อาหารที่มีฟอสฟอรัสสูงทำให้เกิดการควบคุมการแสดงออกของ Bmp2 และ Spp1 MRNA ในไตหนู

ฮิโรชิ มัตสึซากิ, คิคุเอะ โมริ, ชินอิจิ คัตสึมาตะ 

ในการชี้แจงกลไกการพัฒนาของภาวะไตอักเสบจากแคลเซียมในเลือดที่เกิดจากอาหารที่มีฟอสฟอรัสสูง เราจึงเน้นไปที่โปรตีนที่เกี่ยวข้องกับกระดูก เช่น โปรตีนมอร์โฟเจเนติกของกระดูก 2 และ osteopontin การศึกษานี้ตรวจสอบผลกระทบของอาหารที่มีค่า P สูงต่อการแสดงออกของ mRNA ของ Bmp2 และ Spp1 ในหนูไต. หนู Wistar ถูกแบ่งออกเป็นสองกลุ่มและให้อาหารกลุ่มควบคุม (กลุ่มควบคุม) หรืออาหารที่มี P สูง (กลุ่มที่มี P สูง)ไตความเข้มข้นของแคลเซียมและ P เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม P สูงเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม การแสดงออกของ mRNA ของทั้ง Bmp2 และ Spp1 เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม High-P เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่าอาหารที่มีค่า P สูงทำให้เกิดการควบคุม Bmp2 และ Spp1 mRNA ในไต.

คีย์เวิร์ด: อาหารที่มีฟอสฟอรัสสูง, ภาวะไตเสื่อม, Bmp2, Spp1,ไต, หนู

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติมกรุณาติดต่อ:emily.li@wecistanche.com

cistanche รักษาโรคไต

บทนำ

Nephrocalcinosis เป็นโรคที่เกิดจากการสะสมของแคลเซียม (Ca) ในเนื้อเยื่อของไต โดยเฉพาะอย่างยิ่งฟอสฟอรัสในอาหาร (P) เป็นปัจจัยสำคัญในการพัฒนาโรคนี้ การบริหารอาหารที่มี P สูงส่งผลให้ความเข้มข้นของ Ca เพิ่มขึ้นในไตและ Ca ที่สะสมอยู่ในเนื้อเยื่อของไต1-6） แม้ว่าผลของอาหารที่มี P สูงต่อการพัฒนาของภาวะไตอักเสบจากไตจะเป็นจุดสนใจของการศึกษาต่อเนื่อง แต่ก็ไม่ค่อยมีใครรู้เกี่ยวกับกลไกที่รับผิดชอบต่อการพัฒนาของโรคนี้ จึงต้องแก้ไขปัญหานี้อย่างทันท่วงที

เรารายงานว่าจากการตรวจชิ้นเนื้อโดยใช้กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน พบว่ามีผลึกรูปเข็มคล้ายไฮดรอกซีอะพาไทต์ในท่อไตของหนูที่ได้รับอาหาร P สูง6, 7) การวิเคราะห์ด้วยรังสีเอกซ์ระบุว่าตะกอน Ca ที่เกิดจากอาหารที่มี P สูงนั้นประกอบด้วย Ca และ P7 เป็นหลัก) ผลลัพธ์เหล่านี้เปิดเผยว่าตะกอน Ca ที่เกิดจากอาหารที่มี P สูงเป็นรูปแบบหนึ่งของไฮดรอกซีอะพาไทต์ จากการค้นพบนี้ เราสันนิษฐานว่าการพัฒนาของ nephrocalcinosis ถูกควบคุมโดยกลไกที่คล้ายกับการสร้างกระดูก ดังนั้น การศึกษานี้จึงเน้นไปที่โปรตีนที่เกี่ยวข้องกับกระดูก เช่น โปรตีน morphogenetic ของกระดูก 2 (BMP2) BMP2 เป็นปัจจัยสร้างกระดูกที่แสดงกิจกรรมที่กระตุ้นการสร้างกระดูก8, 9) เป็นที่น่าสังเกตว่า BMP2 ถูกระบุว่าเป็นปัจจัยที่กระตุ้น ectopicกระดูกรูปแบบ10, 11). ดังนั้นเราจึงตั้งสมมติฐานว่าถ้า BMP2 มีบทบาทสำคัญในการพัฒนาของ nephrocalcinosis การแสดงออกของโปรตีนนี้ในไตจะถูกควบคุมโดยอาหารที่มี P สูง การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อตรวจสอบว่าอาหารที่มี P สูงมีผลต่อการแสดงออกของ mRNA ของ Bmp2 ใน .หรือไม่ไต.

การศึกษาก่อนหน้านี้ของเรารายงานว่าอาหารที่มีค่า P สูงช่วยเพิ่มการแสดงออกของ osteopontin (OPN) ในท่อไตโดยใช้การวิเคราะห์ทางอิมมูโนฮิสโตเคมิคัล ซึ่งบ่งชี้ว่า OPN อาจมีส่วนเกี่ยวข้องกับการพัฒนาของ Ca ที่สะสมโดยอาหารที่มี P สูง12) ดังนั้นเราจึงตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงในการแสดงออกของ Spp1 mRNA ในไตเช่นกัน.

ผลการศึกษาครั้งนี้อาจให้ข้อมูลเชิงลึกที่มีคุณค่าเกี่ยวกับกลไกที่รับผิดชอบในการพัฒนาภาวะไตเสื่อมที่เกิดจากอาหารที่มี P สูง

วัสดุและวิธีการ

สัตว์และอาหาร.

การศึกษาปัจจุบันได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการการใช้สัตว์ของมหาวิทยาลัยเกษตรแห่งโตเกียว และสัตว์ทั้งหมดได้รับการบำรุงรักษาตามแนวทางของมหาวิทยาลัยสำหรับการดูแลและการใช้สัตว์ทดลอง (การอนุมัติหมายเลข 300049)

สิ่งสำคัญคือต้องสังเกตว่าหนูเพศเมียพัฒนาภาวะไตเสื่อมได้ง่ายกว่าหนูเพศผู้13, 14) นอกจากนี้ เรารายงานว่าอาหารที่มี P สูงจะเพิ่มการแสดงออกของ OPN ในท่อไตของหนูเพศเมีย12） การศึกษาในปัจจุบันได้ใช้หนูเพศเมียเป็นสัตว์ทดลอง หนู Wistar เพศเมียอายุสี่สัปดาห์ (Clea Japan, Tokyo, Japan) ถูกเลี้ยงในกรงลวดตาข่ายสแตนเลสแต่ละตัว ในระหว่างการทดลอง กรงถูกตั้งอยู่ในห้องที่มีแสงควบคุมภายใต้แสง 12-h: วัฏจักรมืด (แสง 0800-2000 h) อุณหภูมิ 22 ± 1 องศา และความชื้นสัมพัทธ์ 60 เปอร์เซ็นต์ถึง 65 เปอร์เซ็นต์

องค์ประกอบของอาหารทดลองแสดงในTable 1. อาหารทดลองถูกเตรียมขึ้นโดยอ้างอิงกับ AIN{{0}}G diet15) อาหารทดลองมีความเข้มข้นของ P ต่างกัน 2 ระดับ (อาหารควบคุม 0.3 เปอร์เซ็นต์ อาหาร P สูง 1.5 เปอร์เซ็นต์) ความเข้มข้นของ P ในอาหารที่มี P สูงถูกกำหนดไว้ที่ 1.5 เปอร์เซ็นต์ เนื่องจากการศึกษาก่อนหน้านี้ของเราตั้งข้อสังเกตว่าความเข้มข้นของ P ในอาหาร 1.5 เปอร์เซ็นต์ทำให้เกิด

ภาวะไตเสื่อมอย่างรุนแรง6, 7, 12, 14）และการแสดงออกของ OPN สูง12） อาหารทดลองทั้งหมดมีความเข้มข้นของ Ca เท่ากัน (0.5 เปอร์เซ็นต์) ความเข้มข้นของ P และ Ca ตามที่กำหนดโดยการวิเคราะห์อาหารทดลองแสดงไว้ในTable 1. ก่อนเริ่มการศึกษา หนูทุกตัวเคยชินกับสภาพเดิมเป็นเวลา 7 วัน ในช่วงเวลาดังกล่าว พวกมันจะได้รับอาหารควบคุมและน้ำปราศจากไอออนฟรี หลังจากช่วงที่เคยปรับตัวให้ชินกับสภาพแวดล้อมแล้ว หนูจะถูกสุ่มแบ่งออกเป็นสองกลุ่มโดยมีน้ำหนักตัวเฉลี่ยใกล้เคียงกัน และให้อาหารกลุ่มควบคุม (กลุ่มควบคุม) หรืออาหารที่มี P สูง (กลุ่ม P สูง) เป็นเวลา 14 วัน หนูได้รับอาหารทดลองที่ได้รับมอบหมายและน้ำปราศจากไอออนฟรีตลอดระยะเวลาการทดลอง เมื่อสิ้นสุดระยะเวลาทดลอง หนูถูกการุณยฆาตโดยการฉีดสารผสมยาชาเข้าช่องท้อง (เมเดโทมิดีน มิดาโซแลม และบิวโตรฟานอล) และเลือดและไตเก็บตัวอย่างมาวิเคราะห์ ตัวอย่างเลือดถูกหมุนเหวี่ยงและส่วนลอยเหนือตะกอนถูกใช้เป็นตัวอย่างในซีรัม ไตจะถูกลบออกและแคปซูลไตก็ถูกทิ้ง เซรั่มและไตตัวอย่างถูกเก็บไว้ที่ －80 องศาจนจำเป็นสำหรับการวิเคราะห์ ไตขวาใช้สำหรับการวิเคราะห์เชิงปริมาณของ Bmp2 และ Spp1 mRNA และด้านซ้ายไตใช้ในการวิเคราะห์ความเข้มข้นของ Ca และ P

การวิเคราะห์แร่

ตัวอย่างอาหารทดลองและไตถูกกำจัดที่ 550 องศาเป็นเวลา 48 ชั่วโมงในเตาเผาแบบปิดเสียง และแร่ถูกสกัดใน 1 โมล/ลิตรของ HCl เพื่อการวิเคราะห์ ความเข้มข้นของ Ca ในอาหารทดลองและไตถูกกำหนดโดยอะตอมมิกดูดกลืนสเปกโตรโฟโตเมตรี16） ความเข้มข้นของ P ในอาหารทดลองและไตวิเคราะห์โดยวิธี Gomori17）

การวิเคราะห์เชิงปริมาณของ Bmp2 และ Spp1 mRNA

RNA ทั้งหมดแยกได้จากไตที่ถูกทำให้เป็นเนื้อเดียวกันโดยใช้รีเอเจนต์ TRIzol (Life Technologies, CA, USA) ตามข้อกำหนดของผู้ผลิต ปริมาณและความบริสุทธิ์ของ RNA ได้รับการประเมินโดยใช้ NanoDrop 2000c (Thermo Fisher Scientific, MA, USA) cDNA ถูกสังเคราะห์โดยใช้ SuperScript III First-Strand Synthesis SuperMix สำหรับ qRT-PCR (Life Technologies) จากนั้นจึงนำ RT- PCR แบบเรียลไทม์เชิงปริมาณไปใช้ SYBR Select Master Mix (Life Technologies) ไพรเมอร์เฉพาะ18-20）ถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์ Bmp2 (ไปข้างหน้า 5'-ACCGTGCTCAGCTTCCATCAC-3'; ย้อนกลับ 5'-TTCCTGCATTTGTTCCCGAAA-3'), Spp1 (ไปข้างหน้า, 5'- TGAGACTGGCAGTTGGTTTGC-3'; ย้อนกลับ 5'-CCACTTTCACCGGGAGAGA-3') และ Gapdh (ไปข้างหน้า 5'-TGGGAAGCTGGTCATCAAC-3'; ย้อนกลับ 5'-GCAT-CACCCCATTTGATGTT{{26} }') ปฏิกิริยา PCR แบบเรียลไทม์ดำเนินการโดยใช้ระบบ StepOne Real-Time PCR (Applied Biosystems, CA, USA) และระดับการแสดงออกของ mRNA ถูกทำให้เป็นมาตรฐานที่ระดับ Gapdh mRNA ค่าของกลุ่มควบคุมถือเป็น 1.00

การวิเคราะห์ทางสถิติ.

ผลลัพธ์จะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SEM สำหรับหนูแต่ละกลุ่ม 6 ตัว หลังจากทำการทดสอบ F เพื่อกำหนดความเหมือนกันของความแปรปรวนแล้ว การทดสอบ t ของนักเรียนถูกใช้เพื่อกำหนดความแตกต่างที่มีนัยสำคัญระหว่างทั้งสองกลุ่ม ถ้าค่าความเป็นเนื้อเดียวกันของความแปรปรวนไม่เท่ากัน การทดสอบ t ของ Welch จะใช้แทนการทดสอบ t ของ Student ความแตกต่างถือว่ามีนัยสำคัญที่ p ＜ 0.05

ผลลัพธ์

น้ำหนักตัว การรับประทานอาหาร และการวิเคราะห์ซีรั่ม

น้ำหนักตัวสุดท้ายและการรับประทานอาหารลดลงอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่มที่มี P สูงเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม (โต๊ะ 2). ไตความเข้มข้นของน้ำหนักและแร่ธาตุไตน้ำหนักเปียกและแห้งเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม P สูงเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม (โต๊ะ 3). ไตความเข้มข้นของ Ca และ P เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม P สูงเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม

การแสดงออกของไต Bmp2 และ Spp1 mRNA

ระดับ Bmp2 mRNA ในกลุ่ม High-P เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม (รูปที่.1A). การแสดงออกของ mRNA ของ Spp1 เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม P สูงเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม (รูปที่. 1B).

การอภิปราย

ผลกระทบทางสรีรวิทยาที่เป็นที่รู้จักกันดีอย่างหนึ่งของอาหารที่มี P สูงคือการพัฒนาของภาวะไตอักเสบจากแคลเซียม ในการศึกษานี้ ความเข้มข้นของ Ca และ P ในไตเพิ่มขึ้นในกลุ่มที่มี P สูงเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม ซึ่งสอดคล้องกับผลการศึกษาก่อนหน้านี้1-6） การศึกษาก่อนหน้านี้รายงานว่าคะแนนทางเนื้อเยื่อวิทยาของ nephrocalcinosis มีความสัมพันธ์เชิงบวกกับความเข้มข้นของ Ca และ P ของไต4, 21） ดังนั้นแม้ว่าจะไม่มีการสังเกตทางเนื้อเยื่อของไตในการศึกษานี้ แต่ความเข้มข้นของ Ca และ P ของไตที่เพิ่มขึ้นบ่งชี้ว่าภาวะไตวายที่เกิดจากอาหารที่มี P สูง

เนื่องจากการสะสมของ Ca ที่เกิดจากอาหารที่มี P สูงมักจะคิดว่าเป็นรูปแบบของไฮดรอกซีอะพาไทต์ 6, 7) เราจึงตั้งสมมติฐานว่าการพัฒนาของภาวะไตอักเสบจากไตนั้นถูกควบคุมโดยกลไกที่คล้ายกับการกำเนิดของออสทีโอ ดังนั้นเราจึงตรวจสอบผลกระทบของอาหารที่มี P สูงต่อการแสดงออกของ Bmp2 mRNA ในไต ผลลัพธ์

แสดงให้เห็นว่าการแสดงออกของ Bmp2 mRNA ของไตเพิ่มขึ้นในกลุ่มที่มี P สูง และอาหารที่มี P สูงทำให้เกิดการควบคุมการแสดงออกของ Bmp2 mRNA ในไต การค้นพบนี้อาจช่วยอธิบายกลไกการพัฒนาภาวะไตเสื่อมที่เกิดจากอาหารที่มี P สูง แม้ว่าจะไม่มีหลักฐานที่แน่ชัดซึ่งสนับสนุนสมมติฐานของเรา แต่ความเป็นไปได้อย่างหนึ่งก็คือการแสดงออกของปัจจัยการถอดรหัสของ osteogenic จะเพิ่มขึ้นในบริเวณที่เป็นหินปูนในไต BMP2 กระตุ้นการสร้างความแตกต่างของ osteoblast และการสร้างกระดูกโดยควบคุมปัจจัยการถอดรหัสของ osteogenic เช่น Osterix, Runx2 และ Msx28, 9) ดังนั้น BMP2 อาจส่งเสริมการเกิด nephrocalcinosis ผ่านการควบคุมปัจจัยการถอดรหัสของ osteogenic ดังกล่าว ในปัจจุบัน บทบาทโดยละเอียดของ BMP2 ในการพัฒนาภาวะไตเสื่อมยังคงไม่ชัดเจน นอกจากนี้ เนื่องจากมีเพียงการวัดการแสดงออกของ Bmp2 mRNA ในการศึกษานี้ จึงไม่ทราบว่าการแสดงออกของโปรตีน BMP2 มีความแตกต่างกันหรือไม่ อย่างไรก็ตาม ผลลัพธ์ของเราแนะนำกลไกที่เป็นไปได้โดยที่การเปลี่ยนแปลงในการแสดงออกของ BMP2 มีบทบาทสำคัญในการก่อโรคของภาวะไตอักเสบจากไตที่เกิดจากอาหารที่มี P สูง

การศึกษาในปัจจุบันมุ่งเน้นไปที่การแสดงออกของ Spp1 mRNA นอกเหนือจากการแสดงออกของ Bmp2 mRNA การศึกษาก่อนหน้านี้ของเราโดยใช้การวิเคราะห์ทางอิมมูโนฮิสโตเคมีบ่งชี้ว่ามีการแสดงออก OPN ในระดับสูงในท่อไตของหนูที่ได้รับอาหารที่มี P สูง12) การศึกษานี้พบว่าการแสดงออกของ Spp1 mRNA เพิ่มขึ้นประมาณ 10- เท่าในกลุ่ม high-P ผลการศึกษาในปัจจุบันและก่อนหน้านี้พบว่าการรับประทานอาหารที่มี P สูงทำให้เกิดการแสดงออกของ OPN ในไต ในทางกลับกัน นักวิจัยคนอื่น ๆ ได้แสดงให้เห็นว่า OPN เป็นเมทริกซ์หินเป็นปัจจัยสำคัญในการก่อตัวของนิ่วในปัสสาวะ22, 23）; ดังนั้น รายงานก่อนหน้านี้ของเราจึงแนะนำว่า OPN อาจมีบทบาทเป็นองค์ประกอบเมทริกซ์ในการก่อตัวของตะกอน Ca ที่เกิดจากอาหารที่มี P สูง12） อย่างไรก็ตาม Paloian และคณะ เมื่อเร็ว ๆ นี้รายงานว่า OPN มีบทบาทในการป้องกันโรคไตที่เกิดจากอาหารที่มี P สูงในหนู OPN KO24） กล่าวคือ บทบาททางสรีรวิทยาของ OPN ต่อภาวะไตอักเสบจากไตที่เกิดจากอาหารที่มี P สูง ดูเหมือนจะเป็นการปราบปรามมากกว่าที่จะส่งเสริมการกลายเป็นปูนในไต. นอกจากนี้ รายงานก่อนหน้านี้ยังอธิบายว่าระดับ OPN เพิ่มขึ้นเพื่อชดเชยการกลายเป็นปูนนอกมดลูกทางพยาธิวิทยาเพิ่มเติมในไตและหลอดเลือดเนื่องจาก OPN ถูกควบคุมที่บริเวณที่เกิดการกลายเป็นปูนทางพยาธิวิทยา

ดังที่ได้กล่าวไว้ข้างต้น การศึกษาในปัจจุบันได้ชี้ให้เห็นถึงความสำคัญของ BMP2 และ OPN ในภาวะไตวายที่เกิดจากอาหารที่มี P สูง เป็นที่น่าสังเกตว่าผลกระทบของ BMP2 และ OPN ต่อการพัฒนาของ nephrocalcinosis นั้นคิดว่าถูกควบคุมโดยกลไกต่างๆ ความแตกต่างทางกลไกเหล่านี้อาจบ่งชี้ว่ากลไกพื้นฐานของการเกิดภาวะไตอักเสบจากไตนั้นซับซ้อน ประเด็นต่อไปที่ต้องพิจารณาคือการยับยั้งการเจริญเติบโตอาจส่งผลต่อการแสดงออกของ Bmp2 และ Spp1 mRNA ในไตเนื่องจากการศึกษาในปัจจุบันพบว่าน้ำหนักตัวสุดท้ายลดลงในกลุ่ม High-P การสังเกตใน 12 ครั้งที่แล้วของเรา) และการศึกษาในปัจจุบันอาจช่วยอธิบายประเด็นนี้ได้ ก่อนหน้านี้เราได้รายงานการแสดงออกของโปรตีน OPN ที่เพิ่มขึ้นในท่อไตของหนูที่มีการเจริญเติบโต

ไม่ถูกยับยั้งโดยอาหารที่มี P สูง12) นอกจากนี้ การศึกษาในปัจจุบันยังแสดงให้เห็นการยับยั้งการเจริญเติบโตในกลุ่ม P สูง แต่มีการแสดงออกของ Spp1 mRNA ในไตในระดับสูง จากการสังเกตเหล่านี้ การศึกษาในปัจจุบันดูเหมือนจะมีผลเพียงเล็กน้อยต่อการยับยั้งการเจริญเติบโตของการแสดงออกของ Bmp2 และ Spp1 mRNA อย่างไรก็ตาม รายละเอียดของความสัมพันธ์ระหว่างการยับยั้งการเจริญเติบโตกับการแสดงออกของยีน Bmp2 และ Spp1 ยังคงไม่ชัดเจน ดังนั้นจึงจำเป็นต้องมีการสอบสวนเพิ่มเติมเพื่อชี้แจงประเด็นนี้

โดยสรุป เพื่อชี้แจงกลไกของการพัฒนาภาวะไตวายจากอาหารที่มี P สูง การศึกษาในปัจจุบันได้กำหนดผลของอาหารที่มี P สูงต่อการแสดงออกของ Bmp2 และ Spp1 mRNA ในไต. ความเข้มข้นของ Kidney Ca และ P เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม P สูงเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม นอกจากนี้ การแสดงออกของ mRNA ของ Bmp2 และ Spp1 เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่มที่มี P สูงเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่าอาหารที่มีค่า P สูงส่งเสริมการควบคุมการแสดงออกของ Bmp2 และ Spp1 mRNA ในไต.

อ้างอิง

1） Hitchman AJ, มี SA ใดๆ, Hitchman A, Harrison JE, Tam C: การกลายเป็นปูนในไตที่เกิดจากฟอสเฟตในหนู แคน เจ Physiol Pharmacol 57: 92-97, 1979

2） Parker HE: ความสัมพันธ์ระหว่างแมกนีเซียมและฟอสฟอรัสที่เพียงพอกับระดับฟอสฟอรัสในอาหารส่วนเกิน Nutr Rep Int 32: 1311-1318, 1985

3） Ritskes-Hoitinga J, Lemmens AG, Danse LHJC, Beynen AC: ภาวะไตวายจากฟอสฟอรัสและการทำงานของไตในหนูเพศเมีย เจ Nutr 119: 1423-1431, 1989

4） Cockell KA, L'Abbe MR, Belonje B: ความเข้มข้นและอัตราส่วนของแคลเซียมและฟอสฟอรัสในอาหารมีอิทธิพลต่อการพัฒนาของ nephrocalcinosis ในหนูเพศเมีย เจ Nutr 132: 252-256, 2002

5） Katsumata S, Matsuzaki H, Uehara M, Suzuki K : ผลของการเสริมแคลเซียมในอาหารต่อการเผาผลาญของกระดูก ความเข้มข้นของแร่ธาตุในไต และการทำงานของไตในหนูที่ได้รับอาหารที่มีฟอสฟอรัสสูง เจ Nutr Sci Vitaminol 61: 195-200, 2015

6) Matsuzaki H, Uehara M, Suzuki K, Liu QL, Sato S, Kanke Y, Goto S : อาหารที่มีฟอสฟอรัสสูงทำให้เกิดภาวะไตอักเสบและการบาดเจ็บที่ท่อส่วนต้นในหนูอย่างรวดเร็ว เจ Nutr Sci Vitaminol 43: 627-641, 1997

7) Liu QL, Sato S, Kishikawa T, Matsuzaki H, Yamanaka N: ประสิทธิผลของการแพทย์แผนจีน Wulingsan ในการยับยั้งการพัฒนาของ nephrocalcinosis ที่เกิดจากอาหารฟอสฟอรัสสูงในหนูที่อายุน้อย Med Electron Microsc 34: 103-114, 2001

8) Sirard C, Kim S, Mirtsos C, Tadich P, Hoodless PA, Its A, Maxson R, Wrana JL, Mak TW: เป้าหมายการหยุดชะงักในเซลล์ของหนูเผยให้เห็นความต้องการตัวแปรสำหรับ Smad4 ในการแปลงสัญญาณที่เกี่ยวข้องกับปัจจัยการเจริญเติบโต เจ ไบโอล เคม 275: 2063-2070, 2000

9) Matsubara T, Kida K, Yamaguchi A, Hata K, Ichida F, Meguro H, Aburatani H, Nishimura R, Yoneda T: BMP2 ควบคุม Osterix ผ่าน Msx2 และ Runx2 ระหว่างการแยกเซลล์สร้างกระดูก เจ ไบโอล เคม 283: 29119-29125, 2008

10） Urist MR : กระดูก: การก่อตัวโดยการเหนี่ยวนำอัตโนมัติ วิทยาศาสตร์ 150: 893-899, 1965

11） Wozney JM, Rosen V, Celeste AJ, Mitsock LM, Whitters MJ, Kriz RW, Hewick RM, Wang EA: ผู้ควบคุมการสร้างกระดูกแบบใหม่: โคลนและกิจกรรมระดับโมเลกุล วิทยาศาสตร์ 242: 1528-1534, 1988

12） Matsuzaki H, Katsumata S, Uehara M, Suzuki S, Miwa M: อาหารที่มีฟอสฟอรัสสูงทำให้เกิดการแสดงออกของ osteopontin ของท่อไตในหนู J Clin Biochem Nutr 41: 179-183, 2007

13） Cousins ​​FB, Geary CPM: การแข็งตัวของไตที่กำหนดเพศในหนู ธรรมชาติ 211 : 980-981, 1966

14） Matsuzaki H, Katsumata S, Masuyama R, Uehara M, Nakamura K, Suzuki K: ความแตกต่างทางเพศในความเข้มข้นของแร่ธาตุในไตและการขับอัลบูมินในปัสสาวะในหนูที่ได้รับอาหารที่มีฟอสฟอรัสสูง Biosci เทคโนโลยีชีวภาพ Biochem 66: 1737-1739, 2002

15） Reeves PG, Nielsen FH, Fahey GC Jr: AIN-93 อาหารบริสุทธิ์สำหรับสัตว์ฟันแทะในห้องปฏิบัติการ: รายงานขั้นสุดท้ายของคณะกรรมการการเขียนเฉพาะกิจของ American Institute of Nutrition เกี่ยวกับการปฏิรูป AIN-76อาหารสัตว์ฟันแทะ . เจ Nutr 123: 1939-1951, 1993

16）Gimblet EG, Marney AF, Bonsnes RW: การหาปริมาณแคลเซียมและแมกนีเซียมในซีรัม ปัสสาวะ อาหาร และอุจจาระโดยอะตอมมิกดูดกลืนสเปกโตรโฟโตเมตรี คลินิกเคมี 13 : 204-214, 1967

17）Gomori G: การดัดแปลงการวัดค่าฟอสฟอรัสสีสำหรับใช้กับโฟโตอิเล็กทริกคัลเลอริมิเตอร์ J Lab Clin Med 27: 955-960, 1942

18) Ming LG, Lv X, Ma XN, Ge BF, Zhen P, Song P, Zhou J, Ma HP, Xian CJ, Chen KM: กลุ่ม prenyl มีส่วนช่วยในการทำงานของ phytoestrogen 8-prenynaringenin ในการเสริมสร้างการสร้างกระดูก และยับยั้งการสลายของกระดูกในหลอดทดลอง วิทยาต่อมไร้ท่อ 154: 1202-1214, 2013

19）Kreke MR, Huckle WR, Goldstein AS: การไหลของของไหลช่วยกระตุ้นการแสดงออกของ osteopontin และ bone sialoprotein โดยเซลล์ stromal ของไขกระดูกในลักษณะที่ขึ้นกับชั่วคราว กระดูก 36: 1047-1055, 2005

20）Drechsler J, Grotzinger J, Hermanns HM: การกำหนดลักษณะของคอมเพล็กซ์ตัวรับ oncostatin M ของหนูซึ่งคล้ายกับมนุษย์ แต่แตกต่างจากตัวรับไซโตไคน์ของหนู PLoS One 7 : e43155, 2012

21） Hoek AC, Lemmens AG, Mullink JWMA, Beynen AC: อิทธิพลของแคลเซียมในอาหาร: อัตราส่วนฟอสฟอรัสต่อการขับแร่ธาตุและภาวะไตวายในหนูเพศเมีย เจ Nutr 118: 1210-1216, 1988 

22) Kohri K, Suzuki Y, Yoshida K, Yamamoto K, Amasaki N, Yamate T, Umekawa T, Iguchi M, Shinohara H, Kurita T: การโคลนโมเลกุลและการจัดลำดับของ cDNA ที่เข้ารหัสโปรตีนนิ่วในปัสสาวะซึ่งเหมือนกับ osteopontin ชุมชน Biochem Biophys Res 184: 859-864, 1992

23）Kohri K, Nomura S, Kitamura Y, Nagata T, Yoshioka K, Iguchi M, Yamate T, Umekawa T, Suzuki Y, Shinohara H, Kurita T: โครงสร้างและการแสดงออกของ mRNA ที่เข้ารหัสโปรตีนนิ่วในปัสสาวะ (Osteopontin) เจ ไบโอล เคม 268: 15180-15184, 1993

24） Paloian NJ, Leaf EM, Giachelli CM: Osteopontin ส่งเสริมการทดสอบกับภาวะแคลเซียมในไตที่เกิดจากฟอสเฟตสูงและการกลายเป็นปูนในหลอดเลือด ไต Int 89: 1027-1036, 2016

25）Giachelli CM, Bae N, Almeida M, Denhardt DT, Alpers CE, Schwartz SM: Osteopontin สูงขึ้นในระหว่างการสร้าง neointima ในหลอดเลือดแดงของหนูและเป็นส่วนประกอบใหม่ของเนื้อเยื่อหลอดเลือดของมนุษย์ J Clin ลงทุน 92: 1686-1696, 1993