thภาษา
หน้าหลัก / ความรู้ / เนื้อหา

ความรู้

การหาลักษณะพิเศษของโปรแอนโธไซยานิดินที่ออกซิไดซ์ตามธรรมชาติและอัลคาไลน์ในสารสกัดจากพืชโดย UHPLC-MS/MS ความละเอียดสูงพิเศษ

Mar 31, 2022

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม ติดต่อtina.xiang@wecistanche.com

เชิงนามธรรม: ในการศึกษานี้ เราวิเคราะห์องค์ประกอบโปรแอนโธไซยานิดิน (PA) ของสารสกัดจากพืช 55 ชนิด ก่อนและหลังอัลคาไลน์ออกซิเดชันโดย UHPLC-MS/MS ความละเอียดสูงพิเศษ เรากำหนดลักษณะโครงสร้าง PA ตามธรรมชาติโดยละเอียด และศึกษาการเปลี่ยนแปลงที่ซับซ้อนในโครงสร้าง PA ที่ดัดแปลง รวมถึงรูปแบบและแบบจำลองทั่วไปของปฏิกิริยาภายในคลาส PA ต่างๆ อันเนื่องมาจากการเกิดออกซิเดชัน PA ตามธรรมชาติคือ PC, PD และ PC/PD ชนิด A และ B นอกจากนี้ เราตรวจพบ PA ที่สะสมอยู่ พีซีชนิด B ในสารสกัดจากพืชต่างชนิดกันค่อนข้างเสถียรและไม่มีการดัดแปลงหรือดัดแปลงเล็กน้อยเนื่องจากออกซิเดชันอัลคาไลน์. สำหรับตัวอย่างบางส่วน เราตรวจพบปฏิกิริยาภายในโมเลกุลของพีซีที่สร้างการเชื่อมโยงอีเทอร์ชนิด A พีซีประเภท A ก็ค่อนข้างเสถียรโดยไม่มีการดัดแปลงใดๆ เลย แต่ในโรงงานบางแห่ง การก่อตัวของอีเธอร์เพิ่มเติมความเชื่อมโยงถูกตรวจพบ PA ที่มีหน่วย PD มีปฏิกิริยามากกว่า หลังจากการออกซิเดชันของอัลคาไลน์ PA เหล่านี้หรือผลิตภัณฑ์ออกซิเดชันของพวกมันไม่ถูกตรวจพบโดย MS อีกต่อไป ถึงแม้ว่า UV ที่ 280 นาโนเมตรชนิดที่แตกต่างกันและ/หรือแบบหน่วงเวลาจะยังตรวจพบ Galloylated PAs ค่อนข้างเสถียรภายใต้การเกิดออกซิเดชันแบบอัลคาไลน์หากเป็นแบบ PC แต่เราตรวจพบการเปลี่ยนแปลงภายในโมเลกุลจากชนิด B เป็นชนิด A Galloylated PDs มีปฏิกิริยาตอบสนองมากกว่าและตอบสนองในทำนองเดียวกันกับ PD ที่ไม่ได้ถูกแกลลออยเลต

คีย์เวิร์ด: แมสสเปกโตรเมตรีความละเอียดสูง orbitrap;ออกซิเดชัน; แทนนิน; UHPLC-DAD-MS/MS

1flavonoids antioxidant

คลิกที่นี่เพื่อเรียนรู้ผลิตภัณฑ์เพิ่มเติม

1. บทนำ

โปรแอนโธไซยานิดิน(PAs, แทนนินแบบควบแน่น) คือโอลิโกเมอร์และโพลีเมอร์ที่ประกอบด้วยฟลาแวน-3-ol หน่วยโมโนเมอร์(รูปที่ 1) ความหลากหลายของโครงสร้าง PA ส่วนใหญ่มาจากรูปแบบไฮดรอกซิเลชัน ลำดับของหน่วยฟลาแวน-3-ol และระดับของโพลิเมอไรเซชัน (DP) นอกเหนือจากความแตกต่างในสเตอริโอเคมีที่ C2 และ C3 และการแปรผันของตำแหน่ง และสเตอริโอเคมีของอินเตอร์ฟลาโวนอยด์พันธบัตร [1]. PA ที่พบบ่อยที่สุดคือ procyanidins (PCs) ที่ประกอบด้วย (epi) catechin units และ prodelphinidins (PDs) ประกอบด้วย (epi)gallocatechin units (รูปที่ 1) โครงสร้าง PA ที่แสดงในรูปมีความเชื่อมโยง C4→C8 อย่างไรก็ตาม PA สามารถเชื่อมโยงได้ด้วยพันธะ C4 → C6 และเราไม่สามารถแยกการเชื่อมโยงทั้งสองนี้ออกจากกันด้วยแมสสเปกโตรเมตรี

PAs are the most commonly available subgroup of plant tannins, responsible for nearly 90% of the world's overall market for industrial tannins (>หลาย 100-กิโลตันต่อปี) และน่าสนใจยิ่งขึ้นในด้านเคมีและเศรษฐกิจในฐานะพอลิเมอร์ชีวภาพ [2-5] ในปัจจุบัน มีการใช้ทรัพยากรเพียงไม่กี่อย่าง เช่น เปลือกไม้หรือไม้เหนียง มิโมซ่า เกบราโช โอ๊ค เกาลัด ป่าชายเลน ซูมัค ไมโรบาลัน และทารา สำหรับการผลิตและส่วนใหญ่สำหรับความต้องการในการฟอกหนัง ไวน์ แร่ อุตสาหกรรมลอยน้ำและการขุดเจาะน้ำมันเพื่อเตรียมกาวนอกเหนือไปจากอาหารสัตว์ [4,6,7] อย่างไรก็ตาม แม้แต่ของเสียหรือผลพลอยได้จากการจัดการและแปรรูปผลไม้ ผัก และทรัพยากรป่าไม้จากการใช้งานทางอุตสาหกรรมที่กล่าวข้างต้นอาจเป็นแหล่งที่มีศักยภาพสำหรับ PAs ตามธรรมชาติ [8-11] PAs ยังสามารถแก้ไขเพิ่มเติมเพื่อเพิ่มความสามารถในการใช้งานและฤทธิ์ทางชีวภาพ [12,13]

(A) A model structure for oligomeric B-type proanthocyanidins (PAs) with C4→C8 linkages: R1 = H, procyanidin, R1 = OH, prodelphinidin. B-type PAs can also be linked by C4→C6 bonds. A-type PAs have an additional C2→O→C7 or C2→O→C5 ether bond. The hydroxyl groups can also be substituted, for example, galloylated or glycosylated. (B) A galloyl group. The chemical properties of PAs can be modified through derivatization reactions [12]. These reactions include, for example, O-acylation by a reaction with acid chlorides or anhydrides or alkylation with alkyl halides. Derivatization modifies the physicochemical properties of PAs for their commercial applications and purification technologies. However, to truly understand the actual reactions happening, several parameters, such as the reagents and solvents used, temperature, pH, and reaction time need to be regulated [12]. A simple and rapid way to improve the usability of plant PAs is to oxidize them to create new PAs with altered molecular structures. Even though the reaction conditions of oxidation are well-known and different reaction mechanisms have been suggested, the corresponding structural changes are mainly known for individual small PAs [14–18]. For example, the oxidation and rearrangement reactions of different monomeric and dimeric flavan-3-ols have been elegantly discussed already 30 years ago, showing that the chemistry of these PAs at alkaline pH is regulated by the formation of A- and/or B-ring quinonemethides as highly reactive intermediates causing the rearrangement reactions and the oxidative conversion of B-type to A-type PAs [15]. Instead, the behavior of PA mixtures in the plant extracts is not known, and this is most probably due to difficulties in the analyzing of structurally different initial PAs, which is challenged even further after oxidation. In our previous study, we tested whether different types of natural PAs could be chemically modified to produce new types of PAs and studied the effects of nonspecific alkaline oxidation mimicking the often-used alkaline extraction process for bark waste [19–23] on 102 PA-containing plant extracts [13]. The results indicated different reactivities for PCs and PDs. The result suggested that plant PAs could be modified at high pH, and the presence of PD groups significantly enhanced the probability of modification reactions. The main reaction route was concluded to be intramolecular, but for PD-rich and galloylated PAs, both intra- and intermolecular reactions were indicated [13]. In addition, other studies have shown that oxidation of PAs includes both intramolecular and intermolecular reactions [14,15,24,25]. The detailed characterization and understanding of natural and oxidized PAs is challenging, but recent advances in ultra-high-performance liquid chromatographic tandem Figure 1. (A) A model structure for oligomeric B-type proanthocyanidins (PAs) with C4→C8 linkages: R1 = H, procyanidin, R1 = OH, prodelphinidin. B-type PAs can also be linked by C4→C6 bonds. A-type PAs have an additional C2→O→C7 or C2→O→C5 ether bond. The hydroxyl groups can also be substituted, for example, galloylated or glycosylated. (B) A galloyl group

คุณสมบัติทางเคมีของ PA สามารถปรับเปลี่ยนได้โดยปฏิกิริยาการเกิดอนุพันธ์ [12] ปฏิกิริยาเหล่านี้รวมถึง ตัวอย่างเช่น O-acylation โดยปฏิกิริยากับกรดคลอไรด์หรือแอนไฮไดรด์หรืออัลคิเลชันกับอัลคิลเฮไลด์ Derivatization จะปรับเปลี่ยนคุณสมบัติทางเคมีกายภาพของ PA สำหรับการใช้งานเชิงพาณิชย์และเทคโนโลยีการทำให้บริสุทธิ์ อย่างไรก็ตาม เพื่อให้เข้าใจปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นจริงอย่างแท้จริง พารามิเตอร์หลายอย่าง เช่น ตัวทำปฏิกิริยาและตัวทำละลายที่ใช้ อุณหภูมิ ค่า pH และเวลาของปฏิกิริยาจำเป็นต้องได้รับการควบคุม [12] วิธีที่ง่ายและรวดเร็วในการปรับปรุงความสามารถในการใช้งานของ PA ของพืชคือการออกซิไดซ์เพื่อสร้าง PA ใหม่ที่มีโครงสร้างโมเลกุลที่เปลี่ยนแปลงไป แม้ว่าสภาวะปฏิกิริยาของการเกิดออกซิเดชันจะเป็นที่ทราบกันดีและได้มีการแนะนำกลไกของปฏิกิริยาที่แตกต่างกันไปแล้ว การเปลี่ยนแปลงโครงสร้างที่สอดคล้องกันนั้นส่วนใหญ่ทราบกันดีอยู่แล้วสำหรับ PA ขนาดเล็กแต่ละชนิด [14-18] ตัวอย่างเช่น ปฏิกิริยาออกซิเดชันและปฏิกิริยาจัดเรียงตัวใหม่ของฟลาแวนโมโนเมอร์และไดเมอร์-3-ols ที่ต่างกันได้ถูกกล่าวถึงอย่างหรูหราเมื่อ 30 ปีที่แล้ว ซึ่งแสดงให้เห็นว่าเคมีของ PA เหล่านี้ที่ pH ด่างถูกควบคุมโดยการก่อตัวของ A และ/หรือ บีริง quinone-methides เป็นตัวกลางที่มีปฏิกิริยาสูงทำให้เกิดปฏิกิริยาการจัดเรียงใหม่และการแปลงออกซิเดชันของ PA ชนิด B เป็น A[15] ในทางกลับกัน ไม่ทราบพฤติกรรมของสารผสม PA ในสารสกัดจากพืช และนี่อาจเป็นเพราะความยากลำบากในการวิเคราะห์ PA เริ่มต้นที่แตกต่างกันเชิงโครงสร้าง ซึ่งถูกท้าทายยิ่งขึ้นไปอีกหลังจากออกซิเดชัน ในการศึกษาก่อนหน้านี้ เราทดสอบว่า PAs ธรรมชาติชนิดต่างๆ สามารถดัดแปลงทางเคมีเพื่อผลิต PA ชนิดใหม่ได้หรือไม่ และศึกษาผลของการออกซิเดชันที่เป็นด่างที่ไม่จำเพาะเจาะจง ซึ่งเลียนแบบกระบวนการสกัดด้วยด่างที่ใช้บ่อยสำหรับของเสียจากเปลือกไม้ [19-23]บน 102 สารสกัดจากพืชที่มี PA [13] ผลลัพธ์ระบุปฏิกิริยาที่แตกต่างกันสำหรับพีซีและ PD ผลการวิจัยชี้ให้เห็นว่า PA ของพืชสามารถแก้ไขได้ที่ pH สูง และการมีอยู่ของกลุ่ม PD เพิ่มความน่าจะเป็นของปฏิกิริยาการดัดแปลงอย่างมีนัยสำคัญ เส้นทางปฏิกิริยาหลักสรุปได้ว่าอยู่ในโมเลกุล แต่สำหรับ PA ที่มี PD-rich และ gallovlated ทั้งปฏิกิริยาภายในและระหว่างโมเลกุลถูกระบุ [13] นอกจากนี้ การศึกษาอื่น ๆ ได้แสดงให้เห็นว่าการเกิดออกซิเดชันของ PA รวมถึงปฏิกิริยาภายในโมเลกุลและปฏิกิริยาระหว่างโมเลกุล [14,15,24,25]

การระบุลักษณะเฉพาะและความเข้าใจโดยละเอียดเกี่ยวกับ PA ตามธรรมชาติและออกซิไดซ์เป็นสิ่งที่ท้าทาย แต่ความก้าวหน้าล่าสุดในเครื่องมือวัดค่าโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูงพิเศษควบคู่กัน (UHPLC-MS/MS) พร้อมเครื่องวิเคราะห์มวลที่มีความละเอียดสูงช่วยให้สามารถจำแนกลักษณะของ PA ของโรงงานได้หลายแบบ [18,26-28]. เครื่องวิเคราะห์มวลที่เป็นที่นิยมสำหรับการกำหนดลักษณะของ PA คือ orbitrap [27,28] และ quadrupole

time-of-flight(OTOF)[29,30] เนื่องจากคุณสมบัติความละเอียดสูง ซึ่งช่วยให้สามารถกำหนดมวลที่แน่นอนและสูตรโมเลกุลที่สอดคล้องกันของ PAs ที่ศึกษาในสารสกัดจากพืช PA ที่พบในธรรมชาติมักจะมีส่วนผสมของโครงสร้างโอลิโกและพอลิเมอร์ที่แตกต่างกัน ซึ่งทำให้ได้ไอออนที่มีประจุแบบทวีคูณในอิออไนเซชันของสเปรย์ด้วยไฟฟ้า ซึ่งขยายช่วงมวลที่ใช้ [30-32] นอกจากนี้ PAs มีรูปแบบการกระจายตัวของคุณลักษณะที่เป็นที่รู้จักกันดี ซึ่งสามารถใช้สำหรับการระบุของพวกมัน: สิ่งเหล่านี้รวมถึงความแตกแยก quinone-methide (QM), การแยกตัวของวงแหวนเฮเทอโรไซคลิก (HRF) และการแยกส่วน retro-Diels-Alder (RDA) [27, 31-33]. รูปแบบการแตกแฟรกเมนต์เดียวกันมักจะปรากฏสำหรับทั้ง PA ชนิด A และ B และค่า m/z ที่สังเกตพบสำหรับ PA ชนิด A ที่มีการเชื่อมโยงอีเทอร์ 1 อันแตกต่างกัน 2 Da จาก PA ชนิด B ที่สอดคล้องกัน [26,{{ 19}}].

ในการศึกษานี้ เราใช้ UHPLC ร่วมกับแมสสเปกโตรเมตรีที่มีความละเอียดสูงพิเศษเพื่อ (a) เพื่อศึกษาโครงสร้าง PA ตามธรรมชาติในตัวอย่างพืชที่อุดมด้วย PA จำนวน 55 ตัวอย่างโดยละเอียด (b) เพื่อดูการเปลี่ยนแปลงที่ซับซ้อนในโครงสร้าง PA ที่ดัดแปลงหลังจาก การเกิดออกซิเดชันทางอากาศในสภาวะที่เป็นด่างและ (c) เพื่อรับรู้รูปแบบทั่วไปและแบบจำลองของปฏิกิริยาภายในคลาส PA ต่างๆ อันเนื่องมาจากการเกิดออกซิเดชัน

9flavonoids anti viral

2. ผลลัพธ์และการอภิปราย

เราเลือกตัวอย่างพืชที่อุดมด้วย PA จำนวน 55 ตัวอย่างซึ่งมีส่วนผสมของ PA ธรรมชาติที่น่าสนใจแต่ซับซ้อนจากการศึกษาก่อนหน้าของเรา [13] ตัวอย่างพืชเหล่านี้ถูกออกซิไดซ์ในทำนองเดียวกันโดยการเกิดออกซิเดชันทางอากาศภายใต้สภาวะที่เป็นด่างเช่นเดียวกับใน [13] และหลังจากการเกิดออกซิเดชัน PA ก็มีความซับซ้อนมากขึ้น PAs ธรรมชาติและที่ถูกดัดแปลงเหล่านี้ได้รับการศึกษาที่นี่โดย UHPLC-DAD ที่เชื่อมต่อกับ Q-orbitrap MS/MS ที่มีความละเอียดสูงพิเศษ เพื่อตรวจจับการเปลี่ยนแปลงที่ซับซ้อนในโครงสร้าง PA PA ถูกจำแนกตามไอออนที่มีประจุแบบเดี่ยวและ/หรือแบบคูณของพวกมันด้วยมวลและสูตรโมเลกุลที่แน่นอนที่สอดคล้องกันของพวกมัน การวิเคราะห์ดำเนินการโดย LC แบบผันกลับ ดังนั้น PA แบบโอลิโกเมอร์และโพลีเมอร์ส่วนใหญ่มีอยู่ในรูปของโคนที่ไม่ได้รับการแก้ไขใน UV chromatograms ที่ 280 นาโนเมตร ดูตัวอย่างสารสกัดจากใบของ Ruprechtia salicifolia ในรูปที่ 2A ในโครมาโตแกรมของไอออนทั้งหมด การแตกตัวเป็นไอออนของสารประกอบฟีนอลิกอื่นๆ มีความเข้มข้นมากกว่าของ PA และดังนั้น โคน PA จึงไม่ปรากฏชัดนัก (รูปที่ 2B) อย่างไรก็ตาม ความแม่นยำของออร์บิแทรปทำให้การตีความผลลัพธ์ของ MS ง่ายขึ้น เนื่องจากรูปแบบไอโซโทปของไอออนที่มีประจุไฟฟ้าทวีคูณนั้นถูกกำหนดไว้อย่างชัดเจน และสามารถตรวจจับการทับซ้อนกันของพีคที่เป็นไปได้ ซึ่งช่วยให้สามารถกำหนดมวลที่แน่นอนและสูตรโมเลกุลของโอลิโก- และ PA โพลีเมอร์ ตัวอย่างเช่น galloylated(epi) catechin ที่ m/z 441, galloylated dimeric PCat m/z729 และ gallovlated trimeric PC ที่ m/z 1017 แสดงพีคที่แยกจากกันอย่างดีในไอออนโครมาโตแกรม (EICs) ที่สกัดออกมาในรูปที่ 2C-E และพวกมัน สามารถตรวจพบได้ง่ายโดยพิจารณาจากค่า UV และมวลสาร รวมถึงมวลที่แน่นอนและสูตรโมเลกุลที่สอดคล้องกัน ผลลัพธ์ที่ได้นี้สอดคล้องกับผลลัพธ์ก่อนหน้านี้ที่ได้รับจาก MS/MS ซึ่งแสดงให้เห็นว่าใบ Ruprechtia salicifolia มี PA 24 มก./กรัม ซึ่งมีเพียง 3 เปอร์เซ็นต์เท่านั้นที่เป็น PA ที่มี PD บางใบถูกจัดเรียง และพบ mDP เป็น 7 [13]

UV chromatogram at 280 nm, (B) total ion chromatogram, (C) extracted ion chromatogram (EIC) at m/z 441, (D) EIC at m/z 729, and (E) EIC at m/z 1017 of the leaf extract of Ruprechtia salicifolia. PA = proanthocyanidin, NL = normalized intensity. 2.1. B-Type PCs in the Initial Non-Oxidized Plant Extracts B-type PCs in the plant extracts were detected based on their singly and multiply charged molecular ions in addition to the characteristic fragmentation patterns. For example, PCs in Begonia bowerae

2.1.B-Type PCs ในสารสกัดพืชที่ไม่ได้ออกซิไดซ์เบื้องต้น

พีซีชนิด B ในสารสกัดจากพืชถูกตรวจพบโดยพิจารณาจากไอออนโมเลกุลที่มีประจุเดี่ยวและแบบทวีคูณ นอกเหนือไปจากรูปแบบการกระจายตัวของลักษณะเฉพาะ ตัวอย่างเช่น พีซีใน Begonia bower เป็นสารสกัด "Nigra" แสดงชุดไอออน [MH] ที่แตกต่างกันโดยคั่นด้วย 288 Da จาก m/z289 ถึง m/z 1729 ซึ่งสอดคล้องกับพีซีประเภท B ตั้งแต่โมโนเมอร์ไปจนถึงเฮกซาเมอร์และของ [M{{ 6}}H]' ไอออนคั่นด้วย144 Da จาก m/z 1008 ถึง m/z 1296 ซึ่งสอดคล้องกับพีซีประเภท B จาก heptamers ถึง noamers (ตารางที่ S1) แมสสเปกตรัมของพีซีโมโนเมอร์ เช่น flavan-3-ols catechin และ epicatechin แสดงแฟรกเมนต์ไอออนที่มีลักษณะเฉพาะที่ m/z 245 ตามที่รายงานไว้ก่อนหน้านี้ [3132,36]

โดยทั่วไป MS/MS ของ PC dimers ชนิด B แสดงรูปแบบการกระจายตัวของลักษณะเฉพาะที่ให้ไอออนที่ m/z 287 และ 289 (ความแตกแยกของ QM), m/z 425 และ 407 (การกระจายตัวของ RDA และการกำจัดน้ำตามลำดับ) และ m /z 451(HRF; รูปที่ 3) การแตกแฟรกเมนต์ RDA ถือเป็นรูปแบบการแตกแฟรกเมนต์ที่สำคัญที่สุดสำหรับการกำหนดคุณลักษณะของไดเมอร์ PC ชนิด B และคิดว่าการแตกแฟรกเมนต์บนยูนิตส่วนขยายนั้นเป็นที่นิยมอย่างกระฉับกระเฉงกว่า เนื่องจากสร้างแฟรกเมนต์ไอออนด้วยระบบ π-πhyperconjugated ที่ใหญ่กว่า การกระจายตัวของ RDA บนยูนิตเทอร์มินัล [31-33]

Characteristic fragmentation pathway and the MS/MS of B-type procyanidin dimer in the leaf extract of Cunninghamia lanceolata. The mechanisms are heterocyclic ring fission (HRF), retro-Diels‒Alder (RDA) fragmentation and quinone methide (QM) cleavage [31–33

2.2.A-Type PCs ในสารสกัดพืชที่ไม่ได้ออกซิไดซ์เบื้องต้น

การมีอยู่ของ PA ชนิด A ในสารสกัดจากพืชเริ่มแรกได้รับการยืนยันโดยรูปแบบการกระจายตัวของลักษณะเฉพาะที่คล้ายกับ PA ชนิด B ตัวอย่าง เส้นทางการกระจายตัวของลักษณะเฉพาะและข้อมูล MS/MS ของไดเมอร์และทริมเมอร์ PC ชนิด A ที่มีการเชื่อมโยงแบบ A เดียวจะแสดงและอภิปรายในรายละเอียด (รูปที่ 4 และ 5) การกระจายตัวของไดเมอร์ PC ชนิด A ทำให้เกิดไอออนสี่ส่วน (รูปที่ 4) การแยกส่วน RDA ของเทอร์มินัลยูนิตทำให้เกิดไอออนที่ m/z 423 ซึ่งยืนยันการมีอยู่ของตัวเชื่อมชนิด A [26,34,35] นอกจากนี้ เราแนะนำว่าการแยกส่วน RDA ของยูนิตส่วนขยายและการสูญเสียน้ำตามลำดับสามารถทำให้เกิดไอออนที่ m/z 407 ไอออนที่ m/z 449 คือการผลิต HRF กล่าวคือ ผลของการสูญเสีย หน่วย phloroglucinol [26] ไอออนที่ m/z 285 และ 289 สอดคล้องกับการตัดแยก QM ในทำนองเดียวกัน PC trimer A-type แสดงโมเลกุลไอออนที่ m/z 863 และไอออนของชิ้นส่วนที่มีลักษณะเฉพาะใน MS/MS ที่ m/z 711.693.573.559,451,411 และ 289 ตามที่รายงานโดย Sui et al. (2016 ก่อนหน้านี้) )[26]. RDA fragmentation ของ A-type PC trimer สร้างไอออนที่ m/z 711 ซึ่งยืนยันอีกครั้งว่ามีการเชื่อมโยง A-type ตามการศึกษาก่อนหน้านี้ [26] และบอกเป็นนัยว่าการเชื่อมโยงแบบ A อาจอยู่ระหว่างสองส่วนขยาย หน่วย เราแนะนำว่าไอออนที่ m/z 693 สอดคล้องกับการสูญเสียน้ำตามลำดับและสนับสนุนตำแหน่งของการเชื่อมโยงประเภท A ดังแสดงในรูปที่ 5 นอกจากนี้ เราแนะนำว่า RDA เพิ่มเติมของวงแหวน C แบบเฮเทอโรไซคลิกของ เทอร์มินอลฟลาแวน-3-หน่วย ol แสดงไอออนที่ m/z559 ไอออนนี้มีน้อยในการศึกษาของเรา ไอออนที่ m/z573 และ 289 สอดคล้องกับการแตกแยกของ QM ของพันธะระหว่างฟลาโวนอยด์ที่ต่ำกว่า [26] นอกจากนี้เรายังตรวจพบไอออนที่ m/z 575 และ 287 เราเสนอว่าไอออนที่ m/z 451 และ 411 สามารถสอดคล้องกับ HRF ของวงแหวนเฮเทอโรไซคลิกของฟลาแวนตรงกลาง-3-ol หน่วยที่รองรับตำแหน่งของ การเชื่อมต่อแบบ A ระหว่างยูนิตต่อขยาย ตามรูปที่ 5

2.3.การปรับเปลี่ยนพีซีประเภท B ในสารสกัดจากพืชเนื่องจากการเกิดออกซิเดชันของอัลคาไลน์

หลังจากการออกซิเดชัน พีซีชนิด B ในสารสกัดจากพืชต่างๆ ถูกดัดแปลงให้แตกต่างกัน ตัวอย่างบางส่วนไม่มีการเปลี่ยนแปลงหรือแก้ไขเล็กน้อย ดูรูปที่ 6A, B ตัวอย่างเช่น สำหรับโอลิโกเมอร์ PC ชนิด B ที่สั้นกว่าในสารสกัดจากใบของต้นบีโกเนียคือ "นิกรา" ก่อนและหลังการเกิดออกซิเดชัน เมื่อสารสกัดจากพืชชนิดนี้ถูกออกซิไดซ์ ค่ามวลรวมของสารสกัดพืชขั้นต้นและสารสกัดจากพืชที่ออกซิไดซ์จะใกล้เคียงกัน อย่างไรก็ตาม ตรวจพบความแตกต่างเล็กน้อยในข้อมูลแมสสเปกโตรเมตรีแบบละเอียด ตัวอย่างเช่น PC dimer ที่ m/z 577 ร่วมกับ m/z575 และ PC trimer ที่ m/z865 กับ m/z 863 ตามลำดับ เมื่อพีซีมีจำนวนน้อยก่อนการเกิดออกซิเดชัน หลังจากการเกิดออกซิเดชัน สัญญาณของพวกมันเกือบจะหายไปจากแมสสเปกตรัม ซึ่งบ่งบอกว่าพวกเขาได้แปลงเป็นแบบที่ไม่สามารถระบุตัวตนได้หรือเสื่อมโทรมเนื่องจากการออกซิเดชัน ปรากฏการณ์นี้สังเกตได้ ตัวอย่างเช่น สำหรับสารสกัดจากใบของ Combretum Indicum และ Euphorbia characias ที่มี PC oligomers สั้นจำนวนน้อย และสนับสนุนโดยข้อมูล MS/MS ก่อนหน้านี้ที่แสดงให้เห็นว่าปริมาณ PA ลดลงจาก 4 มก./มล. เป็น 1 มก. /มล. และ 7 มก./มล. ถึง 1 มก./มล. ตามลำดับ เนื่องจากการเกิดออกซิเดชัน [13] ปรากฏการณ์นี้อาจเกี่ยวข้องกับเงื่อนไขการทดลองที่ใช้ ซึ่งหมายความว่าจะรุนแรงขึ้นเมื่อเนื้อหา PA เริ่มต้นต่ำ ในบางตัวอย่าง ส่วนหนึ่งของพีซีประเภท B ได้รับการแก้ไขเพิ่มเติม ดูรูปที่ 6C, D ตัวอย่างเช่น สำหรับ PColigomers ชนิด B ที่สั้นกว่าในเอกสารประกอบของ Cyperus owoaii ก่อนและหลังการเกิดออกซิเดชัน เมื่อสารสกัดจากพืชประเภทนี้ถูกออกซิไดซ์ จะตรวจพบความแตกต่างที่มองเห็นได้ในสเปกตรัมมวลรวมซึ่งแสดงความแตกต่างของมวล 2 Da เมื่อเปรียบเทียบกับ PC เริ่มต้น (รูปที่ 6C, D, ตาราง S2)

Figure 4. Characteristic fragmentation pathway and the MS/MS of A-type procyanidin dimer in the leaf extract of Aglaonema crispum. The mechanisms are heterocyclic ring fission (HRF), retro-Diels-Alder (RDA) fragmentation and quinone methide (QM) cleavage [26,34]. The ion at m/z407 is a tentative suggestion for the RDA fragmentation and the sequential water elimination of the extension unit.

Figure 5.Characteristic fragmentation pathway and the MS/MS of A-type procyanidin trimer in the leaflet extract of Tectaria macrodonta. The mechanisms suggested are heterocyclic ring fission(HRF), retro-Diels-Alder(RDA)fragmentation and quinone methide (QM) cleavage.

f non-oxidized (A) and oxidized (B) leaf extract of Begonia bowerae

เป็นที่ทราบกันดีว่าการออกซิเดชันของ o-dihydroxy polyphenols กล่าวคือ catechol B-ring ของ PCs โดยทั่วไปจะให้ผล o-quinones ที่มีความแตกต่างมวล 2 Da อันที่จริง เราสังเกตเห็นว่าการออกซิเดชันประเภทนี้สามารถเกิดขึ้นได้ในการวิเคราะห์แมสสเปกโตรเมทรี อาจมีสัญญาณเล็กน้อยในมวลสารที่มีค่า m/z 2 Da น้อยกว่าค่า m/z ของพีซีที่สอดคล้องกับการเกิดออกซิเดชันหรือการก่อตัวของรูปแบบควิโนนของพีซีในระหว่างการแตกตัวเป็นไอออน (ไม่ได้เผยแพร่ข้อมูล) เป็นไปได้ว่าที่นี่ในการเกิดออกซิเดชันที่เป็นด่าง โพลีฟีนอล o-dihydroxy จะก่อตัวเป็นโอ-ควิโนนตัวแรก อย่างไรก็ตาม 0-รูปแบบควิโนนที่เกิดขึ้นนั้นไม่เสถียรและส่วนใหญ่น่าจะตอบสนองอย่างรวดเร็วต่อไป ผลลัพธ์ที่เป็นไปได้ประการหนึ่งอาจเป็นการแปลงออกซิเดชันของพีซีประเภท B เป็นพีซีประเภท A ตามที่รายงานไว้ก่อนหน้านี้ในเอกสาร [15] การเปลี่ยนแปลงของพีซีชนิด B เป็นพีซีชนิด A เกี่ยวข้องกับการกำจัดออกซิเดชันของไฮไดรด์ไอออนที่ C2 ของซีริงเป็นขั้นตอนเริ่มต้น: สภาวะพื้นฐานที่แพร่หลายทำให้เกิดปฏิกิริยาออกซิเดชันของฟังก์ชันโอไดไฮดรอกซีของบีริง ไปเป็นโอ-ควิโนน ซึ่งต่อมาทำหน้าที่เป็น anสารออกซิแดนท์สำหรับการแปลงโปรไซยานิดินไดเมอร์ชนิด B เป็นชนิด A [15] (รูปที่ 7) กลไกของ quinone methide นี้ยังได้รับการพิสูจน์ในอุณหภูมิ ค่า pH และสภาวะของตัวเร่งปฏิกิริยาที่แตกต่างกัน [37] โดยการออกซิเดชันแบบรุนแรงโดยใช้ 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radicals ภายใต้สภาวะที่เป็นกลาง [38] และโดยแลคเคส ( EC1.10.3.2) [39].

The suggested mechanism for the conversion of B-type procyanidin dimer to A-type dimer according to [15,37].

เมื่อเราศึกษาพีซีที่ได้รับการดัดแปลงโดยมีความแตกต่างมวล 2 Da ในสารสกัดออกซิไดซ์และการผลิตที่ได้รับจาก MS/MS พบว่ามีความคล้ายคลึงกับพีซีประเภท A และแฟรกเมนต์ไอออน (ตามที่กล่าวไว้ข้างต้นในหัวข้อ 2.2) แสดงรูปแบบการกระจายตัวที่มีลักษณะเฉพาะที่ให้ไอออนที่ m/z 285 และ 289 (ความแตกแยกของ QM), m/z 423 (การกระจายตัวของ RDA) และ m/z449 (HRF) ตัวอย่างเช่น เราแสดงการแปลงไดเมอร์ PC ชนิด B ของสารสกัดแผ่นพับของ Microgramma Mauritania เป็น PC dimers ชนิด A ในรูปที่ 8 ในไม่ออกซิไดซ์แยก เราตรวจพบ PC dimers ชนิด B สี่ตัวที่มีค่า m/z 577 (รูปที่ 8A) แต่ไม่มี PC dimers ชนิด A ที่มีค่า m/z 575 (รูปที่ 8B) พีคเล็กๆ ใน EIC ที่ m/z575 น่าจะสอดคล้องกับการเกิดออกซิเดชันของพีซีประเภท B ในแหล่งกำเนิดไอออน เนื่องจากเวลาการกักเก็บจะเหมือนกับพีซีประเภท B ทุกประการ ในสารสกัดที่ถูกออกซิไดซ์ เราตรวจพบเฉพาะร่องรอยของพีซีประเภท B เริ่มต้นที่ m/z 577 (รูปที่ 8C) แต่เราตรวจพบจุดสูงสุดที่เข้มข้นในเวลาต่อมาซึ่งสอดคล้องกับพีซีประเภท A ที่ m/z 575 (รูปที่ 8D) พีคเล็กๆ ใน EIC ที่ m/z577 ที่มีเวลาการกักเก็บเท่ากันมากซึ่งสอดคล้องกับสัญญาณไอโซโทปของ m/z 575 ต้องสังเกตว่าการศึกษานี้เป็นเชิงคุณภาพ หมายความว่าไม่สามารถมีปริมาณไอออนได้มากมาย เปรียบเทียบกันเช่นนี้ นอกจากนี้ ต้องสังเกตว่าการแปลงพีซีประเภท B เป็นพีซีประเภท A นั้นไม่สมบูรณ์เหมือนในตัวอย่างนี้เสมอไป และพีซีประเภท B ทั้งหมดไม่ได้ถูกแปลงเป็นพีซีประเภท A ประมาณว่าความอุดมสมบูรณ์ของไอออนของโอลิโกเมอร์ PC ชนิด A และ B มีค่าเท่ากัน ในทางกลับกัน ในบางตัวอย่าง เราตรวจพบความแตกต่างมากขึ้นของ 2 Da; ตัวอย่างเช่น PC heptamer ที่ m/z 2017 สามารถใช้ร่วมกับไอออนที่ m/z2015 และ 2013 ซึ่งบ่งบอกถึงการก่อตัวของการเชื่อมโยง A-type หนึ่งและสองตามลำดับ

Extracted ion chromatograms (EICs) of the non-oxidized leaflet extract of Microgramma mauritiana (A) the ions at m/z 577.11–577.17 showing the presence of B-type procyanidin dimers, (B) the ions at m/z 575.09–575.15 and of the oxidized extract of Microgramma mauritiana (C) the ions at m/z 577.11–577.17 and (D) the ions at m/z 575.09–575.15 showing the presence of A-type procyanidin dimers. (*) the ion corresponds to the isotopic signal of a doubly charged molecular ion for a tetrameric procyanidin. (**) the ion has the same elemental composition as A-type PC dimers but different fragment ions, NL = normalized intensity. Note that this study was qualitative, and the intensities cannot be compared as such

แม้ว่าการแปลงพีซีประเภท B เป็น A-type ดูเหมือนจะเป็นกลไกการเกิดปฏิกิริยาหลัก แต่เราไม่สามารถยกเว้นปฏิกิริยาการดัดแปลงอื่นๆ ได้อย่างเต็มที่ PA มีอยู่ในรูปของสารผสมที่ซับซ้อนในสารสกัดที่ไม่ได้ออกซิไดซ์ในขั้นต้น และของผสมเหล่านี้มีความซับซ้อนมากขึ้นหลังจากออกซิเดชันของอัลคาไลน์ทำให้เกิดข้อมูล MS จำนวนมาก ตัวอย่างเช่น การศึกษาก่อนหน้านี้เกี่ยวกับปฏิกิริยาออกซิเดชันที่เร่งปฏิกิริยาด้วยเบสและปฏิกิริยาการจัดเรียงใหม่ของ PA ได้แสดงให้เห็นว่า PC dimers สามารถสนทนาเป็นผลิตภัณฑ์ต่างๆ ของไอโซเมอไรเซชัน C-ring รวมถึง tetrahydroxypyranochromenes หรือที่เรียกว่า phlorotannins [15] ผลิตภัณฑ์เหล่านี้จะแสดงค่า m/z ที่คล้ายกันมากที่ 577 แต่เวลาเก็บรักษาต่างกันใน LC และรูปแบบการแตกแฟรกเมนต์ต่างกันใน MS ตาม EIC ที่ m/z 577 เราไม่ได้ตรวจพบการจัดเรียงใหม่ประเภทนี้ในสภาวะของปฏิกิริยาที่ใช้ การจัดเรียงใหม่และการเปิดของวงแหวน C ของเฮเทอโรไซคลิกยังสามารถผลิตผลิตภัณฑ์อื่นๆ ผ่านทางรีจิโอไอโซเมอไรเซชัน, อีพีเมอไรเซชัน หรือ 13-การย้ายถิ่นเอริล [15] epimerization ส่วนใหญ่เกี่ยวข้องกับกระบวนการผลิต และตัวอย่างเช่น อุณหภูมิสูงที่เกี่ยวข้องกับการคั่วโกโก้ทำให้เกิดการสูญเสียฟลาแวน-3-ol แต่ยังรวมถึง epimerization ของฟลาแวน-3-ol โมโนเมอร์ ไดเมอร์ และทริมเมอร์ [40]. นอกจากนี้ มีรายงานว่าโพลีฟีนอลออกซิเดสในเนื้อผลกล้วยทำให้เกิด epimerization ของ (-)-epigallocatechin ถึง (-)-gallocatechin[41] เราดูความเป็นไปได้ของ epimerization ของ flavan-3-ols โดยใช้ EIC ที่ m/z289 และโดยทั่วไป เราไม่ได้ตรวจพบ epimerization ที่มีนัยสำคัญที่เกิดจากการออกซิเดชันของอัลคาไลน์ที่ใช้ อย่างไรก็ตาม เราไม่สามารถแยก epimerization ได้ทั้งหมด เนื่องจากเราตรวจพบปริมาณ (บวก )-catechin ที่สัมพันธ์กับ (-)-epicatechin ในสารสกัดออกซิไดซ์ของดอกกะหล่ำดอก Pavonia ในปริมาณที่สูงกว่าสารสกัดที่ไม่ได้ออกซิไดซ์ในขั้นต้น (รูปที่ S1) นอกจากนี้ ยังต้องสังเกตด้วยว่าสารสกัดที่ถูกออกซิไดซ์ถูกทำให้เป็นกลางก่อน UHPLC-MS/MS ซึ่งอาจทำให้เกิดปฏิกิริยารีดอกซ์ ในรูปแบบออกซิไดซ์ quinones เป็นอิเล็กโทรฟิลที่สามารถทำปฏิกิริยากับน้ำที่มีนิวคลีโอฟิลิกอยู่ได้ และอาจส่งผลให้เกิดปฏิกิริยาการลดลงซึ่งทำให้เกิดพีซีประเภท B ซึ่งสามารถอธิบายได้ว่าทำไมพีซีประเภท B บางเครื่องจึงดูเหมือนไม่ได้รับผลกระทบ

flavonoids cardiovascular cerebrovasular

2.4.การปรับเปลี่ยนพีซีประเภท A ในสารสกัดจากพืชเนื่องจากการเกิดออกซิเดชันของอัลคาไลน์

พีซีชนิด A ในสารสกัดจากพืชหลายชนิดมีปฏิกิริยาแตกต่างกันเนื่องจากออกซิเดชันของด่าง ตัวอย่างบางส่วนไม่มีการดัดแปลงหรือดัดแปลงเล็กน้อย เมื่อสารสกัดจากพืชประเภทนี้อยู่ภายใต้การออกซิเดชันของอัลคาไลน์ จะไม่พบความแตกต่างที่มีนัยสำคัญในสเปกตรัมมวลรวม (เช่น ดูตารางที่ S3 สำหรับไอออนหลักที่สังเกตพบในสารสกัดจากใบของ Aglaonema commutatum var. maculatum ก่อนและหลังออกซิเดชัน) อย่างไรก็ตาม ความแตกต่างเล็กๆ น้อยๆ สามารถตรวจพบได้ในข้อมูลแมสสเปกโตรเมตรีแบบละเอียดซึ่งมีความแตกต่างของมวลเท่ากับ 2 Da และบอกเป็นนัยว่าการเชื่อมโยงอีเทอร์ประเภท A เพิ่มเติมสามารถเกิดขึ้นได้ ปรากฏการณ์นี้ชัดเจนมากขึ้นสำหรับบางตัวอย่างที่มีพีซีประเภท A; พบว่าพีซีประเภท A เหล่านี้สร้างการเชื่อมโยงอีเทอร์ประเภท A เพิ่มเติมเนื่องจากการออกซิเดชันของอัลคาไลน์ (รูปที่ 9) เมื่อสารสกัดจากพืชประเภทนี้ถูกออกซิไดซ์ จะตรวจพบความแตกต่างที่ชัดเจนในสเปกตรัมมวลรวมซึ่งแสดงความแตกต่างของมวล 2 Da เมื่อเปรียบเทียบกับพีซีประเภท A เริ่มต้น [MH]-ไอออนที่ m/z 863 สอดคล้องกับ PC trimer ที่มีพันธะอีเทอร์ประเภท A หนึ่งพันธะและไอออนที่ m/z 861 สำหรับเครื่องตัดแต่ง PC ที่มีตัวเชื่อมอีเทอร์สองจุด (รูปที่ 9A ). ในทำนองเดียวกัน tetrameric PC ที่มีการเชื่อมต่ออีเทอร์หนึ่ง สอง และสามถูกตรวจพบโดย [M -H]-ion ที่ m/z 1151, 1149 และ 1147 ตามลำดับ (รูปที่ 9B) ในสัดส่วน พีซีเพนทาเมอร์และเฮกซาเมอร์มีหนึ่งเครื่อง พันธะอีเทอร์สองและสามตัวถูกตรวจพบโดยไอออน [M -H]- ที่ m/z 1439, 1437 และ 1435 และที่ m/z 1727,1725 และ 1723 ตามลำดับ (รูปที่ 9C, D อย่างไรก็ตาม [M -2H]2-ion at m/z 861 ของ PC hexamer มีปริมาณมากกว่า [MH]-ion ที่ m/z 1723 อย่างชัดเจน ดังนั้น แสดงใน รูป).

Molecular ions with corresponding exact masses and molecular formulae for procyanidin oligomers with one or more A-type linkages from the leaflet extract of Tectaria macrodonta: (A) trimers, (B) tetramers, (C) pentamers, and (D) hexamers. The first ion of each oligomer (having one ether bond) is taken from the non-oxidized extract, and the other ions of the oligomer (having two or more ether bonds) from the oxidized extract. For A-type procyanidin hexamer with three ether bonds, the doubly charged ion was more abundant. Figure 9. Molecular ions with corresponding exact masses and molecular formulae for procyanidin oligomers with one or more A-type linkages from the leaflet extract of Tectaria macrodonta: (A) trimers, (B) tetramers, (C) pentamers, and (D) hexamers. The first ion of each oligomer (having one ether bond) is taken from the non-oxidized extract, and the other ions of the oligomer (having two or more ether bonds) from the oxidized extract. For A-type procyanidin hexamer with three ether bonds, the doubly charged ion was more abundant

การก่อรูปของตัวเชื่อมชนิด A เพิ่มเติมยังส่งผลต่อเวลาการคงอยู่ของโอลิโกเมอร์เหล่านี้ จำนวนการเชื่อมต่ออีเทอร์เพิ่มเติมดูเหมือนจะเพิ่มขึ้นบ้างตามระดับของโพลีเมอไรเซชันของพีซีที่เพิ่มขึ้น ซึ่งคาดว่าจะมีตำแหน่งเพิ่มเติมสำหรับพันธะเพิ่มเติม อย่างไรก็ตาม ต้องสังเกตด้วยว่าอาจมีสัญญาณเล็กน้อยที่มีความแตกต่างของมวล 2 Da ซึ่งสอดคล้องกับการเกิดออกซิเดชันหรือการก่อตัวของรูปแบบควิโนนของพีซีในระหว่างการแตกตัวเป็นไอออนตามที่กล่าวไว้ข้างต้น พีคเหล่านี้ยังมองเห็นได้ในแมสสเปกตรัมในรูปที่ 9 ก่อนพีคหลักที่สอดคล้องกับพีซีประเภท A ความอุดมสมบูรณ์ของไอออน รูปร่างของรูปแบบไอโซโทป และแฟรกเมนต์ไอออนที่มีลักษณะเฉพาะที่ได้รับจาก MS/MS ยืนยันการสังเกตของการเชื่อมโยงอีเทอร์ชนิด A เพิ่มเติม สิ่งสำคัญคือต้องสังเกตว่าปฏิกิริยาภายในโมเลกุลเหล่านี้ที่สังเกตได้ดูเหมือนจะไม่ส่งผลต่อระดับเฉลี่ยของการเกิดพอลิเมอไรเซชัน เนื่องจากไม่พบ PA oligomers หรือพอลิเมอร์ที่สูงขึ้นในสารสกัดที่ออกซิไดซ์เมื่อเปรียบเทียบกับสารสกัดที่ไม่ออกซิไดซ์ การสังเกตได้รับการสนับสนุนโดย Mouls และ Fulcrand (2012) [14]

2.5.สารสกัดจากพืชที่มี PA ที่มีทั้งหน่วยย่อย PC และ PD และการดัดแปลงเนื่องจาก Akaline Oxidation

ตัวอย่างจำนวนมากมี PA ที่มีทั้งหน่วย (epi) catechin และ (epi) gallocatechin กล่าวคือ PA เป็นส่วนผสมของ PC/PD ชะตากรรมของสารผสม PC/PD เหล่านี้เนื่องจากการดัดแปลงผ่านอัลคาไลน์ออกซิเดชันนั้นแตกต่างกันเมื่อเปรียบเทียบกับพีซี ตรวจพบสารผสม PC/PD อย่างชัดเจนในสารสกัดจากพืชก่อนการเกิดออกซิเดชันทั้งโดย UV และ MS; ดูตัวอย่างเช่น โอลิโกเมอร์ PA ขนาดเล็กในสารสกัดใบเริ่มต้นของ Podocarpus macrophyllus (รูปที่ 10A และตาราง S4) หลังจากออกซิเดชั่น PAs ที่ถูกดัดแปลงยังคงตรวจพบโดย UVat 280 nm เป็นชนิดที่แตกต่างกันและ/หรือโคกที่ล่าช้า (รูปที่ S2) แต่ MS ไม่พบพวกมันอีกต่อไป ดูตัวอย่างเช่น PA oligomers ที่หายไปในใบออกซิไดซ์ สารสกัดจาก Podocarpus microphallus (รูปที่ 10B และตาราง S4) เราไม่ได้ตรวจพบสัญญาณอื่นใดที่อาจสอดคล้องกับสารผสม PC/PD ที่ดัดแปลงหรือผลิตภัณฑ์ที่อาจเสื่อมสภาพได้ ตัวอย่างเช่น สำหรับ PC dimer ที่ m/z 577 เราสามารถตรวจจับ PC dimer A-type ที่สอดคล้องกันที่ m/z 575 ในสารสกัดที่ออกซิไดซ์ได้ แต่การสังเกตที่แตกต่างกันนั้นไม่สามารถทำได้สำหรับ PC/PD dimers หรือ trimers (รูปที่ 10B). สาเหตุของการสูญเสียโอลิโกเมอร์ PC/PD ที่ตรวจพบได้ใน ESI-MS เช่น ปฏิกิริยาระหว่างโมเลกุลระหว่าง PA [13-15,24,25] เป็นที่ทราบกันดีว่าปฏิกิริยาระหว่างโมเลกุลส่งผลให้เกิดการก่อตัวของ PA ที่ถูกดัดแปลงโดยการเชื่อมต่อของสายโอลิโกเมอร์ที่แตกต่างกันสองสาย และโดยปกติ พวกมันนำไปสู่การเพิ่มระดับเฉลี่ยของโพลีเมอไรเซชัน [14] ตัวอย่างเช่น Vernhet และคณะ (2014) สังเกตเห็นโดยการทดลองการกระเจิงด้วยรังสีเอกซ์แบบมุมเล็กว่าถ้า PA ถูกออกซิไดซ์ในสารละลายที่มีความเข้มข้น PAs ที่ถูกดัดแปลงจะเป็นพอลิเมอร์สูงที่มีสายโซ่ยาวเป็นเส้นตรงหรือเป็นกิ่งยาว [25] การเกิดออกซิเดชันเพิ่มเติมยังสามารถนำไปสู่การเป็นวัฏจักรระหว่างวงแหวน A และ B ของ PA ต่างๆ [24] นอกจากนี้ มีข้อสังเกตว่าพันธะและโครงสร้างใหม่เหล่านี้ทนต่อการแตกแยกที่เกิดจากกรดด้วยตัวเร่งปฏิกิริยา ดังนั้น การเพิ่มระดับเฉลี่ยของโพลีเมอไรเซชันสามารถประมาณได้โดยวิธีการที่ไม่ทำให้เกิดปฏิกิริยาดีพอลิเมอไรซิ่งเท่านั้น [14,24 อย่างไรก็ตาม ผลลัพธ์ของเราแสดงให้เห็นว่า PA ที่ดัดแปลงเหล่านี้ไม่ถูกตรวจพบภายใต้เงื่อนไข ESI-MS มาตรฐานที่ใช้สำหรับ PA (รูปที่ 10) ในการศึกษาก่อนหน้านี้ เราใช้วิธีการตามการตรวจสอบปฏิกิริยาที่เลือกโดยทริปเปิลควอดรูโพลเพื่อตรวจจับ PA ในตัวอย่างที่ไม่ออกซิไดซ์และออกซิไดซ์ และสังเกตว่าองค์ประกอบของหน่วยย่อยเปลี่ยนไปเนื่องจากการออกซิเดชันของอัลคาไลน์ ดังนั้นวิธีการนี้จึงไม่สามารถตรวจจับได้อีกต่อไป PA ที่แก้ไข [13] ผลลัพธ์ MS ที่มีความละเอียดสูงในปัจจุบันสนับสนุนข้อสังเกตก่อนหน้านี้ของเราโดย Triple Quadrupole ว่า PA ที่ดัดแปลงในสารสกัดออกซิไดซ์นั้นซับซ้อนกว่า PA เริ่มต้นในสารสกัดที่ไม่ออกซิไดซ์มาก และตรวจไม่พบภายใต้สภาวะ UPLC-MS/MS ที่คล้ายคลึงกัน [13].

The mass spectra of small mixed B-type oligomeric procyanidins (PCs) and prodelphinidins (PDs) in the non-oxidized (A) and oxidized (B) leaf extract of Podocarpus macrophyllus. The exact masses of main ions are listed in Table S4. The abundances of the ions are fixed to normalized intensity of 6.9 × 106

วิธีการที่ใช้สำหรับการเกิดออกซิเดชันของ PA ในเอกสารประกอบการค่อนข้างแตกต่างจากวิธีการของเรา ดังนั้น ผลลัพธ์จึงไม่สามารถเปรียบเทียบได้โดยตรง [14,24,25] ในการศึกษาก่อนหน้านี้ การเกิดออกซิเดชันได้ดำเนินการในน้ำที่ทำให้เป็นกรดด้วยกรดไตรฟลูออโรอะซิติกที่ pH 3.5 เพื่อเลียนแบบ pH ของไวน์ และได้ออกซิเดชันที่เกิดขึ้นจริงโดยการกวนตัวอย่างในที่ที่มีอากาศเป็นเวลาหลายวัน [14,24, 25]. เราใช้อัลคาไลน์ออกซิเดชันโดยบัฟเฟอร์คาร์บอเนตที่ pH 10 เป็นเวลาหนึ่งชั่วโมงเท่านั้น

สารสกัดจากพืชส่วนใหญ่เกี่ยวข้องกับ PA กับทั้ง PC และ PDsubunits และในสองตัวอย่างเท่านั้น PAs ที่ถือว่าเกือบจะเป็น PD บริสุทธิ์ ตัวอย่างทั้งสองนี้เป็นสารสกัดจาก Callisiagenti varelegans และ Pellaea ooata ตรวจพบ PDs ประเภท B ใน Callisia Gentle var สารสกัด Elegans ก่อนการเกิดออกซิเดชัน ดู ตัวอย่างเช่น โอลิโกเมอร์ PD ขนาดเล็กในตาราง S5 แต่หลังจากออกซิเดชัน MS ไม่พบ PD เหล่านี้อีกต่อไป เราไม่ได้ตรวจพบสัญญาณอื่นใดที่อาจสอดคล้องกับ PD ที่ดัดแปลงหรือผลิตภัณฑ์ที่อาจเสื่อมสภาพได้ อย่างไรก็ตาม PAs ที่ถูกดัดแปลงบางส่วนยังคงตรวจพบโดย UV ที่ 280 นาโนเมตรในลักษณะโคกที่ต่ำกว่าและล่าช้า (รูปที่ S3) ที่น่าสนใจ ก่อนการเกิดออกซิเดชัน มีการตรวจพบ PDs trimeric ชนิด A ในการดึงข้อมูล Pellaea และหลังจากการเกิดออกซิเดชัน สัญญาณเหล่านี้ยังคงมีอยู่ แต่ความเข้มของพวกมันลดลงอย่างมาก

โดย MS และนอกจากนี้ ค่า m/z ที่สอดคล้องกับการก่อตัวของการเชื่อมโยงประเภท A เพิ่มเติมในเครื่องตัดแต่ง PD ถูกตรวจพบในลักษณะเดียวกันกับ PC ชนิด A (ตาราง S6) นี่อาจบ่งชี้ว่านอกเหนือจากปฏิกิริยาระหว่างโมเลกุลที่สังเกตพบสำหรับ PD โฮโม-ชนิด B และ PD ต่างกันแล้ว PD ประเภท A อาจมีปฏิกิริยาภายในโมเลกุลที่คล้ายกันซึ่งตรวจพบสำหรับพีซีประเภท A

2.6. Galloulated PAs ในสารสกัดจากพืชและการดัดแปลงเนื่องจากอัลคาไลน์ออกซิเดชัน

พืชบางชนิดมีสาร PA การมีอยู่ของ PCs, PDs และ PC/PDs ที่จัดสรรในสารสกัดจากพืชได้รับการยืนยันโดยรูปแบบการกระจายตัวของลักษณะเฉพาะ โดยทั่วไป การแตกแฟรกเมนต์ของ PA ที่ถูกใส่ถุงในการวิเคราะห์ MS เกิดขึ้นในทำนองเดียวกันผ่านกลไก RDA, HRF และ QM ตามที่อภิปรายไว้ข้างต้น [31-33] ตัวอย่างเช่น เส้นทางการกระจายตัวของลักษณะเฉพาะและข้อมูล MS/MS ของ PC dimer แบบแกลโลเลตในสารสกัดจากใบของ Ruprechtia salicifolia ถูกแสดงและอภิปรายในรายละเอียด (รูปที่ 11) ตำแหน่งของหมู่แกลลอยด์เป็นเพียงการบ่งชี้เท่านั้น และสามารถติดกับหมู่ไฮดรอกซิลอิสระอื่นๆ ในเทอร์มินัลยูนิต ไอออนที่ m/z603 คือการผลิต HRF ไอออนที่ m/z 287 และ 441 สอดคล้องกับการตัดแยก QM นอกจากนี้ เราตรวจพบความแตกแยกของกลุ่มแกลโลอิลซึ่งทำให้เกิดไอออนที่สอดคล้องกับ PC dimer ที่ m/z577 และการแยกส่วน RDA ที่ตามมาด้วยไอออนที่ m/z425 และการแยกน้ำเพิ่มเติมด้วยไอออนที่ m/z 407 HRF ของ m/z 577 ผลิตแฟรกเมนต์ไอออนที่ m/z 451 นอกจากนี้ เราตรวจพบแฟรกเมนต์ไอออนขนาดเล็กที่ m/z 109,123 และ 125 ซึ่งสอดคล้องกับวงแหวนอะโรมาติก PA ที่ถูกแกลโลอิลสามารถประกอบด้วยหมู่แกลโลอิลหลายหมู่ในโครงสร้างของพวกมัน (ตารางที่ S7)

ntation pathway and the MS/MS of a galloylated procyanidin dimer in the leaf extract of Ruprechtia salicifolia. The position of the galloyl group is only indicative and could be any free OH group in the terminal unit. The mechanisms are heterocyclic ring fission (HRF), retro-Diels‒Alder (RDA) fragmentation and quinone methide (QM) cleavage. Figure 11. Characteristic fragmentation pathway and the MS/MS of a galloylated procyanidin dimer in the leaf extract of Ruprechtia salicifolia. The position of the galloyl group is only indicative and could be any free OH group in the terminal unit. The mechanisms are heterocyclic ring fission (HRF), retro-Diels-Alder (RDA) fragmentation and quinone methide (QM) cleavage.

PAs ที่มีแกลลอเลตที่แตกต่างกันจะมีพฤติกรรมแตกต่างกันระหว่างการเกิดออกซิเดชันทางอากาศภายใต้สภาวะที่เป็นด่าง พีซีแบบ Galloylated ค่อนข้างเสถียรและมีปฏิกิริยาคล้ายกับพีซีที่ไม่ผ่านการเคลือบผิว ตัวอย่างเช่น ไม่พบการเปลี่ยนแปลงที่โดดเด่นสำหรับ PC ที่มีแกลโลอิลซึ่งมีกลุ่มแกลโลอิลหนึ่งกลุ่มในโครงสร้างของพวกเขาในสารสกัดจากใบออกซิไดซ์ของหม้อข้าวหม้อแกงลิง (ตารางที่ S7) อย่างไรก็ตาม ต้องสังเกตว่าความเข้มข้นของไอออนสำหรับ PC ที่ผ่านการเคลือบด้วยแก๊สซึ่งมีกลุ่มแกลลอยด์ตั้งแต่สองกลุ่มขึ้นไปนั้นต่ำกว่าในสารสกัดออกซิไดซ์ของหม้อ Nepenthes maxima และตัวอย่างเช่น เพนทาเมอร์ PC ที่ผ่านการเคลือบด้วยแกลลอยที่มีกลุ่มในห้องครัวหลายกลุ่มนั้นไม่สามารถตรวจพบได้อีกต่อไป (ตาราง ส7). ค่าจำนวนเต็ม m/z สำหรับพีซีบางรุ่นจะคล้ายกับค่า m/z สำหรับ PC/PD ดังนั้น จึงต้องใช้ MS ที่มีความละเอียดสูงพิเศษ ตัวอย่างเช่น m/z 881 สอดคล้องกับ trimeric PA ที่ประกอบด้วย PC สองตัวและหน่วย PD หนึ่งหน่วย (C4sH3; O19, mcalculated 882.20074) และ PC dimer ที่มี Galloylated ซึ่งมีกลุ่ม Galloyl สองกลุ่ม (C44H34O20, mcalculated,882.16435) ในบางตัวอย่าง เช่นในสารสกัดใบออกซิไดซ์ของ Coccoloba uvifera พีซีที่ผ่านการเคลือบด้วยแกลโลอิเลตถูกแปลงเป็นพีซีที่มีถุงน้ำดีชนิด A เนื่องจากการเกิดออกซิเดชัน แม้ว่า PA ที่ถูกแกลโลอิเลตในสารสกัดเริ่มแรกจะดูคล้ายกับในหม้อข้าวหม้อแกงลิง ตัวอย่างเช่น PC dimer ที่จัดสรรซึ่งมีหนึ่ง galloylgroup และแสดงไอออน m/z 729 (ตารางที่ S7) มีความคงตัวในระหว่างการออกซิเดชันของอัลคาไลน์ในสารสกัดจากใบของ Nepenthes maxima แต่ถูกดัดแปลงบางส่วนในสารสกัดจากใบของ Coccoloba ugifera แสดงไอออนทั้งสองที่ m /z 727 และ 729 ไอออนเดิมสอดคล้องกับ PCdimer ชนิด A galloylated (m/z727.13148, C37H2O16) และแสดงชิ้นส่วน MS/MS ที่มีลักษณะเฉพาะที่รองรับการเชื่อมโยงประเภท A:m/z601 (ผลิตภัณฑ์ HRF ของ m/z 727),575(PCdimer ชนิด A), 557 (ความแตกแยกของน้ำจาก m/z575),449 (HRF ของ m/z575, ดูรูปที่ 4),423(RDA ของ m/z 575, ดูรูปที่ 4),285 (QM ของ m/z575 ดูรูปที่ 4), 169 (กรดแกลลิก), 125 (ดูรูปที่ 11) และ 109 (ดูรูปที่ 11) เหตุผลหนึ่งสำหรับความแตกต่างเหล่านี้ใน PA ที่คล้ายคลึงกันระหว่างสารสกัดจากพืชอาจเป็นสารประกอบอื่นๆ ที่มีอยู่ในสารสกัดและส่งผลต่อปฏิกิริยาของ PA

ของผสม PC/PD ที่ถูกแกลโลเลตและ PD ถูกทำปฏิกิริยาและถูกดัดแปลงในทำนองเดียวกันกับของผสม PC/PD ที่ไม่เป็นแกลลอเลตและ PD หลังจากการออกซิเดชัน MS ตรวจไม่พบ PA เหล่านี้ แม้ว่าจะยังคงมองเห็นได้ที่ UV ที่ 280 นาโนเมตร เราไม่ได้ตรวจพบสัญญาณอื่นๆ ที่อาจสอดคล้องกับ PA ที่ดัดแปลงเหล่านี้หรือผลิตภัณฑ์ที่อาจเสื่อมสภาพได้ ในตัวอย่างหนึ่ง กล่าวคือ ในใบ Acacia karroo UV ที่ 280 นาโนเมตรตรวจไม่พบ PDs ที่ถูกแกลโลอิเลตและไม่ใช่ของแกลลอยด์ที่ถูกดัดแปลง

ในการศึกษาก่อนหน้าของเรา [13] โดยที่ PAs ในสารสกัดที่ไม่ได้ออกซิไดซ์และออกซิไดซ์ถูกวิเคราะห์โดยวิธีการตรวจสอบปฏิกิริยาที่เลือก เราสังเกตเห็นว่าตรวจพบโคนแกลโลอิลที่ชัดเจนด้วยวิธี MS/MS จำเพาะของแกลโลอิลในตัวอย่างที่ออกซิไดซ์ แต่รูปร่าง ของโคกมีการเปลี่ยนแปลงและเลื่อนไปตามโคกที่สังเกตพบในโครมาโตแกรม UV PAs ที่ถูกแกลลอฟเลตดั้งเดิมได้รับการแก้ไขในลักษณะที่ยังสามารถตรวจจับกลุ่มแกลโลอิลได้ด้วยวิธีการเฝ้าสังเกตปฏิกิริยาที่เลือก [13] การศึกษาก่อนหน้านี้เกี่ยวกับ (-)-epigallocatechin gallate และ (-)-epigallocatechin ได้แสดงให้เห็นว่า trihydroxyphenyl B-ring เป็นตำแหน่งหลักของการเกิดออกซิเดชัน และไม่มีผลิตภัณฑ์ที่ตรวจพบได้ซึ่งเป็นผลมาจากการเกิดออกซิเดชันของ galloyl moiety [42] อย่างไรก็ตาม สภาวะของปฏิกิริยาที่ใช้และผลิตภัณฑ์ออกซิเดชันที่ได้รับนั้นค่อนข้างแตกต่างเมื่อเทียบกับการศึกษาของเรา เนื่องจากการเกิดออกซิเดชันเกิดขึ้นกับอนุมูลเพอร์ออกซิลที่สร้างขึ้นโดยเทอร์โมไลซิสของตัวเริ่มต้น azo 2,2'-azobis(2,4-dimethylvaleronitrile) [42].

นอกจาก PA ที่ควบแน่นแล้ว ยังมีตัวอย่างอีก 2 ตัวอย่างคือ Cephalotaxus harringtomia subsp. แผ่นพับ drupaceous และใบ Laurus nobilis ดูเหมือนจะมีเครื่องพีซีที่มีไกลโคซิเลตซึ่งมีหน่วยน้ำตาลหนึ่งหน่วยติดอยู่กับโครงสร้างพีซีหนึ่งเครื่อง พบว่าพีซีประเภท glycosylated B-type บางเครื่องแปลงเป็นพีซีประเภท glycosylated A ในระหว่างการออกซิเดชันที่เป็นด่างโดยไม่เกิดความแตกแยกของหน่วยน้ำตาล นอกจากนี้ยังตรวจพบการก่อตัวของการเชื่อมโยงอีเธอร์เพิ่มเติมกับพีซีประเภท A

flavonoids antioxidant

3. วัสดุและวิธีการ

การรวบรวมวัสดุจากพืช การแปรรูป และการสกัด นอกจากนี้ การออกซิเดชันที่ pH 1{{10}} ได้ดำเนินการตามที่รายงานไว้ก่อนหน้านี้ [13] การศึกษาครั้งแรกมีตัวอย่าง 102 ตัวอย่าง ซึ่งเราวิเคราะห์อีก 55 ตัวอย่าง (ตารางที่ S8) สำหรับการออกซิเดชั่นทางอากาศ สารสกัดแต่ละชนิด 20μLof ถูกออกซิไดซ์ด้วย 18{{40}}uL ของ pH 1{{60}}บัฟเฟอร์ เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง การเกิดออกซิเดชันถูกหยุดโดยการเติม 100 uL ของ HCOOH ที่เป็นน้ำ 0.6 เปอร์เซ็นต์ นอกจากนี้ น้ำ 280 μLof ถูกเติมลงใน 20 μL ของการเริ่มต้นที่ไม่ถูกออกซิไดซ์ก่อนการวิเคราะห์ เพื่อให้ได้ปริมาตรสุดท้ายที่ 300 uL สำหรับทั้งตัวอย่างที่ไม่ถูกออกซิไดซ์และออกซิไดซ์ การวิเคราะห์แมสสเปกโตรเมทรีความละเอียดสูงพิเศษถูกดำเนินการโดย UPLC-DAD-ESI-QOrbitrap-MS/MS เครื่องมือนี้ประกอบด้วยระบบ Acquity UPLC (Waters Corp., Milford, MA, USA) ร่วมกับแมสสเปกโตรมิเตอร์แบบ quadrupole-Orbitrap (QExactiveTM, Thermo Fisher Scientific GmbH, Bremen, Germany) คอลัมน์ที่ใช้คือคอลัมน์ Acquity UPLC BEH Phenyl (2.1 ×100 mm,1.7 um, Waters Corp., Wexford, Ireland) สารชะคือ A= อะซีโตไนไตรล์และ B=0.1 เปอร์เซ็นต์ HCOOH.A อัตราการไหล 0.5 มิลลิลิตรต่อนาที-1 ถูกใช้ และโปรไฟล์การชะมีดังต่อไปนี้:0-0 5 นาที 0.1 เปอร์เซ็นต์ A ใน B(ไอโซเครติก);0.5-5 นาที,0.1-30 เปอร์เซ็นต์ A ใน B(เกรเดียนต์เชิงเส้น);5-6นาที 30 เปอร์เซ็นต์ {{44} } เปอร์เซ็นต์ A ใน B(การไล่ระดับสีเชิงเส้น);6-6.1 นาที, 35-90 เปอร์เซ็นต์ A ใน B(การไล่ระดับสีเชิงเส้น); 6.1-9.5 นาที ล้างคอลัมน์และปรับสมดุลใหม่ ปริมาตรของการฉีดคือ 5 ไมโครลิตร ข้อมูล UV （λ=190-500นาโนเมตร） และ MS ถูกบันทึกตลอดการวิเคราะห์ ไอออนไนซ์เชิงลบถูกใช้ในแหล่ง ESI ที่ให้ความร้อนด้วยแรงดันสเปรย์ -3.0 kV, อัตราการไหลของก๊าซฝัก (N2) ที่ 60, อัตราการไหลของก๊าซเสริม (N2) ที่ 20, อัตราการไหลของแก๊สกวาดที่ 0 อุณหภูมิของเส้นเลือดฝอยบวก 380 องศาและความแตกแยกที่เกิดจากการชนกันของแหล่งกำเนิด (CID) ที่ 30 eV สำหรับการสแกน MS แบบเต็ม ช่วงมวลของออร์บิแทรปคือ m/z150-2250 ความละเอียด 35000 และการควบคุมเกนอัตโนมัติ3×10* สำหรับการวิเคราะห์ MS/MS คือ dd-MS2(TopN) พารามิเตอร์มีดังต่อไปนี้: TopN 3; พลังงานการชนแบบปกติแบบขั้นบันได 20, 50 และ 80 eV ความละเอียด 17,500 และการควบคุมอัตราขยายอัตโนมัติ 1×105 การสอบเทียบดำเนินการโดย Pierce ESI Negative Ion Calibration Solution (Thermo Fisher Scentific Inc., Waltham, MA, USA) ข้อมูลได้รับการประมวลผลด้วยซอฟต์แวร์ Thermo Xcalibur Oral Browser (เวอร์ชัน 3.0.63, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA) ตามที่ได้ตัวอย่างที่ถูกออกซิไดซ์โดยใช้บัฟเฟอร์โซเดียมคาร์บอเนต (pH 10) โซเดียมที่ก่อรูปคลัสเตอร์ไอออนด้วยกรดฟอร์มิกในระหว่างการวิเคราะห์ UHPLC-MS/MS ดังนั้น ที่จุดเริ่มต้นของแต่ละโครมาโตแกรมไอออนรวมของตัวอย่างที่ออกซิไดซ์ ตรวจพบจุดสูงสุดที่แรงของกลุ่มรูปแบบโซเดียม (ตารางที่ S9) ตรวจพบรูปแบบได้ง่ายและไม่ส่งผลต่อการวิเคราะห์ PA แฟรกเมนต์ไอออน MS/MS ของโอลิโกเมอร์ PA ขนาดเล็กถูกแสดงไว้ในตาราง S10

cistanche extract powder

4. บทสรุป

ในการศึกษานี้ เราวิเคราะห์องค์ประกอบ PA ของสารสกัดจากพืช 55 ชนิดก่อนและหลังการออกซิเดชั่นอัลคาไลน์โดย UHPLC-MS/MS ความละเอียดสูงพิเศษ (ตารางที่ S8) โครงสร้าง PA ตามธรรมชาติประกอบด้วยพีซีประเภท A และ B, PD และ PC/PDmixtures นอกเหนือจากที่ได้รับการจัดสรร องค์ประกอบของ PA นั้นซับซ้อน และจำเป็นต้องใช้ MS ที่มีความละเอียดสูงพิเศษเพื่อวัดมวลที่แน่นอนและสูตรโมเลกุลที่สอดคล้องกันของ PA ที่หลากหลาย พีซีชนิด B ในสารสกัดจากพืชต่างชนิดกันค่อนข้างเสถียรและไม่มีการดัดแปลงหรือเปลี่ยนแปลงเล็กน้อยเนื่องจากการออกซิเดชันของอัลคาไลน์ สำหรับตัวอย่างบางส่วน เราตรวจพบปฏิกิริยาภายในโมเลกุลของพีซีที่สร้างการเชื่อมโยงอีเทอร์ชนิด A พีซีประเภท A ก็ค่อนข้างเสถียรโดยไม่มีการดัดแปลงใดๆ เลย แต่ในโรงงานบางแห่ง ตรวจพบการก่อตัวของการเชื่อมโยงอีเทอร์เพิ่มเติม สารสกัดจากพืชที่มีหน่วย PD ใน PA (ไม่ว่าจะเป็น PD บริสุทธิ์หรือของผสม PC/PD) มีปฏิกิริยามากกว่า หลังจากการออกซิเดชันของอัลคาไลน์ PA เหล่านี้หรือผลิตภัณฑ์ออกซิเดชันของพวกมันไม่ถูกตรวจพบโดย MS อีกต่อไป แม้ว่า UV ที่ 280 นาโนเมตรชนิดอื่นและ/หรือแบบหน่วงเวลาจะยังตรวจพบ ปฏิกิริยาระหว่างโมเลกุลระหว่าง PA อาจปรับเปลี่ยน PA เหล่านี้เพื่อไม่ให้ตรวจพบภายใต้สภาวะ ESI-MS มาตรฐาน การศึกษาก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่า PA ที่ดัดแปลงเหล่านี้ไม่สามารถศึกษาด้วยวิธีการสลายตัว ดังนั้นจึงจำเป็นต้องมีวิธีการวิเคราะห์แบบใหม่สำหรับการระบุและการกำหนดลักษณะ PAs แบบแกลลอเลตค่อนข้างคงตัวภายใต้การออกซิเดชันของอัลคาไลน์หากพวกมันมีพื้นฐานมาจาก PC แต่การเชื่อมโยงอีเทอร์เพิ่มเติมถูกก่อรูปซึ่งสนับสนุนการแปลงของ PA ชนิด B ที่ถูกแกลโลเลตไปเป็น PA ชนิด A ที่ถูกแกลโลเลต PA ที่มีหมู่แกลลอยด์สองหมู่หรือมากกว่านั้นมีปฏิกิริยามากกว่ากลุ่มที่มีเพียงกลุ่มเดียว ของผสม PC/PD แบบ Gallovlated และ PDs มีปฏิกิริยาตอบสนองมากกว่าและมีปฏิกิริยาในทำนองเดียวกันกับของผสมที่ไม่เป็นกรด อย่างไรก็ตาม จะต้องสังเกตว่าปฏิกิริยาภายในและระหว่างโมเลกุลไม่เป็นข้อยกเว้น และปฏิกิริยาเหล่านี้อาจเกิดขึ้นพร้อมกันได้ นอกจากนี้ เมทริกซ์พืชและสารประกอบอื่นๆ ที่มีอยู่ยังส่งผลต่อปฏิกิริยาเหล่านี้


คุณอาจชอบ