การปราบปรามความเสียหายของไตที่เกี่ยวข้องกับ Inflammation หลังการปลูกถ่ายโดยใช้ PrC ใหม่-210 สารกำจัดอนุมูลอิสระในหนู

Torsten R. Goesch ¹, แนนซี่ เอ. วิลสัน², เหวยเฟิง เจิง², Bret M. Verhoven², เหวยเซียงจง²,มายา เอ็ม. คูมเบ กิตเตอร์³และวิลเลียม อี. ฟาห์ล^1,3,*

เชิงนามธรรม:

Allograftไตการปลูกถ่ายซึ่งกระตุ้นการปฏิเสธเซลล์และแอนติบอดีที่เป็นสื่อกลางของโฮสต์ไตเป็นตัวการสำคัญที่ทำให้ไตเสียหายระหว่างการปลูกถ่าย ในที่นี้ เราถามว่า PRC-210 จะระงับความเสียหายที่พบในการปลูกถ่ายไตแบบ allograft ได้หรือไม่ ไตหนูนอร์เวย์ (BN) สีน้ำตาลถูกผสมในแหล่งกำเนิด (สารละลาย UW) โดยมีหรือไม่มีการเติม PrC-210 30 มิลลิโมลาร์-210 และจากนั้นย้ายปลูกในหนูลูอิส (LEW) ทันที 20 ชั่วโมงต่อมา ไต BN ที่ปลูกถ่ายและพลาสมา LEWrat ถูกวิเคราะห์ไตจุลพยาธิวิทยา และระดับไต/ซีรัมของไซโตไคน์ที่เกี่ยวข้องกับการอักเสบหลายชนิด ถูกวัดเพื่อประเมินพยาธิสภาพของไตที่เกี่ยวข้องกับความไม่ตรงกันและ PrC-210ประสิทธิภาพในการป้องกัน ยี่สิบชั่วโมงหลังการปลูกถ่าย allograft: (i) ความเสียหายของท่อไตทางจุลกายวิภาคอย่างมีนัยสำคัญและการแทรกซึมของเซลล์ที่มีการอักเสบแบบโมโนนิวเคลียร์ถูกพบในไต allograft; (ii)ไตตัวชี้วัดการทำงาน (creatinine และ BUN) เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (iii) การเปลี่ยนแปลงที่สำคัญในไซโตไคน์ที่สำคัญ กล่าวคือ TIMP-1, TNF-alpha และ MIP-3A/CCL20 และระดับแคสเปสที่กระตุ้นการทำงานของไต ใน PRC-210-ไตที่ได้รับการบำบัดและหนูผู้รับ (i) ความเสียหายทางเนื้อเยื่อของไต (คะแนน Banff) และการแทรกซึมของนิวเคลียสโมโนนิวเคลียร์ลดลงจนถึงระดับพื้นหลังที่ไม่ได้รับการรักษา (ii) creatinine และ BUN ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ; และ (iii) แคสเปสที่ถูกกระตุ้นและการเปลี่ยนแปลงของไซโตไคน์ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ บางส่วนไปที่พื้นหลัง โดยสรุป ผลการวิจัยชี้ให้เห็นว่า PrC-210 สามารถให้การปกป้องอวัยวะที่ใช้ได้อย่างกว้างขวางสำหรับเงื่อนไขการปลูกถ่าย allograft; มันสามารถปกป้องไตที่ปลูกถ่ายในระหว่างและหลังจากทุกขั้นตอนของกระบวนการปลูกถ่าย—จากการบริจาคอวัยวะ ผ่านการขนส่ง การปลูกถ่ายใหม่ และการอักเสบหลังการผ่าตัด—เพื่อลดการปฏิเสธแบบเฉียบพลันและเรื้อรัง

Kอายwords: ไตallograft; ไตปฏิเสธ; ขาดเลือด

ติดต่อ:joanna.jia@wecistanche.com

มาค่าโสม cistanche

1. บทนำ

ภาวะไตวายระยะสุดท้ายทำให้เสียชีวิตมากกว่า 1.2 ล้านคนต่อปีทั่วโลก [1]ไตการปลูกถ่ายเป็นการรักษาที่ต้องการสำหรับผู้ป่วยโรคไตวายเรื้อรังระยะสุดท้าย ในแต่ละปีทั่วโลกมีการปลูกถ่ายไตมากกว่า 90000 ครั้ง

กระบวนการปลูกถ่ายเองทำให้เกิดการบาดเจ็บต่อเซลล์และอวัยวะที่สำคัญต่อไตซึ่งช่วยลดการอยู่รอดในระยะยาวของอวัยวะ การดูถูกไตหลักสามประการระหว่างการปลูกถ่าย allograft คือ (i) ความเสียหายที่เกิดจากออกซิเจนและไนโตรเจน (ROS และ RNS) ที่เกิดปฏิกิริยาระหว่างการขาดเลือดเย็น ('ห้องเย็น) [2], (ii) ความเสียหายที่เกิดจาก ROS เมื่อปลูกถ่าย ('การบาดเจ็บซ้ำ') [3] และ (iii) การอักเสบหลังการปลูกถ่าย allograft ซึ่งกระตุ้นการตอบสนองภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติและการปฏิเสธแอนติบอดี (ABMR) [4]

นิวโทรฟิลและมาโครฟาจจะย้ายไปยังการปลูกถ่ายที่เสียหายภายใน 6 ชั่วโมงของการกลับเป็นเลือด และกระตุ้นการสังเคราะห์คีโมไคน์ในเซลล์เดนไดรต์ที่อาศัยอยู่ ซึ่งจะกระตุ้น T lymphocytes และคัดเลือกเซลล์ภูมิคุ้มกันที่ปรับตัวได้ เมื่อเซลล์ภูมิคุ้มกันเหล่านี้แทรกซึมเข้าไปในเซลล์เยื่อบุผิวท่อใกล้เคียง พวกมันจะผลิตมัยอีโลเปอร์ออกซิเดสในนิวโทรฟิลและนิโคตินาไมด์ อะดีนีน ไดนิวคลีโอไทด์ ฟอสเฟต ออกซิเดส (NADPH) ในมาโครฟาจ ซึ่งทั้งสองอย่างนี้มีส่วนทำให้เกิดการผลิตอนุมูลอิสระในท้องถิ่น กระบวนการอักเสบเหล่านี้นำไปสู่การกระตุ้นทางเดินเสริมและการสร้างเซลล์ใหม่และการสลายในไตallograft [5].ABMR สามารถเกิดขึ้นได้จากผลของ alloantibody ที่ทำไว้ล่วงหน้าอย่างใดอย่างหนึ่งหรือทั้งสองอย่างต่อการปลูกถ่ายอวัยวะหรือผ่านการพัฒนา de novo ของแอนติบอดีจำเพาะผู้บริจาค (dnDSA) [5–7] เฉียบพลัน (นาที/วัน) เปลี่ยนเป็นเรื้อรัง (วัน/สัปดาห์) การตอบสนองการอักเสบภายในไต allograft ด้วยการผลิต ROS และไซโตไคน์ที่อักเสบอย่างต่อเนื่อง สามารถสร้างการตอบสนองที่รุนแรงและต่อเนื่องในตัวเองซึ่งเป็นสาเหตุไตความล้มเหลวของอวัยวะ

เพื่อให้เข้าใจถึงวิถีทางเซลล์และโมเลกุลที่เกี่ยวข้องกับการเกิดโรคของไตการอักเสบและการปฏิเสธของ allograft เราพัฒนาและแสดงลักษณะของแบบจำลองหนูที่จำลองเกณฑ์ทางคลินิกส่วนใหญ่ของการตอบสนองภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติ ABMR และการสูญเสียอวัยวะในไต [8] แบบจำลองนี้ใช้เพื่อประเมินกลยุทธ์การปลูกถ่ายหลังการปลูกถ่ายแบบใหม่ๆ จำนวนหนึ่ง

ทั้งสองแนวทางที่ได้รับการยอมรับในปัจจุบันในการลดการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันแบบเฉียบพลันและระยะยาวต่อไตallograft คือ: (i) เพื่อเพิ่มโอกาสในการค้นหาผู้บริจาคที่จับคู่กัน และ (ii) เพื่อกำจัดแอนติบอดีที่มีอยู่ก่อนหน้าที่ต่อต้านไตallograft โดยใช้โปรโตคอล desensitization [9,10]

ในงานที่อธิบายไว้ในต้นฉบับนี้ เราถามว่าแนวทางที่สามในการระงับความรุนแรงของการอักเสบเฉียบพลันและระยะยาวจะเป็นประโยชน์หรือไม่ เราจัดการ PRC-210 สารกำจัดอนุมูลอิสระที่ออกฤทธิ์ทันที ทั้งกับการปลูกถ่าย allograftไตและหนูผู้รับเพื่อตรวจสอบว่าสามารถระงับความเสียหาย ROS ที่เกี่ยวข้องกับการอักเสบได้หรือไม่ แม้ว่าแนวความคิดในการระงับ ROSin . ที่เกี่ยวข้องกับการอักเสบไตการปลูกถ่ายไม่ใช่เรื่องใหม่ การใช้ PRC-210 ROSscavenger ใหม่ที่ดำเนินการทันทีในที่นี้คือ ทั้งการขับออกทันทีและเรื้อรังและการยับยั้งการสร้างการอักเสบและการสร้างอนุมูลอิสระภายใน allograft ที่ปลูกใหม่ไตwould significantly enhance the existing strategies to suppress allograft rejection and would provide another pathway to reduce post-transplant kidney cell damage, and with it, suppress Delayed Graft Function to improve survival of the kidney allograft.PRC-210 is a new small-molecule, aminothiol, free radical scavenger [11]; it has no measurable nausea/emesis nor hypotension side effects [12]. Unlike traditional antioxidants that act indirectly over hours to days via NrF-2 to activate the expression of protective genes [13], PRC-210 directly scavenges ROS to confer 100% protection in seconds [11]. PRC- 210 was the most potent of the 13 commonly studied "antioxidants" screened in an assay that scored the ability of molecules to prevent x-ray-induced damage to naked DNA; the majority of the tested "antioxidants" showed no protection [14,15]. In a related essay, the addition of PrC-210 30 s before a 60 s pulse of •OH to naked DNA provided complete protection against the •OH insult that induced >ความเสียหายของ DNA 95 เปอร์เซ็นต์ในกลุ่มควบคุมที่ไม่มีการป้องกัน [16] ในการศึกษาการปลูกถ่ายไตของสัตว์ฟันแทะสองครั้งก่อนหน้านี้ [16,17] แสดงให้เห็นว่า PRC-210 ยับยั้งความเสียหายของไตที่เกิดจาก ROS ที่เกิดขึ้นระหว่าง (i) ห้องเย็น 30 ชั่วโมง [17] และ (ii) อาการบาดเจ็บที่การกลับเป็นไปของอวัยวะเทียม [16] ] จนถึงระดับเบื้องหลัง ซึ่งจะช่วยขจัดแหล่งที่มาที่สำคัญของการบาดเจ็บที่ไตที่ปลูกถ่ายได้สองแหล่ง นอกจากนี้ โมเลกุล PRC-210 ยังแสดงการปราบปรามการบาดเจ็บที่เกิดจากอนุมูลอิสระในการตั้งค่าอวัยวะอื่นๆ [15,18] ดังนั้นเราจึงตั้งสมมติฐานว่า PrC-210 ควรจะสามารถป้องกัน allograft จากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันที่สร้างขึ้นโดยกระบวนการปฏิเสธทั้งเซลล์และ (ii) ที่สร้างอนุมูลอิสระเป็นผลพลอยได้

เพื่อสำรวจสมมติฐานนี้ เราได้พัฒนาแบบจำลองหนูใหม่ซึ่งหลีกเลี่ยงการชักนำให้เกิดเหตุการณ์ขาดเลือดและการเกิดซ้ำที่สำคัญ และให้ PrC-210 ทั้งก่อนและหลังการปลูกถ่าย ไตของหนูแรทสีน้ำตาลถูกล้างด้วยสารละลาย UW ที่มี PrC-210 และย้ายปลูกถ่ายไปยังผู้รับหนูที่มีซินเจเนอิกลูอิสทันที เวลาขาดเลือดเย็นถูกกำจัดออกไปอย่างแท้จริง ทันทีที่ฝังต่อไปนี้และ 8 ชั่วโมงต่อไปไตรากฟันเทียม หนูผู้รับได้รับการฉีด PrC-210 อย่างเป็นระบบในปริมาณที่จะช่วยให้สามารถขับอนุมูลอิสระได้อย่างต่อเนื่องภายในการปลูกถ่ายไต. ไตที่ปลูกถ่ายและพลาสมาในเลือดจะถูกเก็บเกี่ยว 20 ชั่วโมงหลังการปลูกถ่ายเพื่อให้สามารถวัด PrC-210-ทั้งที่ได้รับ (i) การปราบปรามผลพลอยได้จากการอักเสบและ (ii)ไตการป้องกัน

มาค่าโสม cistanche

2. วัสดุและวิธีการ

2.1. สัตว์

ซื้อหนู Lewis และ BN เพศผู้ที่โตเต็มวัย (200–250 กรัม) จาก Envigo (Indian-napolis, IN, USA) มาเลี้ยงในสถานดูแลสัตว์ที่ University of Wisconsin ในแมดิสัน รัฐวิสคอนซิน สหรัฐอเมริกา ขั้นตอนทั้งหมดดำเนินการตามนโยบายการดูแลและการใช้สัตว์ของมหาวิทยาลัยวิสคอนซิน การบำรุงรักษาสุขภาพสัตว์ ซึ่งรวมถึงการเสียชีวิตของสัตว์ อุณหภูมิห้อง รอบแสง/ความมืด 12 ชั่วโมง และการทำความสะอาดกรง ท่ามกลางหน้าที่ด้านสุขอนามัยอื่นๆ ดำเนินการทุกวันโดยเจ้าหน้าที่ดูแลสัตว์ อาหารและน้ำมีให้โดยอิสระ งานวิจัยนี้ได้รับการอนุมัติในอนาคตโดยคณะแพทยศาสตร์และคณะกรรมการการดูแลและการใช้สัตว์ในสถาบันสาธารณสุขของมหาวิทยาลัยวิสคอนซิน (Animal Protocol #M005204) ทุกกลุ่มมีสัตว์ 4-6 ตัว

2.2. วัสดุ

การสังเคราะห์ PrC-210 HCl อะมิโนไทออล ซึ่งเป็นโมเลกุลพรีคลินิก ถูกอธิบายแยกกัน [19,20] PrC-210 ผลึก HCl (3-(เมทิลอะมิโน)-2-(เมทิล โมโนเมทิล)โพรเพน-1- ไทออล) ถูกเก็บไว้ภายใต้บรรยากาศไนโตรเจนที่ −20 ◦C และแม้กระทั่งกับกิจวัตรประจำวัน การละลาย การใช้ และการจัดเก็บซ้ำ ผลึก PrC-210 มีความคงตัวอย่างสมบูรณ์เป็นเวลานานกว่า 4 ปีโดยการวิเคราะห์แมสสเปกโตรเมทรี สารเคมีอื่นๆ ได้มาจาก Sigma Aldrich (St. Louis, MO, USA) UW Organ Preservation Solution ซื้อจาก Bridge to Life, Columbia, SC, USA

2.3. ขั้นตอนการผ่าตัดและทดลอง

ขั้นตอนการปลูกถ่ายที่ใช้ในการทดลองเหล่านี้แสดงไว้ในรูปที่ 1 ในหนูผู้บริจาค BN หลังจาก ligation สองครั้งของหลอดเลือดแดงใหญ่ ligation ของหลอดเลือดแดงไตและหลอดเลือดดำด้านขวา และส่วนการผ่าตัดของหลอดเลือดดำไตด้านซ้าย หนูด้านซ้ายไตถูกทำให้บริสุทธิ์ในแหล่งกำเนิดโดยใช้สารละลาย UW อุณหภูมิห้อง 5 มล. (ตลอดช่วง 15 วินาที) เพอร์ฟิวเสตคือสารละลาย UW เพียงอย่างเดียว (สำหรับกลุ่ม "0 ชั่วโมง" และ "20 ชั่วโมงไม่มีการบำบัด") หรือสารละลาย UW ซึ่งผลึก PrC-210 เพื่อให้ได้ 30 มิลลิโมลาร์ [17], ถูกเติม, ละลายทันที, และจากนั้น pH ถูกปรับเป็น pH ของสารละลาย UW เริ่มต้นที่ 7.4 โดยการเติม 0.0619 µL 5N NaOH ต่อไมโครโมลของ PrC-210 เกลือ HCL (FW: 220) ค่าครึ่งชีวิตของ PrC-210 ไทออล (รูปแบบออกฤทธิ์) อยู่ที่ประมาณ 3.5 ชั่วโมงในสารละลาย pH ทางสรีรวิทยา เช่น สารละลาย UW และเลือดมนุษย์ [14] ตามไปในแหล่งกำเนิด BN . ซ้ายไตถูกนำออกและเย็บโดย anastomosis ทู่ของหลอดเลือดและท่อไตไปยังตำแหน่งไตซ้ายที่ว่างของหนูผู้รับ LEW LEW . ที่ถูกต้องไตถูกผูกมัดและนำออกทันทีก่อนหน้านี้ ห้านาทีหลังจากการผ่าตัดปิดหนู LEW หนูได้รับยา PrC{{0}} อย่างเป็นระบบ (121 ug PrC-210 HCl ต่อน้ำหนักตัว 1 กรัม ซึ่งเท่ากับ 0.24 X ปริมาณสูงสุดที่ยอมรับได้) โดยการฉีดเข้าช่องท้อง ดังที่แสดงไว้ในแผนผังรูปที่ 1 หนูยังได้รับปริมาณการฉีดในช่องท้องของ PrC-210 (0.24 MTD) ที่บวก 4 ชั่วโมงและบวก 8 ชั่วโมงหลังการปลูกถ่าย หนูถูกทำการุณยฆาตที่บวก 20 ชั่วโมงหลังการย้ายปลูกและไตและเก็บตัวอย่างพลาสมาเพื่อวิเคราะห์ มีหนูอย่างน้อยห้าตัวในแต่ละกลุ่มการรักษา

2.4. การวัด BUN และ Creatinine ในเซรั่ม

วัด BUN และครีเอตินีนในตัวอย่างซีรัมโดยใช้ Catalyst One AnalyzerTechnology (IDEXX Laboratories, Westbrook, ME, USA)

2.5. การทดสอบภูมิคุ้มกันที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์

การทดสอบถูกดำเนินการตามที่อธิบายไว้ในโปรโตคอลชุดอุปกรณ์ ELISA (Rat TIMP-1, Cat# RTM- 100; Rat MIP3-A, Cat# DY540; Rat TNF-alpha, Cat# RTA{ {5}}; R&D Systems, มินนิอาโปลิส, มินนิโซตา, สหรัฐอเมริกา) การเจือจางของพลาสมาของหนูโดยเร็วถูกเติมลงในเพลตที่เคลือบไว้ล่วงหน้า บ่มเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่ 37 О C แอนติบอดีที่จำเพาะต่อไบโอตินเฉพาะสำหรับโปรตีนที่วิเคราะห์แล้วถูกเติมและบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 37 О C, ล้าง, คอนจูเกตจากอะวิดิน เติมฮอร์สแรดิชเปอร์ออกซิเดส ตามด้วยการล้างและการเติมซับสเตรต TMB ปฏิกิริยาถูกบ่มเป็นเวลา 10–30 นาที หยุดด้วยกรดซัลฟิวริก และอ่านที่ 450 นาโนเมตร

2.6. Proteome Profiler Rat Cytokine Array

การสอบวิเคราะห์ถูกดำเนินการอย่างสำคัญตามที่อธิบายไว้ในโปรโตคอลผลิตภัณฑ์ Briefly พลาสมาถูกบ่มด้วยเยื่อหุ้มไนโตรเซลลูโลสที่ตรวจพบด้วยการดักจับและควบคุมแอนติบอดี หลังจากการฟักตัว เยื่อหุ้มถูกล้างและฟักด้วยสเตรปทาวิดิน HRP ในการเบี่ยงเบนจากโปรโตคอล เราใช้ SuperSignal West Femto (ThermoFisher, Madison, WI, USA; Cat# 34094) สำหรับการตรวจจับสารเคมีเนื่องจากให้สัญญาณที่แรงกว่า มีการแสดงภาพรอยเปื้อนบนระบบเอกสารเจลของ FotoDyne

2.7. มิญชวิทยา

ฟอร์มาลินคงที่ (ฟอร์มาลิน 10 เปอร์เซ็นต์), พาราฟินฝัง,ไตถูกตัดเป็น 5 ส่วน um สไลด์ถูกทำให้ปราศจากพาราฟิน, ทำให้น้ำจากไซลีนผ่านชุดเอทานอลที่จัดเกรดให้เป็นน้ำ, และจากนั้นบำบัดตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง สแกนสไลด์โดยใช้วัตถุประสงค์ 20- ใน Aperio Digital Pathology Slide Scanner สไลด์ H&E ทั้งหมดได้รับการตรวจสอบโดย Dr. Weixiong Zhong, MD, PhD, นักพยาธิวิทยาการปลูกถ่าย และให้คะแนนสำหรับ PTC, glomerulitis (g), vasculitis (v)/intimal arteritis, interstitial inflamation (I) และ C4d staining ตาม Banff 2009 [21].

แยกจากกัน สไลด์ถูกกำหนดหมายเลขตาบอด และภาพดิจิทัลที่ไม่ทับซ้อนกันของท่อไตถูกถ่ายที่ส่วนต่อประสานระหว่างไขกระดูกและเยื่อหุ้มสมองจากสไลด์ H/E แต่ละสไลด์ ระมัดระวังไม่ให้รวมลูเมนของหลอดเลือดขนาดใหญ่และโกลเมอรูลี การหาจำนวนพิกเซลสีแดงและสีน้ำเงินโดยอัตโนมัติในแต่ละ 10-ไตรูปภาพดำเนินการโดยใช้มาโครแบบกำหนดเองที่เขียนในซอฟต์แวร์ ImageJ (https://imagej.nih.gov/ij/index.html

เข้าถึงเมื่อ 13 เมษายน 2564) พิกเซลสีแดงแสดงความหนาของท่อใกล้เคียงรวมทั้งขอบแปรง นิวเคลียสถูกหาปริมาณในช่องสีน้ำเงิน อัตราส่วนของพิกเซลนิวเคลียร์สีน้ำเงินต่อหลอดสีแดงให้ค่า Inflammatory Infiltration Score สำหรับการแทรกซึมของเซลล์เม็ดเลือดขาวหลังการปลูกถ่ายไต. คะแนนเฉลี่ยและวางแผนโดยใช้ Graphpad Prism

2.8. กิจกรรมเอนไซม์แคสเปสที่เปิดใช้งาน

เปิดใช้งาน caspase 3 และ 7 กิจกรรมในไตhomogenate supernates ถูกกำหนดโดยใช้สารตั้งต้น Apo-ONE fluorescent (Promega, Madison, WI, USA) [16] Briefly ละลายไตถูกผสมกับ 8-เท่าของบัฟเฟอร์ไลซิสส่วนเกินที่มี 50 mM Na HEPES, pH 7.4, 100 mM NaCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, กลีเซอรอล 10 เปอร์เซ็นต์ และทำให้เป็นเนื้อเดียวกันที่ 4 О C เป็นเวลา 30 วินาทีด้วยเครื่องทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน . โฮโมจิเนตของไตถูกหมุนเหวี่ยงที่ 4OC (16,000- ก.) ในไมโครฟิวจ์ Eppendorf เป็นเวลา 20 นาที supernates ถูกตรวจสอบทันทีสำหรับกิจกรรมของ caspase และปริมาณโปรตีนโดยวิธี Bradford โดยใช้ bovine serum albumin เป็นมาตรฐาน การสอบวิเคราะห์แคสเปสที่ถูกกระตุ้นถูกดำเนินการดังนี้: ซูเปอร์เนท 5 uL (~40 ไมโครกรัมของซุปเปอร์เนทโปรตีน) ถูกเจือจางเป็นปริมาตรรวม 50 uL ด้วยบัฟเฟอร์การสลายข้างต้น ผสมกับ 50 uL ของซับสเตรต Apo-ONE ที่ไม่ถูกเจือจางในหลุม ของจานสีดำ ทึบแสง 96 หลุมเพื่อเริ่มปฏิกิริยา 60 นาที เพลตถูกเขย่าที่ 200 รอบต่อนาทีที่ 37 О C เป็นเวลา 60 นาที ความแตกแยกเปปไทด์ของสารตั้งต้นแคสเปส DEVD ถูกวัดโดยใช้เครื่องอ่านเพลตแบบฟลูออเรสเซนต์ BMG Clariostar ที่ความยาวคลื่นกระตุ้นที่ 499 นาโนเมตร และความยาวคลื่นการปล่อย 521 นาโนเมตร มาตรฐานแคสเปสถูกรวมไว้ในการทดลองแต่ละครั้ง

2.9. ไมโทคอนเดรียไตหนู

เศษไมโตคอนเดรียที่บริสุทธิ์ถูกเตรียมจากหนูแรทที่ถูกทำให้เป็นเนื้อเดียวกันไตด้วยเทคนิคการปั่นเหวี่ยงมาตรฐาน [22] ไมโทคอนเดรียที่ถูกทำให้บริสุทธิ์ถูกแขวนลอยใน 0.15 M Tris HCl buffer, pH 7.4

เพื่อตรวจสอบว่าการเพิ่ม PrC จากภายนอก{{0}} ยับยั้งการกระจายตัวของ DNA ยลที่เกิดจาก ROS [22] ในปริมาตรปฏิกิริยา 25 uL (ในหลอด PCR) เราได้เพิ่ม: 1{{29} } ไมโตคอนเดรียที่ทำให้บริสุทธิ์ uL, 5 uL PrC-210 การเจือจางหรือน้ำ (PrC-210 ถูกเติม 10 นาทีก่อน Fe บวกบวกบวก ADP บวก H2O2 ●OH เครื่องกำเนิด) และ 10 uL ที่มี FeCl2 (2.5 มิลลิโมลาร์; FW:127), อะดีโนซีน 5′ - เกลือโซเดียมไดฟอสเฟต (10 มิลลิโมลาร์; FW: 427) และ H2O2 (ความเข้มข้นสุดท้าย 0.003 เปอร์เซ็นต์) หลังจาก 20 นาทีที่ 37 О C ปฏิกิริยา 10 uL ถูกผสมกับสีย้อมเจล 6- 5 uL ที่มี SDS 0.3 เปอร์เซ็นต์; หลอดนั่งในน้ำ 60 О C เป็นเวลา 1 นาที จากนั้นจึงบรรจุ 10 ul ลงในบ่อน้ำของเจล agarose TAE 1 เปอร์เซ็นต์ และหลังจาก 60 นาทีที่ 60 โวลต์ เจลจะถูกย้อมและถ่ายภาพ มีการทำซ้ำอย่างน้อยสามครั้งสำหรับแต่ละจุดทดสอบเพื่อเปิดใช้งานการเปรียบเทียบทางสถิติ

2.10. การวิเคราะห์ทางสถิติ

ข้อมูลแสดงเป็นค่าเฉลี่ยบวก /一 STDs การทดสอบ t ของนักเรียนใช้เพื่อกำหนดความแตกต่างทางสถิติและค่า p โดยใช้ซอฟต์แวร์ GraphPad Prism 703 ค่า p ที่น้อยกว่า 0.05 ถือว่ามีนัยสำคัญ

3. ผลลัพธ์

3.1. PrC-210 การปราบปรามพยาธิวิทยา Allograft ของไต

ที่ 20 ชั่วโมงหลังการปลูกถ่าย เนื้อเยื่อวิทยาของ BN . ที่ปลูกถ่ายไต(รูปที่ 2A–D) ที่รักษาด้วย UW Solution เพียงอย่างเดียวแสดงให้เห็นอย่างชัดเจนว่าคะแนนของ Banff เพิ่มขึ้นสำหรับหลอดอาหารอักเสบและเส้นเลือดฝอยในช่องท้อง (ลูกศรสีแดงและสีเหลือง); คะแนนพยาธิวิทยาสรุปแสดงในแผง E. BNไตผสมกับ PrC{{0}} ที่มี UW Solution และได้รับยา PrC ในช่องท้องหลังการปลูกถ่าย-210 (รูปที่ 2D) แสดงให้เห็นอย่างชัดเจนว่าพยาธิสภาพในช่องท้องของไตถูกกดทับอย่างชัดเจน และได้คะแนน Banff สำหรับหลอดอาหารอักเสบและเยื่อบุช่องท้องที่กดลงไป เส้นเลือดฝอยเท่ากับคะแนน Banff ของกลุ่ม BN ควบคุม "0 ชั่วโมง" (รูปที่ 2E) การบริหาร PrC-210 ให้การลดลงอย่างมีนัยสำคัญในทั้งครีเอทีน (p=0.032) และ BUN (p=0.046) ตัวบ่งชี้ความเสียหายของไต

3.2. ระดับแคสเปสที่กระตุ้นในไตหลังปลูกถ่าย

ระดับของแคสเปสที่เปิดใช้งานใน BNไตทำให้เป็นเนื้อเดียวกันลดลงอย่างมีนัยสำคัญใน BN allograftไตที่ไม่ได้สัมผัสกับการรักษา PrC{0}} ในช่วง 20 ชั่วโมงหลังการปลูกถ่าย (รูปที่ 5) การไหลเวียนของไต BN กับ PrC-210-ที่มีสารละลาย UW และการปลูกถ่ายในหนูลูอิสที่ได้รับยา PrC ทั่วร่างกาย-210 ส่งผลให้เกิดกิจกรรมแคสเปสที่กระตุ้นเช่นเดียวกันกับที่พบในไตควบคุม "0 ชั่วโมง"

3.3. ระดับ Cytokine ที่อักเสบตาม BN Kidney Allograft

ในการทดลองคัดกรองไตhomogenate supernates จากตัวควบคุม 0 h และ 20 h No Treatmentไตถูกคัดกรองด้วย Proteome Profiler 29 cytokine array เพื่อตรวจหาระดับการแสดงออกของไซโตไคน์และคีโมไคน์ที่เปลี่ยนแปลง สัมพันธ์กับการทำลายล้าง 20 ชั่วโมงหลังการปลูกถ่าย ตามที่แสดงไว้ในรูปที่ 6 ไมโครอาร์เรย์ที่ใส่เข้าไป การเปลี่ยนแปลงถูกพบใน TIMP-1, TNF-alpha และ MIP-3a/CCL20 จากนั้นจึงใช้เพลต ELISA แต่ละตัวเพื่อหาปริมาณการเปลี่ยนแปลงเหล่านี้ใน homogenates ของไตและซีรั่ม ซึ่งรวมถึงหนูที่บำบัดด้วย PrC-210 ด้วยเช่นกัน ทั้งระดับ TIMP-1 และ TNF-alpha เพิ่มขึ้น 20 ชั่วโมงหลังการปลูกถ่าย และในทั้งสองกรณี ระดับของพวกมันลดลงเมื่อมี PrC-210 (รูปที่ 6A–C) ระดับ MIP-3a/CCL20 เพิ่มขึ้นที่ 20 ชั่วโมง แต่พวกมันเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในหนูที่บำบัดด้วย PrC-210- (รูปที่ 6D)

3.4. PrC-210 การคุ้มครองไมโตคอนเดรียไตหนู

การทำงานของไมโตคอนเดรียอย่างต่อเนื่องระหว่างและหลังไตการปลูกถ่ายเป็นสิ่งจำเป็นเพื่อความอยู่รอดของอวัยวะที่ปลูกถ่าย ROS ที่เกิดขึ้นระหว่างการขาดเลือดที่เกี่ยวข้องกับการปลูกถ่าย, การขาดเลือดกลับคืนสู่สภาพเดิม และการปลูกถ่ายหลังการปลูกถ่าย ล้วนส่งผลต่อประสิทธิภาพการทำงานของไมโตคอนเดรียของไตและการรอดชีวิต เนื่องจากบทบาทของไมโตคอนเดรียที่สำคัญ เราจึงแยกไมโตคอนเดรียออกจากไตของหนู และพิจารณาว่า PrC-210 ที่ความเข้มข้นทางเภสัชวิทยาที่ทำได้จะปกป้องออร์แกเนลล์เหล่านี้จากการดูถูก ROS หรือไม่

ในรูปที่ 7 หนูที่บริสุทธิ์ไตไมโตคอนเดรียถูกบ่มด้วยเครื่องกำเนิด ●OH [23] หลังจากปฏิกิริยาสั้นๆ เราเห็นการกระจายตัวของ ROS ที่มีนัยสำคัญของ DNA ของไมโตคอนเดรียไตของหนู หลังจากการดูถูก ROS ส่วนของไมโตคอนเดรียถูกละลายในบัฟเฟอร์บรรจุเจลที่ประกอบด้วย SDS และดีเอ็นเอของไมโตคอนเดรียถูกแยกออกและ "กำหนดขนาด" โดยใช้อะกาโรสเจลโครมาโตกราฟี (รูปที่ 7) การดูถูก ROS ได้ลดขนาดเฉลี่ยของ DNA ไมโตคอนเดรียของไตในหนู (ช่อง b) และการเพิ่ม PrC-210 ลงในไมโทคอนเดรียทำให้ DNA แตกสลาย (ช่อง c–g) ใน PrC-210 ลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้น

มาค่าโสม cistanche

4. การอภิปราย

Allograftไตการปลูกถ่ายซึ่งกระตุ้นการปฏิเสธโดยเซลล์ของโฮสต์โดยเซลล์และแอนติบอดีของไตเป็นปัจจัยสำคัญในระยะสั้นและระยะยาวไตความเสียหายระหว่างการปลูกถ่าย และ Delayed Graft Function ที่เกี่ยวข้องนั้นพบได้ในไตที่ปลูกถ่ายมากถึง 50 เปอร์เซ็นต์ เราทำการศึกษานี้เพื่อพิจารณาว่า PrC-210 จะมีประสิทธิภาพในการระงับความรุนแรงของความเสียหายที่เกิดขึ้นหลังจากการปลูกถ่ายไตแบบ allograft ในแบบจำลองหนูที่กำจัดเวลาขาดเลือดในการปลูกถ่ายและความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันที่เกี่ยวข้องเป็นส่วนใหญ่ สมมติฐานของเราคือแนวทางนี้จะช่วยให้เรามองเห็นผลกระทบของ PrC-210 ต่อการดูถูกหลังการปลูกถ่ายด้วยการแทรกแซงการขาดเลือดขาดเลือดน้อยที่สุด

การเพิ่มขึ้นของ TNF-alpha และการเกิด mononuclear inflation แสดงให้เห็นว่าการปลูกถ่ายไต allograft ทำให้เกิดการอักเสบเฉียบพลันที่เด่นชัดใน 20 ชั่วโมงหลังการปลูกถ่าย และสิ่งนี้สัมพันธ์กับความเสียหายของเซลล์ท่อไตที่เห็นในไตจุลกายวิภาค (คะแนน Banff) TNF-alpha ส่วนใหญ่ผลิตโดยมาโครฟาจที่ถูกกระตุ้นและเป็นโปรตีนที่ส่งสัญญาณจากเซลล์ที่เกี่ยวข้องกับการทำลายแบบเฉียบพลัน มีความสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับการเกิดโรคของการปฏิเสธ allograft เฉียบพลันและเรื้อรัง [24]

ตรงกันข้ามกับการค้นพบข้างต้นใน BN . ที่ไม่ผ่านการบำบัดไต, PrC-210 ที่มอบให้โดยเป็นส่วนหนึ่งของสารละลาย UW และบริหารให้อย่างเป็นระบบในหนูหลังการปลูกถ่ายลดทั้งระดับ TNF-alpha และการกรองของไตโดยเซลล์โมโนนิวเคลียร์ ซึ่งเป็นสัญญาณของการทำลายล้างแบบเฉียบพลันที่ลดลง PrC-210 ลดความเสียหายของไตตามที่เห็นในคะแนนการบาดเจ็บของไตทางเนื้อเยื่อ (คะแนน Banff) ให้อยู่ในระดับเบื้องหลังที่ไม่ได้รับการรักษา และลดระดับของคะแนนการทำงานของไตทั้งทางพยาธิวิทยา creatinine และ BUN

การอักเสบในไต BN ที่ไม่ได้รับการรักษามีความสัมพันธ์กับการเพิ่มขึ้นของ TIMP-1 และ MIP-3A/CCL20 จากการเปรียบเทียบ เราพบว่าการรักษา PrC-210 ลดระดับ TIMP-1 ลงอย่างมีนัยสำคัญ และเพิ่มระดับ MIP-3A/CCL20 อย่างมีนัยสำคัญ

ตัวยับยั้งเนื้อเยื่อของ metalloproteinase-1 (TIMP-1) เป็นตัวควบคุมที่สำคัญของการสังเคราะห์และการย่อยสลายเมทริกซ์นอกเซลล์ (ECM) การสะสม ECM ที่มากเกินไปเป็นกลไกทางพยาธิวิทยาหลักของการพัฒนาของพังผืดในระหว่างและหลังการบาดเจ็บที่ไตเฉียบพลัน โดยพื้นฐานแล้วไม่มีนิพจน์ของ TIMP-1 เป็นปกติไตเนื้อเยื่อ [25] การสังเกตซึ่งได้รับการยืนยันในรูปที่ 6A, B ของเรา แต่ TIMP-1 เป็นที่ทราบกันว่าแสดงออกในไตที่ได้รับบาดเจ็บ ส่วนใหญ่ในเซลล์เยื่อบุผิวท่อไต เยื่อหุ้มชั้นใต้ดินของท่อไต และไซโตพลาสซึมของสิ่งของคั่นระหว่างหน้า เซลล์. การแสดงออกของ TIMP-1 ที่เพิ่มขึ้นมีความสัมพันธ์เชิงบวกกับการเสื่อมของการทำงานของไตพร้อมกัน [26] หนูที่ได้รับการรักษาด้วย PrC-210 พบว่าระดับ TIMP-1 ลดลงอย่างมาก (p=0.001) ทั้งในไตที่เป็นเนื้อเดียวกันและในพลาสมา นี่หมายความว่า PrC-210 ให้ผลในการป้องกันที่แข็งแกร่งต่อการจัดโครงสร้างใหม่ที่เกิดจากการปลูกถ่ายของเมทริกซ์นอกเซลล์ของไต

MIP ของคีโมไคน์-3a/CCL20กระตุ้นรีเซพเตอร์ CCR6 ซึ่งแสดงออกอย่างเฉพาะบนทีเซลล์ควบคุม (Tregs) CCL20 แสดงออกโดยเซลล์บุผนังหลอดเลือดและเซลล์คั่นระหว่างหน้า และยังเพิ่มการควบคุมในไตที่มีอาการบาดเจ็บที่ไตเฉียบพลัน เส้นทาง CCL20– CCR6 มีบทบาทสำคัญในการจัดหา T-cell ที่อาศัย Treg ไปยังไต และได้รับการอธิบายว่า Tregs มีบทบาทเชิงบวกในไตการซ่อมแซม ความทนทานต่อการปลูกถ่าย และการอยู่รอดของไต ทั้งการปิดกั้นแอนติบอดีของวิถี CCL20–CCR6 เช่นเดียวกับการใช้ CCR6-หนูที่บกพร่องในระยะเฉียบพลันไตการทดลองการบาดเจ็บพบว่าเพิ่มความรุนแรงของภาวะไตวายและการตาย [27] นี่แสดงให้เห็นว่าในทางคลินิก การเพิ่มประสิทธิภาพวิถี CCL20–CCR6 และการเปิดใช้งาน Treg อาจเป็นเส้นทางการรักษาที่เป็นไปได้ในการจำกัดภาวะเฉียบพลันและเรื้อรังไตอาการบาดเจ็บ [28] ในการศึกษาของเรา (รูปที่ 6D) ระดับ MIP-3a/CCL20 สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญใน PrC-210-หนูที่ได้รับการบำบัดมากกว่าในหนูที่ไม่ได้รับการรักษา เราคาดการณ์ว่านี่คือสาเหตุหนึ่งที่ทำให้ (i) การรวมเซลล์โมโนนิวเคลียร์ไปยังไตลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 3C) และ (ii) ความเสียหายของไตลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 2) ใน PrC-210-หนูที่ได้รับการบำบัด .

การทำงานของไมโตคอนเดรียของไตตามปกติ และที่สำคัญ การดูถูกระหว่างการเก็บรักษาไต การฝังรากฟันเทียม และขั้นตอนหลังการปลูกถ่ายเป็นปัจจัยกำหนดสำคัญของการบาดเจ็บ ROS และภาวะไตวายในระหว่างการปลูกถ่าย ดังนั้นจึงมีนัยสำคัญที่แสดงให้เห็นว่า PrC-210 สามารถยับยั้งการกระจายตัวของดีเอ็นเอของไมโตคอนเดรียได้อย่างสมบูรณ์ (รูปที่7) ที่ความเข้มข้น (2-4 มิลลิโมลาร์) ที่ได้รับในพลาสมาของทั้งหนูและหนูที่ได้รับทางช่องท้องหรือทางช่องท้อง oral systemic 0.5 ปริมาณ MTD ของ PrC-210 ที่ยอมรับได้โดยไม่มีความเป็นพิษที่ตรวจพบได้ [29]

ในการศึกษาเกี่ยวกับการปลูกถ่ายไตก่อนหน้านี้ [16,17] เราพบว่าแคสเปสกระตุ้นเพิ่มขึ้นอย่างมากในไตที่สัมผัสกับ "การขาดเลือดขาดเลือดเย็น" และ "ภาวะขาดเลือดกลับคืน" การดูถูกไตที่เกิดจากการขาดเลือดเหล่านี้ลดลงเหลือพื้นหลังโดยการรักษาด้วย PrC-210 (รูปที่8) ในการศึกษาต้นฉบับนี้ (ภาพที่ 5) ซึ่งขาดเลือดขาดเลือดเย็นและขาดเลือดกลับคืนมาโดยหลักแล้วโดยการปลูกถ่ายทันที ไม่มีการเพิ่มขึ้นของแคสเปสกระตุ้นในไตที่ปลูกถ่าย ในทางกลับกัน แคสเปสที่ถูกกระตุ้นลดลงอย่างเห็นได้ชัดที่เวลาบวก 20 ชั่วโมงในการควบคุม "ไม่มีการบำบัดด้วยยา" และการบำบัดด้วย PrC-210 ได้ขจัดการลดลงของแคสเปสในหนูบวก 20 ชั่วโมงโดยสิ้นเชิง และรักษาระดับแคสเปสให้คงที่ การตีความผลลัพธ์ที่น่าสนใจเหล่านี้ของเราคือการที่ไม่มีการดูหมิ่นอนุมูลอิสระที่เกิดจากการขาดเลือดที่มีนัยสำคัญใดๆ ผ่าน ROS และ RNS ไปจนถึงหลังการปลูกถ่ายไตไม่มีการตายของเซลล์และเครื่องหมายการตายของเซลล์ที่เกี่ยวข้อง เช่น แคสเปสที่ถูกกระตุ้น แต่ในการปลูกถ่ายไตแบบ allograft เหล่านี้ สัญญาณ inflammatory จาก cyto- และ chemokines ที่เพิ่งแสดงใหม่ในขณะนี้ควบคุมการเผาผลาญของเซลล์ซึ่งรวมถึงที่มีอิทธิพลต่อวิถีการตายของเซลล์ วรรณกรรมอธิบายว่าการแสดงออกมากเกินไปของ TIMP-1 นำไปสู่การปราบปรามของการตายของเซลล์ [26] ผลลัพธ์ของ caspase ของเรา (รูปที่ 5) สนับสนุนผลกระทบ TIMP-1 ที่อธิบายไว้นี้ และบ่งบอกว่า TIMP-1 มีความสำคัญในการควบคุมพยาธิสรีรวิทยาของความเสียหายของเซลล์หลังการปลูกถ่าย allograft ของไต เพื่อยืนยันการปราบปราม PrC-210 ก่อนหน้าของการแสดงออกของ TIMP-1 (รูปที่ 6A, B) การบำบัดด้วย PrC-210 ได้ยกเลิกการเปลี่ยนแปลงของแคสเปสโดยสิ้นเชิง ทำให้ระดับแคสเปสอยู่ในระดับเดียวกันตามที่เห็นใน การควบคุม "0 ชั่วโมง" ไต เนื่องจากระดับ TIMP ของ PrC-210 เซรั่มที่ลดลง-1 ที่บวก 20 ชั่วโมง (รูปที่ 6B) สะท้อนการปราบปรามที่สำคัญของ allograft ได้อย่างแม่นยำ: (i) การตายของเซลล์ (รูปที่ 5), (ii) พยาธิวิทยาทางเนื้อเยื่อ (รูปที่ 2 และ 3) และ (iii) การอักเสบของเซลล์ที่แทรกซึม (รูปที่ 3) เราคาดว่าการเฝ้าติดตามระดับ TIMP-1 ในซีรัมในผู้รับการปลูกถ่ายไตของมนุษย์จะเป็นวิธีที่สมเหตุสมผลในการตรวจสอบประสิทธิภาพทางคลินิกของ PrC-210 ในการทดลองทางคลินิกในอนาคต .

ในงานของเราจนถึงวันที่ [16,17] เราได้แสดงให้เห็นว่า PrC-210 สามารถปกป้องไตที่ปลูกถ่ายจากทั้งการดูหมิ่นการขาดเลือดขาดเลือดเย็นและการดูหมิ่นการขาดเลือดกลับคืนมา ในการศึกษานี้ เราพบว่า PrC-210 ยังปกป้องไต allograft จากการดูหมิ่นการอักเสบที่ไม่ขาดเลือดซึ่งเกิดขึ้นภายหลังการปลูกถ่ายไต PrC-210 ลดระดับของไซโตไคน์ที่ทำให้เกิดการอักเสบเฉียบพลันได้อย่างมีนัยสำคัญ เช่น TNF-alpha และยับยั้งการแสดงออกของ TIMP-1 คีโมไคน์ เหตุการณ์ทั้งสองนี้ และอาจได้รับการสนับสนุนเพิ่มเติมโดยการแสดงออก CCL20 เพิ่มเติม คาดว่าจะ: (i) ลดความเสียหายของไต allograft (ii) ยับยั้งการจัดหา T-cell ไปที่ไต และ (iii) ยับยั้งการกระตุ้นการทำงานของเซลล์ต้นกำเนิดและ ระบบภูมิคุ้มกันแบบปรับตัว ในรูปที่ 8 เราสรุปการค้นพบนี้เพื่อสนับสนุนบทบาทที่เรารู้สึกว่า PrC- 210 สามารถมีได้ในการปลูกถ่ายไตของมนุษย์ มันยับยั้ง: (i) สายพันธุ์ออกซิเจนปฏิกิริยาขาดเลือดเย็น (ROS) และชนิดไนโตรเจนปฏิกิริยา (RNS) สร้างความเสียหายต่อพื้นหลัง [17],

(ii) ความเสียหายของ ROS จากการกลับขาดเลือดของการขาดเลือดกับพื้นหลัง [16] และ (iii) ความเสียหายที่เกิดจากการสลายตัวของ allograft อย่างสำคัญ ในบางกรณี ไปที่พื้นหลัง เนื่องจากกลไกการทำงานของ PrC-210 หลักสำหรับ PrC-210 คือการกำจัดอนุมูลอิสระของออกซิเจนและไนโตรเจน ซึ่งหมายความว่าอนุมูลอิสระเหล่านี้มีส่วนสำคัญต่อความเสียหายของไตที่พบในสภาวะที่ไม่ขาดเลือด กล่าวคือ การเปลี่ยนแปลงที่เกี่ยวข้องกับ allograft ที่ศึกษาในต้นฉบับนี้

โดยสรุป สิ่งนี้ชี้ให้เห็นว่า PrC-210 สามารถให้การปกป้องอวัยวะที่ใช้ได้อย่างกว้างขวางสำหรับเงื่อนไขการปลูกถ่าย allograft; มันสามารถปกป้องไตที่ปลูกถ่ายในระหว่างและหลังจากทุกขั้นตอนของกระบวนการปลูกถ่าย—ตั้งแต่การบริจาคอวัยวะ ผ่านการขนส่ง การปลูกถ่ายใหม่ และการอักเสบหลังการผ่าตัด—เพื่อลดการปฏิเสธแบบเฉียบพลันและเรื้อรัง

Cistanche tubulosa ป้องกันโรคไต คลิกที่นี่เพื่อรับตัวอย่าง

ผลงานของผู้เขียน:NAW, WZ (Weifeng Zeng), WZ (Weixiong Zhong), BMV และ MMCG เข้าร่วมในการวิจัยและวิเคราะห์ข้อมูล TRG และ NAW มีส่วนร่วมในการออกแบบการวิจัยและการวิเคราะห์ข้อมูล WEF และ TRG มีส่วนร่วมในการออกแบบการวิจัย ประสิทธิภาพของการวิจัย การวิเคราะห์ข้อมูล และการเขียนบทความ ผู้เขียนทุกคนได้อ่านและตกลงที่จะตีพิมพ์ต้นฉบับแล้ว

เงินทุน:งานวิจัยนี้ได้รับทุนจาก UW Institute for Clinical and Translational Research และมอบ UL1TR002373 ให้กับ UW ICTR จาก NIH/NCATS, American Society of Transplant Surgeons (133 AAA1552), American College of Surgeons (133 AAB2176) และให้การสนับสนุน WEF (# R03CA176799).

คำชี้แจงของคณะกรรมการพิจารณาสถาบัน: งานวิจัยชิ้นนี้ได้รับการอนุมัติในอนาคตโดยคณะกรรมการการดูแลและการใช้สัตว์ของสถาบัน School of Medicine และสาธารณสุขของสถาบันสาธารณสุขแห่งมหาวิทยาลัยวิสคอนซิน (Animal Protocol #M005204)

คำชี้แจงเกี่ยวกับความพร้อมใช้งานของข้อมูล:ข้อมูลการศึกษามีอยู่อย่างครบถ้วนในต้นฉบับนี้ ความขัดแย้งทางผลประโยชน์: ผู้เขียนประกาศว่าไม่มีความขัดแย้งทางผลประโยชน์

อ้างอิง

1. วัง H.; นากาวี, ม.; อัลเลน, ซี.; ช่างตัดผม RM; บุตตา, ZA; เคซี่ย์, ดีซี; ชาร์ลสัน, เอฟเจ; เฉิน แอริโซนา; โคทส์ MM; Coggeshall, ม.; และคณะ อายุคาดเฉลี่ยทั่วโลก ภูมิภาค และระดับชาติ การตายจากทุกสาเหตุ และการตายเฉพาะสาเหตุสำหรับ 249 สาเหตุของการเสียชีวิต พ.ศ. 2523-2558: การวิเคราะห์อย่างเป็นระบบสำหรับการศึกษาภาระโรคทั่วโลก พ.ศ. 2558 มีดหมอ 2016, 388, 1459–1544 [ข้ามอ้างอิง]

2. รักษา อี.; เชา อี.; Peipert, เจดี; Waterman, A.; ขวัญ, ล.; แมสซี เอบี; โธมัส เอจี; โบว์ริง เอ็มจี; ลีเซอร์, ดี.; เฟลชเนอร์, เอส.; และคณะ จัดส่งไตผู้บริจาคที่มีชีวิตและผลลัพธ์ของผู้รับการปลูกถ่าย อาหรับ. อาร์เชล. เอพิกร์ 2017, 18, 632–641. [CrossRef] [PubMed]

3. น้ำหนัก SC; เบลล์ พีอาร์; Nicholson, ML Renal ischaemia-reperfusion บาดเจ็บ บรา เจ. เซอร์. 2539, 83, 162–170. [ผับเมด]

4. Sellarés, J.; เด Freitas, DG; Mengel, ม.; รีฟ เจ.; Reinecke, G.; น้องบี.; อีดัลโก, แอลจี; Famulski, K.; Matas, A.; Halloran, PF ทำความเข้าใจสาเหตุของความล้มเหลวในการปลูกถ่ายไต: บทบาทที่โดดเด่นของการปฏิเสธและการไม่ปฏิบัติตามแอนติบอดี เป็น. เจ. การปลูกถ่าย. 2555, 12, 388–399. [ข้ามอ้างอิง]

5. Siedlecki, A.; ไอริช, ว.; Brennan, DC Delayed Graft Function ในการปลูกถ่ายไต อาหรับ. อาร์เชล. เอพิกร์ 2011, 11, 2279–2296. [ข้ามอ้างอิง]

6. อีดัลโก, แอลจี; แคมป์เบลล์ PM; น้องบี.; Meinecke, G.; Mengel, ม.; ช้าง, เจ.; Sellars, เจ.; รีฟ เจ.; Halloran, PF; อีดัลโก, แอลจี; และคณะ De NovoDonor-Specific Antibody at the Time of Kidney Transplant Biopsy Associates with Microvascular Pathology and Late Graft Failure. การตรวจชิ้นเนื้อ อาหรับ. อาร์เชล. เอพิกร์ 2552, 9, 2532–2541. [ข้ามอ้างอิง]

7. Loupy, A.; ฮิลล์ จีเอส; Jordan, SC ผลกระทบของแอนติบอดีต่อต้าน HLA เฉพาะผู้บริจาคต่อความล้มเหลวของ allograft ไตในช่วงปลาย แนท. รายได้ Nephrol. 2012, 8, 348–357. [ข้ามอ้างอิง]

8. หวาง, จี.; วิลสัน นา; รีส อาร์เอส; เจคอบสัน LM; จง, ว.; Djamali, A. การแสดงคุณลักษณะของการปฏิเสธแบบเฉียบพลันโดยใช้แอนติบอดีที่เกิดจากการถ่ายเลือดในรูปแบบการปลูกถ่ายไตของหนู อาหรับ. อาร์เชล. เอพิกร์ 2014, 14, 1061–1072. [CrossRef] [PubMed]

9. จอร์แดน เซาท์แคโรไลนา; Pescovitz, MD Presensitization: ปัญหาและการจัดการ คลินิก แยม. ซ. เนฟรอล 2549, 1, 421–432. [CrossRef] [PubMed]

10. สเตกัล, ม.; กลอร์ เจ.; วินเทอร์ส เจ.; มัวร์เอส.; DeGoey, S. การเปรียบเทียบ Plasmapheresis กับ IVIG Desensitization ในปริมาณสูงในผู้รับ Allograft ของไตที่มี Alloantibody จำเพาะผู้บริจาคในระดับสูง อาหรับ. อาร์เชล. เอพิกร์ 2549, 6, 346–351. [CrossRef] [PubMed]

11. Peebles, DD; ซอเรฟ CM; Fahl, WE ROS-scavenger และประสิทธิภาพการป้องกันรังสีของ PrC-210 aminothiol ใหม่ รัศมี. ความละเอียด 2555, 178, 57–68. [ข้ามอ้างอิง]

12. ซอเรฟ CM; แฮ็กเกอร์, TA; Fahl, WE A New Orally Active, Aminothiol Radioprotector-Free of Nausea and Hypotension Side Effects at It's Radioprotective Dores. สูงสุด อินเตอร์ เจ. เรเดียต. ออนคอล 2012, 82, e701–e707. [ข้ามอ้างอิง]

13. เตชะเพียรสัญเจริญกิจ, น.; เฟียลา เจแอล; นวสัมฤทธิ์, ป.; ครอย, อาร์จี; โวแกน GN; Groopman, JD Sulforaphane ซึ่งเป็นสารป้องกันมะเร็ง กระตุ้นเส้นทางที่เกี่ยวข้องกับการสังเคราะห์ทางเยื่อหุ้มเซลล์เพื่อตอบสนองต่อความเสียหายของเนื้อเยื่อโดยอะฟลาทอกซิน บี1 ท็อกซิคอล แอปพลิเคชัน ฟา. 2015, 282, 52–60. [CrossRef] [PubMed]

14. Jermusek, F.; เบเนดิกต์, C.; Dreschmeier, E.; แบรนด์ ม.; ภายใต้ ม.; เจฟฟรี่ เจเจ; รานัลโล FN; Fahl, WE การปราบปรามอย่างมีนัยสำคัญของความเสียหายของดีเอ็นเอที่เกิดจากรังสี CT ในเซลล์มนุษย์ปกติโดย PrC-210 Radioprotector รัศมี. ความละเอียด 2018, 190, 133–141. [CrossRef] [PubMed]

15. แฮ็กเกอร์ TA; ไดอาร์ร่า, จี.; Fahl, BL; กลับเอส.; คอฟมันน์ อี.; Fahl, WE การลดลงอย่างมีนัยสำคัญของการตายของเซลล์ขาดเลือด-reperfusion ในกล้ามเนื้อหัวใจตายของเมาส์โดยใช้ PrC-210 ROS-scavenger ที่ออกฤทธิ์ทันที ฟา. ความละเอียด มุมมอง 2019, 7, e00500. [ข้ามอ้างอิง]

16. บาธ นิวเม็กซิโก; Fahl เรา; สนามแดง, RR การลดลงอย่างมีนัยสำคัญของการตายของเซลล์ขาดเลือดในไตของหนู - การกลับคืนสู่สภาพเดิมโดยใช้ PrC-210 ที่ออกฤทธิ์ทันที - สปีชีส์ออกซิเจนเชิงปฏิกิริยา การปลูกถ่าย โดยตรง. 2019, 5, e549–e555 [CrossRef] [PubMed]

17. เวอร์โฮเฟน บีเอ็ม; คาริม AS; บาธ, นิวเม็กซิโก; Fahl, CJS; วิลสัน นา; เรดฟิลด์, อาร์อาร์; Fahl, WE การปรับปรุงอย่างมีนัยสำคัญในห้องเย็นไตของหนูโดยใช้โซลูชันการรักษาอวัยวะ UW เสริมด้วย PrC ที่ออกฤทธิ์ทันที-210 สารกำจัดอนุมูลอิสระ การปลูกถ่าย ตรง 2020, 6, e578. [ข้ามอ้างอิง]

18. จีเซ่ APJ; กวาร์นาสเชลลี เจจี; วอร์ด เจเอ; ชู ดีไอ; Riazuddin, S.; Ahmed, ZM Radioprotective Effect ของ Aminothiol PrC-210 ต่อหูชั้นในที่ฉายรังสีของหนูตะเภา โปรดหนึ่ง 2015, 10, e0143606. [ข้ามอ้างอิง]

19. คอป, อาร์อาร์; พีเบิลส์, DD; Fahl, WE กิจกรรมการสังเคราะห์และควบคุมการเจริญเติบโตของสมาชิกต้นแบบของตระกูลใหม่ของสารปกป้องรังสีอะมิโนไธออล ชีวการแพทย์ เคมี. เลตต์. 2011, 21, 7426–7430. [ข้ามอ้างอิง]

20. Fahl เรา; พีเบิลส์, D.; Copp, RR สารประกอบอะมิโนไทออลและองค์ประกอบสำหรับใช้ร่วมกับการรักษามะเร็ง สิทธิบัตรสหรัฐอเมริกา 7,314,959 12 เมษายน 2547