เชิงนามธรรม

พื้นหลัง:มีความขาดแคลนในการถ่ายภาพและเทคนิคการประมวลผลภาพสำหรับการเลือกปฏิบัติและปริมาณที่ถูกต้องของ dermal extracellular matrix (ECM) ซึ่งส่วนใหญ่เป็นคอลลาเจน การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อพัฒนาและสาธิตวิธีการสร้างภาพแบบองค์รวมและการประมวลผลภาพเพื่อให้เห็นภาพและวัดปริมาณการเปลี่ยนแปลงของคอลลาเจนในระดับมหภาค ระดับจุลภาค และระดับนาโน โดยใช้การถ่ายภาพแบบฮิสโทเคมี กล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอลแบบรีเฟล็กแทนซ์ (RCM) และกล้องจุลทรรศน์แรงอะตอม (Atomic Force Microscopy (AFM)) ตามลำดับ

Glycoside ของ cistanche ยังสามารถเพิ่มกิจกรรมของ SOD ในเนื้อเยื่อหัวใจและตับ และลดปริมาณของ lipofuscin และ MDA ในแต่ละเนื้อเยื่อได้อย่างมีประสิทธิภาพ กำจัดอนุมูลออกซิเจนที่ทำปฏิกิริยาต่างๆ (OH-, H₂O₂ ฯลฯ) ได้อย่างมีประสิทธิภาพ และป้องกันความเสียหายของ DNA ที่เกิดขึ้น โดย OH-อนุมูล Cistanche phenylethanoid glycosides มีความสามารถในการกำจัดอนุมูลอิสระที่แข็งแกร่ง ความสามารถในการลดที่สูงกว่าวิตามินซี ปรับปรุงกิจกรรมของ SOD ในการระงับสเปิร์ม ลดปริมาณของ MDA และมีผลป้องกันบางอย่างต่อการทำงานของเยื่อหุ้มสเปิร์ม โพลีแซคคาไรด์ของ Cistanche สามารถเสริมการทำงานของ SOD และ GSH-Px ในเม็ดเลือดแดงและเนื้อเยื่อปอดของหนูทดลองที่ชราภาพซึ่งเกิดจาก D-galactose รวมทั้งลดปริมาณ MDA และคอลลาเจนในปอดและพลาสมา และเพิ่มเนื้อหาของอีลาสติน ส่งผลดีต่อ DPPH, ยืดเวลาการขาดออกซิเจนในหนูชรา, ปรับปรุงกิจกรรมของ SOD ในซีรั่ม, และชะลอการเสื่อมทางสรีรวิทยาของปอดในหนูชราทดลองที่มีความเสื่อมทางสัณฐานวิทยาของเซลล์, การทดลองแสดงให้เห็นว่า Cistanche มีความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระที่ดี และมีศักยภาพในการเป็นยาป้องกันและรักษาโรคชราทางผิวหนัง ในขณะเดียวกัน echinacoside ใน Cistanche มีความสามารถที่สำคัญในการกำจัดอนุมูลอิสระ DPPH และมีความสามารถในการกำจัดชนิดของออกซิเจนที่ทำปฏิกิริยาและป้องกันการเสื่อมสลายของคอลลาเจนที่เกิดจากอนุมูลอิสระ และยังมีผลการซ่อมแซมที่ดีต่อความเสียหายของแอนไอออนจากอนุมูลอิสระของไทมีน

คลิกที่วิธีใช้ Antioxidant Cistanche

【สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

วัสดุและวิธีการ:สำหรับการพิสูจน์แนวคิดนี้ ผลิตภัณฑ์ต่อต้านริ้วรอยในเชิงพาณิชย์ที่รู้จักกันว่ากระตุ้นการสังเคราะห์คอลลาเจนใหม่และการจัดโครงสร้างใหม่ได้รับการทดสอบจากภายนอกร่างกายในการตรวจชิ้นเนื้อผิวหนังของมนุษย์จากผู้หญิงสูงอายุสองคน

ผลลัพธ์:เส้นใยคอลลาเจน (RCM) และไฟบริล (AFM) มีความยาวและเรียงตัวเท่ากันหลังการรักษาเมื่อเทียบกับผิวหนังที่ไม่ได้รับการดูแล เนื้อหาของคอลลาเจนและอีลาสติน (การถ่ายภาพด้วยฮิสโตเคมีและ ELISA) ดีขึ้นทางสถิติหลังการรักษา

บทสรุป:จากการค้นพบของเรา เราสามารถสรุปได้ว่า: (1) การถ่ายภาพ AFM, RCM และฮิสโตเคมีสามารถแยกแยะคอลลาเจนจากส่วนประกอบ ECM อื่นๆ ในผิวหนังได้อย่างแม่นยำ และ (2) วิธีการประมวลผลภาพสามารถเปิดใช้งานการวัดปริมาณ และด้วยเหตุนี้จึงบันทึกการปรับปรุงเล็กน้อยในการเปลี่ยนแปลงคอลลาเจนหลังจาก การรักษา (ผลิตภัณฑ์เครื่องสำอางเชิงพาณิชย์ที่มีเทคโนโลยีคอลลาเจนออร์แกไนเซอร์เป็นข้อพิสูจน์แนวคิด) วิธีการถ่ายภาพแบบองค์รวมที่รายงานมีผลโดยตรงทางคลินิกสำหรับนักวิทยาศาสตร์และแพทย์ผิวหนังในการตัดสินใจอย่างรวดเร็ว ตามเวลาจริง และแม่นยำในการวิจัยและวินิจฉัยผิวหนัง

คำสำคัญ

ต่อต้านริ้วรอย, กล้องจุลทรรศน์แรงอะตอม, การปรับโครงสร้างคอลลาเจน, การเปลี่ยนแปลงผิวหนัง, เมทริกซ์นอกเซลล์, กล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอลแบบสะท้อนแสง (Vivascope)

1. บทนำ

การเปลี่ยนแปลงแบบควบคุมของเมทริกซ์นอกเซลล์ผิวหนัง (ECM) เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการพัฒนาตามปกติและสภาวะสมดุลของผิวหนังและอวัยวะอื่นๆ การเปลี่ยนแปลง ECM เป็นจุดเด่นในพยาธิสรีรวิทยาของอายุของผิวหนัง การรักษาบาดแผล และโรคร้ายแรงบางชนิด ซึ่งรวมถึงแต่ไม่จำกัดเพียงมะเร็งและพังผืด2 มีตัวเลือกด้านความงามและการแพทย์มากมายในการรักษาสภาพผิวเหล่านี้ อย่างไรก็ตาม วิธีการถ่ายภาพเป็นสิ่งที่หายากสำหรับ การแสดงภาพตามเวลาจริงของการเปลี่ยนแปลง ECM โดยหลักๆ แล้วคือคอลลาเจนซึ่งเป็นส่วนประกอบโครงสร้างที่มีมากที่สุดของผิวหนัง ECM แม้ว่าจะอยู่ระหว่างการพัฒนา เทคนิคการถ่ายภาพทางคลินิกแบบเรียลไทม์แบบไม่รุกรานบางส่วนเพื่อให้เห็นภาพคอลลาเจนและการจัดโครงสร้าง ได้แก่ กล้องจุลทรรศน์โฟตอนหลายตัวพร้อมการสร้างฮาร์มอนิกครั้งที่สอง (MPM-SHG),3 กล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอลแบบสะท้อนแสง (RCM),4 การตรวจเอกซเรย์การเชื่อมโยงกันของแสง (OCT),5,6 Lindfield Confocal Optical Coherence Tomography (LC-OCT) ขึ้นอยู่กับการรวมกันของรังสี RCM และ OCT,7 การถ่ายภาพด้วยคลื่นสนามแม่เหล็ก (MRI),8 และการถ่ายภาพอัลตราซาวนด์ 9 ในจำนวนนี้ RCM, MPM และ LC-OCT เป็นเครื่องมือถ่ายภาพผิวหนังที่ได้รับการรับรองจาก CE อย่างไรก็ตาม ในบรรดาทั้งหมด เทคนิค RCM (Vivascope® 1500 และ 3000 จาก Lucid, Inc. USA) เป็นเทคนิคการวินิจฉัยโรคผิวหนังทางคลินิกเพียงวิธีเดียวที่ได้รับการอนุมัติจาก FDA (510(k)# K080788) ซึ่งครอบคลุมโดยประกันส่วนใหญ่ใน สหรัฐอเมริกาเพื่อวินิจฉัยรอยโรคที่ผิวหนัง10 เป็นทางเลือกที่ไม่รุกรานและคุ้มค่าสำหรับการตรวจชิ้นเนื้อและจุลพยาธิวิทยาแบบคลาสสิกเพื่อวินิจฉัยและติดตามมะเร็งผิวหนังและการรักษา 10 ในบรรดาวิธีการถ่ายภาพพรีคลินิกเพื่อให้เห็นภาพการจัดเรียงตัวของคอลลาเจน กล้องจุลทรรศน์แรงอะตอม ( AFM), 11 กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน, 11,12 การถ่ายภาพฮิสโตเคมีโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์, 13 กล้องจุลทรรศน์แสงโพลาไรซ์, 14 กล้องจุลทรรศน์เลเซอร์สแกนคอนโฟคอล (CLSM), 15,16 การสะท้อนแสงแบบคอนโฟคอลหลายรูปแบบและกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ 17 และการกระเจิงของรังสีเอกซ์มุมเล็ก18 คือ เป็นที่รู้จักกันดี

คำเตือนสำคัญประการหนึ่งที่จำกัดการใช้เทคนิคการถ่ายภาพทางคลินิกที่กล่าวถึงข้างต้นคือ ต้องมีการประเมินด้วยตนเองที่น่าเบื่อ เนื่องจากความเชี่ยวชาญและประสบการณ์ในการวิเคราะห์ภาพขาวดำของโครงสร้างผิวหนังอย่างแม่นยำเป็นข้อกำหนดเบื้องต้น19,20 ดังนั้น ความพยายามที่มากขึ้นคือ จำเป็นในด้านการประมวลผลภาพเพื่อพัฒนาและตรวจสอบอัลกอริทึมและซอฟต์แวร์เพื่อทำการวิเคราะห์โดยอัตโนมัติ 5 สร้างภาพที่ย้อมสีดิจิทัลที่ง่ายต่อการตีความ 16,17 และดึงข้อมูลเชิงปริมาณเพื่อติดตามความก้าวหน้าของโรคและการบำบัด รวมถึงการจัดระเบียบคอลลาเจนในบริบทของเรา การวิจัย 3,6,12–14 จะช่วยให้ผู้ที่ไม่ใช่แพทย์ผิวหนังและแพทย์ผิวหนังสามารถตัดสินใจได้เร็วขึ้นและมีความมั่นใจมากขึ้น เนื่องจากการตัดสินใจจะทำจากขนาดตัวอย่างที่ใหญ่ขึ้นของภาพสุ่ม มีการศึกษาพื้นฐานบางอย่างเพื่อแสดงการใช้ RCM และ MPM เพื่อทำความเข้าใจการเปลี่ยนแปลงของผิวหนังตามวัย (รวมถึงการสร้างคอลลาเจน) ในอาสาสมัครที่มีอายุน้อยหรือแก่หรืออายุมากด้วยภาพถ่าย21,22 อย่างไรก็ตาม มีความพยายามอย่างจำกัดในการขยายขอบเขต ของเทคนิคการถ่ายภาพเหล่านี้เพื่อจับภาพการปรับปรุงการรักษา ซึ่งต้องใช้การประมวลผลภาพที่ซับซ้อนเพื่อให้ได้ข้อมูลเชิงปริมาณ3,13,16

การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อพัฒนาและสาธิตวิธีการสร้างภาพและการประมวลผลภาพแบบองค์รวมเพื่อให้เห็นภาพและหาปริมาณการปรับปรุงในการเปลี่ยนแปลงผิวหนัง (คอลลาเจนเป็นหลัก) สำหรับการพิสูจน์แนวคิด ผลิตภัณฑ์เครื่องสำอางต่อต้านริ้วรอยแห่งวัยที่ได้รับการพิสูจน์ทางการแพทย์พร้อมเทคโนโลยีคอลลาเจนออร์แกไนเซอร์ถูกนำมาใช้เพื่อประเมินความเป็นไปได้ของการใช้การประมวลผลภาพเพื่อหาปริมาณการเปลี่ยนแปลงเล็กน้อยของคอลลาเจนก่อนและหลังการรักษา

2 วัสดุและวิธีการ

2.1 การตรวจชิ้นเนื้อผิวหนังและการรักษา

ชิ้นเนื้อผิวหนังที่ใช้ในการวิจัยนี้เป็นวัสดุที่เหลือจากการทำศัลยกรรมช่องท้องที่ได้รับจากผู้บริจาคสองรายหลังจากได้รับความยินยอม (ความยินยอมเป็นของทางคลินิก) ผู้บริจาค #1 (อายุ 62 ปี) และผู้บริจาค #2 (อายุ 52 ปี) เป็นเพศหญิงและ Fitzpatrick skin type II การตรวจชิ้นเนื้อได้รับการบำรุงรักษาภายใต้สภาวะการเพาะเลี้ยงมาตรฐานและปฏิบัติทุกวันด้วยผลิตภัณฑ์ทดสอบหรือกลุ่มควบคุม (ไม่ได้รับการรักษาหรือยาหลอก) เป็นเวลา 6 วัน และเก็บเกี่ยวในวันที่ 7 สำหรับการถ่ายภาพและ ELISA การตรวจชิ้นเนื้อจากผู้บริจาค #1 ใช้สำหรับ ELISA, RCM และ AFM ในขณะที่การตรวจชิ้นเนื้อจากผู้บริจาค #2 ใช้สำหรับการถ่ายภาพทางฮิสโตเคมี

2.2 การถ่ายภาพ RCM และ AFM

ชิ้นเนื้อผิวหนังจากผู้บริจาค #1 ถูกเก็บเกี่ยวในวันที่ 7 และถ่ายภาพโดยตรงโดยไม่มีการแบ่งส่วนและการย้อมสีใดๆ AFM (Bruker, Multimode 8 AFM) และ RCM (Vivascope® 1500) ถูกนำมาใช้เพื่อให้ได้ภาพความละเอียดสูงระดับนาโนและไมโครของคอลลาเจนในผิวหนังที่รักษาด้วยผลิตภัณฑ์ทดสอบ และไม่ได้รับการบำบัดเป็นตัวควบคุม สำหรับการทดลองทั้งหมด AFM ติดตั้งคานยื่นขนาดเล็ก (PPP-FMR- 20, เซนเซอร์นาโน): ค่าคงที่ของสปริง, k=0.5–9.5 N/m, ความถี่เรโซแนนซ์, f {{13} }–115 kHz ในอากาศและทำงานในโหมดการแตะที่อุณหภูมิห้อง ตัวอย่างผิวหนังถูกติดตั้งด้านข้างบนจานแม่เหล็ก (1 มม. × 1 มม.) และวางบนเวที ภาพ AFM ได้มาจากมุมมองด้านข้าง/ด้านข้างของชิ้นเนื้อผิวหนังเพื่อหลีกเลี่ยงการแบ่งส่วน สำหรับการถ่ายภาพ RCM ภาพสุ่ม 7 ภาพที่ได้มาจากการตัดชิ้นเนื้อที่ผ่านการบำบัดและไม่ผ่านการบำบัดจากด้านบน (ด้าน Stratum corneum) และด้านล่าง (ด้านหนังแท้) เพื่อให้ได้ภาพคอลลาเจนคุณภาพสูง ภาพ RCM ได้รับการประมวลผลและวิเคราะห์โดยใช้ ConfoScan® สำหรับเนื้อคอลลาเจนเพื่อรายงานดัชนีการกระจายตัวเฉลี่ย ดัชนีการแยกส่วนถูกกำหนดโดยพื้นที่ของวัตถุหารด้วยจำนวนของวัตถุที่ได้รับหลังจากประมวลผลภาพดิบสำหรับเนื้อคอลลาเจน รูปที่ S1 แสดงการประมวลผลภาพโดยใช้ ConfoScan® เพื่อรับค่าเชิงปริมาณในดัชนีการแตกตัวของคอลลาเจน (CFI)

2.3 การถ่ายภาพฮิสโตเคมี

เพื่อทดสอบผลของผลิตภัณฑ์ต่อต้านริ้วรอยในการรักษาผิวที่มีอายุจากแสงแดด (การฟื้นฟูคอลลาเจนและอีลาสตินที่ถูกทำลายจากภาพถ่าย) การตัดชิ้นเนื้อจากผู้บริจาค #2 สัมผัสกับปริมาณรังสียูวีจำลอง (6 J/cm2 ที่มีรังสี UVA 96 เปอร์เซ็นต์ ). ตัวอย่างและเงื่อนไขที่ทดสอบในการทดลองคือ: (A) การควบคุมเชิงลบ (ไม่ได้รับการรักษา ไม่มีรังสียูวี และไม่มีผลิตภัณฑ์ทดสอบ) (B) การควบคุมเชิงบวก (ผิวหนังสัมผัสกับรังสียูวี แต่ไม่มีผลิตภัณฑ์ทดสอบ) และ (C) ได้รับการรักษา ( ผิวที่สัมผัสกับรังสี UV ตามด้วยการรักษาทุกวันด้วยผลิตภัณฑ์ทดสอบ) ตัดชิ้นเนื้อผิวหนังในวันที่ 7 แบ่งส่วน ย้อมสีสำหรับคอลลาเจน (การย้อมสีพิโคซิเรียส) และอีลาสติน (การย้อมสีภูมิคุ้มกัน) และถ่ายภาพ รูปภาพได้รับการประมวลผลและวิเคราะห์โดยใช้อัลกอริทึมการวิเคราะห์รูปภาพที่เป็นกรรมสิทธิ์เฉพาะ เพื่อให้ได้ข้อมูลเชิงปริมาณเกี่ยวกับเนื้อหาของคอลลาเจนและอีลาสตินในผิวหนังชั้น papillary โดยสังเขป กระบวนการวิเคราะห์เพื่อให้ได้ข้อมูลเชิงปริมาณเกี่ยวกับเนื้อหาของคอลลาเจนและอีลาสติน ได้แก่ การแปลงภาพ RGB เป็นพื้นที่สี LAB การกรองพื้นหลังเพื่อให้ได้ภาพที่ชัดเจนของคอลลาเจนและอีลาสติน จากนั้นทำให้เนื้อหาคอลลาเจนและอีลาสตินในผิวหนัง papillary เป็นปกติ พื้นที่เดียวกันหรือหลายพิกเซล มีการตัดชิ้นเนื้อหรือตัวอย่างผิวหนังหกรายการสำหรับแต่ละเงื่อนไข และสองส่วนหรือรูปภาพจากแต่ละตัวอย่าง ทำให้มีรูปภาพและจุดข้อมูล N=12 รายการสำหรับการทดสอบทางสถิติ รูปที่ S2 แสดงแผนผังของวิธีการประมวลผลภาพเพื่อให้ได้ค่าเชิงปริมาณของเนื้อหาคอลลาเจน

2.4 อีไลซา

หลังการเก็บเกี่ยวเนื้อเยื่อในวันที่ 7 ใช้เจาะขนาดเส้นผ่านศูนย์กลาง 4 มม. เพื่อให้ได้ชิ้นเนื้อขนาดเล็กลงและเลือกชิ้นเนื้อสองชิ้นที่มีค่า ∼25 มก./ชิ้นเนื้อ ชิ้นเนื้อเจาะ (น้ำหนักรวม 50 มก.) ผสมในบัฟเฟอร์การสลายที่มีไตรตัน 0.1 เปอร์เซ็นต์และค็อกเทลตัวยับยั้งโปรตีเอส ตามด้วยการทำให้เนื้อเยื่อเป็นเนื้อเดียวกันโดยใช้โฮโมจีไนเซอร์แบบอัตโนมัติที่มีการประมวลผลคู่พร้อมคุณสมบัติเชิงกลและอัลตราโซนิกเพื่อแยกชิ้นเนื้อออกอย่างสมบูรณ์ เนื้อเยื่อ. เนื้อเยื่อที่ถูกสลายถูกปั่นแยก ส่วนลอยเหนือตะกอนถูกรวบรวม แบ่งส่วนออกเป็นสองส่วน และเก็บไว้ที่ −80◦C จนกว่าจะใช้ นอกจากการทำให้เป็นมาตรฐานเกี่ยวกับน้ำหนัก (50 มก.) แล้ว ตัวอย่างยังถูกทำให้เป็นมาตรฐานกับปริมาณโปรตีนทั้งหมดในส่วนเหนือตะกอน สารส่วนเกินถูกวิเคราะห์สำหรับ Pro-Collagen 1, Elastin, Alpha-Smooth Muscle actin (A-SMA), Tenascin-X และกรดไฮยาลูโรนิกโดยใช้ชุด ELISA เชิงพาณิชย์ สถิติดำเนินการกับจุดข้อมูล N=6 จุด (ชิ้นเนื้อ 3 ชิ้น × 2 ส่วนลงตัว)

3 ผลลัพธ์

การถ่ายภาพฮิสโตเคมี (รูปที่ 1) ให้ข้อมูลด้วยตาเปล่าเกี่ยวกับการกระจายและปริมาณของคอลลาเจนและอีลาสติน การลดลงอย่างชัดเจนของสีแดงของกลุ่มเส้นใยคอลลาเจนและอีลาสตินหลังการรักษาชิ้นเนื้อผิวหนังด้วยรังสียูวี

ตารางที่ 1 แสดงค่าเชิงปริมาณของปริมาณคอลลาเจนและอีลาสตินในสภาวะการรักษา 3 ประการ ค่าเหล่านี้ช่วยให้เราวัดการปรับปรุงเนื้อหาคอลลาเจนและอีลาสติน และทำการเปรียบเทียบทางสถิติได้ การลดลงของคอลลาเจน (−23 เปอร์เซ็นต์เมื่อเทียบกับที่ไม่ได้รับการรักษา) และอีลาสติน (−30 เปอร์เซ็นต์เมื่อเทียบกับที่ไม่ได้รับการรักษา) หลังจากได้รับรังสียูวีอย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 2) หลังจากการรักษาด้วยผลิตภัณฑ์ทดสอบเป็นเวลา 6 วัน การตัดชิ้นเนื้อผิวหนังที่สัมผัสรังสียูวีสามารถกู้คืนคอลลาเจน (บวก 18 เปอร์เซ็นต์เมื่อเทียบกับรังสียูวีที่รักษา) และอีลาสติน (บวก 46 เปอร์เซ็นต์เมื่อเทียบกับรังสียูวีที่รักษา) แม้ว่าการจัดเรียงตัวของคอลลาเจนจะไม่ชัดเจนในภาพฮิสโตเคมีคอล (เนื่องจากคอลลาเจนมีอยู่มากมายและหนาแน่นที่สุดในผิวหนัง) แต่สังเกตลักษณะการเรียงตัวในแนวตั้งฉากของเส้นใยอีลาสตินที่วิ่งไปยังผิวหนังชั้นนอก (รูปที่ 1A) และผิวหนังที่ได้รับความเสียหายจากรังสียูวีภายหลัง การรักษาด้วยผลิตภัณฑ์ทดสอบ (รูปที่ 1C)

ELISA (รูปที่ 3) เปรียบเทียบระดับของตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่แสดงโดยการตรวจชิ้นเนื้อผิวหนังที่ได้รับการรักษาด้วยผลิตภัณฑ์ทดสอบหรือยาหลอก เมื่อเทียบกับยาหลอก ระดับอีลาสตินและคอลลาเจนเพิ่มขึ้น 2-3 เท่า โดยเฉพาะโปรคอลลาเจนประเภทที่ 1 (ผลิตภัณฑ์ทดสอบเทียบกับยาหลอก) แม้ว่าจะไม่มีนัยสำคัญ แต่ก็สังเกตเห็นการเพิ่มขึ้นที่สังเกตได้ (P < 0.1) ในกรดไฮยาลูโรนิกและ tenascin-X

RCM สามารถเปิดเผยการจัดระเบียบของเส้นใยคอลลาเจน (กลุ่มของเส้นใยคอลลาเจน) ในผิวหนังได้สำเร็จ (ภาพที่ 4) เนื่องจากคุณสมบัติทางแสงของแผ่นคอนโฟคอลและควอเตอร์เวฟเพลต เทคนิคนี้สามารถแยกแยะคอลลาเจน (สารคอนทราสต์ภายนอกที่แข็งแกร่งพร้อมไบรีฟริงเจนซ์) ออกจากเมทริกซ์อื่น ๆ ได้สำเร็จโดยไม่แยกส่วนและย้อมสีผิวหนัง คอลลาเจนที่แตกตัวเป็นช่วงสั้นๆ และการจัดเรียงตัวแบบเกาะกัน (ลักษณะเฉพาะของคอลลาเจนที่เสียหายและมีการจัดระเบียบไม่ดีในผิวหนังที่มีอายุมาก/มีอายุจากภาพถ่าย) สังเกตได้จากการตรวจชิ้นเนื้อผิวหนังที่ไม่ผ่านการบำบัด หลังจากการรักษาด้วยผลิตภัณฑ์ทดสอบเป็นเวลา 6 วัน การเรียงตัวของเส้นใยคอลลาเจนในชิ้นเนื้อผิวหนังหญิงอายุ 62-ปี (ผู้บริจาค #1) รายนี้ ดูค่อนข้างเป็นระเบียบมากกว่าเส้นใยคอลลาเจนที่ไม่ผ่านการบำบัดที่มีความยาวมากกว่า 100 µm ขนานกัน แม้ว่าจะมีความคมชัดต่ำ แต่เราสามารถสังเกตรูปร่างและขนาดของไฟโบรบลาสต์ได้ (เน้นด้วยลูกศรในรูปที่ 4) ไฟโบรบลาสต์ที่ใหญ่และกระจายตัวมีรูปร่างปกติในผิวหนังที่ผ่านการบำบัดเทียบกับผิวหนังที่ไม่ผ่านการบำบัด เซลล์กลมสว่างในรูปที่ 4C เป็นสิ่งที่น่าสนใจเป็นพิเศษ อาจเป็นแมสต์เซลล์หรือเซลล์อักเสบ ยังไม่เป็นที่แน่ชัดว่าเซลล์ที่อักเสบเหล่านี้เป็นตัวแทนของสภาวะสุขภาพผิวปกติหรือไม่ หรือไม่ว่าจะแสดงออกมาเพื่อตอบสนองต่อแรงที่กระทำบนหัวเลเซอร์เพื่อให้สัมผัสระหว่างหัวเลเซอร์และผิวหนังได้ดีขึ้นเพื่อให้ได้ภาพที่มีคุณภาพสูงของคอลลาเจน เส้นใย

ตารางที่ 2 แสดงดัชนีการกระจายตัวของค่าเฉลี่ยที่กำหนดโดยการวิเคราะห์ ConfoScan® ของภาพสุ่มเจ็ดภาพของผิวหนังที่ได้รับการรักษาและไม่ได้รับการรักษา คอลลาเจนหมายถึงดัชนีการกระจายตัวของกลุ่มที่ได้รับการบำบัดเทียบกับกลุ่มที่ไม่ได้รับการรักษาคือ 0.032 และ 0.064 ตามลำดับ การลดลงของดัชนีการกระจายตัวบ่งชี้ถึงการปรับปรุงในโครงสร้างคอลลาเจน

ในการมองลึกลงไปถึงการจัดเรียงตัวของคอลลาเจน ภาพ AFM ได้รับมาเพื่อให้เห็นภาพการเรียงตัวของคอลลาเจนในระดับนาโน (รูปที่ 5) เราสามารถเห็นเส้นใยคอลลาเจนแต่ละเส้น (ที่รวมตัวกันเป็นเส้นใยคอลลาเจน) ที่มีความหนาระดับนาโนเมตร นอกจากนี้ เรายังสามารถมองเห็นรูปแบบแถบขวางของเส้นใยคอลลาเจน (D ∼ 68 นาโนเมตร) ซึ่งสอดคล้องกับวรรณกรรม 11 และตรวจสอบว่า AFM สามารถแยกแยะคอลลาเจนจากเส้นใย ECM อื่นๆ ได้ ด้วยความสอดคล้องกันกับ RCM มีการสังเกตการจัดเรียงตัวของคอลลาเจนไฟบริลที่ค่อนข้างขนานกันภายใต้ AFM สำหรับผิวหนังที่ได้รับการรักษาและไม่ได้รับการรักษา

4. การอภิปราย

ในงานวิจัยนี้ เราได้สำรวจศักยภาพของการใช้เทคนิคการถ่ายภาพสามแบบเพื่อให้เห็นภาพการเปลี่ยนแปลงของคอลลาเจนในการตัดชิ้นเนื้อผิวหนังของมนุษย์ที่รักษาด้วยผลิตภัณฑ์ต่อต้านริ้วรอยเชิงพาณิชย์ซึ่งมีเปปไทด์สังเคราะห์มาตรฐานบางตัวที่ทราบกันดีว่ากระตุ้นให้เกิดการเปลี่ยนแปลงของคอลลาเจน เทคนิคการถ่ายภาพฮิสโตเคมีและการถ่ายภาพ RCM ควบคู่ไปกับการประมวลผลภาพเพื่อให้ได้ข้อมูลกึ่งปริมาณเกี่ยวกับปริมาณคอลลาเจนและการแตกตัวเป็นดัชนีให้คะแนนการปรับปรุงคอลลาเจนหลังการรักษาด้วยผลิตภัณฑ์ต่อต้านริ้วรอย

ที่น่าสนใจคือ การศึกษาของเราแสดงให้เห็นความสัมพันธ์ที่แข็งแกร่งมากระหว่างการถ่ายภาพฮิสโตเคมีและ ELISA เพื่อรายงานการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญของระดับคอลลาเจนและอีลาสตินหลังการรักษาด้วยผลิตภัณฑ์ทดสอบ โปรคอลลาเจนประเภทที่ 1 เป็นเครื่องหมายของคอลลาเจนที่สังเคราะห์ขึ้นใหม่ และการแสดงออกที่มากเกินไปโดยไฟโบรบลาสต์เพื่อตอบสนองต่อ Matrixyl® (Sederma/Croda) เป็นกลไกที่โดดเด่นสำหรับผลการต่อต้านริ้วรอย23,24 นอกจากนี้ยังมีการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ ในการแสดงออกของ A-SMA ซึ่งเป็นเครื่องหมายเฉพาะของไมโอไฟโบรบลาสต์ ซึ่งเป็นเซลล์ไฟโบรบลาสต์ที่มีความแตกต่างเป็นพิเศษ บทบาทของ A-SMA ในการหดตัวและการเปลี่ยนแปลง ECM ที่ใช้ไฟโบรบลาสต์นั้นเป็นที่เข้าใจกันดี 25 และมีรายงานความสัมพันธ์โดยตรงระหว่างการแสดงออกของ A-SMA และกิจกรรมการหดตัวของไฟโบรบลาสต์ 26 การเพิ่มขึ้นของกรดไฮยาลูโรนิกแม้ว่าจะไม่มีนัยสำคัญ เนื่องจากการมีอยู่ของกรดไฮยาลูโรนิกเป็นส่วนผสมที่ให้ความชุ่มชื้นในผลิตภัณฑ์ต่อต้านริ้วรอย TNSX เป็นโปรตีน ECM ใหม่ที่แปลเป็นภาษาท้องถิ่นระหว่างหรือที่พื้นผิวของคอลลาเจนไฟบริลในผิวหนังชั้นหนังแท้ และรายงาน TNSX เพื่อกระตุ้นการสร้างคอลลาเจนไฟบริลเจเนซิสที่ขึ้นกับปริมาณ 28,29 แม้ว่าจะมีข้อโต้แย้งว่า TNSX ผูกมัดเฉพาะกับประเภทโปรคอลลาเจน 1 หรือสารชีวโมเลกุลคอลลาเจนและ ECM อื่นๆ ด้วย 28,29 มีรายงานการเพิ่มขึ้นของ TNSX ตามขนาดยาเพื่อตอบสนองต่อ SKINectura™ (Lucas Meyer Cosmetics) ซึ่งเป็นสารออกฤทธิ์ในผลิตภัณฑ์ทดสอบการต่อต้านริ้วรอย มีรายงาน (คำขอรับสิทธิบัตรระหว่างประเทศ # PCT /IB2017/056370). ดังนั้นจึงสามารถตั้งสมมติฐานได้ว่า Matrixyl® (Sederma/Croda) และ SKINectura™ (Lucas Meyer Cosmetics) ในผลิตภัณฑ์ทดสอบทำงานร่วมกันเพื่ออำนวยความสะดวกในการสังเคราะห์และจัดเรียงตัวของคอลลาเจนที่สังเคราะห์ขึ้นใหม่ ซึ่งเป็นโปรคอลลาเจนประเภทที่ 1 การลดลงของคอลลาเจนและอีลาสตินอย่างมีนัยสำคัญ หลังการรักษาด้วยรังสียูวี (แบบจำลองผิวที่ถูกทำลายจากภาพถ่าย) ตามด้วยการซ่อมแซมหลังการรักษาด้วยผลิตภัณฑ์ต่อต้านริ้วรอย (ระดับกลับสู่ผิวดั้งเดิมที่ไม่ได้สัมผัสกับรังสียูวี) บ่งชี้ถึงความสามารถของการถ่ายภาพฮิสโทเคมี (กล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์) และเทคนิคการประมวลผลภาพ วัดการเปลี่ยนแปลงเล็กน้อยในเนื้อหาของส่วนประกอบ ECM (รูปที่ 1 และ 2) มีความพยายามอย่างขยันขันแข็งเพื่อพยายามสร้างภาพการจัดเรียงตัวของคอลลาเจนและอิลาสติน (หลังจากการติดฉลากอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์) โดยใช้ระบบถ่ายภาพฟลูออเรสเซนส์ Thunder Leica ที่ซื้อมาใหม่ อย่างไรก็ตาม ความละเอียดไม่สูงพอ และด้วยเหตุนี้จึงไม่สามารถสรุปได้อย่างน่าเชื่อถือเกี่ยวกับองค์กร การถ่ายภาพ CLSM ที่ใช้ฟลูออเรสเซนส์ให้ความละเอียดสูงกว่าการถ่ายภาพไวด์ฟิลด์ฟลูออเรสเซนซ์แบบทั่วไปเพื่อให้มองเห็นการจัดเรียงคอลลาเจนและอิลาสตินได้อย่างชัดเจน การถ่ายภาพฟลูออเรสเซนซ์แบบไวด์ฟิลด์แบบดั้งเดิมถูกจำกัดโดยความเด่นของการเรืองแสงทุติยภูมิและความหนาของตัวอย่าง ซึ่งไม่ใช่ปัญหาสำหรับ CLSM

เราสามารถเห็นภาพการจัดเรียงตัวของคอลลาเจนโดยใช้ RCM (รูปที่ 4) RCM เป็นทางเลือกที่ดีกว่า CLSM เนื่องจาก (1) RCM ไม่ใช้ฉลากหรือการย้อมสีใดๆ (ไม่เหมือนกับ fluorescence-CLSM ใช้เทคนิคการถ่ายภาพผิวหนังทางคลินิกสำหรับคอลลาเจน การปรับปรุงเนื้อสัมผัสของเส้นใยคอลลาเจน เส้นใยยาวและบางหลังการรักษาด้วยผลิตภัณฑ์ต่อต้านริ้วรอย (เทียบกับเส้นใยคอลลาเจนที่หนาแน่นและสั้นแยกส่วนในผิวหนังที่ไม่ได้รับการดูแล) บ่งชี้ถึงรูปแบบการทำงานในระดับโครงสร้าง ความละเอียดของ RCM นั้นสูงพอที่จะจับเซลล์ไฟโบรบลาสต์ ซึ่งเป็นโรงงานสังเคราะห์คอลลาเจนของผิวหนังด้วยซ้ำ เส้นใยคอลลาเจนที่พันรอบไฟโบรบลาสต์อาจเป็นเส้นใยคอลลาเจนที่สังเคราะห์ขึ้นใหม่ เนื่องจากมีเส้นผ่านศูนย์กลางบางกว่าเส้นใยคอลลาเจนที่อยู่รอบๆ และกลุ่มของเส้นใยดังกล่าว (รูปที่ 4) จากการวิเคราะห์ ConfoScan® ของภาพ RCM แบบสุ่ม เราสามารถสรุปได้ว่าผิวหนังที่ไม่ผ่านการบำบัดมีค่าดัชนีคอลลาเจนที่แตกกระจายสูงกว่ามากเมื่อเทียบกับผิวหนังที่ได้รับการรักษา แม้ว่าในภาพ RCM เราจะเห็นการเรียงตัวแบบขนานของเส้นใยคอลลาเจนหลังการรักษาด้วยผลิตภัณฑ์ทดสอบ แต่ก็ไม่สามารถสรุปได้เว้นแต่จะคำนวณอัตราส่วนไอโซโทรปี/แอนไอโซโทรปี ซึ่งอยู่นอกเหนือขอบเขตของการวิจัยนี้ อย่างไรก็ตาม ความละเอียดสูงพิเศษของ AFM ที่ระดับนาโนแสดงให้เห็นหลักฐานการเรียงตัวของคอลลาเจนที่ระดับไฟบริลเดี่ยว จากความสัมพันธ์เชิงบวกระหว่างภาพ RCM และ AFM ในการเรียงตัวแบบขนานของเส้นใยคอลลาเจน (ไม่ได้รับการบำบัดเทียบกับที่ได้รับการบำบัด) มีความเป็นไปได้สูงที่ผลิตภัณฑ์ต่อต้านริ้วรอยจะมีคุณสมบัติการจัดโครงสร้างคอลลาเจนใหม่ที่อ้างสิทธิ์ สำหรับการวิจัยในอนาคตควรทำการศึกษาเพื่อตรวจสอบจุดเดิม (เส้นใยคอลลาเจน) เมื่อเวลาผ่านไป (การศึกษาตามยาว) ก่อนและหลังการรักษาด้วยผลิตภัณฑ์ทดสอบเพื่อตรวจสอบว่าเป็นการจัดเรียงตัวของคอลลาเจนที่มีอยู่หรือเส้นใยคอลลาเจนที่สังเคราะห์ขึ้นใหม่ สอดคล้องกันมากขึ้น อย่างไรก็ตาม การศึกษาระยะยาวดังกล่าวจะต้องมีการบูรณาการเครื่องมือ RCM และ AFM เพื่อให้สามารถถ่ายภาพเนื้อเยื่อที่มีชีวิตและถ่ายภาพไทม์แลปส์เพื่อบันทึกการเปลี่ยนแปลงตามเวลาจริงในการปรับรูปแบบคอลลาเจน

5. สรุปผลการวิจัย

จากผลการวิจัยของเราจากการศึกษาพิสูจน์แนวคิดนี้ เราสามารถสรุปได้ว่าเทคนิคการถ่ายภาพ AFM, RCM และฮิสโตเคมีมีความสามารถในการติดตามการเปลี่ยนแปลงของการจัดเรียงตัวของคอลลาเจนในระดับนาโน จุลภาค และมหภาคตามลำดับ ภาพ AFM และ RCM แสดงหลักฐานการเรียงตัวของคอลลาเจนในระดับนาโนและไมโครหลังการรักษาด้วยผลิตภัณฑ์ทดสอบ การวิเคราะห์ภาพ RCM แบบสุ่มและภาพฮิสโตเคมีโดยใช้วิธีการประมวลผลภาพที่เป็นกรรมสิทธิ์บ่งชี้เพิ่มเติมว่าผิวหนังหลังการรักษาด้วยผลิตภัณฑ์ทดสอบมีการแตกตัวของคอลลาเจนต่ำกว่าและความหนาแน่นของคอลลาเจนสูงกว่าเมื่อเทียบกับที่ไม่ผ่านการบำบัด แม้ว่าจะมีความพยายามในการพัฒนาและตรวจสอบความถูกต้องของอัลกอริธึมการประมวลผลภาพ 3,5,6,12–14,16,17 จำเป็นต้องมีการวิจัยเพิ่มเติมในทิศทางนี้เพื่อให้บรรลุผลการวิจัยก่อนคลินิกและทางคลินิกที่ขับเคลื่อนด้วยข้อมูลและการตัดสินใจในการวินิจฉัย แนวทางแบบองค์รวมของเราในการใช้เทคนิคการถ่ายภาพที่มีความละเอียดสูงและเนื้อหาสูงร่วมกับอัลกอริธึมและซอฟต์แวร์การประมวลผลภาพที่ทรงพลังและแข็งแกร่งเป็นขั้นตอนในทิศทางนี้

แม้ว่าขอบเขตของการวิจัยนี้จะจำกัดอยู่ที่การตรวจสอบองค์กรของคอลลาเจนเพื่อตอบสนองต่อผลิตภัณฑ์ทดสอบการต่อต้านริ้วรอยบนชิ้นเนื้อผิวหนังของมนุษย์ภายนอกร่างกาย แต่เทคนิคการถ่ายภาพเหล่านี้มีความหมายสำหรับการตรวจสอบและการวัดปริมาณของการเปลี่ยนแปลง ECM ซึ่งเป็นจุดเด่นของการพัฒนาตามปกติ การรักษาบาดแผล ตลอดจนตัวบ่งชี้หลักในพยาธิสรีรวิทยาของสภาวะที่คุกคามชีวิต เช่น พังผืดและมะเร็งที่เกิดจากการเปลี่ยนแปลง ECM ที่ไม่มีการควบคุม2

ผลประโยชน์ทับซ้อน

ผู้เขียนขอประกาศว่าไม่มีความขัดแย้งทางผลประโยชน์ใดที่สามารถถูกมองว่าเป็นอคติต่อความเป็นกลางของรายงานการวิจัย

อ้างอิง

1. Shin JW, Kwon SH, Choi JY, Na JI, Choi HR, Park KC กลไกระดับโมเลกุลของการแก่ชราทางผิวหนังและการชะลอวัย Int J Mol วิทย์ 2019;20(9):2126.

2. ค็อกซ์ ทีอาร์, เออร์เลอร์ เจที การเปลี่ยนแปลงและสภาวะสมดุลของเมทริกซ์นอกเซลล์: ผลกระทบต่อโรคไฟโบรติกและมะเร็ง ดิสโมเดลเมค 2554;4(2):165–78

3. Pittet JC, Freis O, Vazquez-Duchene MD, Perie G, Pauly G. การประเมินปริมาณอีลาสติน/คอลลาเจนในชั้นหนังแท้ในร่างกายของมนุษย์โดยการตรวจเอกซเรย์แบบมัลติโฟตอนที่มีความลึกและความสัมพันธ์กับอายุ เครื่องสำอาง. 2014;1(3):211–21

4. Longo C, Casari A, Beretti F, Cesinaro AM, Pellacani G. ความชราของผิวหนัง: การประเมินด้วยกล้องจุลทรรศน์ของการเปลี่ยนแปลงของผิวหนังชั้นนอกและผิวหนังโดยใช้กล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอล เจ แอม อคาเดมี เดอร์มาทอล 2013;68(3):e73–82.

5. Yamazaki K, Li E, Miyazawa A, Kobayashi M. การตรวจสอบเชิงลึกของคุณสมบัติทางแสงและลักษณะทางสัณฐานวิทยาของริ้วรอยแบบเจาะลึกในบริเวณมุมตาด้วยการตรวจเอกซเรย์การเชื่อมโยงกันของแสงเมทริกซ์โจนส์แบบหลายคอนทราสต์ สกิน เรส เทคโนโลยี 2020;27(3):435–443.

6. Yow AP, Cheng J, Li A, Srivastava R, Liu J, Wong DWK และคณะ อัตโนมัติใน vivo 3D high-definition optical coherence tomography skin system Int Conf ประจำปี IEEE Eng Med Biol Soc. 2559;2559:3895–8

7. Ruini C, Schuh S, Sattler E, Welzel J. Line-field confocal optical coherence tomography - การใช้งานจริงในโรคผิวหนังและการเปรียบเทียบกับวิธีการสร้างภาพ สกิน เรส เทคโนโลยี 2021;27:340–52.

8. Tal S, Maresky HS, Bryan T, Ziv E, Klein D, Persitz A, et al.MRI ในการตรวจหาฟิลเลอร์ฉีดเครื่องสำอางบนใบหน้า เฮดเฟซเมด. 2559;12(1):27.

9. Mandava A, Ravuri PR, Konathan R. การถ่ายภาพอัลตราซาวนด์ความละเอียดสูงของรอยโรคที่ผิวหนัง การถ่ายภาพ J Radiol ของอินเดีย 2556;23(3):269–7.

10. Edwards SJ, Mavranesouli I, Osei-Assibey G, Marceniuk G, Wakefield V, Karner C. Vivascope 1500 และ 3000 ระบบตรวจจับและติดตามรอยโรคที่ผิวหนัง: การทบทวนอย่างเป็นระบบและการประเมินทางเศรษฐกิจ การประเมินเทคโนโลยีด้านสุขภาพ 2016;20(58):1–260.

11. เส้นใย Ushiki T. Collagen, เส้นใยร่างแห, เส้นใยยืดหยุ่น ความเข้าใจที่ครอบคลุมจากมุมมองทางสัณฐานวิทยา อาร์คฮิสทอลไซตอล. 2545;65(2):109–26

12. Starborg T, Kalson NS., Lu Y, Mironov A, Cootes T, Holmes D และอื่นๆ การใช้กล้องจุลทรรศน์อิเลคตรอนแบบส่องผ่านและ 3view(R) เพื่อกำหนดขนาดของคอลลาเจนไฟบริลและโครงสร้างสามมิติ แนท โพรเทค. 2556;8(7):1433–48.

13. Wegner KA, Keikhosravi A, Eliceiri AW, Vezina CM การเรืองแสงของพิโคซิเรียสเรดมัลติเพล็กซ์ด้วยอิมมูโนฮิสโตเคมีสำหรับการประเมินเชิงปริมาณของคอลลาเจนในส่วนเนื้อเยื่อ เจ ฮิสโตเคม ไซโตเคม 2017;65(8):479–90.

14. Changoor A, Tran-Khanh N, Methot S, Garon M, Hurtig MB, Shive MS และอื่นๆ วิธีการใช้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงโพลาไรซ์เพื่อการจัดระดับคอลลาเจนที่แม่นยำและเชื่อถือได้ในการซ่อมแซมกระดูกอ่อน Osteoarthr Cartil. 2554;19(1):126–35.

15. Bernstein EF, Chen YQ, Kopp JB, Fisher L, Brown DB, Hahn PJ และอื่นๆ การได้รับแสงแดดเป็นเวลานานจะเปลี่ยนแปลงคอลลาเจนของ papillary dermis การเปรียบเทียบผิวที่ป้องกันแสงแดดและผิวที่ผ่านการถ่ายภาพโดยการวิเคราะห์ทางตอนเหนือ การย้อมสีอิมมูโนฮิสโตเคมี และกล้องจุลทรรศน์สแกนด้วยเลเซอร์คอนโฟคอล เจ แอม อคาเดมี เดอร์มาทอล 2539;34(2 พอยต์ 1):209–18.

16. Schuurmann M, Stecher MM, Paasch U, Simon JC, Grunewald S. การประเมินการย้อมสีแบบดิจิตอลสำหรับกล้องจุลทรรศน์สแกนด้วยเลเซอร์ confocal ex-vivo เจดีวี. 2020;34(7):1496–9.

17. Gareau DS ความเป็นไปได้ของโมเสกคอนโฟคอลแบบมัลติโมดอลที่ย้อมด้วยสีดิจิทัลเพื่อจำลองจุลพยาธิวิทยา J Biomed ตัวเลือก 2552;14(3):034050.

18. Zhang Y, Ingham B, Cheong S, Ariotti N, Tilley RD, Naffa R และอื่น ๆ การศึกษาการกระเจิงของรังสีเอกซ์มุมเล็กซินโครตรอนตามเวลาจริงของโครงสร้างคอลลาเจนระหว่างการทำเครื่องหนัง Ind Eng เคมี Res 2018;57(1):63–9.

19. จากภาพสู่ข้อมูล: การประมวลผลภาพในโรคผิวหนังและชีววิทยาผิวหนัง ใน: Hamblin, M., Avci, P., Gupta, G., บรรณาธิการ การถ่ายภาพในผิวหนัง, 1st ed.Academic Press: Amsterdam, Netherland; 2559. น. 519–35.

20. Schneider SL, Kohli I, Hamzavi IH, Council ML, Rossi AM, Ozog DM เทคโนโลยีการถ่ายภาพที่เกิดขึ้นใหม่ในโรคผิวหนัง ตอนที่ II: การใช้งานและข้อจำกัด เจ แอม อคาเดมี เดอร์มาทอล 2019;80(4):1121–31.

21. Guida S, Pellacani G, Ciardo S, Longo C. การถ่ายภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบสะท้อนแสงของผิวหนังที่มีอายุมากขึ้นและมะเร็งผิวหนัง เดอร์มาทอล แพรค คอนเซปต์ 2021;11(3):2021068.

22. Wang H, Shyr T, Fevola MJ, Cula GO, สตามาตาส GN การเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาที่เกี่ยวข้องกับอายุของเมทริกซ์ผิวหนังในผิวหนังมนุษย์ได้รับการบันทึกไว้ในวิฟด้วยกล้องจุลทรรศน์มัลติโฟตอน J Biomed ตัวเลือก 2018;23(3):1–4.

23. โจนส์ RR, Castelletto V, Connon CJ, Hamley IW ผลกระตุ้นคอลลาเจนของเปปไทด์ แอมฟิฟิล C16-KTTKS ต่อไฟโบรบลาสต์ของมนุษย์ มอล ฟาร์มา. 2556;10(3):1063–9.

24. Gorouhi F, ไมบัค HI บทบาทของเปปไทด์เฉพาะที่ในการป้องกันหรือรักษาผิวที่มีอายุ Int J Cosmet Sci. 2552;31(5):327–45.

25. Shinde AV, Humeres C, Frangogiannis NG บทบาทของแอคตินของกล้ามเนื้อเรียบในการหดตัวและการเปลี่ยนแปลงเมทริกซ์ของไฟโบรบลาสต์ Biochim Biophys แอคต้า 2017;1863(1):298–309.

26 Hinz B, Coletta G, Tomasek JJ, Gabbiani G, Chaponnier C. การแสดงออกของกล้ามเนื้อเรียบของอัลฟ่าแอคตินควบคุมกิจกรรมการหดตัวของไฟโบรบลาสต์ โมลไบโอลเซลล์. 2544;12(9):2730–41.

27. Valcourt U, Alcaraz LB, Exposito JY, Lethias C, Bartholin L. Tenascin-X: นอกเหนือจากฟังก์ชั่นสถาปัตยกรรม เซลล์ Adh Migr 2015;9(1–2):154– 65.

28 Egging D, van den Berkmortel F, Taylor G, Bristow G, Schalkwijk J. ปฏิสัมพันธ์ของโดเมน tenascin-X ของมนุษย์กับโมเลกุลเมทริกซ์นอกเซลล์ผิวหนัง อาร์ค เดอร์มาทอล เรส 2550;298(8):389–96.

29. Minamitani T, Ikuta T, Saito Y, Takebe G, Sato M, Sawa H และอื่นๆ การปรับการสร้างคอลลาเจนไฟบริลเจเนซิสโดย tenascin-X และคอลลาเจนชนิดที่ VI Exp Cell Res. 2547;298(1):305–15

ข้อมูลสนับสนุน

ข้อมูลสนับสนุนเพิ่มเติมสามารถพบได้ในบทความเวอร์ชันออนไลน์ที่เว็บไซต์ของผู้จัดพิมพ์

【สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】