วิธีการตรวจจับการไหลเวียนของ EXOSOMAL PD-L1 หมุนเวียน

ติดต่อ:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

ยังขาดวิธีการที่ได้รับการยอมรับและเป็นกระแสหลักในการตรวจจับการไหลเวียนของ EXOSOMAL PD-L1 วิธีการตรวจจับ exosome แบบดั้งเดิมเช่นการทดสอบอิมมูโนซอร์เบนต์ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ (ELISA) และการวิเคราะห์การไหลสามารถใช้เพื่อตรวจจับ PD-L1 ในการไหลเวียนของ exosomes และปัจจุบัน ELISA เป็นวิธีการที่ใช้กันมากที่สุด วิธี ELISA สามารถตรวจจับเนื้อหาของ PD-L1 ใน exosomes หมุนเวียนเชิงปริมาณและใช้งานง่าย Flow cytometry สามารถใช้เพื่อตรวจจับ EXOSOMAL PD-L1 ที่หมุนเวียนในตัวอย่างขนาดใหญ่ในเชิงปริมาณ แต่ต้องใช้อุปกรณ์ตรวจจับสูง ด้วยการวิจัยเชิงลึกเกี่ยวกับ exosomes วิธีการตรวจจับโปรตีน exosomal และกรดนิวคลีอิกยังได้รับการเสริมและพัฒนาและวิธีการใหม่ ๆ บางอย่างได้รับการแนะนําในด้านการตรวจจับ PD-L1 ในการไหลเวียนของ exosomes (รูป)

การตรวจจับของหมุน เวียนexosomalพีดี-แอล1

1. PCR ดิจิทัล

เนื่องจากกรดนิวคลีอิกจํานวนเล็กน้อยที่มีอยู่ใน exosomes จึงเป็นเรื่องยากสําหรับวิธีการตรวจจับแบบเดิมในการตรวจจับหมายเลขสําเนาของยีนได้อย่างแม่นยํา เทคโนโลยี Digital PCR เป็นวิธีการตรวจจับกรดนิวคลีอิกที่มีความไวสูงมากและการหาปริมาณที่แน่นอน ความไวของมันสามารถเข้าถึงระดับของโมเลกุลกรดนิวคลีอิกเดียวดังนั้นจึงมีข้อดีในการตรวจจับปริมาณกรดนิวคลีอิกของ exosomes นักวิจัยใช้เทคโนโลยี DIGITAL PCR เพื่อวิเคราะห์จํานวนสําเนา PD-L1 mRNA ในพลาสมา exosomes ของผู้ป่วยมะเร็งผิวหนังและมะเร็งปอดที่ไม่ใช่เซลล์ขนาดเล็กอย่างแม่นยํา และเปิดเผยความสัมพันธ์ระหว่างหมายเลขสําเนา mRNA pd-L1 exosomal PD-L1 ในพลาสมาและความสัมพันธ์ต่อต้าน PD1 ระหว่างผลการรักษา การนําเทคโนโลยี PCR แบบดิจิทัลมาใช้ได้ปรับปรุงความสามารถในการตรวจจับของ exosomal PD-L1 mRNA อย่างมีนัยสําคัญ ซึ่งมีความสําคัญอย่างยิ่งต่อการวิจัย exosomal PD-L1 อย่างไรก็ตามอาจมีความไม่สอดคล้องกันระหว่างเนื้อหาของ exosomal PD-L1 mRNA และการแสดงออกของโปรตีน PD-L1 ดังนั้นการตรวจหา exosomal PD-L1 mRNA เพียงอย่างเดียวอาจมีข้อบกพร่องบางอย่างซึ่งจําเป็นต้องมีการวิจัยเพิ่มเติมและชี้แจง

ประโยชน์ต้านมะเร็งทะเลทราย cistanche จากสารสกัดจาก cistanche

2. เอลิซา

ELISA เป็นวิธีการวิเคราะห์ทางภูมิคุ้มกันแบบดั้งเดิมซึ่งมักใช้ในการตรวจจับโปรตีนโมเลกุลขนาดเล็กในพลาสมาหรือสื่อวัฒนธรรม มีความไวสูงและสามารถวิเคราะห์เชิงปริมาณได้ นอกจากนี้ ELISA ยังสามารถใช้ในการตรวจจับโปรตีน EXOSOMAL PD-L1 และสามารถตรวจจับตัวอย่างจํานวนมากในเชิงปริมาณได้ ชุดตรวจจับโปรตีน PD-L1 ตามหลักการของวิธี ELISA ยังถูกนําไปใช้กับการตรวจจับเชิงปริมาณของโปรตีน PD-L1 exosomal ในพลาสมา Chen et al. สร้างระบบตรวจจับโปรตีน PD-L1 exosomal ตามหลักการของ ELISA ซึ่งใช้สําหรับการตรวจหาโปรตีน EXOSOMAL PD-L1 ที่ได้จากสื่อการเพาะเลี้ยงเซลล์หรือพลาสมา ช่วงการตรวจจับเชิงเส้นคือ 0.2-12.0 ng/mL ELISA เป็นวิธีที่ดีในการตรวจจับโปรตีน EXOSOMAL PD-L1 ซึ่งง่ายต่อการตรวจจับเชิงปริมาณและมีความสามารถในการทําซ้ําได้ดี อย่างไรก็ตามเนื่องจากมีโปรตีน PD-L1 ฟรีในพลาสมามันจะรบกวนความแม่นยําของมัน ดังนั้นวิธีนี้จะตรวจจับการไหลเวียน ความไวและความจําเพาะของโปรตีน PD-L1 exosomal ยังคงต้องมีการสํารวจเพิ่มเติม

รากเฮอร์บาซิตสแตนเช่: ต้านมะเร็ง

3. วิธีการวิเคราะห์การไหล

Flow cytometry มักใช้ในการพิมพ์และนับเซลล์หรืออนุภาคชีวภาพอื่น ๆ ที่แขวนลอยอยู่ในของเหลวดังนั้นวิธีนี้จึงถูกนํามาใช้ในการตรวจจับและการนับ exosome THEODORAKIS et al. ใช้โครมาโตกราฟีเป็นครั้งแรกเพื่อแยก exosomes ในพลาสมาของผู้ป่วยมะเร็งศีรษะและลําคอในขั้นต้น จากนั้นใช้การวิเคราะห์การไหลเพื่อตรวจหาและนับ exosomes PD-L1-positive การแสดงออกของโปรตีน PD-L1 แสดงเป็นความเข้มของการเรืองแสง ผลการวิจัยแสดงให้เห็นว่าวิธีการนี้มีความสามารถในการทําซ้ําที่ดีในการตรวจจับโปรตีน PD-L1 exosomal และความผันแปรภายในตัวบุคคลคือ 7% เมื่อทําการทดสอบแบบขนานหลายครั้งในตัวอย่างผู้ป่วยรายเดียว ในเวลาเดียวกันเพื่อตรวจสอบความถูกต้องของวิธีการนักวิจัยใช้การวิเคราะห์การเรืองแสง confocal เป็นวิธีอ้างอิงสําหรับการตรวจหาโปรตีน PD-L1 exosomal ตัวอย่างสามตัวอย่างได้รับการทดสอบแบบขนานและเปรียบเทียบผลลัพธ์และพบว่าผลลัพธ์ของการวิเคราะห์การไหล cytometry และการเรืองแสงแบบ confocal มีความสอดคล้องกันสูงซึ่งบ่งชี้ว่า flow cytometry เป็นวิธีที่แม่นยําสําหรับการวิเคราะห์เชิงปริมาณของ exosomal PD-L1 นอกจากนี้ LUX et al. ยังประสบความสําเร็จในการตรวจพบการแสดงออกของโปรตีน exosomal PD-L1 และ c-Met ในซีรั่มของผู้ป่วยมะเร็งตับอ่อนโดย flow cytometry แต่ประสิทธิภาพของวิธีการตรวจจับจะต้องมีการศึกษาเพิ่มเติม ในปัจจุบันยังมีการเปิดตัวเครื่องวิเคราะห์การไหลที่ใช้เป็นพิเศษสําหรับการตรวจจับ exosome เช่นเครื่องวิเคราะห์การไหลของนาโนที่มีความไวสูง Apogee ซึ่งเหมาะสําหรับการตรวจจับโปรตีน exosome มากกว่าเครื่องวิเคราะห์การไหลแบบเดิม

ประโยชน์ของอาหารเสริมสารสกัดจาก cistanche tubulosa: ต่อต้านเนื้องอกและมะเร็ง

4. เทคโนโลยีการกระเจิงรามันที่ปรับปรุงพื้นผิว

การกระเจิงรามันที่ปรับปรุงพื้นผิว (SERS) เป็นเทคนิคสเปกโทรสโกปีลายนิ้วมือที่มีความไวสูงซึ่งใช้กันอย่างแพร่หลายในด้านชีวการแพทย์ ปัจจุบันนักวิชาการได้ใช้เทคโนโลยี SERS เพื่อตรวจหาโปรตีน PD-L1 exosomal นักวิจัยใช้ลูกปัดแม่เหล็กดัดแปลง TiO2 เป็นครั้งแรกเพื่อดูดซับ exosomes ที่ไม่เฉพาะเจาะจงในพลาสมา จากนั้นใช้โพรบ SERS ที่เชื่อมโยงกับแอนติบอดี PD-L1 เพื่อปรับเปลี่ยนอนุภาคนาโนทองคํา แล้วบ่มตัวอย่าง exosome ด้วยอนุภาคนาโนทองคํา มันก่อตัวเป็นโครงสร้างที่ซับซ้อนของอนุภาคนาโนลูกปัด - exosome - ทองแม่เหล็กและในที่สุดก็ใช้สนามแม่เหล็กเพื่อเพิ่มคุณค่าและแยกคอมเพล็กซ์จากนั้นวางบนเลเซอร์คอนโฟคอลรามานสเปกโตรมิเตอร์เพื่อตรวจจับเพื่อให้เกิดการตรวจจับ exosomes เชิงบวก PD-L1 การตรวจจับเนื้อหาร่างกาย วิธีนี้มีความไวในการตรวจจับสูงและขีด จํากัด การตรวจจับต่ําสุดสามารถเข้าถึงพลาสมา exosome / μL 1 PD-L1 + 1 ตัว นอกจากนี้นักวิจัยยังใช้วิธีนี้เพื่อตรวจจับกลุ่มตัวอย่างที่มีความเข้มข้นต่างกัน ผลการวิจัยพบว่าความเข้มของ SERS มีความสัมพันธ์เชิงเส้นกับลอการิทึมของความเข้มข้นของตัวอย่าง exosome ซึ่งบ่งชี้ว่าวิธีการตรวจจับมีความเสถียรที่ดีและสามารถใช้โดยตรงในพลาสมา ตรวจจับ exosomes โดยไม่ต้องมีขั้นตอนการแยก exosome เพิ่มเติม ในปัจจุบันมีการศึกษาน้อยเกี่ยวกับการประยุกต์ใช้เทคโนโลยี SERS โดยตรงกับการตรวจหาโปรตีน exosomal PD-L1 แต่การวิจัยเกี่ยวกับการใช้เทคโนโลยี SERS กับการตรวจหา exosomes อื่น ๆ ได้ดําเนินการแล้วซึ่งมีการอ้างอิงที่สําคัญสําหรับการตรวจจับค่าโปรตีน EXOSOMAL PD-L1

สถานการณ์การเติบโตของ Cistanche ที่แห้งแล้ง

5. วิธีโฮล์มส์-เอ็กโซพีดี-L1

วิธี HOLMES-ExoPD-L1 เป็นวิธีการตรวจจับแบบใหม่ของโปรตีน PD-L1 exosomal ในวิธีนี้ MJ5C aptamer ใหม่ที่กําหนดเป้าหมายโปรตีน PD-L1 ได้รับการออกแบบซึ่งสามารถจับโปรตีน PD-L1 บนเยื่อหุ้มเซลล์ exosome ได้อย่างมีประสิทธิภาพและไม่รบกวนโดยไกลโคซิเลชั่นโปรตีน PD-L1 ในวิธีนี้ aptamer MJ5C และ exosomes ที่มีฉลากเรืองแสงถูกฝังร่วมกันครั้งแรกในเส้นเลือดฝอยบาง ๆ เพื่อผูกติดกันและเลเซอร์อินฟราเรดถูกโฟกัสไปที่เส้นเลือดฝอยบาง ๆ เพื่อสร้างการไล่ระดับอุณหภูมิระดับไมครอน อัตราเทอร์โมโฟรีซิสของคอมเพล็กซ์ aptamer MJ5C และ exosomal MJ5C aptamer ฟรีนั้นแตกต่างกันอย่างมีนัยสําคัญและการสูญเสียความร้อนของ aptamer ฟรีนั้นเร็วกว่าคอมเพล็กซ์ exosome-aptamer แยกออกจากกัน ดังนั้นภายใต้การกระทําของแสงกระตุ้นเนื้อหาของโปรตีน PD-L1 exosomal สามารถกําหนดได้โดยการตรวจจับความเข้มของการเรืองแสงของ aptamers ที่ติดฉลากเรืองแสง วิธีนี้มีความไวสูงและขีด จํากัด การตรวจจับ 17.6 pg / mL นอกจากนี้ยังมีข้อดีของปริมาณตัวอย่างที่น้อยลงและเวลาในการตรวจจับที่สั้น มันเป็นวิธีการดั้งเดิมอย่างมากสําหรับการตรวจจับโปรตีน PD-L1 exosomal ซึ่งเป็นสิ่งสําคัญมากสําหรับการพัฒนาใหม่ วิธีการตรวจจับโปรตีน PD-L1 exosomal มีค่าให้ความกระจ่าง

ต่อต้านเนื้องอก: อาหารเสริม cistanche

Exosomal PD-L1 มีแนวโน้มการใช้งานในวงกว้างในด้านภูมิคุ้มกันบําบัดเนื้องอกมะเร็งและได้กลายเป็นหนึ่งในฮอตสปอตในด้านการวิจัย exosome เมื่อเทียบกับการตรวจจับการแสดงออกของเนื้อเยื่อ PD-L1 การตรวจจับ exosomal PD-L1 ที่ไหลเวียนอยู่นั้นง่ายต่อการรับชิ้นงานทดสอบและดําเนินการตรวจจับแบบเรียลไทม์ในขณะที่หลีกเลี่ยงปัญหาความแตกต่างของเนื้อเยื่อที่เกิดจากการสุ่มตัวอย่างทางพยาธิวิทยา exosomal PD-L1 ยังนําไปสู่ภูมิคุ้มกันของเนื้องอก มันเป็นสาเหตุสําคัญของการหลบหนีและเกี่ยวข้องกับความก้าวหน้าของเนื้องอกมะเร็งและอาจกลายเป็นตัวบ่งชี้ที่สําคัญสําหรับการประเมินโรคและการทํานายการพยากรณ์โรค นอกจากนี้ ระดับ EXOSOMAL PD-L1 ในพลาสมายังคาดว่าจะใช้ในการคัดกรองผู้ป่วยที่เหมาะสมสําหรับการบําบัดด้วยภูมิคุ้มกันต่อต้าน PD-L1 และคาดการณ์การตอบสนองต่อการรักษา อย่างไรก็ตามยังขาดวิธีการที่ได้รับการยอมรับและมีประสิทธิภาพในการตรวจจับ exosomes PD-L1 ที่หมุนเวียนอยู่ มีความจําเป็นต้องสร้าง exosome หมุนเวียนในอุดมคติด้วยการแยกแบบง่ายหรือไม่มีเลยความต้องการตัวอย่างน้อยลงความไวสูงความสามารถในการทําซ้ําที่ดีและสัญญาณการตรวจจับที่อ่อนแอน้อยกว่า วิธีการสําหรับการตรวจหา PD-L1 ในร่างกาย วิธีการตรวจจับของ exosomal PD-L1 แบบหมุนเวียนยังคงต้องการการวิจัยเชิงลึกเพิ่มเติม แต่เชื่อกันว่าด้วยการพัฒนาและการใช้วิธีการตรวจจับใหม่ในอนาคตการไหลเวียนของ exosomal PD-L1 จะสามารถแนะนําการบําบัดด้วยภูมิคุ้มกันต่อต้าน PD1 ได้ดีขึ้นและใช้ในการวินิจฉัยและรักษาเนื้องอกมะเร็ง มีบทบาทสําคัญกว่า