Cistanche Tubulosa กระตุ้นการตายของเซลล์โดยอาศัยออกซิเจนชนิดปฏิกิริยาของเซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่ของมนุษย์ระยะปฐมภูมิและระยะแพร่กระจาย

การแนะนำ

มะเร็งลำไส้ใหญ่และทวารหนักเป็นหนึ่งในมะเร็งที่พบบ่อยที่สุดทั่วโลก (Brennerและคณะ, 2014) และอุบัติการณ์ของมันเพิ่มขึ้นอย่างต่อเนื่อง โดยมีผู้ป่วยประมาณ 2.4 ล้านรายในปี 2035 เนื่องจากการรับประทานอาหารและวิถีชีวิตสมัยใหม่ ควบคู่ไปกับการออกกำลังกายที่ลดลง ความพยายามในปัจจุบันไม่เพียงพอที่จะต่อสู้กับการแพร่ระบาดของมะเร็งลำไส้ใหญ่ในปัจจุบัน ดังนั้นแนวทางใหม่จึงมีความจำเป็นสำหรับการป้องกันและการรักษาที่มีประสิทธิผล รวมถึงการเปลี่ยนแปลงวิถีชีวิตร่วมกับมาตรการทางเลือกที่ปลอดภัยกว่า เช่นPhytotherapeutics (ไวด์เนอร์และคณะ, 2558). Phytotherapy ซึ่งเป็นการใช้พืชสมุนไพรในการรักษาโรคถือเป็นส่วนหนึ่งที่หลีกเลี่ยงไม่ได้ในประวัติศาสตร์ของมนุษย์สมัยโบราณ พืชสมุนไพรถูกนำมาใช้เป็นแหล่งรักษาทางเลือกสำหรับโรคมะเร็งมายาวนาน โดยคิดเป็นมากกว่าร้อยละ 60 ของสารต้านมะเร็งที่ใช้ในการแพทย์แผนปัจจุบัน (Balunas และ Kinghorn, 2005; Saibuและคณะ, 2558). ตัวอย่างที่รู้จักกันดี ได้แก่ สารสกัดจากCatharanthus roseusก.ดอน. (Apocynaceae), Taxus baccata L. (Taxaceae) และ Camptotheca acuminate Decne (Nyssaceae) (Cragg and Newman, 2005; da Rochaและคณะ, 2544) สารสกัดจากสมุนไพรและสารพฤกษเคมีหลายชนิดแสดงให้เห็นว่ามีฤทธิ์ต้านมะเร็งในมะเร็งลำไส้ใหญ่อันเนื่องมาจากการเหนี่ยวนำการผลิตออกซิเจนชนิดปฏิกิริยา (ROS) และการตายของเซลล์มะเร็งที่เกี่ยวข้อง ดังในกรณีของสารสกัดจากเมลิสซา officinalis(ไวด์เนอร์และคณะ, 2015)

ในบรรดาผู้ที่เข้ารับการบำบัดด้วยพืชบำบัดCistanche ทูบูโลซาซึ่งเป็นพืชทะเลทรายปรสิต Orobanchaceae (Jiang et al., 2009) ซึ่งมีการแพร่กระจายอย่างกว้างขวางในพื้นที่แห้งแล้งและกึ่งแห้งแล้งของแอฟริกา เอเชีย และภูมิภาคเมดิเตอร์เรเนียน แสดงให้เห็นว่ามีคุณสมบัติทางยาที่มีคุณค่า Cistanche tubulosa ถูกนำมาใช้อย่างแพร่หลายในการแพทย์แผนโบราณ และแนะนำว่ามีผลในการรักษาโรคไตบกพร่อง ตกขาวผิดปกติ โรคท้องร่วง ภาวะมีบุตรยากในสตรี และท้องผูกในวัยชรา (Jiang et al., 2009) นอกเหนือจากการใช้ยาแผนโบราณแล้ว ยาที่สำคัญยังมีความสำคัญอีกด้วย คุณสมบัติของ Cistanche Tubulosa ได้รับการศึกษาอย่างเข้มข้นในช่วงทศวรรษที่ผ่านมา รวมถึง vasorelaxant (Yoshikawa et al., 2006), hepatoprotective (Morikawa et al, 2010), anti-hyperglycemic และ hypolipidemic (Xiong et al., 2013) นอกจากนี้ Cistanche Tubulosa ยังได้รับการแนะนำว่าเป็นตัวเสริมศักยภาพของระบบภูมิคุ้มกัน โปรโมเตอร์การสร้างกระดูก และสารต่อต้านริ้วรอยและต่อต้านความเหนื่อยล้า (Xu et al., 2014) นอกจากนี้ สารสกัด Cistanche tubulosa ยังแสดงให้เห็นว่าสามารถป้องกันการสะสมของอะไมลอยด์ในแบบจำลองโรคอัลไซเมอร์ได้ (Wu et al., 2015) แม้จะมีการใช้รักษาโรคที่หลากหลาย แต่ยังไม่มีการศึกษาผลของ Cistanche Tubulosa ในฐานะสารต้านมะเร็งที่มีศักยภาพ

ในงานปัจจุบัน เราได้ตรวจสอบผลต้านมะเร็งของ Cistanche Tubulosa ในเซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่ระยะลุกลามสองสายหลักและสองสาย และกลไกที่เป็นไปได้ที่เป็นรากฐานของผลกระทบนี้

CISTANCHE TUBULOSA ธรรมชาติสำหรับการปรับปรุงการทำงานทางเพศ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

วัสดุและวิธีการ

การรวบรวมและการเตรียมสารสกัดจากพืช

ตัวอย่างของ Cistanche tubulosa ถูกเก็บมาจากพื้นที่ทะเลทรายในกาตาร์ในปี 2014 และได้รับการยืนยันความถูกต้องโดยนักสมุนไพรศาสตร์ ตัวอย่างบัตรกำนัลจะถูกเก็บไว้ในแผนกพิษวิทยาและอเนกประสงค์ที่ ADLQ ตัวอย่างพืชตากแห้งบดด้วย Retsch Knife Mill Grindomix GM300 ให้เป็นผงละเอียด สกัดผงยี่สิบกรัมด้วยน้ำบริสุทธิ์พิเศษ 200 มิลลิลิตรข้ามคืนที่ 37 องศาบนเครื่องปั่นแบบหมุนที่ 200 รอบต่อนาที น้ำมันดิบสารสกัดจากซิสแทนช์ทูบูโลซา (CTE)ถูกปั่นแยกเป็นเวลา 30 นาทีที่ 8000 รอบต่อนาที เพื่อให้ได้สารประกอบที่ไม่ละลายน้ำแบบเป็นเม็ด เก็บส่วนเหนือตะกอนและทำแห้งแบบเยือกแข็งโดยใช้ Labconco Freezone 6 plus Freeze dryer สารสกัดแห้งถูกสร้างขึ้นใหม่ใน Modified Eagle's Medium (DMEM, SIGMA, Germany) ของ Dulbecco ให้มีความเข้มข้น 20 มก./มล. และกรองแบบปลอดเชื้อผ่านตัวกรองเมมเบรนขนาด 0.2- ไมครอน

เส้นเซลล์และการบำรุงรักษาเซลล์

เซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่ของมนุษย์ได้รับ CaCo2, SW620 และ LoVo จาก Cell Lines Service (CLS, Eppelheim ประเทศเยอรมนี) ในขณะที่เซลล์ HCT 116 เป็นของขวัญที่ดีจากภาควิชาวิทยาศาสตร์ชีวภาพและสิ่งแวดล้อม แผนกที่มหาวิทยาลัยกาตาร์ CaCo2 และ HCT11 มาจากตำแหน่งหลักของมะเร็งลำไส้ใหญ่ ในขณะที่ SW620 และ LoVo มาจากตำแหน่งแพร่กระจาย เซลล์ SW620, HCT116 และ LoVo ได้รับการเพาะเลี้ยงและดูแลรักษาใน DME Medium ในขณะที่เซลล์ CaCo2 ได้รับการบำรุงรักษาในสื่อขั้นต่ำที่จำเป็นของ Eagle (EMEM, SIGMA, Germany) เซลล์ถูกเลี้ยงในลักษณะชั้นเดียวเพาะเลี้ยงที่ 37 องศาในอาหารตามลำดับที่เสริมด้วยซีรั่มของวัวในครรภ์ 10% (FBS, SIGMA, เยอรมนี) และ 1% เพนิซิลลิน/สเตรปโตมัยซิน (SIGMA, เยอรมนี) ในบรรยากาศที่มีความชื้นซึ่งมีคาร์บอนไดออกไซด์ 5%

การทดสอบความมีชีวิตของเซลล์

การสอบวิเคราะห์ {{0}}[4,5-ไดเมทิลไทอาซอล-2-อิล]-2,5-ไดฟีนิลเตตราโซเลียม (MTT) ถูกนำมาใช้เพื่อประเมินฤทธิ์ที่เป็นพิษต่อเซลล์ของ CTE ในทำนองเดียวกันตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Jaganjac et al., 2010) ความหนาแน่นของการเพาะของเซลล์ CaCo2, HCT116, SW620 และ LoVo ที่เพาะเลี้ยงในเพลตของหลุม 96- คือ 104 เซลล์ต่อหลุม เซลล์ถูกเพลตในตัวกลางตามลำดับที่เสริมด้วย 10% FBS 24 ชั่วโมงก่อนการบำบัด หลังจาก 24 ชั่วโมง ตัวกลางถูกดึงออกและเซลล์ถูกบำบัดด้วย CTE 0, 0.25, 0.5, 1 และ 2 มก./มล. เป็นเวลา 24, 48 และ 72 ชั่วโมงที่ 37 องศา ในบรรยากาศที่มีความชื้นซึ่งประกอบด้วย 5% CO2 ตามการบำบัดด้วย CTE ตัวกลางถูกกำจัดออกและสารละลาย MTT 40 ไมโครลิตร (0.5 มก./มล.) ถูกเติมลงในแต่ละหลุม

หลังจากการบ่มเป็นเวลา 3 ชั่วโมง สารละลาย MTT จะถูกลบออก ผลิตภัณฑ์ฟอร์มาซานละลายในไดเมทิลซัลฟอกไซด์ (DMSO, SIGMA, เยอรมนี) และวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 590 นาโนเมตรด้วยเครื่องอ่านไมโครเพลท (Infinite 200 PRO NanoQuant, Tecan Trading AG, สวิตเซอร์แลนด์) .

การทดสอบการตายของเซลล์

ตรวจพบการตายของเซลล์ใน CaCo2, HCT116, SW620 และเซลล์ LoVo โดยใช้ชุดตรวจหาการตายของเซลล์ PE Annexin V I โดยมี 7-Amino-Actinomycin D (7-AAD) เป็นสีย้อมสำคัญ (เบคตัน Dickinson International, เบลเยียม) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต โดยสรุป เซลล์ถูกเพาะในเพลตหลุม 24- ที่ความหนาแน่น 5×104 เซลล์/หลุมในตัวกลางตามลำดับที่เสริมด้วย 10% FBS เป็นเวลา 24 ชั่วโมงก่อนการเติม CTE (0, 0.5 หรือ 1 มก./มล.) หลังจากการฟักตัวด้วย CTE 24 ครั้ง เซลล์ถูกเก็บเกี่ยว ล้างสองครั้งด้วยน้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟตเย็น และย้อมด้วยไฟโคเอรีทริน (PE) แอนเนกซิน V และ 7-AAD เป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิห้องในที่มืด เซลล์ที่เปื้อนถูกวิเคราะห์ภายใน 1 ชั่วโมงโดยโฟลว์ไซโตเมทรีโดยใช้ FACS โฟลว์ไซโตมิเตอร์ Aria III และซอฟต์แวร์ FACSDiva (Becton Dickinson) ที่อัตราการไหลต่ำโดยมีเซลล์อย่างน้อย 104 เซลล์ การบำบัดเซลล์เป็นเวลา 4 ชั่วโมงด้วยแคมป์โทเทซิน 6 ไมโครโมลาร์ (SIGMA) ถูกใช้เป็นกลุ่มควบคุมเชิงบวกสำหรับการสอบวิเคราะห์

การผลิต ROS ภายในเซลล์

ตรวจสอบการผลิต ROS ในเซลล์โดยใช้ 2,7- ไดคลอโรไดไฮโดรฟลูออเรสซิน ไดอะซิเตต (DCFH-DA, SIGMA, เยอรมนี) DCFH-DA เป็นโพรบที่ไม่เรืองแสง ซึ่งถูกออกซิไดซ์ด้วย ROS ภายในเซลล์กับสารประกอบฟลูออเรสเซนต์ 2,7- ไดคลอโรฟลูออเรสเซน (DCF) (Poljak-Blazi et al., 2011) การทดสอบ DCFH DA ดำเนินการในลักษณะเดียวกับที่เราได้อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Cindric et al, 2013; Poljak-Blazi et al., 2011) โดยสรุป ความหนาแน่นของการเพาะของเซลล์ CaCo2, HCT116, SW620 และ LoVo ที่เพาะเลี้ยงในเพลตสีดำของหลุม 96- คือ 104 เซลล์ต่อหลุม เซลล์ถูกเพลตในตัวกลางตามลำดับที่เสริมด้วย 10% FBS เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ก่อนเซลล์บำบัดถูกบ่มด้วย 10 ไมโครโมลาร์ DCFH-DA ที่ 37 องศาเป็นเวลา 30 นาทีในอากาศ 5% CO2 / 95% จากนั้นเซลล์ถูกล้างและบำบัดด้วย CTE 0, 0.5 และ 1 มิลลิกรัม/มิลลิลิตรในตัวกลางที่ไม่มีฟีนอลเรด การก่อตัวของ ROS ในเซลล์ได้รับการตรวจสอบอย่างต่อเนื่องตลอด 25 ชั่วโมงที่ 37 องศาและ CO2 5% โดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลทที่มีโมดูลเรืองแสงและควบคุมก๊าซด้านบน (Infinite 200 PRO, Tecan Trading AG, สวิตเซอร์แลนด์) วัดความเข้มของฟลูออเรสเซนซ์ด้วยความยาวคลื่นการกระตุ้น 500 นาโนเมตร และการตรวจจับการปล่อยก๊าซที่ 529 นาโนเมตร หน่วยตามอำเภอใจ หรือหน่วยเรืองแสงสัมพัทธ์ (RFU) จะขึ้นอยู่กับความเข้มของฟลูออเรสเซนซ์โดยตรง

ถังเก็บน้ำธรรมชาติ TUBULOSA สำหรับการปรับปรุงการทำงานของไต PHGS75% ECH 30% ACT 12%

การสร้างไมโตคอนเดรียซูเปอร์ออกไซด์

ความสามารถของ CTE ในการกระตุ้นการสร้างซูเปอร์ออกไซด์โดยไมโตคอนเดรียได้รับการประเมินโดยใช้ MitoSOX Red Probe (Life Technologies) ที่เซลล์ซึมผ่านได้ และมีเป้าหมายเป็นไมโตคอนเดรีย และ Hoechst 33342 สำหรับการย้อมสีด้วยนิวเคลียร์ (Life Technologies) เซลล์ CaCo2, HCT116, SW620 และ LoVo ถูกเพาะในเพลตหลุม 96- ที่ความหนาแน่น 10 4 เซลล์ต่อหลุมในตัวกลางตามลำดับที่เสริมด้วย 10% FBS เป็นเวลา 24 ชั่วโมง . จากนั้นเซลล์ถูกโหลดด้วย MitoSOX 4 µM และ Hoechst 33342 2 µM เป็นเวลา 20 นาที, สีย้อมส่วนเกินถูกล้าง และบำบัดหลุมด้วย CTE 0, 0.5 และ 1 มก./มล. เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่ 37 องศาและ 5% CO2 ความเข้มของฟลูออเรสเซนซ์ถูกวัดด้วยความยาวคลื่นการกระตุ้นที่ 510 นาโนเมตร และการตรวจจับการปล่อยก๊าซที่ 580 นาโนเมตรสำหรับ MitoSOX และความยาวคลื่นการกระตุ้นที่ 350 นาโนเมตร และการตรวจจับการปล่อยก๊าซที่ 461 นาโนเมตรสำหรับ Hoechst 33342 โดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลทที่มีการเรืองแสงด้านบน (Infinite 200 PRO, Tecan Trading เอจี สวิตเซอร์แลนด์)

การวิเคราะห์ทางสถิติ

สถิติเชิงพรรณนาแสดงเป็นค่าเฉลี่ย +/− SD ประเมินความสำคัญของความแตกต่างระหว่างกลุ่มโดยใช้การทดสอบ Student t-test และ Chi-square เมื่อเปรียบเทียบมากกว่าสองกลุ่ม เราใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนด้านเดียวกับการทดสอบหลังการทดสอบที่เหมาะสม มีการใช้ SPSS 11.01 สำหรับ Mircosoft Windows ความแตกต่างโดย P น้อยกว่า 0.05 ถือว่ามีนัยสำคัญทางสถิติ

ผลลัพธ์

ผลของ CTE ต่อการเพิ่มจำนวนของเซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่ของมนุษย์แสดงไว้ในรูปที่ 1 ความเข้มข้นของ CTE ทั้งหมดที่ทดสอบแสดงให้เห็นผลการยับยั้งที่รุนแรงต่อเซลล์ CaCo2 ในลักษณะความเข้มข้นและขึ้นอยู่กับเวลา (รูปที่ 1A) การรักษาด้วย CTE เจ็ดสิบสองชั่วโมงยับยั้งการเจริญเติบโตของเซลล์ CaCo2 มากกว่า 60% เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม (p < 0.05 สำหรับความเข้มข้นทั้งหมด) ผลกระทบที่มีนัยสำคัญของการบำบัดด้วย CTE ต่อการเติบโตของเซลล์ HCT116 ยังถูกตรวจพบที่จุดตลอดเวลาที่ความเข้มข้นสูงสุดสองแห่ง (1 มก./มล. และ 2 มก./มล.) ซึ่งลดลงมากกว่า 70% ที่ความเข้มข้นหลัง (รูป 1B, p < 0.05) แม้ว่าความเข้มข้นของ CTE ที่ต่ำกว่าทั้งสอง (0.25 และ 0.5 มก./มล.) จะลดการเจริญเติบโตของเซลล์ HCT116 อย่างมีนัยสำคัญหลังจาก 24 ชั่วโมง (p<0.05), they had no significant effect following 72 hours of treatment compared to control (p>{{0}}.{{10}}5) การยับยั้งการแพร่กระจายที่ขึ้นกับเวลาและความเข้มข้นด้วย CTE ได้รับการยืนยันเพิ่มเติมในเซลล์ LoVo มากกว่า 60% ที่ความเข้มข้นสูงสุด (p < 0.05) (รูปที่ 1C) และความเข้มข้นของ CTE ทั้งสี่ที่ทดสอบลดการเติบโตของเซลล์ SW620 หลังจาก 48 ชั่วโมง (รูปที่ 1D, p < 0.05 สำหรับทั้งหมด) หลังการรักษา 72 ชั่วโมง พบผลเดียวกันเฉพาะกับความเข้มข้นสูงสุดสองค่าเท่านั้น (p < 0.05) ในขณะที่ความเข้มข้น 0.25 และ 0.5 มก./มล. ไม่แสดงผลที่มีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม (p > 0.05) ผลกระทบของการบำบัด CTE 0.5 และ 1 มก./มล. ต่อการเหนี่ยวนำการตายของเซลล์ได้รับการทดสอบเพิ่มเติมในสายพันธุ์เซลล์ทั้งสี่ (รูปที่ 2) จำนวนเซลล์ที่เพิ่มขึ้นในการตายของเซลล์ระยะแรกถูกตรวจพบใน HCT116 และ LoVo หลังการบำบัด 24- ชั่วโมงด้วย 0.5 มก./มล. (p<0.05, Figure 2B and 2C) and in all cell lines at 1 mg/mL (p<0.05). A significant increase in necrotic or late apoptotic cell number was further observed in CaCo2 and SW620 cell lines (p<0.05, Figure 2A and 2D). The ability of CTE to induce intracellular ROS production is demonstrated in Figure 3. Three hours following CTE treatment there was a strong increase in intracellular ROS production in all cell lines (p<0.05). The intracellular ROS production increased progressively throughout the 25 hours of treatment in a time and concentration-dependent manner. Furthermore, the staining of cells with a mitochondria-targeted probe revealed a strong impact of CTE on mitochondrial superoxide production in a concentration-dependent manner (Figure 4). The highest increase in superoxide production by mitochondria was observed in HCT116 (69%, Figure 4B) and LoVo cells (82%, Figure 4C) following 24-hour treatment with 1 mg/mL of CTE.

รูปที่ 1:ผลของCistanche tubulosaต่อการมีชีวิตของเซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่ ความมีชีวิตของเซลล์ที่วัดโดยการทดสอบ MTT ของ (A) CaCo2, (B) HCT116, (C) LoVo และ (D) SW620 เซลล์แสดงเป็นเปอร์เซ็นต์ของเซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่ที่ไม่ได้รับการรักษาแบบควบคุม ค่าเฉลี่ย (± SD) สำหรับ 5 ซ้ำของการทดสอบตัวแทนจะได้รับ: (*) นัยสำคัญ p<0.05 in comparison to control untreated respective cells.

รูปที่ 2: สารสกัดจากน้ำ Cistanche tubulosa ทำให้เกิดการตายของเซลล์ในเซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่ของมนุษย์ การวิเคราะห์โฟลว์ไซโตเมทรีของ Annexin-V-FITC ของ (A) CaCo2, (B) HCT116, (C) LoVo และ (D) SW620 เซลล์แสดงเป็นเปอร์เซ็นต์ของเซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่ที่ไม่ได้รับการรักษาแบบควบคุม ค่าเฉลี่ย (± SD) สำหรับ 3 ซ้ำของการทดสอบตัวแทนจะได้รับ: (*) นัยสำคัญ p<0.05 in comparison to control untreated respective cells.

รูปที่ 3: สารสกัดจากน้ำ Cistanche tubulosa กระตุ้นการผลิต ROS ภายในเซลล์ตามเวลาและปริมาณรังสี การผลิต ROS ที่วัดโดยการทดสอบ DCFH-DA ใน ( A ) CaCo2, ( B ) HCT116, ( C ) LoVo และ ( D ) เซลล์ SW620 แสดงเป็นค่า RFU เฉลี่ย (± SD) สำหรับ 5- ซ้ำของ การทดลองตัวแทน (*) ความสำคัญหน้า<0.05 in comparison to control untreated colon cancer cells. 

รูปที่ 4: สารสกัดจากน้ำ Cistanche tubulosa กระตุ้นการผลิตไมโตคอนเดรียซูเปอร์ออกไซด์ในเซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่ของมนุษย์ ความเข้มของแสงเรืองแสงของโพรบ MitoSOX Red ที่กำหนดเป้าหมายไมโตคอนเดรียใน A) CaCo2, (B) HCT116, (C) LoVo และ (D) SW620 เซลล์แสดงเป็นเปอร์เซ็นต์ของเซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่ที่ไม่ได้รับการรักษา ค่าเฉลี่ย (± SD) สำหรับ 5 ซ้ำของการทดสอบตัวแทนจะได้รับ: (*) นัยสำคัญ p<0.05 in comparison to control untreated colon cancer cells.

การอภิปราย

แม้ว่าการศึกษาก่อนหน้านี้ได้รายงานคุณสมบัติทางยามากมายของ Cistanche tubulosa แต่นี่ถือเป็นรายงานแรกของผลการต่อต้านการแพร่กระจายในเซลล์มะเร็ง สารประกอบออกฤทธิ์ทางชีวภาพของ Cistanche tubulosa ที่สกัดด้วยน้ำซึ่งเป็นตัวทำละลายที่มีขั้วสูง มีฤทธิ์ทางชีวภาพในการต้านมะเร็งที่รุนแรง ก่อนหน้านี้เราได้เปรียบเทียบประสิทธิภาพของ Cistanche tubulosa ที่ละลายในน้ำกับตัวทำละลายอื่นๆ เช่น เมทานอลและเอทิลอะซิเตต แต่สารสกัดจากน้ำมีฤทธิ์ต้านมะเร็งที่มีแนวโน้มมากที่สุด (ไม่แสดงข้อมูล)

เราได้แสดงให้เห็นถึงความสามารถของ CTE ที่ 1 มก./มล. และ 2 มก./มล. ในการยับยั้งการเจริญเติบโต 60% ของเซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่ทั้งระยะปฐมภูมิและระยะแพร่กระจาย ซึ่งเผยให้เห็นถึงบทบาทที่สำคัญที่อาจเป็นไปได้ของCistanche ทูบูโลซาเหมือนกับการรักษามะเร็งลำไส้ เมื่อเปรียบเทียบกับเซลล์ปกติ เซลล์มะเร็งมีลักษณะโดยทั่วไปโดยการรบกวนของสภาวะสมดุลของรีดอกซ์ และกลยุทธ์ทั่วไปของการรักษาต้านมะเร็งในปัจจุบันคือการเพิ่มความเครียดออกซิเดชันของเซลล์ (Yang et al, 2013) แม้ว่าระดับ ROS ที่ต่ำทางสรีรวิทยาจะมีบทบาทสำคัญในการส่งสัญญาณโมเลกุล แต่การผลิต ROS ที่มากเกินไปสามารถนำไปสู่ความไม่แน่นอนของมะเร็งและความร้ายกาจได้ (Liou และ Storz, 2010) ความไม่สมดุลของสภาวะสมดุลรีดอกซ์ของเซลล์ทำให้เซลล์มะเร็งมีความเสี่ยงต่อการตายของเซลล์ที่เกิดจาก ROS มากขึ้น (Jaganjac et al., 2008; Nogueira และ Hay, 2013) ฤทธิ์ต้านการงอกขยายของ CTE ที่รายงานในการศึกษานี้สามารถสื่อกลางโดยกลไกภายนอกและภายในเซลล์ต่างๆ ของสารประกอบที่รู้จักและไม่รู้จักภายในสารสกัด โดยกำหนดเป้าหมายหลายวิถีทางที่มีบทบาทสำคัญในการตายของเซลล์ เพื่อแยกความแตกต่างระหว่างการตายของเซลล์ในรูปแบบต่างๆ เราได้ตรวจสอบกลไกที่เป็นไปได้ที่รับผิดชอบต่อความเป็นพิษต่อเซลล์ที่เกิดจาก CTE ที่สังเกตได้

CISTANCHE TUBULOSA EXTRACT ป้องกันอัลเซอร์เมอร์ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

ข้อมูลของเราระบุว่า CTE เพิ่มการผลิต ROS ภายในเซลล์ และส่งผลให้เซลล์ตายจาก ROS สถานะรีดอกซ์ของเซลล์ยังมีบทบาทสำคัญในการควบคุมการตายของเซลล์ และห่วงโซ่การขนส่งอิเล็กตรอนแบบไมโตคอนเดรียเป็นหนึ่งในจุดสำคัญของการสร้าง ROS ของเซลล์ (Trachootham et al., 2008) นอกจากนี้ ROS ในเซลล์อาจทำให้เกิดการตายของเซลล์ผ่านทั้งเส้นทางที่ขึ้นกับไมโตคอนเดรียและเป็นอิสระ (Sinha et al., 2013) อันที่จริงข้อมูลของเรายังบ่งชี้ว่าการทำให้ภายนอกของฟอสฟาติดิลซีรีนที่เกิดจาก CTE เป็นผลทั่วไปในการตายของเซลล์ทั้งในเซลล์มะเร็งปฐมภูมิและระยะแพร่กระจาย ซึ่งบ่งชี้ว่ากลไกของการเสียชีวิตที่เกิดจาก CTE นั้นเป็นสื่อกลางโดยการตายของเซลล์มากกว่าเนื้อร้าย การกระตุ้นการตายของเซลล์ในเซลล์มะเร็งเป็นกลยุทธ์ในการแก้ไข และยาต้านมะเร็งหลายชนิดอาจส่งผลต่อการตายของเซลล์ในเซลล์มะเร็ง

สารประกอบหรือสารสกัดที่มีฤทธิ์กระตุ้นการตายของเซลล์ในเซลล์มะเร็งจึงอาจเป็นประโยชน์ในการวิจัยยาต้านมะเร็ง (Wong, 2011) เพื่อตรวจสอบว่าเอฟเฟกต์โปรอะพอพโทติคที่เกิดจาก CTE นั้นถูกสื่อกลางโดยกลไก ROS ที่เกิดจากไมโตคอนเดรียหรือไม่ เราได้วัดการผลิตซูเปอร์ออกไซด์โดยใช้โพรบฟลูออเรสเซนต์ที่กำหนดเป้าหมายไมโตคอนเดรียในเซลล์ที่ได้รับ CTE ข้อมูลของเราแสดงให้เห็นอย่างชัดเจนว่า CTE กระตุ้นการผลิตไมโตคอนเดรียซูเปอร์ออกไซด์ ซึ่งบ่งชี้ว่ากิจกรรมต้านมะเร็งของ Cistanche tubulosa อย่างน้อยก็ในส่วนหนึ่งที่เป็นสื่อกลางผ่านกลไก ROS ที่เกิดจากไมโตคอนเดรีย

ข้อสรุป

โดยสรุป ข้อมูลของเราชี้ให้เห็นว่าสารสกัดน้ำของพืชทะเลทราย Cistanche tubulosa อาจเป็นทางเลือกที่มีแนวโน้มสำหรับแนวทางต้านมะเร็งร่วมกับการรักษาทั่วไปอื่นๆ ในการป้องกันและรักษามะเร็งลำไส้ใหญ่ นอกจากนี้เรายังแสดงให้เห็นว่าความเป็นพิษของสารสกัดจากพืชต่อเซลล์มะเร็งนั้นถูกสื่อกลางโดยการผลิต ROS ในเซลล์ที่เพิ่มขึ้น และอย่างน้อยในบางส่วนจากการตายของเซลล์แบบไมโทคอนเดรีย การศึกษาเพิ่มเติมกำลังดำเนินการแยกและระบุลักษณะองค์ประกอบออกฤทธิ์ทางชีวภาพแต่ละรายการที่รับผิดชอบในการต้านมะเร็ง

จำเป็นต้องมีการวิจัยเพิ่มเติมเพื่อประเมินการใช้สารสกัดนี้ในฐานะสารเคมีป้องกันที่มีประสิทธิภาพ และเพื่อทำความเข้าใจกลไกการออกฤทธิ์ต่อเซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่ในระดับโมเลกุล จำเป็นต้องมีการศึกษาพรีคลินิกและทางคลินิกเพิ่มเติมเพื่อยืนยันผลที่เป็นประโยชน์ต่อสุขภาพที่สังเกตได้ของCistanche tubulosa สำหรับการป้องกันมะเร็ง.

 CISTANCHE TUBULOSA กาแฟ CISTANCHE ปรับปรุงหน่วยความจำ ต่อต้านความเมื่อยล้า PHGS75% ECH 30% ACT 12%