การประเมินการขนส่งในลำไส้ของสารสกัดที่อุดมด้วยไกลโคไซด์ฟีนิลทานอยด์จาก Cistanche Deserticola ข้ามแบบจำลองเซลล์โมโนเลเยอร์ Caco-2

การแนะนำ

เซลล์ Caco-2 ซึ่งได้มาจากมะเร็งของต่อมในลำไส้ของมนุษย์ มีลักษณะคล้ายเอนเทอโรไซต์ ภายใต้สภาวะปกติ เซลล์ Caco-2 จะแยกความแตกต่างจากเซลล์ที่เจริญเต็มที่ได้เองและก่อตัวเป็นชั้นเดียวที่สมบูรณ์ เซลล์ที่อยู่ติดกันจะเกาะติดกันผ่านทางแยกที่แน่นซึ่งเกิดขึ้นที่ด้านปลายของชั้นเดียว ซึ่งสามารถแยกแยะเซลล์ที่อยู่เฉยๆ ได้และขนส่งยาไปทั่วชั้นเยื่อบุผิวอย่างแข็งขัน เนื่องจากความคล้ายคลึงทางสัณฐานวิทยาและชีวเคมีกับเอนเทอโรไซต์ปกติ ชั้นเซลล์เดียวของ Caco-2 จึงทำหน้าที่เป็นแบบจำลองในหลอดทดลองที่ได้รับการยอมรับอย่างดีสำหรับการศึกษาศักยภาพในการดูดซึมในลำไส้และลักษณะการขนส่งของยา

ตรงกันข้ามกับสารเคมี สารสกัดจากพืช (PE) เป็นสารผสมซึ่งมีฤทธิ์ทางชีวภาพและองค์ประกอบออกฤทธิ์ที่มักไม่สามารถระบุได้ชัดเจน นอกจากนี้คุณสมบัติการขนส่งในลำไส้ของ PE เมื่อเทียบกับคุณสมบัติของส่วนประกอบนั้นมีความสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับการใช้ทางคลินิก การวัดฟลักซ์สำหรับตัวอย่างทดสอบทั่วทั้งชั้นเซลล์เดียวของ Caco-2 โดยทั่วไปเกี่ยวข้องกับวิธีการทางเคมี เช่น HPLC, LC/MS เป็นต้น แม้ว่าวิธีการเหล่านี้จะเป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพ แต่ก็ซับซ้อน ใช้เวลานาน มีราคาแพง และในบางครั้ง ต้องใช้อุปกรณ์ที่มีความซับซ้อน ที่สำคัญกว่านั้น ไม่มีส่วนประกอบเดียวหรือส่วนประกอบส่วนน้อยไม่สามารถสะท้อน PE โดยรวมได้ ดังนั้นจึงจำเป็นต้องกำหนดแนวทางใหม่ที่เป็นอิสระจากการกำหนดองค์ประกอบเพื่อระบุและประเมินลักษณะการขนส่งของ PE

Cistanche Deserticola YC Ma (CD) ซึ่งเป็นพืชโฮโลปรสิต เป็นยาจีนโบราณที่ใช้เป็นหลักในการรักษาภาวะไตบกพร่อง ร่างกายอ่อนแอ และท้องผูก และการใช้เหล่านี้ได้รับการบันทึกไว้อย่างเป็นทางการในตำรับยาจีนฟีนิลธานอยด์ไกลโคไซด์ (PhGs)ได้แก่ echinacoside (EC), acteoside (AC) และ isoacteoside (IS) ฯลฯ เป็นสารประกอบโพลีฟีนอลประเภทหนึ่ง พวกมันถือเป็นหนึ่งในองค์ประกอบออกฤทธิ์ทางชีวภาพที่สำคัญของสายพันธุ์ Cistanche การศึกษาทางเภสัชวิทยาแสดงให้เห็นว่าฤทธิ์ทางชีวภาพของ PhGs มีความหลากหลายและรวมถึงฤทธิ์ต่อต้านอนุมูลอิสระ ต้านความเหนื่อยล้า ปกป้องตับ กระตุ้นภูมิคุ้มกัน ต้านการอักเสบ และปกป้องระบบประสาท อย่างไรก็ตาม ยังไม่ได้ตรวจสอบลักษณะการขนส่งในลำไส้ของ PhGs ในการศึกษานี้ เราได้สำรวจความสามารถในการซึมผ่านของลำไส้ของสารสกัดที่อุดมด้วย PhG (PRE) จากซีดีในฐานะระบบบูรณาการ และการซึมผ่านของ PhG หลักสามชนิด (AC, IS และ EC) ในเซลล์ Caco-2 ที่แตกต่างกัน ผลลัพธ์ของเราระบุว่า PRE ได้รับการเคลื่อนย้ายเป็นหลักผ่านการแพร่กระจายแบบพาสซีฟที่ดูดซึมได้ไม่ดีลงไปตามระดับความเข้มข้นโดยไม่มีการไหลออก ซึ่งเป็นพื้นฐานทางเภสัชจลนศาสตร์สำหรับการใช้งานทางคลินิกของ PhGs ในซีดี

CISTANCHE TUBULOSA ธรรมชาติสำหรับการปรับปรุงการทำงานทางเพศ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

วัสดุและวิธีการ

วัสดุ

The human intestinal Caco-2 cell line was obtained from the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA). AC, IS, and EC (>98%) ถูกซื้อจาก Must Biotechnology Co. (เฉิงตู ประเทศจีน) อาหารเลี้ยงเชื้อ Eagle's (DMEM), ซีรั่มของวัวในครรภ์ (FBS) และกรดอะมิโนที่ไม่จำเป็น (NEAA) ที่ได้รับการดัดแปลงของ Dulbecco ผลิตโดย Gibco BRL (Grand Island, NY, USA) 6-เพลต TranswellTM ของหลุม (พื้นที่การเจริญเติบโตของเมมเบรนแทรก 4.67 ตารางเซนติเมตร ) ได้มาจาก Corning (Costar) Inc. (Tewksbury, MA, USA) คอลลาเจนหางหนูได้มาจาก Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) รีเอเจนต์และสารเคมีทั้งหมดสำหรับการวิเคราะห์ HPLC เป็นเกรดการวิเคราะห์

การเตรียม PRE จากซีดี

วัสดุซีดีที่ทำให้แห้งด้วยอากาศถูกทำให้เป็นผงและสกัดโดยการซึมผ่านด้วยเอธานอล 70% ส่วนที่อุดมด้วย PhG ได้รับการเตรียมตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ และสกัดด้วย n-บิวทิลแอลกอฮอล์ที่อิ่มตัวด้วยน้ำ เหล้าสกัดถูกทำให้เข้มข้นและทำให้แห้งภายใต้ความดันลดลง สเปกโตรโฟโตเมทรีเรซิน-ยูวีแบบ Macroporous วัดปริมาณ PhG ที่ 78.4% ตัวอย่างสุดท้ายแสดงผลผลิตของวัตถุดิบ 1.75% โดยน้ำหนักแห้ง ตัวอย่างที่ได้รับจะถูกเก็บไว้ที่ −20 องศาจนกระทั่งนำไปใช้งานต่อไป

การกำหนด AC, IS และ EC โดย HPLC

ระบบ Shimadzu HPLC ที่ติดตั้งซอฟต์แวร์โซลูชัน LC ถูกใช้เพื่อทดสอบเนื้อหาของ AC, IS และ EC ใน PRE คอลัมน์ Intersil C18 แบบย้อนกลับเฟส (4.6 มม. × 25 0 มม., 5 μm) ถูกนำมาใช้และบำรุงรักษาที่อุณหภูมิห้อง เฟสเคลื่อนที่คืออะซีโตไนไตรล์และน้ำที่มีกรดฟอสฟอริก 0.1% (ปริมาตร/ปริมาตร) ที่มีการชะแบบเกรเดียนต์ (ตารางที่ 1) ที่อัตราการไหล 1.0 มิลลิลิตร/นาที เครื่องตรวจจับสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV ถูกตั้งค่าไว้ที่ 334 นาโนเมตร เพื่อกำหนดฟลักซ์ของ AC และ IS ได้อย่างแม่นยำ เราได้พัฒนาวิธีการตรวจจับ HPLC-fluorescence (HPLC-FLD) ใหม่ หลังจากการวิเคราะห์โครงสร้างและการสแกนความยาวคลื่นเรืองแสง (ไม่แสดงข้อมูล) เราได้รับเงื่อนไขการตรวจจับเรืองแสงที่เหมาะสมที่สุดสำหรับ AC (เช่น 338 nm, Em: 448 nm) และ IS (เช่น 320 nm, Em: 434 nm)

วิธีการวิเคราะห์ HPLC ได้รับการตรวจสอบโดยใช้คุณลักษณะด้านประสิทธิภาพต่อไปนี้: ความเสถียร ความเป็นเส้นตรง ความไว ความแม่นยำ (ความแปรปรวนภายในและระหว่างวัน) และความแม่นยำ สารวิเคราะห์ในบัฟเฟอร์การขนส่งถูกเก็บไว้ที่ 25 องศาในความมืดเป็นเวลา 24 ชั่วโมง และวัดความเสถียรของพวกมัน สารวิเคราะห์มีความเสถียรสูงเมื่อมีวิตามินซี (0.4%) เนื่องจากค่าส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ (RSD) ในพื้นที่จุดสูงสุดคือ < 3.5% สมการการถดถอยเชิงเส้น สัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ ช่วงของความเป็นเชิงเส้น LOD และ LOQ สำหรับ AC, IS และ EC แสดงในตารางที่ 2 LOD (18–30 nM) และ LOQ (60–100 nM) ค่าแสดงให้เห็นว่าวิธี HPLC-FLD และ HPLC-UV มีความไวสูง ค่า RSD ที่แสดงความแม่นยำของวิธีการทั้งหมด < 2% สำหรับความแปรปรวนภายในและระหว่างวัน ซึ่งบ่งชี้ถึงความแม่นยำที่ดี สำหรับการประเมินการฟื้นตัว AC, IS และ EC ถูกเพิ่มไปยังบัฟเฟอร์การขนส่งเพื่อให้ได้ระดับความเข้มข้นสามระดับ (สูง ปานกลาง และต่ำ) ค่าการกู้คืนของวิธีการวิเคราะห์สรุปไว้ในตารางที่ 3 ค่าการกู้คืนโดยเฉลี่ยอยู่ระหว่าง 90.0% ถึง 96.4% ซึ่งบ่งชี้ว่ามีความแม่นยำที่ดี โดยสรุป วิธีการ HPLC ที่จัดตั้งขึ้นนั้นน่าพอใจเกี่ยวกับความเป็นเส้นตรง ความไว ความแม่นยำ และความแม่นยำสำหรับการหาปริมาณของ AC, IS และ EC ในบัฟเฟอร์การขนส่ง

การหาค่า PRE ด้วยระบบ bioassay

การทดสอบทางชีวภาพ (ความสามารถในการต่อต้านอนุมูลอิสระทั้งหมด) อิงจากการทดสอบ FRAP (พลังงานรีดิวซ์/สารต้านอนุมูลอิสระ) ที่เราอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [16] และตรวจสอบความถูกต้องในแง่ของความเป็นเส้นตรงและความแม่นยำ (ความแปรปรวนภายในและระหว่างวัน) ความเป็นเส้นตรงของวิธี bioassay ถูกกำหนดโดยอิงจากกราฟการสอบเทียบ ช่วงความเข้มข้นของความเป็นเชิงเส้นคือ 0.0625 − 40 ug/ml (y=0.0258x+0.0968, R2=0.996) ความแม่นยำของวิธีการวิเคราะห์ทางชีวภาพที่กำหนดขึ้นถูกกำหนดในแง่ของความแปรปรวนภายในและระหว่างวันสำหรับการวิเคราะห์ PRE (10.0 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ความสามารถในการทำซ้ำระหว่างวันของวิธีการถูกกำหนดโดยอิงจากการกำหนดห้าครั้งติดต่อกันในวันเดียวกัน ความสามารถในการทำซ้ำระหว่างวันถูกวัดตามการกำหนดห้าครั้งติดต่อกันในสามวันที่แตกต่างกัน ค่า RSD สำหรับความแม่นยำของวิธีการคือ 1.014% และ 4.72% สำหรับความแปรปรวนภายในและระหว่างวัน ตามลำดับ ซึ่งบ่งชี้ว่ามีความแม่นยำที่ดี ดังนั้น วิธีการตรวจวิเคราะห์ทางชีวภาพที่จัดตั้งขึ้นจึงเป็นที่น่าพอใจเกี่ยวกับความเป็นเส้นตรง ความแม่นยำ และความแม่นยำในการหาปริมาณของ PRE ในบัฟเฟอร์การขนส่ง

การเพาะเลี้ยงเซลล์

เพาะเลี้ยงเซลล์ Caco{{0}} ที่ 37 องศาและความชื้นสัมพัทธ์ 95% ในบรรยากาศที่มี CO2 5% และตัวกลางที่ประกอบด้วย DMEM, 10% FBS, 1% NEAA, แอล-กลูตามีน 1%, เพนิซิลลิน (100 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) และสเตรปโตมัยซิน (100 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) สื่อถูกเปลี่ยนวันเว้นวันในระหว่างการเจริญเติบโตและการสร้างความแตกต่างของเซลล์ เซลล์ถูกเลี้ยงในขวดพลาสติกขนาด 75-cm2 และเก็บเกี่ยวทุกๆ 3–5 วันด้วย EDTA-ทริปซิน 0.05% สำหรับการทดลองการขนส่ง เซลล์ถูกเพาะที่ความหนาแน่น 1×105 เซลล์/ซม.2 บนส่วนแทรก Transwell ที่เคลือบด้วยคอลลาเจน ประมาณ 21 วันหลังหยอดเมล็ด ชั้นเดียวถูกนำมาใช้ในการทดลองการขนส่ง ความสมบูรณ์ของพวกมันถูกกำหนดโดยการวัดความต้านทานไฟฟ้าของทรานส์เยื่อบุผิว (TEER) ทั่วทั้งชั้นเดียวด้วย EVOM ที่ติดตั้ง ENDOHM-SNAP (World Precision Instruments, Inc., USA) ค่า TEER ของชั้นเดียวของเซลล์ Caco-2 จำเป็นต้องเกิน 500 O∙cm2

CISTANCHE TUBULOSA ธรรมชาติเพื่อการผ่อนคลายและระบาย PHGS75% ECH 30% ACT 12%

การทดลองการขนส่ง

ชั้นเดียวถูกล้างด้วยบัฟเฟอร์สำหรับการขนส่ง (P-บัฟเฟอร์ซึ่งประกอบด้วย 10 มิลลิโมลาร์ HEPES, 1 มิลลิโมลาร์ โซเดียม ไพรูเวต, 10 มิลลิโมลาร์ กลูโคส, 3 มิลลิโมลาร์ CaCl2 และ 145 มิลลิโมลาร์ NaCl, pH 7.4) และจากนั้นบ่มเพาะล่วงหน้าเป็นเวลา 20 นาที ที่ 37 องศา . หลังจากการถอดบัฟเฟอร์การขนส่งออก บัฟเฟอร์การขนส่งใหม่ที่มีตัวอย่างทดสอบถูกเพิ่มเข้าไปในห้องปลาย (AP) (1.5 มล.) ในการศึกษาทิศทางของ AP ถึง basolateral (BL) หรือห้อง BL (2.5 มล.) ในการศึกษาทิศทางของ BL ถึง AP สำหรับการสอบวิเคราะห์ AC, IS และ EC โดยใช้ HPLC ส่วนลงตัว (300 ul) ถูกนำออกจากแต่ละห้องของตัวรับที่ช่วงเวลาที่ต่างกัน (30, 60, 90 และ 120 นาที) ห้องตัวรับถูกเติมด้วยบัฟเฟอร์การขนส่งที่อุ่นใหม่ (37 องศา) ในปริมาณเท่ากันหลังจากการสุ่มตัวอย่างแต่ละครั้ง ตัวอย่างที่รวบรวมได้จะถูกเก็บไว้ที่ −20 องศาเพื่อใช้ต่อไป สำหรับการพิจารณาก่อนกำหนดโดยใช้การทดสอบทางชีวภาพ จะเก็บเฉพาะตัวอย่างที่เวลา 120 นาทีเท่านั้น เนื่องจากความไม่เสถียรของ PRE, AC, IS และ EC, วิตามินซี 0.4% (w/v) จึงถูกเติมเพื่อทำให้ตัวอย่างคงตัวเพื่อกำหนดปริมาณ AC, IS และ EC โดย HPLC และตัวอย่างสำหรับการวิเคราะห์ทางชีวภาพ PRE คือ ตรวจทันทีหลังจากเก็บตัวอย่าง ค่าสัมประสิทธิ์การซึมผ่านปรากฏ (Papp หรือ 'Papp) ของแต่ละตัวอย่างได้รับการคำนวณ

การวิเคราะห์ข้อมูล

ค่า Papp ในทิศทาง AP BL หรือ BLAP ของ AC, IS และ EC ถูกคำนวณตามสมการต่อไปนี้: Papp {{0}} (4Q/4t)/(AC0) โดยที่ Papp คือค่าสัมประสิทธิ์การซึมผ่านที่ปรากฏ (ซม./วินาที) ที่กำหนดโดย HPLC (4Q/4t) คืออัตราที่ปรากฏของสารประกอบทดสอบ (AC, IS หรือ EC) บนฝั่งตัวรับ (μmol/s) A คือพื้นที่ผิวของเม็ดมีด (cm2 ) C0 คือความเข้มข้นของสารประกอบทดสอบเริ่มต้นที่ฝั่งผู้ให้ (ไมโครโมล/มิลลิลิตร) โดยเฉพาะอย่างยิ่ง หน่วยมวล "ug" ถูกใช้แทน "μmol" เมื่อคำนวณค่า "Papp" ข้อมูลจะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± SD

ผลลัพธ์

องค์ประกอบของ AC, IS และ EC ใน PRE จากซีดี

เนื่องจาก AC, IS และ EC ถือเป็นสารออกฤทธิ์ทางชีวภาพที่สำคัญPhGs ของสายพันธุ์ Cistancheเราวิเคราะห์เนื้อหาใน PRE ผ่าน HPLC-UV โครมาโตกราฟีที่เป็นตัวแทนจะแสดงอยู่ในรูปที่ 1 การระบุองค์ประกอบเหล่านี้ขึ้นอยู่กับการเปรียบเทียบเวลากักเก็บและสเปกตรัม UV กับค่ามาตรฐานที่แท้จริงที่ความยาวคลื่น 334 นาโนเมตร เนื้อหาของ AC, IS และ EC ใน PRE อยู่ที่ 26.60%, 1.84% และ 32.83% ตามลำดับ ดังนั้นสารประกอบทั้งสามนี้จึงคิดเป็น 61.27% ของ PRE; นอกจากนี้ ผลลัพธ์ข้างต้นบ่งชี้ว่าเนื้อหา PhG ใน PRE คือ 78.4% ดังนั้น AC, IS และ EC คิดเป็นประมาณ 80% ของ PhGs ใน PRE

ความสามารถในการต่อต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดของ PRE, AC, IS และ EC

การศึกษาของฤทธิ์ต่อต้านอนุมูลอิสระของ PhGsจากซีดีได้รับการรายงานแล้ว และ AC, IS และ EC คิดเป็นประมาณ 80% ของ PhGs ใน PRE ดังนั้นความสามารถในการต่อต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดของ PRE, AC, IS และ EC จึงได้รับการประเมินและแสดงโดยใช้ค่า FRAP (× 10–6 มิลลิโมล) ดังแสดงในรูปที่ 2 เมื่อค่า FRAP เท่ากับ 8 × 10–6 มิลลิโมล ความเข้มข้นสุดท้ายของ PRE, AC, IS และ EC เท่ากับ 6.20 ug/ml, 3.14 ug/ml, 22.92 ug/ml และ 4.89 ug /ml ตามลำดับ ซึ่งบ่งชี้ว่าความสามารถในการต้านออกซิเดชันรวมของตัวอย่างทั้งสี่นี้อยู่ในอันดับดังนี้: AC > EC > PRE > IS ฤทธิ์ทางชีวภาพของ PRE มาจากกลุ่มสารออกฤทธิ์ (AIG) สำหรับประมาณ 60% ของ PRE, AC และ EC แสดงฤทธิ์ต่อต้านอนุมูลอิสระโดยรวมได้ดีกว่า PRE และ IS เนื่องจาก IS (1.84%) ถือเป็นส่วนเล็กๆ ของ PRE ส่วนประกอบอื่นๆ เช่น IS ที่มีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระอย่างอ่อน จึงมีฤทธิ์อย่างชัดเจนใน PRE เช่นกัน น่าประหลาดใจที่ฤทธิ์ต้านออกซิเดชันทั้งหมดแตกต่างกันเกือบ 7- เท่าระหว่าง AC และ IS ของไอโซเมอร์ ซึ่งบ่งชี้ว่าไม่เพียงแต่จำนวนหมู่ฟีนอลิกไฮดรอกซิลเท่านั้น แต่ยังรวมถึงตำแหน่งของหมู่ฟีนอลิกไฮดรอกซิลในโมเลกุลด้วยที่ส่งผลต่อฤทธิ์ต้านออกซิเดชัน .

การตรวจสอบความถูกต้องของชั้นเดียวของ Caco-2

ในการตรวจสอบความถูกต้องของระบบชั้นเดียวของเซลล์ Caco-2 ค่า Papp ของโพรพาโนลอล (ตัวทำเครื่องหมายที่ขนส่งได้ดี) และสีเหลืองลูซิเฟอร์ (ตัวทำเครื่องหมายที่ขนส่งได้ไม่ดี) จาก AP ถึง BL ทั่วทั้งชั้นเดียวของ Caco-2 กำหนดเป็น 1.51 × 10–5 ซม. / วินาที และ 2.8 × 10–7 ซม. / วินาที ตามลำดับ และค่าเหล่านี้สอดคล้องกับค่าที่เผยแพร่ในรายงานก่อนหน้านี้ การทดสอบฤทธิ์ของอัลคาไลน์ฟอสฟาเตสยังยืนยันว่าชั้นเซลล์เดียวของ Caco-2 มีคุณภาพเทียบเท่ากับเยื่อบุลำไส้เล็ก

การซึมผ่านของ AC, IS และ EC

In general, the Papp values of well-absorbed drugs were high (>1.0 × 10–5 ซม./วินาที) ในขณะที่ยาที่ดูดซึมได้ไม่ดีจะมีค่าต่ำ (< 1.0 × 10–6 cm/s) [3]. As shown in Table 4, the Papp values of AC, IS, and EC were nearly on the order of 10–7 cm/s, indicating that these compounds were poorly permeable. Furthermore, efflux or active transport was not observed because the ratios of Papp BL to AP / Papp AP to BL for AC, IS, and EC were between 0.90 ~ 1.55, and the criterion of net efflux proposed by the FDA Guidance is a ratio less than 2. Based on the kinetic curves presented in Fig. 3, the bidirectional transport percentages of AC, IS, and EC at 200 μM increased linearly with time. The transport rate (TR) values of the three compounds increased linearly in both directions between approximately 100 and 300 μM (Fig. 4). These results indicate that the main transport mechanism of AC, IS, and EC is also passive diffusion. 

การซึมผ่านของ PRE

ผลลัพธ์ข้างต้นบ่งชี้ว่าความสามารถในการต่อต้านอนุมูลอิสระรวมของ PRE อยู่ที่ 61.27% ของ AIG จาก PRE เป็นอย่างน้อย ดังนั้นเราจึงประเมิน TR ของ PRE ตามกราฟความเข้มข้น-ผลกระทบของความสามารถในการต่อต้านอนุมูลอิสระทั้งหมด และคำนวณค่า 'Papp เพื่อสะท้อนลักษณะการขนส่งของ PRE 'ค่า Papp ของ PRE สำหรับ AP!BL และ BL!AP คือ (2.16 ± 0.26) × 10–7 ซม./วินาที และ (3.13 ± 0.29) × 10–7 ซม./ s ตามลำดับ ซึ่งบ่งชี้ว่าสารประกอบนี้ซึมผ่านได้ไม่ดี นอกจากนี้ การไหลออกหรือการขนส่งที่ใช้งานไม่ปรากฏชัดเจน เนื่องจากอัตราส่วนของ 'Papp BL ต่อ AP / 'Papp AP ต่อ BL สำหรับ PRE เท่ากับ 1.45 ยิ่งไปกว่านั้น TR แบบสองทิศทางของ PRE เพิ่มขึ้นเชิงเส้นระหว่างประมาณ 300 ถึง 900 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร (รูปที่ 5) การขาดการกำหนดทิศทางของผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่าการแพร่กระจายแบบพาสซีฟเป็นกลไกการขนส่งหลักของ PRE

ถังเก็บน้ำธรรมชาติ TUBULOSA สำหรับการปรับปรุงภูมิคุ้มกัน PHGS75% ECH 30% ACT 12%

การอภิปราย

เมื่อเปรียบเทียบกับผลิตภัณฑ์ยาที่มีความบริสุทธิ์สูง โดยทั่วไป PE จะเป็นส่วนผสมที่ประกอบด้วยองค์ประกอบหลายร้อยรายการที่มีคุณสมบัติทางเคมีกายภาพที่แตกต่างกันอย่างกว้างขวาง ดังนั้น PE จึงออกแรงทำงานร่วมกันอย่างเป็นระบบ หลายเป้าหมาย และหลายช่องทาง เนื่องจาก AIG ที่ซับซ้อน [21] ซึ่งเป็นอุปสรรคต่อการวิเคราะห์ลักษณะการขนส่งของ PE เพื่อประเมินคุณสมบัติการขนส่งของ PE ในเชิงวิทยาศาสตร์มากขึ้น นักวิจัยบางคนได้ระบุส่วนประกอบหลายรายการ แทนที่จะเป็นส่วนประกอบเดียวใน PE [22–24] อย่างไรก็ตาม องค์ประกอบจำนวนจำกัดไม่สามารถสะท้อนถึง PE โดยรวมได้ อย่างไรก็ตาม การระบุส่วนประกอบทั้งหมดใน PE นั้นเป็นไปไม่ได้ ยิ่งไปกว่านั้น หากส่วนประกอบที่หลากหลายใน PE แสดงลักษณะการขนส่งที่แตกต่างกันโดยสิ้นเชิง ลักษณะการขนส่งแบบองค์รวมของ PE นั้นจะระบุได้ยาก

ในคริสต์ทศวรรษ 1990 มีการใช้ระบบการตรวจวิเคราะห์ทางชีวภาพเพื่อประเมินค่า TR ของสารต้านจุลชีพ [25] ภายในปี 2005 Eguchi และเพื่อนร่วมงานของเขา [26] ได้ประเมินฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดแครอทโดยใช้สื่อ BL จากเซลล์ Caco-2 ที่แตกต่างกัน วิธีนี้เหมาะสมกว่าในการสะท้อนสถานการณ์ในร่างกาย

จากรายงานก่อนหน้านี้เกี่ยวกับกิจกรรมของ PhG และผลลัพธ์ของเรา (รูปที่ 2) TR ของ AIG ใน PRE สามารถประเมินได้โดยการพิจารณาความสามารถในการต่อต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดของตัวกลางในห้องรับ หลังจากการทดลองการขนส่ง เราพบว่า TR ของ PRE มีความคล้ายคลึงกันในทั้งสองทิศทาง และการเคลื่อนย้ายนี้ไม่อิ่มตัวและดูดซึมได้ไม่ดี ('Papp < ​​1.0 × 10–6 cm/s) และไม่ บ่งบอกถึงการไหลออก โดยบอกว่าการแพร่กระจายแบบพาสซีฟลงของการไล่ระดับความเข้มข้นเป็นกลไกการขนส่งหลักของ PRE (รูปที่ 5) นอกจากนี้ คุณลักษณะการขนส่งของ PRE ยังสอดคล้องกับลักษณะการขนส่งของ AC, IS และ EC ซึ่งเป็นส่วนประกอบที่มีประสิทธิภาพที่แสดงฤทธิ์ต่อต้านอนุมูลอิสระใน PRE (รูปที่ 4 และตารางที่ 4) ผลลัพธ์นี้เป็นไปตามที่คาดหวังและชี้ให้เห็นว่าระบบการตรวจวิเคราะห์ทางชีวภาพในปัจจุบันมีความเหมาะสมและเชื่อถือได้สำหรับการประเมินลักษณะการขนส่งของ AIG ใน PRE ในเซลล์ Caco-2 ที่แตกต่างกัน

ตรงกันข้ามกับค่า Canonical Papp ซึ่งมักใช้เพื่อสะท้อนการเคลื่อนย้ายของสารประกอบเดี่ยว 'ค่า Papp ที่ได้รับจาก TR ตามกราฟความเข้มข้น-เอฟเฟกต์อาจไม่เพียงแต่สะท้อนถึงส่วนประกอบที่ทะลุผ่านชั้นเดียวด้วยโครงสร้างที่ไม่เสียหายเท่านั้น แต่ ยังเกี่ยวข้องกับปัจจัยอื่นๆ ที่เกี่ยวข้องกับกิจกรรมเป้าหมาย เช่น เมตาบอไลต์ของส่วนประกอบ ผลิตภัณฑ์ที่ย่อยสลายทางเคมี และแม้แต่ไซโตไคน์บางชนิดที่หลั่งออกมาจากเซลล์ Caco-2 เพื่อตอบสนองต่อการกระตุ้นที่อาจส่งผลต่อฤทธิ์ทางชีวภาพของเป้าหมาย ดังนั้น ปัจจัยหลายตัวที่กล่าวถึงข้างต้น แทนที่จะเป็นเพียงส่วนประกอบที่ขนส่งครบถ้วนเท่านั้น จะเป็นตัวกำหนด 'ค่า Papp' ดังนั้น 'Papp อาจมีความสัมพันธ์อย่างมากกับสถานการณ์ ใน vivo มากกว่าค่า Papp ที่เป็นที่ยอมรับ ในการศึกษานี้ เราได้ชี้แจงลักษณะของ PRE ที่แพร่กระจายแบบพาสซีฟและดูดซึมได้ไม่ดี โดยพิจารณาจาก 'ค่า Papp และลักษณะนี้อาจเกี่ยวข้องกับปริมาณ CD ในปริมาณสูงและระยะเวลาการรักษาทางคลินิกที่ยาวนาน อย่างไรก็ตาม การค้นพบนี้จะให้คำแนะนำที่เป็นระบบมากขึ้นสำหรับแพทย์ในการใช้ CD เมื่อมีการระบุเฉพาะลักษณะการขนส่งของ AIG ส่วนใหญ่ใน CD ไม่ใช่แค่ PhG เท่านั้น

อย่างไรก็ตาม รายการออกฤทธิ์ทางชีวภาพที่เลือกจะต้องมีความไวเพียงพอที่จะตรวจพบในตัวกลางของห้องตัวรับ ซึ่งนำเสนอความท้าทายในการสร้างระบบการตรวจวิเคราะห์ทางชีวภาพเพื่อประเมินลักษณะการขนส่งของ PE นอกจากนี้ฤทธิ์ทางชีวภาพควรขึ้นอยู่กับส่วนประกอบต่างๆ ให้ได้มากที่สุด ในการศึกษาของเรา การทดสอบความสามารถในการต่อต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดมีความเหมาะสมมากกว่าวิธีอื่นๆ หลายวิธี (รูปที่ S1) แต่ถึงกระนั้น การทดสอบของเราก็สามารถตรวจจับ TR ของ PRE ได้ที่ 120 นาทีเท่านั้น

โดยรวมแล้ว การศึกษานี้ได้สร้างระบบการวิเคราะห์ทางชีวภาพแบบใหม่เพื่อประเมินความสามารถในการซึมผ่านของลำไส้ของ PRE ในเซลล์ Caco-2 ที่แตกต่างกัน ผลลัพธ์ที่ได้แสดงให้เห็นว่าการแพร่กระจายแบบพาสซีฟที่ดูดซึมได้ไม่ดีลงไปตามระดับความเข้มข้นโดยไม่มีการไหลออกเป็นกลไกการขนส่งหลักของ PRE (รูปที่ 5) ซึ่งเป็นพื้นฐานทางเภสัชจลนศาสตร์สำหรับการใช้งานทางคลินิกของ PhGs ในซีดี การใช้ระบบการวิเคราะห์ทางชีวภาพแบบใหม่ในการประเมิน TR และด้วยเหตุนี้จึงคำนวณ 'ค่า Papp เพื่อประเมินคุณสมบัติการขนส่งในลำไส้ของ AIG ใน PEs จึงเป็นไปได้ วิธีนี้อาจเหมาะสมกับ PE อื่นๆ ที่ได้รับฤทธิ์ทางชีวภาพที่เหมาะสม

CISTANCHE TUBULOSA ธรรมชาติสำหรับการปรับปรุงการทำงานทางเพศ PHGS75% ECH 30% ACT 12%