สารออกฤทธิ์ของ Cistanche Tubulosa มีบทบาทอย่างไรในโรคอัลไซเมอร์?
Feb 26, 2022
JIANHUA YANG1*, BOWEI JU1,2*, YAO YAN1, HUANHUAN XU1, SHANSHAN WU1, DANDAN ZHU1, DANDAN CAO1 และ JUNPING HU2
เชิงนามธรรม.การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาผลกระทบของการป้องกันระบบประสาทของฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์(PhG) บน H2O2- และเปปไทด์ -amyloid (A )1-42-ที่เหนี่ยวนำให้เกิดการบาดเจ็บของเซลล์ PC12 เป็นแบบจำลองในหลอดทดลองของโรคอัลไซเมอร์ (AD). สภาวะการชักนำที่เหมาะสมที่สุดได้ถูกกำหนดขึ้นโดยการตรวจคัดกรองเวลาฟักตัวและความเข้มข้นต่างๆ เซลล์ PC12 ถูกบำบัดด้วย 0.5 µM A 1-42 และ H2O2 ต่อหน้า PhG เป็นเวลา 24 ชั่วโมง และจากนั้นความอยู่รอดของเซลล์ถูกประเมินโดยการสอบวิเคราะห์ MTT ปริมาณแลคเตทดีไฮโดรจีเนส (LDH) และปริมาณมาลอนไดอัลดีไฮด์ (MDA) ยังถูกวัดอีกด้วย เงื่อนไขที่เหมาะสมสำหรับการจัดตั้งADแบบจำลองคือการบำบัดเซลล์ PC12 ด้วย 0.5 µM A 1-42 เป็นเวลา 48 ชั่วโมงหรือด้วย 25 µM H2O2 ที่ละลายใน DMEM ด้วย PBS PhGs ที่ความเข้มข้น 5, 25 และ 50 µg/ml เพิ่มความอยู่รอดและลดการปล่อย LDH และ MDA โดยเซลล์ PC12 ที่ได้รับบาดเจ็บด้วย A 1-42 หรือ H2O2 โดยสรุป แบบจำลองของการบาดเจ็บของเซลล์ PC12 ที่เหนี่ยวนำโดย 1-42- และ H2O2- ถูกสร้างขึ้นอย่างประสบความสำเร็จ PhGs แสดงให้เห็นว่ามีผลในการป้องกันระบบประสาทที่มีนัยสำคัญต่อการบาดเจ็บของเซลล์ที่เหนี่ยวนำด้วย 1-42- หรือ H2O2-
ติดต่อ:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Cistanche tubulosa มีเอฟเฟกต์มากมาย คลิกที่นี่เพื่อทราบข้อมูลเพิ่มเติม
บทนำ
โรคอัลไซเมอร์ (AD) ความผิดปกติของระบบประสาทที่มีลักษณะทางคลินิกของการสูญเสียความจำแบบก้าวหน้าและการด้อยค่าของฟังก์ชันการรับรู้ (1) เป็นสาเหตุที่พบบ่อยที่สุดของภาวะสมองเสื่อมทั่วโลก (2) ต้นทุนทางการเงินมีมากมายเนื่องจากความชุกของ AD (3) ดังนั้นจึงเป็นเรื่องเร่งด่วนที่จะพัฒนาวิธีการที่เหมาะสมในการจัดการและป้องกันAD.
พยาธิกำเนิดของADมีความสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับการสะสมของ neurofibrillary tangles และ senile plaques (SPs) ในบริเวณสมองที่ได้รับผลกระทบ (4,5) -amyloid เปปไทด์ (A ) ซึ่งเป็นส่วนประกอบหลักของ SP ได้รับรายงานว่ามีบทบาทสำคัญในการลุกลามของADมีผลเป็นพิษต่อเซลล์ประสาท (6) ชิ้นส่วน ซึ่งรวมถึง A 1-40, A 25-35 และ A 1-42 ได้ถูกสร้างขึ้นผ่านการแยกตัวของสารตั้งต้นของอะไมลอยด์ (7) ความเป็นพิษต่อระบบประสาทของ A 1-42 พบว่าสูงกว่าของ A 25-35 และ A 1-40 อย่างมีนัยสำคัญ และ A 1-42 สามารถกระตุ้นให้เกิดADรุ่น (1,8-10) ความเครียดออกซิเดชันอาจเกี่ยวข้องกับการเกิดโรคของADและเป็นกลไกหลักที่ทำให้เกิดพิษต่อระบบประสาทที่เกิดจาก A (11-13) การศึกษาหลายชิ้นชี้ให้เห็นว่า A 1-42 ทำให้เกิดการสะสมภายในเซลล์ของสปีชีส์ออกซิเจนปฏิกิริยา (ROS) ซึ่งนำไปสู่การออกซิเดชันของไขมันและโปรตีน ความเสียหายของดีเอ็นเอและการกระตุ้นสัญญาณของจุดตรวจวัฏจักรเซลล์ (1,14,15) ปริมาณ H2O2 ที่มากเกินไปอาจนำไปสู่ความเสียหายจากปฏิกิริยาออกซิเดชันและทำให้เกิดการตายของเซลล์ PC12 (16) ดังนั้น การกำหนดเป้าหมายความเครียดออกซิเดชันอาจเป็นแนวทางที่มีแนวโน้มสำหรับการพัฒนากลยุทธ์การรักษาเพื่อยับยั้งความเป็นพิษต่อระบบประสาทที่เกิดจาก A ใน AD
เฮอร์บา (ส.)Cistancheยาสมุนไพรจีนที่ใช้กันทั่วไปในจีนแผ่นดินใหญ่เพื่อบำรุงไตและเติมสารสำคัญและเลือด ถูกนำมาใช้เพื่อรักษาความจำเสื่อมและอาการท้องผูกในวัยชรา (17) Phenylethanoid glycoside (PhG) ซึ่งเป็นหนึ่งในองค์ประกอบสำคัญใน H.Cistancheปรับปรุงการด้อยค่าของการตายของเซลล์ประสาทที่เกิดจาก A 25-35 ผ่านฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ (18,19) การศึกษาก่อนหน้านี้ระบุองค์ประกอบหลักห้าประการจาก PhGs ทั้งหมด ได้แก่แอคทีโอไซด์, 2'-อะซิติแลคติโอไซด์,เอ็กไคนาโคไซด์, ซิสตาโนไซด์และไอโซแอคทีโอไซด์ (20). ในบรรดาองค์ประกอบเหล่านี้แอคทีโอไซด์และเอ็กไคนาโคไซด์มีรายงานว่ามีผลป้องกันระบบประสาทต่อความเป็นพิษต่อระบบประสาทที่เกิดจาก A 25-35- หรือ H2O2- (21-23) ตัวอย่างเช่น Wu et al (24) แนะนำว่าแอคทีโอไซด์และเอ็กไคนาโคไซด์
คำสำคัญ:phenylethanoidไกลโคไซด์, เซลล์ PC12, H2O2, -อะไมลอยด์ เปปไทด์1-42, การป้องกันระบบประสาท, ซิสแทนเช่
วัสดุและวิธีการ
การเตรียมปริญญาเอก PhG ทั้งหมดถูกสกัดจาก H.Cistancheตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (25) ลำต้นตากแห้งของ H.Cistancheถูกทำให้เป็นผงและสกัดโดยการซึมผ่านด้วย 80 เปอร์เซ็นต์ EtOH เปอร์โคเลตถูกระเหยภายใต้แรงดันที่ลดลง ตามด้วยแขวนลอยใหม่ในปริมาณที่เหมาะสมของ H2O2 (1{{20}}0 ไมโครโมล/ลิตร) ของผสมถูกแยกเดี่ยวบน SP-825 macroporous resin column (มิตซูบิชิเคมิคอล, โตเกียว, ญี่ปุ่น) และถูกชะด้วย EtOH 0, 30, 50, 70 และ 90 เปอร์เซ็นต์ในน้ำ เพื่อให้ได้เศษส่วนที่อุดมด้วย PhG ตัวชะ EtOH 30-50 เปอร์เซ็นต์ถูกทำให้เข้มข้นและทำให้แห้งภายใต้แรงดันที่ลดลง อัลตราไวโอเลต (UV) สเปกโตรโฟโตเมตรีถูกดำเนินการเพื่อกำหนดหาค่า PhG ทั้งหมด เนื้อหาของอิไคนาโคไซด์และแอกทิโอไซด์ถูกกำหนดโดยโครมาโตกราฟีของเหลวแรงดันสูงตามโปรโตคอลก่อนหน้า (26) คอลัมน์ Hypersil ODS-2 (4.6x250 มม., 5 µm; Dalian Elite Analytical Instruments, Co., Ltd., Dalian, China) ถูกใช้และบำรุงรักษาที่อุณหภูมิห้อง เฟสเคลื่อนที่คือเมทิลไซยาไนด์และน้ำที่มีกรดฟอสฟอริก 0.4 เปอร์เซ็นต์ (v/v; Sigma-Aldrich; Merck KGaA, Darmstadt, Germany) อัตราการไหล 0.75 มล./นาที และความยาวคลื่นตั้งไว้ที่ 333 นาโนเมตร
การเพาะเลี้ยงเซลล์และการรักษาด้วยยา สายเซลล์ pheochromocytoma หนู PC12 จัดทำโดย Dr He Chunhui, Medical School, Xinjiang Medical University (Urumqi, China) เซลล์ได้รับการเพาะเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อ Eagle's modified ที่มีน้ำตาลกลูโคสสูงของ Dulbecco (DMEM; Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA) ที่มีซีรั่มวัวในครรภ์ 10 เปอร์เซ็นต์ (Sangon Biotech Co. Ltd., Shanghai, China) , 100 U/ml penicillin และ 100 U/ml streptomycins ในตู้อบที่อุณหภูมิ 37˚C ที่มีคาร์บอนไดออกไซด์ 5 เปอร์เซ็นต์ และอากาศ 95 เปอร์เซ็นต์ เมื่อถึงจุดบรรจบกัน 80 เปอร์เซ็นต์ เซลล์จะได้รับทริปซิน 0.25 เปอร์เซ็นต์และผ่านเข้าไป
เพื่อที่จะกำจัดการรบกวนของตัวยาเองต่อการเติบโตของเซลล์ PC12 ได้ทำการทดลองความเป็นพิษ โดยสรุป เซลล์ PC12 (3x104 เซลล์/มล.) ถูกเพาะในจาน 96-หลุมที่ 100 ไมโครลิตร/หลุมและบ่มที่ 37˚C ข้ามคืน หลังจากการทิ้ง supernatant นั้น DMEM สมบูรณ์ 200 µl ถูกเติมในกลุ่มว่าง ในขณะที่เซลล์ในกลุ่มแทรกแซงได้รับการรักษาโดย PhGs ในปริมาณต่างๆ (5, 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175 และ 200 µg/ มล.) หลังจากการบ่มเซลล์ที่ 37˚C เป็นเวลา 48 ชั่วโมง สารละลาย MTT 20 µl (Sigma‑Aldrich; Merck KGaA) ถูกเติมลงในแต่ละหลุม หลังจากการบ่มเป็นเวลา 4 ชั่วโมง สารลอยเหนือตะกอนจะถูกทิ้งและเติมไดเมทิลซัลฟอกไซด์ 150 ไมโครลิตรต่อหลุม ตามด้วยการกวนเป็นเวลา 10 นาที ตรวจพบค่าความหนาแน่นของแสง (OD) ที่ 490 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านเพลต ELISA
การบาดเจ็บของเซลล์ PC12 ที่เกิดจาก 1‑ 42 เปปไทด์ 1-42 ที่ซื้อจาก Bioss Biotech (ปักกิ่ง ประเทศจีน) ถูกละลายในน้ำ (100 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ต่อมา ของผสมถูกบ่มที่ 37˚C เป็นเวลา 4 วันและเก็บไว้ที่ 4˚C ก่อนใช้
เซลล์ PC12 ถูกเพาะในเพลต 96-หลุม (3xl04 เซลล์ใน 100 ไมโครลิตรต่อหลุม) หลังจากการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 24 ชั่วโมงสำหรับการเกาะติด 50 µl A 1-42 ที่ความเข้มข้นสุดท้ายต่างๆ (0, 0.25, 0.5, 1, 1.5 หรือ 2 µM) ที่ละลายใน DMEM ที่ปราศจากซีรัมถูกเติมลงไป ตามด้วย ฟักตัวเป็นเวลา 24, 48, 72 หรือ 96 ชั่วโมง ความมีชีวิตของเซลล์ถูกประเมินโดยการสอบวิเคราะห์ MTT ความเข้มข้นของ A 1-42 ที่เหมาะสมคือ 0.5 กำหนดหาเป็น µM
เซลล์ PC12 (3xl04 เซลล์ต่อหลุม) ถูกบำบัดด้วยขนาดต่างๆ ของ PhGs (0, 0.5, 5, 25 หรือ 50 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ต่อหน้า 0.5 µM A 1-42 เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ความมีชีวิตของเซลล์ถูกประเมินโดยการสอบวิเคราะห์ MTT
การบาดเจ็บของเซลล์ PC12 ที่เกิดจาก H2O2 เซลล์ PC12 ถูกเคลือบในเพลต 96-หลุม (3xl04 เซลล์ใน 100 ไมโครลิตรต่อหลุม) หลังจากการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 24 ชั่วโมงสำหรับการเกาะติด H2O2 100 ไมโครลิตรที่ความเข้มข้นสุดท้ายต่างๆ (0, 25, 50, 100, 200, 300, 400 และ 500 ไมโครโมลาร์) ถูกละลายใน DMEM โดยมีหรือไม่มี PBS (0.01 โมล/ลิตร) ถูกเติม ตามด้วยฟักตัว 24 ชม. ความมีชีวิตของเซลล์ถูกประเมินโดยการสอบวิเคราะห์ MTT ความเข้มข้นของ H2O2 และตัวทำละลายที่เหมาะสมที่สุดถูกกำหนดหาเพื่อสร้างแบบจำลองในหลอดทดลองของ AD
เซลล์ PC12 (3xl04 เซลล์ต่อหลุม) ถูกบำบัดด้วยขนาดยาต่างๆ ของ PhG (0, 0.5, 5, 25 และ 50 ไมโครโมลาร์) หลังจากการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 24 ชั่วโมงสำหรับการเกาะติด เซลล์ PC12 ถูกบำบัดด้วย 100 µl H2O2 ที่ละลายใน DMEM ด้วย PBS ต่อหน้า PhGs เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ความมีชีวิตของเซลล์ถูกประเมินโดยการสอบวิเคราะห์ MTT
การสอบวิเคราะห์การปลดปล่อยแลคเตตดีไฮโดรจีเนส (LDH) การบาดเจ็บของเซลล์ได้รับการประเมินโดยการวัดกิจกรรม LDH ในส่วนเหนือตะกอนของเซลล์ PC12 โดยใช้ชุดอุปกรณ์ LDH ตามโปรโตคอลของผู้ผลิต (cat. no. 20150604; Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, จีน). โดยสรุป H2O ที่กลั่นสองครั้ง, กรดไพรูวิก 0.2 ไมโครโมล/มิลลิลิตร, บัฟเฟอร์เมทริกซ์และบัฟเฟอร์โคเอ็นไซม์ I ถูกเติมตามลำดับที่ 48 ชั่วโมงหลังการบำบัดด้วยยา หลังจากการบ่มที่ 37˚C เป็นเวลา 15 นาที เติม 2,4‑dinitro‑phenylhydrazine ต่อมา 250 ไมโครลิตรของสารละลาย NaOH 0.4 โมลาร์ถูกเติมในแต่ละหลุม ส่วนลอยเหนือตะกอนถูกเก็บหลังจากการบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง จากนั้นวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 450 นาโนเมตรด้วยเครื่องอ่านไมโครเพลท
การวัดค่ามาลอนไดอัลดีไฮด์ (MDA) วัด MDA ในส่วนเหนือตะกอนของเซลล์ PC12 โดยใช้ชุดเครื่องมือทางการค้า (cat. no. 20150604; Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute) ตามระเบียบวิธีของผู้ผลิต กล่าวโดยย่อ แอลกอฮอล์ที่คายน้ำและรีเอเจนต์อื่นๆ ถูกเติมตามลำดับ ตามด้วยฟักตัวในอ่างน้ำ ที่อุณหภูมิ 95˚C เป็นเวลา 40 นาที ของผสมถูกหมุนเหวี่ยงที่ 1,006 xg และ 25˚C เป็นเวลา 10 นาทีหลังจากการทำให้เย็นลง จากนั้นใช้ supernatant เพื่อกำหนดเนื้อหาของ MDA ต่อมาวัดค่าการดูดกลืนด้วยเครื่องอ่านไมโครเพลทที่ 532 นาโนเมตร
การประเมินผลการป้องกันของอิชินาโคไซด์และแอกทิโอไซด์ต่อ AD ในหลอดทดลอง เซลล์ PC12 ถูกเพาะที่ความหนาแน่น 3xl04 เซลล์/หลุมในจาน 96-หลุม (100 ไมโครลิตร/หลุม) เซลล์ถูกฟักด้วยยา ได้แก่ echinacoside (cat. no. 111670-200503; National Institutes for Food and Drug Control, Beijing, China) และ acetonide (cat. no. 111530-200505; National Institutes for Food and Drug Control ) ที่ความเข้มข้นต่างๆ (0.5, 25 และ 50 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ต่อจากนั้น เซลล์ถูกบำบัดด้วย A 1-42 หรือ H2O2 เป็นเวลา 24 ชั่วโมง และความอยู่รอดของเซลล์ถูกวัดโดยการสอบวิเคราะห์ MTT
การวิเคราะห์ทางสถิติ. ค่าแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน การทดสอบ t ของนักเรียนใช้สำหรับการเปรียบเทียบระหว่างกลุ่ม การวิเคราะห์ทางสถิติดำเนินการโดยใช้ SPSS 180 (SPSS, Inc., Chicago, IL, USA) พี<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">
ผลลัพธ์
การหาปริมาณของ PhGs จาก H. Cistanches สเปกตรัม UV ของปริญญาเอกสกัดเป็นโซลูชั่นมาตรฐานของเอ็กไคนาโคไซด์และแอคทีโอไซด์ถูกบันทึกไว้ และผลการศึกษาพบว่าสเปกตรัมยูวีมีความสม่ำเสมอ (รูปที่ 1) ยูวีสเปกโตรโฟโตเมตรี
พบว่า มีเนื้อหา PhG อยู่ที่ 87.6 เปอร์เซ็นต์ ผลการตรวจ HPLC แสดงให้เห็นว่าเนื้อหาของอิชินาโคไซด์และแอกทิโอไซด์เท่ากับ 37.7 และ 17.8 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ (รูปที่ 2)
การกำหนดความเข้มข้นของ PhG ในอุดมคติ เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มว่าง PhG ที่ 75, 100, 125, 150, 175 และ 200 ไมโครกรัม/มล. มีผลยับยั้งอย่างมีนัยสำคัญต่อเซลล์ PC12 (P<0.05), while="" phg="" at="" 5,="" 25="" and="" 50="" µg/ml="" showed="" low="" toxicity="" on="" pc12="" cells,="" and="" the="" cell="" viability="" was="">80 เปอร์เซ็นต์ (รูปที่ 3) ดังนั้น PhGs ที่ความเข้มข้น 5, 25 และ 50 ไมโครกรัม/มิลลิลิตรจึงถูกใช้สำหรับการบำบัดเซลล์ PC12 ในการทดลองที่ตามมาเนื่องจากไม่ส่งผลต่อความมีชีวิตของเซลล์
การบาดเจ็บของเซลล์ PC12 ที่เกิดจากสาเหตุ 1‑42 เมื่อเทียบกับในกลุ่มควบคุม ความอยู่รอดของเซลล์ในกลุ่มที่ได้รับบาดเจ็บ 0.5 µM A 1-42 คือ 63 เปอร์เซ็นต์ (P<0.05). the="" cell="" viability="" was="" decreased="" by="" aβ1-42="" in="" a="" concentration-dependent="" manner,="" and="" the="" viability="" was=""><50% in="" the="" 1,="" 1.5,="" and="" 2="" µm="" aβ1-42="" injury="" groups="" (fig.="" 4).="" thus,="" treatment="" with="" 0.5="" µm="" aβ1-42="" for="" 48="" h="" was="" determined="" to="" be="" the="" optimal="" condition="" for="" establishing="" the="" in="" vitro="" ad="">
กิจกรรมของเซลล์ PC12 ที่บำบัดด้วย 0.5 µM A 1-42 ในการมีอยู่ของขนาดยาที่ปลอดภัยของ PhG (5, 25 และ 50 ไมโครกรัม/มล.) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงยังถูกกำหนดหาอีกด้วย เปรียบเทียบกับกลุ่มรุ่น (P<0.01), phgs="" showed="" a="" significant="" neuroprotective="" effect="" on="" pc12="" cells.="" the="" cell="" viability="" was="" rescued="" by="" phgs="" in="" a="" dose-dependent="" manner="" (fig.="">
การบาดเจ็บของเซลล์ PC12 ที่เกิดจาก H2O2 ความมีชีวิตของเซลล์ PC12 ที่บำบัดด้วย 25 µM H2O2 ที่ละลายใน DMEM ด้วย PBS คือ 56.43 เปอร์เซ็นต์ ความมีชีวิตของเซลล์ PC12 ที่บำบัดด้วย 200 µM H2O2 ที่ละลายใน DMEM โดยไม่มี PBS คือ 71.64 เปอร์เซ็นต์ (ตารางที่ I) ดังนั้น เซลล์ PC12 ที่บำบัดด้วย 25 µM H2O2 ที่ละลายใน DMEM ด้วย PBS ถูกเลือกให้เป็นสภาวะที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการสร้างแบบจำลอง AD
เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม ความมีชีวิตของเซลล์ในกลุ่มแบบจำลองเท่ากับ 48.8 เปอร์เซ็นต์ (P<0.05). compared="" with="" the="" model="" group,="" phgs="" had="" a="" significant="" neuroprotective="" effect="" on="" pc12="" cells.="" the="" cell="" viability="" was="" dose-dependently="" increased="">
PhGs และความมีชีวิตของเซลล์ PC12 ที่บำบัดด้วย PhGs ที่ความเข้มข้น 5, 25 และ 50 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร คือ 54, 57 และ 64 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ (ตารางที่ II)
PhGs ยับยั้งการปลดปล่อย LDH ที่เกิดจากการบาดเจ็บโดยเซลล์ PC12 เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม ปริมาณ LDH ของ supernatant ของเซลล์ PC12 ที่ได้รับบาดเจ็บเพิ่มขึ้น ซึ่งถูกยับยั้งโดย PhGs ในลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้น ผลลัพธ์นี้บ่งชี้ว่า PhGs มีผลในการป้องกันระบบประสาทอย่างมีนัยสำคัญต่อเซลล์ PC12 (รูปที่ 6)
ตารางที่ 1 ความมีชีวิตของเซลล์ ( เปอร์เซ็นต์ ) หลังการบำบัด H2O2
ตารางที่ 2 ความมีชีวิตของเซลล์หลังจากการแทรกแซงของยา
ถูกยับยั้งโดย PhGs ในลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้น ผลลัพธ์นี้บ่งชี้ว่า PhGs มีผลในการป้องกันระบบประสาทอย่างมีนัยสำคัญต่อเซลล์ PC12 (รูปที่ 7)
PhG และส่วนประกอบ echinacoside และ acteoside ช่วยชีวิตเซลล์ PC12 ที่ได้รับบาดเจ็บ เมื่อเทียบกับกลุ่มแบบจำลอง การรักษาด้วยแอกทีโอไซด์เพิ่มความมีชีวิตของเซลล์ A 1-42-ที่ได้รับบาดเจ็บอย่างมีนัยสำคัญในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา PhGs และ echinacoside ยังเพิ่มความมีชีวิตของเซลล์ A 1-42-ที่ได้รับบาดเจ็บอย่างมีนัยสำคัญที่ความเข้มข้นทั้งหมดที่ทดสอบ (รูปที่ 8A)
**P<0.05, vs.="" model="" group.="" aβ,="" â-amyloid="" peptide;="" phgs,="" phenylethanoid="" glycosides;="" ech,="" echinacoside;="" as,="">
เมื่อเทียบกับกลุ่มแบบจำลอง Acteoside เพิ่มความมีชีวิตของเซลล์ PC12 ที่รับการรักษาด้วย H2O2 อย่างมีนัยสำคัญ PhGs ยังเพิ่มความมีชีวิตของเซลล์ PC12 ที่บำบัดด้วย H2O2 ในขณะที่ผลกระทบไม่มีนัยสำคัญที่ความเข้มข้น 5 และ 25 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร (รูปที่ 8B) นอกจากนี้ อิไคนาโคไซด์ยังเพิ่มความมีชีวิตของเซลล์ที่ 25 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร
โดยสรุป Acteoside, PhGs และ echinacoside มีผลในการป้องกันระบบประสาทอย่างมีนัยสำคัญต่อเซลล์ PC12 ที่ได้รับบาดเจ็บด้วย A 1-42 หรือ H2O2
การอภิปราย
ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันเป็นกลไกสำคัญที่อยู่เบื้องหลังความเป็นพิษต่อระบบประสาทที่เกิดจาก A ใน AD (11-13) ดังนั้นการกำหนดเป้าหมายความเครียดออกซิเดชันอาจเป็นแนวทางในการบำบัด AD ในการศึกษานี้ แบบจำลองในหลอดทดลองของ AD ที่ประกอบรวมด้วยการบาดเจ็บของเซลล์ PC12 ที่ถูกเหนี่ยวนำโดย 1-42- และ H2O2- ประสบความสำเร็จ ผลลัพธ์ของการทดสอบ MTT, LDH และ MDA แสดงให้เห็นว่า PhGs เพิ่มความมีชีวิตของเซลล์ และลดการปล่อย LDH และ MDA โดยเซลล์ PC12 ที่ได้รับบาดเจ็บ สรุปได้ว่า PhGs มีผลในการป้องกันระบบประสาทอย่างมีนัยสำคัญต่อเซลล์ PC12
เพื่อลดผลกระทบของ PhGs ต่อการเติบโตของเซลล์ PC12 และป้องกันการเพิ่มจำนวนที่ผิดปกติ การกำหนดขนาดยาที่ปลอดภัยของ PhGs ถูกกำหนดในการตรวจคัดกรอง ผลการศึกษาพบว่า PhGs ที่ 75, 100, 125, 150, 175 และ 200 ไมโครกรัม/มล. มีผลยับยั้งอย่างมีนัยสำคัญต่อเซลล์ PC12 (P<0.05,><0.01), while="" cell="" viability="" remained="">80 เปอร์เซ็นต์ที่ความเข้มข้น 5, 25 และ 50 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร ดังนั้น PhGs ที่ความเข้มข้น 5, 25 และ 50 ไมโครกรัม/มิลลิลิตรจึงปลอดภัยสำหรับเซลล์ PC12
การบาดเจ็บจาก A {{0}} ได้รับผลกระทบจากปัจจัยบางอย่าง รวมถึงตัวทำละลาย เวลาในการฟักตัว และคุณภาพของผลิตภัณฑ์ ในการศึกษานี้ เปปไทด์ 1-42 หนึ่งตัวถูกละลายในน้ำ (100 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) และบ่มที่ 37˚C เป็นเวลา 4 วันในตู้บ่ม CO2 ก่อนใช้ เซลล์ PC12 ถูกบำบัดด้วย A 1-42 ที่ความเข้มข้น 0.5, 1, 1.5 และ 2 ไมโครโมลาร์ ผลการศึกษาพบว่าความมีชีวิตของเซลล์ลดลงด้วยการเพิ่มขึ้นของ A 1-42 และความมีชีวิตคือ<50% in="" the="" 1,="" 1.5,="" and="" 2="" µm="" aβ1-42="" injury="" groups.="" thus,="" treatment="" of="" pc12="" cells="" with="" 0.5="" µm="" aβ1-42="" for="" 48="" h="" was="" determined="" to="" be="" the="" optimal="" condition="" for="" establishing="" the="" ad="" model.="" aβ25-35="" has="" been="" commonly="" used="" to="" establish="" ad="" models="" due="" to="" its="" low="" cost="" and="" simple="" operation="" (27-29).="" the="" neurotoxicity="" of="" aβ1-42="" is="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" aβ25-35,="" and="" aβ1-42="" is,="" therefore,="" the="" optimal="" aβ="" fragment="" for="" establishing="" an="" ad="" model="">
H2O2 เป็นตัวออกซิไดซ์และ H2O2 ที่มากเกินไปอาจทำให้เกิดความเสียหายจากออกซิเดชันและทำให้เกิดการตายของเซลล์ (30) ในการศึกษานี้ เซลล์ PC12 ได้รับการบำบัดด้วย 25-500 µM H2O2 ที่ละลายใน DMEM โดยมีหรือไม่มี PBS ผลการศึกษาพบว่า H2O2 ละลายใน DMEM โดยไม่มี PBS ทำให้เกิดการเพิ่มจำนวนเซลล์ PC12 อย่างผิดปกติ ดังนั้น การบำบัดเซลล์ PC12 ที่มี 25 µM H2O2 ที่ละลายใน DMEM ด้วย PBS จึงเป็นสภาวะที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการสร้างแบบจำลอง AD การบาดเจ็บที่เหนี่ยวนำ 1-42- มีค่ามากกว่าการบาดเจ็บที่เกิดจาก H2O2- เนื่องจากความคงตัวที่ไม่ดีของ H2O2 และผลกระทบของตัวทำละลาย
เมื่อเซลล์เสียหาย LDH รั่วเข้าไปในอาหารเลี้ยงเชื้อจะเพิ่มขึ้นอย่างมาก เป็นที่ทราบกันดีว่า ROS ทำให้เกิดการผลิต MDA เนื้อหาของ MDA และ LDH จึงสะท้อนถึงปริมาณความเสียหายจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน ในการศึกษานี้ กิจกรรม LDH และ MDA ที่เกิดจากความเสียหายลดลงเมื่อได้รับ PhGs เพิ่มขึ้น ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า PhGs มีผลในการป้องกันระบบประสาทอย่างมีนัยสำคัญต่อเซลล์ PC12 การทดสอบ MTT แสดงให้เห็นว่า PhGs แสดงผลการป้องกันระบบประสาทที่ขึ้นกับขนาดยาในเซลล์ PC12
โดยสรุป แบบจำลองในหลอดทดลองของ AD ซึ่งประกอบรวมด้วยการบาดเจ็บของเซลล์ PC12 ที่เหนี่ยวนำโดย 1-42- และ H2O2- ถูกสร้างขึ้นอย่างประสบความสำเร็จ การรักษาด้วย PhGs เพิ่มความมีชีวิตของเซลล์ และลดการปล่อย LDH และ MDA โดยเซลล์ PC12 ที่บำบัดด้วย A 1-42 หรือ H2O2 PhGs มีผลป้องกันระบบประสาทอย่างมีนัยสำคัญต่อการบาดเจ็บของเซลล์ที่เหนี่ยวนำด้วย 1-42- หรือ H2O2-
อ้างอิง
1. Qu M, Zhou Z, Xu S, Chen C, Yu Z และ Wang D: การแสดงออกที่มากเกินไปของ Mortalin ช่วยลดความเป็นพิษต่อระบบประสาทที่เกิดจาก beta-amyloid ในเซลล์ SH-SY5Y ความละเอียดของสมอง 1368: 336-345, 2011.
2. Uzun S, Kozumplik O และ Folnegović‑Small V: ภาวะสมองเสื่อมของโรคอัลไซเมอร์: การตรวจสอบข้อมูลในปัจจุบัน Collegium antropologicum 35: 1333-1337, 2011.
3. Brookmeyer R, Johnson E, Ziegler-Graham K และ Arrighi HM: การคาดการณ์ภาระทั่วโลกของโรคอัลไซเมอร์ โรคอัลไซเมอร์และภาวะสมองเสื่อม 3: 186-191, 2007.
4. Castellani RJ, Rolston RK และ Smith MA: โรคอัลไซเมอร์ โรคต่อเดือน 56: 484-546, 2010.
5. Mattson MP: เส้นทางสู่และห่างไกลจากโรคอัลไซเมอร์ ธรรมชาติ 430: 631-639, 2004.
6. Gouras GK, Tsai J, Naslund J, et al: Intraneuronal A 42 การสะสมในสมองของมนุษย์ วารสารพยาธิวิทยาอเมริกัน 156: 15-20, 2000.
7. Shen C, Chen Y, Liu H, et al: ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ส่งเสริมการผลิต A ผ่านการกระตุ้น -secretase ที่ขึ้นกับ JNK วารสารเคมีชีวภาพ 283: 17721-17730, 2008.
8. Shih PH และ Wu CH, Yeh CT และ Yen GC: ผลการป้องกันของแอนโธไซยานินต่อความเสียหายที่เกิดจากอะไมลอยด์ -เปปไทด์ในเซลล์ Neuro-2A วารสารเคมีเกษตรและอาหาร 59: 1683-1689, 2011.
9. Figuiredo CP, Bicca MA, Latini A, Prediger R, Medeiros R และ Calixto JB: กรดโฟลิกบวก -tocopherol บรรเทา amyloid- -ที่เหนี่ยวนำให้เกิดพิษต่อระบบประสาทผ่านการปรับกิจกรรมเชิงซ้อนของไมโทคอนเดรีย วารสารโรคอัลไซเมอร์: JAD 24: 61-75, 2010.
10. Dumont M, Lin MT และ Beal MF: Mitochondria และสารต้านอนุมูลอิสระกำหนดเป้าหมายกลยุทธ์การรักษาโรคอัลไซเมอร์ วารสารโรคอัลไซเมอร์: JAD 20: S633, 2010
11. Sonnen JA, Breitner JC, Lovell MA, Markesbery WR, Quinn JF และ Montine TJ: ความเสียหายที่เกิดจากอนุมูลอิสระต่อสมองในโรคอัลไซเมอร์และโมเดลเมาส์ดัดแปลงพันธุกรรม ฟรี Radical Biology and Medicine 45: 219-230, 2008
12. Lin MT และ Beal MF: ความผิดปกติของไมโตคอนเดรียและความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันในโรคทางระบบประสาท ธรรมชาติ 443: 787-795, 2006.
13. Trushina E และ McMurray C: ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันและความผิดปกติของไมโตคอนเดรียในโรคทางระบบประสาท ประสาทวิทยา 145: 1233-1248, 2007.
14. Huang SH, Lin CM และ Chiang BH: ฤทธิ์ป้องกันของสารสกัด Angelica Sinensis ต่อความเป็นพิษต่อระบบประสาทที่เกิดจากอะไมลอยด์ -เปปไทด์ Phytomedicine 15: 710-721, 2008.
15. Burhans WC และ Heintz NH: วัฏจักรของเซลล์เป็นวัฏจักรรีดอกซ์: เชื่อมโยงเป้าหมายเฉพาะเฟสกับชะตากรรมของเซลล์ ฟรี Radical Biology and Medicine 47: 1282-1293, 2009.
16. Xue HY, Gao GZ, Lin QY, Jin LJ และ Xu YP: ผลการป้องกันของ aucubin ต่อการตายของเซลล์ PC12 ที่เกิดจาก HO กายภาพบำบัด
18. Liu, Fx Wang, Xw Luo L และ Xin H, Na B และ Wang Xf: ผลของ glycosides ของ cistanche ต่อการเรียนรู้และความจำในโรคอัลไซเมอร์ที่เกิดจาก beta-amyloid peptide ในหนูและกลไกที่เป็นไปได้ แถลงการณ์เภสัชวิทยาจีน 22: 595, 2006
19. Bao B, Tang X, Tian H, Tong Y, Wu W และ Hong Y: ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดจาก Cistanche tubulosa (Schrenk) ที่อาศัยอยู่ในทะเลทราย .
20. Jiang Y, Li S, Wang Y, Chen X และ Tu P: การแยกความแตกต่างของ Herba Cistanches ด้วยลายนิ้วมือด้วยการตรวจจับมวลสารแบบอาร์เรย์โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง วารสารโครมาโตกราฟี A 1216: 2156-2162, 2009.
