การยับยั้งเกล็ดเลือดป้องกันการกระตุ้น NLRP3 Inflammasome และการบาดเจ็บของไตที่เกิดจากแบคทีเรีย

ติดต่อ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 อีเมล:audrey.hu@wecistanche.com

Marivee Borges-Rodriguez และคณะ

เชิงนามธรรม:

เกล็ดเลือด ตัวกลางไกล่เกลี่ยของการเกิดลิ่มเลือดในเซลล์ ถูกกระตุ้นในระหว่างภาวะติดเชื้อ และได้รับการยอมรับมากขึ้นว่าเป็นผู้ไกล่เกลี่ยของการตอบสนองทางภูมิคุ้มกัน การกระตุ้นเกล็ดเลือดเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในผู้ป่วยภาวะติดเชื้อเมื่อเปรียบเทียบกับผู้ป่วยที่ควบคุม ICU แม้จะมีความสัมพันธ์กันนี้ แต่บทบาทของเกล็ดเลือดที่กระตุ้นในการเกิดพยาธิสรีรวิทยาของภาวะติดเชื้อนั้นยังไม่ชัดเจน ก่อนหน้านี้เราได้สาธิตการกระตุ้นการอักเสบของอินฟลามาโซมที่คล้าย NOD รีเซพเตอร์ 3 (NLRP3) ในเกล็ดเลือดที่เกิดจากภาวะติดเชื้อในกระแสเลือดจากหนูที่เจาะด้วย cecal-ligation (CLP) เกล็ดเลือดที่กระตุ้นมีความสัมพันธ์กับอาการบวมน้ำที่ปอดและการบาดเจ็บของไตที่เพิ่มขึ้นในการควบคุม CLP เทียบกับ SHAM ในการศึกษานี้ เราตรวจสอบว่าการยับยั้งการกระตุ้นเกล็ดเลือดจะลดการกระตุ้น NLRP3 และการบาดเจ็บของไตและปอดในการตอบสนองต่อ CLP หรือไม่ CLP ดำเนินการในหนู Sprague Dawley (SD) เพศผู้และเพศเมีย (n=10/กลุ่ม) เพื่อกระตุ้นภาวะติดเชื้อในช่องท้องและหนู SHAM ที่ทำหน้าที่เป็นตัวควบคุม ชุดย่อยของ CLPanimals ถูกบำบัดด้วย Clopidogrel (10 มก./กก./วัน, CLP บวกกับ CLOP) เพื่อยับยั้งการกระตุ้นเกล็ดเลือด ประเมินค่า IL-1 และ IL-18 ในพลาสมา และประเมินเนื้อเยื่อ พยาธิวิทยาของไตและปอด และประเมินการทำงานของไต เกล็ดเลือดที่เปิดใช้งานมีค่า 7.8 ± 3.6 เปอร์เซ็นต์ใน Sham, 22 ± 6 เปอร์เซ็นต์ใน CLP และลดลงอย่างมีนัยสำคัญเป็น 14.5 ± 0.6 เปอร์เซ็นต์ใน CLP บวก CLOP (n=8–10/กลุ่ม, p < 0.05)="" .="" การรวมตัวของการอักเสบของ="" nlrp3="" ถูกยับยั้งในเกล็ดเลือดของสัตว์="" clp="" บวกกับ="" clop="" เทียบกับ="" clp="" การเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญของ="" il="" ในพลาสมาและไต-1="" และ="" il-18="" ในการตอบสนองต่อ="" clp="" ลดลงเมื่อใช้การรักษาด้วย="" clopidogrel="" การบาดเจ็บของไตแต่ไม่เกี่ยวกับจุลพยาธิวิทยาของปอดหรือการทำงานของไตได้รับการปรับปรุงให้ดีขึ้นใน="" clp="" plus="" clop="" เทียบกับ="" clp="" ข้อมูลเหล่านี้ให้หลักฐานว่าเกล็ดเลือดที่ถูกกระตุ้นอาจมีส่วนทำให้เกิดอาการบาดเจ็บที่ไตที่เกิดจากภาวะติดเชื้อในกระแสเลือด="" ซึ่งอาจเกิดจากการกระตุ้นด้วย="" nlrp3="" ในเกล็ดเลือด="">

คำสำคัญ:ภาวะติดเชื้อ; NLRP3; เกล็ดเลือด; คลอพิโดเกรล; การบาดเจ็บหลายอวัยวะ การเปิดใช้งานบุผนังหลอดเลือด;การอักเสบ

cistanche tubolosa extract : ต้านการอักเสบ

1. บทนำ

Sepsis เป็นการตอบสนองต่อการอักเสบของโฮสต์ที่เป็นอันตรายถึงชีวิตต่อเชื้อ [1] และเป็นหนึ่งในสาเหตุสำคัญของการเสียชีวิตในโลก ผู้ใหญ่อย่างน้อย 1.7 ล้านคนในอเมริกาเกิดภาวะติดเชื้อและเกือบ 270 คน000 คนอเมริกันเสียชีวิตจากภาวะติดเชื้อทุกปี [2] Sepsis นำไปสู่ความผิดปกติของหลายอวัยวะรวมถึงการบาดเจ็บที่ปอดเฉียบพลัน (ALI) [3],เฉียบพลันไตบาดเจ็บ(AKI) [4,5] ความผิดปกติของระบบโลหิตวิทยาและระบบประสาทส่วนกลาง เป็นต้น การเพิ่มจำนวนอวัยวะที่เกี่ยวข้องกับภาวะติดเชื้อนั้นสัมพันธ์กับอัตราการตายที่เพิ่มขึ้น [6] รูปแบบการรักษาในปัจจุบันมุ่งเน้นไปที่การดูแลแบบประคับประคอง อย่างไรก็ตามอัตราการตายยังคงสูง มีรายงานว่าประมาณ 35 ถึง 50 เปอร์เซ็นต์ของการเสียชีวิตในโรงพยาบาลเกิดจากภาวะติดเชื้อ [7] สิ่งสำคัญคือต้องระบุเป้าหมายการรักษาที่สามารถปรับปรุงอัตราการตายเนื่องจากภาวะติดเชื้อได้

เกล็ดเลือดได้รับการยอมรับว่ามีบทบาทในการสร้างภูมิคุ้มกัน [8,9] นอกเหนือจากบทบาทในการทำให้เลือดแข็งตัวและลิ่มเลือดอุดตัน ภาวะเกล็ดเลือดต่ำมักพบในภาวะติดเชื้อและคิดว่าจะเกิดขึ้นจากการกระตุ้นและการบริโภคเกล็ดเลือด อย่างไรก็ตาม บทบาทในกระบวนการเกิดโรคยังไม่ชัดเจน ภาวะเกล็ดเลือดต่ำมีความเกี่ยวข้องกับการพัฒนา (ความล้มเหลวของอวัยวะหลายส่วน) MOF และเพิ่มอัตราการเสียชีวิต 90-วัน [10–14] เกล็ดเลือดอาจเป็นส่วนสำคัญของการตอบสนองต่อการอักเสบต่อภาวะติดเชื้อ กลไกที่เป็นไปได้ซึ่งเกล็ดเลือดอาจนำไปสู่การบาดเจ็บหลายอวัยวะคือการกระตุ้นโปรตีน 3 อินฟลามาโซม (NLRP3) รีเซพเตอร์ที่คล้าย NOD NLRP3 เป็นตัวรับส่งสัญญาณภูมิคุ้มกันของเซลล์ที่นำไปสู่ความแตกแยกที่เป็นสื่อกลางของ caspase-1 และการกระตุ้น IL-1B และ IL-18 และมีส่วนเกี่ยวข้องในการเกิดโรคของกระบวนการอักเสบ เช่น โรคหอบหืด [15] ] โรคพาร์กินสัน [16] โรคลำไส้อักเสบ [17] และภาวะติดเชื้อ [18] การยับยั้งการรวมตัวของเชื้อ NLRP3 แสดงให้เห็นว่าสามารถป้องกันการบาดเจ็บของอวัยวะที่เกิดจากภาวะติดเชื้อได้ [19–23] ก่อนหน้านี้เราได้แสดงให้เห็นว่า NLRP3 inflammasome ถูกกระตุ้นในเกล็ดเลือดเพื่อตอบสนองต่อ cecal ligation-puncture (CLP) และเกี่ยวข้องกับการบาดเจ็บหลายอวัยวะในการตอบสนองต่อภาวะติดเชื้อในกระแสเลือดในหนูทดลอง CLP 72 ชั่วโมง ในการศึกษานี้ เราตั้งสมมติฐานว่าการปิดกั้นการกระตุ้นเกล็ดเลือดด้วย Clopidogrel (CLOP) จะลดการกระตุ้น NLRP3 ที่ทำให้เกิดการอักเสบ การบาดเจ็บที่ไตและปอดในการตอบสนองต่อภาวะติดเชื้อจากแบคทีเรียหลายชนิด

cistanche flavonoids: ต้านการอักเสบ

2. ผลลัพธ์

2.1. การเปิดใช้งานเพลทและ NLRP3 Inflflammasome Assembly

ด้วยการใช้โฟลว์ไซโตเมทรี เรากำหนดเปอร์เซ็นต์ของการกระตุ้นเกล็ดเลือดระหว่างกลุ่มต่างๆ เราพบว่าการกระตุ้นเกล็ดเลือดในหนู CLP เพิ่มขึ้น 22 ± 6 เปอร์เซ็นต์ เมื่อเทียบกับ SHAM 7.8 ± 3.6 เปอร์เซ็นต์ (p < 0.{{10}}5)="" และลดทอนลงใน="" clp="" บวก="" clop="" หนู="" 14.5="" ±="" 0.6="" เปอร์เซ็นต์="" (p=""><0.05, รูปที่="" 1)="" การประกอบ="" nlrp3="" inflammasome="" ในเกล็ดเลือดได้รับการประเมินโดยการแสดงภาพการโลคัลไลเซชันร่วมกันของ="" nlrp3="" ด้วยโปรตีนคล้ายจุดที่เกี่ยวข้องกับการตายของเซลล์="" (asc)="" โดยใช้อิมมูโนไซโตเคมี="" (รูปที่="" 2)="" co-localization="" ของส่วนประกอบ="" inflammasome="" ในเกล็ดเลือด="" clp="" นั้นมากกว่า="" 83="" เท่าเมื่อเทียบกับ="" sham="" platelets="" (รูปที่="" 2c)="" นอกจากนี้="" การรวมตัวของ="" inflammasome="" ลดลงในเกล็ดเลือดของ="" clp="" plus="" clop="" เมื่อเปรียบเทียบกับ="">

2.2. ไซโตไคน์ที่เกี่ยวข้องกับการอักเสบ

การกระตุ้น NLRP3 ส่งผลให้เกิดการปลดปล่อยไซโตไคน์ที่ก่อให้เกิดการอักเสบ IL-1 และ IL-18 ในรูปแบบที่ออกฤทธิ์ของพวกมัน เราวัดไซโตไคน์ทั้งสองแบบในพลาสมาปอด, และไตเป็นเนื้อเดียวกันของ SAM, CLP และ CLP บวกกับ CLOP ผ่าน ELISA IL ในพลาสมา{{0}} เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญจาก 9 ± 21 pg/mL ใน Sham เป็น 77 ± 31 pg/mL ใน CLP (p <{{10}}}.0 5,="" รูปที่="" 3a).="" การบริหารให้="" clopidogrel="" แสดงการลดลงของ="" il="" ในพลาสมา-1="" 48="" ±="" 38="" pg/ml;="" อย่างไรก็ตาม="" การลดลงไม่มีนัยสำคัญทางสถิติเมื่อเปรียบเทียบกับ="" clp="" (p="">< 0.05="" เทียบกับ="" sham)="" ในทำนองเดียวกัน="" il="" ของไต-1="" เพิ่มขึ้นใน="" clp="" 4="" ±="" 3="" pg/mg="" เมื่อเปรียบเทียบกับ="" sham="" 2.5="" ±="" 0.9="" pg/mg="" (p="">< 0.05,="" รูปที่="" 3b)="" การรักษาด้วย="" clopidogrel="" ลด="" il="" ของไตอย่างมีนัยสำคัญ-1เป็น="" 1.8="" ±="" 0.8="" pg/mg="" (p="">< 0.05)="" ในปอด="" il-1="" เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญจาก="" 70="" ±="" 16="" pg/mg="" ใน="" sham="" เป็น="" 106="" ±="" 36="" pg/mg="" ใน="" clp="" (p="">< 0.05)="" และไม่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญในสัตว์ที่ได้รับการรักษาด้วย="" clopidogrel="" (80="" ±="" 23="" pg="" g,="" รูปที่="">

ไม่พบพลาสม่า IL{{0}} ในหนูแรทแชม อย่างไรก็ตาม IL ในพลาสมาเฉลี่ย-18 คือ 26 ± 6 pg/mL ใน CLP ที่สำคัญ การบริหารให้ Clopidogrel ส่งผลให้ระดับ IL ในพลาสมาลดลง-18 (12 ± 9 pg/mL; p < 0.{{20}}5,="" รูปที่="" 3d)="" ในทำนองเดียวกัน="" il="" ของไต{{10}}="" เพิ่มขึ้นใน="" clp="" (396="" ±="" 65="" pg/mg)="" เมื่อเปรียบเทียบกับ="" sham="" (317="" ±="" 73="" pg/mg;="" p="">< 0.05)="" การรักษาด้วย="" clopidogrel="" ลด="" il="" ของไต-18เป็น="" 214="" ±="" 70="" pg/mg="" (p="">< 0.05,="" รูปที่="" 3e)="" ในปอด="" il-18="" เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญจาก="" 704="" ±="" 219="" pg/mg="" ใน="" sham="" เป็น="" 999="" ±="" 158="" pg/mg="" ใน="" clp="" (p="">< 0.05)="" และยังคงเพิ่มขึ้นในสัตว์ที่ได้รับการรักษาด้วย="" clopidogrel="" 1014="" ±="" 235="" pg/mg="" (="" p="">< 0.05="" เทียบกับ="" sham,="" รูปที่="">

2.3. การเปิดใช้งานบุผนังหลอดเลือด

เราวัดระดับของ angiopoietin ในพลาสมา{{0}} และเอนโดแคนเป็นเครื่องหมายของการกระตุ้นเยื่อบุผนังหลอดเลือดใน Sham, CLP และ CLP บวกกับกลุ่ม CLOP ผ่าน ELISA เอ็นโดแคนในพลาสมาเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญจาก 1234 ± 327 pg/mL ใน Sham เป็น 1978 ± 306 pg/mL ใน CLP (p < {{20}}.05="" เทียบกับ="" sham)="" endocan="" ลดลงอย่างมีนัยสำคัญเป็น="" 1521="" ±="" 283="" pg/ml="" ในหนูแรท="" clp="" ที่ได้รับการบำบัดด้วย="" clopidogrel="" (p="">< 0.05="" เทียบกับ="" clp,="" รูปที่="" 4a)="" พบผลลัพธ์ที่คล้ายกันสำหรับ="" angiopoietin-2="" angiopoietin-2="" เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญจาก="" 5603="" ±="" 2142="" pg/ml="" ใน="" sham="" เป็น="" 56,767="" ±="" 40,000="" pg/ml="" ใน="" clp="" (p="">< 0.05="" เทียบกับ="" sham)="" และลดลงอย่างมีนัยสำคัญในหนูที่ได้รับการรักษาด้วย="" clopidogrel="" เป็น="" 22,486="" ±="" 13,616="" pg/ml="" (p="">< 0.05="" เทียบกับ="" clp,="" รูปที่="">

2.4. การบาดเจ็บที่ปอด

การวิเคราะห์ทางจุลพยาธิวิทยาของปอดจากแต่ละกลุ่มแสดงให้เห็นว่าการแทรกซึมของนิวโทรฟิลเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญด้วยคะแนนเฉลี่ย {{0}}.6 ± 0.2 ในหนู CLP เมื่อเปรียบเทียบกับคะแนน {{6} }.10 ± {{10}}.10 ในหนูหลอก (p < 0.05)="" เรายังสังเกตด้วยว่าการให้="" clopidogrel="" กับหนู="" clp="" ไม่ได้เปลี่ยนแปลงการแทรกซึมของนิวโทรฟิล="" (คะแนน="" 0.5="" ±="" 0.4,="" รูปที่="" 5a)="" พบผลลัพธ์ที่คล้ายคลึงกันในความหนาของผนังถุงน้ำที่มี="" clp="" เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ="" โดยมีความหนาเฉลี่ย="" 1.2="" ±="" 0.1="" µm="" เทียบกับ="" 0.8="" ±="" 0.3="" µm="" ในหนูทดลอง="" (p="">< 0.05)="" การบริหารให้="" clopidogrel="" แก่หนู="" clp="" ไม่ได้ปรับปรุงความหนาของผนังถุง="" (รูปที่="">

2.5. อาการบาดเจ็บที่ไต

ตามที่เราได้เผยแพร่ไปก่อนหน้านี้ GFR ลดลงอย่างมากจาก 2.1 ± 0.8 มล./นาที/100 ก. แต่ในหนูหลอกเหลือ {{10}} .7 ± 0.2 มล./นาที/100 ก. แต่ในหนูแรท CLP (p < 0.05)="" การบริหารให้="" clopidogrel="" แสดง="" gfr="" ที่ปรับปรุงแล้วเป็น="" 1.3="" ±="" 0.5="" มล./นาที/100="" กรัม="" แต่เมื่อเทียบกับ="" clp="" อย่างไรก็ตาม="" ไม่มีนัยสำคัญทางสถิติ="" (รูปที่="" 6a)="" การวิเคราะห์ทางจุลกายวิภาคแสดงให้เห็นความเสียหายของไตที่เพิ่มขึ้นในกลุ่ม="" clp="" เมื่อเทียบกับ="" sham="" การบำบัดด้วย="" clopidogrel="" ทำให้การบาดเจ็บของไตดีขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในสัตว์="" clp="" (รูปที่="">

ประโยชน์ต่อสุขภาพของ cistanche: การทำงานของไตดีขึ้น

3. อภิปราย

Sepsis คือการตอบสนองของภูมิคุ้มกันที่ผิดปกติต่อเชื้อที่ติดเชื้อ ซึ่งมักเกี่ยวข้องกับความล้มเหลวของอวัยวะหลายส่วนและเป็นที่ทราบกันว่ามีอัตราการเสียชีวิตสูง จำเป็นต้องมีการระบุวิธีการรักษาแบบใหม่ที่อาจปรับเปลี่ยนการตอบสนองต่อการอักเสบและลดอัตราการตาย เกล็ดเลือดได้รับการสันนิษฐานว่ามีบทบาทในการปรับภูมิคุ้มกัน โดยธรรมชาติแล้ว น้ำตกการแข็งตัวของเลือดและการกระตุ้นเกล็ดเลือดเป็นจุดสนใจที่โดดเด่นของการตรวจสอบ การให้โปรตีน C ซึ่งเป็นเอนไซม์ภายในร่างกายที่ต้านการแข็งตัวของเลือด มีความเกี่ยวข้องกับการรอดชีวิตที่ดีขึ้นในผู้ป่วยที่มีภาวะติดเชื้อรุนแรง [24] ในญี่ปุ่น แนวทางปฏิบัติเกี่ยวกับภาวะติดเชื้อรวมถึงการใช้การบริหาร antithrombin แบบตั้งเวลาในผู้ป่วยที่ติดเชื้อ DIC และได้แสดงให้เห็นผลลัพธ์ที่ดีขึ้น [25] สิ่งนี้ชี้ให้เห็นว่าการยับยั้งการกระตุ้นเกล็ดเลือดอาจปรับปรุงผลลัพธ์ในภาวะติดเชื้อ การตอบสนองต่อการอักเสบระหว่างภาวะติดเชื้อนั้นซับซ้อนอย่างแน่นอนและอาจเกี่ยวข้องกับเส้นทางมากกว่าหนึ่งทาง ก่อนหน้านี้เราได้เผยแพร่ว่าเกล็ดเลือดจากแบบจำลองการติดเชื้อ CLP polymicrobial sepsis ได้เพิ่มการประกอบ/กระตุ้นของเกล็ดเลือด NLRP3 และเกี่ยวข้องกับการบาดเจ็บที่ปอดและไต [26] ในการศึกษานี้ เรากำหนดเพื่อกำหนดบทบาทของการยับยั้งเกล็ดเลือดในการตอบสนองต่อการอักเสบในแบบจำลองเดียวกันโดยใช้ Clopidogrel ตัวยับยั้ง P2Y12

ตามที่เผยแพร่ก่อนหน้านี้ การกระตุ้นของเกล็ดเลือดเพิ่มขึ้นเพื่อตอบสนองต่อภาวะติดเชื้อจากเชื้อโพลีจุลินทรีย์ในแบบจำลอง CLP เมื่อเทียบกับหนูหลอก เราพบว่าการให้ยา Clopidogrel ช่วยลดการกระตุ้นเกล็ดเลือดในหนู CLP และที่น่าสนใจคือ ยังสังเกตเห็นการลดลงของการรวมตัวของ NLRP3 inflammasome ในเกล็ดเลือด นอกจากนี้เรายังพบแนวโน้มในการลด IL-1B และ IL-18 ในพลาสมาของสัตว์ที่บำบัดด้วย Clopidogrel เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม CLP ในการศึกษาที่ตีพิมพ์ก่อนหน้านี้ เรารายงานว่าการยับยั้ง NLRP3 inflammasome โดยตรงกับ MCC950 ส่งผลให้ IL-1B และ IL-18 ลดลงในพลาสมา [27] นี่แสดงให้เห็นว่าการยับยั้งการกระตุ้นเกล็ดเลือดด้วย Clopidogrel และการลดลงของไซโตไคน์ที่อักเสบในแบบจำลองภาวะติดเชื้อนี้ถูกอาศัยกลไก NLRP3 บางส่วน ดังนั้น จำเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมเพื่อกำหนดเส้นทางการอักเสบที่เป็นสื่อกลางโดย NLRP3 ในเกล็ดเลือดให้ชัดเจนยิ่งขึ้น

Multi-organ failure (MOF) occurs frequently in sepsis. Previously published studies reported that in mice, the CLP model caused significant pulmonary damage; and depletion of platelets reduced CLP-induced edema and neutrophil recruitment in the bronchoalveolar space by >60 เปอร์เซ็นต์ [28]. เราได้เผยแพร่ก่อนหน้านี้ว่าการกระตุ้นเกล็ดเลือดที่เพิ่มขึ้นนั้นสัมพันธ์กับความผิดปกติของอวัยวะหลายส่วนและการบาดเจ็บในแบบจำลองหนู CLP [26] ข้อมูลของเราแสดงการลดลงอย่างมีนัยสำคัญใน IL-1 และ IL-18 ในไตของสัตว์ที่ได้รับ clopidogrel การรวมกันของภาวะไตวายเฉียบพลันและภาวะติดเชื้อในกระแสเลือดสัมพันธ์กับอัตราการเสียชีวิต 70 เปอร์เซ็นต์ เมื่อเทียบกับอัตราการเสียชีวิต 45 เปอร์เซ็นต์ในผู้ป่วยที่มีภาวะไตวายเฉียบพลันเพียงอย่างเดียว [29] อัตราการกรองของไต (GFR) เป็นตัวบ่งชี้ของไตการทำงานและลดลงพร้อมกับความเสียหายของไตที่เพิ่มขึ้น การรักษาด้วย Clopidogrel ช่วยเพิ่มอาการบาดเจ็บที่ไตในหนู CLP ซึ่งแสดงให้เห็นว่าการกระตุ้นเกล็ดเลือดอาจมีบทบาทในการพัฒนา AKI ที่เกิดจากภาวะติดเชื้อ

ประโยชน์ของสารสกัดจาก cistanche: ปรับปรุงการทำงานของไต

สอดคล้องกับบทบาทในการก่อให้เกิด MOF การพัฒนา ALI และกลุ่มอาการหายใจลำบากเฉียบพลัน (ARDS) เป็นเรื่องปกติในผู้ป่วยภาวะติดเชื้อ และมักส่งผลให้เกิดความต้องการเครื่องช่วยหายใจในผู้ป่วยกลุ่มนี้ หลักฐานแสดงให้เห็นว่าการกระตุ้นเกล็ดเลือดมีบทบาทสำคัญในการพัฒนา MOF ในผู้ป่วยติดเชื้อ [8,30] การศึกษาก่อนหน้านี้ได้สนับสนุนสิ่งนี้โดยการแสดงการแทรกซึมของนิวโทรฟิลที่ลดลงในปอดของหนูติดเชื้อที่เกิดจาก CLP หลังจากเกล็ดเลือดหมดลง [28] นอกจากนี้ Liverani และคณะ รายงานว่าหนูที่ได้รับการบำบัดด้วย Clopidogrel มีความทนทานต่อ ALI ที่เกิดจากภาวะติดเชื้อ [31] อย่างไรก็ตาม การศึกษาในปัจจุบันไม่สามารถแสดงหลักฐานที่มีนัยสำคัญของการลดลงของ IL- 1 การแทรกซึมของนิวโทรฟิล หรือความหนาของผนังถุงลมในปอด อาจเป็นเพราะการใช้สัตว์หลายสายพันธุ์ ปริมาณยา Clopidogrel และความแตกต่างอื่นๆ ในการออกแบบการทดลอง

การรั่วไหลของเส้นเลือดฝอยเป็นลักษณะเด่นของภาวะติดเชื้อ โปรตีน เช่น angiopoietin ปัจจัยการเจริญของหลอดเลือด-2 เป็นที่ทราบกันดีว่าส่งเสริมการอักเสบ ความผิดปกติของเยื่อบุผนังหลอดเลือด และเกี่ยวข้องกับการเสียชีวิตในโรงพยาบาลที่เพิ่มขึ้นในผู้ป่วยที่ติดเชื้อ [32] Endocan เป็นอีกหนึ่งเครื่องหมายของความผิดปกติของเซลล์บุผนังหลอดเลือดและเกี่ยวข้องกับความรุนแรงของการเจ็บป่วยและผลลัพธ์ของผู้ป่วยติดเชื้อ [33] เรายังพบว่าเครื่องหมายของการกระตุ้นและการทำงานของบุผนังหลอดเลือดเหล่านี้สูงขึ้นในแบบจำลอง CLP และลดลงในกลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วย Clopidogrel ในทำนองเดียวกัน เราสังเกตเห็นการเพิ่มขึ้นเล็กน้อย แต่ไม่มีนัยสำคัญใน GFR ในกลุ่มที่รับการรักษาด้วย clopidogrel นี่แสดงให้เห็นว่าการกระตุ้นเกล็ดเลือดมีผลต่อการตอบสนองต่อการอักเสบต่อภาวะติดเชื้อ

ในการศึกษานี้ การยับยั้งการกระตุ้นเกล็ดเลือดไม่ได้ส่งผลต่อการปรับปรุงการทำงานของอวัยวะอย่างมีนัยสำคัญ เป็นไปได้ว่าขนาดยาที่เลือก 10 มก./กก./วัน เพียงพอที่จะลดการกระตุ้นของเกล็ดเลือด, การกระตุ้น NLRP3, ไซโตไคน์ และเครื่องหมายของการกระตุ้นเยื่อบุผนังหลอดเลือด แต่ไม่ได้แปลว่าการลดทอนอาการบาดเจ็บที่ปอดหรือการปรับปรุงการทำงานของไต ลิเวอร์นี และคณะ ก่อนหน้านี้ใช้ขนาดเริ่มต้น 30/มก./กก./วัน ในหนูทดลองแบบ wild-type และหนูน็อคเอาท์ P2Y12 ซึ่งแปลได้ว่าเป็นการยับยั้งการบาดเจ็บของปอดที่เกิดจากภาวะติดเชื้อในกระแสเลือด [31] ในการศึกษาเดียวกัน ให้ยา Clopidogrel ก่อนการเหนี่ยวนำให้เกิดภาวะติดเชื้อ ความแตกต่างที่สำคัญนี้อาจอธิบายการขาดการปรับปรุงที่สำคัญในปอดหรือการทำงานของไตที่พบในการศึกษาของเรา

แม้ว่าการศึกษาในปัจจุบันจะชี้ให้เห็นถึงบทบาทในการกระตุ้นเกล็ดเลือดซึ่งมีส่วนทำให้เกิดการอักเสบและการกระตุ้นเยื่อบุผนังหลอดเลือดเพื่อตอบสนองต่อภาวะติดเชื้อ แต่ก็มีข้อจำกัดที่ควรสังเกต ประการแรก ในขณะที่วัดเครื่องหมายของการกระตุ้นเอ็นโดทีเลียม การทดลองเพิ่มเติมเพื่อประเมินการทำงานของบุผนังหลอดเลือดได้รับการประกัน นอกจากนี้ ยังไม่มีการควบคุมการมีส่วนร่วมของปัจจัยจากเกล็ดเลือดอื่นๆ ในการศึกษานี้ ดังนั้นจึงยังมีคำถามที่ยังไม่มีคำตอบว่าเกล็ดเลือดมีส่วนทำให้เกิดภาวะติดเชื้อจากการติดเชื้อและอวัยวะล้มเหลวได้อย่างไร

บทบาทของ Clopidogrel ในการลดอัตราการตายในภาวะติดเชื้อนั้นมีความขัดแย้งกับรายงานเกี่ยวกับการลด ARDS และการช่วยหายใจ แต่ไม่มีการลดลงในการตาย [34] จำเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมเพื่อกำหนดกลไกที่แน่นอนโดยที่เกล็ดเลือดมีส่วนทำให้เกิดการบาดเจ็บที่อวัยวะและความผิดปกติในภาวะติดเชื้อ การศึกษานี้สนับสนุนการสำรวจเพิ่มเติมของเกล็ดเลือดเพื่อเป็นเป้าหมายในการรักษาผู้ป่วยติดเชื้อ

ประโยชน์ต่อสุขภาพของ cistanche tubolosa: ปรับปรุงการทำงานของไต

4. วัสดุและวิธีการ

4.1. สัตว์

ใช้หนู Sprague Dawley ตัวเมียและตัวผู้ที่ซื้อจาก Envigo (อินเดียแนโพลิส IN สหรัฐอเมริกา) ขั้นตอนการทดลองทั้งหมดที่ดำเนินการในการศึกษานี้เป็นไปตามแนวทางของสถาบันสุขภาพแห่งชาติสำหรับการใช้และการดูแลสัตว์ โปรโตคอลทั้งหมดได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการการดูแลและการใช้สัตว์ประจำสถาบันที่ศูนย์การแพทย์มหาวิทยาลัยมิสซิสซิปปี้ การดูแลและการจัดการสัตว์เป็นไปตามแนวทางของสถาบันสุขภาพแห่งชาติสำหรับการรักษาสัตว์อย่างมีจริยธรรม

4.2. Cecal Ligation และการเจาะ

การทดลองในร่างกายทั้งหมดของเราดำเนินการในหนูเพศผู้และเพศเมียอายุ 12- ถึง 13-สัปดาห์ที่มีน้ำหนักประมาณ 225–325 กรัม สัตว์ถูกสุ่มแบ่งออกเป็นสองกลุ่ม: กลุ่มปฏิบัติการหลอก (SHAM, n=10) และกลุ่มเจาะ cecal ligation (CLP, n=10) ภายใต้การดมยาสลบด้วย isoflurane การผ่าตัด CLP ได้ดำเนินการในกลุ่มย่อยของหนูเพื่อทำให้เกิดภาวะติดเชื้อในช่องท้องตามที่เราได้อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [26,27] น้ำเกลืออุ่น (20 มล./กก., 37 ◦C) ถูกฉีดเข้าใต้ผิวหนังทันทีหลังการผ่าตัดเพื่อการช่วยชีวิต สัตว์ที่ทำการผ่าตัดหลอกได้รับการผ่าตัดแบบเดียวกันโดยไม่ต้องทำ ligation ที่ลำไส้ใหญ่หรือเจาะ หนูถูกวางกลับเข้าไปในกรงของพวกมันหลังการผ่าตัด และให้อาหารและน้ำโดยอิสระ ที่ 24 ชั่วโมงหลังการทำ CLP แผลก่อนหน้าถูกเปิดอีกครั้งและลำไส้ใหญ่ส่วนต้นที่เป็นเนื้อตายถูกตัดออกอย่างระมัดระวัง ช่องท้องถูกล้างด้วยน้ำเกลืออุ่น 10 มล. แผลในช่องท้องถูกปิดอีกครั้งเป็นชั้นๆ สัตว์ได้รับยาปฏิชีวนะในวงกว้างทุกวัน (Naxcel 5 มก./กก.) และได้รับยาแก้ปวดด้วย buprenorphine SR (1.2 มก./กก.) ตลอดช่วงการทดลอง 72 ชั่วโมง การรวมตัวของเกล็ดเลือดถูกขัดขวางโดยการบริหารให้รายวันของ Clopidogrel (10 มก./กก./วัน) เป็นเวลา 3 วันในกลุ่มย่อยของหนูแรท CLP (CLP บวก CLOP; n=12) ผ่านทางหลอดอาหารเป็นเวลา 3 วัน ในตอนท้ายของพิธีสาร สัตว์เหล่านี้ถูกสังเวยภายใต้การดมยาสลบ เก็บเลือดและเนื้อเยื่อเพื่อการวิเคราะห์เพิ่มเติม

4.3. การแยกเกล็ดเลือด

เลือดแดงถูกดึงเข้าไปในหลอดสุญญากาศของกรด-ซิเตรต-เดกซ์โทรสและหมุนเหวี่ยงที่ 200× ก. เป็นเวลา 20 นาทีเพื่อให้ได้พลาสมาที่มีเกล็ดเลือดสูง พลาสมาที่มีเกล็ดเลือดสูง (PRP) ผสมกับปริมาตรที่เท่ากันของบัฟเฟอร์ HEP (140 มิลลิโมล/ลิตร NaCl, 2.7 มิลลิโมล/ลิตร KCl, 3.8 มิลลิโมล/ลิตร HEPES, 5 มิลลิโมล/ลิตร EGTA, pH 7.4) ที่มี 1 ไมโครโมลาร์ PGE1 จากนั้นของผสมนี้ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 100× g เป็นเวลา 20 นาทีเพื่ออัดเม็ด RBC และ WBC ที่เหลือซึ่ง 40 ไมโครลิตรของส่วนลอยเหนือตะกอนถูกใช้เพื่อนับเกล็ดเลือด จากนั้น PRP ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 800× g เป็นเวลา 20 นาที ส่วนลอยเหนือตะกอนถูกทิ้งและเม็ดถูกแขวนลอยใหม่ในบัฟเฟอร์ของ Tyrode (134 mmol/L NaCl, 12 mmol/L NaHCO3, 2.9 mmol/L KCl, 0.34 mmol/L Na2HPO4,1 มิลลิโมล/ลิตร MgCl2, 10 มิลลิโมล/ลิตร HEPES) ที่มีกลูโคส 5 มิลลิโมล/ลิตร และ BSA 3 มก./มล.

4.4. Flow Cytometry

เกล็ดเลือดที่แยกออกมาใหม่ (106) ถูกแขวนลอยใหม่ในบัฟเฟอร์ของไทโรด 50 ไมโครลิตร เกล็ดเลือดถูกบ่ม (RT เป็นเวลา 30 นาที) ด้วยฟลูออเรสซินไอโซไธโอไซยาเนต (FITC) -คอนจูเกต CD41 ต้านหนูเมาส์ (โคลน MWReg30, BioLegend, ซานดิเอโก, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) และ Allophycocyanin(APC) คอนจูเกต CD62P ของแอนติเมาส์/หนู (Clone RMP) {9}} ไบโอเลเจนด์). เหตุการณ์อย่างน้อย 10 000 ต่อเกตได้มาโดยใช้ MACsQuant Analyzer 10 (Miltenyi Biotec, Auburn, CA, USA) และวิเคราะห์โดยใช้ซอฟต์แวร์ FlowLogic (Innovation, Sydney, Australia) เกล็ดเลือดถูกจำแนกความแตกต่างโดยการจับที่จำเพาะของแอนติ-CD41 และการกระเจิงด้านข้างและด้านข้างที่มีลักษณะเฉพาะ เกล็ดเลือดที่ย้อมเป็นบวกสำหรับ CD41 และ CD62P ถูกกำหนดให้เป็นเกล็ดเลือดที่ถูกกระตุ้น

4.5. กล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอลและแสง

เกล็ดเลือด (107) จากหนูแรท Sham หรือ CLP หรือถูกกระตุ้นโดยมีหรือไม่มี LPS ได้รับอนุญาตให้เกาะติดกับสไลด์เพอร์มานอกซ์ (Lab-Tek, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) เซลล์ที่ยึดติดถูกตรึงในฟอร์มาลิน 10 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 30 นาที ล้าง 3X ด้วย PBS เป็นเวลา 10 นาทีที่ RT และซึมผ่านด้วยเมทานอล 100 เปอร์เซ็นต์ที่เย็นจัดเป็นเวลา 10 นาที สไลด์ถูกบล็อกใน PBS ด้วยเซรั่มแพะและกระต่าย 10 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ล้างและบ่มด้วยแอนติ-NLRP3antibody ของกระต่าย (NBP2-12446, Novus Biologicals, Littleton, CO, USA) เป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่ RT จากนั้นล้างสไลด์และฟักไข่ด้วย Alexa Fluor 488 ที่ต่อต้านกระต่าย (A11070, Thermo FisherScientifific) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ RT สไลด์ถูกล้างอีกครั้งและฟักด้วย Alexa Fluor647-conjugated rabbit anti-ASC antibody (NBP1-78977AF647, Novus Biologicals) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง กลุ่มควบคุมถูกดำเนินการอย่างเหมือนกัน ยกเว้นการละเว้นของแอนติบอดีปฐมภูมิ การเตรียมการถูกติดตั้งใน Cytoseal 60 (Thermo Fisher Scientific) และวิเคราะห์ด้วยกล้องจุลทรรศน์สแกนคอนโฟกัสของ Nikon C1 (Nikon Inc., Melville, NY, USA) ภาพถูกถ่ายโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ Nikon Eclipse 55i ที่ติดตั้งกล้องสี Nikon-Fi1 (Nikon) และวิเคราะห์โดยใช้ซอฟต์แวร์ NIS-Elements D 3.0

4.6. การหาปริมาณไบโอมาร์คเกอร์ของการกระตุ้นเยื่อบุผนังหลอดเลือดและไซโตไคน์

ระดับของ Angiopoietin ในพลาสมา-2 (MANG20, R&D Systems, Minneapolis, MN, USA) และ Endocan-1 (MBS039900, MyBioSource, San Diego, CA, USA) ถูกวัดเป็นเครื่องหมายของความผิดปกติของเยื่อบุผนังหลอดเลือดโดย ELISA ตาม ไปยังโปรโตคอลของผู้ผลิต พลาสม่าไตและ IL ปอด-1 (RLB00, R&D Systems) และ IL-18 (ab213909, Abcam, Boston, MA, USA) ถูกหาปริมาณโดย ELISA ตามโปรโตคอลของผู้ผลิตไตและ lysates ของปอดถูกเตรียมด้วย BioPlex Cell Lysis Kit (171304011, BioRad, Hercules, CA, USA) ตามโปรโตคอลของผู้ผลิต

4.7. การประเมินอาการบาดเจ็บที่ปอด

Histological evaluation was performed on the lungs via hematoxylin and eosin (H&E)staining. A lung lobe was formalin-fixed. The tissue was subsequently paraffin-embedded and 5-µm sections were stained with (H&E). Sections were evaluated for neutrophil infiltration into the alveolar space. Five sections were scored in a blinded fashion on a scale of0–2 with 0 representing o neutrophils in the alveolar space, 1 representing 1–5 neutrophils in the alveolar space, and 2 representing >5 นิวโทรฟิลในพื้นที่ถุง รูปภาพถูกถ่ายโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ Nikon Eclipse 55i ที่ติดตั้งกล้องสี Nikon DS-Fi1 (Nikon Inc.) ที่ 40X โดยใช้ซอฟต์แวร์ NIS-Elements D 3.0 วัดความหนาของผนังถุงน้ำโดยใช้ซอฟต์แวร์ NIS-Elements D 3.0 ข้อมูลถูกทำให้เป็นมาตรฐานเพื่อค่าหลอกลวง

4.8. การประเมินการบาดเจ็บของไต

ไตwere collected, weighed, and fixed in a 10% buffered formalin solution. Paraffin sections (3 µm) were prepared and stained with Periodic acid-Schiff to assess the degree of glomerular injury on approximately 30 images per section, per rat. Thirtyglomeruli per section were scored in a blinded fashion on a 0–4 scale with 0 representing a normal glomerulus, 1 representing a 25% loss, 2 representing a 50% loss, 3 representing a 75% loss, and 4 representing >สูญเสียร้อยละ 75 ของเส้นเลือดฝอยในกระจุก รูปภาพถูกถ่ายโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ กล้อง และซอฟต์แวร์เดียวกันกับที่กล่าวไว้ก่อนหน้านี้

4.9. การวัดการทำงานของไต

ในระหว่างขั้นตอน CLP จะมีการสอดสายสวนเข้าไปในหลอดเลือดดำที่คอและตัดออกทางใต้ผิวหนังที่ด้านหลังของคอ สายสวนถูกล้างด้วยน้ำเกลือเฮปารินทุกวันจนกระทั่งสิ้นสุดโปรโตคอลสามวัน ในวันสุดท้ายของโครงการวิจัย หนูทดลองได้รับการดมยาสลบแบบสั้นๆ เพื่อประกอบอุปกรณ์ NIC-Kidney (MediBeacon; Mannheim ประเทศเยอรมนี) ที่ทำจากไดโอดเปล่งแสงสองตัวที่กระตุ้น FITC sinistrin ที่ 480 นาโนเมตร ซึ่งเป็นโฟโตไดโอดที่ปล่อยแสงที่ 531 นาโนเมตร ไมโครโปรเซสเซอร์ และแบตเตอรี่ อุปกรณ์นี้ติดอยู่ที่ด้านหลังของหนูโดยใช้แผ่นแปะกาวสองหน้า (MediBeacon) และยึดด้วยแจ็กเก็ตของหนูกับบริเวณโกนที่ด้านหลังของหนู หนูสามารถพักฟื้นในกรงที่แยกจากกันเป็นเวลา 15 นาทีและบันทึกการตรวจวัดพื้นฐาน หลังจากการตรวจวัดพื้นฐาน การฉีด FITC-sinistrin แบบเม็ดเดียว (น้ำหนักตัว 5 มก./100 กรัม; FTC-FS001, MediBeacon) จะถูกฉีดผ่านทางหลอดเลือดดำคอตามด้วยการฉีดน้ำเกลือที่ปราศจากเชื้อ ในช่วงระยะเวลาสองชั่วโมงหลังการฉีดโบลัส จลนพลศาสตร์การขับถ่ายของ FITC-sinistrin ถูกวัดผ่านผิวหนังและใช้ในการคำนวณค่าครึ่งชีวิตการกำจัด (t1/2) ของ FITC-sinistrin โดยใช้แบบจำลองแบบช่องเดียวด้วยซอฟต์แวร์ประเมินผล MDPLab (MediBeacon) เพื่อคำนวณ GFR จากปัจจัยการแปลงที่ได้รับการตรวจสอบแล้ว [35,36]

cistanche รีวิว: ปรับปรุงการทำงานของไต

4.10. การวิเคราะห์ทางสถิติ

การวิเคราะห์กำลังพิจารณาว่า n ของ 10–12 สัตว์/กลุ่มจะได้รับพลัง (1- ) ที่ 0.80 และความน่าจะเป็นของข้อผิดพลาดประเภทที่ 1 ( ) 0.05 เพื่อตรวจหาความแตกต่างอย่างน้อย 5-10 เปอร์เซ็นต์ในการกระตุ้นเกล็ดเลือดระหว่างหนู Sham และ CLP ข้อมูลทั้งหมดแสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SD ข้อมูลทั้งหมดได้รับการตรวจสอบเพื่อให้สอดคล้องกับการแจกแจงแบบเกาส์เซียนโดยการทดสอบภาวะปกติของ D'Agostino-Pearson การวิเคราะห์ทางสถิติดำเนินการด้วย ANOVA ทางเดียวด้วยการทดสอบการเปรียบเทียบหลายรายการของ Tukey เป็นการวิเคราะห์ภายหลังการวิเคราะห์ ค่า p < 0.05="">

ผลงานของผู้เขียน:

แนวความคิด, CAS, JMW และ DCC; ระเบียบวิธี JMW และ D.CC; การตรวจสอบ, OKT, JMW และ DCC; การวิเคราะห์อย่างเป็นทางการ, MB-R., CAS, OKT, JMW และ D.CC; การสืบสวน, MB-R., CAS, OKT, RWT, CHB, CAG, GAT, JMW และ DCC; ทรัพยากร JMW และ DCC; การจัดการข้อมูล, MB-R., CAS และ DCC; การเขียน—การเตรียมร่างต้นฉบับ, MB-R. และ CAS; การเขียน—ทบทวนและแก้ไข, MB-R., CAS, OKT, RWT, CHB, CAG, GAT, JMW และ DCC; การสร้างภาพ, MB-R., CAS, JMW และ DCC; การกำกับดูแล OKT และ DCC; การบริหารโครงการ DCC; การจัดหาเงินทุน DCC ผู้เขียนทั้งหมดได้อ่านและตกลงที่จะเผยแพร่ต้นฉบับของต้นฉบับ

เงินทุน:

งานวิจัยที่รายงานในเอกสารนี้ได้รับการสนับสนุนโดย National Institute Of GeneralMedical Sciences ของ National Institutes of Health ภายใต้รางวัลหมายเลข P20GM104357 และ P30GM103328 งานวิจัยนี้ได้รับทุนจาก National Heart Lung and Blood Institute of the National Institutes of Health ภายใต้ Award Numbers F31HL149257 (OKT), R00HL130456 (DCC) และ R01HL151407 (DCC) และ National Institute of Diabetes and Digestive และไตโรคของสถาบันสุขภาพแห่งชาติภายใต้รางวัลหมายเลข R01DK109133 (JMW) เนื้อหาเป็นความรับผิดชอบของผู้เขียนแต่เพียงผู้เดียวและไม่จำเป็นต้องแสดงถึงความคิดเห็นอย่างเป็นทางการของสถาบันสุขภาพแห่งชาติ

คำชี้แจงของคณะกรรมการพิจารณาสถาบัน:

ขั้นตอนการทดลองทั้งหมดที่ดำเนินการในการศึกษานี้ดำเนินการตามแนวทางของสถาบันสุขภาพแห่งชาติสำหรับการใช้และการดูแลสัตว์ โปรโตคอลทั้งหมดได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการการดูแลและการใช้สัตว์ประจำสถาบันที่ศูนย์การแพทย์มหาวิทยาลัยมิสซิสซิปปี้ (โปรโตคอล 1487A อนุมัติเมื่อ 07/02/2019) การดูแลและการจัดการสัตว์เป็นไปตามแนวทางของสถาบันสุขภาพแห่งชาติสำหรับการรักษาสัตว์อย่างมีจริยธรรม

คำชี้แจงเกี่ยวกับความพร้อมใช้งานของข้อมูล:

ข้อมูลทั้งหมดที่สนับสนุนผลการรายงานจะนำเสนอในต้นฉบับและมีให้อ่านฟรี

ผลประโยชน์ทับซ้อน:

ผู้เขียนไม่แสดงความขัดแย้งทางผลประโยชน์

อ้างอิง

1. Greco, E.; ลูเปีย อี.; บอสโก โอ.; วิซิโอ, บี.; Montrucchio, G. เกล็ดเลือดและความล้มเหลวของหลายอวัยวะในแบคทีเรีย อินเตอร์ เจ โมล. วิทย์. 2017, 18, 2200.
2. รี, C.; ดันเต้, อาร์.; Epstein, L.; เมอร์ฟี่ ดีเจ; ซีมัวร์ CW; อิวาชินา, ทีเจ; คาดรี, เอสเอส; แองกัส ดี.ซี.; แดนเนอร์ RL; ฟิโอเร, AE; และคณะ อุบัติการณ์และแนวโน้มของภาวะติดเชื้อในโรงพยาบาลในสหรัฐฯ โดยใช้ข้อมูลการเรียกร้องทางคลินิกเทียบกับการอ้างสิทธิ์ พ.ศ. 2552-2557 จามา 2017, 318, 1241–1249.
3. คิม, ไวโอมิง; Hong, SB Sepsis และ Acute Respiratory Distress Syndrome: อัปเดตล่าสุด ทูเบอร์ก. ทางเดินหายใจ อ. (โซล) 2016, 79, 53–57.
4. Alobaidi, R.; บาซู, RK; โกลด์สตีน, SL; Bagshaw, การบาดเจ็บที่ไตเฉียบพลันที่เกี่ยวข้องกับ SM Sepsis เซมิน. เนฟรอล 2015, 35, 2–11.
5. อัมโบร ฉัน; คนต่างชาติ, G.; Tinti, F.; มูเรซาน พี.; Mitterhofer, AP ความก้าวหน้าล่าสุดในพยาธิสรีรวิทยาและตัวบ่งชี้ทางชีวภาพของการบาดเจ็บที่ไตเฉียบพลันที่เกิดจากภาวะติดเชื้อ เจติดเชื้อ. 2016, 72, 131–142.
6. Bilevicius, E.; Dragosavac, D.; Dragosavac, S.; Araujo, S.; ฟัลเกา อลาบาม่า; Terzi, RG หลายอวัยวะล้มเหลวในผู้ป่วยติดเชื้อ บราซ. เจติดเชื้อ. อ. 2001, 5, 103–110.
7. หลิว วี.; เอสโกบาร์, จีเจ; กรีน เจดี; โซล เจ.; วิปปี้, A.; แองกัส ดี.ซี.; Iwashyna, TJ Hospital เสียชีวิตในผู้ป่วยที่มีภาวะติดเชื้อจาก 2 กลุ่มที่เป็นอิสระ จามา 2014, 312, 90–92.
8. แคทซ์ เจเอ็น; โกลัปปา, เคพี; Becker, RC Beyond thrombosis: เกล็ดเลือดอเนกประสงค์ในการเจ็บป่วยที่สำคัญ หน้าอก 2011, 139, 658–668
9. สมิท, เอสเอส; McEver, RP; เวย์ริช AS; มอร์เรล ซีเอ็น. ฮอฟแมน มร.; Arepally จีเอ็ม; ฝรั่งเศส, เพนซิลเวเนีย; Dauerman, เอชแอล; เบกเกอร์, อาร์ซี; Platelet Colloquium, P. เกล็ดเลือดทำหน้าที่เกินห้ามเลือด เจ. ทรัมบ์. ฮาโมสต์ 2552, 7, 1759–1766.
10. เดอ Stoppelaar เอสเอฟ; van 't Veer, C.; van der Poll, T. บทบาทของเกล็ดเลือดในภาวะติดเชื้อ ก้อน. ฮาโมสต์ 2014, 112, 666–677.
11. นาวาซ, ม.; ดิคเฟลด์, ต.; บ็อกเนอร์, C.; Fateh-Mogadam, S.; Neumann, FJ เกล็ดเลือดทำงานผิดปกติหลายอวัยวะในระบบบำบัดน้ำเสีย แพทย์แผนเร่งรัด 1997, 23, 379–385.
12. Layios, N.; Delierneux, C.; Hego, A.; Huart, เจ.; Gosset, C.; Lecut, C.; เมส, น.; เกิร์ตส์, พี.; Joly, A.; Lancellotti, P.; และคณะ การทำนายภาวะแบคทีเรียในผู้ป่วยวิกฤตโดยใช้เครื่องหมายกระตุ้นเกล็ดเลือดในการรับ ICU: การศึกษานำร่องในอนาคต แพทย์แผนเร่งรัด ประสบการณ์ 2017, 5, 32.
13. Russwurm, S.; วิคเกอร์ เจ.; ไมเออร์-เฮลล์มันน์, ก.; สแปงเกนเบิร์ก, P.; เบรเดิ้ล, D.; Reinhart, K.; Losche, W. การกระตุ้นเกล็ดเลือดและเม็ดเลือดขาวมีความสัมพันธ์กับความรุนแรงของความผิดปกติของระบบบำบัดน้ำเสีย ช็อค 2002, 17, 263–268
14. Vanderschueren, S.; เดอ Weerdt, A.; Malbrain, ม.; Vankerschaever, D.; ฟรานส์ อี.; วิลเมอร์, A.; Bobbaers, H. Thrombocytopenia และการพยากรณ์โรคในหอผู้ป่วยหนัก คริติคอล แคร์ เมด. 2000, 28, 1871–1876.
15. Theofanis, E.; เซมิเทโคลู, ม.; โมเรียนอส, ฉัน.; ศนิทัส, K.; Xanthou, G. การกำหนดเป้าหมาย NLRP3 Inflammasome Activation ในโรคหืดรุนแรง เจ. คลิน. เมดิ. 2019, 8, 1615.
16. ฮาค ฉัน; อัคเธอร์, ม.; จาคาเรีย, ม.; คิม ไอเอส; อาซัม, เอส.; Choi, DK กำหนดเป้าหมาย microglial NLRP3 inflammasome และบทบาทในโรคพาร์กินสัน เอ็มวี ความผิดปกติ 2020, 35, 20–33.
17. หลิวแอล.; ดง, วาย.; ครับ ม.; จิน, เอส.; หยาง เจ.; Joosse ฉัน; ซัน, วาย.; จางเจ.; Lazarev, M .; แบรนท์ อาร์เอส; และคณะ บทบาทการก่อโรคของการกระตุ้น NLRP3 Inflammasome ในโรคลำไส้อักเสบของทั้งหนูและมนุษย์ อาการลำไส้ใหญ่บวมของ J. Crohn 2017, 11, 737–750
18. แดเนียลสกี้, แอลจี; Giustina, ค.ศ.; Bonfante, S.; บาริเชลโล, ต.; Petronilho, F. The NLRP3 Inflammasome และบทบาทในการพัฒนา Sepsis การอักเสบ 2020, 43, 24–31.
19. หลัว วายพี; เจียงแอล.; คัง, ก.; เฟ, DS; เม้ง XL; น่าน, ซี.ซี.; แพน, SH; จ้าว นาย; Zhao, MY Hemin ยับยั้งการกระตุ้น NLRP3 inflammasome ในการบาดเจ็บที่ปอดเฉียบพลันที่เกิดจากภาวะติดเชื้อ ซึ่งรวมถึง heme oxygenase-1 อินเตอร์ อิมมูโนฟาร์มาคอล 2014, 20, 24–32.

20. มูน เจส; ลีเอส.; พาร์ค, แมสซาชูเซตส์; เสียมโป, II; ฮาสลิป, ม.; ลี พีเจ; หยุน, ม.; คิม ซีเค; Howrylak, เจ.; ไรเตอร์ เซาท์เวลส์; และคณะ การสังเคราะห์กรดไขมันที่เหนี่ยวนำโดย UCP2-ส่งเสริมการกระตุ้นการอักเสบของ NLRP3 ระหว่างภาวะติดเชื้อ เจ. คลิน. สำรวจ 2015, 125, 665–680.

[PubMed]21. ฆ้อง Z.; โจวเจ.; หลี่เอช.; เกา Y.; Xu, C .; จ้าว S.; เฉิน Y.; Cai, W. ; Wu, J. Curcumin ยับยั้งการกระตุ้น NLRP3 inflammasome และป้องกันการช็อกจากการติดเชื้อที่เกิดจาก LPS มล. Nutr. ความละเอียดของอาหาร 2015, 59, 2132–2142.
22. วัง, ป.; หวางเจ .; หลี่, วาย.; ช้าง, ร.; วู, เอช.; หลิน เจ.; Huang, Z. คาร์บอนมอนอกไซด์จากภายนอกช่วยลดการบาดเจ็บของไตเฉียบพลันที่เกิดจาก Sepsis และยับยั้งการกระตุ้น NLRP3 Inflammasome ในหนู อินเตอร์ เจ โมล. วิทย์. 2015, 16, 20595–20608.
23. Kalbitz, M.; ฟัตตาฮี, เอฟ.; เทรลเลอร์, เจเจ; จาจู, L.; มาลัน อีเอ; สโตน เอฟเอส; Huber-Lang, M.; รัสเซล เมกะวัตต์; Ward, PA Complement กระตุ้นการทำงานของหัวใจ NLRP3 inflammasome ในภาวะติดเชื้อ FASEB J. 2016, 30, 3997–4006.
24. เบอร์นาร์ด GR; วินเซนต์ เจแอล; ภายหลัง PF; ลาโรซา เอสพี; ไดเนาท์ เจเอฟ; โลเปซ-โรดริเกซ, A.; สไตน์รับ, เจเอส; การ์เบอร์ จีอี; เฮลเตอร์แบรนด์ เจดี; เอลี อีดับเบิลยู; และคณะ และโปรตีนของมนุษย์ลูกผสม CWEiSSsg ประสิทธิภาพและความปลอดภัยของรีคอมบิแนนท์ฮิวแมนแอคติเวต C สำหรับภาวะติดเชื้อรุนแรง น. อังกฤษ. เจ เมด 2001, 344, 699–709.
25. อิบาต.; Thachil, J. ปัจจุบันและอนาคตของการรักษาด้วยยาต้านการแข็งตัวของเลือดโดยใช้ antithrombin และ thrombomodulin สำหรับการแข็งตัวของเลือดในหลอดเลือดที่เกี่ยวข้องกับภาวะติดเชื้อ: มุมมองจากประเทศญี่ปุ่น อินเตอร์ เจ. เฮมาทอล. 2016, 103, 253–261.
26. คอร์เนลิอุส ดีซี; ไบค์, CH; ทราวิส โอเค; สีขาว DL; หนุ่ม CM; ออสติน เพียร์ซ ดับเบิลยู; ชิลด์ส แคลิฟอร์เนีย; พูเดล, บี.; Williams, JM NLRP3 กระตุ้นการอักเสบในเกล็ดเลือดเพื่อตอบสนองต่อภาวะติดเชื้อ ฟิสิออล ตัวแทน. 2019, 7, e14073.
27. คอร์เนลิอุส ดีซี; ทราวิส โอเค; แทรเมล, อาร์ดับบลิว; Borges-Rodriguez, M.; ไบค์, CH; เกรียร์, ม.; จาเชลลี แคลิฟอร์เนีย; Tardo, จอร์เจีย; Williams, JM NLRP3 การยับยั้งการอักเสบของเลือดจะลดการกระตุ้นของเกล็ดเลือดที่เกิดจากการติดเชื้อแบคทีเรียและป้องกันการบาดเจ็บหลายอวัยวะในการเจาะ cecal-ligation PLOS ONE 2020, 15, e0234039.
28. Asaduzzaman, M.; Lavasani, S.; เราะห์มาน, ม.; จางเอส.; บราวน์ OO; เจปป์สัน, บี.; Thorlacius, H. เกล็ดเลือดสนับสนุนการจัดหานิวโทรฟิลในปอดในภาวะติดเชื้อในช่องท้อง คริติคอล แคร์ เมด. 2552, 37, 1389–1396.
29. ชริเออร์, อาร์ดับบลิว; Wang, W. ภาวะไตวายเฉียบพลันและภาวะติดเชื้อ น. อังกฤษ. เจ เมด 2547, 351, 159–169.
30. วินเซนต์ เจแอล; ยางุชิ, A.; Pradier, O. ฟังก์ชั่นเกล็ดเลือดในภาวะติดเชื้อ คริติคอล แคร์ เมด. 2002, 30, S313–S317.
31. Liverani, E.; ริโก เอ็มซี; ไซแกนคอฟ, AY; คิลแพทริก LE; Kunapuli, SP P2Y12 Receptor ปรับการอักเสบที่เกิดจาก Sepsis อาร์เตอร์. ก้อน. วาส. ไบโอล. 2016, 36, 961–971. [ข้ามอ้างอิง]
32. ซินเนอร์ เจเอ็ม; บันดารี, วี.; แองเกิล, กม.; อีเลียส เจเอ; Siegel, MD Elevated serum angiopoietin 2 ระดับสัมพันธ์กับการเพิ่มขึ้น
การตายในภาวะติดเชื้อ ช็อต 2009, 31, 348–353
33. Scherpereel, A.; Depontieu, F.; Grigoriu, บี.; Cavestri, B.; ซิโคปูลอส, ก.; คนต่างชาติ, ต.; Jourdain, ม.; พูกิน เจ.; Tonnel, AB; Lassalle, P. Endocan เครื่องหมายบุผนังหลอดเลือดใหม่ในภาวะติดเชื้อในมนุษย์ คริติแคร์ เมด 2549, 34, 532–537.
34. วาเลริโอ-โรฮาส เจซี; แจฟเฟอร์, ไอเจ; กอ, ดีเจ; Gajic, O.; Cartin-Ceba, R. ผลลัพธ์ของภาวะติดเชื้อรุนแรงและผู้ป่วยภาวะช็อกจากการติดเชื้อในกระแสเลือดต่อการรักษาด้วยเกล็ดเลือดเรื้อรัง: การศึกษาตามรุ่นประวัติศาสตร์ คริติคอล ความละเอียดในการดูแล ปฏิบัติ 2013, 2013, 782573.
35. ยา เจ.; Issaeva, O.; Wonderer, S.; ซาดิค, ม.; แครนซ์ลิน, บี.; ฟิดเลอร์, เอฟ.; คลอตเซอร์, HM; เครเมอร์ ยู.; Gretz, N. ข้อมูลทางเภสัชวิทยาและความเป็นพิษของซินิสทรินที่ติดฉลากฟลูออเรสซีน ซึ่งเป็นเครื่องหมายใหม่สำหรับการวัด GFR ซุ้มประตู Naunyn-Schmiedeberg ฟา. 2549, 373, 204–211.
36. ยาเจ; Kraenzlin, B.; แจนเดอร์ เจ.; Sattelkau, ต.; ซาดิค, ม.; Kloetzer, HM; ดิวส์, C.; Kraemer, U.; Gretz, N. Sinistrin ที่ติดฉลาก Fluorescein เป็นเครื่องหมายของอัตราการกรองไต ยูโร เจ เมด เคมี. 2548, 40, 1056–1061.