เชิงนามธรรม

ความเป็นมา: มีรายงานว่านมผึ้งจะลดการสังเคราะห์เมลานินและยับยั้งการแสดงออกของโปรตีนและยีนที่เกี่ยวข้องกับการสร้างเมลาโนเจเนซิส ในการศึกษานี้ เราประเมินฤทธิ์ต้านการสร้างเม็ดสีผิวและการสร้างเม็ดสีของ 10-hydroxy-2-decanoic acid (10-HDA) จากนมผึ้ง Apis mellifera

การศึกษาบางชิ้นได้แนะนำว่ากระท่อมอาจช่วยป้องกันความชราของผิวได้ด้วยลดความเครียดออกซิเดชันและการอักเสบซึ่งทั้งสองอย่างนี้สามารถนำไปสู่ริ้วรอย, จุดด่างดำและสัญญาณแห่งวัยอื่นๆ อย่างไรก็ตาม ยังไม่ชัดเจนว่ากระท่อมสามารถปรับผิวให้สว่างขึ้นหรือลดการสร้างเม็ดสี. ในระยะสั้น แม้ว่า cistanche อาจมีผลประโยชน์บางอย่างต่อผิวหนัง แต่ก็ไม่ชัดเจนว่าสามารถใช้เป็นยาที่เชื่อถือได้หรือไม่ผิวขาวตัวแทน. ควรปรึกษาแพทย์ผิวหนังเพื่อขอคำแนะนำเกี่ยวกับวิธีการดูแลผิวที่ปลอดภัยและมีประสิทธิภาพ

คลิกที่ Cistanche Tubulosa เพื่อการฟอกสีฟัน

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม:

david.deng@wecistanche.com วอทแอพ:86 13632399501

วิธีการ:ในการศึกษานี้ เราประเมิน {{0}}กิจกรรมการฟอกสีฟัน HDA โดยเปรียบเทียบกับการเปลี่ยนแปลงของกิจกรรมไทโรซิเนสภายในเซลล์ ปริมาณเมลานิน และระดับโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับการผลิตเมลานินในเซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16F1 หลังการรักษาด้วย {{4 }}เอชดีเอ. นอกจากนี้ ผลของการทำให้ผิวขาวได้รับการประเมินโดยการใช้ผลิตภัณฑ์ครีมที่มี 0.5 เปอร์เซ็นต์ 1 เปอร์เซ็นต์ และ 2 เปอร์เซ็นต์ของ 10-HDA บนผิวหนังของหนู (C57BL/6 J) เป็นเวลา 3 สัปดาห์เพื่อสังเกตผลของ DL *-ค่า

ผลลัพธ์:ผลการวิจัยพบว่า 10-HDA ยับยั้งการแสดงออกของโปรตีน MITF (IC50 0.86 mM) ในเซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16F1 การวิเคราะห์ Western blot พบว่า 10-HDA ยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ไทโรซิเนสและการแสดงออกของโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับไทโรซิเนส 1 (TRP-1), TRP-2 และ microphthalmia-associated transcription factor (MITF) ในเซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16F1 นอกจากนี้ 10-HDA ที่ใช้กับผิวหนังของหนูแสดงค่าดัชนีความขาวของผิวโดยเฉลี่ย (ค่า L) ที่เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ

สรุป:ข้อมูลการตรวจสอบระบุศักยภาพของ 10-HDA เพื่อใช้ในการยับยั้งการสร้างเม็ดสีผิว 10-HDA ถูกเสนอให้เป็นตัวช่วยในการยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิส ดังนั้นจึงสามารถพัฒนาเป็นผลิตภัณฑ์ดูแลผิวที่เป็นเครื่องสำอางได้

คำสำคัญ:นมผึ้ง, 10-ไฮดรอกซี-2-กรดดีคาโนอิก, เมลาโนเจเนซิส, สารทำให้ผิวขาว, สารยับยั้งเมลาโนเจเนซิส

พื้นหลัง

รอยัลเยลลี (RJ) คือผึ้งงานอายุน้อย (Apis mellifera) ที่หลั่งออกมาจากต่อมใต้สมองและขากรรไกรล่าง นางพญาผึ้งที่กำลังพัฒนาได้รับอาหารเลี้ยงผึ้งเพียงอย่างเดียวตลอดชีวิต [1] RJ ให้คุณค่าทางโภชนาการสูงเนื่องจากโปรตีน กรดอะมิโนอิสระ ไขมัน วิตามิน และน้ำตาลจำนวนมาก [2, 3] โปรตีนที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพของ RJ คือโปรตีนนมผึ้งที่สำคัญ (MRJPs), อะพิซิมิน (apisimin) และรอยัลไลซิ่ง (royalizing) ซึ่งมีผลในการกระตุ้นภูมิคุ้มกันและต้านเชื้อแบคทีเรียในหลายการศึกษา [4–6] 10-ไฮดรอกซี-2- เดคาโนอิกแอซิด (10-HDA) เป็นกรดไขมันหลักในอาร์เจที่มีผลดีต่อสุขภาพหลายประการสำหรับมนุษย์ ซึ่งแสดงฤทธิ์ต้านเนื้องอก ต้านแบคทีเรีย และกระตุ้นภูมิคุ้มกัน [7 –9]. 10-HDA พบได้ใน RJ เท่านั้น จึงถูกใช้เป็นตัวบ่งชี้คุณภาพของผลิตภัณฑ์นมผึ้ง [10, 11] ฤทธิ์ทางเภสัชวิทยาหลายอย่างของ RJ ได้รับการยืนยันแล้วจากการทดลองในสัตว์ และกิจกรรมทางเภสัชวิทยารวมถึงการต้านออกซิเดชั่น [12, 13] ต้านการอักเสบ [14] ต้านเนื้องอก [15, 16] ต้านการเกิดเจเนซิส [17] ต้านเชื้อแบคทีเรีย [18–20], ขยายหลอดเลือด [21, 22], ความดันโลหิตสูง [21, 22], ต้านไขมันในเลือดสูง [23], ป้องกันไต [24] และผลทำให้ผิวขาว [25] จากคุณค่าทางโภชนาการและประโยชน์ต่อสุขภาพของมนุษย์ ทำให้มีผลิตภัณฑ์ RJ วางจำหน่ายในท้องตลาดมากขึ้นเรื่อยๆ

สีผิวของสัตว์และมนุษย์มีความสัมพันธ์กับเนื้อหาของเม็ดสีเมลานินในผิวหนัง บทบาทของเมลานินคือการปกป้องผิวจากความเสียหายจากแสงยูวี แต่การสะสมของเมลานินที่มากเกินไปทำให้เกิดความผิดปกติของผิวหนังอย่างร้ายแรง เช่น การเปลี่ยนสีและการสร้างเม็ดสีและเร่งอายุของผิวหนัง [26] เมลานินถูกสังเคราะห์ในเซลล์เมลาโนไซต์ที่อยู่ในชั้นในสุดของผิวหนังชั้นนอกผ่านกลไกการสร้างเมลาโนเจเนซิส [27] เมลาโนเจเนซิสเป็นเส้นทางการสังเคราะห์ทางชีวภาพที่ซับซ้อนซึ่งควบคุมโดยไทโรซิเนส โปรตีนที่เกี่ยวข้องกับไทโรซิเนส 1 และ 2 (TRP-1 และ TRP-2) และปัจจัยการถอดรหัสที่เกี่ยวข้องกับไมโครพาทาลเมีย (MITF) [28, 29] ไทโรซิเนสเป็นเอ็นไซม์จำกัดอัตราสำหรับควบคุมการสังเคราะห์เมลานิน ขั้นตอนแรกของการผลิตเมลานินคือการไฮดรอกซิเลชันของ L-tyrosine เป็น L-3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) และการเปลี่ยน L-DOPA เป็น dopaquinone [30] TRP-2 เร่งปฏิกิริยาการผลิตกรดไดไฮดรอกซีอินโดล-คาร์บอกซิลิก 5,6- ที่เปลี่ยนจากโดปาโครม และผลิตภัณฑ์ของ TRP-2, 5,6- กรดไดไฮดรอกซีอินโดลคาร์บอกซิลิกเป็น a สารตั้งต้นสำหรับ TRP-1 เปลี่ยนเป็นอินโดล-5,6-กรดควิโนนคาร์บอกซิลิก ส่งผลให้เกิดการสังเคราะห์เมลานินในที่สุด [31, 32] การยับยั้งการสังเคราะห์เมลานินผ่านกระบวนการสร้างเม็ดสีเมลาโนเจเนซิสแบบหยุดชะงักจะเป็นหนทางหลักในการป้องกันหรือปรับปรุงความผิดปกติของเม็ดสีผิว เช่น ฝ้า และจุดด่างแห่งวัย ดังนั้น การค้นหาสารประกอบที่มีศักยภาพ ปลอดภัย และมีประสิทธิภาพเพื่อลดการควบคุมปัจจัยเหล่านี้ในการสร้างเมลาโนเจเนซิสจึงเป็นเรื่องสำคัญในอุตสาหกรรมการแพทย์และเครื่องสำอาง [25, 33, 34]

นมผึ้งได้รับการพิสูจน์แล้วว่าสามารถลดการสังเคราะห์เมลานินได้ [22] แต่สารประกอบที่ออกฤทธิ์หลักหรือกลไกที่อยู่เบื้องหลังกิจกรรมเหล่านี้ของ RJ ยังไม่เป็นที่ทราบแน่ชัด ในการศึกษาก่อนหน้านี้ เราพบว่า 10-HDA สามารถยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ไทโรซิเนส (ข้อมูลที่ไม่ได้เผยแพร่) ในการศึกษานี้ ได้มีการประเมินผลเพิ่มเติมในการยับยั้งเอนไซม์ไทโรซิเนสโดย 10-HDA การสังเคราะห์เมลานินในแบบจำลองหลอดทดลองโดยใช้การเพาะเลี้ยงเซลล์เมลาโนมา B16F10 และแบบจำลองสัตว์ของหนูเมาส์ที่มีการใช้ผิวหนังถูกดำเนินการเพื่อตรวจสอบผลการยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิสของ 10-HDA

วิธีการ

การเตรียม 10-HDA จากนมผึ้ง

นมผึ้งจัดทำโดยผู้เลี้ยงผึ้ง Fu-Chang ในเมืองฮัวเหลียน ประเทศไต้หวัน ตัวอ่อนอายุ 3-วัน ถูกย้ายเข้าไปในถ้วยควีนเซลล์บนเฟรม และแต่ละเฟรมมีควีนคัพ 30 อัน เฟรมถูกย้ายเข้าไปในรังผึ้ง และเก็บ RJ 72 ชั่วโมงหลังจากย้ายตัวอ่อน แต่ละรังมีผึ้งประมาณ 25,000 ตัว [35] ตัวอย่าง RJ ที่รวบรวมถูกเก็บไว้ที่ระดับ −20 จนกว่าจะมีการวิเคราะห์เพิ่มเติม นมผึ้ง (40 ก.) ถูกรีฟลักซ์ด้วยเมทานอล (400 มล. × 4 × 30 นาที) และเก็บส่วนเหนือตะกอนด้วยการหมุนเหวี่ยงที่ 4500 xg เป็นเวลา 30 นาที ส่วนลอยถูกทำให้เข้มข้นภายใต้ความดันที่ลดลงเพื่อให้ได้สารสกัดที่ยังไม่ผ่านกระบวนการใดๆ (10.76 ก.) ที่ชื่อ RJM RJM ที่แขวนลอยอยู่ในเมทานอลถูกทำให้บริสุทธิ์โดยคอลัมน์โครมาโตกราฟีแบบซิลิกาเจล (SiO2 CC) แล้วชะด้วยคลอโรฟอร์มและเมทานอลเกรเดียนต์ (300:1 ถึง 1:1) เพื่อให้ได้สิบเศษส่วนที่วิเคราะห์โดย TLC เศษส่วนที่ 4 และ 5 แสดงจุดที่มีนัยสำคัญ ดังนั้น เศษส่วนเหล่านี้จึงถูกนำไปทำให้บริสุทธิ์และวิเคราะห์เพิ่มเติม เศษส่วน 4 และ 5 ถูกทำให้บริสุทธิ์ซ้ำๆ โดย SiO2 CC (ชะด้วยคลอโรฟอร์ม/เมทานอล 300:1 ถึง 1:1) และตกผลึกเพิ่มเติมด้วยอะซีโตนเพื่อให้ได้ 10-ไฮดรอกซี-2-กรดดีคาโนอิก ({{32} } เอชดีเอ). โครงสร้างทางเคมีของผลิตภัณฑ์บริสุทธิ์ได้รับการยืนยันโดยการวิเคราะห์ NMR และ GC-mass spectra 10-การวิเคราะห์เชิงปริมาณ HDA ถูกกำหนดโดยโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC) ด้วยระบบสูบน้ำ Waters 1525 ที่ติดตั้งเครื่องตรวจจับ Water 2489, คอลัมน์ RP-8 GP250 (4.6 มม.) และ Waters เครื่องเก็บตัวอย่างอัตโนมัติ 717plus เฟสเคลื่อนที่คือสารละลายเมทานอล (60:40 v/v ด้วยน้ำบริสุทธิ์พิเศษและน้ำปราศจากไอออน) ที่ปรับด้วยกรดฟอสฟอริกเป็น pH 2.5 กรองผ่านเมมเบรน (0.45 ไมโครเมตร) และไล่แก๊สออกเป็นเวลา 5 นาที อัตราการไหลของเฟสเคลื่อนที่ถูกปรับเป็น 1.0 มล./นาที และการตรวจจับถูกดำเนินการที่ 225 นาโนเมตร เนื้อหาของ 10HDA ในตัวอย่างสุดท้ายที่บริสุทธิ์คือ 90 เปอร์เซ็นต์ ซึ่งใช้สำหรับการวิเคราะห์เพิ่มเติม

การเพาะเลี้ยงเซลล์และการรักษา 10-HDA

เซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16F10 (หมายเลข BCRC: 60,031) เลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อ Eagle (DMEM) ที่ปรับปรุงแล้วของ Dulbecco เสริมด้วยซีรั่มวัวทารกในครรภ์ 10 เปอร์เซ็นต์ (v/v) ที่อุณหภูมิ 37 องศาในตู้อบควบคุมความชื้น CO2- (5 เปอร์เซ็นต์ ) . เซลล์ถูกเพาะที่ความหนาแน่นของเซลล์ที่เหมาะสมใน 24-หลุมหรือจาน 6-หลุม หลังจากการบ่ม 1 วัน เซลล์จะได้รับการบำบัดด้วย 10-HDA ที่มีความเข้มข้นต่างๆ มีการใช้สื่อในกลุ่มควบคุมแทน 10-HDA หลังจากนั้นเซลล์จะถูกเก็บเกี่ยวและใช้สำหรับการทดสอบต่างๆ

การวัดความมีชีวิตของเซลล์

ความมีชีวิตของเซลล์วัดโดย {{0}}(4,5-dimethylthiazol-2- yl)-2,5 -diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay ตาม วิธีการที่รายงานโดย Carmichael et al [36]. B16F10 เซลล์มะเร็งผิวหนังถูกเพาะเลี้ยงใน DMEM ที่มี FBS 10 เปอร์เซ็นต์และ L-glutamine 1 เปอร์เซ็นต์ (4 มิลลิโมลาร์) ในตู้อบ CO2 5 เปอร์เซ็นต์ที่ 37 องศา เซลล์เพาะเลี้ยง (1 × 104 เซลล์/หลุม) ถูกเพาะใน 96-จานหลุม 10-HDA (ละลายในไดเมทิลซัลฟอกไซด์ (DMSO)) เจือจางโดยตัวกลางที่ความเข้มข้น 1, 0.5, 0.1 mM และกรดโคจิก 1 mM ถูกเติมลงในหลุม สื่อถูกใช้เป็นช่องว่าง หลังจาก 24-ชั่วโมงบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาต่ำกว่า 5 เปอร์เซ็นต์ของ CO2 สื่อถูกนำออกจากแต่ละหลุม จากนั้นล้างหลุมด้วย PBS (น้ำเกลือ 1 M ฟอสเฟต-บัฟเฟอร์) สองครั้ง สารละลาย MTT 200 ul (2 มก./มล.) ถูกเติมลงในแต่ละหลุม ปฏิกิริยาถูกยุติโดยการเพิ่ม DMSO 100 ไมโครลิตรหลังจากการบ่ม 4-ชั่วโมง วัดค่าการดูดกลืนแสงของแต่ละหลุมที่ 540 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านอิมมูโนแอสเซย์ (BIO-TEK, Winooski, VT) [20–23] ความมีชีวิตของเซลล์ถูกกำหนดโดยสมการต่อไปนี้: ความมีชีวิตของเซลล์ ( เปอร์เซ็นต์ )=[(AB)/ C] × 100 เปอร์เซ็นต์ , A: ปริมาตรการดูดกลืนแสงตัวอย่าง, B: ปริมาตรการดูดกลืนแสงเปล่า, C: ปริมาตรการดูดกลืนแสงควบคุม

การวัดปริมาณเมลานินของเซลล์

ปริมาณเมลานินภายในเซลล์ของเซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16F10 ถูกวัดโดยใช้วิธีการดัดแปลงที่อธิบายโดย Bilodeau et al., [37] ในตอนท้ายของการเพาะเลี้ยงเซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16F10 เซลล์จะถูกเก็บเกี่ยวและล้างด้วย PBS เซลล์ที่เก็บเกี่ยวถูกสลายในบัฟเฟอร์การแยกสลายด้วยความเย็น (20 มิลลิโมลาร์โซเดียมฟอสเฟต (pH 6.8), 1 เปอร์เซ็นต์ไทรทัน X-100, 1 มิลลิโมลาร์ฟีนิลเมทิลซัลโฟนิลฟลูออไรด์ (PMSF), 1 มิลลิโมลาร์ Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)) หลังจากการปั่นแยกที่ 15,000×g เป็นเวลา 30 นาที เม็ดถูกละลายใน 1 N NaOH ที่มี 20 เปอร์เซ็นต์ DMSO เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 60 องศา ปริมาณโปรตีนในส่วนลอยถูกกำหนดโดยใช้การทดสอบแบรดฟอร์ด วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 405 นาโนเมตร และคำนวณปริมาณเมลานินเทียบกับมาตรฐานเมลานินสังเคราะห์ที่ทราบ ระดับเมลานิน ( เปอร์เซ็นต์ )=[(AB)/ C] × 100 เปอร์เซ็นต์ ; A: ปริมาณการดูดกลืนแสงตัวอย่าง; B: ปริมาณการดูดกลืนแสงเปล่า; C: ควบคุมปริมาณการดูดกลืนแสง

การวัดกิจกรรมไทโรซิเนสของเซลล์

การทดสอบกิจกรรมไทโรซิเนสดำเนินการตามวิธีที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้โดย Martinez-Esparza et al., [38] โดยมีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย เซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16F10 ถูกสลายในโซเดียมฟอสเฟต 20 มิลลิโมลาร์ (pH 6.8), ไตรตัน X 1 เปอร์เซ็นต์-100 และฟีนิลมีเทนซัลโฟนิลฟลูออไรด์หรือ PMSF 1 มิลลิโมลาร์ และหมุนเหวี่ยงที่ 14,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาที ปริมาณโปรตีนของสารเหนือตะกอนแต่ละชนิดถูกกำหนดโดยใช้ Bradford assay โดยมี Bovine Serum Albumin (BSA) เป็นมาตรฐานโปรตีน กิจกรรมไทโรซิเนสถูกกำหนดหาในส่วนผสมของปฏิกิริยา (1 มล.) ที่มีฟอสเฟตบัฟเฟอร์ 50 มิลลิโมลาร์ (pH 6.8), DOPA 2 มิลลิโมลาร์ และโปรตีนส่วนเกิน 300 ไมโครกรัม หลังจากบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเป็นเวลา 15 นาที วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 475 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท กิจกรรมไทโรซิเนส ( เปอร์เซ็นต์ )=[(AB)/ C] × 100 เปอร์เซ็นต์ ; A: ปริมาณการดูดกลืนแสงตัวอย่าง; B: ปริมาณการดูดกลืนแสงเปล่า; C: ควบคุมปริมาณการดูดกลืนแสง

การวิเคราะห์แบบตะวันตก

เซลล์ถูกล้าง 3 ครั้งใน PBS ที่เย็นจัดและสลายในบัฟเฟอร์ RIPA (pH 7.4, 50 mM tris, 0.1 เปอร์เซ็นต์ SDS, 50 mM NaCl, 1 เปอร์เซ็นต์ NP-40, 1 mM PMSF, อะโปรตินิน 10 มก./มล. และลิวเปปติน 10 มก./มล.) ส่วนลงตัวของไลเสตถูกใช้เพื่อกำหนดปริมาณโปรตีนโดยวิธีการของ Bradford assay โดยใช้ bovine serum albumin เป็นมาตรฐาน โปรตีน (40 มก.) ถูกแยกออกด้วย SDS polyacrylamide gel electrophoresis ร้อยละ 10 และแต้มบน Hybond-C Extra nitrocellulose membrane (Amersham Bioscience, UK) เยื่อหุ้มเซลล์ถูกปิดกั้นด้วยนมไร้ไขมัน 5 เปอร์เซ็นต์ในน้ำเกลือ Tris-buffer (TBS) ที่มี Tris-HCl 10 mM, pH 7.5 และ NaCl 150 mM เป็นเวลา 30 นาที MITF, tyrosinase, dopachrome tautomerase 2 (TRP-2), TRP-1 และ -actin (เป็นตัวควบคุมภายใน) ถูกตรวจพบโดยใช้กระต่ายโพลีโคลนอลแอนติบอดี ตามลำดับ เยื่อถูกบ่มเพิ่มเติมด้วยแอนติบอดีทุติยภูมิโพลีโคลนอลจากแพะต่อกระต่าย IgG-H&L (HRP) จากนั้นตรวจพบแอนติบอดีที่ถูกผูกไว้ทั้งหมดโดยใช้ Super Signal® West Pico Chemiluminescent Substrate (ECL) (Thermo Scientific) ความเข้มของสัญญาณของแต่ละแบนด์ถูกกำหนดปริมาณด้วยระบบเครื่องวัดความหนาแน่น Gel Doc TM / Chemi Doc TM Universal hood II (Bio-Rad) ที่ติดตั้งตัวรวมและปรับให้เป็นมาตรฐานด้วยการควบคุมภายใน

การกำหนดกิจกรรมการสร้างเม็ดสีในหนู

กิจกรรมการสร้างเม็ดสีถูกตรวจสอบผ่านระบบแบบจำลองของเมาส์โดยโปรโตคอลที่แก้ไขของ Tai et al [39]. การศึกษาได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการจริยธรรมของมหาวิทยาลัย National Formosa (หมายเลขอนุมัติ: 10,401) หนูดำเพศเมียอายุ 5 สัปดาห์ (C57BL/6 J) น้ำหนัก 20 ถึง 25 กรัม ถูกซื้อมาจาก National Animal Laboratory Center ไทเป ตลอดการทดลองทั้งหมด สัตว์ถูกเลี้ยงในห้องปรับอากาศที่มีอุณหภูมิคงที่ (25 องศา ± 2 องศา ) และเก็บไว้ในแสง 12 ชั่วโมง: รอบมืด สัตว์ได้รับการปรับสภาพเป็นเวลา 7 วันก่อนการทดลอง หลังจากโกนขนแล้ว สัตว์เหล่านี้ได้รับการพักผ่อน 1-วัน ตัวอย่างเจลที่มี 10-HDA เตรียมโดยการกระจายยาในวาสลีน หนูทั้งหมดสี่สิบตัวถูกแบ่งเท่าๆ กันออกเป็นห้ากลุ่ม และแต่ละกลุ่มถูกป้ายวันละสองครั้งด้วยวาสลีน 0.1 กรัม (กลุ่มควบคุม), กรดโคจิก 1 เปอร์เซ็นต์ในวาสลีน, 0.5 เปอร์เซ็นต์ , 1 เปอร์เซ็นต์ หรือ 2 เปอร์เซ็นต์ 10-HDA ในวาสลีน . ใช้งานต่อเนื่องเป็นเวลา 3 สัปดาห์ และวัดค่าดัชนีความขาวของผิว (ค่า L) บนผิวบริเวณเดิมทุกวันด้วย DermaLab® Combo (Cotex Technology ประเทศเดนมาร์ก) ซึ่งเป็นเครื่องวัดสีที่ใช้สีขาวที่มีความเข้มสูง LED เป็นแหล่งกำเนิดแสง เครื่องมือวัดสีเชื่อมต่อกับคอมพิวเตอร์ [40] เราพิจารณาเฉพาะพารามิเตอร์ L และค่า L คือความสว่างสัมพัทธ์ ตั้งแต่สีดำทั้งหมด (L=0) ไปจนถึงสีขาวทั้งหมด (L=100) ค่า L-value ของดัชนีความขาวของผิวหนังเริ่มต้นถูกทดสอบจากผิวหนังของหนูแต่ละตัวก่อนนำไปใช้กับสารที่ทดสอบ

การวิเคราะห์ทางสถิติ

ผลลัพธ์ทั้งหมดในการศึกษานี้ได้รับการวิเคราะห์โดยใช้ขั้นตอนแบบจำลองเชิงเส้นทั่วไปที่มีให้จากชุดซอฟต์แวร์ระบบวิเคราะห์ทางสถิติเวอร์ชัน 9.1 (สถาบันระบบวิเคราะห์ทางสถิติ, 2002) การทดสอบหลายช่วงของดันแคน [41] ใช้เพื่อตรวจหาความแตกต่างระหว่างวิธีการรักษา การทดลองแต่ละครั้งดำเนินการเป็นสามเท่า

ผลลัพธ์

ผลของ 10-HDA ต่อความมีชีวิตของเซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16F1

ปริมาณที่เหมาะสมจากการทดสอบความมีชีวิตของเซลล์โดย MTT ในเซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16F1 แสดงในรูปที่ 1 ซึ่งแสดงให้เห็นอย่างชัดเจนว่า 10-HDA ไม่เป็นพิษต่อเซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16F1 ที่ความเข้มข้น 0.1, { {8}}.5 และ 1 มิลลิโมลาร์ และกรดโคจิกไม่เป็นพิษต่อเซลล์ต่อเซลล์มะเร็งผิวหนังที่ความเข้มข้น 1 มิลลิโมลาร์ ความมีชีวิตของเซลล์ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (ลดลง 20 เปอร์เซ็นต์) ในเซลล์มะเร็งผิวหนังที่สัมผัสกับ 1.5 mM 10-HDA (P < 0.05) (ไม่แสดงข้อมูล) และ 5 มิลลิโมลาร์ กรดโคจิก ดังนั้น ความเข้มข้น 0.1, 0.5, 1 มิลลิโมลาร์ของ 10-HDA และ 1 มิลลิโมลาร์ของกรดโคจิกจึงถูกนำมาใช้ในการทดลองครั้งต่อๆ ไป

การยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ไทโรซิเนสและการสังเคราะห์เมลานินในเซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16F10 โดย 10-HDA

กรดโคจิกเป็นสารต่อต้านการสร้างเม็ดสีเมลาโนเจเนซิสที่มีประสิทธิภาพและเป็นที่รู้จักกันดี และถูกใช้เป็นตัวควบคุมเชิงบวกในการศึกษานี้ 10-HDA อย่างมีนัยสำคัญ (p < 0.05) ยับยั้งการสังเคราะห์เมลานินและกิจกรรมของเอนไซม์ไทโรซิเนส เมื่อเทียบกับการควบคุมเซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16F1 ที่ไม่ได้รับการบำบัด ที่ขนาดยา 1 มิลลิโมลาร์ 10- HDA เหนี่ยวนำให้กิจกรรมไทโรซิเนสในเซลล์ลดลง 28 ± 2.4 เปอร์เซ็นต์ (P < 0.01) และ 40.4 ± 3 การสังเคราะห์เมลานินในเซลล์ลดลง .0 เปอร์เซ็นต์ (P < 0.001) ในขณะที่กรดโคจิก (1 มิลลิโมลาร์) ยังลดกิจกรรมของเอนไซม์ไทโรซิเนสและการสังเคราะห์เมลานินลงอย่างมีนัยสำคัญถึง 14.4 ± 3.7 เปอร์เซ็นต์ (P < 0.05) และ 19.3 ± 1.5 เปอร์เซ็นต์ (P < 0.001) ตามลำดับ (รูปที่ 2 และ 3)

การยับยั้งการแสดงออกของโปรตีนไทโรซิเนส TRP-1 และ TRP-2 ในเซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16F10 โดย 10-HDA

เพื่อตรวจสอบว่า 10-HDA สามารถมีอิทธิพลต่อการแสดงออกของโปรตีน melanogenic หรือไม่ การวิเคราะห์ Western blotting ได้ดำเนินการโดยใช้ lysate ของเซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16F10 ที่รักษาด้วย 10-HDA (รูปที่ 4) 10-HDA ยับยั้งการแสดงออกของไทโรซิเนส, TRP-1 และ TRP-2 อย่างมากในเซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16F1 เมื่อเปรียบเทียบกับเซลล์ที่ไม่ได้รับการรักษา (รูปที่ 4b–d) -actin ซึ่งเป็นโปรตีนที่ใช้ในการดูแลทำความสะอาดซึ่งใช้เป็นตัวควบคุมภายใน ไม่มีการเปลี่ยนแปลงใดๆ 10-HDA ยับยั้งระดับการแสดงออกของโปรตีนของเอนไซม์สร้างเม็ดสีที่คล้ายกับกรดโคจิก

ผลการยับยั้ง 10-HDA ต่อระดับโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับปัจจัยการสร้างเม็ดสีผิวในเซลล์ B16F10

ในระหว่างกระบวนการสร้างเมลาโนเจเนซิสในเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม MITF มีบทบาทควบคุมหลักในการสังเคราะห์เส้นทาง TRPs รวมถึง TYR, TRP{{0}} และ TRP-2 [25, 26] ผลกระทบของ 10-HDA ต่อการแสดงออกของ MITF ได้รับการประเมินโดยใช้ Western blotting B16F1{{10}} เซลล์มะเร็งผิวหนังได้รับความเข้มข้นต่างๆ ของ 10- HDA (0.1, 0.5 และ 1 mM) ส่งผลให้การแสดงออกของ MITF ลดลงโดย 10-HAD ( รูปที่ 4e) ค่า IC50 สำหรับ 10-การยับยั้ง HDA ของนิพจน์ MITF มีค่าประมาณ 0.86 mM ผลลัพธ์ปัจจุบันชี้ให้เห็นว่าระดับโปรตีนของ MITF ลดลงโดย 10-HDA ผลการลดเม็ดสีของ 10-HDA อาจเป็นผลจากการแสดงออกของยีน MITF ที่ควบคุมไม่ได้ ซึ่งจะไปกดการแสดงออกของโปรตีนและยีนของ tyrosinase, TRP-1 และ TRP-2

การประเมินกิจกรรมการสร้างเม็ดสีของ 10-HDA ในร่างกาย ผ่านหนู

ในการคาดเดาปริมาณของมนุษย์ เราใช้หนูเป็นสัตว์จำลองเพื่อตรวจสอบกิจกรรมการสร้างเม็ดสีของ {{0}}HDA หลังการโกนขน หนูได้รับการรักษาด้วยกรดโคจิก 1 เปอร์เซ็นต์ในวาสลีน 0.5 เปอร์เซ็นต์ , 1 เปอร์เซ็นต์ หรือ 2 เปอร์เซ็นต์ 10-HDA ในวาสลีน และวัดและบันทึกดัชนีความขาวกระจ่างใสของผิว สำหรับการศึกษาในสัตว์ทดลองนี้ เราใช้กรดโคจิกเป็นตัวควบคุมเชิงบวก กรดโคจิกถูกใช้อย่างแพร่หลายในฐานะตัวแทนบำบัดการเสื่อมสภาพของผิวหนังทั่วโลก หลังจากสัปดาห์แรกของการรักษา ระดับความขาวของผิวเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในหนูที่ได้รับ HDA 10- เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม และการเพิ่มขึ้นนี้ยังคงดำเนินต่อไปจนกระทั่งสิ้นสุดการทดลอง กิจกรรมการสร้างเม็ดสีของ 0.5, 1 และ 2 เปอร์เซ็นต์ 10-HDA เทียบได้กับกรดโคจิก 1 เปอร์เซ็นต์ ผลลัพธ์ของเราพบว่า 10-HDA สามารถส่งเสริมผิวขาวบนผิวของหนูอย่างมีนัยสำคัญที่ความเข้มข้นต่ำถึง 0.5 เปอร์เซ็นต์ (รูปที่ 5) ดังนั้น 10-HDA จึงเป็นตัวเลือกที่ดีในการเป็นสารปรับสีผิวให้ขาวขึ้นเพื่อรักษารอยดำที่ผิวหนัง

การอภิปราย

การสังเคราะห์เมลานินถูกควบคุมโดยเอนไซม์ที่ซับซ้อนของไทโรซิเนส, TRP1 และ TRP2 ระดับของยีนที่เกี่ยวข้องกับเมลาโนเจเนซิสและการยับยั้งโปรตีนมีบทบาทสำคัญในประสิทธิภาพของสารลดการสร้างเม็ดสี ซึ่งมักจะใช้ในการรักษารอยดำหรือผลิตภัณฑ์เครื่องสำอาง [28] เพื่ออธิบายผลการยับยั้งที่แท้จริงของ 10-HDA ต่อการสร้างเมลาโนเจเนซิส เนื้อหาของเมลานินและกิจกรรมไทโรซิเนสภายในเซลล์ของเซลล์ B16F10 ได้รับการทดสอบที่ช่วงความเข้มข้นเดียวกัน ผลลัพธ์ในรูป 2 และ 3 บ่งชี้ว่า 10-HDA แสดงฤทธิ์ยับยั้งการสังเคราะห์เมลานินในเซลล์ B16F10 สูงกว่ากรดโคจิก ข้อมูลเปิดเผยว่า 10- HDA ขัดขวางการสร้างเมลาโนเจเนซิสในเซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16F10

การสร้างเมลาโนเจเนซิสถูกครอบงำอย่างน้อยโดยโปรตีนควบคุม 3 ชนิด ได้แก่ ไทโรซิเนส TRP1 และ TRP2 ในเมลาโนไซต์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม [29] การแสดงออกของ TRP-1, TRP-2 และ MITF ทั้งหมดถูกยับยั้งในเซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16F10 ซึ่งได้รับการรักษาด้วย 10-HDA MITF เป็นปัจจัยถอดรหัสที่สำคัญในการควบคุมการแสดงออกของเอนไซม์สร้างเม็ดสีผิว เช่น ไทโรซิเนส, TRP-1 และ TRP-2 [42, 43] จากข้อมูล Western blotting ของเรา (รูปที่ 4) เซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่ได้รับ 10-HDA จะลดการแสดงออกของเอนไซม์ที่จำกัดอัตราทั้งหมด รวมถึง tyrosinase, TRP-1 และ TRP-2 และป้องกันการสะสมของเมลานินอย่างผิดปกติในระหว่างกระบวนการสร้างเมลาโนเจเนซิส ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า 10- HDA สามารถยับยั้งกระบวนการสร้างเมลาโนเจเนซิสได้โดยการยับยั้งการแสดงออกของ MITF ในการศึกษานี้ เราได้แสดงให้เห็นว่า 10-HDA ยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิสโดยลดการควบคุมโปรตีน MITF, ไทโรซิเนส และการผลิตเมลานิน เส้นทางการยับยั้งของ 10-HDA ในการแสดงออกของ MITF แตกต่างจากสารยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิสอื่นๆ เช่น กรดโคจิก อาร์บูติน และกรดแอสคอร์บิก ซึ่งไม่ส่งผลต่อการแสดงออกของ MITF [44, 45] สิ่งนี้ชี้ให้เห็นว่า 10-HDA มีศักยภาพที่ดีเยี่ยมในการใช้เป็นสารปรับสีผิวให้ขาวขึ้นอย่างปลอดภัยและเป็นธรรมชาติสำหรับเครื่องสำอางที่ใช้งานได้จริง [46]

เมลาโนมา เป็นมะเร็งผิวหนังที่เกิดจากทรานส์ร้ายที่ก่อตัวขึ้นจากเมลาโนไซต์ Melanomas ที่เกิดขึ้นในผิวหนังที่ถูกทำลายจากแสงแดดอย่างเรื้อรัง ผิวเยื่อเมือก และผิวหนังบริเวณอวัยวะต่างๆ เกิดจาก BRAF และ NRAS ที่กระตุ้นมากเกินไป [47] การสูญเสียตำแหน่ง CDKN2A [48] การแสดงออกของ MITF ที่มากเกินไป [49] ชุดที่กระตุ้นการทำงานมากเกินไป [50 ], เปิดใช้งาน mGluR1 [51, 52] มากเกินไป…และคณะ ในการศึกษานี้ 10-HDA สามารถยับยั้งการแสดงออกของ MITF ในเซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16F10 สิ่งนี้บ่งชี้ว่า 10-HDA มีศักยภาพในการเป็นส่วนประกอบของยารักษาโรคผิวหนังหรือยาต้านมะเร็งผิวหนัง

RJ ถูกนำมาใช้ในการเตรียมผิวหนังหลายอย่างรวมถึงการฟื้นฟูผิว การฟื้นฟูผิว การฟื้นฟู การเผาไหม้เพื่อรักษา หรือการรักษาบาดแผล [53, 54] นอกจากนี้ มีรายงานว่ากรดไขมันไม่อิ่มตัวบางชนิดใน RJ สามารถยับยั้งการสังเคราะห์เมลานินและกิจกรรมของเอนไซม์ไทโรซิเนส ซึ่งนำไปสู่การลดระดับของการสร้างเมลาโนเจเนซิส [55] และเราได้แสดงให้เห็นว่าผลกระทบของการสร้างเม็ดสีของ RJ อาจเป็นผลมาจากการมีอยู่ของ {{3 }}เอชดีเอ. เนื่องจากผิวหนังของหนูมีความคล้ายคลึงกับมนุษย์ เราจึงใช้หนูเป็นแบบจำลองสัตว์ในร่างกายเพื่อตรวจสอบกิจกรรมการสร้างเม็ดสีของ 10-HAD ดังแสดงในรูปที่ 5 ดัชนีความขาวของสีผิวเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในหนูที่ได้รับ 10-HAD เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม นอกจากนี้ โคยะ-มิยาตะและคณะ ได้รับการประเมินกิจกรรมส่งเสริมการผลิตคอลลาเจนของ 10-HDA ในเซลล์ไฟโบรบลาสต์ที่ผลิตทรานส์ฟอร์มมิ่งโกรทแฟกเตอร์- 1 (TGF- 1) ซึ่งเป็นปัจจัยสำคัญสำหรับการผลิตคอลลาเจน [55] . ดังนั้น 10-HDA จึงเป็นสารประกอบธรรมชาติที่มีแนวโน้มสูงสำหรับการฟื้นฟูผิวและการรักษารอยดำ

บทสรุป

10-HDA ไม่เพียงแต่ยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ไทโรซิเนสเท่านั้น แต่ยังยับยั้งการแสดงออกของเอนไซม์ที่สร้างเม็ดสีผิวด้วย ซึ่งรวมถึงไทโรซิเนส, TRP-1 และ TRP-2 ด้วยการยับยั้ง MITF ในเซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16F10 ส่งผลให้เม็ดสีเมลานินในเซลล์เมลาโนมา B16F10 ลดลง นอกจากนี้ โมเดลสัตว์ในร่างกายยังแสดงกิจกรรมการสร้างเม็ดสีของ 10-HDA ในการประยุกต์ใช้เฉพาะที่ ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า 10-HDA มีตัวเลือกที่อาจเป็นตัวยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิสที่ปลอดภัยและเป็นธรรมชาติสำหรับอุตสาหกรรมเครื่องสำอาง ซึ่งการค้นหาสารประกอบที่เป็นธรรมชาติและมีประสิทธิภาพเป็นหนึ่งในวัตถุประสงค์ที่สำคัญมากในการพัฒนาผลิตภัณฑ์ดูแลผิวที่ดีขึ้น .

ตัวย่อ

10-HDA: 10-ไฮดรอกซี-2-กรดดีคาโนอิก; BSA: วัวเซรั่มอัลบูมิน; DMEM: สื่อกลางของ Eagle ที่ดัดแปลงโดย Dulbecco; DMSO: ไดเมทิลซัลฟอกไซด์; EDTA: กรด Ethylenediaminetetraacetic; L-DOPA: แอล-3,4- ไดไฮดรอกซีฟีนิลอะลานีน; MITF: ปัจจัยการถอดรหัสที่เกี่ยวข้องกับ microphthalmia; MRJP: โปรตีนนมผึ้งที่สำคัญ; MTT: 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide; PBS: น้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต; PMSF: ฟีนิลมีเทนซัลโฟนิลฟลูออไรด์หรือฟีนิลเมทิลซัลโฟนิลฟลูออไรด์; TLC: โครมาโตกราฟีแบบชั้นบาง; TRP-1: โปรตีนที่เกี่ยวข้องกับไทโรซิเนส 1; TRP- 2: โปรตีนที่เกี่ยวข้องกับไทโรซิเนส 2

กิตติกรรมประกาศ

เราขอขอบคุณคุณ Li-Yu Lee จาก Fu-Chang Beekeeping สำหรับการเตรียมนมผึ้ง

เงินทุน

งานนี้ได้รับการสนับสนุนโดยทุนจากกระทรวงวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยี ไต้หวัน ROC (MOST102–2622-B-150-002-CC2 & MOST 103–2313-B-150 -001 -MY2 ถึง ซีซีเป็ง).

ความพร้อมใช้งานของข้อมูลและวัสดุ

ข้อมูลทั้งหมดที่สร้างหรือวิเคราะห์ในระหว่างการศึกษานี้จะรวมอยู่ในบทความที่เผยแพร่นี้และไฟล์ข้อมูลเพิ่มเติม

ผลงานของผู้เขียน

CCP คิดและออกแบบการทดลอง HZS และ IPL ทำการทดลอง CCP และ PCK วิเคราะห์ข้อมูล CCP, PCK และ JCL สนับสนุนรีเอเจนต์/วัสดุ/เครื่องมือวิเคราะห์ CCP และ IPL เขียนและแก้ไขบทความ ผู้เขียนทั้งหมดอนุมัติฉบับสุดท้ายของต้นฉบับ

ข้อมูลผู้เขียน

CCP, ดุษฎีบัณฑิตสาขาเทคโนโลยีชีวภาพ, รองศาสตราจารย์ภาควิชาเทคโนโลยีชีวภาพ, มหาวิทยาลัย National Formosa HZS ปริญญาโทด้านเทคโนโลยีชีวภาพ จบการศึกษาจากภาควิชาเทคโนโลยีชีวภาพ มหาวิทยาลัย National Formosa IPL, แพทย์สาขาเทคโนโลยีชีวภาพ, ผู้จัดการแผนกวิจัยและพัฒนา, Challenge Bioproducts Co., Ltd. PCK, แพทย์สาขาเคมี, รองศาสตราจารย์ภาควิชาเทคโนโลยีชีวภาพ, National Formosa University JCL ผู้จัดการทั่วไปของ Honey Bee Town Co., Ltd.

การอนุมัติจริยธรรม

การทดลองในสัตว์ทั้งหมดได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการจริยธรรมของมหาวิทยาลัย National Formosa (หมายเลขอนุมัติ: 10,401) และสอดคล้องกับแนวทางการดูแลและการใช้สัตว์ทดลอง

ยินยอมให้ตีพิมพ์

ใช้ไม่ได้ในส่วนนี้ บทความนี้ไม่ใช่การศึกษาทางคลินิกที่เกี่ยวข้องกับมนุษย์ และต้นฉบับนี้ไม่มีข้อมูลทางคลินิกใดๆ

การแข่งขันความสนใจ

ผู้เขียนประกาศว่าพวกเขาไม่มีผลประโยชน์ที่แข่งขันกัน

หมายเหตุของสำนักพิมพ์

Springer Nature ยังคงเป็นกลางเกี่ยวกับการอ้างสิทธิ์ในเขตอำนาจศาลในแผนที่ที่เผยแพร่และความเกี่ยวข้องของสถาบัน

รายละเอียดผู้แต่ง

1 ภาควิชาเทคโนโลยีชีวภาพ National Formosa University, Huwei, Yunlin, Taiwan 2 ฝ่ายวิจัยและพัฒนา Challenge Bioproducts Co., Ltd., Douliou, Yunlin, Taiwan 3 Honey Bee Town Co., Ltd., No.77-2 Huaxi, 970 Hualien City, Taiwan

ได้รับ: 9 มีนาคม 2017 รับ: 21 กรกฎาคม 2017

เผยแพร่ออนไลน์: 09 สิงหาคม 2017

อ้างอิง

1. Chen C, Chen S. การเปลี่ยนแปลงส่วนประกอบโปรตีนและความคงตัวในการเก็บรักษารอยัลเยลลีภายใต้สภาวะต่างๆ เคมีอาหาร. 2538;54:195–200.

2. Takenaka T. องค์ประกอบทางเคมีของนมผึ้ง. ผึ้งวิทย์. 2525;3:69–74.

3. Schmitzova J, Klaudiny J, Albert S, Schroder W, Schreckengost W, Hanes J, Judova J, Simuth J. ตระกูลโปรตีนนมผึ้งที่สำคัญของผึ้ง Apis Mellifera L. Cell Mol Life Sci. 2541;54:1020–30.

4. Okamoto I, Taniguchi Y, Kunikita T, Kohno K, Iwaki K, Ikeda M. Major royal jelly protein 3 ปรับการตอบสนองของภูมิคุ้มกันในหลอดทดลองและในร่างกาย วิทยาศาสตร์ชีวิต 2003;1:2029–45.

5. Fujiwara S, Imai J, Fujiwara M, Yaeshima T, Kawashima T, Kobayashi K. โปรตีนต้านเชื้อแบคทีเรียที่มีศักยภาพในนมผึ้ง เจ ไบโอล เคม. 2533;265:11333–7.

6. Bilikova J, Hanes J, Nordhoff E, Sanger W, Klaudiny J, Simuth J. Apisimin เปปไทด์ที่อุดมด้วย serine-valine ใหม่จากนมผึ้ง (Apis Mellifera L.) นมผึ้ง: การทำให้บริสุทธิ์และลักษณะโมเลกุล FEBS เล็ต 2545;528:125–9.

7. Townsend GF, Brown WH, Felauer EE, Hazlett B. การศึกษาฤทธิ์ต้านมะเร็งในหลอดทดลองของกรดไขมัน IV. เอสเทอร์ของกรดที่เกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดกับ 10- ไฮดรอกซี-2-กรดดีคาโนอิกจากนมผึ้งต่อมะเร็งเม็ดเลือดขาวของหนูที่ปลูกถ่ายได้ สามารถ J Biochem Physiol. 2504;39:1765–70.

8. Blum MS, Novak AF, Taber S. 10-Hydroxy-2Δ-decanoic acid ยาปฏิชีวนะที่พบในนมผึ้ง วิทย์ 2502;130:452–3.

9. Vucevic D, Melliou E, Vasilijic S, Gasic S, Ivanovski P, Chinou I, Colic M. กรดไขมันที่แยกได้จากนมผึ้งจะปรับการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันของเซลล์ dendritic ในหลอดทดลอง Int อิมมูโนฟาร์มาคอล 2550;7:1211–20.

10. ผู้ประกอบ N กฎหมาย JH ความหลากหลายของกรดไขมันจากนมผึ้ง ธรรมชาติ. 1960;188:938–9.

11. Antinelli JF, Zeggane S, Davico R, Rognone C, Faucon JP, Lizzani L. การประเมิน (E)-10-กรดไฮดรอกไซด์-อีโนอิกเป็นพารามิเตอร์ความสดของนมผึ้ง เคมีอาหาร. 2546;80:85–9.

12. Takeshi N, Reiji I. การเตรียมและคุณสมบัติเชิงหน้าที่ของสารสกัดน้ำและสารสกัดอัลคาไลน์ของนมผึ้ง เคมีอาหาร. 2547;84:181–6.

13. Takeshi N, Mizuho S, Rriji I, Hachiro I, Nobutaka S. กิจกรรมต้านอนุมูลอิสระของน้ำผึ้งเชิงพาณิชย์ นมผึ้ง และโพลิส เคมีอาหาร. 2544;75:237–40.

14. มาร์ทอส เอ็มวี, นาวาฮาส วายอาร์, โลเปซ เจเอฟ คุณสมบัติเชิงหน้าที่ของน้ำผึ้ง โพลิส และนมผึ้ง วิทย์อาหารเจ. 2551;73:117–24.

15. Hiroshi I, Masamitsu S, Kazuhiro T, Yoko A, Satoshi M, Hideaki H. ผลิตภัณฑ์ Bee ป้องกันการสร้างเส้นเลือดใหม่ที่เกิดจาก VEGF ในเซลล์บุผนังหลอดเลือดในสายสะดือของมนุษย์ BMC Complement Altern Med. 2009;9:1–10.

16. Tamura T, Fujii A, Kuboyama N. ฤทธิ์ต้านมะเร็งของนมผึ้ง (RJ) นิปปอน ยาคุริงาคุ ซาชิ 2530;89:73–80.

17. Park HM, Cho MH, Cho Y, Kim SY นมผึ้งช่วยเพิ่มการสร้างคอลลาเจนในผิวหนังหนูหลังการตัดรังไข่ อาหารเจเมด. 2555;15:568–75. ดอย:10.1089/jmf. 2011.1888.

18. Izuta H, Shimazawa M, Tsuruma K, Araki Y, Mishima S, Hara H. ผลิตภัณฑ์ผึ้งป้องกันการสร้างเส้นเลือดใหม่ที่เกิดจาก VEGF ในเซลล์บุผนังหลอดเลือดในสายสะดือของมนุษย์ BMC Complement Altern Med. 2552;6:489–94.

19. Tseng JM, Huang JR, Huang HC, Tzen JTC, Chou WM, Peng CC. อำนวยความสะดวกในการผลิตเปปไทด์ต้านจุลชีพ-Royalisin และแอนติบอดีผ่านระบบตัวน้ำมันเทียม เทคโนโลยีชีวภาพ 2554;27:153–61.

20. Bílikova K, Huang SC, Lin IP, Šimuth J, Peng CC. โครงสร้างและความสัมพันธ์ของฤทธิ์ต้านจุลชีพของรอยัลไลซิ่ง เปปไทด์ต้านจุลชีพจากนมผึ้งของ Apis Mellifera เปปไทด์ 2015;68:190–6.

21. Okuda H, Kameda K, Morimoto C, Matsuura Y, Chikaki M, Jiang M. การศึกษาเกี่ยวกับสารคล้ายอินซูลินและสารยับยั้งต่อเอนไซม์ที่เปลี่ยน angiotensin ในนมผึ้ง มิตซูบาชิ คางาคุ. 2541;19:9–14.

22. Shinoda M, Nakajin S, Oikawa T, Sato K, Kamogawa A, Akiyama Y. การศึกษาทางชีวเคมีเกี่ยวกับปัจจัยขยายหลอดเลือดในนมผึ้ง ยาคุกาคุ ซัซชิ. 2521;98:139–45. 23. Vittek J. ผลของนมผึ้งต่อไขมันในเลือดในสัตว์ทดลองและมนุษย์ที่มีภาวะหลอดเลือดแข็งตัว ประสบการณ์ 2538;51:927–35.

24. Ibrahim A, Eldaim MA, Abdel-Daim MM. ฤทธิ์ป้องกันไตของผึ้งและนมผึ้งต่อการเป็นพิษของซิสพลาตินกึ่งเรื้อรังในหนูแรท ไซโตเทคโนโลยี. 2559;68:1039–48.

25. Han SM, Yeo JH, Cho YH, Pak SC. นมผึ้งช่วยลดการสังเคราะห์เมลานินผ่านการควบคุมการแสดงออกของเอนไซม์ไทโรซิเนส แอม เจ ชิน เมด 2554; 39:1253–60.

26. Gilchrest BA, Eller MS. DNA photodamage กระตุ้นการสร้างเม็ดสีและการตอบสนองของ photoprotective อื่น ๆ J Investig Dermatol Symp Proc. 2542;4:35–40.

27. D'Mello SAN, Finlay GJ, Baguley BC, Askarian-Amiri ME เส้นทางการส่งสัญญาณใน Melanogenesis Int J Mol วิทย์ 2559;17:1144. ดอย:10.3390/ijms17071144.

28. Kobayashi T, Vieira WD, Potter B, Sakai C, Imokawa G, Hearing VJ การปรับการแสดงออกของโปรตีนเมลาโนเจนิกระหว่างการเปลี่ยนจากสหภาพยุโรปเป็นฟีโอเมลาโนเจเนซิส เจ เซลล์ วิทย์. 2538;108:2301–9.

29. Kim SS, Kim MJ, Choi YH, Kim BK, Kim KS, Park KJ, Park SM, Lee NH, Hyun G. การควบคุมเอนไซม์ไทโรซิเนส, TRP-1, TRP-2 และ MITF การแสดงออกของส้มกดเค้กใน murine B16 F10 เมลาโนมา Asian Pac J Trop ไบโอเมด 2556;3:617–22.

30. Land EJ, Ito S, Wakamatsu K, Riley PA ให้คะแนนคงที่สำหรับสองขั้นตอนทางเคมีแรกของการสร้างเซลล์ยูเมลาโนเจซิส เม็ดสีเซลล์ Res. 2546;16:487–93.

31. Yen FL, Wang MC, Liang CJ, Ko HH, Lee CW. สารยับยั้ง Melanogenesis จากสารสกัด Phyla nodiflora Evid Based Complement Alternat Med 2012; รหัส: 867494 ดอย 10.1155/2012/867494

32. Tachibana M. MITF: กระแสน้ำที่หลั่งไหลไปยังเซลล์เม็ดสี เม็ดสีเซลล์ Res. 2543;3:230–40.

33. Jung SO, Kim DH, Son JH, Nam KC, Ahn DU, Jo CR. คุณสมบัติการทำงานของไข่แดงฟอสวิตินเป็นตัวยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิส เคมีอาหาร. 2555;135:993–8.

34. Yeon HK, Youn OJ, Cho CW, Son DW, Park SJ, Rho JH, Sang YC ผลการยับยั้งกรดซินนามิกต่อการสังเคราะห์เมลานินในผิวหนัง ไบโอลฟาร์มาบูล. 2551;31:946–8.

35. Liu JR, Yang YC, Shi LS, เป็ง CC. คุณสมบัติต้านอนุมูลอิสระของนมผึ้งที่สัมพันธ์กับอายุตัวอ่อนและระยะเวลาที่เก็บเกี่ยว เจ อกริ ฟู้ด เคม. 2550;56:11447–52.

36. คาร์ไมเคิล เจ, DeGraff WG, Gazdar AF, Minna JD, Mitchell JB. การประเมินการทดสอบสีแบบกึ่งอัตโนมัติโดยใช้เตตระโซเลียม: การประเมินการทดสอบความไวต่อสารเคมี มะเร็ง Res 2530;47:936–42.

37. Bilodeau ML, Greulich JD, Hullinger RL, Bertolotto C, Ballotti R, Andrisani O. MP-2 กระตุ้นการแสดงออกของยีนไทโรซิเนสและเมลาโนเจเนซิสในเซลล์เมลาโนไซต์ที่มีความแตกต่าง เม็ดสีเซลล์ Res. 2544;14:328–36.

38. Martinez-Esparza M, Jimenez-Cervantes D, Solano F, Lonzano JA, JC CB. กลไกการยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิสโดยปัจจัยเนื้อร้ายของเนื้องอก-อัลฟาในเซลล์เมลาโนมาของหนูเมาส์ B16/F10 เออร์ เจ ไบโอเคม 2541;255:139–46.

39. Ding HY, Chang TS, Shen HC, Tai SK สารยับยั้ง Murine tyrosinase จาก Cynanchum Bungei และการประเมินฤทธิ์ลดเม็ดสีในหลอดทดลองและในร่างกาย ประสบการณ์โรคผิวหนัง. 2011;20:720–4.

40. Takiwaki H, Serup J. การวัดค่าพารามิเตอร์สีของแผ่นโลหะสะเก็ดเงินด้วยเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์แบบสะท้อนแสงแถบแคบและการวัดสีแบบไตรสติมูลัส สกินฟาร์มาคอล. 2537;7:145–50.

41. มอนต์โกเมอรี่ ดี.ซี. การทดลองด้วยปัจจัยเดียว: การวิเคราะห์ความแปรปรวน ในการออกแบบและวิเคราะห์การทดลอง มอนต์โกเมอรี่ ดี.ซี. เอ็ด จอห์น ไวลีย์แอนด์ซันส์ นิวยอร์ก 2534; 75–77.

42. Park HY, Wu C, Yonemoto L, Murphy-Smith M, Wu H, Stachur CM MITF เป็นสื่อกลางในการแสดงออกของโปรตีนไคเนส Cb ที่เกิดจากแคมป์ในเซลล์เมลาโนไซต์ของมนุษย์ Biochem J. 2006;395:571–8.

43. โกดิง CR. Mitf จากยอดประสาทถึงเมลาโนมา: การถ่ายทอดสัญญาณและการถอดความในสายเลือดเมลาโนไซต์ ยีนเดฟ 2543;14:1712–28.

44. Kim DS, Park SH, Kwon SB, Li K, Youn SW, Park KC (−)-Epigallocatechin-3- gallate และ hinokitiol ลดการสังเคราะห์เมลานินผ่านการผลิต MITF ที่ลดลง อาร์ช ฟาร์มา เรส 2547;27:334–9.

45. Choi YK, RhoYK, Yoo KH, Lim YY, Li K, Kim BJ. ผลของวิตามินซีกับวิตามินรวมต่อการสร้างเมลาโนเจเนซิส: การศึกษาเปรียบเทียบในหลอดทดลองและในร่างกาย แพทย์ฝึกหัด J Dermatol 2554;49:218–26.

46 Dynek JN, Chan SM, Liu J, Zha J, Fairbrother WJ, Vucic D. ปัจจัยการถอดความที่เกี่ยวข้องกับ Microphthalmia มะเร็ง Res 2551;68:3124–32.

47. Curtin JA, Fridlyand J, Kageshita T, Patel HN, Busam KJ, Kutzner H, Cho KH, Aiba S, Bröcker EB, LeBoit PE, Pinkel D, Bastian BC ชุดการเปลี่ยนแปลงทางพันธุกรรมที่แตกต่างกันในมะเร็งผิวหนัง N Engl J Med. 2548;353(20):2135–47.

48. Chan SH, Lim WK, Scott T Michalski ST, Lim JQ, NDB, Met-Domestici M, Young CNC, Vikstrom K, Esplin ED, Fulbright J, Ang MK, Wee J, Sittampalam K, Farid M, Lincoln SE, Itahana K, Abdullah S, The BT, Ngeow J. Germline hemizygous การลบ CDKN2A–CDKN2B locus ในผู้ป่วยที่มีอาการ Li–Fraumeni syndrome npj ยาจีโนมิก 2559; ดอย:10.1038/ npjgenmed.2016.15

49. Hartman ML, Czyz M. MITF ในมะเร็งผิวหนัง: กลไกที่อยู่เบื้องหลังการแสดงออกและกิจกรรมของมัน Cell Mol Life วิทย์. 2558;72:1249–60. ดอย:10.1007/วินาที00018-014- 1791-0

50. Antonescu CR, Busam KJ, Francone TD, Wong GC, Guo T, Agaram NP, Besmer P, Jungbluth A, Gimbel M, Chen CT, Veach D, Clarkson BD, Paty PB, Weiser MR. การกลายพันธุ์ของ L576P KIT ในเนื้องอกทางทวารหนักมีความสัมพันธ์กับการแสดงออกของโปรตีน KIT และมีความไวต่อการยับยั้งไคเนสเฉพาะ Int J มะเร็ง 2550;121:257–64.

51. Abdel-Daim M, Funasaka Y, Komoto M, Nakagawa Y, Yanagita E และอื่น ๆ เภสัชจลนศาสตร์ของ metabotropic glutamate receptor subtype 1 และการก่อตัวของมะเร็งผิวหนังในร่างกาย เจ เดอร์มาทอล 2553;37:635–46.

52. Ohtani Y, Harada T, Funasaka Y, Nakao K, Takahara C และอื่นๆ ชนิดย่อยของตัวรับเมตาโบทรอปิกกลูตาเมต-1 เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการเจริญเติบโตในร่างกายของมะเร็งผิวหนัง อองโคยีน. 2551;27:7162–70.

53. Kim J, Kim Y, Yun H, Park H, Kim SY, Lee KG, Han SM, Cho Y. นมผึ้งช่วยเพิ่มการโยกย้ายของเซลล์ไฟโบรบลาสต์ผิวหนังของมนุษย์ และเปลี่ยนระดับของคอเลสเตอรอลและสฟิงกานีนในรูปแบบการรักษาบาดแผลในหลอดทดลอง Nutr Res ปฏิบัติ 2010;4:362–8.

54 Fujii A, Kobayashi S, Kuboyama N, Furukawa Y, Kaneko Y, Ishihama S, Yamamoto H, Tamura T. การเสริมการรักษาบาดแผลด้วยนมผึ้ง (RJ) ในหนูที่เป็นเบาหวานสเตรปโตโซโทซิน เจพีเอ็น เจ ฟาร์มาคอล 2533;53:331–7.

55. Koya-Miyata S, Okamoto I, Ushio S, Iwaki K, Ikeda M, Kurimoto M. การระบุปัจจัยส่งเสริมการผลิตคอลลาเจนจากสารสกัดนมผึ้งและกลไกที่เป็นไปได้ Biosci ไบโอเทคโนล ไบโอเคมี 2547;68:767–73.

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501