การแสดงออกของเนื้อเยื่อ - specifc ของตัวรับ SARS-CoV-2, เอนไซม์แปลง Angiotensin 2, ในแบบจําลองเมาส์ของโรคไตเรื้อรัง
Mar 22, 2022
ตั้งแต่เดือนมกราคม 2020 โรคติดเชื้อไวรัสโคโรนา 2019 (COVID-19) ซึ่งเกิดจากโรคทางเดินหายใจเฉียบพลันรุนแรง coronavirus 2 (SARS-CoV-2) เป็นปัญหาด้านสาธารณสุขทั่วโลก การติดเชื้อ SARS-CoV-2 เกิดขึ้นเมื่อโปรตีน S ของไวรัสจับกับเอนไซม์แปลง angiotensin 2 (ACE2) และเข้าสู่เซลล์1,2 ดังนั้นการแสดงออกของ ACE2 ที่เพิ่มขึ้นในอวัยวะที่เป็นเป้าหมายที่เป็นไปได้ของ SARS-CoV-2 อาจเพิ่มความเสี่ยงของการติดเชื้อ COVID- 19 ACE2 เป็นเอนไซม์ที่มีบทบาทสําคัญในระบบเรนิน -angiotensin (RAS) ซึ่งแปลง angiotensin (Ang) II เป็น Ang1-7 และสร้างส่วนประกอบของแกนรับ ACE2-Ang1-7-MAS3 นอกจากนี้ยังออกแรงผลป้องกันอวัยวะโดยการต่อต้านกิจกรรมของแกนรับ ACE-Ang II-angiotensin type 1 (AT1)4–7 . รายงานก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่า ACE2 เปลี่ยนรูปแบบการแสดงออกเฉพาะเนื้อเยื่อภายใต้เงื่อนไขต่าง ๆ รวมถึงโรคหัวใจและหลอดเลือดโรคเบาหวาน (DM) และโรคไต 8–11. การแสดงออกของ ACE2 ในปอดซึ่งมีความสําคัญอย่างยิ่งสําหรับการติดเชื้อ SARS-CoV-2 จะลดลงในกลุ่มอาการหายใจลําบากเฉียบพลันที่เกิดจาก lipopolysaccharide12 รายงานอีกฉบับหนึ่งแสดงให้เห็นว่าการแสดงออกของ ACE2 นั้นสูงกว่าในผู้ชายที่มีอายุมากกว่า13 ในภาควิชาวิทยาศาสตร์การแพทย์และเวชศาสตร์หัวใจ, โยโกฮาม่าซิตี้มหาวิทยาลัยบัณฑิตวิทยาลัยแพทยศาสตร์, 3-9 Fukuura, Kanazawa-ku, โยโกฮาม่า 236-0004, ประเทศญี่ปุ่น. 2 โปรแกรมความผิดปกติของหัวใจและการเผาผลาญ, โรงเรียนแพทย์ Duke-NUS, สิงคโปร์, สิงคโปร์ 3แผนกการแพทย์, ภูเขาซีนายเบ ธ อิสราเอล, นิวยอร์ก, นิวยอร์ก, สหรัฐอเมริกา 4ภาควิชาอณูชีววิทยา บัณฑิตวิทยาลัยแพทยศาสตร์มหาวิทยาลัยโยโกฮาม่า เมืองโยโกฮาม่า ประเทศญี่ปุ่น 5ภาควิชาโสตนาสิกลาริงซ์วิทยา, ศัลยศาสตร์ศีรษะและคอ, คณะแพทยศาสตร์, มหาวิทยาลัยเมืองโยโกฮาม่า, โยโกฮาม่า, ญี่ปุ่น 6การแพทย์ภายใน มหาวิทยาลัยทันตกรรมคานางาวะ
คําสําคัญ;โรคไต ไต; ไต ACE2; เนื้อเยื่อไต; ภาวะไตวาย
CISTANCHE จะช่วยปรับปรุงโรคไต/ไต
นอกจากนี้การแสดงออก ACE2 จมูกและกิ่งยังสูงกว่าในผู้ใหญ่มากกว่าในเด็ก14 อย่างไรก็ตามเพื่อความรู้ที่ดีที่สุดของเราการศึกษาเพียงไม่กี่ชิ้นได้ตรวจสอบว่าการแสดงออกของ ACE2 ในปอดมีการเปลี่ยนแปลงอย่างไรในโรคอื่น ๆ ผู้ป่วยเรื้อรังโรคไต(CKD) มีความเสี่ยงต่อโรค COVID-19 ที่รุนแรง แต่ไม่มีหลักฐานของความชุกที่เพิ่มขึ้นของ COVID-19 ในผู้ป่วยโรคไตเรื้อรัง15–21 เมื่อพิจารณาถึงข้อเท็จจริงที่ว่าจําเป็นต้องมี ACE2 สําหรับการติดเชื้อ COVID-19 ผลการวิจัยเหล่านี้อาจชี้ให้เห็นว่าการแสดงออกของ ACE2 ในปอดไม่ได้รับการปรับปรุงในผู้ป่วยโรคไตเรื้อรัง โดยเฉพาะอย่างยิ่งการแสดงออกของเซลล์ ACE2 น่าจะเกี่ยวข้องกับความไวต่อความเสี่ยงของการติดเชื้อโดย SARS-CoV ซึ่งเกี่ยวข้องกับ SARS-CoV-222 ความจริงที่ว่าเด็กที่มีการแสดงออก ACE2 ต่ํามีความอ่อนไหวต่อ COVID-19 น้อยกว่าผู้ใหญ่23 ยังสนับสนุนสมมติฐานเหล่านี้ ดังนั้นเราจึงทําการทดลองเพื่อตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงในการแสดงออกของ ACE2 ในปอดในหนูแบบจําลอง CKD สองประเภท: หนูที่เกิดจากอะดีนีน (เช่นหนูอะดีนีน) และกรดอะสตอลโลจิก (AA) ที่เกิดจาก (เช่นหนู AA) เพื่อจัดการกับสมมติฐานนี้ ความสัมพันธ์ของนิพจน์ ACE2 กับตัวบล็อก RAS ก็ถูกตรวจสอบเช่นกัน จนถึงขณะนี้การใช้ตัวบล็อก RAS ได้รับการแสดงเพื่อเพิ่มการแสดงออกของอวัยวะ ACE2 ในบางกรณี24–27 การตรวจสอบทางระบาดวิทยาล่าสุดแสดงให้เห็นว่าการใช้ตัวบล็อก RAS ไม่ได้เพิ่มความเสี่ยงของ COVID-1928–30 นอกจากนี้ การแสดงออกของ ACE2 ในปอดไม่ได้รับการปรับปรุงเมื่อตัวบล็อก RAS ได้รับการจัดการกับหนูปกติ31 อย่างไรก็ตาม ยังไม่มีรายงานเกี่ยวกับ efects ของตัวบล็อก RAS ในการแสดงออก ACE2 ของปอดในบริบทของโรคไตเรื้อรัง จุดนี้เป็นสิ่งจําเป็นสําหรับการจัดการ COVID-19 ในอนาคตและผลสืบเนื่อง ที่นี่เราตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงในการแสดงออกของ ACE2 ในปอดเนื่องจากการรักษาตัวบล็อก RAS ในหนูรุ่น CKD
ผลลัพธ์หนูรุ่น CKD ที่เกิดจากอะดีนีนแสดงให้เห็นว่าน้ําหนักลดลงอย่างเห็นได้ชัดการทํางานของไตลดลงและความดันโลหิตสูง (BP) เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม น้ําหนักตัวพื้นฐาน (BW) และความดันโลหิตซิสโตลิกเหมือนกันระหว่างกลุ่มควบคุมและอะดีนีน BW เพิ่มขึ้นเมื่อเวลาผ่านไปในกลุ่มควบคุมในขณะที่มันลดลงในกลุ่มอะดีนีน; กําไร BW นี้แตกต่างกันอย่างมีนัยสําคัญระหว่างกลุ่ม (รูปที่ 1A) Systolic BP ได้รับการยกระดับอย่างมีนัยสําคัญในกลุ่ม adenine เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุมเมื่อเวลาผ่านไป (รูปที่ 1B) ที่ 2 สัปดาห์การขับถ่ายอัลบูมินในปัสสาวะเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสําคัญในกลุ่มอะดีนีนเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม (หนูอะดีนีน 41.0±8.3 ไมโครกรัมต่อวันเทียบกับการควบคุม 13.6±1.7 ไมโครกรัมต่อวัน P<0.001; fig. 1e).="" there="" were="" also="" signifcant="" enhancements="" of="" plasma="" creatinine="" and="" blood="" urea="" nitrogen="" (bun)="" levels="" in="" the="" adenine="" group,="" compared="" with="" the="" control="" group="" at="" 2="" or="" 4 weeks="" (creatinine:="" 2 weeks:="" adenine="" mice="" 0.22±0.01 mg/dl="" vs.="" control="" 0.10±0.01 mg/="" dl,=""><0.05; 4 weeks:="" adenine="" mice="" 0.31±0.06 mg/dl="" vs.="" control="" 0.11±0.01 mg/dl,=""><0.01; bun:="" 2 weeks:="" adenine="" mice="" 65.0±7.0 mg/dl="" vs.="" control="" 25.7±0.5 mg/dl,=""><0.01; 4 weeks:="" adenine="" mice="" 61.7±12.5 mg/dl="" vs.="" control="" 25.6±1.6 mg/dl,=""><0.01; fig. 1c,="" d).="" moreover,="" creatinine="" clearance="" also="" showed="" a="" signifcant="" reduction="" in="" the="" adenine="" group="" (2 weeks:="" adenine="" mice="" 170±15 μl/min="" vs.="" control="" 397±25 μl/min,=""><0.001; 4 weeks:="" adenine="" mice="" 136±29 μl/min="" vs.="" control="" 357±31 μl/min,=""><0.001;>
การแสดงออกของ ACE2 ในไตลดลงอย่างมีนัยสําคัญในหนูรุ่น CKD ที่เกิดจากอะดีนีนเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุมในขณะที่การแสดงออกของ ACE2 ในปอดไม่แตกต่างกันระหว่างกลุ่ม.เนื้อเยื่อวิทยาของไตแสดงให้เห็นถึงการขยายตัวที่แตกต่างกันและการฝ่อของ tubules เช่นเดียวกับการแทรกซึมของเซลล์เข้าไปในเกี่ยวกับไตคั่นระหว่างหน้าในหนูอะดีนีน การย้อมสี ACE2 ส่วนใหญ่พบในท่อใกล้เคียงในทั้งสองกลุ่ม แต่ระดับของการย้อมสีลดลงในกลุ่มอะดีนีน (รูปที่ 2A) ระดับโปรตีน ACE2 ในไต(ประมาณการโดยการวิเคราะห์รอยเปื้อนตะวันตก) พบว่ากลุ่มอะดีนีนลดลงอย่างเห็นได้ชัดเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุมทั้ง 2 และ 4 สัปดาห์ (2 สัปดาห์: หนูอะดีนีน 0.55±0.04 เทียบกับการควบคุม 1.00±0.10, P<0.001; 4 weeks:="" adenine="" mice="" 0.32±0.07="" vs.="" control="" 0.90±0.07,=""><0.001; fig. 2c).="" in="">ไต ACE2นิพจน์ mRNA แสดงให้เห็นว่ากลุ่มอะดีนีนลดลงอย่างเห็นได้ชัดที่ 2 สัปดาห์ (หนูอะดีนีน 0.61±0.04 เทียบกับการควบคุม 1.00±0.03, P<0.001; fig. 2e);="" a="" similar="" tendency="" for="" reduction="" was="" observed="" at="" 4 weeks,="" although="" the="" difference="" was="" not="" statistically="" signifcant="" (fig. 2e).="" lung="" histology="" findings="" did="" not="" differ="" between="" groups;="" ace2="" staining="" was="" observed="" in="" type="" 2="" alveolar="" epithelial="" cells="" (fig. 2b).="" there="" were="" no="" differences="" in="" ace2="" protein="" or="" mrna="" expression="" levels="" in="" the="" lungs="" at="" 2="" or="" 4 weeks="" (fig. 2d,="" f).="" the="" difference="" in="" plasma="" ace2="" activity="" was="" not="" statistically="" signifcant="">
CISTANCHE จะช่วยปรับปรุงไต/ไตวาย
หนูรุ่น CKD ที่เกิดจาก AA พบว่าน้ําหนักลดลงอย่างเห็นได้ชัดและการทํางานของไตลดลงเมื่อเทียบกับกลุ่มยานพาหนะในขณะที่ความดันโลหิตไม่แตกต่างกันระหว่างกลุ่มBW พื้นฐานและ BP systolic เหมือนกันระหว่างยานพาหนะและกลุ่ม AA BW เพิ่มขึ้นเมื่อเวลาผ่านไปในกลุ่มยานพาหนะในขณะที่ลดลงในกลุ่ม AA กําไร BW นี้แตกต่างกันอย่างมีนัยสําคัญระหว่างกลุ่ม (รูปที่ 3A) อย่างไรก็ตามไม่มีความแตกต่างในความดันโลหิตซิสโตลิกระหว่างกลุ่ม (รูปที่ 3B) เมื่อเทียบกับกลุ่มยานพาหนะมีการปรับปรุงระดับ creatinine และ BUN ในพลาสมาอย่างมีนัยสําคัญรวมถึงการขับถ่ายอัลบูมินปัสสาวะในกลุ่ม AA (creatinine: หนู AA 0.40±0.03 mg / dL เทียบกับยานพาหนะ 0.14±0.01 mg / dL, P<0.001; bun:="" aa="" mice="" 62.8±4.6 mg/="" dl="" vs.="" vehicle="" 29.0±1.4 ="" mg/dl,=""><0.001; urinary="" albumin="" excretion:="" aa="" mice="" 61.3±7.3 ="" μg/day="" vs.="" vehicle="" 9.5±0.9 μg/day,=""><0.001; fig. 3c–e).="" creatinine="" clearance="" also="" showed="" a="" signifcant="" reduction="" in="" the="" aa="" group="" (aa="" mice="" 72±12="" μl/min="" vs.="" vehicle="" 159±13="" μl/min,=""><0.001;>
การแสดงออกของ ACE2 ในไตลดลงอย่างมีนัยสําคัญในหนูรุ่น CKD ที่เกิดจาก AA เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุมในขณะที่ระดับโปรตีน ACE2 ในปอดไม่แตกต่างกันระหว่างกลุ่ม. การวิเคราะห์เนื้อเยื่อวิทยาของไตแสดงให้เห็นว่าท่อฝ่อและการแทรกซึมของเซลล์เข้าไปในเกี่ยวกับไตคั่นระหว่างหน้าในกลุ่ม AA การย้อมสี ACE2 ส่วนใหญ่พบในท่อใกล้เคียงในทั้งสองกลุ่ม แต่ระดับของการย้อมสีลดลงในกลุ่ม AA (รูปที่ 4A) ระดับโปรตีน ACE2 ในไตแสดงให้เห็นว่ากลุ่ม AA ลดลงอย่างเห็นได้ชัดเมื่อเทียบกับกลุ่มยานพาหนะ (หนู AA 0.22±0.03 เทียบกับยานพาหนะ 1.00±0.08, PA<0.001; fig. 4c).="" in="" addition,="">ไต ACE2การแสดงออกของ mRNA ลดลงอย่างมากในกลุ่ม AA (หนู AA 0.30±0.02 เทียบกับยานพาหนะ 1.00±0.06, P<0.001; fig. 4e).="" lung="" histology="" findings="" did="" not="" differ="" between="">
การย้อมสี ACE2 พบได้ในเซลล์เยื่อบุผิวถุงลมชนิดที่ 2 (รูปที่ 4B) และไม่มีความแตกต่างในระดับโปรตีน ACE2 ในปอดระหว่างกลุ่ม (รูปที่ 4D) การแสดงออกของ mRNA ACE2 ในปอดลดลงอย่างมีนัยสําคัญในกลุ่ม AA มากกว่าในกลุ่มยานพาหนะ (หนู AA 0.76±0.04 เทียบกับยานพาหนะ 1.00±0.04, PA<0.01; fig. 4f).="" moreover,="" there="" was="" a="" signifcant="" reduction="" in="" plasma="" ace2="" activity="" in="" the="" aa="" group="" (aa="" mice="" 84.8±2.6="" rfu/min="" vs.="" vehicle="" 98.3±3.0="" rfu/min,=""><0.01;>
Olmesartan ลดทอนการปรับปรุงของความดันโลหิตและการขับถ่ายอัลบูมินปัสสาวะและการลดน้ําหนักในหนูรุ่น CKD ที่เกิดจากอะดีนีนการรักษา Olmesartan ลดทอนการลดน้ําหนักในหนูอะดีนีน (รูปที่. 5A) การรักษาด้วย Olmesartan ยังช่วยลดความดันโลหิตซิสโตลิกได้อย่างมีนัยสําคัญทั้งในกลุ่มควบคุมและกลุ่มอะดีนีน (หนูอะดีนีน 131.5±0.4 mmHg เทียบกับการควบคุม 121.2±0.7 mmHg, Pg<0.001; olmesartan="" mice="" 111.7±1.1 ="" mmhg="" vs.="" control="" 121.2±0.7 ="" mmhg,=""><0.001; adenine+olmesartan="" mice="" 117.2±0.9 ="" mmhg="" vs.="" adenine="" mice="" 131.5±0.4 mmhg,=""><0.001; fig. 5b).="" in="" adenine="" mice,="" olmesartan="" treatment="" improved="" plasma="" creatinine="" level="" (adenine="" mice="" 0.19±0.02="" vs.="" control="" 0.13±0.01,="" p="">< 0.01;="" adenine+olmesartan="" mice="" 0.14±0.01="" vs.="" adenine="" mice="" 0.19±0.02,="" p="">< 0.01;="" fig. 5c)="" and="" suppressed="" urinary="" albumin="" excretion="" (adenine="" mice="" 67.9="" ±6.7 μg/day="" vs.="" control="" 18.0±3.6 μg/day,="" p=""><0.001; adenine+olmesartan="" mice="" 52.5±2.3="" vs.="" olmesartan="" mice="" 17.4±3.7 μg/day,=""><0.001; adenine-olmesartan="" mice="" 52.5±2.3 μg/day="" vs.="" adenine="" mice="" 67.9±6.7 μg/day,=""><0.05;>
Olmesartan ไม่ได้กล่าวถึงการแสดงออกของ ACE2ในกลุ่มควบคุมและอะดีนีนทั้ง mRNA หรือระดับการแสดงออกของโปรตีนของ ACE2 ในไตไม่ได้รับการเปลี่ยนแปลงโดยการรักษา olmesartan (รูปที่ 6A, C) ไม่มีการเปลี่ยนแปลงใน aCE2 mRNA ในปอดหรือระดับการแสดงออกของโปรตีนระหว่างกลุ่มควบคุมและกลุ่มอะดีนีน (รูปที่ 6B, D) นอกจากนี้ยังไม่มีความแตกต่างที่มีความหมายในกิจกรรมพลาสม่า ACE2 (รูปที่ 6E) นอกจากนี้ยังมีการตรวจสอบการแสดงออกของ ACE2 mRNA ในทางเดินหายใจส่วนบน (คอหอย) แต่ไม่พบความแตกต่างที่มีความหมายระหว่างกลุ่ม (รูปเสริม S1)
การอภิปรายการระบาดใหญ่ของ Te COVID-19 มีผลกระทบอย่างลึกซึ้งทั่วโลก สําหรับผู้สูงอายุและผู้ที่มีโรคประจําตัวข้อมูลเกี่ยวกับความเสี่ยงและความรุนแรงของการติดเชื้อ COVID-19 เป็นข้อพิจารณาที่สําคัญ มีการศึกษาทางระบาดวิทยาจํานวนมากเกี่ยวกับ COVID-19 ทั่วโลกซึ่งแสดงให้เห็นว่าผู้ป่วยโรคไตเรื้อรังมีแนวโน้มที่จะเป็น COVID-1917 ที่รุนแรง แต่การเจ็บป่วยของ COVID-19 อาจไม่สูงขึ้นในผู้ป่วยโรค CKD15–21 โดยเฉพาะอย่างยิ่งผลการวิเคราะห์เมตาหลายครั้งพบว่าความชุกของโรคไตเรื้อรังอยู่ที่ 1.7–5.2% ในผู้ป่วย COVID-1915–17,21 นอกจากนี้การวิเคราะห์ผู้ป่วย COVID-19 ใน New 5,700 ราย
พื้นที่ยอร์กแสดงให้เห็นว่า 8.5% มีพื้นฐานโรคไต19. เนื่องจากความชุกของโรคไตเรื้อรังโดยประมาณอยู่ที่ 9.1% ทั่วโลก18 และประมาณ 15% ในสหรัฐอเมริกา20 ความเสี่ยงของการติดเชื้อ SARS-CoV-2 อาจไม่เพิ่มขึ้นเมื่อเทียบกับการปรากฏตัวของโรคไตเรื้อรัง ACE2 มีบทบาทสําคัญในการแพร่เชื้อ COVID-191,2 นอกจากนี้ระดับของการแสดงออกของ ACE2 ในเซลล์ทางเดินหายใจมีความสัมพันธ์กับความเสี่ยงของการติดเชื้อโดย SARS-CoV ซึ่งเป็น coronavirus ที่คล้ายกันกับตัวแทนสาเหตุของ COVID-1922 เนื่องจาก COVID-19 เป็นโรคทางเดินหายใจการแสดงออกของ ACE2 ในปอดจึงเป็นองค์ประกอบสําคัญของการแพร่กระจายของโรค ในการศึกษาปัจจุบันเราตั้งสมมติฐานว่าการขาดการเพิ่มขึ้นของการแสดงออกของ ACE2 ในปอดใน CKD นั้นเชื่อมโยงกับการไม่มีการเจ็บป่วย COVID-19 ที่เพิ่มขึ้น สมมติฐานนี้ได้รับการสนับสนุนจากข้อเท็จจริงที่ว่าเด็กที่มีการแสดงออก ACE2 ต่ํามีความอ่อนไหวต่อ COVID-19 น้อยกว่าผู้ใหญ่ เราใช้หนูแบบจําลอง CKD สองประเภทในการทดลองของเราเพื่อตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงในการแสดงออกของ ACE2 ในปอดที่เกี่ยวข้องกับการเกิดโรค CKD โรคไตเรื้อรังที่เกิดจากอะดีนีนเป็นแบบจําลองสัตว์ที่เป็นตัวแทนของโรค32 การให้อะดีนีนมากเกินไปอาจทําให้เกิดโรคไตเรื้อรังโดยทําให้เกิดเกี่ยวกับไตท่ออุดตันและความเสื่อมเช่นเดียวกับเกี่ยวกับไตพังผืดคั่นระหว่างหน้าเนื่องจากการสะสมของ 2-8 dihydroxyadenine32,33 ในทางตรงกันข้าม CKD ที่เกิดจาก AA เกิดจากการก่อให้เกิดพังผืดจากความเสียหายท่อที่เกิดจาก AA34 ทั้งสองรุ่นนี้ได้รับการคัดเลือกเนื่องจาก BP ได้รับการพิสูจน์แล้วว่าเพิ่มขึ้นในรุ่น CKD ที่เกิดจากอะดีนีน 35 ในขณะที่ไม่เพิ่มขึ้นในรุ่น CKD ที่เกิดจาก AA36 โดยเฉพาะอย่างยิ่งความดันโลหิตสูงเป็นภาวะแทรกซ้อนที่พบบ่อยในผู้ป่วยโรคไตเรื้อรัง เราสันนิษฐานว่าจะเป็นประโยชน์ในการตรวจสอบว่ามีหรือไม่มีความดันโลหิตสูงมีผลต่อการแสดงออกของ ACE2 ในปอดในการเกิดโรค CKD หรือไม่ ผลการวิจัยพบว่าไต ACE2ระดับโปรตีนลดลงใน CKD ทั้งสองรุ่น ในหนูอะดีนีน, ไม่มีความแตกต่างที่มีความหมายในระดับ mRNA ที่ 4 สัปดาห์, แต่มีการลดลงของระดับโปรตีน. หนึ่งในเหตุผลสําหรับความแตกต่างนี้อาจเกี่ยวข้องกับการปราบปรามการแปล Lambert DW, et al. แสดงให้เห็นว่า miR-421 ปราบปรามการแปลโปรตีน ACE2 โดยไม่ส่งผลกระทบต่อระดับการถอดเสียง ACE237 การศึกษาอื่นยังแสดงให้เห็นว่าซีรั่ม miR-421 เพิ่มขึ้นในผู้ป่วยโรคไตเรื้อรังหรือความดันโลหิตสูง38,39 ดังนั้นในกลุ่มหนูอะดีนีนที่มีโรคไตเรื้อรังและความดันโลหิตสูงเป็นเวลานาน (4 สัปดาห์), miR-421
อาจเพิ่มขึ้นและยับยั้งการแปลโปรตีน, ส่งผลให้เกิดความแตกต่างระหว่าง mRNA และการแสดงออกของโปรตีน. ระดับโปรตีน ACE2 ในปอดไม่แตกต่างกันใน CKD ทั้งสองรุ่นเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุมและยานพาหนะ แม้ว่าจะเป็นที่น่าสนใจว่าการแสดงออกของ MRNA ACE2 ในปอดลดลงในแบบจําลอง CKD ที่เกิดจาก AA แต่การค้นพบของเรานั้นโดดเด่นกว่าเพราะเราไม่พบความแตกต่างในระดับโปรตีน ACE2 ในปอดซึ่งส่งผลโดยตรงต่อการติดเชื้อ SARS-CoV-2 นอกจากนี้กิจกรรมพลาสม่า ACE2 ไม่ได้แตกต่างกันในทั้งสองรุ่น CKD เมื่อเทียบกับการควบคุมและยานพาหนะ ACE2 ที่ละลายน้ําได้ในพลาสมาถือว่าแยกออกและปล่อยออกมาจากเซลล์เนื้อเยื่อ กิจกรรม ACE2 ในพลาสมาที่เพิ่มขึ้นได้รับการรายงานว่ามีความสัมพันธ์กับการเพิ่มขึ้นของการปล่อยโปรตีน ACE2 จากเนื้อเยื่อซึ่งบ่งชี้ว่าโปรตีน ACE2 ในเนื้อเยื่อลดลง40 ดังนั้นผลการศึกษาในปัจจุบันที่กิจกรรม ACE2 ในพลาสมาไม่เปลี่ยนแปลงในสถานะ CKD บ่งชี้ว่าการปล่อยโปรตีน ACE2 ที่แสดงในเนื้อเยื่อจะไม่เปลี่ยนแปลงในสถานะ CKD ซึ่งสนับสนุนการค้นพบว่าการแสดงออกของโปรตีน ACE2 ในเนื้อเยื่อไม่เปลี่ยนแปลงในบริบทของโรคไตเรื้อรัง ความสัมพันธ์ระหว่างตัวบล็อก COVID-19 และ RAS เป็นจุดสนใจอย่างต่อเนื่องของการอภิปรายวิจัย การศึกษาในสัตว์ก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่าตัวบล็อก RAS ช่วยเพิ่มการแสดงออกของเนื้อเยื่อ ACE2 ซึ่งนําไปสู่ความกลัวว่าการใช้ตัวบล็อก RAS อาจเพิ่มความเสี่ยงของการติดเชื้อ SARS-CoV-2 อย่างไรก็ตามการใช้ตัวบล็อก RAS ในการศึกษาก่อนหน้านี้เหล่านั้นนําไปสู่การเพิ่มประสิทธิภาพของเนื้อเยื่อ ACE2 ภายใต้เงื่อนไขทางพยาธิวิทยาที่เฉพาะเจาะจง24,27 เท่านั้น การปรับขึ้นนี้ไม่เกินช่วงปกติ การศึกษาอื่นตรวจสอบปอดและไต ACE2การแสดงออกในหนูปกติที่รับการรักษาด้วยตัวบล็อก RAS พบว่าไม่มีการเพิ่มขึ้นเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม31 ในทางกลับกันมีรายงานว่าตัวบล็อก RAS เช่น candesartan และ captopril เพิ่มการแสดงออก ACE2 ในปอดในหนูปกติ41 ในการปฏิบัติทางคลินิกในโลกแห่งความเป็นจริงการศึกษาทางระบาดวิทยาบางอย่างเกี่ยวกับการใช้ตัวบล็อก RAS ในผู้ป่วย COVID-19 ได้แสดงให้เห็นว่าการใช้ยาเหล่านั้นไม่ได้เพิ่มความเสี่ยงของ COVID-1928–30 อย่างไรก็ตามผลกระทบของตัวบล็อก RAS ต่อการแสดงออกของ ACE2 ในปอดยังคงเป็นที่ถกเถียงกันอยู่ ไม่มีการศึกษาก่อนหน้านี้ได้ตรวจสอบ efects ของตัวบล็อก RAS ในการแสดงออก ACE2 ของปอดในบริบทของ CKD แม้ว่าตัวบล็อก RAS เป็นสิ่งจําเป็นสําหรับการรักษาผู้ป่วยโรคไตเรื้อรัง การศึกษาในปัจจุบันได้ดําเนินการเพื่อแก้ไขช่องว่างนี้ในวรรณคดี เพื่อสร้างแบบจําลองการปฏิบัติทางคลินิกในโลกแห่งความเป็นจริงอย่างใกล้ชิดยิ่งขึ้นเราใช้แบบจําลอง CKD ที่เกิดจากอะดีนีนซึ่งแสดงความดันโลหิตสูงพร้อมกัน ผลการวิจัยพบว่าการบริหารงานของ olmesartan ซึ่งเป็นตัวบล็อก RAS ไม่ได้ช่วยเพิ่มการแสดงออกของ ACE2 ในปอดเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม นอกจากนี้การแสดงออกของ ACE2 mRNA ในทางเดินหายใจส่วนบนซึ่งเป็นเป้าหมายเริ่มต้นของการติดเชื้อ SARS-CoV-2 ไม่ได้รับการปรับปรุงเพื่อตอบสนองต่อการรักษา olmesartanไต ACE2ระดับโปรตีนลดลงในแบบจําลอง CKD การบริหารงานของ olmesartan ไม่ได้เพิ่มระดับโปรตีน ACE2 ของไตในการควบคุมและหนูอะดีนีน การขาดการฟื้นฟูในไต ACE2 ในหนูอะดีนีนที่ได้รับการรักษาด้วย olmesartan อาจเกิดจากการใช้แบบจําลอง CKD ที่แตกต่างกันเมื่อเทียบกับการศึกษาก่อนหน้านี้27 เช่นเดียวกับระยะเวลาที่ค่อนข้างสั้นของการรักษาตัวรับ angiotensin25,27 อย่างไรก็ตามการรักษา olmesartan ปรับปรุงพารามิเตอร์ไตวายหลายอย่างรวมถึงการขับถ่ายอัลบูมินในปัสสาวะ ผลลัพธ์เหล่านี้สนับสนุนการใช้ตัวบล็อก RAS อย่างต่อเนื่องในผู้ป่วย COVID-19 ที่เป็นโรคไตเรื้อรัง
CISTANCHE จะช่วยปรับปรุงการติดเชื้อในไต/ไต
การศึกษานี้มีข้อจํากัดบางประการ ประการแรกมันตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงของการแสดงออก ACE2 ในปอดในหนูแบบจําลอง CKD เท่านั้นในขณะที่ไม่ได้ตรวจสอบการติดเชื้อ SARS-CoV-2 โดยตรง ประการที่สองเราสังเกตหนูอะดีนีนเป็นเวลา 4 สัปดาห์และหนู AA เป็นเวลา 8 สัปดาห์ในการศึกษานี้ แต่ผลลัพธ์อาจแตกต่างกันในการสังเกตเป็นระยะเวลานานขึ้น ประการที่สามการแสดงออกของ ACE2 ในปอดอาจแตกต่างกันระหว่างหนูและมนุษย์ ประการที่สี่ ในผู้ป่วยโรคไตเรื้อรังความรุนแรงของ COVID-19 มีแนวโน้มที่จะมากกว่า นี้ แต่เราไม่สามารถอ้างถึงกลไกพื้นฐานของความรุนแรงได้ ประการที่ห้าไม่เพียง แต่ระดับการแสดงออกของ ACE2 ในปอดเท่านั้นที่กําหนดความไวต่อ COVID-19 แต่อาจได้รับผลกระทบจากปัจจัยอื่น ๆ อีกมากมาย สรุปได้ว่าเราไม่พบการเปลี่ยนแปลงในการแสดงออกของโปรตีน ACE2 ในปอดในหนูแบบจําลอง CKD โดยไม่คํานึงถึงสถานะความดันโลหิตสูง นอกจากนี้การใช้การรักษาตัวรับ angiotensin ในหนูรุ่น CKD ไม่ได้เพิ่มการแสดงออกของ ACE2 ในปอด ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นถึงสมมติฐานที่ว่าความเสี่ยงของการเจ็บป่วยจาก COVID-19 อาจไม่สูงขึ้นในผู้ป่วยโรคไตเรื้อรังเนื่องจากการแสดงออก ACE2 ในปอดที่มั่นคง ผลการวิจัยของ Te ยังให้หลักฐานทางวิทยาศาสตร์พื้นฐานที่สําคัญว่าสามารถใช้ตัวบล็อก RAS ได้อย่างปลอดภัยในการรักษาผู้ป่วย COVID-19 ที่เป็นโรคไตเรื้อรัง
วัสดุและวิธีการ .การศึกษานี้ดําเนินการตามแนวทางของสถาบันสุขภาพแห่งชาติสําหรับการใช้สัตว์ทดลอง การทดลองในสัตว์ทั้งหมดได้รับการตรวจสอบและอนุมัติโดยคณะกรรมการการศึกษาสัตว์ของมหาวิทยาลัยเมืองโยโกฮาม่า (หมายเลขอนุมัติ: FA20-027) ซึ่งเป็นไปตามแนวทางของ ARRIVE มีความพยายามที่จะลดจํานวนสัตว์ที่ใช้และรับประกันความทุกข์ทรมานน้อยที่สุด หนูถูกจัดให้อยู่ในสภาพแวดล้อมที่มีการควบคุมโดยมีวงจรแสงมืด 12 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 25 °C หนูได้รับอนุญาตให้เข้าถึงอาหารและน้ําได้ฟรี หนูรุ่น CKD การทดลอง Te ดําเนินการโดยใช้หนูตัวผู้ C57BL/6 J อายุ 8-9 สัปดาห์ หลังจากปรับสภาพให้ชินกับสภาพ 1 สัปดาห์ในทุกกลุ่ม ในการทดลองอะดีนีนหนูได้รับอาหารผสมกับอะดีนีน 0.2% (0.2% อะดีนีน + 0.3% NaCl, 3.6 กิโลแคลอรี / กรัม, CE-2; CLEA, โตเกียว, ญี่ปุ่น; กลุ่มอะดีนีน) หรืออาหารมาตรฐาน (0.3% โซเดียมคลอไรด์, 3.6 กิโลแคลอรี / กรัม, CE-2; ซีลีอา; กลุ่มควบคุม) เป็นเวลา 2 หรือ 4 สัปดาห์ ในการทดลอง AA หนูถูกฉีดเข้าช่องท้องด้วย AA (3 มก. / กก.) สัปดาห์ละสองครั้งเป็นเวลา 4 สัปดาห์ตามด้วยระยะเวลาพักฟื้น 4 สัปดาห์ กลุ่มยานพาหนะถูกฉีดด้วยยานพาหนะ (75% ไดเมทิลซัลฟอกไซด์) ในการทดลองการรักษา olmesartan หนูถูกสุ่มแบ่งออกเป็นสี่กลุ่มทดลอง: (1) (2) กลุ่มอะดีนีนให้อาหารผสมกับอะดีนีน 0.2% (3) กลุ่มควบคุม olmesartan รับการรักษาด้วยตัวรับ AT1 olmesartan ที่เป็นปฏิปักษ์ในน้ําดื่ม (4 มก. / กก. / วัน; (4 มก. / กก. / วัน; (4 มก. / กก. / วัน; (4 มก. / กก. / วัน; 4 มก. / กก. / วัน; 4 มก. / กก. / วัน; 2) ไดอิจิ Sankyo เคมีภัณฑ์ฟาร์มา จํากัด, โตเกียว, ญี่ปุ่น); และ (4) กลุ่ม adenine-olmesartan ซึ่งให้ปริมาณเท่ากับกลุ่มในกลุ่มที่ 2 และ 3
การวัดความดันโลหิตSystolic BP ถูกวัดโดยวิธี tail-cuf (BP-Monitor MK-2000; BP-2000) บริษัท มุโรมาจิ คิไค โตเกียว ประเทศญี่ปุ่น) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้42,43 การวัดทั้งหมดดําเนินการระหว่างเวลา 9:00 น. ถึง 14:00 น. มีการวัดอย่างน้อย 10 ครั้งในเมาส์แต่ละตัวและค่าเฉลี่ยถูกใช้สําหรับการวิเคราะห์การวิเคราะห์ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสแบบถอดความเชิงปริมาณเชิงปริมาณแบบเรียลไทม์RNA ทั้งหมดถูกสกัดจากปอดเกี่ยวกับไตและเนื้อเยื่อคอหอยโดยใช้ ISOGEN (ยีนนิปปอน, โตเกียว, ญี่ปุ่น); cDNA ถูกสังเคราะห์โดยใช้ระบบ SuperScript III First-Strand (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) การวิเคราะห์ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสแบบถอดความย้อนกลับเชิงปริมาณแบบเรียลไทม์ดําเนินการโดยใช้ระบบตรวจจับลําดับ ABI PRISM 7000 ผลิตภัณฑ์การถอดความแบบย้อนกลับได้รับการบ่มเพาะด้วย TaqMan PCR Master Mix และโพรบ TaqMan แบบกําหนดเอง (ระบบชีวภาพประยุกต์ เมืองฟอสเตอร์ แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้44,45 ใช้โพรบ TaqMan ต่อไปนี้: ACE2 (Mn01159003_m1) ระดับ mRNA ถูกทําให้เป็นมาตรฐานสําหรับ 18S rRNA
การวิเคราะห์รอยเปื้อนแบบตะวันตกการแสดงออกของโปรตีนถูกวิเคราะห์โดยการซับแบบตะวันตกโดยใช้ homogenates เนื้อเยื่อตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้45,46 สั้น ๆ, สารสกัดจากโปรตีนทั้งหมดถูกเตรียมจากเนื้อเยื่อที่มีโซเดียม dodecyl ซัลเฟตที่ประกอบด้วยบัฟเฟอร์ตัวอย่าง. ความเข้มข้นของโปรตีนของแต่ละตัวอย่างถูกวัดด้วย NanoDrop One (Thermo Fisher Scientific) โดยใช้อัลบูมินซีรั่มวัวเป็นมาตรฐาน สารสกัดโปรตีนในปริมาณที่เท่ากันจากตัวอย่างเนื้อเยื่อแต่ละตัวอย่าง (เนื้อเยื่อปอด: 24 μg, เนื้อเยื่อไต: 10 μg) ถูกแยกส่วนบนเจลโพลีอะคริลาไมด์ 5-20% (อัตโต โตเกียว ญี่ปุ่น) โปรตีนที่แยกแล้ว Te จะถูกถ่ายโอนไปยังเมมเบรนโพลีไวนิลลิดีนไดฟลูออไรด์โดยใช้ระบบซับแห้ง iBlot (Invitrogen) เมมเบรนถูกปิดกั้นเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องด้วยน้ําเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟตที่มีนมผงพร่องมันเนย 5% เยื่อหุ้มเซลล์ถูกบ่มด้วยแอนติบอดีปฐมภูมิสําหรับ ACE2 (Ab108252 1:500 [ปอด] หรือ 1:1000 [ไต], Abcam, Cambridge, MA, USA) และ β-actin (A5441 1:10,000, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) เมมเบรนถูกล้างแล้วบ่มด้วยแอนติบอดีทุติยภูมิเป็นเวลา 60 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ไซต์ Te ของปฏิกิริยาแอนติบอดี-แอนติเจนถูกมองเห็นโดยสารตั้งต้น chemiluminescence ที่ได้รับการปรับปรุง (เมอร์ค, เคนิลเวิร์ธ, นิวเจอร์ซีย์, สหรัฐอเมริกา) ภาพถูกวิเคราะห์เชิงปริมาณโดยใช้ ChemiDoc Touch (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) เพื่อเปรียบเทียบระดับการแสดงออกของโปรตีน ACE2 ในปอดและเนื้อเยื่อไตในหนูปกติจะทําการซับแบบตะวันตกเพิ่มเติมบนเมมเบรนเดียวกัน (รูปเสริม S2) ปริมาณโปรตีนที่อธิบายถูกแยกส่วนออกเป็นเจล ((A) ปอด: 24/10/1 μg, ไต: 24/10/1 μg, (B) ปอด: 24/12 μg, ไต: 0.2/0.15/0.1 μg); มีการใช้แอนติบอดีปฐมภูมิเดียวกันสําหรับ ACE2 (Ab108252 1:1000, Abcam, Cambridge, MA, USA) ในการตรวจสอบความจําเพาะของแอนติบอดีจะใช้เปปไทด์บล็อกแบบเลือก ACE2 (ab198988) การซับแบบตะวันตกแสดงแถบโปรตีนเดี่ยวซึ่งถูกยกเลิกโดยเปปไทด์บล็อกแบบเลือก ACE2 (รูปเสริม S3)
การวิเคราะห์อิมมูโนฮิสโตเคมีปอดและเกี่ยวกับไตเนื้อเยื่อจากหนูได้รับการแก้ไขด้วยพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 4% และต่อมาฝังอยู่ในพาราฟิน ส่วนที่หนาสี่ไมโครเมตรถูกทําให้เป็น dewaxed และคืนความชุ่มชื้น การดึงแอนติเจนทําได้โดยการทําความร้อนด้วยไมโครเวฟ ส่วน Te ถูกบล็อกเพื่อลดกิจกรรมไบโอตินภายนอกโดยใช้รีเอเจนต์ปิดกั้น peroxidase (Dako, Carpinteria, CA, USA) และรับการรักษาเป็นเวลา 60 นาทีด้วยเซรั่มแพะปกติ 10% ในน้ําเกลือที่มีฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ส่วนนั้นถูกบ่มด้วยแอนติบอดีต่อต้าน ACE2 เจือจางเป็น 1:500 (Ab15348, Abcam) เพื่อตรวจสอบความจําเพาะของแอนติบอดีการบําบัดด้วยภูมิคุ้มกันยังถูกตรวจสอบโดยการละเว้น Ab หลักและใช้เปปไทด์บล็อกแบบเลือก ACE2 (ab15352) การย้อมสี ACE2 ในปอดและเนื้อเยื่อไตs ถูกสังเกตซึ่งไม่ได้สังเกตเมื่อแอนติบอดีถูกดูดซึมล่วงหน้าด้วยเปปไทด์บล็อกที่เลือก ACE2 (ab15352) หรือการละเว้นแอนติบอดี ACE2 (รูปที่ S4 เพิ่มเติม)
CISTANCHE จะช่วยปรับปรุงอาการปวดไต/ไต
การวิเคราะห์ทางชีวเคมีหลังจากสูดดมยาชาไอโซฟลูราน 5% ตัวอย่างเลือดจะถูกรวบรวมโดยการเจาะหัวใจในสภาวะที่เลี้ยงโดยการเจาะหัวใจ สัตว์ทดลองถูกฆ่าตายอย่างมีมนุษยธรรมหลังจากการดมยาสลบ ตัวอย่างเลือดทั้งหมดถูกหมุนเหวี่ยงที่ 3000 รอบต่อนาที (MR-150, Tomy Seiko Co., Ltd., Tokyo, Japan) ที่ 4 °C เป็นเวลา 10 นาทีเพื่อแยกพลาสมา ตัวอย่างพลาสมาที่ได้จะถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ−80 °Cจนกว่าจะใช้งาน พลาสมา creatinine, BUN, creatinine ปัสสาวะและระดับอัลบูมินปัสสาวะถูกวัดโดยใช้ฮิตาชิ 7180 autoanalyzer (ฮิตาชิ, โตเกียว, ญี่ปุ่น).
กิจกรรมพลาสม่า ACE2กิจกรรม ACE2 วัดโดยบริษัท TechnoPro R&D (โตเกียว ประเทศญี่ปุ่น) โดยใช้ชุดทดสอบกิจกรรม ACE2 (SensoLyte 390) ที่อุณหภูมิ 27 °C (SensoLyte 390) ที่อุณหภูมิ 27 °C (SensoLyte 390) ที่อุณหภูมิ 27 °C (SensoLyte 390) ที่อุณหภูมิ 27 °C (SensoLyte 390) ที่อุณหภูมิ 27 °C (SensoLyte 390) ที่อุณหภูมิ 27 °C (SensoLyte 390) ที่อุณหภูมิ 27 °C (SensoLyte 390) ที่อุณหภูมิ 27 ตัวอย่างถูกเจือจาง 1:10 โดยใช้บัฟเฟอร์การทดสอบที่ให้มาพร้อมกับชุดทดสอบกิจกรรม ACE2 การทดสอบ Te ดําเนินการในแผ่น 384 หลุม ตัวอย่างพลาสมาบัฟเฟอร์การทดสอบเท่านั้น (พื้นหลัง) หรือ 4-เมทิล - คูมาริน - 7 - เอไมด์ (0.16-5 μM) เป็นมาตรฐานอ้างอิงถูกเพิ่มเข้าไปในแผ่นปฏิกิริยา OptiPlate-384 F ที่ 10 μL / หลุม สิบ, สารละลายพื้นผิว ACE2 (0.05 mM 4-methylcoumaryl-7-amide/Dnp ในบัฟเฟอร์การทดสอบ) ถูกเพิ่มที่ 10 μL/well หลังจากปฏิกิริยาความเข้มของการเรืองแสง (Ex / Em = 330 นาโนเมตร / 390 นาโนเมตร) ถูกวัดที่ช่วงเวลา 5 นาทีเป็นเวลา 3 ชั่วโมงโดยใช้เครื่องอ่านแผ่น EnSpire (PerkinElmer, Waltham, MA, USA) ความเข้มของการเรืองแสงของตัวอย่างในแต่ละจุดคํานวณจากความเข้มของการเรืองแสงของตัวอย่าง ความชันของแต่ละตัวอย่าง (RFU/min) ถูกกําหนดจากการประมาณเชิงเส้นของพล็อตในช่วงเวลา 30 ถึง 90 นาทีหลังจากเริ่มการวัด
การวิเคราะห์ทางสถิติข้อมูลจะแสดงเป็นข้อผิดพลาดมาตรฐาน±ค่าเฉลี่ย มีการวิเคราะห์ความแตกต่างดังนี้ การวิเคราะห์ความแปรปรวนแบบสองทางตามด้วยการวิเคราะห์เฉพาะกิจของ Bonferroni ดําเนินการเพื่อกําหนดความแตกต่างเมื่อเวลาผ่านไประหว่าง adenine และกลุ่มควบคุม (รูปที่ 1, 2), AA และกลุ่มยานพาหนะ (รูปที่ 3A, B) หรือกลุ่ม adenine และ olmesartan (รูปที่ 5, 6 และ S1) การทดสอบ t ที่ไม่ได้จับคู่ถูกใช้เพื่อกําหนดความแตกต่างระหว่าง AA และเมาส์รถยนต์ (รูปที่ 3C–F, 4) ค่า P<0.05 were="" considered="" statistically="">
