ตัวเล็กแต่ยิ่งใหญ่—เอ็กโซโซม ผู้ส่งสารระหว่างเซลล์แบบใหม่ในการเสื่อมของระบบประสาท ตอนที่ 1

สรุปง่ายๆ:

Exosomes เป็นอนุภาคนาโนทางชีวภาพที่เพิ่งได้รับการยอมรับว่าเป็นผู้ส่งสารระหว่างเซลล์ ประกอบด้วยไขมัน โปรตีน และ RNA พวกเขาสามารถถ่ายโอนเนื้อหาไปยังเซลล์ในบริเวณใกล้เคียง แต่ยังรวมถึงเซลล์ในระยะไกลด้วย

เอ็กโซโซมเป็นเครื่องมือสื่อสารระหว่างเซลล์ที่เพิ่งค้นพบซึ่งสามารถปล่อยถุงน้ำขนาดเล็กและละเอียดอ่อนไปยังเซลล์รอบๆ โดยส่งโปรตีนบางชนิด สารส่งสัญญาณ และสารอื่นๆ ไปยังเซลล์รอบๆ สารเหล่านี้สามารถช่วยให้เซลล์เปลี่ยนสถานะและยังส่งผลต่อการเจริญเติบโต การพัฒนา เมแทบอลิซึม และด้านอื่นๆ ของเซลล์อื่นๆ ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา การศึกษาพบว่าเอ็กโซโซมมีบทบาทสำคัญในการทำงานของสมองมนุษย์ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการบำรุงรักษาและปรับปรุงความจำ

ประการแรก เอ็กโซโซมสามารถส่งเสริมการส่งสัญญาณระหว่างเซลล์ประสาทได้ การส่งข้อมูลระหว่างเซลล์ประสาทเป็นหนึ่งในเงื่อนไขที่จำเป็นสำหรับการทำงานปกติของระบบประสาท และเอ็กโซโซมมีบทบาทเป็นผู้ส่งสาร ซึ่งสามารถทำให้การส่งข้อมูลระหว่างเซลล์ประสาทราบรื่นขึ้น ซึ่งจะช่วยพัฒนาการรับรู้และความจำของสมอง

ประการที่สอง เอ็กโซโซมสามารถควบคุมการเผาผลาญของเซลล์ประสาทได้ ในกระบวนการผลิตเซลล์ประสาทที่ผลิตและปล่อยเอ็กโซโซม กระบวนการเมตาบอลิซึมจำนวนมากเข้ามาเกี่ยวข้อง ซึ่งส่งเสริมความสมดุลและการควบคุมเมแทบอลิซึมของเซลล์ กระบวนการเหล่านี้ไม่เพียงแต่ช่วยเพิ่มความสามารถของเซลล์ประสาทเท่านั้น แต่ยังช่วยกำจัดของเสียจากการเผาผลาญและโมเลกุลที่เป็นอันตราย และทำให้เซลล์สมองแข็งแรงอีกด้วย

ในที่สุด เอ็กโซโซมยังสามารถช่วยซ่อมแซมความเสียหายของเซลล์ประสาทได้ โปรตีนและกรดนิวคลีอิกหลายชนิดที่ขนส่งโดยเอ็กโซโซมมีประโยชน์ต่อการเจริญเติบโต การซ่อมแซม และการงอกใหม่ของเซลล์ และสามารถส่งเสริมการซ่อมแซมและการงอกใหม่ของเซลล์ประสาท ซึ่งจะช่วยปรับปรุงความสามารถในการอยู่รอดของเซลล์สมอง และเสริมสร้างศูนย์ความจำและความสามารถทางการรับรู้

โดยสรุปมีความสัมพันธ์ใกล้ชิดระหว่างเอ็กโซโซมและความจำ เราสามารถเปลี่ยนความทรงจำของเด็กๆ ได้โดยเริ่มจากการรับประทานอาหาร แนวทางโครงสร้างอาหารของเด็กอย่างแข็งขันและการรับประทานอาหารที่อุดมด้วยส่วนผสมที่เป็นประโยชน์ เช่น กรดไขมัน โปรตีน และวิตามิน สามารถส่งเสริมการผลิตและการปล่อยเอ็กโซโซม ซึ่งจะช่วยให้เด็กพัฒนาความสามารถในการเรียนรู้และความจำ เด็ก ๆ ยังสามารถได้รับเกมฝึกสมองและแบบฝึกหัดเพื่อท้าทายและฝึกการคิด กระตุ้นศักยภาพของ exosome และมีบทบาทที่ดีขึ้น จะเห็นได้ว่าเราต้องปรับปรุงความจำ และ Cistanche สามารถปรับปรุงความจำได้อย่างมาก เนื่องจาก Cistanche เป็นสมุนไพรจีนโบราณที่มีลักษณะพิเศษมากมาย หนึ่งในนั้นคือการปรับปรุงความจำ ประสิทธิภาพของ Cistanche มาจากส่วนผสมออกฤทธิ์หลายชนิดใน Cistanche รวมถึงกรดแทนนิก โพลีแซ็กคาไรด์ ฟลาโวนอยด์ไกลโคไซด์ ฯลฯ ส่วนผสมเหล่านี้สามารถส่งเสริมสุขภาพสมองได้หลายวิธี

คลิกรู้เพื่อปรับปรุงหน่วยความจำระยะสั้น

ความสามารถพิเศษนี้ช่วยให้พวกเขาปรับเปลี่ยนสรีรวิทยาของเซลล์ผู้รับได้ ในสมอง เอ็กโซโซมมีบทบาทในโรคเกี่ยวกับความเสื่อมของระบบประสาท เช่น โรคอัลไซเมอร์ โรคพาร์กินสัน และโรคปลอกประสาทเสื่อมแข็งด้านข้างของกล้ามเนื้ออะไมโอโทรฟิค

เชิงนามธรรม:

Exosomes ที่มีต้นกำเนิดจากเอนโดโซมเป็นชั้นหนึ่งของถุงนอกเซลล์ที่มีความสำคัญในการสื่อสารระหว่างเซลล์ เอ็กโซโซมถูกปล่อยออกมาจากเซลล์ทุกเซลล์ในร่างกายของเรา และส่วนประกอบของพวกมันประกอบด้วยไขมัน โปรตีน และกรดนิวคลีอิก มีรอยเท้าที่สะท้อนถึงต้นกำเนิดของพวกมัน

สินค้าจากภายนอกมีพลังในการปรับสรีรวิทยาของเซลล์ผู้รับในบริเวณใกล้เคียงกับเซลล์ที่ปล่อยออกมาหรือเซลล์จากระยะไกล การควบคุมศักยภาพของเอ็กโซโซมขึ้นอยู่กับความบริสุทธิ์ของสารเตรียมเอ็กโซโซม

ดังนั้นจึงมีการพัฒนาวิธีการแยกหลายวิธี และเราให้ข้อมูลสรุปโดยย่อของวิธีการต่างๆ มากมาย แม้ว่าเซลล์ในระบบประสาทส่วนกลางจะถูกกั้นอย่างสันโดษ แต่เซลล์ในระบบประสาทส่วนกลางก็ไม่ได้รับการยกเว้นจากอิทธิพลที่บุกรุกจากภายนอก ทั้งเซลล์ประสาทและกเลียปล่อยเอ็กโซโซม มักในลักษณะที่ขึ้นกับกิจกรรม

มีคำอธิบายโดยย่อเกี่ยวกับเอ็กโซโซมที่ปล่อยออกมาจากเซลล์ต่างๆ ในสมอง และบทบาทในการรักษาสภาวะสมดุลของระบบประสาทส่วนกลาง จุดเด่นของโรคทางระบบประสาทหลายอย่างคือการสะสมของโปรตีนรวมตัว การศึกษาล่าสุดเกี่ยวข้องกับบทบาทของเครื่องมือสื่อสารระหว่างเซลล์ของ exosomes ในการแพร่กระจายของโปรตีนที่พับผิดซึ่งเป็นการแพร่กระจายของพยาธิวิทยา

ในการทบทวนนี้ เราจะหารือเกี่ยวกับการมีส่วนร่วมที่เป็นไปได้ของ exosome ในการลุกลามของโรคอัลไซเมอร์ โรคพาร์กินสัน และโรคหลอดเลือดตีบด้านข้างของ amyotrophic

การทำความเข้าใจการมีส่วนร่วมของเอ็กโซโซมในการเกิดโรคของการเสื่อมของระบบประสาทเปิดพื้นที่สำหรับการใช้เอ็กโซโซมเป็นยารักษาโรคในการส่งยาไปยังสมอง เนื่องจากเอ็กโซโซมข้ามอุปสรรคในเลือดและสมอง

คำสำคัญ: เอ็กโซโซม; เซลล์ประสาท; เซลล์เกลีย ระบบประสาทส่วนกลาง (CNS); โรคทางระบบประสาท;โรคอัลไซเมอร์; โรคพาร์กินสัน; เส้นโลหิตตีบด้านข้าง amyotrophic

1. บทนำและมุมมองทางประวัติศาสตร์

การสื่อสารระหว่างเซลล์เป็นที่สนใจอย่างมากสำหรับการพัฒนาของตัวอ่อน การงอกใหม่/การแทนที่ของเยื่อบุผิว การสร้างเซลล์สืบพันธุ์ และการบำรุงรักษาสภาวะสมดุล

กลไกหลายอย่างของการสื่อสารระหว่างเซลล์และเซลล์ เช่น เอ็นโดไซโทซิส/เอกโซไซโตซิส และไซโตพลาสซึมที่ยื่นออกมาแบบกลืน ถูกระบุโดยใช้การศึกษาเชิงอุลตร้าสตรัคชันและชีวเคมี [1–3] มีการระบุผู้เล่นอีกรายหนึ่งคือถุงนอกเซลล์ แต่บทบาทของพวกเขาในการสื่อสารระหว่างเซลล์ไม่ได้รับการชื่นชมในทันที [4]

ถุงนอกเซลล์ถูกค้นพบโดยบังเอิญในระหว่างการตรวจสอบการปล่อยเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับพลาสมาเมมเบรน, ecto-ATPase และ ecto-50-นิวคลีโอไทเดสเข้าไปในอาหารเลี้ยงเซลล์ ในปี 1981 เพื่อนร่วมงานของ Tramsand เพาะเลี้ยงเซลล์เส้นปกติและนีโอพลาสติกของหนูและต้นกำเนิดของมนุษย์ในตัวกลางที่ปราศจากซีรั่ม เนื่องจากเป็นที่รู้กันว่าซีรั่มมีฤทธิ์เร่งปฏิกิริยาของ ATPase และ50-นิวคลีโอไทเดส

หลังจากกำจัดเซลล์ที่ลอยอยู่และเศษซากออก ตัวกลางที่ถูกปรับสภาพจะถูกปั่นแยกด้วยความเร็ว 310,000× g เป็นเวลา 90 นาทีในโรเตอร์ Spinco Ti-70 และตรวจสอบเม็ดภายใต้กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน ค้นพบประชากรสองกลุ่มของถุงที่ห่อหุ้มเยื่อหุ้มเซลล์นอกเซลล์ โดยกลุ่มหนึ่งมีเส้นผ่านศูนย์กลางเฉลี่ยระหว่าง 500 ถึง 1,000 นาโนเมตร และกลุ่มที่สองมีขนาดเล็กกว่าโดยมีเส้นผ่านศูนย์กลาง ~ 40 นาโนเมตร

ถุงเหล่านี้ซึ่งผู้เขียนอธิบายไว้ในตอนแรกว่าเป็น "ถุงที่มีการผลัดเซลล์ผิว" มีทั้งกิจกรรมของเอนไซม์ 50-50-นิวคลีโอไทเดสและ ATPase นอกจากนี้ ถุงที่ผลัดเซลล์ผิวยังมี RNA และฟอสโฟลิพิดที่แตกต่างจากเซลล์ต้นกำเนิดและพลาสมาเมมเบรนของต้นกำเนิดตามลำดับ

การฟักตัวของถุงที่ผลัดเซลล์จากเซลล์ C6 glioma ด้วยนิวโรบลาสโตมาเซลล์ที่มีป้ายกำกับล่วงหน้า 32P กระตุ้นการเกิดฟอสโฟรีเลชั่นของโปรตีนนิวโรบลาสโตมาพร้อมการปล่อยฟอสฟอรัสที่มีฉลากกัมมันตภาพรังสีอิสระ (32P) ร่วมกัน

ข้อมูลเหล่านี้แสดงให้เห็นว่าถุงที่ผลัดเซลล์ไม่เพียงแต่เป็นพาหะของเสียจากเซลล์ (เอนไซม์) เท่านั้น แต่ยังมีหน้าที่ทางสรีรวิทยาอีกด้วย รถรางและเพื่อนร่วมงานได้ตั้งชื่อคำว่า เอ็กโซโซม เพื่ออธิบาย "ถุงที่ผลัดเซลล์" [5] (ดูบทความทบทวนโดย [6] สำหรับประวัติของตุ่มที่อยู่นอกเซลล์ ก่อนปี 1981) หลายปีต่อมา กลุ่มวิจัยสองกลุ่มได้ศึกษาชะตากรรมของตัวรับทรานสเฟอร์รินในเรติคูโลไซต์ด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนอย่างอิสระ [7–9]

เรติคูโลไซต์ที่เจริญเต็มที่ไม่จำเป็นต้องใช้ทรานสเฟอร์ริน ดังนั้นเรติคูโลไซต์จึงกลายเป็นตัวรับทรานสเฟอร์ริน ทั้งสองกลุ่มตั้งข้อสังเกตว่าเรติคูโลไซต์ที่เพาะเลี้ยงปล่อยถุงเล็ก ๆ ที่มีเส้นผ่านศูนย์กลางประมาณ 50 นาโนเมตรออกสู่พื้นที่นอกเซลล์

ถุงเล็ก ๆ เหล่านี้มีตัวรับทรานสเฟอร์รินที่ไม่สลายตัว ในปี พ.ศ. 2530 จอห์นสตันและเพื่อนร่วมงานใช้คำว่า เอ็กโซโซม เพื่ออธิบายถุงเล็กๆ ที่มีตัวรับทรานสเฟอร์ริน [10] หลังจากช่วงหลายปีแรกเหล่านี้ ศักยภาพของเอ็กโซโซมได้รับการตระหนักในฐานะผู้ส่งสารระหว่างเซลล์แบบใหม่ที่สามารถปรับสรีรวิทยาของเซลล์เป้าหมายได้

สิ่งที่น่าสนใจคือ การกำเนิดของเอ็กโซโซมเริ่มต้นขึ้นด้วยภาวะเอนโดไซโทซิส (กระบวนการที่ระบุในปี พ.ศ. 2426 ตรวจสอบโดย [3]) ในเซลล์และการปลดปล่อยเอ็กโซโซมไปยังพื้นที่ภายในเซลล์ใช้กระบวนการเอ็กโซไซโทซิส นับตั้งแต่การค้นพบครั้งแรก ตอนนี้เรารู้แล้วว่าเอ็กโซโซมเป็นชนิดย่อยของเซลล์ถุงน้ำนอกเซลล์ ของต้นกำเนิดเอนโดไซติกที่มีขนาดเส้นผ่านศูนย์กลาง 40–160 นาโนเมตร [11]

การศึกษาตามรอยแสดงให้เห็นว่าโมเลกุลขนาดใหญ่ถูกเอนโดไซโตสในการรุกรานหรือหลุมบนพื้นผิวเซลล์ที่เคลือบด้วยขนแปรง (เช่น เคลือบแคลทริน) การบุกรุกเหล่านี้ในที่สุดจะแยกออกจากพลาสมาเมมเบรนและตรวจพบในไซโตพลาสซึม

หลังจากสูญเสียขนแปรง (เช่น แคลทริน) ถุงที่เคลือบด้วยเอนโดไซโตสจะเรียบและหลอมรวมกับเอนโดโซมในระยะเริ่มแรกเพื่อการรีไซเคิลอย่างรวดเร็วกลับสู่ผิวเซลล์ (การรีไซเคิลเอนโดโซมในรูปที่ 1) [12] หรือผ่านการสุกจนเกิดเป็นเอ็นโดโซมตอนปลาย

เอ็นโดโซมช่วงต้นและปลายทำหน้าที่เป็น "ฮับการเรียงลำดับ" เพื่อกำหนดทิศทางเนื้อหาอย่างเหมาะสม: (i) สำหรับการขนส่งถอยหลังเข้าคลองไปยังเครือข่ายทรานส์ - กอลจิ (เช่น การดึงข้อมูลจากเอนโดโซมถึง TGN) [13,14]; (ii) ไปจนถึงไลโซโซมสำหรับการย่อยสลายโมเลกุลขนาดใหญ่เป็นผลิตภัณฑ์ง่ายๆ เพื่อนำกลับมาใช้ใหม่ภายในเซลล์ [15,16]; และ/หรือ (iii) สำหรับการรีไซเคิลไปยังพื้นผิวเซลล์ผ่านร่างกายหลายช่อง [17]

ในระหว่างการเจริญเติบโตของเอนโดโซมในระยะแรกจนกลายเป็นเอ็นโดโซม เยื่อหุ้มเอนโดโซมภายในจะเกิดการรุกราน ส่งผลให้เกิดการก่อตัวของถุงน้ำในช่องท้อง (ปัจจุบันเรียกว่าเอ็กโซโซม) โมเลกุลขนาดใหญ่เฉพาะ เช่น โปรตีนไซโตซิลิก กรดนิวคลีอิก และลิพิด จะถูกจัดเรียงเป็นเอ็กโซโซมที่กำลังพัฒนา

เอนโดโซมตอนปลายที่เต็มไปด้วยเอ็กโซโซมจะถูกระบุว่าเป็นเนื้อหลายส่วนที่อพยพไปยังพลาสมาเมมเบรน เมื่อหลอมรวมกับพลาสมาเมมเบรน multivesicularbodies จะปล่อยเอ็กโซโซมออกสู่อวกาศภายนอกเซลล์โดยผ่านกระบวนการเอ็กโซไซโทซิส (รูปที่ 1) [18,19] โปรตีนชุดย่อยจำนวนมากที่ได้รับการคัดเลือกตามลำดับมีบทบาทชี้ขาดในกระบวนการของเอนโดโทซิสไปจนถึงเอ็นโดโซมระยะแรก การเจริญของเอ็นโดโซมไปจนถึงเอ็นโดโซมตอนปลาย และชะตากรรมภายในเซลล์ที่ตามมา (ตรวจสอบโดย [17,18,20])

ความสำคัญของโปรตีนเหล่านี้เน้นไปที่การสูญเสียและ/หรือการกลายพันธุ์ที่ทำให้เกิดโรคต่างๆ ตัวอย่างเช่น โปรตีน Strumpellin และ SWIP เป็นส่วนหนึ่งของ WASH คอมเพล็กซ์ที่มีส่วนร่วมในการเกิดปฏิกิริยาพอลิเมอไรเซชัน เช่นเดียวกับการแยกตัวและการคัดแยกเอนโดโซม การกลายพันธุ์ในยีน Strumpellin ทำให้เกิดโรคอัมพาตขาเกร็งทางพันธุกรรม โดยมีลักษณะเฉพาะคือการเสื่อมของเซลล์ประสาทมอเตอร์ [21]

การกลายพันธุ์แบบจุดเดียว (Pro1019Arg) ในโปรตีน SWIP ทำให้ WASH complex ไม่เสถียร คอมเพล็กซ์ WASH ที่ไม่เสถียรยับยั้งการค้าเอนโดลิโซโซม ทำให้เกิดการจับตัวเป็นก้อนของเอ็นโดโซม การรับส่งข้อมูลเอนโดโซมที่มีข้อบกพร่องส่งผลกระทบต่อการรับรู้และการทำงานของเซลล์ประสาท โดยมีอาการที่อธิบายว่าเป็นภาวะปัญญาอ่อนแบบไม่แสดงอาการ [22,23]

ในไซโตพลาสซึม เอ็กโซโซมเกิดขึ้นจากเอนโดโซมโดยใช้คอมเพล็กซ์การเรียงลำดับเอนโดโซมที่จำเป็นสำหรับการขนส่ง (ESCRT) หรือที่รู้จักกันในชื่อกลไกที่ขึ้นกับ ESCRT ของการสร้างไบโอโซมจากเอ็กโซโซม (ตรวจสอบโดย [18,20])

สองกลุ่มรายงานการสร้างไบโอโซมโดยใช้ลิพิดโดยอิสระต่อกัน ซึ่งเป็นกลไกที่ไม่ขึ้นกับ ESCRT ไขมันสองชนิดที่ระบุในการศึกษาเหล่านี้คือ บิส(โมโนเอซิลกลีเซอโร)ฟอสเฟต/ไลโซบิสฟอส ฟาติดิกแอซิด (BMP/LBPA) และเซราไมด์ [29,30]

Rab31 เป็นอีกหนึ่งกลไกที่ไม่ขึ้นกับ ESCRT สำหรับการสร้างไบโอโซมจากภายนอกในไซโตพลาสซึม การเปิดใช้งาน Rab31 ช่วยกระตุ้นการก่อตัวของถุงน้ำในช่องท้อง [31] มีกลไกอื่นที่ขณะนี้อยู่ระหว่างการหารือและยังไม่ได้สำรวจ

กลไกนี้มีพื้นฐานมาจากการสังเกตโครงสร้างพิเศษในช่วงปลายทศวรรษปี 1950 ถึง 1970 ซึ่งแสดงให้เห็นว่านิวเคลียสของเซลล์สามารถเป็นแหล่งกำเนิดของสิ่งมีชีวิตหลายถุงที่เต็มไปด้วยถุงขนาดเล็ก ถุงเล็กที่อธิบายไว้ในการศึกษาเหล่านี้อาจเป็น exosome แต่คำว่า exosome ไม่ได้ถูกบัญญัติขึ้นในเวลานั้น Kilarski และ Jasinski สังเกตกระบวนการที่เรียกว่า Nuclear blebbing หรือการอัดขึ้นรูปด้วยนิวเคลียร์ในเซลล์ของกระเพาะว่ายน้ำของปลาเกาะคอน Perca fluviatilis L. (รูปที่ 2a) [24] โดยมีเนื้อหาคล้ายกับ nucleolarkaryoplasm [32]

ผู้เขียนเหล่านี้ตั้งข้อสังเกตว่าการระเบิดของนิวเคลียร์สามารถถูกกระตุ้นได้โดยการกำจัดก๊าซออกจากกระเพาะปัสสาวะของปลาเกาะ [24] กระบวนการของการเกิด blebbing นิวเคลียร์ดูเหมือนจะมีประโยชน์ในฐานะที่เป็นแหล่งกำเนิดของ exosomes ที่อุดมด้วยกรดนิวคลีอิกและ/orribonucleoprotein

blebs นิวเคลียร์เต็มไปด้วยถุงเล็ก ๆ ที่เกิดขึ้นจากการพับเดี่ยวของเยื่อหุ้มภายในของ blebs นิวเคลียร์ (รูปที่ 2b) ซึ่งเป็นกระบวนการที่คล้ายกับการก่อตัวของถุงในช่องท้องในเอนโดโซม หยดนิวเคลียร์ที่เต็มไปด้วย 'ถุงเล็ก ๆ' ในที่สุดก็แยกออกจากนิวเคลียสจนกลายเป็นส่วนหนึ่งของไซโตพลาสซึม (รูปที่ 2c)

Kilarski และ Jasinski เรียก blebs นิวเคลียร์ว่าเป็น multivesicular bodies ในต้นฉบับเนื่องจากขาดคำศัพท์ที่ดีกว่า ผู้เขียนเหล่านี้อาจพูดถูกโดยไม่ได้ตั้งใจเนื่องจากการศึกษาต่อมารายงานว่ามีเซลล์หลายเซลล์อยู่ในนิวเคลียสของเซลล์ [33] นิวเคลียสเบิลส์ที่เต็มไปด้วยถุงเล็ก ๆ มีลักษณะทางสัณฐานวิทยาคล้ายกับร่างกายหลายถุงที่มีต้นกำเนิดจากเอนโดโซมในไซโตพลาสซึม (รูปที่ 1 และ 2)

เนื่องจากความคล้ายคลึงกันของนิวคลีโอแคปซิดของนิวเคลียร์หลายเซลล์กับนิวคลีโอแคปซิดของไวรัส นักวิจัยจึงมุ่งความสนใจไปที่ไวรัสวิทยาและปรากฏการณ์ของนิวเคลียส blebbing และการทำงานของเซลล์ยังคงไม่ได้รับการสำรวจ [34]

โดยไม่คำนึงถึงรูปแบบของการสร้างไบโอโซม exosome ประกอบด้วย alipid bilayer และมีปริมาณโมเลกุลขนาดใหญ่ที่ประกอบด้วยไขมัน โปรตีน และกรดนิวคลีอิก

โมเลกุลขนาดใหญ่บางส่วนพบได้ทั่วไปในเอ็กโซโซมที่เกิดจากเซลล์ทั้งหมด ดังนั้นจึงจัดเป็นเครื่องหมายเอ็กโซโซม และใช้เป็นเครื่องมือยืนยันในการแยกแยะเอ็กโซโซมจากถุงนอกเซลล์อื่นๆ โมเลกุลขนาดใหญ่ที่มีเอกลักษณ์เฉพาะที่มีอยู่ใน exosomesoften สะท้อนถึงต้นกำเนิดของพวกมัน และด้วยเหตุนี้จึงมีแนวโน้มที่จะถูกกำหนดให้เป็นตัวชี้วัดทางชีวภาพ

เซลล์ทั้งหมดจะปล่อยเอ็กโซโซมออกสู่พื้นที่นอกเซลล์ จากพื้นที่นอกเซลล์ เอ็กโซโซมจะหาทางเข้าไปในของเหลวทางชีวภาพต่างๆ และเข้าถึงเซลล์เฉพาะที่และในระยะไกล เซลล์ที่เพาะเลี้ยง ในหลอดทดลอง จะปล่อย exosome ของพวกมันออกสู่อาหารเลี้ยงเชื้อ การปล่อยเอ็กโซโซมออกสู่พื้นที่นอกเซลล์อย่างต่อเนื่องทำให้ตัวกลางในการเพาะเลี้ยงและของเหลวทางชีวภาพเป็นแหล่งอุดมสมบูรณ์สำหรับการแยกเอ็กโซโซม

Exosomes มี RNA จำนวนมากทั้งแบบเข้ารหัสและแบบไม่เข้ารหัส ชิ้นส่วน DNA ของจีโนมแบบเกลียวคู่ และ DNA ของไมโตคอนเดรีย รถรางและเพื่อนร่วมงานเป็นคนแรกที่อธิบายถึงการมีอยู่ของ RNA ใน "exfoliated vesicles" ซึ่งเป็นส่วนผสมของ exosomes และ microvesicles

พวกเขาพบว่า "เซลล์ที่ผลัดเซลล์ผิวหรือเอ็กโซโซม" มีอาร์เอ็นเอ 5% [5] Valadi และเพื่อนร่วมงานเป็นคนแรกที่วิเคราะห์ RNA ที่บรรจุ inexosomes อย่างเป็นระบบ exosomal RNAs รวมถึง mRNAs และ microRNAs ที่แปลได้ (miRs) [35]

MicroRNAs เป็นคลาสของ RNA ที่ไม่เข้ารหัส (ncRNAs) พวกมันมีความยาวประมาณ 22 นิวคลีโอไทด์และควบคุมการแสดงออกของยีนในระดับหลังการถอดรหัสโดยจับกับ 30-บริเวณที่ไม่แปลของ RNA ตัวส่งสารเป้าหมายของพวกมัน [36] สิ่งที่น่าสนใจคือ miRNA บางตัวที่อุดมไปด้วย exosomes จะไม่ถูกตรวจพบในเซลล์ต้นกำเนิด ซึ่งแนะนำระบบการคัดแยก/บรรจุภัณฑ์ RNA แบบเลือกสรรในระหว่างการสร้างไบโอโซมของ exosomes

ต่างจากเซลล์ตรงที่ exosomes มีไรโบโซม RNA เพียงเล็กน้อยหรือไม่มีเลย แต่มีชิ้นส่วน tRNA [38] การเรียงลำดับ RNA ออกเป็น exosomes ขึ้นอยู่กับ (1) โปรตีนที่เกี่ยวข้องกับ RNA-based silencing complex (RISC) (2) ลำดับ RNA และโปรตีนนำทาง (3) การเติมนิวคลีโอไทด์ที่ 30end ของ miRNAs (4) ความพร้อมใช้ของเซลล์ของ miRNA และ (5) เซราไมด์ [39,40]

เราเชื่อว่าการหลั่งนิวเคลียร์เป็นอีกกระบวนการหนึ่งของเซลล์ที่ช่วยให้สามารถแยกแยะ RNA, RNA–โปรตีนเชิงซ้อน และ DNA ของจีโนมออกเป็นเอ็กโซโซมได้ มีเหตุผลหลายประการสำหรับมุมมองนี้: (1) เนื้อหาของ 'ถุงในช่องท้อง' มีความคล้ายคลึงกับนิวเคลียสคาริโอพลาสซึม [32] 'ถุง' ในนิวเคลียสมัลติเวซิคูลาร์ (MVB II) ได้รับการเสริมสมรรถนะด้วย RNA, โปรตีนที่เป็นกรดและพื้นฐาน และด้วยเหตุนี้ผู้เขียนจึงพิจารณา ' ถุงในช่องท้อง 'เป็นที่ตั้งของการสังเคราะห์ RNA นอกเหนือจากนิวคลีโอลัส [41]

Proteins present in the vesicles may have been RNA-binding proteins and Dicer1 that were detected in exosomes [42] (unpublished data, Kumari Lab, Kansas State University, Manhattan, KS, USA). (2) Considering the nucleus as a site of exosome biogenesis can explain the presence of RNAs including precursor miRNAs (unpublished data, Kumari Lab) and double-stranded genomic DNA fragments ranging from 100 bp to >10 kbin เอ็กโซโซม [43–47]

โดยบังเอิญ ตรวจพบ DNA ของจีโนมเฉพาะใน exosome ที่ได้มาจากเซลล์มะเร็งและไม่ใช่เซลล์ปกติ [47] เซลล์มะเร็งมีการจัดเรียง/การโยกย้ายของโครมาตินที่ผิดปกติเนื่องจากโครมาตินผิดปกติ และอาจมี ploidy [48] ซึ่งอาจทำให้เกิดการกระจายตัวของ DNA ของจีโนมในนิวเคลียสของเซลล์มะเร็ง ชิ้นส่วน DNA เหล่านี้สามารถรวมเข้ากับ MVB type II (และ exosomes) ที่กำลังพัฒนาในนิวเคลียสได้อย่างง่ายดาย (3) รูปแบบของ 'small vesicle'biogenesis ใน blebs นิวเคลียร์ที่อธิบายโดย Kilarski และ Jasinski [24] นั้นคล้ายคลึงกับการก่อตัวของ intraluminal vesicles ในเอนโดโซมตอนปลายในไซโตพลาสซึม

เราเชื่ออย่างยิ่งว่าการมีอยู่ของ DNA จีโนมในเอ็กโซโซมนั้นเป็นพยาธิสภาพ ดังนั้นการมีอยู่ของดีเอ็นเอในเอ็กโซโซมจึงสามารถนำมาใช้เป็นเครื่องมือในการวินิจฉัยการพัฒนาเซลล์ที่ผิดปกติ (หรือมะเร็ง) ในร่างกายได้ (4) การเพิ่มขึ้นของจำนวนเอ็กโซโซมที่ปล่อยออกมาโดยเซลล์ขึ้นอยู่กับกิจกรรม [49] เทียบได้กับเซลล์แก๊สที่แสดงการปล่อยก๊าซนิวเคลียร์เพิ่มขึ้นเมื่อกำจัดก๊าซออกจากกระเพาะปัสสาวะของปลาเกาะคอน [24]

เมื่อเร็วๆ นี้ มีการตรวจพบโปรตีนและ DNA ของไมโตคอนเดรียในพลาสมาเอ็กโซโซมของผู้ป่วยมะเร็งบางราย และการมีอยู่ของโปรตีนเหล่านี้สัมพันธ์กับความรุนแรงของมะเร็ง [50,51]

มักพบการสลายตัวของไมโตคอนเดรียในเซลล์ที่เสื่อมสภาพ [52,53] คริสเตของไมโตคอนเดรียที่ปล่อยออกมาจากไมโตคอนเดรียที่เสื่อมถอยอาจถูกทำให้อยู่ภายในโดยอวัยวะหลายช่องและในที่สุดก็ถูกบรรจุเป็นอินเนโซโซม

แนวคิดนี้ได้รับการสนับสนุนจากภาพโครงสร้างพิเศษของเซลล์ลิมโฟบลาสต์อยด์ของมนุษย์และรูของอะซินีของต่อมลูกหมากลิงบาบูนที่มี 'ไมโครเวสิเคิล' (หรือเอ็กโซโซม) ที่ได้มาจากการสลายตัวของคริสเตของไมโทคอนเดรีย [54]

จากการอภิปรายข้างต้นและหลักฐานการทดลองที่สนับสนุน เราเสนอว่าลักษณะที่ต่างกันของเอ็กโซโซมมีต้นกำเนิดมาจากการสร้างทางชีวภาพของร่างกายที่มีหลายเวซิคูลาร์และเอ็กโซโซมที่เกี่ยวข้องที่ตำแหน่งเซลล์ย่อยที่แตกต่างกัน และไม่ได้อยู่ในไซโตพลาสซึมทั้งหมดตามความเชื่อของเราในปัจจุบัน ข้อเสนอของเราสามารถอธิบายความแตกต่างของเอ็กโซโซมได้ เช่นเดียวกับความไม่ตรงกันระหว่างการคำนวณทางทฤษฎีและข้อมูลการทดลองเกี่ยวกับจำนวน RNA ขนาดเล็กหรือโมเลกุลโปรตีนที่บรรจุอยู่ภายใน exosome หนึ่งเดียวที่บริสุทธิ์จากซีรั่ม [55]

จากการคำนวณทางทฤษฎีโดยใช้ขนาดเอ็กโซโซมโดยเฉลี่ย Li และเพื่อนร่วมงานคาดการณ์ว่าแต่ละเอ็กโซโซมจะรองรับประมาณ 70–25,000 RNA หรือโมเลกุลโปรตีนขนาดเล็ก

อย่างไรก็ตาม ข้อมูลการทดลองแสดงให้เห็นว่ามีโมเลกุล RNA หนึ่งโมเลกุลต่อ exosome บริสุทธิ์จากซีรั่ม [55] สมมติฐานของเราจำเป็นต้องมีการสำรวจเพิ่มเติมเกี่ยวกับนิวเคลียส blebbing, Nuclear multivesicular bodies และการสร้างทางชีวภาพของ RNA/ribonucleoprotein-contained exosomes ใน Nuclear multivesicular bodies ลิพิดเป็นส่วนสำคัญของเยื่อหุ้ม exosome และมีการกระจายแบบไม่สมมาตรระหว่างแผ่นพับเมมเบรน exosome ทั้งสอง องค์ประกอบของไขมันแตกต่างกันระหว่างเยื่อหุ้มเซลล์ต้นกำเนิดและเยื่อหุ้มเซลล์ภายนอก

โดยทั่วไป ลิพิดที่เสริมสมรรถนะในเอ็กโซโซมเมมเบรนได้แก่ สฟิงโกไมอีลิน เซราไมด์ ไมโครโดเมนของไลปิดที่อุดมด้วยโคเลสเตอรอล ganglioside GM3 ลิพิดที่อิ่มตัว และฟอสฟาทิดิลซีรีน [56–58] โปรตีนเอ็กโซโซมประกอบด้วยโปรตีนที่พบได้ทั่วไปในเอ็กโซโซมส่วนใหญ่และโปรตีนที่มีลักษณะเฉพาะ ไปยังเซลล์ต้นกำเนิดบางเซลล์

โดยทั่วไปปริมาณโปรตีนของเอ็กโซโซมทั้งหมดได้รับการเสริมสมรรถนะสำหรับการกำหนดเป้าหมายและโปรตีนฟิวชัน เช่น เตตร้าพานิน, อินทิกริน, โปรตีนคาเปโรน เช่น โปรตีนช็อกความร้อน (Hsp60, Hsp70 และ Hsp90), โปรตีนการค้าเมมเบรน HSP ขนาดเล็ก, โปรตีน Rab, ARF GTPases, ภาคผนวก และ โปรตีนที่เกี่ยวข้องกับการสร้าง multivesicular bodies เช่น ALIX และ TSG101 [59]

การศึกษาล่าสุดแสดงให้เห็นว่ามีโปรตีนที่จับกับ RNA ซึ่งก่อตัวเป็นสารเชิงซ้อนของ RNA-protein ใน exosomes [38] กระบวนการเซลล์หลายอย่างที่รับประกันการอัปโหลดโปรตีนไปยัง exosomes คือ (1) กลไก ESCRT สำหรับโปรตีนที่มีการดัดแปลงหลังการแปลบางอย่างเช่น ubiquitination, arginine methylation ที่กระตุ้นโดย Wnt, ออกซิเดชัน, ฟอสโฟรีเลชั่น, ไกลโคซิเลชั่นและซิทรูลิเนชัน; (2) การดูดเลือดอัตโนมัติโดยอาศัยพี่เลี้ยง (CMA) ที่อาศัยอันตรกิริยาระหว่างช็อตความร้อนโคเนทโปรตีน 71 kDa (HSC70) และโปรตีนที่มี KFERQmotif

หลังจากจับ HSC70 กับโปรตีนที่มีมาตรฐาน KFERQ แล้ว โปรตีนจะถูกมุ่งเป้าไปที่ร่างกายที่มีหลายถุง โดยปกติแล้วการกินอัตโนมัติโดยอาศัย Chaperone จะดำเนินการเพื่อการย่อยสลายโปรตีนในไลโซโซม ข้อมูลล่าสุดชี้ให้เห็นว่า CMA มีบทบาทในการปลดปล่อย exosome และการแพร่กระจายของโปรตีนที่รวมตัวเป็นสื่อกลางจาก exosome ในโรคทางระบบประสาทบางชนิด [60–63]

มีการวิจัยนอกโซโซมเพิ่มขึ้นอย่างมากนับตั้งแต่ทศวรรษ 1990 และมีการสร้างข้อมูลมากมายเกี่ยวกับสินค้าเอ็กโซโซม ฐานข้อมูลถูกสร้างขึ้นเพื่อจัดเตรียมข้อมูลสรุปของสินค้าภายนอกก่อนที่จะจัดการชุดข้อมูลขนาดใหญ่ได้ยากเกินไป

ความสามารถในการทำซ้ำของข้อมูลที่เผยแพร่บนเอ็กโซโซมเป็นอีกเหตุผลหนึ่ง เนื่องจากห้องปฏิบัติการส่วนใหญ่ใช้วิธีการต่างๆ ที่พัฒนาขึ้นเพื่อแยกเอ็กโซโซม ตัวอย่างเช่น Vesiclepedia เป็นบทสรุปที่รวบรวมด้วยตนเองของสินค้าระดับโมเลกุล (ไขมัน, RNA และโปรตีน) ที่ระบุในชั้นต่างๆ ของถุงนอกเซลล์ [64] Vesiclepedia เป็นทรัพยากรที่มีคุณค่าสำหรับนักวิจัย

ฐานข้อมูล Vesiclepedia เปิดเผยต่อสาธารณะ และอนุญาตให้ผู้ใช้สืบค้นและดาวน์โหลดข้อมูลสินค้า Exosome ตามเกณฑ์การค้นหาที่ผู้ใช้ป้อน EV pedia, Exocarta, ExoRbase และ EV miRNA เป็นฐานข้อมูลเพิ่มเติมที่จัดทำรายการ exosomalproteins และ RNA [64]

ฐานข้อมูลขับเคลื่อนโดยคำอธิบายประกอบของชุมชน ข้อมูลที่รวบรวมในฐานข้อมูลเหล่านี้ได้มาโดยการแยกเอกโซโซมโดยใช้เทคนิคการแยกที่แตกต่างกันที่หลากหลายซึ่งไม่รวมอยู่ในฐานข้อมูล

ปริมาณคาร์โก้ภายนอกอาจแตกต่างกันขึ้นอยู่กับวิธีการแยกที่ใช้ ทำให้เกิดความคลุมเครือในผลลัพธ์ที่รายงาน เพื่อปรับปรุงความสามารถในการทำซ้ำและความโปร่งใสในการทดลอง จึงมีการพัฒนาชุดเครื่องมือ EV-TRACK ฐานความรู้แบบโอเพ่นซอร์ส EV-TRACK ครอบคลุมข้อมูลเกี่ยวกับการเตรียมการแบบ exosome และการกำหนดลักษณะเฉพาะแบบ exosome [65]

คุณลักษณะสำคัญของ EV-TRACK คือ EV-METRIC ซึ่งนำเสนอการรายงานพารามิเตอร์การทดลองเป็นเปอร์เซ็นต์องค์ประกอบที่สำเร็จจากรายการเก้ารายการ [66] ส่วนประกอบเหล่านี้ได้รับการตัดสินใจโดยกลุ่มความร่วมมือ EVTRACK และถือว่าจำเป็นสำหรับการตีความข้อมูลและการทำซ้ำข้อมูลการทดลองที่ชัดเจน ดังนั้น EV-METRIC จึงได้รับการออกแบบมาเพื่อช่วยนักวิจัยและผู้ตรวจสอบในการให้ภาพรวมของข้อมูลที่ครอบคลุม

2. วิธีการปัจจุบันสำหรับการแยกเอกโซโซม

Exosomes นำเสนอแหล่งข้อมูลอันอุดมสมบูรณ์สำหรับการค้นพบตัวบ่งชี้ทางชีวภาพและสำหรับกลยุทธ์การรักษาใหม่ๆ รวมถึงเวชศาสตร์ฟื้นฟู สิ่งที่สำคัญที่สุดสำหรับความสำเร็จของเป้าหมายเหล่านี้คือการแยกเอกโซโซมบริสุทธิ์ออกด้วยวิธีการที่ทำซ้ำได้

การแยกตัวของความสามารถเชิงหน้าที่มีความสำคัญอย่างยิ่งต่อการประยุกต์ใช้ในการรักษาที่มีศักยภาพ Exosome ได้รับการทำให้บริสุทธิ์จากของเหลวทางชีวภาพหลายชนิด เช่น เลือด พลาสมา น้ำไขสันหลัง น้ำลาย ปัสสาวะ และนม ของเหลวชีวภาพแต่ละชนิดมีลักษณะทางกายภาพและเคมีที่แตกต่างกันซึ่งจำเป็นต้องพิจารณาก่อนที่จะแยกออกจากกัน

ในบางกรณี ข้อควรระวังเฉพาะอาจจำเป็นสำหรับการแยกเชื้อแบบ exosome การใช้เอ็กโซโซมบริสุทธิ์ขั้นสุดท้ายเป็นอีกปัจจัยหนึ่งที่มีอิทธิพลต่อวิธีการแยกเอ็กโซโซม

จนถึงปัจจุบัน มีการพัฒนาวิธีการแยกเอ็กโซโซมหลายวิธี และบางวิธีขึ้นอยู่กับลักษณะเฉพาะของเอ็กโซโซม เช่น ขนาด ความหนาแน่น ประจุที่พื้นผิว และโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับพื้นผิวเอ็กโซโซม (รูปที่ 3) [67]

วิธีการแยกเอกโซโซมที่ใช้อยู่ในปัจจุบันบางส่วนแสดงอยู่ในตารางที่ 1 ส่วนใหญ่ไม่ใช่วิธีการแบบสแตนด์อโลนและต้องมีขั้นตอนการประมวลผลหลังตัวอย่างก่อน วิธีการหลักๆ จะอธิบายสั้นๆ ไว้ด้านล่าง

รูปที่ 3 วิธีการที่ใช้โดยทั่วไปสำหรับการแยกเอ็กโซโซมและการประยุกต์ขั้นปลายน้ำ วิธีการต่างๆ มากมายที่ได้รับการพัฒนาจนถึงปัจจุบันสำหรับการแยกเอ็กโซโซมนั้นขึ้นอยู่กับความหนาแน่นลอยตัวของพวกมัน โครงการที่ 1, 13 และ 1.19 กรัม/มิลลิลิตร วิธีการปั่นแยกด้วยความเข้มข้นสูง (UC) ได้รับการปรับปรุงเพิ่มเติมเป็น แยกการเตรียมบริสุทธิ์ของเอ็กโซโซมตามความหนาแน่นลอยตัวของพวกมันโดยการปั่นแยกด้วยความเข้มข้นสูงแบบไอโซปิกแบบโอเวอร์ซูโครสหรือการไล่ระดับความหนาแน่นของไอโอไดซานอล (DG)

ในการกำจัดปริมาณโปรตีนสูงในโปรตีนในปัสสาวะออก ให้ใช้วิธีการปั่นเหวี่ยงแบบพิเศษร่วมกับโครมาโทกราฟีแบบแยกขนาด (SEC) ข้อจำกัดด้านเวลาที่เกี่ยวข้องกับวิธีการปั่นแยกด้วยความเข้มข้นสูงทำให้เกิดการพัฒนาวิธีการกรอง (UF)

การส่งตัวอย่างเจือจาง เช่น อาหารเลี้ยงเชื้อและปัสสาวะผ่านหัวทำให้มีนาโนหรือไมโครเมมเบรนทำให้ได้สารบริสุทธิ์จากภายนอก การอุดตันของเมมเบรนและการกู้คืนโปรตีนจากภายนอกที่ไม่ดีทำให้วิธีนี้ไม่เป็นที่นิยมสำหรับการใช้งานขั้นปลาย เช่น การแยก RNA และการใช้งานที่มีปริมาณงานสูง

อีกวิธีหนึ่งที่พัฒนาขึ้นเพื่อแยกเอ็กโซโซมจากการฟอกไตด้วยการกรองไฮโดรสแตติกของไหลทางชีวภาพที่เจือจางมาก (HFD *) ร่วมกับการหมุนเหวี่ยง ในวิธี HFD ตัวอย่างจะถูกไดอะไลซ์ผ่านเมมเบรนสำหรับการฟอกไตด้วยค่าตัดน้ำหนักโมเลกุล 1,000 kDa ภายใต้ความดันไฮโดรสแตติก ซึ่งช่วยให้สามารถกำจัดโมเลกุลขนาดใหญ่ที่ไม่ต้องการออกจากตัวอย่าง และเอ็กโซโซมจะถูกนำกลับคืนมาโดยการปั่นแยก

วิธีการตกตะกอนแบบเอ็กโซโซมโดยพิจารณาจากความสามารถในการละลายหรือการกระจายตัวและการรวมกลุ่มได้รับการพัฒนาขึ้นเพื่อประมวลผลตัวอย่างหลายตัวอย่างพร้อมกัน ชุดอุปกรณ์เชิงพาณิชย์สำหรับการทำให้บริสุทธิ์แบบเอ็กโซโซมใช้กลยุทธ์นี้

ในวิธีนี้ โอรัสไซต์ในปัสสาวะผสมกับโพลีเอทิลีนไกลคอล (PEG) 6000 หรือใช้ร่วมกับโปรทามีน (บวก PEG35,000) และบ่มในชั่วข้ามคืนหรือ 1 ชั่วโมงบนน้ำแข็ง

ของผสมที่เกิดความขุ่นของ T ถูกปั่นแยกเพื่อกู้คืนเอ็กโซโซมที่ใช้สำหรับการวิเคราะห์ RNA และโปรตีนขั้นปลาย รีเอเจนต์อื่นๆ ที่ใช้สำหรับการตกตะกอนของเอ็กโซโซมคือ (1) 0.1M โซเดียมอะซิเตต pH 4.75 (วิธีการทำให้เกลือออก) (NaAc), (2) อะซิโตนเย็นที่มีปริมาตร4-เท่าตัว (−20 ◦C) ( การตกตะกอนของตัวทำละลายอินทรีย์ PROtein และเรียกโดยย่อว่า PROSPR), (3) และส่วนผสมของ PEG และสารละลายเดกซ์แทรน (สูงถึง 1.5%) (วิธีการสองเฟสที่ช่วยให้สามารถแยกโปรตีนจากเอ็กโซโซม)

การจำแนกโปรตีนบนพื้นผิวเอ็กโซโซมนำไปสู่การพัฒนาวิธีการที่ใช้การจับโดยอิงอิมมูโนอัฟฟินิตี้โดยใช้แอนติบอดีต่อโปรตีนบนพื้นผิวเอ็กโซโซม เช่น Tim4, แอนเน็กซิน, EpCAM, โปรตีนบนพื้นผิวเอ็กโซโซมทั่วไป, CD63 และโปรตีนช็อกความร้อน (อันตรกิริยาระหว่างสัมพรรคภาพ) ความสัมพันธ์ระหว่างเลคติน (ที่จับกับไกลโคโปรตีนบนพื้นผิวของเอ็กโซโซม) และเฮปาริน (ที่จับกับโปรตีโอไกลแคนของเฮปาราน ซัลเฟตบนพื้นผิวภายนอกโซม) ถูกนำมาใช้เพื่อพัฒนาวิธีการแยกออกจากโซโซม

มีการใช้แพลตฟอร์มต่างๆ เช่น เม็ดบีดแม่เหล็ก, ไมโครทิปซิลิกาเสาหินที่มีรูพรุนสูง, พื้นผิวของแผ่นพลาสติก, ตัวกรองเซลลูโลส, ตัวกรองสัมพรรคภาพเมมเบรน, สารอะกาโรสซอร์เบนท์ และอุปกรณ์ไมโครฟลูอิดิก ถูกนำมาใช้สำหรับวิธีการทำให้บริสุทธิ์เอกโซโซมตามความสัมพันธ์ และทั้งสองมีข้อดีที่แตกต่างกันสำหรับการใช้งานใน การวินิจฉัย การพยากรณ์โรค เช่น ระบบการนำส่งยา และการตรวจจับและวิเคราะห์สินค้าในส่วนหน้าของโฟเรโซโซม

ดัดแปลงโดยได้รับอนุญาตจาก Konoshenko MY, Lekchnov EA,Vlassov AV, Laktionov PP การแยกถุงนอกเซลล์: วิธีการทั่วไปและแนวโน้มล่าสุด Biomed Res Int. 2018 30 ม.ค.; 2018:8545347. ดอย:10.1155/2018/8545347. PMID: 29662902; PMCID:PMC5831698; ลิขสิทธิ์© 2022 มาเรียหยู โคโนเชนโก และคณะ

นี่เป็นบทความแบบเปิดที่เผยแพร่ภายใต้ Creative Commons Attribution License ซึ่งอนุญาตให้ใช้ แจกจ่าย และทำซ้ำได้อย่างไม่จำกัดในสื่อใดๆ โดยมีเงื่อนไขว่างานต้นฉบับต้องมีการอ้างอิงอย่างถูกต้อง [67]

For more information:1950477648nn@gmail.com