HLA-G แสดงออกอย่างกว้างขวางโดยแมสต์เซลล์ในบริเวณที่มีพังผืดของอวัยวะในตับ ปอด และไต
Feb 21, 2022
เชิงนามธรรม:ก่อนหน้านี้เราได้แสดงให้เห็นว่าแมสต์เซลล์ที่แสดง HLA-G มีความเกี่ยวข้องกับบริเวณที่เกิดไวรัสตับอักเสบซีตับพังผืด ในที่นี้ เรามุ่งที่จะตรวจสอบว่าการแสดงออกของ HLA-G ในแมสต์เซลล์มีความเฉพาะเจาะจงสำหรับสาเหตุของไวรัสหรือไม่ตับหรือกระบวนการทั่วไปของการเกิดพังผืด เราแจกแจง HLA-G บวกเซลล์และแมสต์เซลล์โดยอิมมูโนฮิสโตเคมีของ (i)ตับบล็อกจากโรคตับแข็งจากแอลกอฮอล์ 41 ราย (ii) 10 ของโรคปอดอุดกั้นเรื้อรังที่ไม่ทราบสาเหตุ (IPF) และ (iii) 10 จาก เรนะlพังผืด ธรรมชาติของเซลล์ HLA-G plus ถูกกำหนดโดยมัลติเพล็กซ์อิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์โดยใช้ซอฟต์แวร์ มากกว่าครึ่งหนึ่งของเซลล์ HLA-G plus ทั้งหมดเป็นเซลล์แมสต์ในบริเวณที่เป็นพังผืดของตับแข็งจากแอลกอฮอล์และ IPF ในไต,ภายใต้การเกิดพังผืด เซลล์ HLA-G plus เป็นเซลล์แมสต์ แต่ไม่สามารถนับได้ นอกจากนี้ ในบางกรณีของตับและปอด เราสังเกตโหนดเซลล์จำนวนหนึ่ง ซึ่งเป็นรูขุมทุติยภูมิหรือตติยภูมิ ซึ่ง HLA-G แสดงออกอย่างมากโดยบีลิมโฟไซต์ โดยสรุป HLA-G บวกแมสต์เซลล์สามารถสังเกตได้ในบริเวณที่เป็นพังผืดของอวัยวะทั้งหมดที่ศึกษา การศึกษาก่อนหน้านี้ชี้ให้เห็นถึงบทบาทในการป้องกัน HLA-G บวกกับแมสต์เซลล์จากการอักเสบและการเกิดพังผืด รูขุมที่สังเกตพบที่มีบีลิมโฟไซต์ซึ่งแสดงออก HLA-G อาจเสริมบทบาทการต้านไฟโบรติกของพวกมันด้วย
คำสำคัญ:พังผืด; HLA-G; เซลล์เสา; รูขุมขน; บีลิมโฟไซต์; ยาต้านจุลชีพ; ไต; ตับ
บทนำโรคเรื้อรังที่นำไปสู่การเกิดพังผืดของอวัยวะสัมพันธ์กับการตายและการเจ็บป่วยที่สำคัญ โดยคิดเป็นสัดส่วนถึง 45 เปอร์เซ็นต์ของการเสียชีวิตในประเทศที่พัฒนาแล้ว [1] ความชุกของโรค fifibrotic เพิ่มขึ้นอย่างต่อเนื่องและเป็นปัญหาด้านสาธารณสุขที่สำคัญ โรค fibrotic สามารถส่งผลกระทบต่ออวัยวะทั้งหมดเช่นตับ, ไตปอดและหัวใจ พังผืดทางพยาธิวิทยามีลักษณะเฉพาะโดยการสะสมของส่วนประกอบของเมทริกซ์นอกเซลล์ (ECM) เช่นคอลลาเจน การสะสม ECM ดังกล่าวทำลายสถาปัตยกรรมปกติของอวัยวะและนำไปสู่ความผิดปกติและความล้มเหลวของอวัยวะด้วยการเปลี่ยนแปลงการทำงานเฉพาะของแต่ละอวัยวะ กล่าวคือ สำหรับตับ, หน้าที่ของการล้างพิษ, สำหรับปอด, หน้าที่ของการแลกเปลี่ยนก๊าซ, และสำหรับไต,ฟังก์ชั่นการกรอง นอกจากนี้ การเกิดพังผืดยังสามารถส่งเสริมการพัฒนาของมะเร็ง การปลูกถ่ายเพื่อทดแทนอวัยวะที่เป็นไฟโบรติกมักเป็นทางเลือกในการรักษาที่ดีที่สุด กระบวนการของการเกิดพังผืดเกิดขึ้นเพื่อตอบสนองต่อการบาดเจ็บหรือความเสียหายของเนื้อเยื่อตามการตอบสนองการอักเสบแบบถาวรหรือรุนแรงเกินไป ภาวะพังผืดซึ่งสามารถย้อนกลับได้ในตอนแรกสามารถพัฒนาไปสู่สภาวะที่ไม่สามารถย้อนกลับได้ [2] ดิตับอาจได้รับบาดเจ็บจากไวรัส (ตับอักเสบ บี ซี ดี อี) สารพิษจากเชื้อรา ปรสิต ออโต้แอนติบอดี การรับประทานอาหารที่มีไขมันสูง และการดื่มแอลกอฮอล์มากเกินไป ซึ่งเป็นสาเหตุที่พบบ่อยของตับfifibrosis [3] และแม้กระทั่งสาเหตุเด่นในบางประเทศ เมื่อดูหมิ่นซ้ำแล้วซ้ำเล่าตับพัฒนาโรคตับอักเสบเรื้อรังด้วยการเกิดพังผืดตามมาด้วยโรคกระดูกพรุนขั้นสูงหรือโรคตับแข็งซึ่งเป็นภาวะเสี่ยงต่อมะเร็งตับ (HCC)
ในปอด พังผืดที่ปอดไม่ทราบสาเหตุ (idiopathic pulmonary fifibrosis - IPF) แสดงถึงกลุ่มของโรคที่พบบ่อยที่สุดซึ่งรวมถึงภาวะภูมิไวเกินจากไฟโบรซิสและปอดรูมาตอยด์ โรคปอดคั่นระหว่างหน้าที่มีพังผืดแบบก้าวหน้าเรื้อรังที่ไม่ทราบสาเหตุนี้พบได้ยาก ส่งผลกระทบต่อผู้คนกว่าสามล้านคนทั่วโลก อย่างไรก็ตาม IPF เกี่ยวข้องกับการเสียชีวิตก่อนวัยอันควร อันที่จริง IPF นำไปสู่ความล้มเหลวของระบบทางเดินหายใจขั้นสูงและยังแสดงถึงปัจจัยเสี่ยงที่เป็นอิสระสำหรับมะเร็งปอด [4] การปลูกถ่ายปอดควรพิจารณาเป็นทางเลือกสำหรับผู้ป่วยเด็กที่เป็นโรคขั้นสูง
ไตfifibrosis เป็นทางเดินร่วมขั้นสุดท้ายของความก้าวหน้าจำนวนมากโรคไตอุบัติการณ์ของโรคเรื้อรังโรคไตนำไปสู่จุดจบโรคไตเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ ส่งผลกระทบต่อ 10 เปอร์เซ็นต์ของประชากรทั่วโลก โดยมีอัตราการเสียชีวิตสูง [5] นอกจากนี้ ผู้ป่วยโรคเรื้อรังโรคไตมีความเสี่ยงที่จะพัฒนามากขึ้นไตมะเร็ง (มากถึง 10 เท่าของประชากรทั่วไป) โดยมีความเสียหายระดับทวิภาคีและ/หรือ multifocal บ่อยครั้ง [6]
โดยไม่คำนึงถึงอวัยวะที่พัฒนา fibrosis สิ่งสำคัญคือต้องเข้าใจกลไกที่เกี่ยวข้องกับการเกิดขึ้นเพื่อพัฒนาวิธีการรักษาเพื่อป้องกันไม่ให้เกิด โดยเฉพาะอย่างยิ่งการอักเสบเรื้อรังนำไปสู่ตับหรือไตการเกิดพังผืดและการควบคุมอาจทำให้สามารถจำกัดการลุกลามและการเริ่มมีอาการของอวัยวะล้มเหลวหรือมะเร็งได้ ไซโตไคน์และคีโมไคน์มีบทบาทสำคัญในทั้งการวางแนวการตอบสนองของภูมิคุ้มกันและการรักษาการอักเสบ [7,8] นอกจากโมเลกุลภูมิคุ้มกันเหล่านี้แล้ว ยังมีการตรวจสอบโปรตีนอื่นๆ เช่น HLA-G ซึ่งเป็นโมเลกุลระดับ Ib HLA ที่รู้จักกันดีในด้านคุณสมบัติการปรับภูมิคุ้มกัน [9] ก่อนหน้านี้เราได้แสดงให้เห็นว่า HLA-G แสดงออกโดยแมสต์เซลล์ที่เกี่ยวข้องกับบริเวณที่เกิดไวรัสตับอักเสบซีตับการเกิดพังผืด [10,11] ในการศึกษานี้ เราตรวจสอบว่าการแสดงออกของ HLA-G ในแมสต์เซลล์มีความเฉพาะเจาะจงต่อสาเหตุของไวรัสหรือไม่ตับหรือกระบวนการของการเกิดพังผืดโดยไม่คำนึงถึงอวัยวะ เราระบุลักษณะการแสดงออกของ HLA-G ในแมสต์เซลล์และเซลล์ภูมิคุ้มกันในกลุ่มพาราฟินฟินของกลุ่มผู้ป่วยโรคตับแข็งที่เกิดจากแอลกอฮอล์ 41 ราย, 10 รายที่มี IPF และ 10 รายที่มีไตพังผืด การระบุที่แม่นยำของเซลล์ที่แสดงออก HLA-G ดำเนินการโดยใช้อิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์สี่เท่าในส่วนพาราฟินฟินและซอฟต์แวร์ที่แยกวิเคราะห์ฟลูออเรสเซนซ์และรวมเข้ากับสามกรณีของตับการเกิดพังผืดที่เกิดจากแอลกอฮอล์และ IPF สองรายการ
ผลลัพธ์
การแสดงออกเชิงปริมาณและลักษณะของ HLA-G plus Cells ในการเกิดพังผืดที่เกิดจากแอลกอฮอล์การศึกษาอิมมูโนฮิสโตเคมีเบื้องต้นดำเนินการกับชุดตัวอย่างการเกิดพังผืดที่เกิดจากแอลกอฮอล์ (n=41) ซึ่งช่วยให้สามารถแจงนับเซลล์ HLA-G plus และ CD117 plus บนสไลด์ทั้งหมดได้ด้วยการแจงนับกึ่งอัตโนมัติโดยใช้ซอฟต์แวร์ HALO ผลลัพธ์สรุปไว้ในตารางที่ 1
เซลล์ HLA-G plus และ CD117 plus ถูกนับโดยทั่วพื้นผิวของสไลด์ต่อเนื่องที่มีโรคตับแข็งจากแอลกอฮอล์ 41 รายโดยใช้ซอฟต์แวร์ HALO ด้วยอัลกอริธึมที่เหมาะสมตามอิมมูโนฮิสโตเคมีด้วย 4H84 ซึ่งจดจำ HLA-G และชุดต้าน CD117/c ค่าเฉลี่ย ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน และช่วงถูกระบุสำหรับเซลล์ HLA-G plus และ CD117 plus: 555 ± 699 HLA-G plus /(41–2686) และ 200 ± 271 CD 117 plus เซลล์ (12–1113)
ลักษณะทางสัณฐานวิทยาของ HLA-G plus cells ในโรคตับแข็งที่เกิดจากแอลกอฮอล์ topographi cally สอดคล้องกับแมสต์เซลล์ (รูปที่ 1A) ในบางกรณี การทำฉลากสองครั้งสำหรับ CD117 และแมสต์เซลล์ของมนุษย์ถูกดำเนินการและแสดงให้เห็นว่าเซลล์บวก CD117 ตับเป็นเซลล์แมสต์ในพื้นที่ที่มีเส้นใย (รูปที่ 1A) ศึกษากรณีตัวอย่างที่เป็นตัวแทนของโรคตับแข็งที่เกิดจากแอลกอฮอล์โดยวิธีอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์สี่เท่าและการย้อมสีซิเรียสเรดโดยใช้ซอฟต์แวร์ HALO เพื่อระบุเซลล์ HLA-G plus ได้อย่างแม่นยำ พื้นที่เฉลี่ยของการเกิดพังผืดคิดเป็นร้อยละ 19.4 ของตับเนื้อเยื่อ. การระบุตัวตนของเซลล์ HLA-G บวกแสดงให้เห็น 51 เปอร์เซ็นต์ว่าเป็นแมสต์เซลล์ (ตารางที่ 2; รูปที่ 1A,1B1) ที่กำหนดโดยทริปเทสเซลล์แมสต์ของมนุษย์บวกกับฟีโนไทป์ CD1177 หรือโพรสเตสแมสต์เซลล์ของมนุษย์บวกกับการย้อมสีร่วมสำหรับ CD117 แมสต์เซลล์ซึ่งแสดงออก HLA-G ถูกตั้งอยู่ในบริเวณที่เป็นเส้นใย (รูปที่ 1B1) ในทางกลับกัน 49 เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ HLA-G plus ไม่ใช่แมสต์เซลล์หรือเซลล์บวก CD117 (ตารางที่ 3) และโดยทั่วไปดูเหมือนว่าจะถูกจัดกลุ่มเข้าด้วยกันเป็นโหนด (รูปที่ 1B2) ดังนั้น การติดฉลากอื่นๆ จึงถูกดำเนินการบนโซนต่างๆ เพื่อระบุเซลล์เหล่านี้ (ตารางที่ 4) การแบ่งเซลล์ HLA-G plus ชนิดต่างๆ จะแตกต่างกันไปตามพื้นที่ของตับตรวจเนื้อเยื่อ (ตารางที่ 3 และ 4) โดยรวมแล้ว 63 เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ HLA-G plus ในพื้นที่ fifibrotic ดูเหมือนจะเป็นเซลล์แมสต์ เทียบกับเพียง 3 เปอร์เซ็นต์ในโหนด นอกจากนี้ 68 เปอร์เซ็นต์ของ HLA-G plus เซลล์ในโหนดแสดงร่วมกันถึง CD20, เครื่องหมายของ B lymphocytes (รูปที่ 1C1) และ CD3 3 เปอร์เซ็นต์ (รูปที่ 1C2) HLA-G บวก CD117 แมสต์เซลล์ ทริปเทส HLA-G บวก CD117 HLA-G บวก CD117 แมสต์เซลล์ ทริปเตส พลัส และ HLA-G บวก CD117 บวก แมสต์-เซลล์ ทริปเตส บวก เซลล์ ถูกนับในสามกรณีที่แสดงแทนของตับfifibrosis โดยใช้ซอฟต์แวร์ HALO พร้อมอัลกอริธึมที่เหมาะสม เซลล์ถูกนับในตัวอย่างโรคตับแข็งจากแอลกอฮอล์ 2 บริเวณที่แตกต่างกัน กล่าวคือ บริเวณที่เป็นไฟโบรติกและโหนดเซลล์ ในกรณีตัวอย่างของตับfifibrosis โดยใช้ซอฟต์แวร์ HALO พร้อมอัลกอริธึมที่เหมาะสม ไม่มีเซลล์ HLA-G plus แสดงร่วมกันกับ CD31 เครื่องหมายของเซลล์บุผนังหลอดเลือดหรือ CD1a เครื่องหมายของเซลล์เดนไดรต์
รูปที่ 1 ธรรมชาติของเซลล์ HLA-G ในกรณีตัวแทนของตับพังผืด (A) ในย่อหน้าแรก ภาพสองภาพทางด้านซ้ายแสดงการแสดงออกของ HLA-G และ CD117 ในกรณีตัวแทนของตับการเกิดพังผืดจาก 41 รายโดยใช้อิมมูโนฮิสโตเคมี โดย 4H84 รู้จักแอนติบอดี HLA-G และ CD117 ที่จดจำเซลล์ c-kit สไลด์ถูกทาทับโดย Mayer hematoxylin Fibrosis spans ล้อมรอบด้วยเส้นสีแดง พื้นที่ในวงกลมสอดคล้องกับภูมิประเทศที่สอดคล้องกับสไลด์ย้อมสี HLA-G และ CD117 สี่เหลี่ยมผืนผ้าแสดงกำลังขยายสูงของพื้นที่นี้ ซึ่งบ่งชี้ว่าเซลล์ HLA-G สองเซลล์ตรงกับเซลล์ CD117 สองเซลล์ นอกจากนี้ยังมีสัณฐานวิทยาที่เข้ากันได้กับเซลล์เสา ภาพถ่ายเรืองแสงคู่ (CD117/Mast cell tryptase) โดยมีภาพถ่ายสามภาพทางด้านขวาซึ่งสัมพันธ์กับการเรืองแสงแบบธรรมดา (DAPI ระบายสีนิวเคลียสเป็นสีน้ำเงิน CD117 เป็นสีเขียว แมสต์เซลล์โพรเทสเป็นสีแดง) แสดงเซลล์ส่วนใหญ่ที่ติดฉลากร่วม สีเหลือง เซลล์ CD117 ส่วนใหญ่เป็นเซลล์แมสต์ (B) อิมมูโนฟลูออเรสเซนส์สี่เท่าในกรณีตัวแทนของตับการเกิดพังผืด (จากสามอย่าง) โดยใช้ DAPI ที่มีนิวเคลียสสีน้ำเงิน, HLA-G (ที่มีแอนติบอดี 4H84) ที่มีสีเขียวเทียม, CD117 ในสีน้ำเงินเทียม, แมสต์เซลล์ tryptase ในสีหลอกสีแดง และภาพคอมโพสิตหรือการผสาน ทางด้านขวาจะแสดงการย้อมสีซิเรียสเรด 1 และ 2 สอดคล้องกับพื้นที่สองส่วนที่แตกต่างกันของตับ,ช่วงการเกิดพังผืดและโหนดเซลล์ตามลำดับ เซลล์ HLA-G ส่วนใหญ่แสดง CD117 และแมสต์เซลล์ tryptase ในการเกิดพังผืด (1) ในทางตรงกันข้าม เซลล์ HLA-G ส่วนใหญ่ไม่ได้แสดงร่วมกันกับแมสต์เซลล์ ยกเว้นเซลล์ HLA-G บางเซลล์ในบริเวณรอบนอกของโหนดเซลล์ (2) ใกล้หรือในการเกิดพังผืด (C) อิมมูโนฟลูออเรสเซนส์สี่เท่าบนเซลล์โหนดของตับการเกิดพังผืดที่แสดงใน B2 โดยมี DAPI, HLA-G ที่มีสีเขียวหลอก, CD20 ที่มีสีชมพูบานเย็น หรือ CD3 ที่มีสีน้ำเงินเทียม ตามลำดับ ใน 1 และ 2 การจับคู่สีแดงซิเรียสอยู่ทางขวา สี่เหลี่ยมจัตุรัสแสดงพื้นที่ภูมิประเทศที่จำกัดซึ่งมีเซลล์บวก HLA-G และเซลล์ที่เกี่ยวข้องในโซนนั้น รูปภาพประกอบแสดงการติดฉลากร่วมสีชมพูของ HLA-G และ CD20 ไม่มีการย้อมสีร่วมระหว่าง HLA-G กับสีเขียวเทียม และ CD3 ที่มีสีน้ำเงินเทียม
จำนวนสัมบูรณ์ของเซลล์ HLA-G plus , CD3 plus (T lymphocytes), CD20 plus (B lymphocytes) และเซลล์แมสต์เซลล์ tryptase plus (mast cells) ถูกกำหนดโดยใช้ซอฟต์แวร์ HALO ด้วยอัลกอริธึมที่เหมาะสมในกรณีตัวอย่างหนึ่งกรณีและถูกแสดงออก ต่อ mm2
การวิเคราะห์ HLA-G plus Cells ใน IPFในการศึกษาครั้งแรกที่ทำกับชุดของ IPF (n=10) โดยอิมมูโนฮิสโตเคมี ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ เราประเมินจำนวนเซลล์ HLA-G บวกเป็น 135 ± 62/mm2 และของ CD117 บวกเซลล์ที่จะเป็น 227 ± 134/mm2 (ตารางที่ 5) เซลล์ HLA-G plus ไม่ตรงกับเซลล์ CD117 plus ในการเกิดพังผืดในปอด (รูปที่ 2A) การวิเคราะห์ HALO ของอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์สี่เท่าและการย้อมสีซิเรียสเรดแสดงให้เห็นว่าธรรมชาติของเซลล์ HLA-G จะแตกต่างกันขึ้นอยู่กับพื้นที่เนื้อเยื่อของปอด (ตารางที่ 6) แท้จริงแล้ว 63 เปอร์เซ็นต์ของ HLA-G plus เซลล์ในพื้นที่ fifibrotic เป็นแมสต์เซลล์ (B1, C1) ในขณะที่พวกมันประกอบด้วยเพียง 7 เปอร์เซ็นต์ของ HLA-G plus เซลล์ในโหนด (B2, C2) เซลล์ HLA-G plus ส่วนใหญ่ในโหนดแสดง CD20 ร่วมกัน (รูปที่ 2B)
รูปที่ 2 ลักษณะของเซลล์ HLA-G ในกรณีตัวแทนของ IPF (A) ในย่อหน้าแรกที่ 5 ภาพด้านซ้ายแสดงสีซิเรียสเรดของเคสตัวแทน 1 รายจาก 10 IPF ภาพตรงกลางแสดงการย้อมทับโดย Mayer hematoxylin โดยใช้อิมมูโนฮิสโตเคมี พื้นที่ในวงกลมสอดคล้องกับภูมิประเทศบนสไลด์ที่ย้อมสี HLA-G และ CD117 โดย 4H84 จดจำแอนติบอดี HLA-G และ CD117 ที่จดจำเซลล์ c-kit สี่เหลี่ยมแสดงกำลังขยายที่ชัดเจนของพื้นที่เหล่านี้ ซึ่งบ่งชี้ว่าเซลล์ HLA-G ไม่ตรงกับเซลล์ CD117 (B) อิมมูโนฟลูออเรสเซนส์สี่เท่าในกรณีตัวแทนของตับการเกิดพังผืดในสองอย่างโดยใช้ DAPI ที่มีนิวเคลียสสีน้ำเงิน, HLA-G (ที่มีแอนติบอดี 4H84) ที่มีสีเขียวเทียม, CD117 ในสีน้ำเงินเทียม, แมสต์เซลล์ tryptase ในสีหลอกสีแดง และภาพคอมโพสิตหรือการผสาน ทางด้านขวาจะแสดง Sirius Red; 1 และ 2 สัมพันธ์กับพื้นที่สองส่วนที่แตกต่างกันของปอด ตามลำดับ ช่วงการเกิดพังผืดและโหนดเซลล์ (C) Quintuple อิมมูโนฟลูออเรสเซนต์ที่มี DAPI, HLA-G ที่มีสีเขียวหลอก, ทริปเทสที่มีสีแดงหลอก, CD3 ที่มีสีน้ำเงินเทียม, CD20 ที่มีสีหลอกสีชมพูบานเย็น, ในกรณีเดียวกันของ IPF ที่แสดงใน (B) . (C1) สอดคล้องกับพื้นที่ (B1) ใน (C1) เซลล์ HLA-G ส่วนใหญ่สอดคล้องกับแมสต์เซลล์ในบริเวณที่เกิดพังผืด ในขณะที่แมสต์เซลล์ที่หายากมากคือ HLA-G ในโหนดที่แสดงใน (C2) เซลล์ส่วนใหญ่ของโหนดคือ CD20 การวิเคราะห์ HALO แสดงให้เห็นว่าเซลล์ HLA-G plus ส่วนใหญ่เป็นลิมโฟไซต์บี
เซลล์ HLA-G plus และ CD117 plus ถูกนับสำหรับ 10 กรณีโดยใช้ซอฟต์แวร์ HALO ด้วยอัลกอริธึมที่เหมาะสม ตามอิมมูโนฮิสโตเคมี ค่าเฉลี่ย ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน และพิสัยจะถูกระบุ
การวิเคราะห์ HLA-G plus Cells ใน Renal Fibrosisในการศึกษาชุด 10 กรณีของไตการเกิดพังผืดโดยอิมมูโนเคมี เราพบ 133 ± 102 HLA-G plus cells/mm2 และ 426 ± 207 CD117 plus cells/mm2 (ตารางที่ 7) ไม่มีการจับคู่ระหว่างเซลล์ HLA-G plus และ CD117 plus (รูปที่ 3A)
รูปที่ 3 ธรรมชาติของเซลล์ HLA-G ในกรณีตัวแทนของไตพังผืด (A) ในย่อหน้าแรก ภาพด้านซ้ายแสดงสีแดงซิเรียส ภาพตรงกลางแสดงการย้อมทับโดย Mayer hematoxylin โดยใช้อิมมูโนฮิสโตเคมี พื้นที่ในวงกลมสอดคล้องกับภูมิประเทศของสไลด์ย้อมสี HLA-G และ CD117 โดย 4H84 รู้จัก HLA-G และ CD117 ที่รู้จักเซลล์ c-kit ลูกศรสีแดงเป็นเซลล์บวก สี่เหลี่ยมแสดงการขยายที่รุนแรงของพื้นที่เหล่านี้ซึ่งบ่งชี้ว่าเซลล์ HLA-G ไม่ตรงกับเซลล์ CD117 (B) อิมมูโนฟลูออเรสเซนต์สี่เท่าในกรณีตัวแทนของตับการเกิดพังผืดโดยใช้ DAPI ที่มีนิวเคลียสสีน้ำเงิน, HLA-G (ที่มีแอนติบอดี 4H84) ที่มีสีเขียวเทียม, CD117 ในสีน้ำเงินเทียม, แมสต์เซลล์โพรเทสในสีแดงเทียม และภาพคอมโพสิตหรือการผสาน ทางด้านขวาจะแสดง Sirius Red เซลล์ที่มีสีเหลืองในการผสานจะสอดคล้องกับ HLA-G บวกแมสต์เซลล์ (C) บริเวณที่ย้อมด้วยสีน้ำเงินนั้นสอดคล้องกับท่อจำนวนมากที่แสดง CD117 เท่านั้น เซลล์ที่มีสีเหลืองในการผสานจะสอดคล้องกับ HLA-G บวกแมสต์เซลล์
HLA-G plus และ CD117 plus เซลล์ถูกนับสำหรับ 10 กรณีของไตการเกิดพังผืดโดยใช้ซอฟต์แวร์ HALO พร้อมอัลกอริธึมที่เหมาะสมตามอิมมูโนฮิสโตเคมี ค่าเฉลี่ย ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน และช่วงถูกระบุสำหรับเซลล์ HLA-G plus และ CD117 plus การติดฉลากสี่เท่าด้วยซอฟต์แวร์ HALO ควบคู่ไปกับ Sirius Red และการวิเคราะห์ทางสัณฐานวิทยาแสดงให้เห็นความแตกต่างอย่างมากของการติดฉลากในส่วนของไตไม่เพียงแต่บริเวณกายวิภาคเท่านั้น แต่ยังอยู่ในช่องกายวิภาคเดียวกันด้วย (ภาพที่ 3B,C) ดังนั้น การแจงนับและการคำนวณเปอร์เซ็นต์ของเซลล์ HLA-G plus จึงไม่มีความเกี่ยวข้องในอวัยวะนี้ อันที่จริง การตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์แสดงให้เห็นการย้อมสีที่รุนแรงของเส้นรอบวงของท่อที่มี CD117 ซึ่งไม่ได้ติดฉลากร่วมกับเซลล์แมสต์เซลล์ (รูปที่ 3C) เซลล์ HLA-G plus เป็นเซลล์แมสต์และตั้งอยู่ในคั่นระหว่างหน้าที่มีการอักเสบ (รูปที่ 3B,C)
การอภิปรายการแสดงออกของโปรตีน HLA-G แสดงให้เห็นเป็นครั้งแรกในไซโตโทรโฟบลาสต์ที่ส่วนต่อประสานระหว่างทารกในครรภ์กับมารดา [12] ภายใต้สภาวะพื้นฐาน การแสดงออกของมันถูกจำกัดไว้เฉพาะเนื้อเยื่อเฉพาะ เช่น กระจกตา [13] ไธมัส [14] และเกาะเล็กเกาะน้อยของตับอ่อน [15] อย่างไรก็ตาม เซลล์บางชนิดก็สามารถแสดงออกได้เช่นกัน เช่น เซลล์บุผิวหลอดลม [16], เซลล์มีเซนไคมอล [17], เซลล์ของสายเลือด monocytic [18–20] และสารตั้งต้นของอีรีทรอยด์และบุผนังหลอดเลือด [21] ในสภาวะที่แปลกประหลาด . ก่อนหน้านี้เราได้แสดงให้เห็นว่าแมสต์เซลล์สามารถแสดง HLA-G ในสถานะเบสได้ โดยมีการแสดงออกที่เพิ่มขึ้นในสภาพแวดล้อมที่อุดมด้วยไซโตไคน์บางอย่าง โดยเฉพาะอย่างยิ่ง ไฟโบรติกเนื้อเยื่อตับเราตรวจสอบว่า HLA-G สามารถแสดงออกโดยแมสต์เซลล์ที่เกี่ยวข้องกับตับการเกิดพังผืดจากสาเหตุอื่นหรือการเกิดพังผืดในอวัยวะอื่นโดยการศึกษา 41 รายที่เกิดจากแอลกอฮอล์ตับโรคตับแข็ง 10 ของ IPF และ 10 ของไตพังผืด
การติดเชื้อ การบาดเจ็บที่เป็นพิษและจากการเผาผลาญ และโรคอักเสบที่ไม่ทราบสาเหตุสามารถส่งเสริมการพัฒนาของไฟโบรซิสได้ เนื่องจากการบาดเจ็บเรื้อรังทำให้เกิดการตายของเซลล์เนื้อเยื่อซึ่งปล่อยไซโตไคน์ที่ทำให้เกิดการอักเสบและการอักเสบ เช่น TGF- เซลล์ที่ผลิตคอลลาเจนจะแยกความแตกต่างจากเซลล์มีเซนไคม์ที่อาศัยอยู่เพื่อตอบสนองต่อการบาดเจ็บ Epithelial to mesenchymal Transition เป็นปรากฏการณ์ของการเปลี่ยนแปลงของเซลล์ที่สังเกตได้สำหรับ cholangiocytes ในตับ, นิวโมไซต์ในปอด และเซลล์เยื่อบุผิวท่อในไต[22]. เซลล์อะพอพโทติกกระตุ้นให้ความเข้มข้นของ TGF- เพิ่มขึ้นในทุกอวัยวะ อย่างไรก็ตาม ลักษณะเฉพาะของไฟโบรเจเนซิสอาจแตกต่างออกไปในอวัยวะต่างๆ ในตับ,อะพอพโทซิสเกี่ยวข้องกับเซลล์ตับ ในขณะที่มันส่งผลต่อเซลล์เยื่อบุผิวในปอดและไต[22]. ดังนั้นไฟโบรบลาสต์ที่อาศัยในไตและปอดเปิดใช้งานเป็น myofifibroblast ที่แสดง a-SMA, collagen1 ในขณะที่ตับmyofifibroblast รักษาเครื่องหมายเฉพาะของระบบประสาทไว้ [23]
ในตับ,เซลล์ตับมีส่วนสนับสนุนมากกว่าร้อยละ 80 ของเซลล์ที่ผลิตคอลลาเจนทั้งหมด ในปอด ความเสียหายของ pneumocytes เกี่ยวข้องกับการตายของเซลล์บุผนังหลอดเลือด บทบาทของการอักเสบใน IPF เป็นที่ถกเถียงกัน IPF ทั่วไปไม่แสดงการไหลเข้าของเซลล์การอักเสบ แต่ผู้เขียนบางคนแนะนำบทบาทของการอักเสบในการแยกแยะความแตกต่างของไฟโบรบลาสต์ในปอดเป็น myofifibroblasts ที่ผลิต ECM [24] IPF [25] รอยโรคเยื่อบุผิวเกี่ยวกับถุงลมที่เกิดซ้ำๆ ที่ไม่ทราบสาเหตุและการตายของเซลล์เยื่อบุผิวเกี่ยวกับถุงลม ในไตและตับ,เซลล์ myelomonocytic คัดเลือกมาจากไขกระดูกและเป็นตัวแทนตามลำดับ 14 ถึง 15 เปอร์เซ็นต์และ 8 ถึง 12 เปอร์เซ็นต์ของ myofifibroblasts ไม่พบการกลับตัวของการเกิดพังผืดในปอดในทางตรงกันข้ามกับตับและไตในกรณีที่ไม่มีการบาดเจ็บและหากยังไม่ถึงจุดกลับ อันที่จริง กระบวนการอักเสบมีจำกัดใน IPF โดยเฉพาะอย่างยิ่งในระยะเริ่มต้นของโรค ในขณะที่รอยโรคเยื่อบุผิวถุงลมที่เกิดซ้ำๆ ที่ไม่ทราบสาเหตุและการตายของเซลล์เยื่อบุผิวในถุงลมสามารถส่งเสริมการเพิ่มจำนวนและกระตุ้นการทำงานของไฟโบรบลาสต์ในปอดหรือไมโอฟิไฟโบรบลาสต์ [25]
ส่วนตับfifibrosis ซึ่งเป็นกระบวนการรักษาบาดแผลที่ล้มเหลวของไตเนื้อเยื่อหลังได้รับบาดเจ็บเรื้อรังและต่อเนื่องจะนำไปสู่การผลิตและการหลั่งของไซโตไคน์ที่ก่อให้เกิดการอักเสบ เช่นเดียวกับ TGF- ซึ่งมีบทบาทสำคัญในกระบวนการสลายพังผืด ตัวอย่างเช่น ในตับfifibrosis, TGF- ซึ่งแสดงเป็นจำนวนนาทีใน HSC ที่สงบนิ่งถูกสร้างขึ้นอย่างรวดเร็วโดยเซลล์ประเภทนี้หลังจากอาการบาดเจ็บที่ตับนอกจาก HSC แล้ว แหล่งที่มาอื่นๆ ของ TGF ยังได้รับการอธิบายว่าเป็นเกล็ดเลือด มาโครฟาจ ตับ และเซลล์แมสต์ด้วย [26] TGF- 1 ถูกเก็บไว้ในเมทริกซ์ในรูปแบบแฝง และเมื่อเปิดใช้งานแล้ว จะส่งเสริมการเปลี่ยนจากไฟไฟโบรบลาสต์เป็นมัยโอฟิไฟโบรบลาสต์ ซึ่งเป็นพื้นฐานสำหรับกระบวนการเกิดพังผืด นอกจากนี้ยังยับยั้งการเสื่อมสภาพของ ECM โดยการยับยั้ง metalloprotease และส่งเสริม TIMP ที่ยับยั้งตามธรรมชาติ ดังนั้น มันจึงกระตุ้นการผลิต ECM ผ่านกลไก SMAD3-ที่ไม่ขึ้นกับหรือเกี่ยวข้องกับ SMAD [27] อันที่จริง มีปฏิสัมพันธ์ซึ่งกันและกันระหว่างเซลล์แมสต์และ TGF- TGF- เป็นสารดึงดูดที่มีศักยภาพสำหรับเซลล์แมสต์ แท้จริงแล้ว กระบวนการทางพยาธิวิทยาที่เป็นสื่อกลางโดย TGF- มักเกี่ยวข้องกับการสะสมเซลล์แมสต์ [28] นอกจากนี้ แมสต์เซลล์เป็นหนึ่งในแหล่งหลักของ IL-17 ที่ขับเคลื่อนการเกิดพังผืดที่ขึ้นกับ TGF- - TGF- ยังได้รับรายงานเพื่อส่งเสริมหรือระงับการทำงานของเซลล์แมสต์ อันที่จริง TGF- ยับยั้งการแสดงออกของตัวรับ IgE ที่มีสัมพรรคภาพสูง Fc1RI ซึ่งกระตุ้นเซลล์แมสต์ [30] ในทางกลับกัน มันยับยั้งการเพิ่มจำนวนเซลล์แมสต์ การเสื่อมสภาพ และการผลิตโมเลกุลเอฟเฟกเตอร์หลายอย่าง เช่น ฮีสตามีนและ TNF- [31] เนื่องจากการเพิ่มขึ้นของ MC ในการเกิดพังผืด ผลของ TGF- ต่อการทำงานของ MC จึงมีความสำคัญในการควบคุมการตอบสนองการอักเสบที่คงไว้ซึ่งกระบวนการละลายลิ่มเลือด
เช่นเดียวกับไวรัสตับอักเสบซีที่เกิดจากไวรัสตับfifibrosis เราพบว่าเซลล์ HLA-G plus ครึ่งหนึ่งในโรคตับแข็งที่เกิดจากแอลกอฮอล์เป็นเซลล์แมสต์ (ตารางที่ 2) และมีเพียง 34 เปอร์เซ็นต์ของเซลล์แมสต์ที่แสดง HLA-G โดยมีความแปรปรวนเฉพาะบุคคลสูงแสดงโดยค่าเบี่ยงเบนมาตรฐาน (ตารางที่ 1) . นอกจากนี้ เราสังเกตการแบ่งแยกที่แตกต่างกันตามภูมิภาคของตับ,โดยที่ 63–92 เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ HLA-G plus ในบริเวณที่เป็นพังผืดเป็นเซลล์แมสต์ ในขณะที่มีเพียง 3–23 เปอร์เซ็นต์เท่านั้นที่เป็นเซลล์แมสต์ในโหนดเซลล์ (ตารางที่ 3) ในทำนองเดียวกัน มีการสังเกตรูปแบบที่แตกต่างกันสำหรับแมสต์เซลล์ เนื่องจาก 92 เปอร์เซ็นต์ของแมสต์เซลล์ในบริเวณที่เป็นไฟโบรติกแสดง HLA-G ในขณะที่มีเพียง 23 เปอร์เซ็นต์เท่านั้นที่แสดง HLA-G ในโหนดเซลล์ (ไม่แสดงข้อมูล) ดังนั้น การแสดงออกของ HLA-G ไม่ได้จำกัดอยู่ที่สาเหตุของไวรัสตับโรคตับแข็ง อันที่จริง เราได้รับผลลัพธ์ที่คล้ายคลึงกันสำหรับปอด ใน IPF 63 เปอร์เซ็นต์ของ HLA-G plus เซลล์ในบริเวณ fifibrotic เป็นแมสต์เซลล์ ในขณะที่เพียง 7 เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ที่อยู่ในโหนดเท่านั้นที่เป็นเซลล์แมสต์ (ตารางที่ 6) กรณีของไตการเกิดพังผืดมีความเฉพาะเจาะจง เนื่องด้วยจำนวนทูบูลจำนวนมาก จึงไม่สามารถนับเซลล์ในบริเวณที่เป็นไฟโบรติกได้อย่างเหมาะสม เนื่องจากแมสต์เซลล์ได้แทรกซึมเข้าไปในทูบูล ทำได้เฉพาะการสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์เชิงคุณภาพเท่านั้น โดยแสดง HLA-G plus เซลล์จำนวนหนึ่งเป็นแมสต์เซลล์ โดยไม่สามารถแยกความแตกต่างของทูบูลจากบริเวณที่เป็นไฟโบรติกได้ (รูปที่ 3) ดังนั้น HLA-G ดูเหมือนจะแสดงออกโดยแมสต์เซลล์ในโรคไฟโบรติกผ่านผิวเซลล์และโมเลกุลภายในไซโตพลาสซึม โดยไม่คำนึงถึงอวัยวะ ก่อนหน้านี้เราได้แสดงให้เห็นแล้วว่าแมสต์เซลล์ของมนุษย์ในวัฒนธรรมสามารถสร้างรูปแบบ HLA-G ที่ละลายได้ในตัวกลางที่ปรับสภาพที่สถานะเป็นเบส และการหลั่งนั้นเพิ่มขึ้นหลังจากการกระตุ้นด้วยไซโตไคน์ ซึ่งรวมถึง IL-10 [10]
เปอร์เซ็นต์ที่สูงขึ้นของแมสต์เซลล์ (มากกว่าครึ่งหนึ่ง) ที่แสดง HLA-G ในตับและปอดอาจอธิบายได้ด้วยส่วนประกอบที่ทำให้เกิดการอักเสบของไฟโบรซิส แท้จริงแล้วในฐานะเซลล์ภูมิคุ้มกันโดยกำเนิด จำนวนเซลล์แมสต์เพิ่มขึ้นในสภาวะการอักเสบ และพวกมันยังสามารถปล่อยตัวกลางที่ทำให้เกิดการอักเสบได้ [32] จำนวนแมสต์เซลล์เพิ่มขึ้นในโรคที่เป็นพังผืด อันที่จริงความหนาแน่นของแมสต์เซลล์ในปอดของผู้ป่วย IPF นั้นสูงกว่าผู้ที่มีโรคปอดอื่นๆ [33] และปอดปกติ ในทำนองเดียวกันมนุษย์โรคไตมาพร้อมกับการเพิ่มขึ้นของจำนวนเซลล์แมสต์ในไตคอร์เทกซ์ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในบริเวณที่เกิดพังผืด [34] เนื่องจากแมสต์เซลล์ไม่ค่อยพบในสุขภาพที่ดีไต
สิ่งพิมพ์ก่อนหน้านี้ระบุว่าแมสต์เซลล์ไม่อยู่หรือพบเพียงเล็กน้อยในตับ ปอด และ . ของมนุษย์ปกติไต[35]. ความคืบหน้าของความรู้เกี่ยวกับแมสต์เซลล์แสดงให้เห็นว่าแมสต์เซลล์ซึ่งเป็นเซลล์ภูมิคุ้มกันโดยกำเนิดสามารถสังเกตพบได้ในเนื้อเยื่อทั้งหมด แต่มีมากในบริเวณที่สัมผัสกับสิ่งแวดล้อม ยิ่งไปกว่านั้น พวกมันยังแสดงตัวรับจำนวนมาก ซึ่งช่วยให้พวกมันตอบสนองต่อสิ่งเร้าและโต้ตอบกับเซลล์อื่นๆ [36]ไตแมสต์เซลล์ทำหน้าที่คล้ายกับเซลล์ในปอด มีการรายงานข้อมูลที่ขัดแย้งกันเกี่ยวกับบทบาทของแมสต์เซลล์ในการเกิดพังผืด ผู้เขียนหลายคนเสนอว่าแมสต์เซลล์มีส่วนเกี่ยวข้องกับการเกิดพังผืดเนื่องจากมีบทบาทในการอักเสบเฉียบพลันและเรื้อรังซึ่งเริ่มต้นขึ้น นอกจากนี้ แมสต์เซลล์สามารถหลั่งฮีสตามีน เฮปาริน และ IL-4 ซึ่งช่วยเพิ่มการเพิ่มจำนวนของไฟโบรบลาสต์ อย่างไรก็ตาม อื่นๆ [37,38] รวมทั้งเรา [39] ได้แสดงให้เห็นว่าแมสต์เซลล์มีบทบาทในการต้านการสลายพังผืด: ตัวอย่างเช่น ในแบบจำลองสัตว์ เช่น หนูและหนูที่มีหนู Ws/Ws ที่ขาดเซลล์แมสต์ โอกาซากิและคณะ แสดงให้เห็นว่าการเกิดพังผืดที่เหนี่ยวนำนั้นรุนแรงกว่าในหนูแรทที่มีเซลล์ขาดแมสต์มากกว่าในหนูป่า [38]
นอกจากนี้ แมสต์เซลล์ยังแสดงให้เห็นว่ามีโพลาไรซ์ในมะเร็ง เช่นเดียวกับมาโครฟาจ [40] แมสต์เซลล์ต้านการอักเสบจะแสดงไซโตไคน์ เช่น IL-10 และจำนวนของพวกมันสัมพันธ์แบบผกผันกับความรุนแรงของการอักเสบ ในขณะที่แมสต์เซลล์อักเสบที่ลุกลามจะตอบสนองต่อสภาวะการอักเสบที่ลุกลาม มีแนวโน้มว่าเซลล์แมสต์ที่ต้านการอักเสบจะแสดง HLA-G โดยเฉพาะอย่างยิ่ง เนื่องจาก (i) มีการแสดงความสัมพันธ์ในหลายแบบจำลองด้วยระดับ IL-10 ทวีคูณและการแสดงออกของ HLA-G และ (ii) HLA-G มีฤทธิ์ต้านการอักเสบ แมสต์เซลล์ที่แสดงออก HLA-G อาจมีอยู่ในระยะเริ่มแรกของโรค ระหว่างระยะการอักเสบ เพื่อต่อต้านการอักเสบ ซึ่งเป็นปฏิกิริยาครั้งแรกที่เกิดกับแผล ในวรรณคดี มีรายงานว่า Il-10 โดยการลดการตอบสนองการอักเสบ อาจยับยั้งการเพิ่มจำนวนและการสังเคราะห์คอลลาเจนของ myofifibroblasts [41] แท้จริงแล้ว IL-10 อาจมีบทบาทในการป้องกันแอลกอฮอล์โรคตับ[42]. ในทางตรงกันข้าม พบระดับ IL-10 ในซีรัมในผู้ป่วยที่มี IPF สูงกว่าคนปกติ และระดับ IL-10 สูงสุดในการล้างหลอดลมในผู้ป่วย IPF แสดงให้เห็นเมื่อเทียบกับโรคซาร์คอยด์หรือโรคปอดอักเสบจากภูมิไวเกิน [43]. เราสามารถอธิบายได้ด้วยองค์ประกอบที่ทำให้เกิดการอักเสบที่มีความสำคัญน้อยกว่า ในไตfifibrosis แสดงให้เห็นในแบบจำลองหนูเมาส์ที่ขาด IL-10 กำเริบไตการอักเสบและการเกิดพังผืด [44] ในมนุษย์ การรักษาด้วย IL-10 immunotherapy ที่เกี่ยวข้องกับ TGF- antagonist จะทำให้อาการเรื้อรังดีขึ้นโรคไต [45].
ผลลัพธ์ที่เกี่ยวข้องอีกประการหนึ่งคือการสังเกตเซลล์ HLA-G plus ในโหนดเซลล์ ใกล้กับบริเวณที่เป็นพังผืดในกรณีที่เกิดโรคตับแข็งจากแอลกอฮอล์ซึ่งพบไม่บ่อย เซลล์เหล่านี้ถูกสร้างลักษณะทางสัณฐานวิทยาโดยกลุ่มเซลล์ขนาดเล็กถึงขนาดกลางที่จดจำได้ง่าย ซึ่งบ่งชี้ถึงการรวมตัวของต่อมน้ำเหลือง ลักษณะทางสัณฐานวิทยาของพวกมันบ่งบอกถึงรูขุมขนซึ่งเป็นโครงสร้างที่เกิดขึ้นจาก B lymphocytes เป็นหลัก อิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์สี่เท่าในโหนดยืนยันสมมติฐานนี้ เนื่องจาก 68 เปอร์เซ็นต์ของ HLA-G บวกเซลล์แสดง CD20 ร่วมกัน ซึ่งเป็นเครื่องหมายเฉพาะของบีลิมโฟไซต์ (ตารางที่ 3) โครงสร้างที่คล้ายกันยังถูกสังเกตพบใน IPF ด้วยผลลัพธ์ที่คล้ายคลึงกัน โดยแสดง 76 เปอร์เซ็นต์ของ HLA-G บวกเซลล์ในโหนดเป็นบีลิมโฟไซต์ (ตารางที่ 6) มีรายงานการเกิดเนื้องอกในต่อมน้ำเหลืองในการเกิดพังผืด ดังนั้น ภายใต้เงื่อนไขทางพยาธิวิทยาบางอย่าง เช่น การอักเสบอย่างต่อเนื่อง มวลรวมของเซลล์อาจพัฒนาไปเป็นโครงสร้างที่มีการจัดระเบียบสูงซึ่งคล้ายกับเนื้อเยื่อน้ำเหลืองทุติยภูมิ กล่าวคือ อวัยวะต่อมน้ำเหลืองตติยภูมิหรือต่อมน้ำเหลืองนอกมดลูก [46] ต่อมน้ำเหลืองดังกล่าวมีพื้นที่ที่อุดมด้วย T-cell และรูขุม B-cell ที่มีจุดศูนย์กลางเชื้อโรค [47] กลไกโดยที่เซลล์บีแทรกซึมจัดระเบียบรูขุมขนนอกมดลูกและศูนย์กลางของเชื้อโรคถูกควบคุมโดยลิมโฟทอกซิน- 1 2 และลิมฟอยด์คีโมไคน์ เช่น CC-คีโมไคน์ลิแกนด์ 19 (CCL19), CCL21, CXC-คีโมไคน์ลิแกนด์ 12 (CXCL12) และ CXCL13 ซึ่งควบคุมลิมโฟไซต์กลับบ้าน นอกจาก lym photoxin และ chemokines แล้ว ยังจำเป็นต้องมีการกระตุ้นแอนติเจนเพื่อกระตุ้นและรักษาการสร้างรูขุมขน ไม่พบรูขุมดังกล่าวในกลุ่มของเราที่ชักนำไวรัสตับอักเสบซีตับการเกิดพังผืดและพบได้เพียงหนึ่งในสามกรณีที่เกิดจากแอลกอฮอล์ตับfifibrosis ซึ่งบ่งบอกถึงระยะที่ชัดเจนของโรค อันที่จริงการทำงานของอวัยวะน้ำเหลืองนอกมดลูกและความสัมพันธ์กับการอักเสบและไฟโบรซิสยังไม่ชัดเจน การศึกษาจำนวนหนึ่งได้แสดงให้เห็นบทบาทที่แปลกใหม่และน่าประหลาดใจสำหรับเซลล์บีในการควบคุมไฟโบรบลาสต์ในการเกิดพังผืด ซึ่งผลของการเกิดโพรไฟโบรติกนั้นคล้ายคลึงกับของ TGF และยังได้รับการปรับปรุงโดยปัจจัยกระตุ้นเซลล์บี (BAFF) [48]
ความเกี่ยวข้องของแหล่งเซลล์ของ HLA-G ในการเกิดพังผืดไม่ได้เป็นเพียงการพรรณนาเท่านั้น แต่ยังใช้งานได้อีกด้วย HLA-G มีผลยับยั้งการทำงานของลิมโฟไซต์ทุกประเภท [49] และเซลล์เดนไดรต์ [20,50] ผ่านทางตัวรับเฉพาะของมัน เช่น ILT2 และ ILT4 การปรากฏตัวของ HLA-G ในเซลล์ภูมิคุ้มกันเหล่านี้ นอกจากจะเป็นเครื่องหมายของการอักเสบแล้ว ยังเป็นสัญญาณของปฏิกิริยาภูมิคุ้มกันที่เหมาะสมด้วยการลดอาการอักเสบด้วย เป็นที่ทราบกันดีว่า HLA-G มีบทบาทในการป้องกันปฏิกิริยาการอักเสบที่เกินจริง ดังที่แสดงไว้ก่อนหน้านี้ในภาวะช็อกจากการติดเชื้อในกระแสเลือด [51] นอกจากนี้ ก่อนหน้านี้ เราได้ศึกษาปฏิสัมพันธ์ซึ่งกันและกันระหว่างแมสต์เซลล์และเซลล์ตับและแสดงให้เห็นว่ามันนำไปสู่การดึงดูดของเซลล์แมสต์และการผลิตคอลลาเจนลดลงอย่างมีนัยสำคัญโดยเซลล์ HSC ผ่านการผลิต HLA-G [39] นอกจากนี้ การแสดงออกของ HLA-G โดยบีเซลล์ในรูขุมนอกมดลูกยังอาจช่วยต่อต้านผลการก่อมะเร็งของลิมโฟไซต์บีบนไมโอไฟโบรบลาสต์ด้วยการยับยั้งบีเซลล์ผ่านกลไกออโตไครน์
ผู้ป่วยและวิธีการ
ผู้ป่วยกลุ่มคนที่41ตับได้ทำการศึกษาผู้ป่วยปลูกถ่ายตับแข็งที่เกิดจากแอลกอฮอล์ ผู้ป่วยได้รับแจ้งเกี่ยวกับระเบียบการและไม่มีการคัดค้าน (คณะกรรมการจริยธรรมโรงพยาบาล ประกาศฉบับที่ 16.47) ตัวอย่างพาราฟินบล็อกสิบตัวของไตการเกิดพังผืดและ 10 แห่งของ IPF (คณะกรรมการจริยธรรมของโรงพยาบาล ประกาศฉบับที่ 16.123) ซึ่งไม่เปิดเผยชื่ออย่างสมบูรณ์และไม่สามารถย้อนกลับได้ ได้รับการศึกษาตามหลักการของปฏิญญาเฮลซิงกิ ลักษณะทางคลินิกและทางชีววิทยาของทั้งสามกลุ่มตามผลรวมตามลำดับในตารางที่ 8-10
ระเบียบวิธี
อิมมูโนฮิสโตเคมีและอิมมูโนเฟลฟลูออเรสเซนซ์เนื้อเยื่อได้มาจากการอธิบายตับและไตหรือการตรวจชิ้นเนื้อปอด ส่วนอนุกรมที่ฝังด้วยพาราฟินฟิน (หนา 4 ไมโครเมตร) ถูกเตรียม และทำการย้อมสีทางเนื้อเยื่อมาตรฐาน กล่าวคือ การลงสี HES และการติดฉลากซิริอุสเรดของคอลลาเจน ในแบบคู่ขนาน อิมมูโนฮิสโตเคมีและอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์ถูกดำเนินการในส่วนต่อเนื่องของส่วนที่ฝังพาราฟฟินจากบล็อกเดียวกันหลังจากการแยกพาราฟฟินิเซชันและโปรโตคอลการดึงแอนติเจน แอนติบอดีปฐมภูมิ (mAbs) มีดังต่อไปนี้: โมโนโคลนัลเมาส์ที่ต้าน HLA-G ของมนุษย์ (Exbio, 4H84 2 ไมโครกรัม/มิลลิลิตรหรือ 1:100, เวสเทค, สาธารณรัฐเช็ก), โพลีโคลนัลแรบบิทแอนตี้-ฮิวแมน CD117/c-kit , รู้จักเซลล์มัยอีลอยด์และแมสต์เซลล์ (Dako, 1:200, Coppenhagen, Denmark), โมโนโคลนัลต้านมนุษย์ของเมาส์ (ฮัม) แมสต์เซลล์ tryptase (โคลน AA1, Dako, 1:1000), เฉพาะสำหรับแมสต์เซลล์, โมโนโคลนัลแอนตี้-ฮิวแมน CD3 (Thermo Scientififics, SP7, 1:500, Waltham, MA, USA), เฉพาะสำหรับ T lymphocytes และ monoclonal anti human CD20 (Dako, M0755, 1:600) เฉพาะสำหรับ B lymphocytes
Brieflfly สไลด์สำหรับอิมมูโนฮิสโตเคมีถูกบ่มด้วยแอนติบอดีหลักในระบบอัตโนมัติ Discovery Ultra (Roche, Meylan, France) แอนติบอดีปฐมภูมิที่ถูกผูกมัดถูกเปิดเผยโดยใช้แอนติบอดีต่อหนูหรือแอนติบอดีรอง IgG ของแพะที่ biotinylated (Vector, ABCYS, les Ulis, France, 1:700) และไดอะมิโน-เบนซิดีน (ชุดตรวจจับ DAB MAP, Roche , Meylan ประเทศฝรั่งเศส) ตามด้วยสี Mayer hematoxylin เพื่อกำหนดลักษณะที่แม่นยำของเซลล์ HLA-G plus, ทริปเปิ้ล (DAPI, CD117, แมสต์เซลล์ tryptase), สี่เท่า (DAPI, HLA-G, CD117, แมสต์เซลล์ tryptase) และควินทูเพิล (DAPI, HLA-G, CD3, จากนั้นทำการย้อมด้วย CD20, แมสต์เซลล์ tryptase) ในอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์ในสามกรณีที่เป็นตัวแทนของโรคตับแข็งที่เกิดจากแอลกอฮอล์และสองกรณีที่เป็นตัวแทนของ IPF การเปิดเผยดำเนินการโดยใช้ชุดเครื่องมือ Discovery FAM, rhodamine, DCC และ Cy5 (ระบบการแพทย์ Ventana, Illkirch, ฝรั่งเศส) หลังจากการย้อมสี รูปภาพของพื้นผิวทั้งหมดของส่วนจะถูกแปลงเป็นดิจิทัลด้วยกำลังขยาย 20 เท่าหรือ 40 เท่าโดยใช้เครื่องสแกนคอนโฟคอล (Pannoramic Scanner, 3DHistech, Budapest, Hungary) วิเคราะห์อิมมูโนฮิสโตเคมีและมัลติเพล็กซ์อิมมูโนฟลูออเรสเซนส์โดยใช้ซอฟต์แวร์วิเคราะห์ดิจิทัล HALO (V3.0.311) ซอฟต์แวร์นี้ได้รับการฝึกฝนให้รู้จักกับการเกิดพังผืด (Sirius Red) โดยใช้โมดูล Area Quantifification (V2.1.3) ในขณะที่โมดูล Fish-IF (v1.2.2) ได้รับการฝึกสำหรับตัวอย่างที่ติดฉลากด้วยสีย้อม เลือกส่วนทั้งหมดของแต่ละตัวอย่างสำหรับการวิเคราะห์ด้วยอัลกอริธึมที่เกี่ยวข้อง ข้อมูลถูกแยกไปยังซอฟต์แวร์สเปรดชีตเพื่อการวิเคราะห์
บทสรุปงานนี้เกี่ยวข้องกับการทดลองข้อมูลก่อนหน้าของเราเกี่ยวกับบทบาทการต่อต้านการป้องกันของแมสต์เซลล์ผ่านการแสดงออกของ HLA-G [39] แนะนำว่าแมสต์เซลล์มีบทบาทในการต้านการพังผืดและการป้องกันผ่านการแสดงออกของ HLA-G ในสถานการณ์ที่เป็นพังผืด บทบาทนี้เสริมด้วย B ลิมโฟไซต์ที่แสดง HLA-G ในรูขุมขนนอกมดลูก โดยรวมแล้ว การค้นพบนี้ชี้ให้เห็นถึงบทบาทในการป้องกัน HLA-G ที่แสดงออกโดยเซลล์แมสต์ในอวัยวะที่มีพังผืด
