เชิงนามธรรม

วัตถุประสงค์:Maclura pomifera (Rafin.) Schneider เป็นสายพันธุ์ที่แพร่หลายไปทั่วโลก ซึ่งมักนิยมเลี้ยงเพื่อวัตถุประสงค์ในการประดับ การศึกษาก่อนหน้านี้เปิดเผยว่าผลไม้ M. pomifera อุดมไปด้วยไอโซฟลาโวนอยด์ก่อนวัยอันควร แสดงกิจกรรมทางชีวภาพที่น่าสนใจ และมีประโยชน์ที่เป็นไปได้ โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อใช้เฉพาะที่ เมื่อพิจารณาว่าสารประกอบฟีนอลิกเป็นแหล่งที่จำเป็นในการพัฒนาผลิตภัณฑ์เครื่องสำอางต่อต้านริ้วรอย การศึกษานี้จึงตรวจสอบศักยภาพในการต่อต้านริ้วรอยของสารสกัดเมทานอล 80 เปอร์เซ็นต์ของ M. pomifera (MPM) โดยการประเมินฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระและเอนไซม์ที่ย่อยสลายเมทริกซ์นอกเซลล์

Glycoside ของ cistanche ยังสามารถเพิ่มกิจกรรมของ SOD ในเนื้อเยื่อหัวใจและตับ และลดปริมาณของ lipofuscin และ MDA ในแต่ละเนื้อเยื่อได้อย่างมีประสิทธิภาพ กำจัดอนุมูลออกซิเจนที่ทำปฏิกิริยาต่างๆ (OH-, H₂O₂ ฯลฯ) ได้อย่างมีประสิทธิภาพ และป้องกันความเสียหายของ DNA ที่เกิดขึ้น โดย OH-อนุมูล Cistanche phenylethanoid glycosides มีความสามารถในการกำจัดอนุมูลอิสระที่แข็งแกร่ง ความสามารถในการลดที่สูงกว่าวิตามินซี ปรับปรุงกิจกรรมของ SOD ในการระงับสเปิร์ม ลดปริมาณของ MDA และมีผลป้องกันบางอย่างต่อการทำงานของเยื่อหุ้มสเปิร์ม โพลีแซคคาไรด์ของ Cistanche สามารถเสริมการทำงานของ SOD และ GSH-Px ในเม็ดเลือดแดงและเนื้อเยื่อปอดของหนูทดลองที่ชราภาพซึ่งเกิดจาก D-galactose รวมทั้งลดปริมาณ MDA และคอลลาเจนในปอดและพลาสมา และเพิ่มเนื้อหาของอีลาสติน ส่งผลดีต่อ DPPH, ยืดเวลาการขาดออกซิเจนในหนูชรา, ปรับปรุงกิจกรรมของ SOD ในซีรั่ม, และชะลอการเสื่อมทางสรีรวิทยาของปอดในหนูชราทดลองที่มีความเสื่อมทางสัณฐานวิทยาของเซลล์, การทดลองแสดงให้เห็นว่า Cistanche มีความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระที่ดี และมีศักยภาพในการเป็นยาป้องกันและรักษาโรคชราทางผิวหนัง ในขณะเดียวกัน echinacoside ใน Cistanche มีความสามารถที่สำคัญในการกำจัดอนุมูลอิสระ DPPH และมีความสามารถในการกำจัดชนิดของออกซิเจนที่ทำปฏิกิริยาและป้องกันการเสื่อมสลายของคอลลาเจนที่เกิดจากอนุมูลอิสระ และยังมีผลการซ่อมแซมที่ดีต่อความเสียหายของแอนไอออนจากอนุมูลอิสระของไทมีน

คลิกที่อาหารเสริม Cistanche Tubulosa

【สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

วัสดุและวิธีการ:สำหรับการศึกษานี้ ประเมินศักยภาพการยับยั้ง 80 เปอร์เซ็นต์ MPM ต่อเอนไซม์ต่างๆ ที่เกี่ยวข้องกับกระบวนการชราภาพ เนื่องจากบทบาทที่ชัดเจนของความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันในวัยชรา จึงใช้การทดสอบสารต้านอนุมูลอิสระในหลอดทดลองเช่นกัน นอกจากนี้ โอซาจินยังถูกกำหนดให้เป็นไอโซฟลาโวนอยด์ที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพที่สำคัญของตัวอย่างโดยการวิเคราะห์ด้วยโครมาโตกราฟีแบบชั้นบางที่มีประสิทธิภาพสูง

ผลลัพธ์:ผลลัพธ์ของการทดสอบสารต้านอนุมูลอิสระทางกลไกที่แตกต่างกันแสดงให้เห็นถึงศักยภาพในการต้านอนุมูลอิสระที่สำคัญของสารสกัด มีการศึกษาศักยภาพในการยับยั้ง MPM ต่อเอนไซม์ไฮยาลูโรนิเดส คอลลาจีเนส และอีลาสเทส ซึ่งเชื่อมโยงโดยตรงกับการเร่งกระบวนการชรา และผลการวิจัยพบว่า MPM ยับยั้งเอนไซม์ข้างต้นอย่างชัดเจน MPM มีปริมาณฟีนอลและฟลาโวนอยด์ที่เป็นเอกลักษณ์ 113.92 ± 2.26 มก. เทียบเท่ากรดแกลลิก/กรัม และ 66.41 ± 0.74 มก. QE/กรัม ตามลำดับ เมื่อพิจารณาการทดสอบความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระทั้งหมด มีความเป็นไปได้ที่จะบอกว่า MPM เป็นสารต่อต้านริ้วรอยที่มีแนวโน้มดี

บทสรุป:ผลการศึกษานี้เปิดเผยว่าสารสกัดจากผลไม้ของ M. pomifera มีศักยภาพในการต่อต้านริ้วรอยอย่างมีนัยสำคัญและอาจใช้เพื่อจุดประสงค์นี้

คำสำคัญ:Maclura pomifera, ต่อต้านริ้วรอย, สารต้านอนุมูลอิสระ, HPTLC, osajin

การแนะนำ

ในทำนองเดียวกัน อวัยวะทั้งหมดรวมถึงผิวหนังของมนุษย์ต้องผ่านการเปลี่ยนแปลงทางสรีรวิทยาต่างๆ ตามอายุที่มากขึ้น1 ความชรามีอยู่สองประเภท: ความชราที่แท้จริงถูกควบคุมโดยพันธุกรรม และการชราภาพภายนอกเป็นผลตามธรรมชาติของการเปลี่ยนแปลงทางสรีรวิทยาเนื่องจากผลกระทบที่สร้างความเสียหายจากปัจจัยแวดล้อม เช่น รังสีอัลตราไวโอเลต (UV ) การแผ่รังสี สารพิษจากสารเคมี และการสูบบุหรี่1,2 การเสื่อมโทรมของโครงสร้างหลอดเลือดและต่อม การสูญเสียเนื้อเยื่อเส้นใย และการงอกใหม่ของเซลล์ที่ลดลงเป็นปัจจัยพื้นฐานของความชรา3 ซึ่งนำไปสู่การเพิ่มขึ้นในการเสื่อมสภาพของเนื้อเยื่อ รอยย่น และการลดลงของเมทริกซ์นอกเซลล์ (ECM ).4

ในฐานะที่เป็นอวัยวะที่ใหญ่ที่สุด ผิวหนังมีหน้าที่หลายอย่าง เช่น การป้องกัน ควบคุมอุณหภูมิของร่างกาย และตรวจจับประสาทสัมผัส5 ผิวหนังประกอบด้วยหนังกำพร้า หนังแท้ และเนื้อเยื่อใต้ผิวหนัง และเป็นปราการด่านแรกระหว่างร่างกายมนุษย์กับชั้นนอก สิ่งแวดล้อม 6,7 ECM เป็นหน่วยที่ใหญ่ที่สุดของผิวหนังชั้นหนังแท้และสนับสนุนการเจริญเติบโตและความยืดหยุ่นโดยการนำเสนอโครงร่างโครงสร้าง 8 คอลลาเจน อีลาสติน และไฟโบรเนกติน ซึ่งเกิดจากไฟโบรบลาสต์ของผิวหนัง ประกอบเป็น ECM และหลอมรวมเข้ากับโปรตีโอไกลแคน 5 คอลลาเจนคือ โปรตีนพื้นฐานประกอบด้วยประมาณ 25-35 เปอร์เซ็นต์ของปริมาณโปรตีนทั้งหมดในร่างกาย และพบได้ในพื้นที่นอกเซลล์ของเนื้อเยื่อเกี่ยวพันของสัตว์ประเภทต่างๆ3 สาเหตุสำคัญประการหนึ่งของการแก่ของผิวหนังและการเกิดริ้วรอยคือการเปลี่ยนแปลงของคอลลาเจน โครงสร้าง 1 อีลาสตินเป็นโปรตีนที่ให้ความยืดหยุ่นทางสรีรวิทยาที่ไม่เหมือนใครแก่ผิวหนัง และมีอยู่ในเนื้อเยื่อเกี่ยวพันหลายแห่ง 6 ความชุ่มชื้นของผิว และการทำให้ผิวเรียบเนียน ชุ่มชื้น และมีการหล่อลื่นเป็นปัจจัยสำคัญที่ป้องกันความชราของผิว และที่สำคัญคือ glycosaminoglycan (GAG) กรดไฮยาลูโรนิกมีบทบาทสำคัญในกิจกรรมเหล่านี้ 8 องค์ประกอบสำคัญเหล่านี้ถูกย่อยสลายโดยเอนไซม์ไฮยาลูโรนิเดส คอลลาจิเนส และอีลาสเตส จึงนำไปสู่การเร่งอายุของผิว นอกจากนี้ การสัมผัสกับจุลินทรีย์ มลพิษ รังสีไอออไนซ์ สารเคมี และสารพิษจะนำไปสู่การก่อตัวของสายพันธุ์ออกซิเจนปฏิกิริยา (ROS) และเป็นผลที่ตามมาที่เป็นอันตรายเร่งอายุผิว9 ROS สามารถเริ่มต้นเส้นทางโมเลกุลที่ซับซ้อน และเป็นผลให้คอลลาเจนเนส อีลาสเตส และกิจกรรมไฮยาลูโรนิเดสอาจเพิ่มขึ้น นำไปสู่การสลาย ECM ที่ตรวจพบได้และการปรับเปลี่ยนพื้นผิว 10 ด้วยเหตุผลที่กล่าวถึง สารธรรมชาติชนิดใหม่ซึ่งลดการสร้าง ROS และยับยั้งโปรตีเอสที่ย่อยสลาย ECM อาจชะลอกระบวนการชราของผิวได้ 11

Maclura pomifera (Rafin.) Schneider อยู่ในวงศ์ Moraceae หรือตระกูลหม่อน และเป็นที่รู้จักกันว่าต้นส้มโอเซจ ซึ่งปลูกกันเกือบทั่วโลก12 M. pomifera มีฤทธิ์ทางชีวภาพหลายอย่าง เช่น ต้านแบคทีเรีย ต้านเชื้อรา ต้านไวรัส ทำลายเซลล์ ต้านเนื้องอก estrogenic และยาต้านมาเลเรีย13 เนื่องจากสารไอโซฟลาโวนที่อยู่ในพรีไนเลต ได้แก่ โอซาจินและปอมมิเฟริน ซึ่งถือเป็นสารเมแทบอไลต์หลักของผลไม้14 ในการผลิตเครื่องสำอางต่อต้านวัย สารประกอบฟีนอลเป็นแหล่งธรรมชาติที่สำคัญ ดังนั้นจึงมีความสนใจเพิ่มขึ้นในการศึกษาพืชที่อุดมด้วยสารประกอบฟีนอล เช่น M. pomifera สำหรับกิจกรรมดังกล่าว การศึกษาก่อนหน้านี้พบว่าไอโซฟลาโวนของ Maclura เพิ่มระดับการแสดงออกของคอลลาเจน อีลาสติน และไฟบริลลินที่เทียบเท่าหรือเหนือกว่าเรตินอลที่มีความเข้มข้นเท่ากัน ดังนั้นจึงอาจสันนิษฐานได้ว่า Maclura isoflavones เป็นสารกระตุ้นโปรตีน ECM ที่มีศักยภาพ 15 เมื่อพิจารณาจากข้อมูลเหล่านี้ การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อตรวจสอบศักยภาพในการต่อต้านริ้วรอยของสารสกัดจากเมทานอล 80 เปอร์เซ็นต์ของ M. pomifera (MPM) โดยการสำรวจศักยภาพในการออกฤทธิ์ทางชีวภาพของสารต้านอนุมูลอิสระและการยับยั้ง เอนไซม์ย่อยสลาย ECM นอกจากนี้ การวิเคราะห์เชิงปริมาณของส่วนประกอบออกฤทธิ์ทางชีวภาพที่สำคัญของสารสกัด osajin ถูกวัดโดยโครมาโตกราฟีแบบชั้นบางประสิทธิภาพสูง (HPTLC) และการวิเคราะห์ปริมาณฟีนอลทั้งหมดและปริมาณฟลาโวนอยด์ทั้งหมดเพื่อความเข้าใจที่ถูกต้องยิ่งขึ้นของโปรไฟล์ฟีนอล ผลการวิจัยพบว่า M. pomifera อาจเป็นแหล่งผลิตภัณฑ์ต่อต้านวัยที่มีค่า

วัสดุและวิธีการ

เคมีภัณฑ์

Sigma Chemical Co. (เซนต์หลุยส์, มิสซูรี่, สหรัฐอเมริกา) เป็นผู้จัดหาเอนไซม์ สารเคมี และข้อมูลอ้างอิงทั้งหมดที่ใช้ในการทดสอบ คุณภาพของสารเคมีทั้งหมดอยู่ในระดับวิเคราะห์

วัสดุปลูก

ผลของ M. pomifera เก็บจาก Uşak, Türkiye ในเดือนพฤษภาคม 2020 Dr. Hilal Bardakcı ดำเนินการตามขั้นตอนการระบุพฤกษศาสตร์ของตัวอย่างพืช ตัวอย่างใบสำคัญของพืชถูกฝากไว้ที่ Acıbadem University, Herbarium of Faculty of Pharmacy (ACUPH 00002)

การเตรียมสารสกัด

ผลไม้ถูกแยกออกเป็นชิ้นเล็ก ๆ และผ่านเครื่องปั่น ผลไม้ (6.45 กก.) ถูกบดด้วยเมทานอล 80 เปอร์เซ็นต์ (MeOH) 3125 มล. โดยใช้อุปกรณ์เขย่าเป็นเวลาสามวันที่อุณหภูมิห้องในที่มืด Macerate ถูกกรองและทำขั้นตอนนี้ซ้ำสองครั้ง สารกรองที่ได้มาถูกรวบรวมเข้าด้วยกัน จากนั้น เมทานอลจะถูกระเหยในเครื่องระเหยแบบหมุน สารสกัดหยาบเมทานอลถูกทำให้แห้ง (ผลผลิตคือ 204.37 ก., 3.16 เปอร์เซ็นต์ ) และเก็บไว้ที่ระดับ -20 (MPM)

ขั้นตอนการหาปริมาณของสารออกฤทธิ์ทางชีวภาพที่สำคัญโดย HPTLC

สารเคมีและรีเอเจนต์ทั้งหมดที่ใช้เป็นเกรดวิเคราะห์ ซื้อคลอโรฟอร์ม (CHCl3) และเอทิลอะซีเตต (EtOAc) จากซิกมา-อัลดริช มาตรฐานของโอซาจินที่มีจำหน่ายในท้องตลาดซื้อมาจาก Sigma-Aldrich (SMB {{10}}0092) การวิเคราะห์ HPTLC ดำเนินการบนแผ่นซิลิกาเจล HPTLC ขนาด 20 ซม. × 10 ซม. 60 F254 (เมอร์ค ดาร์มสตัดท์ เยอรมนี) เนื้อหา Osajin ใน MPM ถูกกำหนดโดยระบบวิเคราะห์ CAMAG HPTLC เฟสเคลื่อนที่ที่ใช้ในการศึกษาปัจจุบันได้รับการอธิบายก่อนหน้านี้โดย Bozkurt et al.16 ระหว่างการแยกหลักการที่ใช้งานของ M. pomifera ใช้สารสกัด MeOH 10 มก./มล. เป็นสารละลายทดสอบการวิเคราะห์ สารละลายสต็อกมาตรฐาน (0.5 มก./ มล.) ของโอซาจินถูกเตรียมโดยใช้อะซิโตน 2 มล. สารละลายที่ใช้กับสารประกอบมาตรฐานที่มีความเข้มข้น 50 ไมโครกรัม/มิลลิลิตรถูกเตรียมโดยการเจือจางด้วยอะซีโตนจากสารละลายสต็อก แต่ละตัวอย่างถูกกรองผ่านตัวกรองเข็มฉีดยา 0.45 µm สารสกัด 10 ไมโครลิตรพร้อมกับสารละลายมาตรฐานที่มีความเข้มข้นแตกต่างกันอย่างน้อยห้าชนิด (3.3-4.7 ไมโครลิตร) ถูกนำมาใช้ในรูปแบบของแถบความยาว 8 มม. บนแผ่น HPTLC แก้วซิลิกาเจล 60 F254 ที่มี CAMAG Automatic TLC แซมเพลอร์ IV การพัฒนาดำเนินการใน CAMAG Automatic Developing Chamber-2 (ADC- 2) และเฟสเคลื่อนที่คือ CHCl3: EtOAc [8:2 (v/v)] ห้องถูกอิ่มตัวเป็นเวลา 10 นาทีและจานถูกปรับสภาพล่วงหน้าเป็นเวลา 5 นาทีก่อนการพัฒนา ความชื้นถูกควบคุมโดย ADC-2 โดยใช้ MgCl2 (33 เปอร์เซ็นต์ RH) เป็นเวลา 10 นาที การประเมินความหนาแน่นดำเนินการโดยใช้ CAMAG TLC Scanner IV ในโหมดเรืองแสง ขนาดสลิตถูกรักษาไว้ที่ 5 × 0.2 มม., ไมโคร และตั้งค่าความเร็วในการสแกนไว้ที่ 20 มม./วินาที เนื้อหามาตรฐานได้รับโดยการเปรียบเทียบพื้นที่ใต้เส้นโค้งลักษณะการทำงานของเครื่องรับ (AUCs) กับเส้นโค้งการสอบเทียบมาตรฐานที่ 280 นาโนเมตร การมีอยู่ของมาตรฐานในสารสกัดได้รับการยืนยันโดยการเปรียบเทียบทั้งปัจจัยการกักเก็บ (Rf) และสเปกตรัม UV ที่ซ้อนทับของสารสกัดและมาตรฐานแต่ละชนิด ปริมาณของโอซาจินถูกกำหนดโดยการเปรียบเทียบความเข้มของแสงสะท้อนแบบกระจายจากสารสกัดและเศษส่วนกับสารประกอบมาตรฐาน

วัดปริมาณโอซาจินในสารสกัดจากพืชดิบโดยใช้ HPTLC-densitometry ค่า Rf ของมาตรฐาน osajin พบว่าเป็น 0.556 การเกิดขึ้นของโอซาจินในตัวอย่างทดสอบได้รับการยืนยันโดยการเปรียบเทียบค่า Rf และการทับซ้อนกันของสเปกตรัมรังสียูวี (รูปที่ 1) การหาปริมาณทำได้โดยการเปรียบเทียบ AUC ของตัวอย่างกับเส้นโค้งการสอบเทียบที่ได้รับโดยใช้สารประกอบมาตรฐาน osajin ฟังก์ชันการปรับเทียบคือ y=2.268*10-8x ค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ (R) และค่าสัมประสิทธิ์การแปรผันของฟังก์ชันการสอบเทียบคือ 0.998 เปอร์เซ็นต์ และ 1.06 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ การวิเคราะห์ HPTLC แสดงให้เห็นว่า MPM มีโอซาจิน 0.22 เปอร์เซ็นต์ (w/w) ผลการศึกษา HPTLC แสดงไว้ในตารางที่ 1

การวิเคราะห์โปรไฟล์ฟีนอล

การทดสอบปริมาณฟีนอลทั้งหมด

การทดสอบดำเนินการเพื่อประเมินปริมาณฟีนอลทั้งหมดของตัวอย่างด้วยวิธีของ Folin-Ciocalteu ตามที่เคิร์ต-เซเลปและคณะใช้ก่อนหน้านี้17 20 ไมโครลิตรของสารละลายตัวอย่างที่เจือจางใหม่ผสมกับ 75 ไมโครลิตร Na2 CO3 (20 เปอร์เซ็นต์ ) และ 100 ไมโครลิตร FCR (สารทำปฏิกิริยา Folin-Ciocalteu) เจือจางด้วย H2 O (1:9) หลังจากการบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่ 45 องศา อ่านค่าการดูดกลืนแสงของสารผสมทางสเปกโตรโฟโตเมตริกที่ 765 นาโนเมตร ผลลัพธ์แสดงเป็นมิลลิกรัมของกรดแกลลิกเทียบเท่า (GAE) ต่อกรัมของสารสกัด

การทดสอบปริมาณฟลาโวนอยด์ทั้งหมด

การวัดปริมาณฟลาโวนอยด์ทั้งหมดของเศษส่วนทำตามวิธีที่รายงานก่อนหน้านี้โดย Bardakci et al.18 ผสมตัวอย่างอย่างรัดกุม 1 M CH3 COONa และ AlCl3 10 เปอร์เซ็นต์ที่เตรียมขึ้นใหม่ จากนั้นทำการบ่มส่วนผสมเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้องและในที่มืด หลังจากกระบวนการบ่ม มีการคำนวณค่าการดูดกลืนแสงที่ 415 นาโนเมตร ผลลัพธ์ถูกยืนยันเป็นมิลลิกรัมของเคอร์ซิตินเทียบเท่า (QE) ในตัวอย่าง 1 กรัม

การกำหนดฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระในหลอดทดลอง

2,2-ไดฟีนิล-1-พิคริลไฮดราซิล (DPPH) การทดสอบฤทธิ์กำจัดอนุมูล

ในการตรวจสอบฤทธิ์กำจัดอนุมูลของ DPPH นั้น ให้ผสมสารละลายตัวอย่างที่เจือจางใหม่ (ความเข้มข้นต่างๆ ที่เตรียมจากสารละลายสต็อก 1 มก./มล.) และสารละลาย DPPH เมทานอล (100 มิลลิโมลาร์) หลังจากช่วงเวลาการบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 45 นาที ค่าการดูดกลืนแสงจะอ่านได้ที่ 517 นาโนเมตร มีการใช้บิวทิเลตไฮดรอกซีโทลูอีน (BHT) เป็นสารประกอบอ้างอิงเพื่อให้ได้เส้นโค้งการสอบเทียบ ค่า IC50 ของผลลัพธ์แสดงเป็น µg/mL.19

การทดสอบฤทธิ์ลดสารต้านอนุมูลอิสระเฟอริก (FRAP)

ในการรับรีเอเจนต์ FRAP 25 มล. ของ 300 มิลลิโมลาร์ อะซิเตตบัฟเฟอร์ (pH 3.6), 2.5 มล. TPTZ [2,4,6-tris (2-pyridyl)-s-triazine] , และ 2.5 มล. ของ FeCl3 .6H2 O (20 มิลลิโมลาร์) ถูกผสม หลังจากนั้น ตัวอย่าง 10 มล. ถูกเติมลงใน FRAP reagent 260 มล. และเจือจางเป็น 300 มล. ด้วยน้ำกลั่นในจาน 96 หลุม หลังจากบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่ 37 องศา วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 593 นาโนเมตร BHT ถูกใช้เป็นสารประกอบอ้างอิง ใช้สารละลายเฟอรัสคลอไรด์ (0.252 มิลลิโมลาร์) เพื่อให้ได้กราฟมาตรฐานและได้ผลลัพธ์เป็น mM FeSO4 ในสารสกัดแห้ง 1 กรัม20

การทดสอบความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระที่ลดลงของ Cupric (CUPRAC)

การทดสอบ CUPRAC ได้รับการประเมินตามวิธีการที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้โดย Barak และคณะ 21 ผสมปริมาตร 10 มิลลิโมลาร์ CuSO4, นีโอคูปราอีน และแอมโมเนียมอะซีเตตบัฟเฟอร์ (85 มล.) เท่ากันในจานหลุม 96- หลังจากนั้น เติมน้ำกลั่น 51 มล. และสารละลายตัวอย่าง 43 มล. ลงในส่วนผสมตามลำดับ หลังจากการบ่มเป็นเวลา 20 นาที ค่าการดูดกลืนแสงจะอ่านได้ที่ 450 นาโนเมตร ผลลัพธ์ระบุว่าเทียบเท่ากรดแอสคอร์บิกมิลลิกรัมในสารสกัดแห้ง 1 กรัม

การหาค่าความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระทั้งหมด (TOAC)

การทดสอบความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดคำนวณตามวิธีฟอสโฟโมลิบดีนัมที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้โดย Barak et al.22 ขั้นแรก เพื่อให้ได้สารละลาย TOAC; ผสม 28 มิลลิโมลาร์ โซเดียม ฟอสเฟต โมโนเบสิก, 4 มิลลิโมลาร์ แอมโมเนียม โมลิบเดต และ 600 มิลลิโมลาร์ H2 SO4 จากนั้น สารละลาย TOAC 300 µL ผสมกับสารละลายตัวอย่าง 30 µL ในจานสุขภาพ 96 แผ่น หลังจากระยะบ่มที่อุณหภูมิ 95 องศา เป็นเวลา 90 นาที ค่าการดูดกลืนแสงจะอ่านได้ที่ 695 นาโนเมตร กรดแอสคอร์บิกถูกใช้เพื่อให้ได้เส้นโค้งมาตรฐานและผลลัพธ์ถูกคำนวณเป็นมิลลิกรัมของ Trolox ที่เทียบเท่าในสารสกัดแห้ง 1 กรัม

ยับยั้งการทำงานของเอ็นไซม์ที่เกี่ยวข้องกับความชราของผิวหนัง

ฤทธิ์ต้านคอลลาเจน

ในการวัดกิจกรรมการต่อต้านคอลลาเจนของ MPM สารละลายบัฟเฟอร์ไตรซีน 50 mM (pH: 7.5) ถูกเตรียม (400 mM NaCl และ 10 mM CaCl2 ) คลอสตริเดียม ฮิสโตไลคัม (ChC - EC. 3.4.23.3) ถูกใช้เป็นแหล่งของคอลลาจีเนส ซึ่งถูกละลายในสารละลายบัฟเฟอร์ไตรซีน 50 มิลลิโมลาร์ เพื่อให้ได้ความเข้มข้นเริ่มต้นที่ 0.8 U/mL 2 มิลลิโมลาร์ของ N-[3-(2-furyl) acryloyl]-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA) ที่ละลายใน tricine buffer ถูกใช้เป็นสารตั้งต้น สารสกัดถูกบ่มด้วยเอนไซม์คอลลาจีเนสในสารละลายบัฟเฟอร์เป็นเวลา 15 นาที ก่อนเติมสารตั้งต้นเพื่อเริ่มปฏิกิริยา ของผสมปฏิกิริยาสุดท้ายประกอบรวมด้วยปริมาตรรวม 150 ไมโครลิตร; บัฟเฟอร์ tricine, 0.8 mM FALGPA, 0.1 ยูนิตของ ChC และ 25 μL MPM น้ำถูกใช้สำหรับผลลัพธ์ที่ว่างเปล่า หลังจากเติมสารตั้งต้นแล้ว จะทำการวัดค่าการดูดกลืนแสงทันที การควบคุมเชิงบวกดำเนินการ epigallocatechin gallate (EGCG)23

ฤทธิ์ต้านอีลาสเทส

การประเมิน MPM สำหรับกิจกรรมต่อต้านอีลาสเทสดำเนินการโดยใช้สารละลายบัฟเฟอร์ 0.2 mM Tris-HCl (pH: 8.0) สารละลายสต็อกของอีลาสเตส (PE, EC 3.4.21.36) ที่ได้จากตับอ่อนของสุกรถูกเตรียมด้วยน้ำกลั่นที่ความเข้มข้น 3.33 มก./มล. N-ซัคซินิล-Ala-Ala-p-ไนโตรอะนิไลด์ (AAAPVN) ที่จะใช้เป็นสารตั้งต้นถูกละลายในสารละลายบัฟเฟอร์ (1.6 มิลลิโมลาร์) สารสกัด MPM ถูกบ่มด้วย PE 1 ไมโครกรัม/มิลลิลิตรเป็นเวลา 15 นาทีที่ 37 องศาก่อนการเติมสารตั้งต้น เมื่อสิ้นสุดการบ่มล่วงหน้า 15 นาที 0สารตั้งต้น AAAPVN .8 mM ถูกเติมลงในส่วนผสมของเอนไซม์ที่มีสารสกัดจากพืช 1 มก./มล. และทำการบ่มอีกครั้งเป็นเวลา 15 นาทีที่ 37 องศา ในขณะที่ใช้ EGCG 0.25 มก./มล. เป็นตัวควบคุมเชิงบวก ตัวอย่างทดสอบนี้มีปริมาณ EGCG เท่ากันแทนที่จะเป็น MPM และตั้งค่าการทดสอบซ้ำ หลังจากระยะฟักตัว วัดค่าที่จุดเวลาที่แตกต่างกัน 4 จุดเป็นเวลา 5 ถึง 30 นาทีโดยเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ไมโครเพลท SkyHigh ของ Thermo Scientific Multiskan ที่การกระตุ้น 365 นาโนเมตรและการปล่อยก๊าซ 410 นาโนเมตร24, 25

ฤทธิ์ต้านไฮยาลูโรนิเดส

กิจกรรมต่อต้านไฮยาลูโรนิเดสดำเนินการโดยการปรับเปลี่ยนวิธีการที่อธิบายโดย Kolayli et al.26 และ Lee et al.3 ประการแรก ไฮยาลูโรนิเดสที่ซื้อในเชิงพาณิชย์ (EC 3.2.1.35, Sigma-Aldrich) ถูกละลายใน 0 02 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH: 3.5) ที่มี NaCl และ bovine serum albumin จากนั้น กรดไฮยาลูโรนิก ซึ่งเป็นสารตั้งต้นที่เหมาะสมของเอนไซม์ ถูกเตรียมในอะซิเตตบัฟเฟอร์ (0.1 M, pH: 3.5) และทำให้พร้อมใช้งาน ส่วนผสมของการทดสอบประกอบด้วย MPM 20 µL ที่ความเข้มข้น 1 มก./มล., ไฮยาลูโรนิเดส 10 µL และ 60 µL ของ 0.1 M acetate buffer ถูกบ่มล่วงหน้าเป็นเวลา 20 นาทีที่ 37 องศา หลังจากเวลาบ่ม กรดไฮยาลูโรนิก 10 µL ถูกเติมลงในส่วนผสมและบ่มอีกครั้งที่อุณหภูมิ 37 องศาเป็นเวลา 20 นาที เมื่อสิ้นสุดเวลาฟักตัวทั้งหมด วัดค่าที่จุดเวลาต่างๆ โดยเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ไมโครเพลท SkyHigh ของ Thermo Scientific Multiskan ที่ 600 นาโนเมตร กลุ่มเปล่าไม่มีเอนไซม์ในการตั้งค่าการทดลอง ในขณะที่กลุ่มควบคุมไม่มีสารสกัด เปอร์เซ็นต์ของฤทธิ์ต้านไฮยาลูโรนิเดสคำนวณโดยใช้สมการต่อไปนี้:

กิจกรรมต่อต้านความชรา ( เปอร์เซ็นต์ )= [(Abs of control - Abs of sample)/ Abs of control] × 100

การวิเคราะห์ทางสถิติ

การทดลองต่อต้านอีลาสเทส ต่อต้านคอลลาเจนเนส และต่อต้านไฮยาลูโรนิเดสที่รวมอยู่ในการศึกษานี้ถูกทำซ้ำสามครั้งแยกกัน วิเคราะห์ความแตกต่างทางสถิติโดยใช้การทดสอบค่า t ของซอฟต์แวร์ GraphPad Prism 8 (p น้อยกว่าหรือเท่ากับ 0.05)

ผลลัพธ์และการสนทนา

การกำหนดศักยภาพในการต่อต้านริ้วรอย

อีลาสติน คอลลาเจน และกรดไฮยาลูโรนิกเป็นส่วนประกอบของ ECM ซึ่งมีบทบาทสำคัญในการทำให้ผิวดูอ่อนเยาว์ อีลาสตินเป็นโปรตีนที่สำคัญในการรักษาคุณสมบัติความยืดหยุ่นของผิวหนัง ดังนั้น การลดลงของอีลาสตินใน ECM นำไปสู่การเร่งกระบวนการชราภาพ 27 บทความก่อนหน้านี้บ่งชี้ถึงความเชื่อมโยงโดยตรงระหว่างรอยย่นและความชราของผิวหนังด้วยปริมาณอีลาสตินที่ลดลง28 กรดไฮยาลูโรนิกเป็นโมเลกุล GAG ที่ไม่ชอบน้ำ ซึ่งถูกดีโพลิเมอร์ผ่านไฮยาลูโรนิเดส กรดไฮยาลูโรนิกมีความสำคัญต่อการรักษาความเรียบเนียนและความชุ่มชื้นของผิว ดังนั้นจึงแสดงให้เห็นว่าการสลายตัวที่มากเกินไปนำไปสู่การแห้งและรอยย่นของผิวหนัง29 ตลอดกระบวนการชราตามกาลเวลา ระดับคอลลาเจนที่ลดลงจะทำให้ชั้นหนังแท้บางลง ซึ่งถือเป็นข้อบ่งชี้ที่ชัดเจนภายใต้การตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์3{{23 }} มีการระบุอย่างชัดเจนว่าการชะลอการสลายตัวของคอลลาเจนผ่านสารยับยั้งคอลลาเจนเนสส่งผลให้โครงสร้างผิวเหี่ยวย่นและแก่ก่อนวัยเป็นระยะ 5 เมื่อพิจารณาจากข้อมูลนี้ สารที่ยับยั้งอีลาสเทส คอลลาจีเนส และไฮยาลูโรนิเดสมีศักยภาพสำคัญสำหรับผลิตภัณฑ์ต่อต้านริ้วรอย การศึกษาก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่าไอโซฟลาโวนอยด์หลายชนิดแสดงฤทธิ์ยับยั้งทางชีวภาพอย่างมีนัยสำคัญต่อเอนไซม์ดังกล่าว Addotey et al.31 แสดงให้เห็นว่าไอโซฟลาโวนอยด์ที่แตกต่างกัน 4 ชนิดยับยั้งไฮยาลูโรนิเดสได้ถึง 61.2 เปอร์เซ็นต์ Kim et al.32 ได้แสดงให้เห็นว่า isoflavonoid ที่แยกได้จาก Glycyrrhiza uralensis Fisch., licoricidine มีฤทธิ์ยับยั้งอีลาสเทสอย่างมีนัยสำคัญ ค่า IC50 ของชะเอมเทศคำนวณเป็น 61.2 ± 4.2 µM ในขณะที่กรดโอลีโนลิกคำนวณเป็น 131.4 ± 11.4 เป็นสารประกอบอ้างอิง ผลลัพธ์ระบุว่าไอโซฟลาโวนอยด์อาจยับยั้งเอนไซม์อีลาสเตส สอดคล้องกับการศึกษาข้างต้น Kim et al.33 ศึกษาไอโซฟลาโวนอยด์พรีไนเลตที่แตกต่างกันเก้าชนิด ซึ่งเป็นโครงสร้างที่เกี่ยวข้องอย่างมากกับโอซาจิน ที่แยกได้จากรากของ Flemingia philippinensis Merr & รอล์ฟ นักวิจัยรายงานว่าไอโซฟลาโวนที่อยู่ในพรีไนเลต 5 ชนิดมีฤทธิ์ยับยั้งที่มีศักยภาพในการต่อต้านนิวโทรฟิลอีลาสเตส โดยค่า IC50 มีความหลากหลายระหว่าง 1.9-12.0 µM ในขณะที่ค่า IC50 ของกรดโอลีโนลิกอยู่ที่ 28.4 µM ในการศึกษาอื่น Ergene Öz et al. 34 ตรวจสอบกิจกรรมการยับยั้ง ในหลอดทดลอง ของไอโซฟลาโวนอยด์ห้าชนิดที่แยกได้จากรากของ Ononis spinoza L. เทียบกับ hyaluronidase, collagenase และ elastase มีรายงานว่ากิจกรรมการยับยั้งไฮยาลูโรนิเดสของไอโซฟลาโวนอยู่ระหว่าง 22.08-45.58 เปอร์เซ็นต์ ในขณะที่ที่ความเข้มข้นเดียวกัน กรดแทนนิกแสดงการยับยั้ง 88.32 เปอร์เซ็นต์ ผลการยับยั้งเอนไซม์คอลลาจิเนสคำนวณได้ระหว่าง 20.41- 28.49 เปอร์เซ็นต์ และวัดการยับยั้งเอนไซม์อีลาสเทสได้ที่ 20.47-46.88 เปอร์เซ็นต์ EGCG ถูกใช้เป็นข้อมูลอ้างอิงสำหรับทั้งการตรวจวิเคราะห์และกิจกรรมการยับยั้งที่ความเข้มข้นเดียวกันโดยวัดได้ 41.18 เปอร์เซ็นต์ และ 84.64 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ การศึกษาอื่นตรวจสอบการรักษาเฉพาะที่ของ pomiferin ที่แยกได้โดยตรงจาก M. pomifera 15 Pomiferin เป็นไอโซฟลาโวนอยด์ prenylated ซึ่งพบได้ในผลไม้ M. pomifera และโครงสร้างโมเลกุลของมันคล้ายกับของ osajin อย่างมาก ผู้วิจัยรายงานว่า pomiferin แสดงกิจกรรมการกระตุ้นโปรตีน ECM ที่มีศักยภาพโดยการเพิ่มคอลลาเจนและอิลาสตินซึ่งเหนือกว่าหรือเทียบเท่ากับสารประกอบอ้างอิงคือเรตินอล การศึกษาที่กล่าวถึงทั้งหมดเปิดเผยว่าไอโซฟลาโวนเป็นสารยับยั้งเอนไซม์เหล่านี้ในระดับปานกลางถึงสูง และมีศักยภาพที่สำคัญในฐานะสารต่อต้านริ้วรอยตามธรรมชาติ

ในการศึกษานี้ได้ทำการตรวจสอบกิจกรรมการยับยั้งเอนไซม์ hyaluronidase, collagenase และ elastase ของ MPM ในหลอดทดลองเพื่อหาศักยภาพในการต่อต้านริ้วรอย การสอบวิเคราะห์เปรียบเทียบดำเนินการสำหรับการสอบวิเคราะห์การยับยั้งคอลลาเจนเนสที่จุดสองเวลา เช่น 20 และ 40 นาที สำหรับทั้ง MPM และสารประกอบอ้างอิง EGCG ผลการวิจัยพบว่ากิจกรรมการยับยั้งเอนไซม์คอลลาจีเนสเพิ่มขึ้นตามเวลา MPM 1 มก./มล. แสดงการยับยั้ง 84.55 ± 1.99 เปอร์เซ็นต์ ในขณะที่ EGCG 25{{40}} µg/mL แสดง 84.66 ± 1.83 เปอร์เซ็นต์หลังจากการฟักตัว 20 นาที ฤทธิ์ทางชีวภาพของการยับยั้งถูกขยายเมื่อเวลาผ่านไป หลังจาก MPM 40 นาที และ EGCG ยับยั้งเอนไซม์คอลลาจีเนสได้ 94.68 ± 2.42 เปอร์เซ็นต์ และ 94.98 ± 2.81 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ สอดคล้องกับวรรณกรรม MPM แสดงฤทธิ์ยับยั้งอีลาสเทสอย่างมีนัยสำคัญ ผลลัพธ์ถูกวัดสำหรับจุดสี่เวลา (5, 10, 20 และ 30 นาที) และแสดงให้เห็นการเพิ่มขึ้นเมื่อเวลาผ่านไป (รูปที่ 2) EGCG (250 µg/mL) ถูกใช้เป็นตัวอ้างอิงและฤทธิ์ยับยั้งเพิ่มขึ้นที่ทุกจุดเวลา (44.07 ± 0.00 เปอร์เซ็นต์ , 52.19 ± 0.00 เปอร์เซ็นต์ , 64.69 ± 0.{{41 }} เปอร์เซ็นต์ และ 86.21 ± 0.00 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ) ในขณะเดียวกัน MPM ในความเข้มข้น 1 มก./มล. แสดงฤทธิ์การเพิ่มประสิทธิภาพและการยับยั้งที่สูงขึ้น ซึ่งเพิ่มขึ้นจาก 34.70 ± 0.57 เปอร์เซ็นต์เป็น 97.40 ± 1.04 เปอร์เซ็นต์จาก 5 นาทีเป็น 30 นาที ในทำนองเดียวกัน MPM 1 มก./มล. ยับยั้งเอนไซม์ไฮยาลูโรนิเดสอย่างมีนัยสำคัญหลังจากฟักตัวเป็นเวลา 40 นาที วัดการยับยั้งได้ 83.91 ± 2.36 เปอร์เซ็นต์หลังจากผ่านไป 40 นาที หลังจากนั้น 80 นาทีของการบ่มเพาะ อัตราการยับยั้งขยายเป็น 97.19 ± 0.45 เปอร์เซ็นต์ เมื่อพิจารณาการทดสอบการยับยั้งเอนไซม์ทั้งหมด ผลลัพธ์แสดงให้เห็นอย่างชัดเจนว่า MPM อาจเป็นสารต่อต้านริ้วรอยตามธรรมชาติที่มีคุณค่า และอาจใช้ในเนื้อหาของผลิตภัณฑ์ต่อต้านริ้วรอยต่างๆ ดังนั้น M. pomifera อาจมีความสำคัญทางเศรษฐกิจเป็นพิเศษ

การกำหนดศักยภาพของสารต้านอนุมูลอิสระ

ปัจจัยภายนอกและปัจจัยภายในมากมายที่นำไปสู่การแก่ของผิวด้วยกลไกต่างๆ ปัจจัยเหล่านี้ส่วนใหญ่ได้รับผลกระทบโดยตรงหรือโดยอ้อมจากการก่อตัวของ ROS ใน ECM ของผิวหนัง35 เนื่องจากผิวหนังครอบคลุมส่วนนอกของร่างกายเรา จึงต้องเผชิญกับการฉายรังสี UV ในปริมาณมากในชีวิตประจำวัน ดังนั้น ปัญหาผิวส่วนใหญ่ เช่น ผิวไหม้แดด รอยดำ และการเกิดมะเร็งผิวหนังมีสาเหตุมาจากหรือเกี่ยวข้องกับผลกระทบโดยตรงของรังสียูวี ในทำนองเดียวกัน การถ่ายภาพเป็นผลเพิ่มเติมจากคุณสมบัติที่เป็นอันตรายของมัน36 ยิ่งกว่านั้น แสงยูวียังสร้างการก่อตัวของ ROS และเป็นผลให้เกิดความเครียดออกซิเดชันในเนื้อเยื่อผิวหนัง ซึ่งเป็นกลไกที่สำคัญที่สุดอย่างหนึ่งที่นำไปสู่การเกิดแสง37 มีการตั้งสมมติฐานว่าเนื่องจากมากเกินไป การก่อตัวของ ROS ทำให้ผิวแก่ก่อนวัย สารที่มีความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระที่สำคัญอาจเป็นเครื่องมือที่มีค่าในการต่อต้านผลกระทบที่เป็นอันตรายของรังสี UV จากการศึกษาทางคลินิกแสดงให้เห็นว่าการใช้สารต้านอนุมูลอิสระเฉพาะที่มีผลในการป้องกันผิวหนัง38

หลังจากการเชื่อมโยงกันระหว่างการใช้สารต้านอนุมูลอิสระเฉพาะที่และการชะลอความชราของผิว ซึ่งเป็นที่ยอมรับกันดีในวรรณกรรมก่อนหน้านี้ การตรวจสอบศักยภาพในการต้านอนุมูลอิสระในหลอดทดลองของ MPM ให้ข้อมูลที่มีค่าสำหรับการต่อต้านความชราเมื่อทาเฉพาะที่ วรรณกรรมก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่าสารสกัดที่มีไอโซฟลาโวนอยด์จำนวนมากอาจเป็นสารต้านอนุมูลอิสระที่มีคุณค่า ในการศึกษาก่อนหน้านี้ สารสกัดที่อุดมด้วยไอโซฟลาโวนอยด์ของสารสกัด F. macrophylla ช่วยลดความเสียหายของผิวหนังที่เกิดจากรังสี UVB โดยการกำจัด ROS.39 Santos และ Silva4{{10}} บ่งชี้ว่าไอโซฟลาโวนอยด์ก่อนวัยอันควรมีศักยภาพในการต้านอนุมูลอิสระที่สำคัญเนื่องจากพวกมัน มอยอิตีฟลาโวนอยด์และผลเพิ่มเติมของพรีนิลไซด์เชน ศักยภาพในการต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดและไอโซฟลาโวนอยด์ของ M. pomifera ได้รับการประเมินในการศึกษาก่อนหน้านี้ ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่าสารสกัดไฮโดรแอลกอฮอล์และโอซาจินบริสุทธิ์แสดงกิจกรรมที่สำคัญในการตรวจ DPPH, FRAP และ TOAC แม้ว่าเศษส่วน pomiferin และเอทิลอะซีเตตจะแสดงกิจกรรมที่สูงกว่า 41 สำหรับการศึกษานี้ การตรวจวิเคราะห์โดยอนุมูล DPPH, FRAP, CUPRAC และ TOAC ดำเนินการเพื่อหาค่าศักยภาพในการต้านอนุมูลอิสระในหลอดทดลองของ MPM อย่างครอบคลุม (ตารางที่ 2) MPM แสดงกิจกรรมการกำจัดอนุมูล DPPH ที่มีนัยสำคัญ โดยที่ค่า IC50 ถูกวัดในปี 199886 ± {{20}}}.02 การทดสอบ FRAP และ TOAC ยังส่งผลให้เกิดกิจกรรมการลดโลหะที่สังเกตได้ 0.191 ± 0.01 mM FeSO4 /DE และ 114.43 ± 0.02 AAE/g DE ตามลำดับ การค้นพบนี้สอดคล้องกับการศึกษาก่อนหน้านี้ที่เผยแพร่โดย Orhan et al.41 การทดสอบ CUPRAC ได้ดำเนินการกับสารสกัดจากผลไม้ M. pomifera เป็นครั้งแรกตามความรู้ของเรา ในทำนองเดียวกัน MPM แสดงกิจกรรมการลดทองแดงที่สำคัญในการทดสอบ CUPRAC ซึ่งวัดผลลัพธ์เป็น 73.928 ± 0.01 AAE/g DE เมื่อพิจารณาการทดสอบความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระทั้งหมด มีความเป็นไปได้ที่จะบอกว่า MPM เป็นสารต่อต้านริ้วรอยที่มีแนวโน้มดี

โปรไฟล์ฟีนอลและการวิเคราะห์ HPTLC

ไอโซฟลาโวนอยด์เป็นสารฟีนอล ซึ่งเป็นที่รู้จักในฐานะองค์ประกอบของพืชที่มีหน้าที่ในกิจกรรมทางชีวภาพที่สำคัญหลายอย่าง เช่น สารต้านอนุมูลอิสระ ต้านมะเร็ง และต่อต้านปัญหาทางนรีเวช42 การศึกษาก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่าไอโซฟลาโวนอยด์ที่ผ่านการเตรียมล่วงหน้าเป็นสารประกอบฟีนอลิกที่สำคัญในผลไม้ M. pomifera43 การศึกษาจำนวนมากระบุว่าโอซาจิน และปอมมิเฟอรินเป็นส่วนประกอบหลักของผลไม้ M. pomifera ซึ่งมีหน้าที่หลักในการทำกิจกรรมทางชีวภาพ12 Osajin และ pomiferin เป็นสารไอโซฟลาโวนอยด์ prenylated ที่คล้ายคลึงกันอย่างมาก ซึ่งแตกต่างกันเพียงกลุ่มไฮดรอกซิลกลุ่มเดียวเท่านั้น44 รายงานก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นถึงผลลัพธ์ที่ขัดแย้งกันสำหรับเนื้อหาของ osajin และ pomiferin ของผล M. pomifera Kartal et al.45 พัฒนาวิธี LC-MS สำหรับการตรวจหา osajin และ pomiferin ใน M. pomifera ซึ่งรวบรวมจากจังหวัด Türkiye ของอังการา ผลการวิจัยพบว่าปริมาณ pomiferin สูงกว่าปริมาณ osajin เล็กน้อยในส่วนต่าง ๆ ของตัวอย่างผลไม้ ในการศึกษาอื่น เก็บตัวอย่างผลไม้ M. pomifera จากภูมิภาคต่าง ๆ ของมิดเวสต์และตอนใต้ของสหรัฐอเมริกา และวัดปริมาณโอซาจินและปอมมิเฟอรินด้วยวิธีการวิเคราะห์ HPLC แบบใหม่ ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่าความแตกต่างทางภูมิศาสตร์ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญของปริมาณไอโซฟลาโวนอยด์ในตัวอย่าง 46 Tsao et al.47 พิจารณาปริมาณโอซาจินและโพมิเฟรินของผลไม้ที่เก็บจากแคนาดา และพบว่าปริมาณโพมิเฟรินสูงกว่าปริมาณโอซาจินเล็กน้อย ในทางตรงกันข้าม Hwang et al.48 ได้สรุปผลการศึกษาหลายชิ้นที่พบว่าปริมาณ osajin สูงกว่าปริมาณ pomiferin ในสารสกัดต่างๆ สามารถอ้างได้ว่าปริมาณโอซาจินและปอมมิเฟอรินของผล M. pomifera มีความแตกต่างกันอย่างมากด้วยความแตกต่างทางภูมิศาสตร์และเทคนิคการสกัด เนื่องจากโครงสร้างทางเคมีที่คล้ายคลึงกันอย่างเด็ดขาด สำหรับการศึกษานี้ ปริมาณ MPM ถูกวัดผ่านการวิเคราะห์ HPTLC เป็นครั้งแรกที่เราทราบ ผลการวิเคราะห์แสดงให้เห็นว่าโอซาจินเป็นส่วนประกอบสำคัญของ MPM ซึ่งรวบรวมจากจังหวัดอูซัค 0.22 เปอร์เซ็นต์ของตัวอย่างประกอบด้วยโอซาจิน (ตารางที่ 1) นอกจากนี้ เพื่อให้บรรลุการประเมินโปรไฟล์ฟีนอลของ MPM เพิ่มเติม ได้ทำการตรวจวิเคราะห์ปริมาณฟีนอลทั้งหมดและฟลาโวนอยด์ทั้งหมด ผลการวิจัยพบว่า MPM มีปริมาณฟีนอลและฟลาโวนอยด์ที่โดดเด่นดังนี้ 113.92 ± 2.26 mg GAE/g และ 66.41 ± 0.74 mg QE/g ตามลำดับ ผลการประเมินโปรไฟล์ฟีนอลแสดงให้เห็นว่า MPM อาจเป็นตัวเลือกที่โดดเด่นในฐานะสารต่อต้านริ้วรอยจากธรรมชาติ

บทสรุป

แม้ว่าการศึกษาเกี่ยวกับการใช้ผล M. pomifera เฉพาะที่นั้นจะค่อนข้างใหม่ แต่ความสนใจในลักษณะนี้ก็เพิ่มมากขึ้นด้วยรายงานที่ให้กำลังใจ ดังนั้น การศึกษานี้จึงมีวัตถุประสงค์เพื่ออธิบายการประเมินที่ครอบคลุมถึงศักยภาพในการต่อต้านวัยที่เป็นไปได้ของสารสกัดจากผลไม้ M. pomifera การวิเคราะห์ HPTLC ใช้สำหรับผลไม้ M. pomifera เพื่อกำหนดปริมาณไอโซฟลาโวนอยด์เป็นครั้งแรกตามความรู้ของเรา พร้อมกับการศึกษาในหลอดทดลองเพื่อกำหนดโปรไฟล์ฟีนอลทั้งหมด ผลการวิจัยพบว่าโอซาจินเป็นส่วนประกอบหลักของตัวอย่าง นอกจากนี้ ศักยภาพในการต้านอนุมูลอิสระในหลอดทดลองของสารสกัดได้รับการประเมินด้วยการทดสอบที่แตกต่างกัน 4 ชุด และผลลัพธ์แสดงให้เห็นถึงศักยภาพในการต้านอนุมูลอิสระที่สำคัญของ MPM นอกจากนี้ยังมีการวัดฤทธิ์ยับยั้งเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับกระบวนการชรา และพบว่า MPM มีฤทธิ์ยับยั้งเอนไซม์ที่โดดเด่น โดยสรุป การศึกษานี้ให้ข้อมูลที่อาจนำไปสู่การผลิตผลิตภัณฑ์บำรุงผิวใหม่

จริยธรรม

การอนุมัติของคณะกรรมการจริยธรรม:ไม่จำเป็นต้องได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการจริยธรรมสำหรับการศึกษา

ความยินยอม:ไม่จำเป็น.

การตรวจสอบโดยเพื่อน:การตรวจสอบโดยเพื่อนภายนอก

ผลงานการประพันธ์

แนวคิด: THB, TBŞ., HB, การออกแบบ: THB, İ.KC, EC, การรวบรวมหรือประมวลผลข้อมูล: THB, İ.KC, HB, การวิเคราะห์หรือการตีความ: THB, İ.KC, การค้นหาวรรณกรรม: THB, TBŞ., การเขียน: THB, EC

ขัดผลประโยชน์:ไม่มีการประกาศความขัดแย้งทางผลประโยชน์โดยผู้เขียน

การเปิดเผยข้อมูลทางการเงิน:การศึกษานี้ได้รับการสนับสนุนโดย Acıbadem Mehmet Ali Aydınlar University Commission of Scientific Projects (no: 2020/02/07)

อ้างอิง

1. Hwang E, Park SY, Yin CS, Kim HT, Kim YM, Yi TH ผลการต่อต้านริ้วรอยของส่วนผสมของ Panax ginseng และ Crataegus pinnatifida ในเซลล์ไฟโบรบลาสต์ผิวหนังของมนุษย์และผิวหนังของมนุษย์ที่มีสุขภาพดี J โสม Res 2560;41:69-77.

2. Ganceviciene R, Liakou AI, Theodoridis A, Makrantonaki E, Zouboulis CC. กลยุทธ์การต่อต้านริ้วรอยของผิว เดอร์มาโทเอนโดครินอล. 2555;4:308-319.

3. Lee H, Hong Y, Tran Q, Cho H, Kim M, Kim C, Kwon SH, Park S, Park J, Park J. บทบาทใหม่สำหรับ ginsenoside RG3 ในการต่อต้านริ้วรอยผ่านการทำงานของไมโตคอนเดรียในผิวหนังมนุษย์ที่ฉายรังสีอัลตราไวโอเลต ไฟโบรบลาสต์ J โสม Res 2019;43:431-441.

4. Rouvrais C, Bacqueville D, Patrick B, Haure MJ, Duprat L, Coutanceau C, Castex-Rizzi N, Duplan H, Mengeaud V, Bessou-Touya S. การประเมินคุณสมบัติต่อต้านริ้วรอยของเรตินัลดีไฮด์ เดลต้า-โทโคเฟอรอล กลูโคไซด์ และไกลซิลไกลซีน ส่วนผสมของโอเลไมด์ เจ อินเวส เดอร์มาทอล 2017;137(ภาคผนวก 2):S303.

5. Bravo K, Alzate F, Osorio E. ผลไม้จากพืชป่า Andean ที่ปลูกและคัดสรรเป็นแหล่งของสารที่มีศักยภาพในการต้านอนุมูลอิสระและต่อต้านริ้วรอย Ind พืชผล Prod. 2559;85:341-352.

6. Yepes A, Ochoa-Bautista D, Murillo-Arango W, Quintero-Saumeth J, Bravo K, Osorio E. เมล็ดเสาวรสสีม่วง (Passiflora edulis f. edulis Sims) เป็นแหล่งของสารต่อต้านริ้วรอยแห่งวัย: เอนไซม์ สารต้านอนุมูลอิสระและการศึกษาเชิงคำนวณหลายระดับ อาหรับเจเคม 2021;14:102905.

7. Rittié L, Fisher GJ. สัญญาณที่เกิดจากแสงยูวีลดหลั่นและความชราของผิว Aging Res Rev. 2002;1:705-720.

8. Duque L, Bravo K, Osorio E. วิธีการต่อต้านริ้วรอยแบบองค์รวมที่ใช้ในพืชสมุนไพรที่ได้รับการคัดเลือก: มุมมองของการปกป้องแสงของผิวหนังด้วยกลไกต่างๆ Ind พืชผล Prod. 2560;97:431-439.

9. Manjia NJ, Njayou NF, Joshi A, Upadhyay K, Shirsath K, Devkar VR, Moundipa FP ศักยภาพในการต่อต้านความชราของพืชสมุนไพรในแคเมอรูนHarungana madagascariensis Lam. และ Psorospermum aurantiacum Engl. ป้องกันความเสียหายของผิวหนังที่เกิดจากแสงอัลตราไวโอเลต B ในหลอดทดลอง Eur J Integr Med. 2019;29:100925.

10. Pujimulyani D, Suryani CL, Setyowati A, Handayani RAS, Arumwardana S, Widowati W, Maruf A. ศักยภาพด้านเวชสำอางของ Curcuma mangga Val สารสกัดจากไฟโบรบลาสต์ BJ ของมนุษย์เทียบกับ MMP1, MMP3 และ MMP13 เฮลิออน. 2020;6:e04921.

11. Stavropoulou MI, Stathopoulou K, Cheilari A, Benaki D, Gardikis K, Chinou I, Aligiannis N. NMR การทำโปรไฟล์การเผาผลาญของตัวอย่างโพลิสกรีก: การประเมินเปรียบเทียบองค์ประกอบทางพฤกษเคมีและการตรวจสอบคุณสมบัติต่อต้านริ้วรอยและสารต้านอนุมูลอิสระ J Pharm Biomed ก้น. 2021;194:113814.

12. Filip S, Djarmati Z, Lisichkov K, Csanadi J, Jankov RM การแยกและศึกษาคุณลักษณะของสารสกัด Maclura (Maclura pomifera) ที่ได้จากการสกัดด้วยของไหลวิกฤตยิ่งยวด Ind พืชผล Prod. 2558;76:995-1000.

13. Saloua F, Eddine NI, Hedi Z. องค์ประกอบทางเคมีและลักษณะเฉพาะของโอเซจส้ม Maclura pomifera (Rafin.) Schneider seed and seed oil. Ind พืชผล Prod. 2552;29:1-8.

14. Veselá D, Kubínová R, Muselík J, Zemlicka M, Suchý V. กิจกรรมต้านอนุมูลอิสระและ EROD ของ osajin และ pomiferin Fitoterapia. 2547;75:209-211.

15. Gruber JV, Holtz R, Sikkink SK, Tobin DJ การตรวจในหลอดทดลองและภายนอกร่างกายของการรักษาด้วย pomiferin เฉพาะที่ Fitoterapia. 2557;94:164-171.

16. Bozkurt İ, Dilek E, Erol HS, Çakir A, Hamzaoğlu E, Koç M, Keleş ON, Halici MB การศึกษาผลของ pomiferin จาก Maclura pomifera ต่อแผลในกระเพาะอาหารที่เกิดจาก indomethacin: การศึกษาเชิงทดลองในหนูแรท Med Chem Res. 2560;26:2048-2056.

17. Kurt-Celep İ, Celep E, Akyüz S, İnan Y, Barak TH, Akaydın G, Telci D, Yesilada E. Hypericum Olympic L. ฟื้นฟูความเสียหายของ DNA และป้องกันการเปิดใช้งาน MMP-9 ที่เกิดจาก UVB ในผิวหนังของมนุษย์ ไฟโบรบลาสต์ เจ เอ็ทโนฟาร์มาคอล. 2020;246:112202.

18. Bardakci H, Cevik D, Barak TH, Gozet T, Kan Y, Kirmizibekmez H. สารทุติยภูมิ ลักษณะทางพฤกษเคมีและกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระของสารสกัด Sideritis congesta PH Davis et Hub.- Mor. ไบโอเคม ซิสเต็ม อีคอล 2020;92:104120.

19. Celep E, Seven M, Akyüz S, İnan Y, Yesilada E. อิทธิพลของวิธีการสกัดต่อการยับยั้งเอนไซม์ โปรไฟล์ฟีนอล และความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของ Sideritis trojan Bornm J Bot แอฟริกาใต้ 2019;121:360–365.

20. Bardakcı H, Barak TH, Özdemir K, Celep E. ผลของวัสดุในการผลิตเบียร์และสารเติมแต่งต่างๆ ต่อองค์ประกอบโพลีฟีนอลและฤทธิ์ทางชีวภาพของสารต้านอนุมูลอิสระของ Tilia platyphyllos Scop เชิงพาณิชย์ เงินทุน เจ เรส ฟาร์มา. 2020;24:133-141.

21. Barak TH, Celep E, İnan Y, Yesilada E. อิทธิพลของการย่อยอาหารในหลอดทดลองของมนุษย์ต่อการดูดซึมของปริมาณฟีนอลิกและฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดจากผลไม้ Viburnum opulus L. (แครนเบอร์รี่ยุโรป) Ind พืชผล Prod. 2019;131:62-69.

22. Barak TH, Celep E, İnan Y, Yeşilada E. การจำลองการย่อยอาหารของมนุษย์ในหลอดทดลองของการดูดซึมและกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระของฟีนอลจากสารสกัดผลไม้ Sambucus ebulus L. ชีววิทยาศาสตร์อาหาร. 2020;37:100711.

23. Ersoy E, Eroglu Ozkan E, Boga M, Yilmaz MA, Mat A. ศักยภาพในการต่อต้านริ้วรอยและฤทธิ์ต้านไทโรซิเนสของ Hypericum สามสายพันธุ์โดยเน้นที่องค์ประกอบทางพฤกษเคมีโดย LC-MS/MS Ind พืชผล Prod. 2019;141:111735.

24. Lee KK, Kim JH, Cho JJ, Choi JD. ผลการยับยั้งของสารสกัดจากพืช 150 ชนิดต่อการทำงานของอีลาสเทสและฤทธิ์ต้านการอักเสบ Int J Cosmet Sci. 2542;21:71-82.

25. Itoh S, Yamaguchi M, Shigeyama K, Sakaguchi I. ศักยภาพในการต่อต้านริ้วรอยของสารสกัดจาก Chaenomeles sinensis เครื่องสำอาง 2019;6:21.

26. Kolayli S, Can Z, Yildiz O, Sahin H, Karaoglu SA การศึกษาเปรียบเทียบฤทธิ์ต้านไฮยาลูโรนิเดส สารป้องกันการแข็งตัว สารต้านอนุมูลอิสระ ฤทธิ์ต้านจุลชีพ และคุณสมบัติทางเคมีฟิสิกส์ของน้ำผึ้งดอกเกาลัด (Castanea sativa Mill.) เจ เอนไซม์ อินฮิบ เมด เคม. 2016;31(ภาคผนวก 3):96-104.

27. Korkmaz B, Horwitz MS, Jenne DE, Gauthier F. Neutrophil elastase, proteinase 3 และ cathepsin G เป็นเป้าหมายในการรักษาโรคในมนุษย์ Pharmacol Rev. 2010;62:726-759.

28. Akazaki S, Nakagawa H, Kazama H, Osanai O, Kawai M, Takema Y, Imokawa G. การเปลี่ยนแปลงที่เกี่ยวข้องกับอายุของริ้วรอยบนผิวหนังประเมินโดยการวิเคราะห์ morphometric สามมิติแบบใหม่ บีอาร์เจ เดอร์มาทอล 2545;147:689- 695.

29. Barla F, Higashijima H, Funai S, Sugimoto K, Harada N, Yamaji R, Fujita T, Nakano Y, Inui H. ผลการยับยั้งของอัลคิลแกลเลตต่อไฮยาลูโรนิเดสและคอลลาเจนเนส Biosci ไบโอเทคโนล ไบโอเคมี 2019;73:2335-2337.

30. Chung JH, Kang S, Varani J, Lin J, Fisher GJ, Voorhees JJ ลดไคเนสที่ควบคุมสัญญาณนอกเซลล์และเพิ่มกิจกรรมไคเนส MAP ที่เปิดใช้งานความเครียดในผิวหนังมนุษย์ที่มีอายุมากขึ้น ในร่างกาย เจ อินเวส เดอร์มาทอล 2543;115:177-182.

31. Addotey JN, Lenger's I, Jose J, Gampe N, Béni S, Petereit F, Hensel A. ไอโซฟลาโวนอยด์ที่มีฤทธิ์ยับยั้งเอนไซม์ไฮยาลูโรนิเดสของมนุษย์-1 และ norneolignan clitorienolactone B จากสารสกัดราก Ononis spinosa L. Fitoterapia. 2561;130:169-174.

32. Kim KJ, Xuan SH, Park SN ลิโคริซิดิน ซึ่งเป็นไอโซฟลาโวนอยด์ที่แยกได้จาก Glycyrrhiza uralensis Fisher ป้องกันการเกิดแสง UVA ที่เกิดจากไฟโบรบลาสต์ผิวหนังของมนุษย์ Int J Cosmet Sci. 2560;39:133-140.

33. Kim JY, Wang Y, Uddin Z, Song YH, Li ZP, Jenis J, Park KH. การแข่งขัน neutrophil elastase ยับยั้งไอโซฟลาโวนจากรากของ Flemingia philippinensis Bioorg เคมี 2018;78:249-257.

34. Ergene Öz B, Saltan İşcan G, Küpeli Akkol E, Süntar İ, Bahadır Acıkara Ö ไอโซฟลาโวนอยด์เป็นสารสมานแผลจาก Ononidis radix เจ เอ็ทโนฟาร์มาคอล. 2018;211:384-393.

35. Azevedo Martins TE, de Oliveira Pinto CAS, de Oliveira AC, Robles Velasco MV, Gorriti Guitiérrez AR, Cosquillo Rafael MF, Huamani Tarazona JP, Retuerto-Figueroa MG การมีส่วนร่วมของสารต้านอนุมูลอิสระเฉพาะเพื่อรักษาสุขภาพผิว - บทวิจารณ์ วิทย์เภสัช. 2020;88:27.

36. Krutmann J, Schroeder P. บทบาทของไมโทคอนเดรียในการถ่ายภาพผิวหนังมนุษย์: แบบจำลองโรงไฟฟ้าที่มีข้อบกพร่อง J Investig Dermatol Symp Proc. 2552;14:44-49.

37. Dong KK, Damaghi N, Picart SD, Markova NG, Obayashi K, Okano Y, Masaki H, Grether-Beck S, Krutmann J, Smiles KA, Yarosh DB ความเสียหายของ DNA ที่เกิดจากรังสี UV ทำให้เกิดการปลดปล่อย MMP-1 ในผิวหนังของมนุษย์ เอ็กซ์พีเดอร์มาทอล 2551;17:1037-1044.

38 Oresajo C, Pillai S, Manco M, Yatskayer M, McDaniel D. สารต้านอนุมูลอิสระและผิวหนัง: ทำความเข้าใจสูตรและประสิทธิภาพ เดอร์มาทอล เทอร์ 2555;25:252-259.

39. เชียง HM, Chiu HH, Liao ST, Chen YT, Chang HC, Wen KC. สารสกัด Isoflavonoidrich fleming macrophylla ช่วยลดความเสียหายของผิวหนังที่เกิดจากรังสี UVB โดยการกำจัดสายพันธุ์ออกซิเจนที่ทำปฏิกิริยาและยับยั้งการแสดงออกของ MAP kinase และ MMP Evid Based Complement Alternat Med. 2556;2556:696879.

40. ซานโตส ซีเอ็มเอ็ม, ซิลวา เอเอ็มเอส ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของพรีนิลฟลาโวนอยด์ โมเลกุล 2020;25:696.

41. Orhan IE, Sezer Senol F, Demirci B, Dvorska M, Smejkal K, Zemlicka M. ศักยภาพในการต้านอนุมูลอิสระของอนุพันธ์ฟลาโวนอยด์ธรรมชาติและกึ่งสังเคราะห์บางชนิดและสารสกัดจาก Maclura pomifera (Rafin.) Schneider (โอเซจส้ม) และสาระสำคัญของมัน ส่วนประกอบของน้ำมัน ตุรกี J Biochem 2559;41:403-411.

42. Křížová L, Dadáková K, Kašparovská J, Kašparovský T. ไอโซฟลาโวนส์ โมเลกุล 2019;24:1076.

43. Su Z, Wang P, Yuan W, Grant G, Li S. ฟีนอลจากผลของ Maclura pomifera แนท โปรดัก คอมมูนิตี้. 2017;12:1743-1745.

44. Orazbekov Y, Ibrahim MA, Mombekov S, Srivedavyasasri R, Datkhayev U, Makhatov B, Chaurasiya ND, Tekwani BL, Ross SA การแยกและการประเมินทางชีวภาพของฟลาโวนอยด์พรีไนเลตจาก Maclura pomifera Evid Based Complement Alternat Med. 2018;2018:1370368.

45. Kartal M, Abu-Asaker M, Dvorska M, Orhan I, Zemlicka M. วิธี LC-DAD-MS สำหรับการวิเคราะห์ pomiferin และ osajin, ไอโซฟลาโวนที่สำคัญใน Maclura pomifera (Rafin.) Schneider โครมาโตกราฟี 2009;69:325-329.

46. ​​Darji K, Miglis C, Wardlow A, Abourashed EA การตรวจ HPLC ของระดับไอโซฟลาโวนในโอเซจออเรนจ์จากมิดเวสต์และตอนใต้ของสหรัฐอเมริกา J Agric Food Chem. 2556;61:6806-6811.

47. Tsao R, Yang R, Young JC. สารต้านอนุมูลอิสระไอโซฟลาโวนในส้มโอเซจ Maclura pomifera (Raf.) Schneid J Agric Food Chem. 2546;51:6445-6451.

48. Hwang HS, Winkler-Moser JK, Tisserat B, Harry‐O'kuru RE, Berhow MA, Liun SX ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดส้มโอเซจในน้ำมันถั่วเหลืองและน้ำมันปลาระหว่างการเก็บรักษา J Am Oil Chem Soc. 2021;98:73-87.

【สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】