การสัมผัสไอเสียจากน้ำมันดีเซลเปลี่ยนแปลงการแสดงออกของเครือข่ายที่เกี่ยวข้องกับการเสื่อมของระบบประสาทในสมองของม้าลายตอนที่ 2

การเตรียมตัวอย่างโปรตีน

เพื่อเตรียมตัวอย่างโปรตีน หัวตัวอ่อนที่ได้รับการดมยาสลบตั้งแต่ 80 ถึง 100 ตัว (pdf 5 ตัว) ได้รับการแยกอย่างระมัดระวังและล้างด้วย PBS ก่อนที่จะถ่ายโอนไปยังบัฟเฟอร์สลายซึ่งประกอบด้วย TCA/อะซิโตนที่แช่เย็นไว้ล่วงหน้า 15% ที่มีเบตา-เมอร์แคปโตเอธานอล 0.07% (ME ) และค็อกเทลตัวยับยั้งโปรติเอส (ต้องการผู้ผลิต) ในปริมาตรรวม 500 ul.

ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา มีความสนใจอย่างมากเกี่ยวกับผลกระทบของตัวอย่างโปรตีนต่อความจำ ผู้คนจำนวนมากขึ้นเรื่อยๆ เริ่มตระหนักถึงความสำคัญของอาหารที่มีต่อสุขภาพ โดยเฉพาะบทบาทที่สำคัญของโปรตีนในร่างกายมนุษย์

โปรตีนเป็นวัสดุก่อสร้างพื้นฐานของร่างกายมนุษย์และมีบทบาทสำคัญในร่างกายมนุษย์ ด้วยเหตุนี้ ตัวอย่างโปรตีนจึงกลายเป็นช่องทางสำคัญสำหรับหลาย ๆ คนในการแสวงหาสุขภาพและความงาม นอกเหนือจากการสร้างกล้ามเนื้อและรูปร่างตามร่างกายแล้ว ตัวอย่างโปรตีนยังสามารถปรับปรุงความจำของบุคคลได้อีกด้วย

นักวิทยาศาสตร์บางคนได้ศึกษาความสัมพันธ์ระหว่างโปรตีนกับความจำ พวกเขาพบว่าการบริโภคโปรตีนอย่างเพียงพอในระยะยาวมีประโยชน์ต่อสุขภาพกายทุกด้าน โดยเฉพาะด้านความจำ มีหลักฐานเพิ่มมากขึ้นว่าการบริโภคโปรตีนในอาหารมีผลกระทบสำคัญต่อการทำงานของสมองและความจำ

โปรตีนเป็นองค์ประกอบสำคัญของเซลล์ประสาทในสมองของมนุษย์ ดังนั้นการบริโภคโปรตีนในแต่ละวันจึงมีผลกระทบสำคัญต่อความจำและความสามารถในการคิดของผู้คน การบริโภคโปรตีนในระยะยาวไม่เพียงแต่ตอบสนองความต้องการโปรตีนของร่างกายเท่านั้น แต่ยังช่วยให้สมองมีความกระตือรือร้นและมีสุขภาพดีอีกด้วย

นอกจากนี้โปรตีนยังสามารถช่วยให้ร่างกายรักษาสมดุลของน้ำตาลในเลือดและรักษาอารมณ์ให้คงที่ นี่เป็นสิ่งสำคัญมากสำหรับการรักษาความจำและทักษะการคิด ดังนั้นการบริโภคโปรตีนในปริมาณปานกลางสามารถช่วยปรับปรุงการทำงานของการรับรู้และสภาวะทางอารมณ์ต่างๆ ของร่างกายมนุษย์ได้

โดยรวมแล้วมีความสัมพันธ์ที่ดีระหว่างตัวอย่างโปรตีนและความทรงจำ การเพิ่มปริมาณโปรตีนช่วยให้สมองและร่างกายของคุณแข็งแรง พัฒนาทักษะการคิดและความจำ สำหรับคนที่ต้องพัฒนาความจำ จำเป็นอย่างยิ่งที่จะต้องบริโภคโปรตีนในปริมาณที่เหมาะสม เราควรกินอาหารที่มีโปรตีนอย่างเหมาะสมและใส่ใจกับมื้ออาหารที่เหมาะสมเพื่อรักษาร่างกายให้แข็งแรงและจิตใจที่เฉียบแหลม จะเห็นได้ว่าเราต้องปรับปรุงความจำ และ Cistanche Deserticola สามารถปรับปรุงความจำได้อย่างมีนัยสำคัญ เนื่องจาก Cistanche Deserticola มีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ ต้านการอักเสบ และต่อต้านวัย ซึ่งสามารถช่วยลดปฏิกิริยาออกซิเดชันและการอักเสบในสมอง จึงช่วยปกป้อง สุขภาพของระบบประสาท นอกจากนี้ Cistanche Deserticola ยังสามารถส่งเสริมการเจริญเติบโตและการซ่อมแซมเซลล์ประสาท ซึ่งจะช่วยปรับปรุงการเชื่อมต่อและการทำงานของโครงข่ายประสาทเทียม ผลกระทบเหล่านี้สามารถช่วยปรับปรุงความจำ การเรียนรู้ และความเร็วในการคิด และยังอาจป้องกันการพัฒนาของความผิดปกติทางสติปัญญาและโรคทางระบบประสาทอีกด้วย

คลิกรู้อาหารเสริมเพื่อเพิ่มความจำ

หลังจากการทำให้เป็นเนื้อเดียวกันช่วงสั้นๆ โปรตีนถูกตกตะกอนเป็นเวลา 12 ชั่วโมงที่ 20 องศา ตามด้วยการหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาทีที่ 4 องศา ส่วนลอยเหนือตะกอนถูกเอาออก และโปรตีนเม็ดถูกล้างสองครั้งด้วยอะซิโตนเย็น (ที่มี 0.07% ME และค็อกเทลที่เป็นสารยับยั้งโปรตีเอส) เม็ดโปรตีนสุดท้ายถูกละลายในบัฟเฟอร์การสลายที่มียูเรีย 7.0 โมลาร์ และไทโอยูเรีย 2.0 M โดย sonication บนน้ำแข็ง

ตัวอย่างโปรตีนที่ละลายได้ถูกปั่นแยกที่ 15,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 องศาเพื่อให้ตกตะกอนอนุภาคที่ไม่ละลายน้ำ และวัดความเข้มข้นของตัวอย่างโปรตีนขั้นสุดท้ายโดยใช้วิธีแบรดฟอร์ด

การวิเคราะห์โปรตีโอมิกส์ปริมาณงานสูงที่ใช้ TMT

ตัวอย่างถูกรีดิวซ์, เติมอัลคิลเลต และย่อยโดยการเติมทริปซินและไลเอส-ซี โปรตีเอสตามลำดับ จากนั้นจึงติดฉลากเปปไทด์โดยใช้แท็กไอโซบาริก 10-plexTMT ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ตัวอย่างที่ติดฉลากถูกผสมและแยกส่วนละเอียดโดยใช้โครมาโตกราฟีแบบรีเวิร์สเฟสโครมาโตกราฟีที่มี pH สูง

จากนั้นเศษส่วนส่วนบุคคลจะถูกวิเคราะห์โดย LC – MS / MS โดยใช้โครมาโทกราฟีแบบย้อนกลับเฟสแบบออนไลน์และแมสสเปกโตรมิเตอร์แบบตีคู่บนสเปกโตรมิเตอร์มวล Thermofsher Fusion Lumos ข้อมูลได้มาโดยใช้วิธี MS3 ที่ใช้การเลือกสารตั้งต้นแบบซิงโครนัสตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้า (McAlister et al. 2014) การค้นหาฐานข้อมูลและการแยกข้อมูลไอออนของนักข่าว TMT ดำเนินการโดยใช้แพลตฟอร์มซอฟต์แวร์ MaxQuant (Cox และ Mann 2008)

การเปรียบเทียบข้อมูล TMT ทั่วทั้งตัวอย่างดำเนินการโดยใช้ MSStats (Choiet al. 2014) การวิเคราะห์การถอดเสียง ประมาณ 80–100 หัวถูกแยกออกจากตัวอ่อนที่ถูกดมยาสลบ (120 ชั่วโมง) ล้างด้วย PBS และอยู่ภายใต้การสกัด RNA ทั้งหมดโดยใช้ Trizol (Sigma Aldrich, Saint Louis , USA) รีเอเจนต์ตามคำแนะนำของผู้ผลิต

คุณภาพและปริมาณของ RNA ได้รับการประเมินโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ NanoDrop2000 (Thermo Scientific, MA) และเพิ่มเติมโดย Agilent 2100 Bioanalyzer เพื่อรับรองความเข้มข้นขั้นต่ำที่ 50 ng/ul และหมายเลข RNAintegrity (RIN) ที่ 8 จากนั้นจึงดำเนินการเตรียมห้องสมุดโดยใช้ Illumina HiSeq4000 ตาม โปรโตคอล: "เวิร์กโฟลว์การเตรียมไลบรารี TruSeqStranded Total RNA ด้วยRibo-Zero Gold" และตัวอย่างได้รับการจัดลำดับตามเงื่อนไขต่อไปนี้: "Paired End run, R1=75 รอบ (แอนติเซนส์สแตรนด์), ดัชนี =8 รอบ R2=75 รอบ (สายสัมผัส)"

การวิเคราะห์ข้อมูล

ชุดข้อมูลทั้งสองสำหรับโปรตีโอมิกและการศึกษาการถอดเสียงได้รับการอัปโหลดและวิเคราะห์พร้อมกันโดยใช้เครื่องมือออนไลน์ Metascape ซึ่งช่วยให้สามารถใส่คำอธิบายประกอบของยีนสำหรับสปีชีส์ต่างๆ รวมถึง Danio rerio (Zhou et al. 2019) เพื่อประเมินการมีส่วนร่วมของการเปลี่ยนแปลงโปรไฟล์โปรตีโอมหรือทรานสคริปโตโมมในเส้นทางเฉพาะ ข้อมูลถูก วิเคราะห์ผ่านการใช้ซอฟต์แวร์ Ingenuity Pathways Analysis (IPA) (Krämer et al. 2014)

ชุดข้อมูลที่มีตัวระบุยีนหรือโปรตีนและค่าการแสดงออกที่เกี่ยวข้องถูกอัพโหลดลงในแอปพลิเคชัน ตัวระบุแต่ละตัวถูกแมปกับวัตถุที่สอดคล้องกันในฐานความรู้ของ Ingenuity

การตัดทอนการเปลี่ยนแปลงการแสดงออกเป็น 1.3- เท่าถูกกำหนดไว้เพื่อระบุโมเลกุลที่มีการควบคุมการแสดงออกที่แตกต่างกัน การวิเคราะห์เชิงหน้าที่ระบุการทำงานทางชีวภาพและ/หรือโรคที่สำคัญที่สุดต่อชุดข้อมูล โมเลกุลจากชุดข้อมูลที่ตรงตามจุดตัดและสัมพันธ์กับหน้าที่ทางชีววิทยาได้รับการพิจารณาสำหรับการวิเคราะห์ การทดสอบที่แม่นยำของ Right-tailedFisher ใช้ในการคำนวณค่า p ซึ่งระบุความน่าจะเป็นที่การทำงานทางชีวภาพและ/หรือโรคแต่ละรายการที่กำหนดให้กับชุดข้อมูลนั้นเกิดจากโอกาสเพียงอย่างเดียว

การวิเคราะห์เส้นทาง

เพื่อประเมินการมีส่วนร่วมของการเปลี่ยนแปลงโปรไฟล์โปรตีโอมออร์ทรานสคริปต์ในเส้นทางเฉพาะ ชุดข้อมูลทั้งสองถูกอัปโหลดไปยังซอฟต์แวร์ IPA (Krämer et al. 2014) เส้นทาง Canonical ที่มีการเปลี่ยนแปลงที่มีนัยสำคัญอันดับต้น ๆ จะได้รับการประเมินและตีความเพิ่มเติมโดยใช้ PCR และการซับแบบตะวันตกตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง

การซับแบบตะวันตก

โหลดโปรตีนทั้งหมด 25 ไมโครกรัมบน 12%NuPAGE (Novex, CA) และถ่ายโอนไปยังเมมเบรน PVDF (Novex, CA) ตามที่อธิบายไว้ (MahmoudianSani et al. 2017; Rafee et al. 2019) เมมเบรนถูกปิดกั้นด้วยนมพร่องมันเนย 5% ในทริส-บัฟเฟอร์ซาลีนและ 0.01% ทวีน 20 (บัฟเฟอร์ TBST) เป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง จากนั้นบ่มข้ามคืนที่ 4 องศาด้วยกระต่ายโพลีโคลนอลแอนติ-Cyp1A1(Abcam, CA) หรือโมโนโคลนอลแอนติ-GAPDH ของเมาส์ ( Abcam, CA) เจือจางในบัฟเฟอร์ TBST ที่มีนมพร่องมันเนย 1%

หลังจากการล้างใน TBST บล็อตถูกบ่มด้วยแอนติบอดีต่อต้านกระต่าย-HRP (Abcam, CA) ของลาทุติยภูมิหรือแอนติบอดีต่อต้านหนูเมาส์-HRP (ซานตาครูซ, CA) ของแพะเป็นเวลา 2 ชั่วโมง ตามด้วยการพัฒนาด้วยซับสเตรตการซับแบบตะวันตกของ Pierce™ ECL Plus ( เทอร์โม ฟิชเชอร์ ไซแอนติฟิค, สหรัฐอเมริกา) แถบถูกมองเห็นด้วยภาพโดยใช้เครื่องสแกน LI-COR และวิเคราะห์ผ่านความหนาแน่น (LI_COR Biosciences,NE)

PCR แบบเรียลไทม์

RNA ทั้งหมดถูกแยกออกจากหัวโดยใช้รีเอเจนต์ TRIzol (Sigma Aldrich, Saint Louis, USA) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต จากนั้นทำการวัดโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ NanoDrop 2000 (Thermo Scientific, MA) จำนวน 1 ไมโครกรัมของตัวอย่าง RNA แต่ละตัวถูกถอดรหัสแบบย้อนกลับโดยใช้ iScript™ ซูเปอร์มิกซ์การถอดรหัสแบบย้อนกลับ (Bio-Rad, CA) และ PCR แบบเรียลไทม์ดำเนินการโดยใช้ SsoAdvancedUniversal SYBR Green ซุปเปอร์มิกซ์ (Bio-Rad, CA) และไพรเมอร์อยู่ในรายการ ในตารางเสริม 1 ระดับการแสดงออกสัมพัทธ์คำนวณโดยใช้วิธี 2− ΔΔCT และใช้การทดสอบ T ทางสถิติเพื่อประเมินความแตกต่างที่มีนัยสำคัญ

ผลลัพธ์และการอภิปราย

การวิเคราะห์โปรตีโอมิกและการถอดเสียงเป็นสองเครื่องมือหลักในการทำความเข้าใจกลไกระดับโมเลกุลที่เกี่ยวข้องกับกระบวนการของโรคและการตอบสนองต่อสิ่งเร้าด้านสิ่งแวดล้อม (Duan et al. 2017; García-Estrada et al.2013; Jami et al. 2014a, b, 2015; Kosalková et al.2012) . ที่นี่ เราทำการวิเคราะห์การแสดงออกเชิงลึกทั้งระดับการถอดเสียงและโปรตีโอมิกในส่วนหัวของตัวอ่อนเซบีริชที่สัมผัสกับ DEPe

หัวที่ประกอบด้วยเนื้อเยื่อสมองเป็นส่วนใหญ่ ถูกแยกออกเพื่อกำจัดลักษณะการแสดงออกของเนื้อเยื่ออื่นๆ เนื่องจากเราสนใจที่จะกำหนดวิถีทางพยาธิวิทยาภายในของระบบประสาทส่วนกลาง

ลักษณะการแสดงออกของหัวของปลาเซบีฟิชเอ็มบริโอ

การวิเคราะห์โปรไฟล์ให้โปรตีนที่ตรวจพบ 11,172 รายการ และเป้าหมาย mRNA 14,748 รายการจากยีนเข้ารหัสมากกว่า 26 รายการ000 (Howe et al. 2013) ในบรรดาโปรตีน 11, 172 รายการที่ระบุจากตัวอย่างที่มีป้ายกำกับ TMT (ตารางเสริม 2) มีโปรตีน 141 รายการที่ได้รับการควบคุมอย่างมีนัยสำคัญและ 607 รายการถูกลดระดับลง (ตารางเสริม 3 และรูปที่ 1a) ในทำนองเดียวกันมีการถอดเสียง 367 รายการและ 149 รายการถูกลดระดับลงระหว่างการถอดเสียง 14, 748 รายการ (ตารางเสริม 4) ที่ตรวจพบในการวิเคราะห์ RNA-seq (รูปที่ 1b และตารางเสริม 5)
ในกรณีส่วนใหญ่ ผลการวิจัยจากการวิเคราะห์เชิงโปรตีนและการถอดเสียงแบบ upregulation มีความสอดคล้องกัน ตัวอย่างเช่น โปรตีนที่ได้รับการควบคุมระดับสูงอันดับต้นๆ ได้แก่ ไซโตโครม P450 Cyp1a, Cyp1c1, หน่วยย่อยของโปรตีนที่จับกับกัวนีนนิวคลีโอไทด์, แอนเนกซิน, ไอโซฟอร์มสั้นของ Plexin B2b, สมาชิกดีไฮโดรจีเนส/รีดักเตส (แฟมิลี SDR) 13- เช่น 1, เอสแอนติเจนของเรตินา/ต่อมไพเนียล (สารจับ) b และซัลโฟทรานส์เฟอเรส6B1

ในทำนองเดียวกัน ยีนที่มีการควบคุมการถอดเสียงสูงที่สุด ได้แก่ cytochrome P450 (Cyp1a), chemokine (C–C motif) ลิแกนด์ 27a, aryl-hydrocarbonreceptor repressor A, cytochrome P450 (Cyp1b) และ Rh family C glycoprotein ในทางกลับกันโปรตีนและการถอดเสียงที่ควบคุมลดลง ไม่ได้มีความสัมพันธ์กันมากนักเสมอไป

ตัวอย่างเช่น คอมเพล็กซ์ซิน 2, สเปกตรินอัลฟา, สายเบาของไมโอซินในหัวใจ-1, โปรตีนที่ทำปฏิกิริยากับ SEC23, หน่วยย่อยเมมเบรน ATPsynthase EA, ไซโตโครม b และดีอะซิติเลสที่ขึ้นกับ NAD อยู่ในกลุ่มโปรตีนที่ได้รับการควบคุมต่ำในระดับบนสุด ในขณะที่โปรตีนเมมเบรนส่วนของเรตินาเอาท์เตอร์ 1a , ตัวถูกละลายพาหะแฟมิลี 5 (ตัวขนส่งไอโอไดด์), FBJ murine Osteosarcoma viral oncogene homolog B, คอมเพล็กซ์ 4c, FOSlike แอนติเจน 1a, opsin 1 และ v-fos แสดงการควบคุมการถอดรหัสสูงสุด (ตารางที่ 1 และ 2)

แอนติบอดีที่รับรู้ถึงโปรตีนเซบีฟิชนั้นมีจำกัด แต่เรายืนยันตัวอย่างของการเปลี่ยนแปลงเหล่านี้โดยใช้การวิเคราะห์แบบ Western Blot การควบคุมโปรตีน Cyp1A และการลดลงของ Complexin 2 (CPLX2) ได้รับการยืนยันโดยใช้ GAPDH เป็นตัวควบคุมการโหลด (รูปที่ 2a) ระดับที่สูงขึ้นของการถอดความ TAT และ UGT1B1 และระดับที่ต่ำกว่าของ CHNRB และ TH2 ยังได้รับการยืนยันโดย qPCR โดยใช้ Elf-alpha เป็นการควบคุมภายใน (รูปที่ 2b)

คำอธิบายประกอบของยีน

มีเครื่องมือและซอฟต์แวร์ชีวสารสนเทศออนไลน์มากมายที่สามารถให้ข้อมูลที่เป็นประโยชน์เกี่ยวกับคำอธิบายประกอบของยีนได้ ในงานนี้ Metascape ซึ่งมีความสามารถในการใส่คำอธิบายประกอบของยีนสำหรับ Danio rerio (Zhouet al. 2019) ถูกนำมาใช้ในงานนี้

ชุดข้อมูลทั้งสองชุดสำหรับการศึกษาโปรตีโอมิกและการถอดเสียงได้รับการอัปโหลดและวิเคราะห์พร้อมกันโดยใช้เครื่องมือออนไลน์นี้ หลังจากรวมผลลัพธ์ของการเปลี่ยนแปลงทั้งโปรตีโอมิกและทรานสคริปโตมิกในซอฟต์แวร์แล้ว กระบวนการต่างๆ เช่น การตอบสนองต่อการกระตุ้นซีโนไบโอติก การเผาผลาญของซีโนไบโอติกโดยไซโตโครม P450 และการควบคุมการแสดงออกของยีนแบบเป็นกลาง ถูกค้นพบจากการรักษาด้วย DEPe (รูปที่ 3a)

การวิเคราะห์นี้ยังเสนอแนะระดับที่ถูกระงับของกระบวนการทางชีวภาพ เช่น "การรับรู้ทางการมองเห็น" "การถ่ายโอนแสง" และ "การทำให้เป็นภายในของตัวรับโปรตีน G" การเปลี่ยนแปลงในโปรไฟล์การแสดงออกที่เกี่ยวข้องกับการมองเห็นไม่ใช่เรื่องที่ไม่คาดคิด เนื่องจากการรักษาด้วย DEPe ในช่วงแรกของการพัฒนาส่งผลให้ดวงตาเล็กลง (ไม่แสดงข้อมูล)

การส่งสัญญาณการเผาผลาญของซีโนไบโอติก

ซีโนไบโอติกซึ่งเป็นสารประกอบจากธรรมชาติหรือสารเคมีสังเคราะห์ที่แปลกปลอมสามารถกระตุ้นการตอบสนองต่อความเครียดของเซลล์ ซึ่งนำไปสู่การสร้างความแตกต่าง การแพร่กระจาย การตายของเซลล์ หรือเนื้อร้าย แท้จริงแล้ว ร่างกายจำเป็นต้องปกป้องตัวเองอย่างแข็งขันจากซีโนไบโอติก รวมถึงสารประกอบภายนอกที่เป็นพิษและสารเมตาบอไลต์ของพวกมัน ด้วยการแสดงออกของเอนไซม์และผู้ขนส่งที่เกี่ยวข้องกับการกำจัดและการล้างพิษ

เอนไซม์เหล่านี้แบ่งออกเป็นสามกลุ่ม: เอนไซม์ PhaseI (CYP, ALDH, FMO) ซึ่งนำขั้วเข้าสู่ซีโนไบโอติกส์; เอนไซม์ระยะที่ 2 (UGT, GST, SULT) ซึ่งแนะนำความสามารถในการชอบน้ำผ่านการผันโมเลกุลที่ชอบน้ำ เช่น ซัลเฟต กรดกลูโคโรนิก และกลูตาไธโอน ไปยังซีโนไบโอติกส์ และเอนไซม์ระยะที่ 3 (MDR1, OATP2, MRP) ที่ขนส่งซีโนไบโอติกหรือคอนจูเกตที่เกิดขึ้นในระหว่างระยะที่ II ไปจนถึงบริเวณนอกเซลล์

เอนไซม์เหล่านี้เกิดขึ้นผ่านการส่งสัญญาณลดหลั่นที่เกี่ยวข้องกับตัวรับเฉพาะ (CAR, PXR, AHR) และการกระตุ้นการทำงานของปัจจัยการถอดรหัสโดย MAPK (NRF2, MAF) (Omiecinski et al. 2011)

ในกรณีที่ไม่มีตัวกระตุ้น ตัวรับที่มีฤทธิ์เป็นส่วนประกอบ (CAR) จะอยู่ในไซโตพลาสซึมเอเอสเอคอมเพล็กซ์ที่มี CCRP และ HSP90 แต่เมื่อมีตัวกระตุ้นอยู่ CAR จะย้ายเข้าไปในนิวเคลียสและจับกับ RXR เพื่อสร้างเฮเทอโรไดเมอร์และเชื่อมโยงกับรูปแบบซ้ำ ๆ หลายแบบเช่น DR3, DR4, ER6 และ ER8 และมีส่วนช่วยในการควบคุมการแสดงออกของยีน (ตารางเสริม 2)

การวิเคราะห์โปรตีโอมิกส์ของเราเผยให้เห็นการกระตุ้นการเผาผลาญซีโนไบโอติก โดยแท้จริงแล้ว การควบคุมที่ชัดเจนของ CYP1A1, CYP3A7, HMOX1 (ฮีมออกซิเดส 1), CAT (คาตาเลส) และ CES1 (คาร์บอกซีเอสเทอเรส 1) แสดงการเหนี่ยวนำของเมแทบอลิซึมระยะที่ 1 ในขณะที่การแสดงออกของ UGT1A1 (สมาชิก UDP glucuronosyltransferase แฟมิลี 1 สมาชิก A1) และ GSTP1 เพิ่มขึ้น ( กลูตาไธโอน S-transferase pi 1) บ่งชี้การเปิดใช้งานการเผาผลาญ PhaseII

สิ่งที่น่าสนใจคือ การปรับลดซัลเฟตทรานสเฟอเรส เช่น SULT1A1 (สมาชิกซัลโฟทรานสเฟอเรสแฟมิลี 1A สมาชิก 1), SULT1C2 (สมาชิกซัลโฟทรานสเฟอเรสแฟมิลี 1C สมาชิก 2) และ SULT2B1 (สมาชิกแฟมิลีซัลโฟทรานสเฟอเรส 2B 1) เสนอแนะว่าการเพิ่มความสามารถในการชอบน้ำในเมตาบอลิซึมของระยะที่ 2 มีแนวโน้มที่จะเกิดขึ้นอย่างพึงประสงค์ผ่านการควบคู่กับกรดกลูโคโรนิกและกลูตาไธโอน แต่ไม่ใช่การผันซัลเฟต (รูปที่ 4)

ผลการศึกษาการถอดเสียงค่อนข้างสอดคล้องกัน เนื่องจาก CYP1A, CYP1B, CYP3A7, GSTO1, GSTP1 และ UGT1A1 ได้รับการควบคุมที่ระดับ RNA อย่างไรก็ตาม SULT2B1 แสดงการควบคุมที่ระดับ RNA (ในขณะที่แสดงในระดับโปรตีนน้อยเกินไป)

อาจเนื่องมาจากการมีส่วนร่วมของกลไกอื่นๆ ที่ทำให้เกิดการย่อยสลายหรือการหยุดการทำงานของเอนไซม์ซัลเฟตทรานสเฟอร์เรสหลังการรักษาด้วย DEPe สิ่งที่น่าประหลาดใจเป็นพิเศษคือการเปลี่ยนแปลงการเผาผลาญของซีโนไบโอติกเกิดขึ้นในหัว (น่าจะเป็นสมอง) ของปลา การแสดงออกของยีนซีโนไบโอติกได้รับการอธิบายไว้ในระบบประสาทของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม แต่นี่เป็นรายงานครั้งแรกของพวกมันในสมองเซบีฟิช (McMillan และ Tyndale 2018)

การค้นพบนี้สอดคล้องกับการศึกษาที่คล้ายกันซึ่งดำเนินการโดย Shankar และเพื่อนร่วมงานที่ทดสอบผลกระทบของกลุ่มโพลีไซคลิกอะโรมาติกไฮโดรคาร์บอน (PAHs) ด้านสิ่งแวดล้อมกลุ่มต่างๆ ต่อการพัฒนาของตัวอ่อน และประเมินเพิ่มเติมถึงผลกระทบของแผนการรักษาแต่ละแผนต่อโปรไฟล์การถอดเสียง

ในร่างกายของตัวอ่อน hpost-fertilization (hpf) จำนวน 48 ตัว พบว่ามีการควบคุม Cyp1a ทั้งในระดับการถอดรหัสและโปรตีน เพื่อเป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่เชื่อถือได้ตั้งแต่เนิ่นๆ ของการกระตุ้น AHR ของ xenobiotic และการเปลี่ยนแปลงของการถอดรหัสแบบดาวน์สตรีม (Shankar et al. 2019)

การตอบสนองต่อความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันที่เป็นสื่อกลางของ NRF2-

ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชั่นสามารถกระตุ้นการตายของเซลล์และเนื้อร้าย และเชื่อว่าเกี่ยวข้องกับการเสื่อมของระบบประสาท (Ahmadinejad et al. 2017; Jami et al. 2014b, 2015) การตอบสนองต่อการป้องกันเซลล์ที่สำคัญต่อความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันคือการเหนี่ยวนำของสารต้านอนุมูลอิสระและเอนไซม์ล้างพิษ

ปัจจัยนิวเคลียร์-อีรีทรอยด์ 2-ปัจจัยที่เกี่ยวข้อง 2(Nrf2) จับกับโปรโมเตอร์องค์ประกอบการตอบสนองของสารต้านอนุมูลอิสระ (ARE) และกระตุ้นการถอดรหัสของพวกมัน Nrf2 ที่ไม่ใช้งานนั้นสัมพันธ์กับโปรตีน Keap1 ที่มีผลผูกพันกับแอคตินและยังคงอยู่ในไซโตพลาสซึม

เมื่อถูกกระตุ้นโดยความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชั่น Nrf2 จะถูกฟอสโฟรีเลชั่นเพื่อตอบสนองต่อโปรตีนไคเนส C, ฟอสฟาทิดิลิโนซิทอล 3-ไคเนส และวิถีทางไคเนสของ MAP จากนั้น phosphorylated Nrf2 ก็สามารถย้ายไปยังนิวเคลียสและผูก AREsto กระตุ้นการทำงานของเอนไซม์ล้างพิษและสารต้านอนุมูลอิสระ (ตารางเสริม 3) (Ma 2013)

For more information:1950477648nn@gmail.com