ผล Renoprotective ของ Isoliquiritigenin ต่อการบาดเจ็บของไตเฉียบพลันที่เกิดจาก Cisplatin ผ่านการยับยั้ง FPR2 ใน Macrophage

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม โปรดติดต่อ: ali.ma@wecistanche.com

Tan Rui-Zhi et al

Click to Cistanche สำหรับการรักษาโรคไต

เชิงนามธรรม

ไตบาดเจ็บเฉียบพลัน (อากิ) เป็นภาวะแทรกซ้อนที่ร้ายแรงในผู้ป่วยวิกฤต หลักฐานที่สะสมบ่งชี้ว่ามาโครฟาจมีบทบาทสำคัญต่อการอักเสบในอาการบาดเจ็บที่ไตเฉียบพลันและ isoliquiritigenin (ISL) สามารถยับยั้งการอักเสบของ macrophagic ได้ แต่มีบทบาทในอาการบาดเจ็บที่ไตเฉียบพลันและไม่ทราบกลไกเบื้องหลัง การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อตรวจสอบผลของ ISL ต่อ AKI และบทบาทของตัวรับฟอร์มิลเปปไทด์ 2 (FPR2) ในกระบวนการนี้ ในการศึกษานี้ แบบจำลอง AKI ที่เกิดจากซิสพลาตินและแบบจำลองการอักเสบของมาโครฟาจที่เกิดจากไลโปโพลีแซคคาไรด์ถูกนำมาใช้เพื่อทำการทดลอง ในหลอดทดลอง และ ในหลอดทดลอง ผลปรากฏว่า ISL โล่งใจอย่างยิ่งไตบาดเจ็บและยับยั้งการอักเสบของไตในร่างกายและระงับการตอบสนองต่อการอักเสบของ macrophagic ในหลอดทดลอง ที่สำคัญ พบว่า FPR2 ได้รับการควบคุมอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมในมาโครฟาจที่เกิดจาก AKI และ LPS ในขณะที่ ISL ยับยั้งอย่างรุนแรง น่าสนใจ การแสดง FPR2 ที่มากเกินไปด้วยการถ่าย pcDNA31-FPR2 ได้ย้อนกลับผลการต้านการอักเสบของ ISL ในมาโครฟาจอย่างมีประสิทธิภาพ โดยแนะนำว่า FPR2 อาจเป็นเป้าหมายที่เป็นไปได้สำหรับ ISL เพื่อป้องกันการอักเสบและปรับปรุงไตบาดเจ็บของอาการบาดเจ็บที่ไตเฉียบพลัน. เมื่อนำมารวมกัน การค้นพบนี้บ่งชี้ว่า ISL ปรับปรุงที่เหนี่ยวนำด้วยซิสพลาตินไตบาดเจ็บโดยการยับยั้ง FPR2 ที่เกี่ยวข้องกับการอักเสบมาโครฟาจซึ่งอาจให้ตัวเลือกการรักษาที่เป็นไปได้สำหรับ AKI

1. บทนำ

เฉียบพลันไตการบาดเจ็บ (AKI) เป็นประเภทรุนแรงที่พบบ่อยของไตโรคที่มีอัตราการเสียชีวิตสูง1 เป็นลักษณะการทำงานของไตลดลงอย่างรวดเร็วซึ่งเกิดขึ้นภายใน 7 วันหรือน้อยกว่า สิ่งพิมพ์ล่าสุดรายงานว่าอุบัติการณ์ของ AKI สูงถึง 5 เปอร์เซ็นต์ของผู้ป่วยในและ 30 เปอร์เซ็นต์ของผู้ป่วยที่รุนแรงและอากิทำให้มีผู้เสียชีวิต 2 ล้านคนทั่วโลกในแต่ละปี ซึ่งกลายเป็นปัญหาสุขภาพระดับโลก แม้ว่าคำจำกัดความจะธรรมดาและสม่ำเสมอ แต่ AKI อาจเกิดจากสาเหตุหลายประการ รวมถึงการบริโภคยาที่เป็นพิษต่อไต อาการบาดเจ็บที่กล้ามเนื้อขาดเลือด-เลือดกลับ (Ischemia-reperfusion trauma, IRI) ภาวะติดเชื้อ การผ่าตัดหัวใจและหลอดเลือด ความดันโลหิตสูง และเบาหวาน2,3 เก่า อายุ โรคเบาหวาน และภาวะหัวใจล้มเหลวเพิ่มความเสี่ยงต่อ AKI ซึ่งมักจะนำไปสู่โรคไตเรื้อรังที่ไม่สามารถย้อนกลับได้ (CKD) และโรคไตวายเรื้อรังระยะสุดท้าย (ESRD) ในผู้ป่วยบางราย4 น่าสังเกต การศึกษาแสดงให้เห็นว่าเซลล์ภูมิคุ้มกันเกือบทั้งหมดมีส่วนเกี่ยวข้อง ในการอักเสบของภูมิคุ้มกันของไตใน AKI.5 ในหมู่พวกเขา แมคโครฟาจมีบทบาทสำคัญในการส่งเสริมการอักเสบของไต6 การลบมาโครฟาจช่วยปรับปรุงการบาดเจ็บของไตและการอักเสบของ AKI7 ดังนั้น การยับยั้งการอักเสบของมาโครฟาจอย่างมีประสิทธิผลอาจเป็นประโยชน์สำหรับ การปรับปรุงแนวทางการรักษาในปัจจุบันสำหรับการจัดการ AKI

Isoliquiritigenin (ISL) เป็นฟลาโวนอยด์ที่มีโครงสร้าง chalcone ซึ่งมีรากฐานมาจากยาสมุนไพรจีนโบราณที่มีชื่อเสียง8 ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา ได้รับความสนใจอย่างกว้างขวางจากนักวิทยาศาสตร์เนื่องจากมีสารต้านอนุมูลอิสระ ต้านการอักเสบ การรวมตัวของเกล็ดเลือด และต้านเชื้อแบคทีเรีย คุณสมบัติต้านไวรัส ต้านเนื้องอก ปกป้องตับ ปกป้องระบบประสาท ปกป้องหัวใจ และล้างพิษ9 ISL แสดงให้เห็นแล้วว่าสามารถยับยั้งการเพิ่มจำนวนเซลล์ ลด ROS และกระตุ้นการตายของเซลล์มะเร็ง การตายของเซลล์มะเร็งถึงตายในระดับต่างๆ รายงานระบุว่า isoliquiritigenin สามารถยับยั้งการผลิต IL-6 และ TNF-a ที่เกิดจากส่วน lipid A ของ LPS ในมาโครฟาจ RAW264.7 และทำให้การก่อตัวของ LPS-TLR4/ MD-2 ซับซ้อนลดลง นอกจากนี้ ISL สามารถกระตุ้นการตายของเซลล์ HepG2 ผ่านเส้นทางการส่งสัญญาณ MAPK, STAT3 และ NF-kB ที่เป็นสื่อกลางของ ROS11 หลักฐานจากการทดลองยังแสดงให้เห็นว่า ISL กระตุ้นการกระตุ้นจากภายในที่อาศัย ROS และกระตุ้นกลไกโปรตีเอสของไมโตคอนเดรีย-ไซโตโครม ของ PC-12 การตายของเซลล์ เป็นที่น่าสังเกตว่า ISL มักใช้เป็นอาหารเสริมสำหรับผู้หญิง12 การศึกษาล่าสุดแสดงให้เห็นว่า ISL มีฤทธิ์ต้านการอักเสบอย่างมีนัยสำคัญใน AKI แต่กลไกการทำงานเฉพาะยังไม่ชัดเจน

การวิจัยก่อนหน้านี้จากทีมของเราพบว่า Mincle ซึ่งเป็นเลคตินชนิด C ที่เกิดจากมาโครฟาจเป็นตัวรับการรู้จำรูปแบบเมมเบรนที่เกี่ยวข้องกับการอักเสบของไต 13 โดยเราได้คัดกรอง formyl peptide receptors 2 (FPR2) ที่มีความสัมพันธ์บางอย่างกับ Mincle จาก ฐานข้อมูล GEO อย่างไรก็ตาม บทบาทในโรคไตเฉียบพลันยังไม่ได้รับการยืนยัน FPR2 เป็นยีนที่กำหนดรหัสโปรตีนที่เป็นของตระกูลตัวรับโปรตีนควบคู่ G และมีกรดอะมิโนตกค้าง 351 ชนิด14,15 พวกมันคือตัวรับคู่โปรตีนของเมมเบรน G 7- ที่สามารถไกล่เกลี่ยการควบคุมภูมิคุ้มกัน การหลั่งปัจจัยการอักเสบ เคมีบำบัดของเซลล์และการยึดเกาะของเซลล์ซึ่งมีความสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับการเกิดขึ้นและการพัฒนาของโรคต่างๆ16 ความคล้ายคลึงกันของ FPR1 และ FPR3 สูงถึง 69 เปอร์เซ็นต์และ 83 เปอร์เซ็นต์ เซลล์ย่อย FPR2 ถูกแปลเป็นภาษาท้องถิ่นในเยื่อหุ้มเซลล์และเป็นโปรตีนเมมเบรนแบบหลายช่อง ส่วนใหญ่แสดงออกในนิวโทรฟิล, อีโอซิโนฟิล, โมโนไซต์, เซลล์เยื่อบุผิว, ไฟโบรบลาสต์, เซลล์เกลีย, เซลล์ mesangial ฯลฯ กระจายอยู่ในอวัยวะต่างๆ เช่น ปอด ม้าม และตับ โดยเฉพาะอย่างยิ่ง FPR2 แสดงออกอย่างมากมายในเยื่อบุระหว่างไต 17 ที่ซึ่งเซลล์อักเสบอาศัยอยู่ หน้าที่หลักของ FPR2 คือการรวมสื่อส่งเสริมการสลายตัวเฉพาะทาง (SPM) บางอย่างเพื่อไกล่เกลี่ยการทำงานของสารเมตาโบไลต์เหล่านี้ในการระงับและกำจัดการอักเสบ อย่างไรก็ตาม บทบาทของ FPR2 ในการอักเสบของ AKI และสามารถใช้เป็นเป้าหมายในการแทรกแซงยาได้หรือไม่

ในการศึกษาปัจจุบันนี้ เราใช้แบบจำลอง AKI ของเมาส์ที่เป็นพิษต่อไต - cisplatin และแบบจำลองเซลล์อักเสบที่เหนี่ยวนำโดย LPS เพื่อสำรวจผลการปรับปรุงของ ISL ต่อการบาดเจ็บและการอักเสบของไตใน AKI ตลอดจนบทบาทสำคัญของ FPR2 ในการอักเสบของไต และการรักษา ISL ของ AKI การศึกษานี้จะให้แนวทางใหม่ในการทำความเข้าใจกลไกการบาดเจ็บจากการอักเสบและกลยุทธ์การรักษาสำหรับ AKI

2. วัสดุและวิธีการ

2.1. ยาเสพติด

Isoliquiritigenin (purity>ร้อยละ 98 ) เป็นสารประกอบไอโซฟลาโวนที่สกัดจากรากชะเอมเทศ สูตรโมเลกุลของมันคือ C15H12O4 ในการศึกษานี้ ซื้อ isoliquiritigenin จาก Chengdu Bio purify Phytochemicals Ltd. (BP0787) ละลายใน DMSO 10 เปอร์เซ็นต์ (ST038, Beyotime, China) และหนูที่ได้รับ cisplatin ได้รับการฉีดเข้ากระเพาะอาหารในขนาด 7.5 มก./กก. และ 30 มก. /กก. ตามลำดับ

2.2. การแยกตัวของ BMDM

หนูเมาส์ C57BL/6 เพศผู้ที่มีอายุ 6e8 สัปดาห์ถูกเลือกเพื่อแยกเซลล์ BMDM แยกกระดูกขาหลังออกจากกระดูกโคนขาอย่างระมัดระวังและเอากล้ามเนื้อที่ติดอยู่ออก บดกระดูกใน PBS ด้วยครกจนสีของกระดูกเปลี่ยนจากสีแดงเป็นสีขาว ต่อจากนั้น รวบรวมส่วนลอยเหนือตะกอนและกรองผ่านกระชอน 70 ตามด้วยการหมุนเหวี่ยงที่ 1500 รอบต่อนาที เป็นเวลา 5 นาที เม็ดเลือดแดงแตกในของเหลวที่กรองด้วย 10 - PBS ซึ่งจากนั้นถูกกรองด้วยตัวกรองเซลล์ขนาด 40 มม. ฟักเซลล์ที่ได้รับในจานเพาะเลี้ยงขนาด 10 ซม. และกระตุ้นด้วย L929 supernatant 30 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 7 วัน เซลล์ BMDM ถูกกระตุ้นด้วย 100 ng/ml LPS เพื่อสร้างแบบจำลองเซลล์ที่มีการอักเสบ

2.3. การล้มลงและการแสดงออกที่มากเกินไปของ FPR2 ใน BMDM

FPR2 ถูกควบคุมโดยการทรานส์เฟกชันด้วย Zeta LifeAdvanced Transfection Reagent (AD600050, Zeta life, USA) และFPR2 siRNA เป็น BMDM (ลำดับของ FPR2 siRNA: Sense, 5'-GGAGAUGUGUAUUGUACAUTT-3'; Antisense, 5'-AUGUACAAUACA CAUCUCCTT-3'. Sangon Biotech ประเทศจีน). ในทำนองเดียวกัน pcDNA3.1-FPR2plasmid (สร้างโดย Fenghui Biotech ประเทศจีน) ถูกทรานส์เฟกเป็น BMDM ด้วย ZETA เพื่อแสดงออก FPR2 ในเซลล์มากเกินไป

2.4. การทดลองกับสัตว์

การทดลองกับสัตว์ทั้งหมดได้ดำเนินการตามแนวทางของคณะกรรมการจริยธรรมของมหาวิทยาลัยแพทย์ตะวันตกเฉียงใต้ หนู C57BL/6 ตัวผู้ 32 ตัวถูกซื้อจาก ChengduDaShuo Animal Co., Ltd ซึ่งถูกสุ่มแบ่งออกเป็น 4 กลุ่ม: กลุ่มหลอก, กลุ่มแบบจำลอง (กลุ่ม AKI ที่เหนี่ยวนำโดย Cisplatin), กลุ่มขนาดต่ำ ISL (7.5 มก./กก., กลุ่ม L), และกลุ่มที่ให้ยาสูง (30 มก./กก., กลุ่ม H) กลุ่มตัวอย่างถูกฉีดด้วย cisplatin 20 มก./กก. (P4394, Sigma-Aldrich, USA) ในวันแรก ในขณะที่กลุ่มที่ได้รับยาขนาดต่ำได้รับ ISL 7.5 มก./กก. และกลุ่มที่สูงได้รับ 30 มก./กก. ISL เป็นเวลา 3 วัน . หลังจาก 3 วัน เก็บซีรั่มและไตจากหนูที่สังเวย

2.5. การทดสอบการทำงานของไต

หลังจากเก็บซีรั่มของหนูแต่ละกลุ่มแล้ว ให้ปฏิบัติตามคำแนะนำของชุดเครื่องมืออย่างเคร่งครัดเพื่อตรวจหาระดับครีเอตินินในซีรัม (C011-2-1, Jiancheng Biotech, China) และยูเรียไนโตรเจน (C013-2-1, Jiancheng Biotech, จีน).

2.6. การย้อมสีทางพยาธิวิทยา

การย้อมสี H&E: ส่วนการดีแว็กซ์และการเติมน้ำเป็นประจำ การย้อมฮีมาทอกซิลินเป็นเวลา 5 นาที การล้างด้วยน้ำ RO การแยกแอลกอฮอล์ของกรดไฮโดรคลอริก 1 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 2 วินาที การล้างด้วยน้ำประปา การแช่เอทานอล 75 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 2 วินาที อีโอซินที่ละลายในแอลกอฮอล์ 1 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 30 วินาที , ล้างด้วยน้ำประปา, เอทานอล 100 เปอร์เซ็นต์ ขจัดน้ำออก 1 นาที, แห้ง, ไซลีนโปร่งใสเป็นเวลา 10 นาที, แห้ง, ผนึกด้วยสารยึดเกาะเป็นกลาง (36313ES60, Yepsen, China)

การย้อมสี PAS: วางชิ้นในสารละลายกรดเป็นระยะที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5e8 นาที ตามด้วยการล้างด้วยน้ำ RO สองครั้ง จากนั้นใส่ชิ้นเหล่านี้ลงในน้ำยา Schiff เป็นเวลา 10e20 นาที ล้างด้วยน้ำประปาเป็นเวลา 10 นาที ย้อมด้วย hematoxylin เป็นเวลา 1e2 นาที แห้งและโปร่งใสในแอลกอฮอล์ 100 เปอร์เซ็นต์ แห้ง ผนึกด้วยสารยึดเกาะที่เป็นกลาง

2.7. อิมมูโนเฟลฟลูออเรสเซนซ์

วางส่วนเนื้อเยื่อแช่แข็งใน PBS ล้างสองครั้ง ตรึงด้วยฟอร์มัลดีไฮด์ 10 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 10 นาที เนื้อเยื่อในส่วนต่างๆ ถูกบล็อกด้วยเซรั่มแพะ 5 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 30 นาที ตามด้วยฟักตัวด้วย FPR2 ต้านเมาส์ปฐมภูมิ (1:200, sc-57141, ซานตาครูซ, สหรัฐอเมริกา) และยาต้านหนู F4/80 แอนติบอดี (1:200, sc-52664, ซานตาครูซ, สหรัฐอเมริกา) ที่4 - C ค้างคืน ในวันถัดไป ล้างส่วนต่างๆ สองครั้งด้วย PBS ฟักด้วยแอนติบอดีทุติยภูมิ (1: 200) ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง และย้อมนิวเคลียสด้วย DAPI ภาพถูกจับโดยระบบ EVOS

2.8. เอลิซา

ความเข้มข้นของ IL-1b, IL-6, TNF-a ในซีรัมและส่วนเหนือตะกอนของเซลล์ถูกวิเคราะห์โดยใช้ชุดเครื่องมือ ELISA (EMC001B, EMC004, EMC102A, Neobioscience, ประเทศจีน) ตามคำแนะนำของชุดคิท

2.9. เรียลไทม์-PCR

สกัด RNA ทั้งหมดโดยใช้ชุดแยก RNA (Tiangen, China) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต หลังจากแปลง RNA ที่แยกออกมาเป็น cDNA ย้อนกลับแล้ว ให้เพิ่มไปยังระบบปฏิกิริยา 10 mL เพื่อดำเนินการ PCR แบบเรียลไทม์โดยระบบ Roche LightCycler 480 และระบบปฏิกิริยามีดังนี้: Eastep® qPCR MasterMix 2 -, 5 มล.; แม่แบบ cDNA 1 มล.; ไพรเมอร์ต้นน้ำ (10 mM), 0.5 mL; ไพรเมอร์ดาวน์สตรีม (10 mM), 0.5 mL; น้ำปราศจากนิวคลีเอส 3 มล. ไพรเมอร์ที่ใช้ในการทดลองนี้สังเคราะห์โดย Sangon (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) และลำดับของไพรเมอร์ทั้งหมดแสดงอยู่ในตารางที่ 1

2.10. หยดตะวันตก

RIPA lysis buffer ใช้ในการสกัดโปรตีนจากเนื้อเยื่อไตและเซลล์ BMDM หลังจากแยกโปรตีนใน SDS-PAGEgel 10 เปอร์เซ็นต์ และถ่ายโอนไปยังเมมเบรน PVDF บล็อกเมมเบรนใน BSA 5 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 1 ชั่วโมง และล้างด้วย TBST 3 ครั้ง ตามด้วยการฟักตัวเมมเบรนด้วยแอนติบอดีปฐมภูมิที่อุณหภูมิ 4 - C ค้างคืน (เตรียมไว้) ด้วย BSA 5 เปอร์เซ็นต์, 1: 1,000) จากนั้น เยื่อหุ้มเซลล์ถูกบ่มด้วยแอนติบอดีทุติยภูมิ (Peroxidase-Conjugated Goat anti-Mouse IgG (ZB-2305, 1:3000), Goat anti-Rabbit IgG (ZB-2301, 1:3000)) ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชม. ภาพถูกถ่ายโดยระบบภาพเจล (BIORAD, USA) ความเข้มของแถบสีเทาคำนวณโดยซอฟต์แวร์ Image J

2.11. การวิเคราะห์ทางสถิติ

ผลลัพธ์แสดงเป็นค่าเฉลี่ย±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน วิเคราะห์ข้อมูลด้วยการทดสอบ ANOVA แบบทางเดียว ตามด้วยการเปรียบเทียบแบบพหุคูณกับการทดสอบ LSD โดยใช้ซอฟต์แวร์ SPSS 210 P < 0.05="" ถือว่ามีนัยสำคัญทางสถิติ="" การทดลองแต่ละกลุ่มจะซ้ำกัน="" 3="">

3. ผลลัพธ์

3.1. Isoliquiritigenin ปรับปรุงการบาดเจ็บของไตที่เกิดจาก cisplatin และยับยั้งการอักเสบของไต

เพื่อตรวจสอบผล renoprotective และต้านการอักเสบของ isoliquiritigenin ใน AKI เราตรวจพบระดับของ Cre และ BUN ในซีรัมของแต่ละกลุ่ม ตลอดจนการแสดงออกและการหลั่งของ cytokine ที่อักเสบด้วย PCR และ ELISA แบบเรียลไทม์ นอกจากนี้ พยาธิสภาพของไตยังวัดโดยการย้อมสี H&E และ PAS ผลการวิจัยพบว่าเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มปกติ ระดับของ Cre และ BUN ในซีรัมจะเพิ่มขึ้นในรูปแบบ AKI ในขณะที่การรักษาด้วย ISL 7.5 มก./กก. หรือ 30 มก./กก. ช่วยลดระดับ Cre และ BUN ในซีรัมได้อย่างมีนัยสำคัญ ปริมาณ 30 มก./กก. มีผลการรักษาที่ดีที่สุด (รูปที่ 1A และ B) โดยเฉพาะอย่างยิ่ง 30 มก./กก. ของ ISL สามารถปรับปรุงความเสียหายของท่อไตตามเปอร์เซ็นต์เนื้อร้ายของท่อที่ประเมินได้ (รูปที่ 1C) ผลลัพธ์ของ ELISA และ PCR แสดงให้เห็นว่าการหลั่งของ IL-1b, IL-6 และ TNF-a ลดลงหลังจากการแทรกแซงของ ISL (7.5 มก./กก. และ 30 มก./กก.) และการแสดงออกของ mRNA ของ IL-1b, IL-6 และ TNF-a ยังลดลงอย่างน่าทึ่งโดยการบริหารให้ ISL 30 มก./กก. (รูปที่ 1DeI) ในทางกลับกัน ผลลัพธ์ของการย้อมสี H&E และ PAS แสดงให้เห็นว่าไตในกลุ่ม AKI แสดงความเสียหายของท่อไตอย่างรุนแรง เยื่อบุผิวของไตหลั่ง เซลล์ mesangial และ mesangial interstitial hyperplasia และการแทรกซึมของเซลล์อักเสบ น่าแปลกใจที่ ISL 30 มก./กก. สามารถย้อนกลับการบาดเจ็บของไตใน AKI ได้อย่างมีประสิทธิภาพ (รูปที่ 1J) ผลการวิจัยทั้งหมดเปิดเผยว่าการให้ ISL 7.5 มก./กก. และ 30 มก./กก. ISL สามารถปรับปรุงการบาดเจ็บที่ไตที่เกิดจากซิสพลาตินและยับยั้งการอักเสบของไต ซึ่ง ISL ขนาด 30 มก./กก. ให้ผลดีที่สุด

3.2. Isoliquiritigenin ลดการแสดงออกของ FPR2 ในแมคโครฟาจของหนู AKI

รายงานก่อนหน้านี้จำนวนมากระบุว่า FPR2 มีบทบาทสำคัญในการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันและโรคที่เกี่ยวข้องกับการอักเสบ อย่างไรก็ตาม ผลกระทบที่อาจเกิดขึ้นของ FPR2 ในไตของ AKI นั้นไม่ได้กำหนดไว้ ในการศึกษานี้ เราดำเนินการอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์เพื่อระบุตำแหน่งของ FPR2 และมาโครฟาจ (F4/80 ซึ่งเป็นผู้ผลิตมาโครฟาจ) ผลการศึกษาพบว่ามาโครฟาจ (จุดสีเขียว) แทรกซึมเข้าไปในไตของหนู AKI อย่างมากมาย ขณะที่ FPR2 (จุดแดง) อยู่ร่วมกับ F4/80 แสดงให้เห็นว่า FPR2 ส่วนใหญ่แสดงออกบนมาโครฟาจ และระดับของ FPR2 มีนัยสำคัญ เพิ่มขึ้นในไตของหนู AKI (รูปที่ 2A) เรายังตรวจพบการแสดงออกของ FPR2 mRNA และโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับการอักเสบโดย PCR แบบเรียลไทม์และการซับแบบตะวันตกในไต และผลที่ได้แสดงให้เห็นว่า ISL 30 มก./กก. สามารถควบคุม mRNA และระดับโปรตีนของ FPR2 ใน ไตของหนู AKI เทียบกับกลุ่ม ISL 7.5 มก./กก. (รูปที่ 2B, G, H) ที่สำคัญ ผลการทดสอบแบบตะวันตกพบว่า ISL ขนาด 30 มก./กก. ยังยับยั้งการกระตุ้นของ p-65 และควบคุมระดับโปรตีนของ TNF-a, IL-6 และ IL{{28} ที่ลดลง }b ในไตของหนู AKI (รูปที่ 2CeF) ข้อมูลทั้งหมดข้างต้นชี้ให้เห็นว่า ISL บรรเทาการอักเสบของไตของหนู AKI อาจเกี่ยวข้องกับการลดการแสดงออกของ FPR2 ในแมคโครฟาจ

3.3. Isoliquiritigenin ยับยั้งการแสดงออกและการหลั่งของ FPR2 และ cytokines ที่อักเสบในเซลล์ BMDM ที่เกิดจาก LPS

เพื่อตรวจหาผลกระทบของ ISL ต่อเซลล์ BMDM ที่เกิดจาก LPS เพิ่มเติม เราได้ตรวจสอบระดับ mRNA ของ FPR2 การแสดงออก และการหลั่งของไซโตไคน์ที่อักเสบในเซลล์ BMDM ที่เกิดจาก LPS หลังจากการบริหาร ISL โดย PCR และ ELISA แบบเรียลไทม์ ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่า ISL ลดระดับ mRNA ของ FPR2, IL-1b, IL-6 และ TNF-a (รูปที่ 3AeD) รวมถึงการหลั่งของ IL-1b , IL-6 และ TNF-a ในเซลล์เหนือตะกอนในเซลล์ในเซลล์ BMDM ที่เหนี่ยวนำโดย LPS (รูปที่ 3EeG) ผลลัพธ์ข้างต้นชี้ให้เห็นว่าการรักษา ISL ที่มีความเข้มข้น 40 mM ยับยั้งการอักเสบในเซลล์ BMDM ที่เกิดจาก LPS ได้อย่างมาก

3.4. Isoliquiritigenin ลดระดับโปรตีนของ FPR2 และ cytokines ที่อักเสบในเซลล์ BMDM ที่เกิดจาก LPS

นอกจากนี้เรายังตรวจพบระดับโปรตีนของ FPR2 และไซโตไคน์ที่มีการอักเสบในเซลล์ BMDM ที่เหนี่ยวนำโดย LPS หลังจากการบริหาร ISL โดยการซับแบบตะวันตก ข้อมูลแสดงให้เห็นว่าเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม ระดับโปรตีนของ FPR2, p-p65, IL-6 และ TNF-a เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในเซลล์ BMDM ที่เหนี่ยวนำโดย LPS และลดลงอย่างมากด้วยการบริหารให้ ISL 40 มิลลิโมลาร์ ( มะเดื่อ 4AeE) ผลลัพธ์เหล่านี้แสดงให้เห็นเพิ่มเติมว่า ISL สามารถยับยั้งการกระตุ้น NF-kB และลดระดับโปรตีนของไซโตไคน์ที่มีการอักเสบในเซลล์ BMDM ที่เหนี่ยวนำด้วย LPS

3.5. การยับยั้ง FPR2 ยับยั้งการอักเสบที่เกิดจาก LPS ในเซลล์ BMDM

ในการสำรวจบทบาทของ FPR2 ในการอักเสบของมาโครฟาจ เราใช้ siRNA เพื่อทำให้ FPR2 ล้มลงในเซลล์ BMDM ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่าการเปลี่ยนถ่าย siRNA สามารถยับยั้งการแสดงออกของ FPR2 ในมาโครฟาจที่เหนี่ยวนำโดย LPS (รูปที่ 5A) อย่างมีนัยสำคัญ และลดการแสดงออกของ IL-1b และ TNF-a อย่างมีประสิทธิผล (รูปที่ 5B และ C) นอกจากนี้ ผล Western blot พิสูจน์ว่าหลังจากการถ่าย siRNA ระดับโปรตีนของ FPR2 ถูกยับยั้งอย่างมีนัยสำคัญ โดยไม่คำนึงว่า LPS จะถูกกระตุ้นหรือไม่ (รูปที่ 5D และ E) โดยเฉพาะอย่างยิ่ง การล้มลงของ FPR2 ช่วยลดระดับโปรตีนของไซโตไคน์ที่อักเสบได้อย่างมีนัยสำคัญและยับยั้งการทำงานของการส่งสัญญาณ NF-kB (รูปที่ 5FeK) ซึ่งบ่งชี้ว่า FPR2 มีบทบาทสำคัญในการส่งเสริมการตอบสนองต่อการอักเสบในมาโครฟาจ นอกจากนี้ยังอาจเป็นเป้าหมายหลักของ ISL ในการยับยั้งการอักเสบของมาโครฟาจ

3.6. การแสดงออกที่มากเกินไปของ FPR2 ต่อต้านผลต้านการอักเสบของ isoliquiritigenin ในเซลล์ BMDM ที่เหนี่ยวนำโดย LPS

เพื่อตรวจสอบว่า ISL ระงับการอักเสบใน AKI ผ่านการยับยั้ง FPR2 ในมาโครฟาจ เราใช้ FPR2 overexpression plasmid เพื่อควบคุมการแสดงออกของ FPR2 ในเซลล์ BMDM ที่มีการอักเสบที่บำบัดด้วย ISL ดังแสดงในรูปที่ 6 ระดับโปรตีนและ mRNA ของ FPR2 เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญใน pcDNA3 1- กลุ่มที่ถ่าย FPR2 (รูปที่ 6A, B, G) และการแสดงออกที่มากเกินไปของ FPR2 ได้ยกเลิกผลการยับยั้งที่ 40 mM ISL ในการกระตุ้น p65 และระดับโปรตีนของ IL-1b, IL-6 และ TNF-a ในเซลล์ BMDM ที่เหนี่ยวนำโดย LPS (รูปที่ 6CeF) ในทำนองเดียวกัน FPR2 ที่มีการควบคุมขั้นสูงได้ขจัดผลการปราบปรามของ 40 mM ISL ต่อการแสดงออกและการหลั่งของไซโตไคน์ที่อักเสบในเซลล์ BMDM ที่เหนี่ยวนำโดย LPS เช่น IL-1b, IL-6 และ TNF-a (รูปที่ 6HeM) แสดงให้เห็นว่า ISL ลดการอักเสบในเซลล์ BMDM ที่เกิดจาก LPS โดยยับยั้ง FPR2

4. การอภิปราย

การบาดเจ็บที่ไตเฉียบพลันเป็นโรคทางคลินิกที่พบได้บ่อย มักจะนำไปสู่การทำงานของภูมิคุ้มกันบกพร่องของผู้ป่วยในระยะเวลาอันสั้น ในกรณีที่บาดเจ็บ สูญเสียเลือด อวัยวะเสียหาย ช็อก ไตเป็นอวัยวะที่อ่อนแอที่สุดและมีแนวโน้มที่จะเกิดการบาดเจ็บเฉียบพลันได้18e20 การศึกษาจำนวนมากยืนยันว่าการอักเสบมีบทบาทสำคัญในการพัฒนา AKI ซึ่งได้รับการพิจารณา เป็นเป้าหมายการแทรกแซงที่เป็นไปได้สำหรับการรักษา AKI ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา ยาจีนมีความก้าวหน้าอย่างมากในการแทรกแซงการอักเสบ รวมถึงเคอร์คูมิน เควอซิทิน นารินเจนิน และโมโนเมอร์อื่นๆ Iso-liquiritigenin เป็นสารประกอบฟลาโวนอยด์ซึ่งมีฤทธิ์ทางชีวภาพมากมาย เช่น ต้านการอักเสบ ต่อต้านอนุมูลอิสระ ต่อต้านเนื้องอก และผลกระทบอื่นๆ21 จากการศึกษาก่อนหน้านี้พบว่า ISL ยับยั้งการตายของเซลล์ การอักเสบ และการผลิตเมทริกซ์นอกเซลล์ในแองจิโอเทนซิน เซลล์ HK-2 ที่เหนี่ยวนำครั้งที่สอง 22 การศึกษาจาก Wu Yangping พบว่า ISL สามารถลดการควบคุม IL-6 และ IL-8 ได้โดยการยับยั้งการทำงานของ NF-kB ในรูปแบบโรคสะเก็ดเงิน ISL อาจเป็นตัวเลือกในการรักษาโรคสะเก็ดเงินและโรคอักเสบจากภูมิคุ้มกันทำลายตนเองอื่นๆ 23 ในทางกลับกัน การศึกษาเมื่อเร็วๆ นี้แสดงให้เห็นว่า ISL สามารถบรรเทา AKI ที่ติดเชื้อได้โดยการยับยั้งการโยกย้าย NF-kB p65 และยับยั้งการตอบสนองต่อการอักเสบ24 ในการศึกษานี้ เรา พบว่า ISL สามารถปรับปรุงการทำงานของไตในหนู AKI ที่เกิดจาก cisplatin ได้อย่างมีประสิทธิภาพ ลดความเสียหายของไต และยับยั้งการอักเสบของไต อย่างไรก็ตามกลไกที่แม่นยำของ ISL ในการยับยั้งการอักเสบนั้นไม่ชัดเจน

FPR2 อยู่ในตระกูลของตัวรับเคมีบำบัดและเป็น G-protein-coupled receptor ที่มีทรานส์เมมเบรน 7 เท่า การศึกษาก่อนหน้านี้พบว่า FPR2 เกี่ยวข้องกับกระบวนการทางสรีรวิทยาและพยาธิวิทยาที่หลากหลาย รวมทั้งการตอบสนองการป้องกัน การอักเสบ โรคเกี่ยวกับระบบประสาท เนื้องอก ความผิดปกติที่เกี่ยวข้องกับการเผาผลาญกลูโคสและไขมัน.25,26 FPR2 สามารถควบคุมได้ด้วยไลโปโพลีแซคคาไรด์ ปัจจัยการอักเสบต่างๆ และพรอสตาแกลนดิน E2 ในกระบวนการอักเสบซึ่งอาจมีบทบาทต่อต้านการอักเสบและการอักเสบได้27,28 ผลกระทบที่แตกต่างกันของ FPR2 ต่อการอักเสบขึ้นอยู่กับสภาพแวดล้อมและลิแกนด์ที่กระตุ้นเส้นทางการส่งสัญญาณที่แตกต่างกัน29 ในการศึกษานี้ เราพบว่า FPR2 ส่วนใหญ่แสดงออกในมาโครฟาจในคั่นระหว่างหน้าของไต และแสดงออกอย่างมากในไตของหนู AKI ที่เกิดจากซิสพลาติน ซึ่งบ่งชี้ว่า FPR2 ในมาโครฟาจอาจเกี่ยวข้องกับการตอบสนองต่อการอักเสบของมาโครฟาจในไต AKI หลักฐานที่เพิ่มขึ้นยืนยันว่ามีแมคโครฟาจจำนวนมากแทรกซึมเข้าไปในไตภายในเวลาไม่กี่ชั่วโมงหลังจากเกิด AKI และทำให้ไตเสียหายมากขึ้นจากการตอบสนองต่อการอักเสบ.30e33 ดังนั้นการควบคุมการอักเสบของมาโครฟาจที่แทรกซึมในไต AKI อาจลดลง เป็นแนวทางสำคัญในการปรับปรุง AKI และไม่ทราบว่า FPR2 เกี่ยวข้องกับกระบวนการนี้หรือไม่

ผลการทดลองของเราแสดงให้เห็นว่าการรักษาด้วย ISL ขนาดต่ำและขนาดสูงในหนู AKI ที่เหนี่ยวนำโดยซิสพลาติน ไม่เพียงแต่สามารถปรับปรุงโครงสร้างและการทำงานของไตเท่านั้น แต่ยังช่วยลดระดับของไซโตไคน์ที่อักเสบอีกด้วย นอกจากนี้ ISL ยังสามารถลดระดับโปรตีนของ FPR2 และกิจกรรมของ p65 ได้อย่างมีประสิทธิภาพ เนื่องจาก FPR2 ส่วนใหญ่แสดงออกในมาโครฟาจ จึงบ่งชี้ว่า ISL อาจปรับปรุงการอักเสบของไตโดยการยับยั้ง FPR2 ในมาโครฟาจ เนื่องจากบทบาทสำคัญของมาโครฟาจที่แทรกซึมในการอักเสบของไต เราจึงสกัดมาโครฟาจที่ได้มาจากไขกระดูกเบื้องต้นเพื่อตรวจหาผลการปรับปรุงของ ISL ต่อการอักเสบของมาโครฟาจและกลไกที่อาจเกิดขึ้นในหลอดทดลอง ผลลัพธ์ของเราแสดงให้เห็นว่า ISL สามารถยับยั้งการอักเสบของมาโครฟาจที่เกิดจาก LPS ได้อย่างมีนัยสำคัญ และควบคุมการแสดงออกและการหลั่งของปัจจัยในการอักเสบ IL-1b, IL-6 และ TNF-a ในเวลาเดียวกัน ISL ยังสามารถลดระดับโปรตีนของโมเลกุลที่มีการอักเสบในมาโครฟาจและยับยั้งการแสดงออกของ mRNA และระดับโปรตีนของ FPR2 ที่กระตุ้นโดย LPS ในการตรวจสอบบทบาทสำคัญของการยับยั้ง FPR2 ของการอักเสบด้วย ISL เราใช้ pcDNA3.1-FPR2plasmid เพื่อแสดงออก FPR2 มากเกินไป และพบว่าในมาโครฟาจที่มีการอักเสบที่รักษาด้วย ISL การแสดงออกที่มากเกินไปของ FPR2 จะต่อต้านผลการยับยั้งของ ISL ต่อการอักเสบ บ่งชี้ว่าการอักเสบของมาโครฟาจที่ควบคุมโดย ISL ส่วนใหญ่เกิดจากการยับยั้ง FPR2 โดยเฉพาะอย่างยิ่ง เราใช้แบบจำลอง AKI ที่เหนี่ยวนำโดยซิสพลาติน ในร่างกาย และเลือกแบบจำลองเซลล์อักเสบที่เกิดจาก LPS ในหลอดทดลอง แม้ว่ารีเอเจนต์การเหนี่ยวนำของทั้งสองโมเดลจะไม่สอดคล้องกัน แต่ปัจจุบันทั้งสองวิธีนี้ได้รับการยอมรับในการสร้างแบบจำลองการอักเสบ ในร่างกาย และ ในหลอดทดลอง ตามลำดับ เนื่องจากงานวิจัยนี้มุ่งเน้นไปที่การตอบสนองต่อการอักเสบ จึงเป็นไปได้ที่จะใช้สองวิธีนี้ในการศึกษาเดียว

ข้อมูลเหล่านี้พิสูจน์แล้วว่า ISL สามารถลดการแสดงออกของปัจจัยการอักเสบ ในร่างกาย และ ในหลอดทดลอง ได้อย่างมีประสิทธิภาพ และอาจทำได้โดยการยับยั้งการแสดงออกของ FPR2 ดังนั้น ISL จึงอาจทำหน้าที่เป็นยารักษาโรคที่มีศักยภาพสำหรับ AKI

รับทราบ

งานนี้ได้รับการสนับสนุนโดยโครงการร่วมทุน Luzhou - Southwest MedicalUniversity (2017LZXNYD-P01 และ 2018LZXNYD-PT03) มหาวิทยาลัยการแพทย์ตะวันตกเฉียงใต้ - โครงการร่วมโรงพยาบาลในเครือแพทย์แผนโบราณ (2018XYLH-034) โครงการก่อสร้างห้องปฏิบัติการหลักของมณฑลเสฉวน แพทยศาสตร์ (2018#53) โครงการวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีหลูโจว (2020-JYJ-56) และทุนพิเศษร่วมของเทศบาลลู่โจว - มหาวิทยาลัยการแพทย์ตะวันตกเฉียงใต้เพื่อการแนะนำความสามารถระดับสูง (ทีม Lan Hui-Yao ).

อ้างอิง

1. Soares DB, Mambrini JVM, Botelho GR, Girundi FF, Botoni FA, Martins MAP การรักษาด้วยยาและปัจจัยอื่นๆ ที่เกี่ยวข้องกับการพัฒนาของการบาดเจ็บที่ไตเฉียบพลันในผู้ป่วยวิกฤต: การศึกษาแบบภาคตัดขวางPeerJ. 2018;6:e5405. e-pub ก่อนพิมพ์ 2018/08/22

2. Sato Y, Yanagita M. เซลล์ภูมิคุ้มกันและการทำลายล้างใน AKI ถึง CKD ลุกลามAm J Physiol Ren Physiol. 2018;315(6):F1501eF1512. e-pub ก่อนพิมพ์ 2018/08/30.

3. Ram P, Mezue K, Pressman G, Rangaswami J. การบาดเจ็บที่ไตเฉียบพลันหลังการเปลี่ยนลิ้นหัวใจเอออร์ตาคลินิก คาร์ดิโอล. 2017;40(12):1357e1362. e-pub ก่อนพิมพ์ 2017/12/19

4. YH H, IJ C, YF L, YJ C, YH L, HW C. Lactoferrin มีส่วนช่วยในการป้องกันไตวายเฉียบพลันและภาวะไตวายในระยะแรกเภสัชกรรม. 2020;12(5):434.

5. Bonavia A, Singbartl K. การทบทวนบทบาทของเซลล์ภูมิคุ้มกันในการบาดเจ็บที่ไตเฉียบพลันPediatr Nephrol. 2018;33(10):1629e1639. e-pub ก่อนพิมพ์ 2017/08/13

6. Li J, Tang Y, Tang PMK และอื่น ๆ การปิดกั้นปัจจัยยับยั้งการย้ายถิ่นของมาโครฟาจช่วยป้องกันการบาดเจ็บที่ไตเฉียบพลันที่เกิดจากซิสพลาตินในหนูทดลองมอล เธอ. 2018;26(10):2523e2532. e-pub ก่อนพิมพ์ 2018/08/06.

7. Ferenbach DA, Sheldrake TA, Dhaliwal K และอื่น ๆ Macrophage/monocyte depletion โดย clodronate แต่ไม่ใช่ Diphtheria toxin ช่วยเพิ่มภาวะไตขาดเลือด / การบาดเจ็บซ้ำในหนูไต Int. 2012;82(8):928e933. e-pub ก่อนพิมพ์ 2012/06/08

8. JQ, JC, BM และอื่นๆ Isoliquiritigenin ยับยั้งหลอดเลือดโดยการปิดกั้นการแสดงออกของช่อง TRPC5การรักษาโรคหัวใจและหลอดเลือด. 2020;2020:1926249.

9. YG, XL, HY, LP, X C. Isoliquiritigenin ออกฤทธิ์ต่อต้านอนุมูลอิสระและต้านการอักเสบผ่านการกระตุ้นวิถี KEAP-1/Nrf2 และยับยั้งวิถี NF-kB และ NLRP3 ในเยื่อหุ้มปอดอักเสบจากคาราจีแนนอาหาร& การทำงาน. 2020;11(3):2522e2534.

10. LS, XY, XY, YW, Q Z. Isoliquiritigenin กระตุ้นการตายของเซลล์มะเร็งกระเพาะปัสสาวะ T24 ของมนุษย์ผ่านกลไกที่ไม่ขึ้นกับไคเนสที่ขึ้นกับ cyclinตัวอักษรมะเร็ง. 2017;14(1):241e249.

11. Wang JR, Luo YH, Piao XJ และอื่น ๆ กลไกที่เป็นสาเหตุของการตายของเซลล์ที่เกิดจาก isoliquiritigenin และการจับกุมวัฏจักรของเซลล์ผ่านวิถี ROS-mediated MAPK/STAT3/NF- kappaB ในเซลล์มะเร็งตับของมนุษย์ผู้พัฒนายาRes. 2019;80(4):461e470. e-pub ก่อนพิมพ์ 2019/01/31

12. AH, CS, YY และอื่น ๆ การประเมินฤทธิ์เอสโตรเจนของสายพันธุ์ชะเอมเทศ เปรียบเทียบกับฮ็อพที่ใช้ในพืชพฤกษศาสตร์สำหรับอาการวัยหมดประจำเดือนPLOSหนึ่ง. 2013;8(7):e67947.

13. LL L, PM T, CJ L และอื่น ๆ Mincle รีเซพเตอร์การรู้จำรูปแบบเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการรักษาฟีโนไทป์ของมาโครฟาจ M1 ในการทำให้ไตวายเฉียบพลันไต Int. 2017;91(3):587e602.

14. Schroder N, Schaffrath A, Welter JA และอื่น ๆ การยับยั้งตัวรับฟอร์มิลเปปไทด์ช่วยเพิ่มผลลัพธ์ในรูปแบบเมาส์ของโรคอัลไซเมอร์Jการอักเสบของระบบประสาท. 2020;17(1):131. e-pub ก่อนพิมพ์ 2020/04/26

15. Neymeyer H, Labels R, Reverte V และอื่น ๆ การกระตุ้นสัญญาณแอนเน็กซิน A1 ในไฟโบรบลาสต์ของไตทำให้เกิดผลต้านไฟโบรบลาสต์Acta Physiol. 2015;215(3):144e158. e-pub ก่อนพิมพ์ 2015/09/04

16. FC, MP, R A. ลำดับการส่งสัญญาณที่แตกต่างที่เกิดจากตัวรับฟอร์มิลเปปไทด์ 2 (FPR2) ที่แตกต่างกันInt เจ โมล วิทย์. 2013;14(4):7193e7230.

17. HW, XP, YG และอื่น ๆ สารประกอบที่ได้มาจากเห็ดหลินจือจะออกฤทธิ์ยับยั้งผ่านฟอร์มิลเปปไทด์รีเซพเตอร์ 2หน้า Pharmacol. 2020;11:337.

18. Wang Y, Cai J, Tang C, Dong Z. Mitophagy ในการบาดเจ็บที่ไตเฉียบพลันและการซ่อมแซมไตเซลล์. 2020;9(2). e-pub ก่อนพิมพ์ 2020/02/07

19. Sato Y, Takahashi M, Yanagita M. พยาธิสรีรวิทยาของความก้าวหน้าของ AKI ถึง CKDเซมิน เนโฟรล. 2020;40(2):206e215. e-pub ก่อนพิมพ์ 2020/04/19

20. Ronco C, Bellomo R, Kellum JA. การบาดเจ็บที่ไตเฉียบพลันมีดหมอ. 2019;394(10212): 1949e1964. e-pub ก่อนพิมพ์ 2019/11/30

21. PZ, HM J, JW Z และอื่น ๆ ผลการป้องกันของ isoliquiritigenin ต่อการบาดเจ็บที่สมองในหนูติดเชื้อโดยการลดทอนของ NF-kBในflเภสัชวิทยา. 2019;27(4): 809e816.

22. DX, WH, ST Y, YS T. Isoliquiritigenin บรรเทาอาการบาดเจ็บที่ไตจากความดันโลหิตสูงที่เกิดจาก Ang II ผ่านการยับยั้งการอักเสบของ cytokines และ apoptosis ที่เกิดจากความเครียดออกซิเดชันผ่านทาง Nrf2 และ NF-kBชีวเคมีชีวฟิสิกส์Res Coมมun. 2018;506(1):161e168.

23. YW, XC, XG และอื่น ๆ Isoliquiritigenin ป้องกันความก้าวหน้าของอาการคล้ายโรคสะเก็ดเงินโดยการยับยั้ง NF-kB และ proinflammatory cytokinesเจ โมลเมด(เบล). 2016;94(2):195e206.