การวิเคราะห์องค์ประกอบและกิจกรรมทางภูมิคุ้มกันของโอลิโกแซ็กคาไรด์ที่แยกได้จาก Cistanche Deserticola

ติดต่อ: emily.li@wecistanche.com

เชิงนามธรรม.ได้โอลิโกแซ็กคาไรด์ (CDOS) จากCistanche deserticolaโดยการสกัดด้วยด่าง (pH{0}}) การตกตะกอนของเอทานอล และการแยกส่วนออกเป็นเศษส่วนที่ทำให้บริสุทธิ์สองส่วน (เช่น CDOS-1 และ CDOS-2) โดย Sephadex G-100 และโครมาโตกราฟีการกรองคอลัมน์ Sephadex G-25 องค์ประกอบโมโนแซ็กคาไรด์ของ CDOS ถูกสอบวิเคราะห์โดยโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูง (HPLC) พบว่า CDOS-1 ประกอบด้วยซูโครสเท่านั้น และ CDOS-2 ประกอบด้วยซูโครส แรมโนส และแมนนิทอลเป็นหลัก โดยมีอัตราส่วนโมล 1:0.73:3.61 การทดสอบทางภูมิคุ้มกันระบุว่า CDOS มีผลอย่างมากต่อดัชนีม้ามของเมาส์ เพิ่มกิจกรรมการฟาโกไซโตซิสของมาโครฟาจและกระตุ้นการเพิ่มจำนวนเซลล์ที่ผลิตแอนติบอดี หวังว่า CDOS จะได้รับการพัฒนาให้เป็นอาหารหรือยาที่ใช้งานได้จริง

คำสำคัญ:Cistancheทะเลทราย, โอลิโกแซ็กคาไรด์, การทำให้บริสุทธิ์, องค์ประกอบ, กิจกรรมทางภูมิคุ้มกัน

Cistanche deserticola มีเอฟเฟกต์มากมาย คลิกที่นี่เพื่อทราบข้อมูลเพิ่มเติม

1. บทนำ

CistancheDeserticola YCMa. (Family Orobanchaceae) เป็นพืชกาฝากพันธุ์สั้นที่มีถิ่นกำเนิดอยู่ทางตะวันตกเฉียงเหนือของจีน พืชแห้งทั้งต้น (ไม่มีดอก) เรียกว่า ยาชูกำลัง และเรียกว่า "รู กองกอง" ในการแพทย์แผนตะวันออก จัดว่ามีรสหวานและเค็ม อบอุ่นในธรรมชาติ และมีสาเหตุมาจากช่องไตและลำไส้ใหญ่ด้วย หน้าที่ของเติมพลังที่ไตและอาหารเสริมเอสเซ้นส์ บำรุงลำไส้ และลำไส้ที่ผ่อนคลาย [1]-[3] การศึกษาทางเภสัชวิทยาสมัยใหม่พบว่าสามารถกระตุ้นการสังเคราะห์ DNA และชะลอกระบวนการชราภาพ เพิ่มสารต้านอนุมูลอิสระ [4] ป้องกันและรักษาโรคหัวใจและหลอดเลือด [3] นอกจากนี้ยังสามารถทำให้เกิดยาแก้ปวดและต่อต้าน-อักเสบผลกระทบ [5] เสริมการเรียนรู้และความจำโดยการกระตุ้นปัจจัยการเจริญเติบโตของเส้นประสาท [6]. การศึกษาบางชิ้นระบุว่าสารสกัดจาก C. deserticola สามารถกระตุ้นการทำงานของ phagocytic ของมาโครฟาจภายในช่องท้องในหนูทดลอง [7]-[9] และปรับปรุงร่างกาย's ภูมิคุ้มกัน[10]. จากการศึกษาก่อนหน้านี้ โรงงานแห่งนี้ประกอบด้วยองค์ประกอบที่ออกฤทธิ์หลายอย่าง ซึ่งรวมถึง ฟีนิลทานอยด์ ไกลโคไซด์ อิริดอยด์ ลิกแนน แซคคาไรด์ อัลคาลอยด์ เป็นต้น [11] เช่น C.ทะเลทรายphenylethanoidไกลโคไซด์และพอลิแซ็กคาไรด์ได้รับการยอมรับว่าเป็นส่วนประกอบสำคัญ การศึกษาจำนวนมากได้มุ่งเน้นไปที่โครงสร้างและฤทธิ์ทางชีวภาพของพวกมันในช่วงทศวรรษที่ผ่านมา [12] - [17] สำหรับโอลิโกแซ็กคาไรด์ที่มีคุณค่าในค. ทะเลทรายิโคลา, รายงานค่อนข้างจำกัด Oligosaccharides ซึ่งเป็นแซ็กคาไรด์สายสั้นที่มีน้ำตาลโฮโมหรือเฮเทอโรเป็นที่รู้จักกันดีว่ามีประโยชน์ต่อชีวิตมนุษย์และมีการใช้กันอย่างแพร่หลายมาเป็นเวลานาน [18] โอลิโกแซ็กคาไรด์เชิงหน้าที่ ซึ่งมีหน้าที่ทางสรีรวิทยา เช่น การก่อมะเร็งต่ำและปัจจัยการเจริญเติบโตของไบฟิโดแบคทีเรีย [19] ช่วยปรับปรุงสุขภาพของมนุษย์และสัตว์ ได้ถูกนำมาใช้เป็นส่วนประกอบอาหาร เมื่อเร็ว ๆ นี้ มีรายงานเกี่ยวกับหน้าที่ใหม่ของโอลิโกแซ็กคาไรด์ซึ่งมีความสามารถในการปรับระบบภูมิคุ้มกันของมนุษย์ สัตว์ และปลา [20] ในบทความนี้ เรารายงานส่วนแรกของผลการวิจัยของโครงการ การแยกส่วน ของโอลิโกแซ็กคาไรด์ทั้งหมดที่ได้จากสารสกัดอัลคาไลของ C. deserticola โดยการรวมกันของอัลตราฟิลเตรชันและโครมาโตกราฟีการซึมผ่านเจล และการวิเคราะห์องค์ประกอบของพวกมันโดยโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูง (HPLC) นอกจากนี้เรายังนำเสนอกิจกรรมภูมิคุ้มกันของ C. deserticola oligosaccharides ตามความรู้ของเรา มีรายงานไม่กี่ฉบับที่ตีพิมพ์เกี่ยวกับการศึกษากิจกรรมกระตุ้นภูมิคุ้มกันของค. ทะเลทรายิโคลาโอลิโกแซ็กคาไรด์

2. ทดลอง

2.1. วัสดุ

C. deserticola ได้รับการปลูกฝังและรวบรวมจาก Alxa League (มองโกเลียใน, จีน) หนูคุนหมิง (เกรด II อายุหกสัปดาห์) ถูกซื้อจากศูนย์ทดลองเภสัชวิทยาของมหาวิทยาลัยมองโกเลียใน Sephadex G-100,Sephadex G-25, กรดไตรฟลูออโรอะซิติก (TFA), 1-ฟีนิล-3-เมทิล-5- ไพราโซโลน(PMP), D-กลูโคส, D- กาแลคโตส, D-ฟรุกโตส, D-xylose, D-mannose, กรด D-galacturonic, กรด D- กรดกลูโคโรนิก, ซูโครส, แรมโนส, แมนนิทอล, ฟูโคส, แรมโนส, ซื้อจากซิกมา (เซนต์หลุยส์, มิสซูรี, สหรัฐอเมริกา) RPMI ปานกลาง-1640 ซื้อมาจาก Gibco Invitrogen Co. (ซานดิเอโก แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา) สารเคมีอื่นๆ ทั้งหมดมีระดับการวิเคราะห์

2.2. การสกัดโอลิโกแซ็กคาไรด์

ร่างที่แห้งของ C. deserticola ถูกตัดเป็นชิ้นเล็ก ๆ และบดเพิ่มเติมเป็นผงโดยโรงสีแล้วสกัดด้วยเอธานอลปราศจากน้ำ (3×5000 มล.) ที่ 70 องศาเป็นเวลา 3 ชั่วโมงภายใต้ความกดอากาศ คอนเดนเซอร์ไหลย้อนได้รับการแก้ไขเพื่อขจัดไขมัน จากนั้นส่วนที่เหลือถูกสกัดด้วยด่าง (pH=10) ที่ 60 องศาเป็นเวลา 3 ครั้ง (2 ชั่วโมงในแต่ละครั้ง) หลังจากการปั่นเหวี่ยง (2000 กรัม เป็นเวลา 15 นาที ที่ 20 องศา ) ส่วนลอยเหนือตะกอนถูกทำให้เข้มข้นถึงหนึ่งในสิบของปริมาตรในเครื่องระเหยแบบหมุนภายใต้แรงดันที่ลดลงที่ 50 องศาและกรอง จากนั้นกรองถูกลดโปรตีนโดยใช้รีเอเจนต์ Sevag [21] และเปลี่ยนสีด้วยถ่านกัมมันต์

2.3. การแยกและการทำให้บริสุทธิ์ของโอลิโกแซ็กคาไรด์

โอลิโกแซ็กคาไรด์ที่ยังไม่ผ่านกระบวนการเยือกแข็งถูกละลายในน้ำกลั่น ปั่นเหวี่ยง จากนั้นส่วนลอยเหนือตะกอนถูกทำให้บริสุทธิ์โดยคอลัมน์ Sephadex G-100 (1×50 ซม.) ที่ปรับสมดุลด้วยน้ำบริสุทธิ์พิเศษ หลังจากการโหลดด้วยตัวอย่าง คอลัมน์ถูกชะด้วยน้ำบริสุทธิ์พิเศษที่อัตราการไหล 5 มล./นาที เก็บเศษส่วนต่างๆ โดยใช้หลอดทดลอง ปริมาณคาร์โบไฮเดรตทั้งหมดของแต่ละหลอดวัดที่ 490 นาโนเมตรโดยวิธีฟีนอล-H2SO4 [22] สารละลายที่ถูกชะด้วยน้ำถูกแยกออกเป็นสองส่วนคือ CDOS-1 และ CDO-2 สองเศษส่วนถูกทำให้บริสุทธิ์เพิ่มเติมตามลำดับบนคอลัมน์ Sephadex G-25 (2.7×85 ซม.) โดยใช้น้ำบริสุทธิ์พิเศษ (ที่อัตราการไหล 1 มล./นาที) หลังจากเก็บเศษส่วนที่บริสุทธิ์แล้ว นำไปแช่เยือกแข็ง

2.4. การวิเคราะห์องค์ประกอบโมโนแซ็กคาไรด์

องค์ประกอบมอนอแซ็กคาไรด์ของ CDO บรรลุผลได้โดยการวิเคราะห์ HPLC CDO (2 มก.) ถูกไฮโดรไลซ์ก่อนด้วยแอนไฮดรัสเมทานอลที่มี 2 โมลาร์ HCl ที่ 80 องศาเป็นเวลา 16 ชั่วโมงภายใต้บรรยากาศไนโตรเจนและจากนั้นด้วย 2 โมลาร์ TFA ที่ 120 องศาเป็นเวลา 1 ชั่วโมง หลังจากที่ TFA ถูกกำจัดออกโดยการระเหย ไฮโดรไลเสตถูกทำให้เป็นอนุพันธ์ในเวลาต่อมาด้วย PMP ตามวิธีการที่รายงาน [23] และวิเคราะห์โดย HPLC การแยก HPLC ดำเนินการบนระบบ EF-2002 HPLC (บริษัท KNAUER ประเทศเยอรมนี) อนุพันธ์ของ PMP ถูกโครมาโตกราฟีโดยใช้ปริมาตร Sugar-PAK (6.5×300 มม. บริษัทแก้วน้ำ อเมริกา) และวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 245 นาโนเมตร ปริมาตรการฉีดคือ 20µL และเฟสเคลื่อนที่ซึ่งประกอบด้วย PBS (ตัวทำละลาย A) และอะซีโตไนไตรล์ (ตัวทำละลาย B) ถูกใช้สำหรับการชะแบบไอโซเครติกที่อัตราส่วนปริมาตร 82 เปอร์เซ็นต์ (A) ถึง 18 เปอร์เซ็นต์ (B) เวลารัน HPLC ทั้งหมดคือ 40 นาที และอัตราการไหลคือ 0.5 มล./นาที

2.5. กิจกรรมทางภูมิคุ้มกัน

2.5.1. หน้าที่ Phagocytic ของ monocyte-macrophage

หนูคุนหมิง 60 ตัว (เกรด II อายุหกสัปดาห์) ถูกซื้อมาจากศูนย์ทดลองเภสัชวิทยาของมหาวิทยาลัยมองโกเลียใน และปรับตัวให้ชินกับสภาพก่อนใช้เป็นเวลา 1 สัปดาห์ หนูทั้งหมดถูกสุ่มแบ่งออกเป็นสี่กลุ่ม ซึ่งประกอบด้วยกลุ่มควบคุมน้ำเกลือ กลุ่มการให้ยา CDO สูง กลุ่มการให้ยาปานกลาง และกลุ่มการให้ยา CDO ต่ำ หนูเมาส์ถูกฉีดเข้าไปในช่องท้องด้วยสารละลายโอลิโกแซ็กคาไรด์ 0.5 มล. วันละครั้งเป็นเวลา 5 วัน กลุ่มขนาดการให้ยา CDO สูง ปานกลาง หรือต่ำได้รับ CDO 10{{10}}, 50 หรือ 25 มก./กก./BW ตามลำดับ; และฉีดน้ำเกลือ 0.5 มิลลิลิตรในกลุ่มควบคุม ในวันที่เจ็ด มีการดำเนินการทดลองการกวาดล้างอนุภาคคาร์บอนตาม Hou [24] และวัดดัชนีม้ามและดัชนีต่อมไทมัส โดยสังเขป 0.05 มล./10 ก./บาร์เรล หมึกอินเดียถูกฉีดเข้าไปในหนูเมาส์แต่ละตัวผ่านทาง vena caudalis จากนั้นได้รับเลือด 20 ไมโครลิตรจาก vena orbitalis หลัง 3 และ 7 นาทีหลังการฉีด ตัวอย่างเลือดถูกวางในหลอดที่มี Na2CO3 0.1 เปอร์เซ็นต์ 2 มล. และค่า OD ถูกวัดที่ 600 นาโนเมตร ดัชนีการกวาดล้าง (K) ดัชนีฟาโกไซติก ( ) และดัชนีอวัยวะภูมิคุ้มกันคำนวณได้ดังนี้ (1) t2 และ t1 หมายถึง 7 นาทีและ 3 นาทีตามลำดับ

2.5.2. การเพิ่มจำนวนเซลล์ที่สร้างแอนติบอดี

กลุ่มของหนูเมาส์คุนหมิง (ห้าตัวต่อกลุ่ม) ได้รับภูมิคุ้มกันโดยการฉีดเข้าช่องท้องของ 2 x 107 SRBC ใน 1.0 มล. ของ PBS ที่เติมด้วยวัสดุทดสอบ 50 ไมโครกรัม (ไม่มีในกลุ่มควบคุม) หนึ่งสัปดาห์ต่อมา เซลล์ม้าม (106 เซลล์ต่อ 2 มล. ต่อหลุม) จากหนูเมาส์คุนหมิงถูกเพาะเลี้ยงโดยมีหรือไม่มีวัสดุทดสอบเป็นเวลา 72 ชั่วโมงในตัวกลาง RPMI 1640 10 เปอร์เซ็นต์ภายใต้คาร์บอนไดออกไซด์ 5 เปอร์เซ็นต์ในอากาศ เพิ่มเป็นสามเท่าสำหรับแต่ละวัฒนธรรม กำหนดจำนวนของ PFC เทียบกับ SRBC ต่อเซลล์ม้าม 106 เซลล์ [25], [26]

2.6. การวิเคราะห์ทางสถิติ

ข้อมูลถูกแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ±SD ความแตกต่างระหว่างกลุ่มทดสอบและกลุ่มควบคุมถูกวิเคราะห์โดยการทดสอบ t ของนักเรียน P < 0.05="">

3. ผลลัพธ์และการอภิปราย

3.1. การแยกและการทำให้บริสุทธิ์ของโอลิโกแซ็กคาไรด์

CDO ถูกแยกออกจากสารสกัดอัลคาไลของวัตถุแห้งของ C. deserticola โดยผลผลิต 3.07 เปอร์เซ็นต์ เศษส่วนของ CDOS-1 และ CDOS-2 สองส่วนแยกจากสารชะน้ำกลั่นโดยคอลัมน์ Sephadex G-100 ตามลำดับ (รูปที่ 1) เศษส่วนที่บริสุทธิ์ของ CDOS-1 และ CDOS-2 แสดงพีคเดียวในคอลัมน์ Sephadex G-25 ซึ่งบ่งชี้ว่าไม่มีโอลิโกแซ็กคาไรด์อื่นอยู่ในตัวอย่าง ผลลัพธ์ขององค์ประกอบโมโนแซ็กคาไรด์พบว่า CDOS-1 ประกอบด้วยซูโครสเท่านั้น (รูปที่ 2) และ CDOS-2 ประกอบด้วยซูโครส แรมโนส และแมนนิทอลเป็นหลัก (รูปที่ 3) โดยมีอัตราส่วนของโมล จาก 1:0.73:3.61

3.2. กิจกรรมทางภูมิคุ้มกันของ CDOs

หลักฐานในหลอดทดลองและในหลอดทดลองจำนวนมากได้แสดงให้เห็นว่าโอลิโกแซ็กคาไรด์ตามธรรมชาติแสดงการทำงานของภูมิคุ้มกันโดยกระตุ้นทั้งเซลล์และร่างกายมีภูมิคุ้มกัน คำตอบ[27], [28]. ในบทความนี้ 100 mg/kg/BW CDOs เพิ่มดัชนีม้ามของเมาส์ แต่ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในดัชนีต่อมไทมัสระหว่างกลุ่มที่บำบัดและกลุ่มควบคุม (ตารางที่ 1) มาโครฟาจเป็นองค์ประกอบสำคัญของการป้องกันโฮสต์จากการติดเชื้อไวรัสโดยการยับยั้งการจำลองแบบภายในเซลล์ของไวรัสและโดยการฆ่าเซลล์ที่ติดไวรัส [29] เมื่อถูกกระตุ้น สารตัวกลางของออกซิเจนหรือไนโตรเจนและไซโตไคน์หลายชนิดจะถูกปลดปล่อยจากมาโครฟาจและมีส่วนร่วมในการทำงานทางชีววิทยาที่สำคัญต่างๆ เช่น ฤทธิ์ต้านการอักเสบและต้านเนื้องอก [30]- [32] ดังนั้นกิจกรรม phagocytic ของแมคโครฟาจจึงเป็นตัวบ่งชี้ที่สำคัญของการทำงานของภูมิคุ้มกันของร่างกาย ในการศึกษานี้ ปริมาณ CDO ในระดับปานกลางและสูงช่วยเพิ่มกิจกรรมการทำลายเซลล์ของเซลล์มาโครฟาจ (ตารางที่ 1) การเพิ่มจำนวนเซลล์ที่สร้างแอนติบอดีที่เหนี่ยวนำโดย CDO ได้รับการศึกษาโดยการตรวจสอบการเพิ่มขึ้นของ hemolytic PFC ในม้ามของหนูคุนหมิงซึ่งได้รับภูมิคุ้มกันด้วย SRBC บวกกับตัวอย่างทดสอบ ผลการวิจัยพบว่า CDO ขนาดปานกลางและสูงช่วยเพิ่มจำนวนเซลล์ที่สร้างแอนติบอดีได้อย่างมีนัยสำคัญ (ตารางที่ 2) CDO ปริมาณสูงทำให้จำนวน PFC เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (P <>

อ้างอิง

[1] J. Li, Y. Jiang, R. Fan. การรับรู้สัญญาณชีวภาพแบบผสมตามการวิเคราะห์เวฟเล็ต ใน: Y. Jiang, et al (eds). Proc. ของการประชุมเชิงปฏิบัติการวิศวกรรมกีฬาสหราชอาณาจักร-จีน ลิเวอร์พูล: สหพันธ์วิชาการโลก. 2550 หน้า 1-8.

[2] J. Ouyang, XD Wang, B. Zhao และอื่น ๆ ผลของธาตุหายากต่อการเจริญเติบโตของเซลล์ Cistanche Deserticola และการผลิตฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ เจบี ไอโอเทค, 2003, 102 (2) : 129-134

[3] Xu Zhaohui, Yang Junshan, Lu Ruimian, และคณะ ผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติใหม่จาก Cistanche Deserticola YCMA วารสารวิทยาศาสตร์เภสัชกรรมจีน, 1999, 8(2):61-63.

[4] X. Wang, L. Li, Muhuyati, X. Wanag, N. Du. ฤทธิ์ต้านออกซิเดชันของไกลโคไซด์ของ Cistanche ในเนื้อเยื่อของหนู จงกั๋วจงเหยาซาจื่อ. 1998, 23(9):554-5.

[5] Lin LW, Hsieh MT, Tsai FH, Wang WH, Wu CR Anti-nociceptive และต้านการอักเสบที่เกิดจาก Cistanche Deserticola ในหนู เจ เอธโนฟาร์มาคอล. 2002, 83(3):177-82.

[6] ชอย เจจี; มูน, เอ็ม; จอง, ฮู; คิม เอ็มซี; คิม, SY; โอ้ MS Cistanches Herba ช่วยเพิ่มการเรียนรู้และความจำโดยการกระตุ้นปัจจัยการเจริญเติบโตของเส้นประสาท การวิจัยพฤติกรรมสมอง. 2011, 216 (2): 652–8.

[7] Zong G, He W, Wu G, Chen M, Shen X, Shi M. การเปรียบเทียบระหว่าง Cistanche deserticola YC Ma และ C, tubulosa (Shenk) Wight เกี่ยวกับการดำเนินการทางเภสัชวิทยาบางอย่าง Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 1996, 21(7):436-7.

[8] He W, Shu XF, Zeng GZ และอื่น ๆ การศึกษาการเสริมสมรรถภาพทางเพศของ C. deserticola เจ ชิน เมด. 1996, 21(9): 534- 537.

[9] Zeng GZ, He W, Wu GL และอื่น ๆ การเปรียบเทียบระหว่างน้ำหนัก Cistanche deserticola YC Ma และ C.tubulosa กับการดำเนินการทางเภสัชวิทยาบางอย่าง เจ ชิน เมด 1996, 21(7): 436-438.

[10] Zeng QL, Zheng YF, Lu ZL Immunomodulatory effects ของโพลีแซ็กคาไรด์ของ Cistanche deserticola YC Ma. มหาวิทยาลัยเจเจ้อเจียง แพทยศาสตร์บัณฑิต 2002, 31(4): 284- 287.

[11] หลี่ หยวน ซ่ง หยวนหยวน จาง หงฉวน ความก้าวหน้าในการวิจัยองค์ประกอบทางเคมีและฤทธิ์ทางยาของ Cistanche ทรัพยากรพืชป่าของจีน, 2010, 29(1):7-11.

[12] Du NS, วัง H, Yi YH. การแยกและการระบุฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์จาก Cistanche deserticola Nat Prod R & D, 1993, 5(4): 5- 8.

[13] Lu NS, Liu JL การหาค่า phenylethanoid glycosides ใน Cistanche deserticola โดย macro reticular resin- spectrophotometry Nat Prod R & D, 1993, 5(3): 30-33.

[14] Xiong QB, Tezuka Y, Kaneko T และอื่น ๆ การยับยั้งไนตริกออกไซด์โดยฟีนิลเลธานอยด์ในมาโครฟาจที่กระตุ้น

European Journal of Pharmacology, 2000, 400: 137- 144.

[15] Zhao Wei, Yan Hong, Liang Zhong-Yan, และคณะ การวิเคราะห์โครงสร้างของ Polysaccharide SPA ที่ละลายในน้ำที่แยกได้จากลำต้นของ Cistanche Deserticola Ma วารสารเคมีของมหาวิทยาลัยจีน, 2005, 26(3):461-463.

[16] หวังเซียงเอี้ยน. การศึกษาเภสัชวิทยาภูมิคุ้มกันและลักษณะการดูดซึมของพอลิแซ็กคาไรด์ของ Cistanche deserticola 2011, No.S1, Medicine and Health Sciences, E057-235-1-70.

[17] Xiong Q, Hase K, Tezuka Y, Tani T, Namba T, Kadota S. กิจกรรม Hepatoprotective ของ phenylethanoids จาก Cistanche deserticola แพลนตา เมด. 1998, 64(2):120-5.

[18] คู่มืออะไมเลสและเอนไซม์ที่เกี่ยวข้อง (ed. โดย The Amylase Research Society of Japan), Pergamon Press (1988)

[19] Araya, S. (ed.) Proceedings of the 5th Conference on Dental Caries and Coupling Sugar (ในภาษาญี่ปุ่น), National Institute of Health, Tokyo (1980)

(20) โคโดะ โอตากะ. Oligosaccharide ที่ใช้งานได้จริงและมุมมองใหม่ในด้านการปรับภูมิคุ้มกัน เจ. ไบโอล. แมคโครโมล 2549, 6(1), 3-9.

[21] Navarini L, Gilli R, Gombac V, Abatangelo A, Bosco M, Toffanin R. Polysaccharides จากน้ำร้อนที่สกัดจากเมล็ดกาแฟอาราบิก้าคั่ว: การแยกตัวและลักษณะเฉพาะ คาร์โบไฮเดรต โพลีม 1999, 40:71–81.

[22] Dubois M, Gilles KA, Hamilton JK, Rebers PA, Smith F. Colorimetric method สำหรับการกำหนดน้ำตาลและสารที่เกี่ยวข้อง ก้น เคมี. 2499, 28:350–356.

[23] Yang X, Zhao Y, Wang Q, Wang H, Mei Q. การวิเคราะห์ส่วนประกอบโมโนแซ็กคาไรด์ใน Angelica polysaccharides โดยโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูง ก้นวิทย์. 2548, 21:1177–1180.

[24] Yufang Hou, Yubao Hou, Liu Yanyan, และคณะ การสกัดและทำให้บริสุทธิ์ของเลกตินจากถั่วแดงและการศึกษาการทำงานของภูมิคุ้มกันเบื้องต้นของเลคตินและโพลิแซ็กคาไรด์สมุนไพรจีนสี่ชนิด วารสารชีวการแพทย์และเทคโนโลยีชีวภาพ, 2010:1-9.

[25] คันนิงแฮม เอเจ และเอ เซนเบิร์ก การปรับปรุงเพิ่มเติมในเทคนิคของคราบจุลินทรีย์สำหรับการตรวจหาเซลล์ที่สร้างแอนติบอดีเดี่ยว ภูมิคุ้มกันวิทยา.1968, 14:599-600.

[26] ฮารุฮิโกะ ทาคาดะ, โทโมฮิโกะ โอกาวะ, ฟุมิโนบุ โยชิมูระ, และคณะ กิจกรรมทางภูมิคุ้มกันของเศษ Porin ที่แยกได้จาก Fusobacterium nucleatum ATCC 10953 [J] การติดเชื้อและภูมิคุ้มกัน 2531, 56(4): 855-863.

[27] Wang MQ, Guilbert LJ, Ling L, Li J, Wu YQ, Xu SR, Pang P, Shan JJ Immunomodulating activity of CVT- E002: สารสกัดที่เป็นกรรมสิทธิ์จากโสมอเมริกาเหนือ (Panax quinque folium) เจ Pharm Pharmacol.2001, 53:1515–1523.

[28] Nergard CS, Kiyohara H, Reynolds JC, Thomas-Oates JE, Matsumoto T, Yamada H, Patel T, Petersen D, Michaelsen TE, Diallo D, Paulsen BS โครงสร้างและความสัมพันธ์เชิงโครงสร้าง-กิจกรรมของสามไมโทจีนิกและการตรึงส่วนเสริม pectic arabinogalactans จากพืช antiulcer ของ Malian Cochlospermum tinctorium A. Rich และ Vernonia kotschyana Sch Bip อดีต Walp ชีวโมเลกุล 2549, 7:71–79.

[29] อี.-เอ็ม. ชอย, อ.-เจ. คิม, วาย.-โอ. คิม และ เจ.เค. Hwang ฤทธิ์กระตุ้นภูมิคุ้มกันของ Arabinogalactan และ Fucoidan ในหลอดทดลอง วารสารอาหารสมุนไพร. 2005, 8(4):446–453.

[30] ย. เฉิน, เจ.-เอ. Duan, D. Qian, และคณะ การประเมินและการเปรียบเทียบกิจกรรมภูมิคุ้มกันของเศษส่วนที่ละลายน้ำได้ 4 ส่วนของ Angelica Sinensis ในหลอดทดลอง กับมาโครฟาจในช่องท้องในหนูทดลอง ICR อิมมูโนเภสัชวิทยานานาชาติ 2010, 10:422–430.

[31] YS Lee, OK Han, CW Park และอื่น ๆ การแสดงออกของยีน cytokine ที่ทำให้เกิดการอักเสบและการควบคุมไนตริกออกไซด์ของ Astragali radix ที่สกัดด้วยน้ำในเซลล์มาโครฟาจ RAW 264.7 วารสารชาติพันธุ์วิทยา. 2005, 100(3): 289–294.

[32] KY ลี และ YJ จอน โพลีแซ็กคาไรด์ที่แยกได้จาก Poria cocos sclerotium กระตุ้นการกระตุ้น NF-κB/ Rel และการแสดงออกของ iNOS ในมาโครฟาจของหนู อิมมูโนเภสัชวิทยานานาชาติ 2003, 3(10-11):1353–1362.