การตอบสนองทางชีวเคมีและจุลพยาธิวิทยาของ Biomphalaria Alexandrina ต่อ RIPEX (สารควบคุมการเจริญเติบโตของพืช)Ⅰ

เชิงนามธรรม

พื้นหลัง

สารควบคุมการเจริญเติบโตของพืชใช้กันอย่างแพร่หลายในการเกษตรเพื่อเพิ่มการเจริญเติบโตและการสุกของพืช แต่สารเหล่านี้เป็นอันตรายต่อระบบนิเวศทางน้ำ การศึกษาในปัจจุบันได้ประเมินผลของการสัมผัส RIPEX ความเข้มข้น EC 48 เปอร์เซ็นต์ (8 และ 16 ไมโครลิตร/ลิตร) ต่อค่าพารามิเตอร์ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน ฮอร์โมนเพศ เอนไซม์ที่มีศักยภาพภูมิคุ้มกัน จำนวนเม็ดเลือดที่แตกต่างกัน และจุลพยาธิวิทยาของต่อมย่อยอาหารและไข่ Biomphalaria alexandrina หอยทาก

คลิกเพื่อ cistanche สมุนไพรสำหรับฮอร์โมนเพศชาย

ผลลัพธ์

การสัมผัส RIPEX ทำให้กิจกรรม Superoxide dismutase และ Glutathione-S-Transferase เพิ่มขึ้นโดยรวมใน B. Alexandrina อย่างไรก็ตาม การได้รับสาร RIPEX มากเกินไปจะยับยั้งการทำงานของ SOD ในหอยทาก กิจกรรม Malondialdehyde แสดงการเพิ่มขึ้นของ B. Alexandrina ที่สัมผัสกับความเข้มข้นทั้งสองหลังจากช่วงเวลาการสัมผัสทั้งหมด RIPEX ยังทำให้ฮอร์โมนเทสโทสเตอโรนเพิ่มขึ้นอย่างมากในหอยทากที่สัมผัสกับ 16 µL/L อย่างไรก็ตาม มันลดระดับฮอร์โมนในหอยทากที่สัมผัสกับ 8 µL/L ที่ 7 วัน สำหรับ estradiol มีการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญหลังจากการสัมผัส 3 วันถึง 16 µl/L และ 7 วันของการสัมผัสถึง 8 µL/L การสัมผัส RIPEX ยังเพิ่มกิจกรรมของเอนไซม์ Myeloperoxidase และ Adenosine deaminase ในต่อมย่อยอาหารของหอยทาก มันเพิ่มจำนวนเม็ดเลือดทั้งหมดของหอยทากที่สัมผัสและจำนวนของแกรนูโลไซต์ ต่อมย่อยอาหารของหอยทากและเซลล์ไข่แสดงการเปลี่ยนแปลงทางพยาธิสภาพหลังจากได้รับสาร RIPEX เป็นเวลา 7 วัน

ข้อสรุป

การค้นพบนี้ชี้ให้เห็นว่า RIPEX เป็นพิษต่อ B. Alexandrina และหอยทากชนิดนี้สามารถใช้เป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพสำหรับการปนเปื้อนในสิ่งแวดล้อมด้วยสารควบคุมการเจริญเติบโตของพืช

คำหลัก

Biomphalaria alexandrina, RIPEX, ฮอร์โมนเพศชาย, Estradiol, Myeloperoxidase, Adenosine deaminase, จุลพยาธิวิทยา

1 พื้นหลัง

มลพิษทางเคมีเกษตรของน้ำผิวดินเป็นปัญหาด้านสิ่งแวดล้อมที่เพิ่มขึ้นทั่วโลก โดยเฉพาะอย่างยิ่งในพื้นที่ที่เกษตรกรรมขยายตัวอย่างรวดเร็วและรุนแรงขึ้น สารเคมีสังเคราะห์ต่างๆ เช่น ยาฆ่าแมลงหรือปุ๋ย ถูกนำมาใช้เพื่อปรับเปลี่ยนปริมาณและคุณภาพของพืชผลเพื่อตอบสนองความต้องการของลูกค้า [7, 40] สารเร่งการเจริญเติบโตของพืชเป็นเคมีเกษตรทั่วไปในหลายประเทศ [18]

เมื่อสารเคมีเหล่านี้ถูกสูดดมหรือบริโภคโดยตรงกับผักที่ปนเปื้อน สารเคมีเหล่านี้เป็นอันตรายต่อสุขภาพของมนุษย์ [39] สารกำจัดศัตรูพืชกลุ่มออร์กาโนฟอสฟอรัส เอเทฟอน (2-คลอโรเอทิลฟอสโฟนิกแอซิด) เป็นสารเคมีสังเคราะห์ที่ปล่อยเอทิลีน ซึ่งโดยทั่วไปใช้เป็นสารควบคุมการเจริญเติบโตของพืช (PGR) เพื่อส่งเสริมการชักนำให้เกิดดอก การสุกของผลไม้ และปฏิกิริยาทางสรีรวิทยาอื่นๆ ได้รับการอนุมัติให้ใช้กับอาหาร อาหารสัตว์ ที่ไม่ใช่อาหาร เรือนเพาะชำเรือนกระจก และไม้ประดับที่ปลูกกลางแจ้ง [3, 50] การประเมินความเป็นพิษของ ethephon ในห้องปฏิบัติการแสดงให้เห็นว่า ethephon ทำให้เกิดรูปร่างผิดปกติของสายอากาศที่สอง ขนแปรงประสาทสัมผัส กระดูกสันหลังส่วนหาง และพลับพลาของ Daphnia magna ซึ่งนำไปสู่การสูญเสียการทำงานและเสียชีวิต [54]

Abd-El Azeem [1] บันทึกการลดลงของอัตราการเติบโต ความเสียหายของ DNA และผลการตายของเซลล์ในต่อมย่อยอาหารของทาก Deroceras reticulatum หลังจากสัมผัสกับ ethephon ผู้เขียนหลายคนยอมรับความเป็นพิษของ Ethephon ต่อหนูและนก [2, 17, 55] นอกจากนี้ การได้รับเอทิฟอนทำให้เกิดความเป็นพิษต่อพันธุกรรม ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน และความเป็นพิษต่อระบบสืบพันธุ์ในหนู [16] ความผิดปกติของระบบสืบพันธุ์และอวัยวะสืบพันธุ์ในหนูก็เชื่อมโยงกับการสัมผัส ethephon [2, 16] นอกจากนี้ Ethephon ยังแสดงให้เห็นว่าเป็นพิษต่อภูมิคุ้มกัน มีฤทธิ์ในการกลายพันธุ์ [26] เพิ่มความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน และลดความเข้มข้นของกรดดีออกซีไรโบนิวคลีอิกและกรดไรโบนิวคลีอิก [4]

Ethephon ในแหล่งน้ำอาจเป็นอันตรายต่อสัตว์น้ำ อย่างไรก็ตาม ข้อมูลเกี่ยวกับผลกระทบต่อสิ่งมีชีวิตในน้ำยังมีน้อย มีการใช้สัตว์น้ำหลายชนิดเพื่อตรวจหาฮอร์โมนการเจริญเติบโตของพืชในระบบน้ำ อย่างไรก็ตาม สิ่งมีชีวิตเหล่านี้บางส่วนมีความท้าทายในการจัดการและบำรุงรักษาในห้องแล็บ ทำให้ยากต่อการนำไปใช้ในการประเมินความเป็นพิษต่อระบบนิเวศน์ [54] หอยน้ำรวมทั้งหอยทากได้รับความสนใจในฐานะสิ่งมีชีวิตทดสอบเมื่อเร็วๆ นี้ เนื่องจากความต้องการในการพัฒนาแบบจำลองสัตว์ไม่มีกระดูกสันหลังสำหรับการตรวจสอบสิ่งแวดล้อมของสารปนเปื้อนในน้ำ [21, 45] หอยทากเป็นกลุ่มมอลลัสก์ที่มีมากที่สุดในระบบน้ำ หอยทากนำเสนอทางเลือกที่หาประโยชน์ได้น้อยกว่าสำหรับสัตว์มีกระดูกสันหลังระดับสูงในฐานะตัวบ่งชี้ทางชีวภาพ เนื่องจากสามารถใช้ในการทดลองต่างๆ

ในแง่นี้ Biomphalaria alexandrina snail ถูกใช้อย่างกว้างขวางในฐานะสิ่งมีชีวิตบ่งชี้มลพิษในน้ำจืดด้วยสารกำจัดศัตรูพืช [29, 30] นอกเหนือจากศักยภาพในการเป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพแล้ว หอยทากชนิดนี้ทำหน้าที่เป็นตัวกลางในการแพร่เชื้อ Schistosoma mansoni [35] ดังนั้น ความเข้มข้นของสารเคมีเกษตรในสิ่งแวดล้อมสามารถมีอิทธิพลต่อการแพร่กระจายของ schistosomiasis ผ่านทางผลกระทบโดยตรงและโดยอ้อมต่อโฮสต์ระดับกลางและความหนาแน่นของปรสิต [27] การตรวจสอบในปัจจุบันมีวัตถุประสงค์เพื่อตรวจสอบผลกระทบของการได้รับสารควบคุมการเจริญเติบโตของพืช RIPEX 48 เปอร์เซ็นต์ EC (ชื่อทางการค้าของ ethephon 2-chloroethyl phosphonic acid) ต่อลักษณะทางชีวเคมี ภูมิคุ้มกันวิทยา และเนื้อเยื่อวิทยาต่างๆ ของ B. alexandrina หอยทากเป็นสิ่งมีชีวิตบ่งชี้ทางชีวภาพ

2 วิธี

2.1 ทดสอบสิ่งมีชีวิต

หอยทาก Biomphalaria alexandrina เก็บมาจากทะเลสาบ Manzalah ที่ El-Matareya, Dakahlia Governorate, Egypt (31 องศา 11′ N 32 องศา 2′ E) และเก็บรักษาไว้ในน้ำประปาที่มีอากาศถ่ายเทที่อุณหภูมิคงที่ 20 องศา พวกเขาได้รับใบผักกาดสดทุกวัน หลังจากการบำรุงรักษาเป็นเวลา 4 สัปดาห์ภายใต้สภาวะของห้องปฏิบัติการ หอยทากที่โตเต็มวัยที่แข็งแรง (เส้นผ่านศูนย์กลางเปลือก 10–12 มม.) ถูกนำมาใช้ในการทดลองครั้งต่อๆ ไป

2.2 วัสดุทดลองและสภาวะการสัมผัส

สารควบคุมการเจริญเติบโตของพืช RIPEX (รูปแบบสารละลายที่มี ethephon 48 เปอร์เซ็นต์ [2- chloroethyl phosphonic acid (C2H6ClO3P)] และส่วนผสมเฉื่อย 52 เปอร์เซ็นต์) ซื้อจาก Chema Industries (เมืองนิวนูบาเรีย เมืองเบฮิรา ประเทศอียิปต์ ใบอนุญาตจดทะเบียนเลขที่ . 1840). มีการเตรียมความเข้มข้นหลายชุด ต้นไม้จำลองที่มีหอยทากสิบตัวถูกเปิดเผย หลังจาก1-วันที่สัมผัส หอยทากที่ตายแล้วจะถูกนับและกำจัดออก และคำนวณ LC50 และ LC90 ด้วยซอฟต์แวร์ทางสถิติของสังคมศาสตร์ (SPSS; IBM Corp. Armonk, NY, USA)

2.3 การออกแบบการทดลอง

ความเข้มข้นต่ำถึงตายสองความเข้มข้นที่แสดงแทน LC10 และ LC20 ถูกใช้ (8 และ 16 µL/L) หอยทาก 90 ตัวถูกแบ่งออกเป็นสามกลุ่ม แต่ละกลุ่มมีการทำซ้ำสามตัว (หอยทากสิบตัว/ตัวจำลอง): กลุ่มควบคุม กลุ่มที่สัมผัส 8 µL/L และกลุ่มที่สัมผัส 16 µL/L ที่ช่วง 1-, 3- และ 7-วัน ตัวบ่งชี้ทางชีวภาพของความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันและเอนไซม์ที่มีศักยภาพในระบบภูมิคุ้มกันได้รับการประเมินในต่อมย่อยอาหาร ประเมินฮอร์โมนสเตียรอยด์ใน Ovotestis ประเมินจำนวนเม็ดเลือดที่แตกต่างกันและมิญชวิทยาของต่อมย่อยอาหารและ ovotestis สำหรับการตรวจสอบทางชีวเคมี เนื้อเยื่อ 0.5 กรัม (ต่อมย่อยอาหารหรือโอโวเทสติส) จากแต่ละกลุ่มถูกทำให้เป็นเนื้อเดียวกันในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ 0.5 มล. (pH 6.5) โดยใช้เครื่องโฮโมจีไนเซอร์แก้วและหมุนเหวี่ยงที่ 10,000×g, 4 องศาเป็นเวลา 10 นาที . ส่วนลอยเหนือตะกอนที่เป็นผลลัพธ์ถูกใช้สำหรับการสอบวิเคราะห์ที่ตามมา

2.4 การกำหนดเครื่องหมายความเครียดออกซิเดชัน

2.4.1 ซูเปอร์ออกไซด์ ดิสมิวเตส (SOD, EC 1.15.1.1)

กิจกรรม SOD ถูกกำหนดโดยใช้ EnzyChrom™ Superoxide Dismutase Assay Kit (Cat. No: ESOD{{0}}; BioAssay Systems, Hayward, CA, USA) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต เนื้อเยื่อที่เป็นเนื้อเดียวกันโดยใช้บัฟเฟอร์สลายด้วยความเย็น (50 mM โพแทสเซียมฟอสเฟต 0.1 mM EDTA และ 0.5 เปอร์เซ็นต์ Triton X-100) ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 12,000g เป็นเวลา 5 นาทีที่ 4 องศา , และส่วนลอยน้ำถูกรวบรวมเพื่อตรวจหา SOD [43] กิจกรรมของ SOD ถูกวัดที่ความหนาแน่นของแสง (OD) ที่ 440 นาโนเมตร

2.4.2 กลูตาไธโอน‑S‑ทรานสเฟอเรส (GST, EC 2.5.1.18)

เอนไซม์ Tis กระตุ้นการผัน GSH ด้วย {{0}}คลอโร-2,4-ไดไนโตรเบนซีน (CDNB) วัดสเปกโตรโฟโตเมตริกที่ 340 นาโนเมตร ส่วนผสมของปฏิกิริยาประกอบด้วยโพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ 0.1 โมลาร์, pH 6.5, GSH ที่ละลายในโพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (140 มก./100 มล.) และ CDNB 4 มก./มล. ในเอทิลแอลกอฮอล์ กิจกรรมของเอนไซม์หนึ่งหน่วยหมายถึงปริมาณของเอนไซม์ที่กระตุ้นการก่อตัวของ S-conjugate 1 ไมโครโมลต่อนาที [11]

2.4.3 มาลอนไดอัลดีไฮด์ (MDA)

Malondialdehyde ในโฮโมจีเนตทั้งหมดถูกกำหนดให้เป็นสารปฏิกิริยากรดไทโอบาร์บิทูริก (TBARS) ตามวิธีการมาตรฐานของ Ohkawa และคณะ [37]. ของผสมในการทำปฏิกิริยาประกอบด้วยโฮโมจีเนตเนื้อเยื่อ 0.1 มล., สารละลายโซเดียมโดเดซิลซัลเฟตที่มีปริมาตรเท่ากัน, กรดแอซีติก 0.75 มล., กรดไทโอบาร์บิทูริก 0.75 มล., และ 0.3 มล. ของน้ำกลั่น ส่วนประกอบเหล่านี้ผสมกันในกระแสน้ำวนและบ่มในอ่างน้ำเดือดเป็นเวลา 1 ชั่วโมง จากนั้นทำให้เย็นลงที่อุณหภูมิห้อง เติมน้ำกลั่นสิบ 0.5 มล. และ n-บิวทานอล 2.5 มล. ในแต่ละหลอดและผสมอย่างแรงด้วยกระแสน้ำวน จากนั้นหมุนในเครื่องปั่นแยกที่ 2,500×g เป็นเวลา 10 นาที ค่าการดูดซับถูกอ่านได้ที่ 532 นาโนเมตร

2.5 การตรวจฮอร์โมน

2.5.1 ฮอร์โมนเพศชาย

เทสโทสเตอโรนถูกกำหนดโดยใช้ชุดเทสโทสเตอโรน Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) (Cat. No: ADI-900-065; Enzo Life Sciences, NY, USA) เทสโทสเตอโรนเป็นแอนโดรเจนหลักที่ส่งผลต่อพัฒนาการทางเพศขั้นปฐมภูมิและขั้นทุติยภูมิ ไดรฟ์เพศ 100 ไมโครลิตรของสารเพิ่มปริมาณมาตรฐาน (การวิเคราะห์บัฟเฟอร์ 3 หรือสื่อเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ) ถูกปิเปตลงในหลุมการจับที่ไม่จำเพาะและการจับสูงสุด (มาตรฐาน 0 พิโกกรัม/มิลลิลิตร) หลังจากนั้น 100 µL ของมาตรฐาน #1 ถึง #5 ลงในหลุมที่เหมาะสม ตัวอย่าง (100 µL) ถูกปิเปตลงในหลุมที่เหมาะสมและ 50 µL ของบัฟเฟอร์สำหรับวิเคราะห์ 3 ลงในหลุมจับที่ไม่จำเพาะเจาะจง นอกจากนี้ 50 ไมโครลิตรของแอนติบอดีสีเหลืองถูกเติมลงในแต่ละหลุม ยกเว้นหลุมที่ว่างเปล่า การมีฤทธิ์ทั้งหมด และหลุมการจับที่ไม่จำเพาะ การบ่มจานที่อุณหภูมิห้องบนเครื่องเขย่าจานเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 500 รอบต่อนาที หลังจากนั้น คอนจูเกตสีน้ำเงิน 50 µL ถูกเติมลงในแต่ละหลุม ยกเว้นกิจกรรมทั้งหมดและหลุมว่าง หลังจากล้างหลุมออกจากเนื้อหาแล้ว การล้างทำได้โดยเติมน้ำยาล้าง 400 µL ลงในหลุมทุกๆ 3 ครั้ง คอนจูเกตสีน้ำเงิน (5 µL) ถูกเติมลงในหลุมกิจกรรมทั้งหมดและ 200 µL ของสารละลายของ p-nitrophenyl phosphate ถูกเติมลงในทุกหลุมและบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเป็นเวลา 1 ชั่วโมงโดยไม่เขย่า การอ่านแผ่นที่ 405 นาโนเมตรได้ดำเนินการหลังจากเติมสารละลายหยุด 50 µL ในทุกหลุม [12, 48]

2.5.2 เอสตราไดออล

Estradiol ถูกกำหนดโดยใช้ชุด ELIZA ของ estradiol (Cat. No: 501890; Cayman Chemical, Michigan, USA) ตามโปรโตคอลของผู้ผลิต หลักการของปฏิกิริยานี้ขึ้นอยู่กับความเข้มข้นของ estradiol acetylcholinesterase (AChE) ที่ติดตามมีค่าคงที่ แต่ความเข้มข้นของ estradiol ดั้งเดิมจะแปรผัน ดังนั้นปริมาณของ estradiol acetylcholinesterase (AChE) ที่ติดตามซึ่งจับกับ estradiol antiserum จะแปรผกผันกับความเข้มข้นของ estradiol ดั้งเดิม ในบ่อน้ำ บัฟเฟอร์ ELISA 100 µL ถูกเติมไปยังการจับที่ไม่จำเพาะและหลุมการจับสูงสุด เติม 50 µL จากท่อ #8 ไปยังหลุมมาตรฐานต่ำสุดทั้งสองหลุม (มาตรฐาน 8) และ 50 µL จากท่อ #7 ไปยังแต่ละหลุมมาตรฐานถัดไป (มาตรฐาน 7) ตัวอย่าง (50 µL) ถูกเติมลงในแต่ละหลุม Estradiol AChE Tracer (50 µL) ถูกเติมไปยังแต่ละกิจกรรมทั้งหมดและหลุมเปล่า หลังจากนั้น Estradiol ELISA antiserum (50 µL) ถูกเติมลงในแต่ละหลุม ยกเว้นสำหรับกิจกรรมทั้งหมด การจับที่ไม่เฉพาะเจาะจง และหลุมว่าง หลังจากการบ่มด้วยเครื่องเขย่าวงโคจร (2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง) วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 414 นาโนเมตร [52]

2.6 การตรวจหาเอนไซม์ที่มีศักยภาพในระบบภูมิคุ้มกัน

2.6.1 ไมอีโลเปอร์ออกซิเดส (MPO, EC 1.11.2.2)

กิจกรรม MPO หนึ่งหน่วยถูกกำหนดให้เป็นปริมาณของเอนไซม์ที่ไฮโดรไลซ์สารตั้งต้นและสร้างทอรีนคลอรามีนเพื่อบริโภค 1.0 ไมโครโมลของ TNB ต่อนาทีที่ 25 องศา MPO ถูกกำหนดโดยใช้ชุดทดสอบกิจกรรมการวัดสี myeloperoxidase (Cat. No: MAK068; Sigma-Aldrich, MO, USA) วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 412 นาโนเมตร

2.6.2 อะดีโนซีน ดีอะมิเนส (ADA, EC 3.5.4.4)

ADA เป็นเอนไซม์ที่กระตุ้นการเปลี่ยนอะดีโนซีนและ 2'-ดีออกซีอะดีโนซีนไปเป็นอิโนซีนและ 2'-ดีออกซีอิโนซีน ADA ถูกกำหนดตามหลักการของชุดทดสอบกิจกรรม adenosine deaminase กระดานข่าวทางเทคนิค (หมายเลขหมวด: MAK400; Merck KGaA, Darmstadt, เยอรมนี) หนึ่งหน่วยของอะดีโนซีนดีอะมิเนสคือปริมาณของเอนไซม์ที่ไฮโดรไลซ์อะดีโนซีนเพื่อให้ได้ไอโนซีน 1.0 ไมโครโมลต่อนาทีที่ 37 องศา รีเอเจนต์คือ 1×ADA assay buffer (41 μL), ADA Converter (2 μL), ADA Developer (2 μL) และ ADA substrate (5 μL)

2.7 จำนวนเม็ดเลือดที่แตกต่างกัน

เซลล์เม็ดเลือดแดงถูกรวบรวมจากหอยทาก (ควบคุม, เปิดเผย) ตาม Sminia [47] หลังจากถูกปาสเตอร์ปิเปตแตะที่หัว-เท้า หอยทากก็ถูกบีบให้หดกลับเข้าไปในเปลือกลึกและขับน้ำเหลืองออกมา ซึ่งจะถูกรวบรวมเพื่อตรวจนับเม็ดเลือดที่แตกต่างกัน Hemolymph ถูกป้ายบนสไลด์กล้องจุลทรรศน์เพื่อการแพร่กระจาย หลังจากการตรึงในเมทานอล 99.8 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 5 นาที สไลด์ถูกหมุนทำมุม 45 องศาเพื่อทำให้แห้งที่อุณหภูมิห้อง และย้อมด้วยสี Giemsa เป็นเวลา 20 นาที ความแตกต่างของเม็ดเลือดถูกกำหนดให้เป็นสัดส่วนกับการนับ 100

2.8 การตรวจชิ้นเนื้อ

การตรวจทางเนื้อเยื่อดำเนินการหลังจาก 7 วันของการสัมผัสกับ 8 และ 16 µL/L RIPEX ต่อมย่อยอาหารและโอโวเทสทิสถูกผ่าออกและนำไปใส่ในของเหลวของบูอินทันที หลังจากการตรึง 1 วัน ตัวอย่างจะถูกทำให้แห้งผ่านชุดแอลกอฮอล์และเคลียร์ในไซลีน ทำบล็อกขี้ผึ้งพาราฟิน [42] สิบนิกาย (ความหนา 5–7 μm) ถูกตัดและย้อมด้วย hematoxylin และ eosin (เมเยอร์ H และ E) การย้อมสีตามด้วยการล้างที่ดีด้วยน้ำประปา ส่วนเนื้อเยื่อวิทยาถูกถ่ายภาพโดยใช้กล้องถ่ายภาพอัตโนมัติ (Optika, อิตาลี)

2.9 การวิเคราะห์ทางสถิติ

ข้อมูลแสดงเป็นค่าเฉลี่ย±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานและวิเคราะห์โดยซอฟต์แวร์ทางสถิติของสังคมศาสตร์ (SPSS; IBM Corp. Armonk, NY, USA) การวิเคราะห์ความแปรปรวนแบบสองทางของ ANOVA ถูกใช้เพื่อระบุความแตกต่างระหว่างกลุ่มควบคุมและกลุ่มที่ได้รับสัมผัส ระหว่างความเข้มข้นที่แตกต่างกันและจุดเวลาที่ได้รับสัมผัส กำหนดระดับนัยสำคัญไว้ที่ p น้อยกว่าหรือเท่ากับ 0.05

กลไกของ Cistanche ช่วยเพิ่มผลเทสโทสเตอโรน

พบว่า Cistanche ช่วยเพิ่มระดับฮอร์โมนเพศชายได้หลายวิธี ประการแรก ประกอบด้วยสารประกอบที่เรียกว่าเอจินาโคไซด์และแอกทีโอไซด์ ซึ่งแสดงให้เห็นว่าช่วยเพิ่มการผลิตฮอร์โมนลูทีไนซิ่ง (LH) ในต่อมใต้สมอง LH กระตุ้นเซลล์ Leydig ในอัณฑะให้ผลิตฮอร์โมนเพศชาย Cistanche ยังประกอบด้วยโพลีแซคคาไรด์และฟีนิลเลทานอยด์ไกลโคไซด์ ซึ่งแสดงให้เห็นว่ามีคุณสมบัติต้านอนุมูลอิสระและต้านการอักเสบ สิ่งนี้สามารถช่วยลดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันและการอักเสบในอัณฑะ ซึ่งอาจทำให้การผลิตฮอร์โมนเพศชายลดลง นอกจากนี้ Cistanche ยังพบว่าเพิ่มการแสดงออกของยีนที่เกี่ยวข้องกับการสังเคราะห์ฮอร์โมนเพศชาย และลดการทำงานของเอนไซม์ที่ทำลายฮอร์โมนเพศชาย เช่น {{1} }แอลฟารีดักเตส โดยรวมแล้ว การรวมกันของกลไกเหล่านี้มีส่วนทำให้ Cistanche กระตุ้นฮอร์โมนเทสโทสเตอโรน

Hoda H. Abdel‑Azeem1*, Azza H. Mohamed1 และ Mohamed R. Habib2