Epigenetic Regulator BRD4 เกี่ยวข้องกับการตอบสนองการอักเสบที่เกิดจากแคดเมียมในไตของหนู

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม:ali.ma@wecistanche.com

Zhongguo Gong et al

Cistanche tubulosa ป้องกันโรคไต คลิกที่นี่เพื่อรับผลิตภัณฑ์และ Cistanche DHT

บทคัดย่อ

แคดเมียม (Cd) ได้รับการอธิบายว่าเป็นตัวกระตุ้นการอักเสบที่อาจเกิดขึ้นได้ ในขณะที่หลักฐานที่เพิ่มขึ้นแสดงให้เห็นว่าการอักเสบที่ไม่เหมาะสมเป็นปัจจัยสนับสนุนอาการบาดเจ็บที่ไต. ดังนั้นการวิจัยเกี่ยวกับการตอบสนองต่อการอักเสบที่เกิดจาก Cd จึงมีความสำคัญอย่างยิ่งในการอธิบายกลไกการเกิดพิษต่อไตที่เกิดจาก Cd โบรโมโดเมนที่มี4(BRD4) เป็นตัวควบคุม epigenetic ที่สำคัญที่เกี่ยวข้องกับการพัฒนาของโรคอักเสบหลายชนิด แต่บทบาทด้านกฎระเบียบใน Cd-triggeredอักเสบคำตอบยังคงต้องชี้แจง ที่นี่ เราพบว่าการรักษาด้วย Cd ในหนู Sprague-Dawley (2 มก./กก. BW, ip, 5 วันติดต่อกัน) และในหนูเซลล์ไตเส้น (NRK{{0}}E, 0–10 ไมโครโมลาร์, 12 ชั่วโมง) เหนี่ยวนำการถอดรหัสของไซโตไคน์ที่มีการอักเสบ ซึ่งสามารถลดลงได้โดย JQ1 (ตัวยับยั้ง BRD4, 25 มก./กก. BW, ip , 3 วันติดต่อกันในร่างกาย; 0.5 μM, 12 ชั่วโมงในหลอดทดลอง) หรือ BRD4 RNA ที่รบกวนขนาดเล็ก (siRNA, ในหลอดทดลอง) ซึ่งบ่งชี้ว่า BRD4 มีส่วนร่วมในการตอบสนองต่อการอักเสบที่เกิดจาก Cd ต่อไป การศึกษาของเราชี้แจงบทบาทของ BRD4 ในการตอบสนองต่อการอักเสบที่เกิดจาก Cd การยับยั้ง BRD4 ช่วยลดการย้ายและกระตุ้นนิวเคลียร์ NF-κB ที่ส่งเสริม Cd ในร่างกายและในหลอดทดลอง Cd เพิ่มระดับ acetylation ของ RelA K310 และเพิ่มการผูกมัด BRD4 กับ acetylated NF-κB RelA ในร่างกาย และ ในหลอดทดลอง ซึ่งถูกยกเลิกโดยการยับยั้ง BRD4 โดยสรุป การศึกษาของเราชี้ให้เห็นว่า BRD4 เกี่ยวข้องกับการถอดรหัสของไซโตไคน์อักเสบที่กระตุ้นด้วย Cd โดยเป็นสื่อกลางในการกระตุ้นเส้นทางการส่งสัญญาณ NF-κB และเพิ่มความผูกพันกับ acetylated NF-κB RelA ในหนูไต,ดังนั้น BRD4 อาจเป็นเป้าหมายในการรักษาโรคไตที่เกิดจาก Cd

คำสำคัญ: BRD4แคดเมียมไตอักเสบไซโตไคน์ NF-κB JQ1

1. บทนำ

แคดเมียม (Cd) เป็นสารก่อมลพิษโลหะหนักที่มีความเป็นพิษสูงและครึ่งชีวิตที่ยาวนาน ด้วยการพัฒนาของการผลิตภาคอุตสาหกรรม ภัยคุกคามที่เพิ่มขึ้นของมลพิษจากซีดีต่อความมั่นคงด้านสิ่งแวดล้อมและสุขภาพของมนุษย์ทำให้เกิดความกังวล (Wang et al., 2020; Horiguchi and Oguma, 2016) หลังจากที่ร่างกายดูดซึม Cd จะทำให้เกิดความเสียหายต่ออวัยวะหลายส่วนและไตเป็นอวัยวะเป้าหมายหลัก (Fernando et al., 2020; Zhao et al., 2021) ก่อนหน้านี้ เราได้ตรวจสอบอย่างเป็นระบบว่าการยับยั้ง autophagy ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน และการตายของเซลล์แบบอะพอพโทซิสมีส่วนทำให้เกิดพิษต่อไตที่เกิดจาก Cd ในหนู (Liu et al., 2017; Wang et al., 2017) การอักเสบเป็นการตอบสนองทางสรีรวิทยาที่ทำหน้าที่เป็นปฏิกิริยาป้องกันการติดเชื้อหรือการบาดเจ็บ แต่การตอบสนองการอักเสบที่ไม่สามารถควบคุมได้และไม่เหมาะสมที่เกิดจาก Cd อาจก่อให้เกิดอันตรายได้ เช่น การทำลายเนื้อเยื่อปกติที่ยืนอยู่ข้าง ๆ และส่งเสริมโรคภูมิต้านตนเอง (Hossein-Khannazer et al., 2020; Zhang et อัล., 2020). การตอบสนองต่อการอักเสบที่กระตุ้นด้วยซีดีทำให้โรคหัวใจและหลอดเลือดรุนแรงขึ้น และความเสียหายของตับ บ่งชี้ว่าการอักเสบอาจมีบทบาทสำคัญในการใช้ Cd-mediatedไตกระบวนการทางพยาธิวิทยา (Fagerberg et al., 2017; Almeer et al., 2019)

Epigenetics หมายถึงการดัดแปลงพันธุกรรมในการแสดงออกของยีนตามการเปลี่ยนแปลงลำดับที่ไม่ใช่ DNA และการย้อนกลับของการดัดแปลงเหล่านี้ช่วยให้ค้นพบเป้าหมายการรักษาใหม่ (Vendetti and Rudin, 2013) โดเมนโบรโมโดเมนและโดเมนภายนอก (BET) ประกอบด้วยโบรโมโดเมนที่มี 2 (BRD2), BRD3, BRD4 และโบรโมโดเมนเฉพาะ (BRDT) ซึ่งมีลักษณะเฉพาะโดยโบรโมโดเมนสองชนิดและจับกับอะซิติเลตไลซีนของฮิสโตนและไม่ใช่ฮิสโตน ( Lochrin et al., 2014; Chatterjee and Bohmann, 2018). โปรตีน BET ทำหน้าที่เป็นตัวกระตุ้นร่วมในการถอดรหัสของยีนจำนวนมาก ซึ่งควบคุมวงจรเซลล์ การตอบสนองต่อการอักเสบ ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน และกระบวนการทางสรีรวิทยาอื่นๆ ในแบบจำลองทางพยาธิวิทยาต่างๆ (Jiao et al., 2020; Wang et al., 2019b) BRD4 เป็นสมาชิกที่ได้รับการศึกษามาเป็นอย่างดีในตระกูลโปรตีน BET และการศึกษาแบบสะสมได้รายงานว่าเป็นเป้าหมายของอีพีเจเนติกใหม่ในการควบคุมที่หลากหลายโรคไตรวมถึงโรคไตอักเสบเรื้อรัง โรคไตจากเบาหวาน และความเสียหายของไตจากการทดลอง (Zeng and Zhou, 2002; Morgado-Pascual et al., 2019) BRD4 ได้รับการยืนยันให้เข้าร่วมในกระบวนการถอดความที่ขึ้นอยู่กับปัจจัยนิวเคลียร์ κB (NF-κB) เพื่อควบคุมการตอบสนองต่อการอักเสบในหลายโรค (Xu และ Vakoc, 2014; Suarez-Alvarez et al., 2017) BRD4 สามารถคัดเลือกได้โดย acetylated RelA (หน่วยย่อย NF-κB ซึ่งเป็นยีนเข้ารหัสโปรตีน) ที่ไลซีน 310 (RelA-K310ac) ผ่านทางโบรโมโดเมน ดังนั้นจึงกระตุ้นไคเนส 9 (CDK9) ที่ขึ้นกับ cyclin และฟอสโฟรีเลต RNA polymerase II เพื่อส่งเสริม การถอดรหัสยีนเป้าหมาย NF-κB (Hajmirza et al., 2018) การศึกษาเมื่อเร็ว ๆ นี้ชี้ให้เห็นว่าสารยับยั้ง BRD4 อาจเป็นทางเลือกในการรักษาสำหรับโรคอักเสบ ในรูปแบบการบาดเจ็บไขสันหลังของหนู การยับยั้ง BRD4 ลดการตอบสนองต่อการอักเสบและส่งเสริมการฟื้นตัวของ microglia (Dey et al., 2019) นอกจากนี้ การยับยั้ง BRD4 ได้ยกเลิกการอักเสบของไตในการทดลองในแบบจำลอง murine ของการอุดตันของท่อไตข้างเดียว, ฐานต้านเยื่อหุ้มเซลล์ GN และการฉีด Angiotensin II (Suarez-Alvarez et al., 2017)

ในมุมมองของผลกระทบที่อาจเกิดขึ้นจากการอักเสบของ Cd และผลด้านกฎระเบียบของ BRD4 ต่อการอักเสบ เราตั้งสมมติฐานว่า BRD4 เกี่ยวข้องกับการตอบสนองต่อการอักเสบที่เกิดจาก Cd ตามที่คาดไว้ BRD4 ไกล่เกลี่ยกระบวนการถอดรหัสของไซโตไคน์ที่มีการอักเสบในแบบจำลองไตของหนูที่สัมผัส Cd การศึกษาของเราเผยให้เห็นกลไกที่เป็นไปได้ในการตอบสนองต่อการอักเสบที่เกิดจาก Cd และให้ข้อมูลเชิงลึกใหม่เกี่ยวกับการบำบัดพิษต่อไตที่เกิดจาก Cd

2. วัสดุและวิธีการ

2.1. สารเคมีและแอนติบอดี

ซื้อแคดเมียมคลอไรด์ (CdCl2, anhydrous, 439800) จาก Sigma-Aldrich (Carlsbad, CA, USA) (บวก )-JQ1 (HY-13030) ได้รับจาก MedChemExpress (Monmouth Junction, NJ, USA) ซื้อชุดสกัดโปรตีนนิวเคลียร์จากสถาบันเทคโนโลยีชีวภาพ Beyotime (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน P0027) ชุดเคมีลูมิเนสเซนส์ที่มีประสิทธิภาพ (ECL, 32209) และรีเอเจนต์การทดสอบโปรตีนกรดบิซินโชนินิก (BCA, 23225) ได้รับจาก Thermo Fisher Scientific (Madison, WI, USA) ใช้แอนติบอดีปฐมภูมิที่ต้านโปรตีนต่อไปนี้: NF-κB p65 (10745-1- AP), IL-1 (26048-1-AP), TNF- (17590-1-AP) ถูกซื้อมาจาก กลุ่มโปรตีนเทค (หวู่ฮั่น, จีน); ซื้อ -actin (3700 s), Histone H3 (His3, 4499), Sirtuin 1 (Sirt1, 8469), IgG กระต่ายปกติ (IgG, 4394) จาก Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA); BRD4 (ab128874), K (ไลซีน) acetyltransferase 3 (KAT3B/Ep300, ab14984), NF-κB RelA (acetyl K310) (RelA-K310ac, ab19870), Alexa Fluor® 488–conjugated donkey anti-rabbit (ab150073) จาก Abcam (เคมบริดจ์ สหราชอาณาจักร) แอนติบอดีที่สอง: Goat Anti-Mouse IgG (H plus L) (115-035-003) และ Goat Anti-Rabbit IgG (H plus L) (111-035-003) ถูกซื้อจาก Jackson ImmunoResearch (West Grove, PA, USA ).

2.2. สัตว์และการทดลอง

หนู Sprague-Dawley ยี่สิบสี่ตัว (เพศผู้อายุ 6 สัปดาห์ 110–120 ก.) ถูกซื้อจาก Pengyue Experimental Animal Breeding Co., Ltd (จี่หนาน ชานตง ประเทศจีน) หนูได้รับอนุญาตให้เข้าถึงอาหารและน้ำได้ฟรีในห้องควบคุมสิ่งแวดล้อม (24 ± 5 ​​องศา , รอบแสง/มืด 12 ชม.) ขั้นตอนการทดลองใช้กับ European Communities Council Directive 2010/63/EU สำหรับการทดลองกับสัตว์ และขั้นตอนทั้งหมดได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการการดูแลและการใช้สัตว์ของมหาวิทยาลัยหยางโจว หลังจากผ่านไปหนึ่งสัปดาห์ของการปรับตัวให้ชินกับสภาพอากาศ หนูถูกสุ่มแบ่งออกเป็นสี่กลุ่ม: (1) กลุ่มควบคุม: ฉีดเข้าช่องท้องด้วยตัวทำละลายที่สอดคล้องกัน (น้ำเกลือทางสรีรวิทยาหรือ 2-ไฮดรอกซีโพรพิล- -สารละลายไซโคลเด็กซ์ทริน) (2) กลุ่ม Cd: CdCl2 (น้ำหนักตัว 2 มก./กก. ละลายในน้ำเกลือทางสรีรวิทยา) ฉีดเข้าช่องท้องเป็นเวลา 5 วันติดต่อกันเพื่อสร้างแบบจำลองการเป็นพิษของ Cd (3) กลุ่ม Cd plus JQ1: CdCl2 (น้ำหนักตัว 2 มก./กก.) ฉีดเข้าช่องท้องเป็นเวลา 5 วันติดต่อกันเพื่อสร้างแบบจำลองการเป็นพิษของ Cd และ JQ1 (25 มก./กก. ของน้ำหนักตัว ละลายใน 2-ไฮดรอกซีโพรพิล{{ 25}}สารละลายไซโคลเด็กซ์ทริน) ฉีดเข้าช่องท้องในวันที่ 6–8 (4) กลุ่ม JQ1: JQ1 (25 มก./กก. ของน้ำหนักตัว) ฉีดเข้าช่องท้องในวันที่ 6-8 สถิติของปริมาณ Cd ในซีรัมของหนูและเนื้อเยื่อไตแสดงไว้ในตารางที่ S1 ซึ่งสะท้อนถึงความสำเร็จในการสร้างแบบจำลองหนูที่สัมผัส Cd

หลังจากการรักษา 8 วัน หนูถูกฆ่าโดยปากมดลูกเคลื่อนภายใต้การดมยาสลบหลังจากอดอาหาร 12 ชั่วโมง เนื้อเยื่อไตถูกผ่าออก และเนื้อเยื่อ 1 กรัมของไตแต่ละข้างถูกเก็บไว้อย่างรวดเร็วที่อุณหภูมิ −80 ◦C สำหรับการติดตาม Western blot และการวิเคราะห์ PCR เชิงปริมาณ (qPCR) ปริมาณที่เหลือของเนื้อเยื่อได้รับการแก้ไขอย่างรวดเร็วใน 4 เปอร์เซ็นต์พาราฟอร์มัลดีไฮด์ (PFA) สำหรับการย้อมสีอิมมูโนฮิสโตเคมี (IHC)

2.3. การเพาะเลี้ยงเซลล์และการรักษา

เซลล์ไตของหนู (NRK{0}}E) ได้มาจาก Shanghai Cell Bank of China Academy of Sciences เซลล์ NRK-52E ถูกเพาะเลี้ยงด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อ Eagle ที่ดัดแปลงของ Dulbecco (DMEM, Gibco, 12800-017) ที่มีซีรัมวัวในครรภ์ 5 เปอร์เซ็นต์ (FBS, Gibco, 10437-028), เพนิซิลลิน และสเตรปโตมัยซิน (1 00 U/mL) ในสภาวะที่มีความชื้น CO2 5 เปอร์เซ็นต์ และอากาศ 95 เปอร์เซ็นต์ที่ 37 องศา CdCl2 (ละลายน้ำได้มากเป็นพิเศษ) และ JQ1 (ละลายด้วยไดเมทิลซัลฟอกไซด์) แยกจากกันที่ 4 องศาและ -20 องศา และเจือจางลงในสารละลายที่ใช้งานได้ก่อนใช้งาน การออกแบบการทดลองมีดังนี้: (1) เซลล์ได้รับการบำบัดด้วย 0, 2.5, 5, 10 μM Cd เป็นเวลา 12 ชั่วโมง หรือ 5 μM Cd เป็นเวลา 0, 6, 12, 24 ชั่วโมง เพื่อดำเนินการหาปริมาณที่ตามมา (2) เซลล์ถูกบำบัดด้วย 5 ไมโครโมลาร์ Cd และ/หรือ 0.5 ไมโครโมลาร์ JQ1 เป็นเวลา 12 ชั่วโมงเพื่อดำเนินการหาปริมาณที่ตามมา (3) เซลล์ถูกทรานส์เฟกด้วย siBRD4 และ/หรือบำบัดด้วย 5 ไมโครโมลาร์ Cd เป็นเวลาอีก 12 ชั่วโมงเพื่อดำเนินการหาปริมาณที่ตามมา

2.4. การถ่าย RNA ที่รบกวนเล็กน้อย

เราถ่ายยีน BRD4 ที่รบกวนขนาดเล็ก 20 นาโนเมตร (siBRD4, Invitrogen, CA, USA) ลงในเซลล์ NRK-52E โดยรีเอเจนต์การถ่าย Lipofectamine RNAiMAX (Thermo Fisher Scientific, Cat# 13778150) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงตามคู่มือผลิตภัณฑ์ ใช้ความรู้สึก siRNAs ต่อไปนี้:

siBRD4 โดยมีลำดับเป้าหมายเป็น 5′-CCGTCAAGCTGAACCTCCCTGATTA-3′;

siCt (กลุ่มควบคุมเชิงลบของ siRNA) โดยมีลำดับเป้าหมายเป็น 5′- UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3′

2.5. ซับตะวันตก

ตัวอย่างเนื้อเยื่อไตและเซลล์ NRK-52E ถูกสลายในบัฟเฟอร์ RIPA ที่มีตัวยับยั้งโปรตีเอสเพื่อสกัดโปรตีนทั้งหมด โปรตีนนิวเคลียสถูกเตรียมจากเนื้อเยื่อและเซลล์สดล่วงหน้าและเก็บไว้ที่ -80 องศา ตัวอย่างโปรตีน (20–30 ไมโครกรัมต่อตัวอย่าง) ถูกแยกโดยอิเล็กโตรโฟรีซิส SDS-PAGE จากนั้นถ่ายโอนไปยังเยื่อโพลีไวนิลลิดีนฟลูออไรด์ (Millipore, ISEQ00010) เยื่อหุ้มเซลล์ถูกบล็อกด้วยนมพร่องมันเนย 5 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 90 นาที และบ่ม 12 ชั่วโมงที่ 4 องศาด้วยแอนติบอดีหลักต่อไปนี้: -แอกติน (1:5000), NF-κB p65 (1:1000), IL-1 ( 1:600), TNF- (1:600), BRD4 (1:1000), Ep300 (1:1000), Sirt1 (1:1000), His3 (1:1000), RelA-K310ac (1:1000) จากนั้นเมมเบรนถูกล้างด้วย TBST และบ่มด้วยแอนติบอดีทุติยภูมิที่สอดคล้องกัน (1:10000) เป็นเวลา 90 นาทีที่อุณหภูมิห้อง (RT) เยื่อหุ้มเซลล์ถูกบ่มด้วยอิเล็กโตรเคมีลูมิเนสเซนซ์ (ECL, ThermoFisher Scientific) และกำหนดบน Chemidoc XRS (Bio-Rad, Marnes-La Coquette, ฝรั่งเศส) และวิเคราะห์ความหนาแน่นของแสงโดยใช้ ImageJ (NIH, Bethesda, MD, USA)

2.6. การย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์ (IF)

NRK{{0}}E เซลล์ที่เพาะใน 24-จานหลุมถูกทำให้โตจนเกิดการบรรจบกันประมาณ 60 เปอร์เซ็นต์ เซลล์ได้รับการบำบัดด้วย 5 ไมโครโมลาร์ Cd และ/หรือ 0.5 ไมโครโมลาร์ JQ1 เป็นเวลา 12 ชั่วโมง จากนั้นตรึงด้วย PFA (4 เปอร์เซ็นต์ , 10 นาที) ซึมผ่านด้วยไทรทัน X- 100 (0.1 เปอร์เซ็นต์ , 15 นาที) ถูกบล็อกด้วย BSA (2 เปอร์เซ็นต์, 90 นาที) ที่ RT และฟักด้วยแอนติบอดีปฐมภูมิ (NF-κB p65, การเจือจาง 1:50) ค้างคืนที่ 4 องศา หลังจากถูกล้างด้วย PBS สามครั้ง เซลล์ถูกบ่มด้วยแอนติบอดีทุติยภูมิ (1:500 การเจือจาง) เป็นเวลา 90 นาที และด้วย DAPI เป็นเวลา 5 นาทีที่ RT จากนั้นเซลล์ถูกสังเกตพบภายใต้กล้องจุลทรรศน์แบบคอนโฟคอล NF-κBการโยกย้ายนิวเคลียร์ได้รับการวิเคราะห์ในการศึกษาอิสระสามครั้ง

2.7. qPCR

RNA ทั้งหมดของเนื้อเยื่อไตและเซลล์ NRK-52E ถูกสกัดด้วยชุด RNAiso Plus (Takara Bio, Shiga, Japan) RNA ทั้งหมด 1 ug ถูกใช้เพื่อสังเคราะห์ cDNA สายที่ 1 ตามคู่มือของผู้ผลิต (Roche, Basel, Switzerland) DNA เสริม (cDNA) 2 ไมโครลิตรต่อหลุมถูกนำมาใช้เพื่อตรวจจับระดับ mRNA สัมพัทธ์โดยใช้ LightCycler® 96 Real-Time PCR System (โรช) คำนวณระดับ mRNA สัมพัทธ์ตามสมการ 2-△△CT ไพรเมอร์ถูกระบุไว้ในตาราง S2 -actin เป็นยีนอ้างอิงของหนู

2.8. ร่วมภูมิคุ้มกัน (Co-IP)

เนื้อเยื่อไตและเซลล์ NRK-52E ถูกสลายในบัฟเฟอร์สลายเซลล์ที่เตรียมใหม่ (20 mM HEPES–KOH pH 7.5, 150 mmol/L NaCl, 2 mmol/L EDTA, 1 เปอร์เซ็นต์ Triton X{{8} }) ที่มี PMSF เม็ดบีดโปรตีน G (100 ไมโครลิตรต่อตัวอย่าง, Bio-Rad, Hercules, CA, USA) ถูกผสมกับ 2 ug BRD4, RelA-K310ac หรือแอนติบอดี IgG ต่อตัวอย่าง และหมุนเป็นเวลา 10 นาทีที่ RT จากนั้น ไลเซตโปรตีนทั้งหมดถูกบ่มด้วยสารเชิงซ้อนบีดส์-แอนติบอดีข้ามคืนที่ 4 องศา หลังจากล้างด้วยบัฟเฟอร์การสลายเซลล์สามครั้ง อิมมูโนพรีซิปิเทตถูกระงับใหม่ด้วยบัฟเฟอร์ตัวอย่าง 1 × SDS PAGE เพื่อกำหนดค่าตัวอย่าง ตรวจพบโปรตีนเป้าหมายโดยใช้ Western blotting กับแอนติบอดีปฐมภูมิต้าน BRD4 และ anti-RelA K310ac

2.9. การวิเคราะห์ทางสถิติ

ข้อมูลทั้งหมดได้มาจากการทดลองอิสระอย่างน้อยสามครั้งและแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± SEM เว้นแต่จะระบุไว้เป็นอย่างอื่น เปรียบเทียบกลุ่มทดลองโดยการทดสอบ t-test แบบสองด้านของนักเรียนแบบ unpaired หรือการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว (ANOVA) โดยใช้ SPSS 220 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) ความสำคัญถูกกำหนดไว้ที่ p <>

3. ผลลัพธ์

3.1. Cd กระตุ้นการแสดงออกของไซโตไคน์อักเสบ ในร่างกาย และ ในหลอดทดลอง

ในฐานะที่เป็นสารก่อมลพิษต่อสิ่งแวดล้อม ซีดีได้รับการพิสูจน์แล้วว่าก่อให้เกิดความเสียหายต่อไตโดยการควบคุมชุดของกระบวนการทางชีววิทยา (Wang et al., 2019c) ในการศึกษานี้ การเปลี่ยนแปลงในระดับการถอดรหัสของไซโตไคน์ที่มีการอักเสบได้รับการตรวจสอบหลังจากการสัมผัสซีดีเพื่อตรวจสอบว่าการอักเสบเกี่ยวข้องกับความเป็นพิษต่อไตที่เกิดจากซีดีหรือไม่ ข้อมูลแสดงให้เห็นว่าการได้รับ Cd เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญระหว่าง interleukin (IL)-1 และ tumor necrosis factor (TNF)- ระดับโปรตีนในเซลล์ NRK-52E (รูปที่ 1A-B) และเนื้อเยื่อไตของหนู (รูปที่ 1C) -D). ในขณะเดียวกัน ดังที่แสดงในรูปที่ 1E-F การได้รับ Cd ช่วยเพิ่มระดับการถอดรหัสของไซโตไคน์ที่มีการอักเสบ (IL-1 , IL-6, TNF- และ (Monocyte chemoattractant protein-1) MCP -1) ในร่างกายและในหลอดทดลอง การค้นพบนี้ชี้ให้เห็นว่า Cd กระตุ้นการแสดงออกของไซโตไคน์ที่อักเสบในไตของหนู

3.2. BRD4 มีส่วนร่วมในกระบวนการถอดรหัสของไซโตไคน์อักเสบที่เกิดจาก Cd

BRD4 เป็นตัวควบคุม epigenetic ที่เพิ่งอธิบายใหม่ซึ่งจับกับ acetylated histones หรือ non-histone เพื่อควบคุมกระบวนการอักเสบในหลายโรค ในที่นี้ สารยับยั้ง BRD4 JQ1 และ BRD4-siRNA ถูกใช้เพื่อตรวจสอบบทบาทของ BRD4 ต่อการตอบสนองต่อการอักเสบที่กระตุ้นด้วย Cd ข้อมูลแสดงให้เห็นว่า IL-1 ที่ยกระดับ Cd และระดับโปรตีน TNF ถูกควบคุมโดยการรักษา JQ1 ในร่างกาย และ ในหลอดทดลอง (รูปที่ 2A–D) และโดยการล้มลงของ BRD4 ในหลอดทดลอง (รูปที่ S1A-B) ในขณะเดียวกัน การบำบัดด้วย JQ1 ยับยั้งระดับการถอดรหัสที่เสริม Cd อย่างมีนัยสำคัญของ IL-1 , IL-6, TNF- และ MCP-1 ในเซลล์ NRK-52E (รูปที่ 2E) และเนื้อเยื่อไตของหนู (รูปที่ 2F) นอกจากนี้ การล้มลงของ BRD4 ยังลดระดับการถอดรหัสของไซโตไคน์ที่มีการอักเสบใน Cd ที่เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในเซลล์ NRK-52E (รูปที่ S1C) โดยรวมแล้วการค้นพบนี้ชี้ให้เห็นว่า BRD4 เป็นตัวควบคุมที่สำคัญของการตอบสนองต่อการอักเสบที่เกิดจาก Cd ในไตของหนู

3.3. ระดับการแสดงออกของ BRD4 ยังคงไม่เปลี่ยนแปลงหลังจากสัมผัสซีดี

ถัดไป การเปลี่ยนแปลงในระดับการแสดงออกของ BRD4 ถูกตรวจพบหลังจากการสัมผัสซีดี เซลล์ NRK-52E ถูกบำบัดด้วย Cd ภายใต้การไล่ระดับความเข้มข้น และหนูถูกฉีดเข้าช่องท้องด้วย Cd เป็นเวลา 5 วันเพื่ออธิบายผลของ Cd ต่อการแสดงออกของ BRD4 ในไต ในหลอดทดลอง และในหลอดทดลอง ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่าระดับโปรตีน BRD4 ไม่เปลี่ยนแปลงทั้งในเซลล์ NRK-52E ที่สัมผัส Cd (รูปที่ 3A-B) และเนื้อเยื่อไตของหนู (รูปที่ 3C-D) นอกจากนี้ ระดับ BRD4 mRNA ยังไม่เปลี่ยนแปลงหลังจากการสัมผัส Cd (รูปที่ 3E-F) ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า BRD4 ไกล่เกลี่ยการตอบสนองต่อการอักเสบที่เกิดจาก Cd ไม่ได้ขึ้นอยู่กับการเปลี่ยนแปลงในระดับการแสดงออก

3.4. BRD4 ควบคุมการโยกย้ายนิวเคลียร์ NF-κBที่ส่งเสริมด้วยซีดี

บทบาทของ BRD4 ในการตอบสนองต่อการอักเสบที่เกิดจาก Cd ได้รับการสำรวจในการศึกษาของเรา การเปลี่ยนแปลงเส้นทางการส่งสัญญาณ NF-κBมีความสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับการถอดรหัสของไซโตไคน์ที่อักเสบ (Chi et al., 2021) การศึกษาของเราพบว่า BRD4 เกี่ยวข้องกับการเคลื่อนย้ายนิวเคลียร์ที่ควบคุมโดย Cd และการกระตุ้น NF-κB ขั้นแรก การแปลเป็นภาษาท้องถิ่นของ NF-κB ถูกกำหนดโดยการย้อมสี IF และการย้อมสี IHC ข้อมูลในรูปที่ 4A และ D แสดงให้เห็นว่า JQ1 ยับยั้งการเคลื่อนย้ายนิวเคลียร์ NF-κB ที่ส่งเสริม Cd ในเซลล์ NRK-52E และเนื้อเยื่อไตของหนู ในขณะเดียวกัน ผล Western blot พบว่า JQ1 ลดระดับโปรตีนนิวเคลียร์ของ Cd ที่เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญของ NF-κB ในร่างกาย (รูปที่ 4B-C) และในหลอดทดลอง (รูปที่ 4E-F) ในทำนองเดียวกัน การล้มลงของ BRD4 ยังยับยั้งการโยกย้ายนิวเคลียร์ NF-κB ที่ส่งเสริม Cd อย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ S2A) และลดระดับโปรตีนนิวเคลียร์ของ Cd ที่เพิ่มขึ้นของ NF-κB (รูปที่ S2B-C) ในเซลล์ NRK-52E เมื่อนำมารวมกัน การยับยั้ง BRD4 สามารถลดการย้ายนิวเคลียร์ NF-κB ที่ส่งเสริมด้วย Cd โดยบอกว่า BRD4 เป็นสื่อกลางในการกระตุ้นเส้นทางการส่งสัญญาณ NF-κBในไตหลังจากได้รับ Cd

3.5. Cd เพิ่มระดับอะซิติเลชั่น RelA K310

การศึกษายืนยันว่า BRD4 จับกับ acetylated RelA K310 ผ่านโดเมนโบรมีนเพื่อควบคุมการถอดรหัสที่ขึ้นกับ NF-κB (Morgado-Pascual et al., 2019; Zhong et al., 2018) ดังนั้นจึงตรวจพบระดับอะซิติเลชั่นของ RelA K310 และการแสดงออกของเอนไซม์สองตัว ข้อมูลแสดงให้เห็นว่าระดับโปรตีน RelA-K310ac และ acetylase Ep300 ลดลงอย่างต่อเนื่องด้วยความเข้มข้นของ Cd ที่เพิ่มขึ้น ในขณะที่ระดับโปรตีน deacetylase Sirt1 ค่อยๆ เพิ่มขึ้นในเซลล์ NRK-52E (รูปที่ 5A-B) และเนื้อเยื่อไตของหนู (รูปที่ 5A-B) . 5C-D). นอกจากนี้ ระดับ mRNA ของ Ep300 และ Sirt1 ยังมีแนวโน้มเหมือนกัน (รูปที่ 5E-F) ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า Cd ส่งเสริมระดับอะซิติเลชันของ RelA K310 ดังนั้น BRD4 อาจเกี่ยวข้องกับการถอดรหัสไซโตไคน์อักเสบที่กระตุ้นด้วย Cd ในไต

3.6. Cd เพิ่มการเชื่อมโยง BRD4 กับ RelA-K310ac เพื่อปรับปรุงฟังก์ชันการถอดรหัส

การผูกกับไซต์อะซิติเลชั่นเป็นพื้นฐานสำหรับการควบคุมการถอดรหัสของ BRD4 (Huang et al., 2009) เพื่อตรวจสอบว่า Cd ควบคุมฟังก์ชัน BRD4 โดยเพิ่มการรวม BRD4 กับ RelA-K310ac หรือไม่ การโต้ตอบระหว่าง RelA-K310ac และ BRD4 จะถูกตรวจพบผ่าน Co-IP ข้อมูลในรูปที่ 6A แสดงให้เห็นว่า Cd เพิ่มปฏิสัมพันธ์ระหว่าง RelA-K310ac และ BRD4 ในเซลล์ NRK-52E อย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งได้รับการบรรเทาโดยการรักษา JQ1 หรือการล้มลงของ BRD4 นอกจากนี้ยังพบแนวโน้มเดียวกันในเนื้อเยื่อไตของหนู (รูปที่ 6B) ผลลัพธ์เหล่านี้แสดงให้เห็นว่า Cd ช่วยเพิ่มการผูกมัดของ BRD4 กับ RelA-K310ac ซึ่งส่งเสริมการถอดรหัสที่ขึ้นกับ NF-κB และต่อมามีส่วนช่วยในการตอบสนองต่อการอักเสบที่เกิดจาก Cd

4. การอภิปราย

มีรายงานว่าซีดีเป็นสาเหตุของการอักเสบเนื่องจากมีความเป็นพิษสูง ในขณะที่กลไกที่แน่นอนยังไม่เป็นที่เข้าใจอย่างถ่องแท้ (Arab-Nozari et al., 2020; Ghosh, 2018) การศึกษาของเรายืนยันว่า Cd กระตุ้นการแสดงออกของไซโตไคน์ที่มีการอักเสบในเซลล์ไตของหนู และพบว่า BRD4 ซึ่งเป็นเป้าหมายของอีพีเจเนติกส์ที่มีหน้าที่สำคัญในกระบวนการต่างๆ ของเซลล์ซึ่งรวมถึงการอักเสบ มีส่วนทำให้เกิดการตอบสนองต่อการอักเสบที่กระตุ้นด้วยซีดี การทดลองเพิ่มเติมระบุว่า BRD4 เกี่ยวข้องกับการกระตุ้นเส้นทางการส่งสัญญาณ NF-κB ที่ส่งเสริม Cd นอกจากนี้ Cd ยังเพิ่มระดับ acetylation ของ RelA K310 ซึ่งจะเป็นการเพิ่ม BRD4 ที่มีผลผูกพันกับ acetylated NF-κB RelA เพื่อส่งเสริมการถอดรหัส cytokines อักเสบที่ขึ้นกับ NF-κB

การอักเสบเป็นหนึ่งในกลไกการป้องกันตามธรรมชาติต่อสารเคมีจากภายนอก ในขณะที่การตอบสนองการอักเสบที่ไม่สามารถควบคุมได้และไม่เหมาะสมสามารถทำลายเนื้อเยื่อปกติและทำให้เกิดโรคภูมิต้านตนเองได้ (Jian et al., 2018) ตัวบ่งชี้ทางชีววิทยาของการอักเสบที่เพิ่มขึ้นของ Cd มักเกี่ยวข้องกับโรคต่างๆ การศึกษาพบว่าการอักเสบที่เกิดจาก Cd เกี่ยวข้องกับการเกิดหลอดเลือด (Tinkov et al., 2018) นอกจากนี้ Cd ยังส่งเสริมการแสดงออกของไซโตไคน์อักเสบซึ่งมีส่วนทำให้ปอดและเนื้อเยื่ออัณฑะเสียหายและก่อให้เกิดพิษต่อตับ (Koopsamy Naidoo et al., 2019; Arafa et al., 2014) ผลกระทบที่เป็นอันตรายเหล่านี้สอดคล้องกับผลลัพธ์ของเรา ซึ่งการตอบสนองต่อการอักเสบเกี่ยวข้องกับการบาดเจ็บที่ไตที่เกิดจากซีดี การวิจัยที่เพิ่มขึ้นได้มุ่งเน้นไปที่กลไกการเกิดการอักเสบที่เกิดจากซีดี ในฐานะสมาชิกครอบครัวโปรตีน BET ที่ได้รับการศึกษามาเป็นอย่างดี BRD4 มีบทบาทสำคัญในกระบวนการทางชีววิทยาหลายอย่างรวมถึงการอักเสบ ที่นี่ JQ1 (ตัวยับยั้ง BRD4) และ siRNA ถูกใช้เพื่อควบคุมกิจกรรมการทำงานของ BRD4 และพบว่าการยับยั้ง BRD4 ลดการถอดรหัสของไซโตไคน์อักเสบที่เกิดจาก Cd ในไตของหนู ซึ่งบ่งชี้ว่า BRD4 มีส่วนร่วมในการตอบสนองต่อการอักเสบที่กระตุ้นด้วย Cd . เป็นที่เชื่อกันโดยทั่วไปว่าการไม่ควบคุมการแสดงออกของ BRD4 เป็นเหตุการณ์สำคัญในการตอบสนองต่อการอักเสบ ในการบาดเจ็บไขสันหลัง ภาวะหัวใจโตมากเกินไปทางพยาธิวิทยา และโรคที่เกี่ยวข้องกับการอักเสบอื่นๆ การแสดงออกของ BRD4 ที่ไม่เป็นระเบียบมีส่วนทำให้เกิดการอักเสบของไซโตไคน์ (Zhu et al., 2020; Marazzi et al., 2018; Ren et al., 2019) อย่างไรก็ตาม Cd ไม่มีผลต่อระดับการแสดงออกของ BRD4 ภายใต้สภาวะการทดลองในปัจจุบัน ซึ่งทำให้เราต้องพิจารณาว่า BRD4 เป็นตัวกลางในการตอบสนองต่อการอักเสบที่เกิดจาก Cd ผ่านวิถีทางอื่นๆ หรือไม่

NF-κBเป็นปัจจัยกำกับดูแลที่สำคัญในกระบวนการอักเสบและมีหน้าที่ควบคุมการแสดงออกของผู้ไกล่เกลี่ยการอักเสบจำนวนมาก (Lawrence, 2009) มีรายงานการศึกษาว่า BRD4 มีส่วนเกี่ยวข้องในการควบคุมเส้นทางการส่งสัญญาณ NF-κB หวางและคณะ (2017) แนะนำว่า BRD4 ควบคุมการเปิดใช้งาน NF-κB ที่เป็นสื่อกลางของ IKK ผ่านเส้นทาง p38 และ JNK–MAPK วังและคณะ (2019a) พบว่า BRD4 knockdown หรือการรักษา JQ1 ปิดกั้น lipopolysaccharide (LPS) - เปิดใช้งานเส้นทางการส่งสัญญาณ NF-κBใน microglia Meng และคณะ (2014) แสดงให้เห็นว่าการรักษา JQ1 ปิดกั้นการแสดงออกของไซโตไคน์ที่อักเสบโดยการยับยั้งการกระตุ้น NF-κBในเซลล์ RAW 264.7 ที่บำบัดด้วย LPS รายงานเหล่านี้ระบุว่า BRD4 เป็นตัวกลางในการกระตุ้น NF-κB ในรูปแบบการอักเสบจำนวนมากในขณะที่การยับยั้ง BRD4 เป็นวิธีการรักษาที่มีประสิทธิภาพในการต่อต้านการอักเสบ ในการศึกษาในปัจจุบัน การยับยั้ง BRD4 ขัดขวางการโยกย้ายนิวเคลียร์ของ NF-κB ในเนื้อเยื่อไตของหนูที่สัมผัส Cd และเซลล์ NRK-52E ซึ่งบ่งชี้ว่า BRD4 จะเป็นสื่อกลางในเส้นทางการส่งสัญญาณ NF-κB ที่เปิดใช้งาน Cd

โดยปกติ หลังจากที่ NF-κB ถูกกระตุ้นโดยสิ่งเร้าต่างๆ และเคลื่อนเข้าสู่นิวเคลียส BRD4 จะจับกับ acetylated NF-κB RelA ที่ไซต์ K310 ซึ่งเพิ่มความเสถียรและกิจกรรมการถอดรหัสในนิวเคลียส (Hajmirza et al., 2018) ดังนั้นระดับอะซิติเลชันของ RelA K310 จึงส่งผลต่อการทำงานของกฎระเบียบของ BRD4 ต่อการตอบสนองต่อการอักเสบ ในเซลล์ประสาทของฮิปโปแคมปัส deacetylase Sirt1 ไกล่เกลี่ย RelA K310 deacetylation เพื่อควบคุมการแสดงออกของ BACE1 ซึ่งมีส่วนช่วยในการผลิตเซลล์ประสาท amyloid (Flores-Leon et al., 2019) ในเซลล์ไกลโอบลาสโตมา การรักษาด้วยโฟโตไดนามิกจะเน้นที่การควบคุม deacetylase Sirt1 และกระตุ้น acetylase Ep300 ซึ่งเพิ่มระดับ RelA-K310ac และนำไปสู่การผลิตไนตริกออกไซด์เพื่อการอยู่รอดที่เพิ่มขึ้น (Fahey et al., 2019) การศึกษาของเราพบว่า Cd ส่งเสริมระดับ acetylation ของ RelA K310 โดยการเพิ่มการแสดงออกของ Ep300 และลดการแสดงออกของ Sirt1 ซึ่งบ่งชี้ว่า Cd ส่งผลต่อฟังก์ชันควบคุม BRD4 โดยการเพิ่มระดับ acetylation ของ RelA K310

โดยเฉพาะอย่างยิ่ง ผลลัพธ์ของเราแสดงให้เห็นว่าการรักษาด้วย JQ1 มีประสิทธิภาพมากกว่าการล้มลงของ BRD4 ในการบรรเทาการตอบสนองต่อการอักเสบที่เกิดจาก Cd JQ1 มีความสัมพันธ์ในการจับกับ BRD4 สูง และสามารถปิดกั้น BRD4 ที่เกาะกับโครโมโซมได้เกือบทั้งหมด ในขณะที่ siBRD4 สามารถรบกวนการแสดงออกของโปรตีน BRD4 เพื่อลดการผูกมัด BRD4 กับตำแหน่งเป้าหมาย ซึ่งแนะนำว่า BRD4 จะเป็นสื่อกลางในการตอบสนองต่อการอักเสบที่เกิดจาก Cd อาจขึ้นอยู่กับ จับกับ acetylated NF-κB RelA การศึกษาล่าสุดได้แสดงให้เห็นกลไกการกำกับดูแลที่คล้ายคลึงกัน: หลังจากการโยกย้ายและการเปิดใช้งานนิวเคลียร์ NF-κB แล้ว BRD4 มีปฏิสัมพันธ์กับ acetylated RelA เพื่อกระตุ้นการกระตุ้นการถอดรหัสของ NF-κB (Huang et al., 2009) RelA–BRD4 ได้รับคัดเลือกให้เป็น NF-κB โปรโมเตอร์เป้าหมายในสภาวะการกระตุ้นการอักเสบต่างๆ ในขณะที่การรักษา JQ1 กระทำโดยการป้องกันไม่ให้ BRD4 จับกับ acetylated NF-κB RelA ซึ่งจะช่วยลดกิจกรรมการถอดรหัสของ NF-κB (Zou et al., 2014) ผลลัพธ์ของเราแสดงให้เห็นว่าการยับยั้ง BRD4 บล็อกการโต้ตอบที่เสริม Cd ระหว่าง BRD4 และ RelA-K310ac ในไตของหนู ซึ่งสนับสนุนผลลัพธ์ข้างต้นของเราที่ยับยั้ง BRD4 ยับยั้งกิจกรรมการถอดรหัสที่เกิดจาก Cd ของ NF-κBซึ่งบ่งชี้ว่า Cd ช่วยเพิ่ม BRD4 ที่มีผลผูกพันกับ acetylated NF-κB RelA เพื่อเพิ่มการถอดรหัสของไซโตไคน์ที่อักเสบ

โดยสรุปการศึกษาของเราเปิดเผยกลไกการกำกับดูแลของ BRD4 ในการตอบสนองต่อการอักเสบที่เกิดจาก Cd ในไตของหนู: (1) BRD4 ไกล่เกลี่ยการโยกย้ายและการกระตุ้นนิวเคลียร์ NF-κBที่เกิดจาก Cd (2) Cd เพิ่มระดับอะซิติเลชัน RelA K310 และเพิ่มการผูกมัด BRD4 กับ acetylated NF-κB RelA ซึ่งส่งเสริมการถอดรหัสไซโตไคน์อักเสบที่ขึ้นกับ NF-κB นอกจากนี้ การยับยั้ง BRD4 ช่วยลดระดับไซโตไคน์ที่เกิดจากการอักเสบของ Cd ได้อย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งบ่งชี้ว่า BRD4 ที่เป็นเป้าหมายมีศักยภาพที่จะพัฒนาเป็นวิธีการที่มีประสิทธิภาพในการรักษาโรคที่มีการอักเสบ ซึ่งรวมถึงโรคไตอักเสบที่เกิดจาก Cd

คำแถลงผลงานการประพันธ์ CRediT

Zhongguo Gong: แนวความคิด, วิธีการ, การสร้างภาพ, การวิเคราะห์อย่างเป็นทางการ, การตรวจสอบ, การสืบสวน, การวิเคราะห์อย่างเป็นทางการ, การจัดการข้อมูล, การเขียน – ร่างต้นฉบับ Gang Liu: แนวความคิด, วิธีการ, การสร้างภาพ, การจัดการข้อมูล, การเขียน – ร่างต้นฉบับ, การบริหารโครงการ, การจัดหาเงินทุน Wenjing Liu: ซอฟต์แวร์ ทรัพยากร วิธีการ การวิเคราะห์อย่างเป็นทางการ Hui Zou: การบริหารโครงการ, การกำกับดูแล. เพลงรุ่ยหลง: ซอฟต์แวร์ การวิเคราะห์อย่างเป็นทางการ การกำกับดูแล Hongyan Zhao: ซอฟต์แวร์ การวิเคราะห์อย่างเป็นทางการ การกำกับดูแล หยาน หยวน: การกำกับดูแล Jianhong Gu: การกำกับดูแล Jianchun Bian: การจัดหาเงินทุน การกำกับดูแล Jiaqiao Zhu: การเขียน – ทบทวนและแก้ไข, ควบคุมดูแล. Zongping Liu: การเขียน – ทบทวนและแก้ไข, การกำกับดูแล,

การบริหารโครงการ การจัดหาเงินทุน การวางแนวความคิด

การประกาศผลประโยชน์ที่แข่งขันกัน

ผู้เขียนประกาศว่าพวกเขาไม่มีผลประโยชน์ทางการเงินที่เป็นคู่แข่งกันหรือความสัมพันธ์ส่วนตัวที่อาจดูเหมือนจะมีอิทธิพลต่องานที่รายงานในบทความนี้

การรับทราบ

งานนี้ได้รับการสนับสนุนโดย National Natural Science Foundation of China (Nos. 31872533, 31902329, 32072933), the National Key Research and Development Program of China (No. 2016YFD0501208) และโครงการ Priority Academic Program Development of Jiangsu Higher Education สถาบัน (PADP) ต้นฉบับได้รับการแก้ไขสำหรับภาษาอังกฤษ ไวยากรณ์ เครื่องหมายวรรคตอน การสะกดคำ และรูปแบบโดยรวมโดยบรรณาธิการที่พูดภาษาอังกฤษเป็นภาษาแม่ที่มีคุณสมบัติสูงของ ELIXIGEN อย่างน้อยหนึ่งคน

อ้างอิง

Almeer, RS, AlBasher, GI, Alarifi, S. , Alkahtani, S. , Ali, D. , Abdel Moneim, AE, 2019 นมผึ้งช่วยลดความเป็นพิษต่อไตที่เกิดจากแคดเมียมในหนูเพศผู้ วิทย์. ตัวแทน 9 (1), 5825.

Arab-Nozari, M. , Mohammadi, E. , Shokrzadeh, M. , Ahangar, N. , Amiri, FT, Shaki, F. , 2020 การสัมผัสกับแคดเมียมและฟลูออไรด์ในระดับที่ไม่เป็นพิษทำให้เกิดพิษต่อตับในหนูผ่านทาง ก่อให้เกิดความเสียหายจากปฏิกิริยาออกซิเดชันของไมโตคอนเดรีย อะพอพโทซิส และวิถีของ NF-kB สิ่งแวดล้อม วิทย์. มลพิษ ความละเอียด อินเตอร์ 27 (19), 24048–24058.

Arafa, MH, Mohammad, NS, Atteia, HH, 2014 ผงเมล็ด Fenugreek ช่วยลดความเสียหายของอัณฑะที่เกิดจากแคดเมียมและความเป็นพิษต่อตับในหนูเพศผู้ ประสบการณ์ ท็อกซิคอล ปทุม. 66 (7), 293–300.

Chatterjee, N. , Bohmann, D. , 2018 BET-ting บน Nrf2: การส่งสัญญาณ Nrf2 สามารถมีอิทธิพลต่อกิจกรรมการรักษาของสารยับยั้งโปรตีน BET ได้อย่างไร ชีวะ 40 (5), 1800007.

Chi, Q. , Zhang, Q. , Lu, Y. , Zhang, Y. , Xu, S. , Li, S. , 2021. บทบาทของ selenoprotein S ในการสร้างกับดักนิวโทรฟิลที่ขึ้นอยู่กับสายพันธุ์ของออกซิเจนปฏิกิริยาที่เกิดจากซีลีเนียม- หลอดเลือดแดงไม่เพียงพอ รีดอกซ์ ไบโอล 44, 102003 Dey, A., Yang, W., Gegonne, A., Nishiyama, A., Pan, R., Yagi, R., Grinberg, A.,Finkelman, FD, Pfeifer, K., Zhu, J. ., Singer, D. , Zhu, J. , Ozato, K. , 2019 BRD4 ชี้นำการพัฒนาเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดและปรับการตอบสนองต่อการอักเสบของมาโครฟาจ EMBO จ. 38 (7)

Fagerberg, B. เกิด, Y. , Barregard, L. , Salsten, G. , Forsgard, N. , Hedblad, B. , Persson, M. , Engstrm, G. , 2017. การได้รับแคดเมียมสัมพันธ์กับตัวรับการกระตุ้น urokinase plasminogen activator ที่ละลายน้ำได้ ซึ่งเป็นเครื่องหมายการหมุนเวียนของการอักเสบและโรคหัวใจและหลอดเลือดในอนาคต สิ่งแวดล้อม ความละเอียด 152, 185– 191.

Fahey, JM, Korytowski, W. , Girotti, AW, 2019 เหตุการณ์การส่งสัญญาณต้นน้ำนำไปสู่การผลิตที่เพิ่มขึ้นของไนตริกออกไซด์ที่รอดชีวิตได้ในเซลล์ glioblastoma ที่ท้าทายด้วยแสง ฟรี Radic ไบโอล. เมดิ. 137, 37–45.

Fernando, TD, Jayawardena, BM, Mathota Arachchige, YLN, 2020. การเปลี่ยนแปลงของสารเมตาโบไลต์และโลหะหนักที่แตกต่างกันใน Oryza sativa L. ที่เกี่ยวข้องกับโรคไตเรื้อรังที่ไม่ทราบสาเหตุในศรีลังกา เคมีสเฟียร์ 247, 125836.

Flores-Leon, M. ,Perez-Dominguez, M. , Gonzalez-Barrios, R. , Arias, C. , 2019 การสูญเสีย NAD( บวก ) ที่เกิดจากกรด Palmitic สัมพันธ์กับฟังก์ชันที่ลดลงของ SIRT1 และการแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของ BACE1 ในเซลล์ประสาทฮิปโปแคมปัส นิวโรเคม. ความละเอียด 44 (7), 1745– 1754.

Ghosh, KNI, 2018. การรักษาด้วยแคดเมียมทำให้เกิด echinococcosis, ความเสียหายของ DNA, การอักเสบ, และการตายของเซลล์ในเนื้อเยื่อหัวใจของหนูเผือก Wistar สิ่งแวดล้อม ท็อกซิคอล ฟา. 59, 43–52. การอักเสบและมะเร็ง ไบโอเมดิซีน 6 (1), 16.

Horiguchi, H. , Oguma, E. , 2016 การได้รับแคดเมียมอย่างเฉียบพลันทำให้เกิดนิวโทรฟิเลียเป็นเวลานานพร้อมกับการเหนี่ยวนำปัจจัยกระตุ้นอาณานิคมแกรนูโลไซต์ในตับของหนูที่ล่าช้า โค้ง. ท็อกซิคอล 90 (12), 3005–3015.

Hossein-Khannazer, N. , Azizi, G. , Eslami, S. , Alhassan Mohammed, H. , Fayyaz, F. ,Hosseinzadeh, R. , Usman, AB, Kamali, AN, Mohammadi, H. , Jadidi-Niaragh, F. , Dehghanifard, E. , Noorisepehr, M. , 2020. ผลของการสัมผัสแคดเมียมในการเหนี่ยวนำให้เกิดการอักเสบ อิมมูโนฟาร์มาคอล อิมมูโนท็อกซิคอล 42 (1), 1–8.