Iridoids ต้านการอักเสบจากลำต้นของ Cistanche Deserticola ที่เพาะเลี้ยงในทะเลทรายทาริม

ติดต่อ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 อีเมล:audrey.hu@wecistanche.com

บทคัดย่อ

เพื่อกำหนดองค์ประกอบทางเคมีของCistanche deserticolaเพาะเลี้ยงในทะเลทรายทาริม มีการตรวจสอบไฟโตเคมิคอลอย่างเป็นระบบ ส่วนประกอบถูกแยกออกโดยซิลิกาเจล, Sephadex LH-20, เจล MCI, โครมาโตกราฟีแบบคอลัมน์ ODS และ HPLC กึ่งเตรียมการ โครงสร้างของพวกเขาถูกกำหนดบนพื้นฐานของการวิเคราะห์สเปกโตรสโกปี MS และ NMR โดยวิธีทางเคมีและ / หรือเปรียบเทียบกับข้อมูลวรรณกรรม กิจกรรมต้านการอักเสบของไอโซเลตได้รับการประเมินสำหรับผลการยับยั้งของพวกมันต่อการผลิตไนตริกออกไซด์ (NO) ที่เหนี่ยวนำโดยไลโปโพลีแซคคาไรด์ (LPS) ในเซลล์ไมโครเกลียของหนูเมาส์ BV-2 ไอริดอยด์เก้าชนิดถูกแยกออกและระบุว่าเป็นcistanche ทะเลทรายA (1), ซิสตานิน (2), ซิสตาคลอริน (3), 6-ดีออกซีคาทัลโพล (4), กลูโรไซด์ (5), แคนคาโนไซด์ เอ (6), อาจูกอล (7), บาร์ทซิโอไซด์ (8) และ {{9 }}กรดเอพิ-โลกานิก (9). สารประกอบ 9 แสดงการยับยั้งที่มีศักยภาพบนการผลิต NO ที่มีค่า IC50 เป็น 5.2 ไมโครโมล·L-1, เทียบได้กับเควอซิตินกลุ่มควบคุมเชิงบวก (4.3 ไมโครโมล·L-1) สารประกอบ 1 คืออิริดอยด์ใหม่และสารประกอบ 5, 6 และ 8 ถูกแยกออกจากสปีชีส์นี้เป็นครั้งแรก

[คำสำคัญ] Cistanche deserticola; อิริดอยด์; การอธิบายโครงสร้าง ฤทธิ์ต้านการอักเสบ

Cistanche deserticola

บทนำ

ซิสตันเชส เฮอร์บา(Roucongrong ในภาษาจีน) ที่อยู่ในวงศ์ Orobanchaceae มีการกระจายพันธุ์ในแอฟริกาเหนือ อาระเบีย และประเทศในเอเชียเป็นหลัก [1] เป็นยาชูกำลังที่รู้จักกันดีในการแพทย์แผนจีน (TCM) ลำต้นของCistancheทะเลทรายและCistanchetubulosaมีการใช้กันอย่างแพร่หลายในประเทศจีนและญี่ปุ่นในการรักษาภาวะไตพร่อง ภาวะมีบุตรยากในสตรี โรคตกขาวผิดปกติ โรคประสาทอ่อน และอาการท้องผูกในวัยชรา [2-3] การตรวจสอบไฟโตเคมิคอลครั้งก่อนมี

[ทุนวิจัย] โครงการนี้ได้รับการสนับสนุนทางการเงินจากมูลนิธิวิทยาศาสตร์ธรรมชาติแห่งชาติของจีน (หมายเลข 81222051) โครงการวิจัยทางวิทยาศาสตร์ของการแพทย์แผนจีน (หมายเลข 201307002) และโครงการวิจัยและพัฒนาเทคโนโลยีหลักแห่งชาติ "นวัตกรรมยาใหม่" ของจีน

ผู้เขียนเหล่านี้ไม่มีส่วนได้เสียที่จะประกาศ จัดพิมพ์โดย Elsevier BV สงวนลิขสิทธิ์ระบุว่ามีฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์(PhGs), iridoids, lignans และ polysaccharides ในCistancheสปีชีส์ [4] และไอโซเลทบางตัวแสดงฤทธิ์ในการป้องกันระบบประสาท ตับ ต้านการอักเสบ ต้านแบคทีเรีย ต้านไวรัส และต้านอนุมูลอิสระ [5-6]

ในช่วงปลายทศวรรษ 1990 เพื่อปกป้องบ่อน้ำมัน Tazhong และควบคุมทะเลทราย โรงงานตรึงทราย Haloxylon ammodendron (CA Mey.) Bunge ซึ่งเป็นเจ้าภาพของCistancheทะเลทรายได้รับการแนะนำจากเหนือจรดใต้ของซินเจียงและปริมาณมากของค. ทะเลทรายิโคลาถูกเพาะเลี้ยง สภาพภูมิอากาศและสภาพแวดล้อมการเจริญเติบโตทางตอนใต้แตกต่างจากตอนเหนือของซินเจียงอย่างมาก ไม่ว่าจะเป็นองค์ประกอบทางเคมีของCistancheทะเลทรายที่เพาะเลี้ยงทางตอนใต้ของซินเจียงแตกต่างกันหรือไม่ไม่ชัดเจน เพื่อกำหนดองค์ประกอบทางเคมีของCistancheทะเลทรายเพาะเลี้ยงในทะเลทรายทาริม ได้ทำการตรวจสอบไฟโตเคมิคัลอย่างเป็นระบบในการศึกษานี้ ในที่นี้ มีการรายงานการแยกและการอธิบายโครงสร้างของอิริดอยด์ไกลโคไซด์ (1) ร่วมกับสารอะนาล็อกที่รู้จักแปดชนิด (2–9) พร้อมกับกิจกรรมต้านการอักเสบของพวกมัน

ฤทธิ์ต้านการอักเสบของCistanche deserticola

ผลลัพธ์และการอภิปราย

สารสกัดเอทานอลในน้ำร้อยละ 85 ของลำต้นของCistancheทะเลทรายถูกแขวนลอยใน H2O (10 ลิตร) และสกัดด้วย EtOAc (10 ลิตร × 3) และ n-BuOH ตามลำดับ สารสกัด EtOAc และ n-BuOH อยู่ภายใต้ซิลิกาเจล, Sephadex LH-20, เจล MCI และโครมาโตกราฟีคอลัมน์ ODS (CC) และ HPLC แบบกึ่งเตรียมเพื่อให้ได้ไอริดอยด์ใหม่ (1) และแปดชนิดที่รู้จัก ({ {9}}) (รูปที่ 1).

สารประกอบ 1 ถูกแยกเดี่ยวในลักษณะผงอสัณฐานสีขาวที่มีการหมุนเชิงแสงเป็นลบ ([a]20 –118.0, c 0.1, MeOH) สเปกตรัมอินฟราเรดของมันแสดงให้เห็นแถบการดูดกลืนที่แรงที่ประมาณ 3 393 ซม.-1 ที่สามารถระบุได้จากกลุ่มไฮดรอกซี มีสูตรโมเลกุลของ C16H26O9 ที่กำหนดโดยไอออนกึ่งโมเลกุลที่ m/z 385.148 5 [M บวก Na] บวก (Calcd. สำหรับ C16H26O9Na, 385.146 9) และ m/z 401 .122 8 [M บวก K] บวก (คำนวณสำหรับ CHOK, 401120 8) ความสัมพันธ์จาก H-1 ถึง C-1′, H-10 ถึง C-7, C-8 และ C-9 และจาก H-11 ถึง C-3, C-4 และ C{{32 }} ยังสนับสนุนการอธิบายข้างต้น

สเตอริโอเคมีของสารประกอบ 1 ถูกกำหนดโดยการเปรียบเทียบการเปลี่ยนแปลงทางเคมีและค่าคงที่การมีเพศสัมพันธ์กับข้อมูลวรรณกรรมและโดยการวิเคราะห์สเปกตรัม NOESY ความสัมพันธ์ของ H-5 กับ H-9 ถูกกำหนดหาเป็น cis จากค่าคงที่การมีเพศสัมพันธ์ (10.5 Hz) [8-9] สำหรับอิริดอยด์ที่เป็นธรรมชาติที่สุด การกำหนดค่าของ C-1-OH, H-5 และ H-9 คือ และการเปลี่ยนแปลงทางเคมี 13C NMR ของ C{{10} } และ C-1′ โดยทั่วไปอยู่ที่ δC 93–98 และ 97–101 ตามลำดับ ในขณะที่สำหรับการกำหนดค่า - เสียงสะท้อนของ C-1 และ C-1′ โดยเฉลี่ยแล้ว ดาวน์ฟิลด์ 5–6 เลื่อน [10-11] ข้อมูล 13C NMR ของ com-16 26 9 ใน ( บวก )-HR-ESIMS และรองรับโดยข้อมูล 13C NMR (ตารางที่ 1) ซึ่งระบุ 4 องศาของความไม่อิ่มตัว ข้อมูลไฮโดรไลซิสของกรด−1ตาราง 1 1H NMR (500 MHz) และ 13C NMR (125 MHz) ของ 1 (δ ใน ppm, J ใน Hz) ของสารประกอบ 1 ที่มี 2 โมล, L ของกรดไตรฟลูออโรอะซิติกมี D-glucose, ซึ่งระบุได้โดยการวิเคราะห์อนุพันธ์ไซเลนโดยการวิเคราะห์ GC การกำหนดค่าสัมพัทธ์ที่จุดศูนย์กลางอะโนเมอร์ของกลูโคซิลถูกกำหนดจากค่าคงที่ของคัปปลิ้งที่ 8.0 เฮิรตซ์ ข้อมูล 1H และ 13C NMR (ตารางที่ 1) ของสารประกอบ 1 ซึ่งถูกกำหนดไว้อย่างชัดเจนโดยการทดลอง 2D NMR ต่างๆ แสดงสัญญาณที่กำหนดให้กับเมทิลสองตัวที่ δH 1.23 (3H, s, H-10) และ 1.52 (3H, br s, H-11), หนึ่งเมทิลีนที่ δH 1.70 (1H, dt, J=13.5, 5.5 Hz, H-6 ) และ 1.92–1.98 (1H, m, H -6 ), สาม methines ที่ δH 2.47 (1H, br d, J= 10.5 Hz, H-9), 2.67–2.72 (1H, m, H-5 ) และ 3.62 (1H, t-like, J= 5.5 Hz, H-7) และ , -หมู่อะซีตัลไม่อิ่มตัว δH 5.40 (1H, d, J=2 0 Hz, H-1), 5.92 (1H, br s, H-3), ร่วมกับโปรตอน -D-glucopyranosyl anomeric ที่ δH 4.61(1H, d, J=8 0 Hz, H-1′) ข้อมูล 1H และ 13C NMR ของสารประกอบ 1 มีความคล้ายคลึงกันอย่างมากกับข้อมูลของด้านลังกา A (6) ยกเว้นสัญญาณที่แยกส่วนอย่างชัดเจนของ H-7 [δH 3.62 (1H, t-like, J=5 .5 Hz)] และ C-7 (δC 79.8) ซึ่งบ่งชี้ไฮดรอกซิเลชันของตำแหน่ง C-7 [7] การหักนี้ได้รับการสนับสนุนโดยการวิเคราะห์ 1H-1H COZY ของ H-1/H-9/H-5/H-6/H{{127} } และความสัมพันธ์ของ HMBC จาก H-7 ถึง C-5, C-6, C-8, C-9 และ C-10 ( มะเดื่อ 2). HMBC . อื่น ๆ

ปอนด์ 1 รายงานที่นี่ (ตารางที่ 1) ระบุค่าปกติ - การกำหนดค่าสำหรับ C-1-OH, H-5 และ H-9 การกำหนดค่าสัมพัทธ์ของ H-7 และ H3-10 ถูกกำหนดจากสเปกตรัม NOESY (รูปที่ 2) ซึ่ง NOE มีความสัมพันธ์ระหว่าง H-1 และ H3-10 และ ระหว่าง H3-10 และ H-7 แสดงว่าโปรตอนเหล่านี้อยู่บนหน้าเดียวกัน ไม่มีความสัมพันธ์ NOESY ระหว่าง H3-10 และ H-9 ชี้ให้เห็นว่า H-9 และ H3-10 อยู่ตรงข้ามกับโมเลกุล ดังนั้น โครงสร้างของสารประกอบ 1 ถูกอธิบายเป็น 7-ไฮดรอกซิล- ลังกานด้าน A ที่ชื่อcistadesertosideA.

สารประกอบที่รู้จักถูกระบุเป็นบาง (2) [12],ซิสตาคลอริน(3) [12], 6-deoxycatalpol (4) [13], กลูโคไซด์ (5) [14], ด้านลังกา A (6) [7], Lugol (7) [15], bartsioside (8) [16] และ 8-กรดเอพิ-ออร์แกนิก (9) [17] โดยเปรียบเทียบกับข้อมูล NMR กับที่รายงานในวรรณคดี กิจกรรมต้านการอักเสบของไอริดอยด์ที่แยกได้เหล่านี้ได้รับการประเมินสำหรับผลการยับยั้งของพวกมันต่อการผลิต NO ที่เหนี่ยวนำโดย LPS ในเซลล์ไมโครเกลียลของ BV-2 และความเป็นพิษต่อเซลล์ของพวกมันถูกทดสอบครั้งแรกในเซลล์ BV-2 ด้วยการบำบัดด้วย LPS เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ชม. ความบริสุทธิ์ของไอโซเลตทั้งหมดมากกว่า 95 เปอร์เซ็นต์ตามการวิเคราะห์ทางสเปกโตรสโกปี 1 H NMR ไอโซเลตทั้งหมดไม่แสดงความเป็นพิษต่อเซลล์ที่มีนัยสำคัญใดๆ ที่ความเข้มข้น 40 ไมโครโมล·L-1 ในเซลล์ BV-2 (ตารางที่ 2) สารประกอบ 9 แสดงผลการยับยั้งที่มีศักยภาพต่อการผลิต NO ที่มีค่า IC50 เป็น 5.2 ไมโครโมล·L−1 เทียบได้กับเควอซิตินกลุ่มควบคุมเชิงบวก (4.3 ไมโครโมล·L-1 ) ในขณะที่สารอื่นๆ ไม่แสดงผลที่โดดเด่นใดๆ ที่การทดสอบ ความเข้มข้น 40 ไมโครโมล·L-1 (ตารางที่ 2) การวิเคราะห์ความสัมพันธ์เชิงโครงสร้าง-แอคติวิตีเบื้องต้นบ่งชี้ว่าการมีอยู่ของหมู่คาร์บอกซิลที่ตำแหน่ง C-4 ในสารประกอบ 9 อาจเกี่ยวข้องกับการออกฤทธิ์ที่มีนัยสำคัญ โดยสรุป ไอริดอยด์ที่รู้จักหนึ่งชนิดใหม่และแปดชนิดที่รู้จักถูกแยกออกจากลำต้นของค. ทะเลทรายิโคลาเพาะเลี้ยงในทะเลทรายทาริมและสารประกอบ 9 แสดงผลการยับยั้งที่โดดเด่นต่อการผลิต NO ที่เหนี่ยวนำโดย LPS ในเซลล์ไมโครเกลียล BV-2 ก่อนหน้านี้มีรายงาน Iridoids ที่รู้จักทั้งหมดจากป่าค. ทะเลทรายิโคลา[7, 12-17] ดังนั้นจึงไม่มีความแตกต่างที่ชัดเจนในโครงสร้างทางเคมีของอิริดอยด์และฟีนิลทานอยด์ระหว่างค. ทะเลทรายิโคลาเพาะเลี้ยงในทะเลทรายทาริมกับแหล่งอาศัยอื่นๆ โดยพิจารณาจากรายงานล่าสุดของเรา [19]

Cistanche deserticola: ฤทธิ์ต้านการอักเสบ

ทดลอง

ขั้นตอนการทดลองทั่วไป

IR spectra ถูกบันทึกบน Nicolet Nexus 470 FT Infrared Spectrometer สเปกตรัม NMR ได้มาจากสเปกโตรมิเตอร์ Varian Inova-500 สเปกตรัมมวล HR ถูกวัดบนระบบมวล Bruker APEX IV FT-MS (7.{15}} T) ที่ติดตั้งแหล่งกำเนิด ESI ESI-MS ถูกวัดบนสเปกโตรมิเตอร์ MS ดักไอออน Agilent 6320 การหมุนด้วยแสงถูกวัดบนโพลาริมิเตอร์ Rudolph AUTOPOL IV จุดหลอมเหลวถูกกำหนดหาบนเครื่องมือวัดจุดหลอมเหลวขนาดเล็กสำหรับแสดงผลแบบดิจิตอล X-4 (ไม่ถูกแก้ไข) HPLC แบบกึ่งเตรียมได้ดำเนินการบนอุปกรณ์ Waters 600 ที่มีคอลัมน์ ODS (Alltech, 250 มม. × 10 มม. ID, 5 µm) การวิเคราะห์ GC ดำเนินการกับ VARIAN CP-3800 gas chromatograph ที่มีคอลัมน์ DB-5 (0.25 มม. × 30 ม.) โครมาโตกราฟีแบบคอลัมน์ดำเนินการบนซิลิกาเจล (200–300 mesh, Qingdao Marine Chemistry Ltd., China), MCI gel (CHP20P, 75–150 μmol·L−1 , Mitsubishi Chemical Industries Ltd., Japan), Sephadex LH{{24 }} (Amersham Biosciences, Sweden) และ ODS C18 (40–63 μm; Merck, Germany) TLC ถูกดำเนินการบนเพลตซิลิกาเจล GF254 ที่เคลือบด้วยแก้ว มองเห็นจุดได้ภายใต้แสงยูวีหรือโดยการฉีดพ่นด้วยสารละลายเอทานอลกรดซัลฟิวริก 5 เปอร์เซ็นต์

วัสดุปลูก

ลำต้นของ C. deserticola ถูกเก็บรวบรวมในทะเลทรายทาริม เขตปกครองตนเองซินเจียงอุยกูร์ ประเทศจีน และระบุโดยศาสตราจารย์ TU Peng-Fei ตัวอย่างบัตรกำนัล (หมายเลข CD201011) ถูกฝากไว้ที่หอสมุนไพรของศูนย์วิจัยการแพทย์แผนจีนแห่งมหาวิทยาลัยปักกิ่ง การสกัดและการแยก ลำต้นแห้งของ C. deserticola (15.3 กก.) ถูกตัดอย่างประณีตและสกัดด้วยเอทานอลที่เป็นน้ำ 85 เปอร์เซ็นต์ (120 L × 1 h × 3) สารตกค้างเข้มข้น (4.5 กก.) ถูกแขวนลอยใน H2O (10 ลิตร) และสกัดด้วย EtOAc (10 ลิตร × 3) และ n-BuOH (10 NAN Ze-Dong, et al. / Chin J Nat Med, 2016, 14(1 ): 6165 – 64 – L × 3) ตามลำดับ สารประกอบ 2–6 ได้มาจากสารสกัด EtOAc ในขณะที่ได้สารประกอบ 1 และ 7–9 จากสารสกัด n-BuOH

สารสกัด EtOAc (65.8 กรัม) อยู่ภายใต้ซิลิกาเจล CC (200–300 เมช) โดยใช้ระบบตัวทำละลายแบบเกรเดียนต์ของ CHCl3/MeOH ( 50: 1, 20: 1, 10: 1, 6: 1, 2: 1 และ 1: 1) เพื่อให้ได้เศษส่วนสิบเศษ (คุณพ่อ 1– คุณพ่อ 10). พ่อ 2 (5.3 ก.) ถูกแยกโดย Sephadex LH-20 CC ชะด้วย CHCl3/MeOH (1: 1) เพื่อให้ได้เศษส่วนหลักสามส่วน (Fr. 2-1, Fr. 2-2 และ คุณพ่อ 2-3) พ่อ 2-3 แยกด้วยซิลิกาเจล CC โดยใช้ PE/Me2CO (50 : 1, 20 : 1, 10 : 1, 5 : 1, 2 : 1, 1 : 1 และ 0 : 1) เพื่อให้ได้เศษส่วนสี่ส่วน ( คุณพ่อ 2-3-1–คุณพ่อ 2-3-4) พ่อ 2-3-2 ถูกแยกโดย CC ซิลิกาเจล, ที่ชะด้วย PE/CHCl3/MeOH (8: 8: 1) เพื่อให้ผลผลิตเป็นสารประกอบ 3 (20.6 มก.) สารประกอบ 2 ได้มาจากคุณพ่อ 2-3-3 หลังจากการทำให้บริสุทธิ์โดยโครมาโตกราฟีบนซิลิกาเจล CC ที่ชะด้วย PE/CHCl3/MeOH (5: 5: 1) พ่อ 4 (2.5 กรัม) ถูกแยกโดย Sephadex LH-20 CC ที่ชะด้วย CHCl3/MeOH (1: 1) เพื่อให้ได้เศษส่วนสามส่วน (Fr. 4-1, Fr. 4-2 และ คุณพ่อ 4-3) พ่อ 4-2 อยู่ภายใต้ MCI gel CC (MeOH/H2O, 10: 90 ถึง 90: 10, V/V) เพื่อให้ได้เศษส่วนหลักสามส่วน (Fr. 4-2-1, Fr. 4-2-2, และคุณพ่อ 4-2-3) พ่อ 4-2-1 ถูกทำให้บริสุทธิ์โดยกึ่งเตรียม HPLC [CH3CN-H2O (10: 80)] เพื่อให้ผลผลิตเป็นสารประกอบ 4 (32.3 มก.) และ 5 (15.0 มก.) ในขณะที่ Fr 4-2-2 ถูกทำให้บริสุทธิ์โดยกึ่งเตรียม HPLC [CH3CN-H2O (10: 80)] เพื่อให้ผลผลิตเป็นสารประกอบ 6 (8.3 มก.) สารสกัด n-BuOH (536 กรัม) อยู่ภายใต้ซิลิกาเจล CC (200–300 เมช) โดยใช้ระบบตัวทำละลายแบบเกรเดียนต์ของ CHCl3/MeOH (20: 1, 10: 1, 6: 1, 2: 1, 1: 1, 0: 1) เพื่อให้ได้เศษส่วนหลักสิบส่วน (คุณพ่อ D1–Fr. D10) พ่อ D5 (3.0 กรัม) อยู่ภายใต้ MCI gel CC (MeOH/H2O, 10: 90 ถึง 80: 20, V/V) เพื่อให้ได้เศษส่วนสามส่วน (Fr. D5-1–Fr. D5-3 ). พ่อ D5-2 (120 มก.) ถูกแยกโดยซิลิกา เจล CC (200–300 เมช, 10.0 กรัม; PE/EtOAc/MeOH 3 : 3 : 1) เพื่อให้สารประกอบ 8 (12.5 มก.) พ่อ D8 (4.5 ก.) ถูกแยกโดย Sephadex LH-20 CC, ชะด้วย MeOH เพื่อให้ได้เศษส่วนสามส่วน (Fr. D8-1–Fr. D8-3) พ่อ D8-3 ถูกแยกออกจากคอลัมน์ ODS เปิด (MeOH/ H2O, 20: 80 ถึง 80: 20, V/V) เพื่อให้ได้เศษส่วนสามส่วน (Fr. D8-3-1–Fr. D{{157 }}) พ่อ D8-3-1 อยู่ภายใต้ HPLC กึ่งเตรียมการ [CH3CN-H2O (8: 90)] เพื่อให้สารประกอบ 1 (2.3 มก.) พ่อ D9 (10.1 ก.) ถูกแยกโดยคอลัมน์ Sephadex LH-20 ที่ชะด้วย MeOH เพื่อให้ได้เศษส่วนหลักสามส่วน (Fr. D9-1–Fr. D9-3) พ่อ D9-3 ถูกนำไปยังคอลัมน์ของเจล MCI (MeOH/H2O, 0: 100 ถึง 50: 50, V/V) เพื่อให้สารประกอบ 7 (15.3 มก.) และ 9 (45.5 มก.) Cistadesertoside A (1): ผงอสัณฐานสีขาว [] 20 D –118.0 (c 0.1, MeOH); IR (KBr) νmax: 3 393, 1 071, 1 028 cm-1 ; ( บวก )-HRESI-MS m/z 385.146 9 [M บวก Na] บวก (Calcd. สำหรับ C16H26O9Na, 385.148 5) และ m/z 401120 8 [M บวก K] บวก (คำนวณสำหรับ C16H26O9K, 401.122 8); ข้อมูล 1 H NMR และ 13C NMR ดูตารางที่ 1

กรดไฮโดรไลซิสของสารประกอบ 1

สารประกอบ 1 (1.0 มก.) ถูกกวนผสมที่ 90 องศา เป็นเวลา 5 ชั่วโมงด้วย 2 โมล·L−1 CF3COOH (EtOH: H2O, 1: 1, 2 มล.) หลังจากถูกทำให้เย็นลงจนถึงอุณหภูมิห้อง สารละลายถูกทำให้เข้มข้นภายใต้แรงดันที่ลดลง ส่วนที่เหลืออยู่ถูกละลายใน 2 มล. ของไพริดีนด้วย 0.1 โมล·L−1 L-ซิสเทอีน เมทิล เอสเทอร์ ไฮโดรคลอไรด์ และกวนผสมที่ 60 องศา เป็นเวลา 1.5 ชั่วโมง หลังจากถูกทำให้เย็นและทำให้เข้มข้น ของผสมถูกบำบัดด้วยไตรเมทิลคลอโรซิเลน (TMSCl) และเฮกซะเมทิลไดซิลาเซน (HMDS) (1: 2, V/V, 0.5 มล.) ในไพริดีน (2 มล.) ตามด้วยการกวนผสมที่ 60 องศา 0.5 ชม. จากนั้น สารละลายถูกทำให้เข้มข้นจนแห้ง และเรซิดิวถูกแบ่งส่วนด้วย H2O และ n-เฮกเซน (2 × 3 มล.) [18] เศษส่วน n-เฮกเซนถูกวิเคราะห์โดย GC โดยใช้คอลัมน์ DB-5 (0.25 มม. × 30 ม.) อุณหภูมิของหัวฉีดและเครื่องตรวจจับถูกตั้งไว้ที่ 220 องศา ระบบไล่ระดับอุณหภูมิถูกนำไปใช้กับเตาอบ เริ่มต้นที่ 140 องศาเป็นเวลา 1 นาที และเพิ่มขึ้นเป็น 250 องศาที่อัตรา 4 องศา·นาที-1 พีคของไฮโดรไลเสตของอนุพันธ์น้ำตาลถูกระบุโดยการเปรียบเทียบเวลาการคงอยู่กับตัวอย่างแท้ของ D-glucose (19.24 นาที) หลังจากการบำบัดที่คล้ายคลึงกันด้วย TMSCl/ HMDSยับยั้งการผลิต NO

กิจกรรมการยับยั้ง NO ของสารประกอบที่แยกได้ถูกประเมินโดยเทียบกับเซลล์ microglial ที่เหนี่ยวนำโดย LPS-2 โดยวิธี Griess โดยใช้ชุดทดสอบ NO (Nanjing-Jiancheng BioTech Institute, Nanjing, Jiangsu, China) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [19], และใช้เควอซิทินเป็นตัวควบคุมเชิงบวก นอกจากนี้ ความมีชีวิตของเซลล์ยังได้รับการประเมินโดยการทดสอบ MTT

ประโยชน์ของ Cistanche: ต้านการอักเสบ

อ้างอิง

[1] Kobayashi H, Oguchi H, Takizawa N และอื่น ๆ ใหม่ phenylethanoid glycosides จากCistanche tubulosa(Schrenk) ฮุก. ฉ. ฉัน [J] Chem Pharm Bull, 1987, 35(8): 3309-3314.

[2] เทคนิควัฒนธรรมพืชสมุนไพรหลักของซินเจียง [M] ซินเจียง: Xinjiang Institute of Traditional Chinese and Ethnologic Medicines Ed, Xinjiang Science and Technology Press, 2004: 84-88

[3] คณะกรรมการเภสัชตำรับจีน, ตำรับยาจีน [M]. ฉบับที่ ฉัน ปักกิ่ง: China Medical Science and Technology Press, 2010: 126.

[4] Jiang Y, Tu PF. การวิเคราะห์องค์ประกอบทางเคมีใน Cistanche

สายพันธุ์ [J]. J Chromatogr A, 2009, 1216(11): 1970-1979.

[5] Pan J, Yuan CS, Lin CJ และอื่น ๆ กิจกรรมทางเภสัชวิทยาและกลไกของฟีนิลโพรพานอยด์ไกลโคไซด์ [J] Pharmazie, 2003, 58(11): 767-775.

[6] Fu GM, Pang HH, Wong Y. phenylethanoid glycosides ที่เกิดขึ้นตามธรรมชาติ: โอกาสในการบำบัดรักษาแบบใหม่ [J] Curr Med Chem, 2008, 15(25): 2592-2613.

[7] Xie HH, Morikawa T, Matsuda H และอื่น ๆ องค์ประกอบ Monoterpene จากCistanche tubulosa-โครงสร้างทางเคมีของ kankanosides AE และ kankanol [J] Chem Pharm Bull, 2006, 54(5): 669-675.

[8] Foderaro TA, สเตอร์มิทซ์ FR. เคมีของ Scrophulariaceae ตอนที่ 24. Iridoid glycosides จากสายพันธุ์ Penstemon: AC-5, C-9 trans-iridoid และ C-8 epimeric pairs [J] ไฟโตเคมี 1992, 31(12): 4191-4195

[9] Krull RE, สเตอร์มิทซ์ FR. อิริดอยด์ไกลโคไซด์ที่หลอมรวมทรานส์จาก Penstemon mucronatus [J] ไฟโตเคมี, 1998, 49(8): 2413-2415.

[10] Takeda Y, Yagi T, Matsumoto T และอื่น ๆ Nepetanudosides และ iridoid glucosides ที่มีสเตอริโอเคมีจาก Nepeta nuda ssp อัลบิฟลอรา [J]. ไฟโตเคมี 2539 42(4): 1085-1088

[11] Takeda Y, Ooiso Y, Masuda T และอื่น ๆ Iridoid และ eugenol glycosides จากกล้อง Nepeta [J] ไฟโตเคมี, 1998, 49(3): 787-791.

[12] Kobayashi H, Karasawa H, Miyase T, และคณะ การศึกษาองค์ประกอบของ Cistachis herba ครั้งที่สอง การแยกตัวและโครงสร้างของอิริดอยด์ใหม่ซิสตานินและซิสตาคลอริน[เจ]. Chem Pharm Bull, 1984, 32(5): 1729-1734.

[13] Arslanian RL, Harris GH, Stermitz FR. เคมีของ Scrophulariaceae 7. ไอริดอยด์กลูโคไซด์บางชนิด รวมถึง 6-deoxycatalpol ใหม่ จากพู่กันอินเดียสายพันธุ์ที่เกี่ยวข้องกับ Castilleja miniata [J] เจ แนท โปรด, 1985, 48(6): 957-961.

[14] Sticher O, Weisflog A. การหาและแยกไอริดอยด์กลูโคไซด์จาก Galeopsis tetrahit (Labiatae) และการอธิบายโครงสร้างของกลูโรไซด์ [J] Pharm Acta Helv, 1975, 50(11): 394-403.

[15] Nishimura H, Sasaki H, Morota T และอื่น ๆ การศึกษาทางเคมีและชีวภาพเกี่ยวกับ Rehmanniae Radix ตอนที่ 3 หก iridoid glycosides จาก Rehmannia glutinosa [J] ไฟโตเคมี, 1989, 28(10): 2705-2709.

[16] Junior P. iridoids เพิ่มเติมจากสายพันธุ์ Penstemon [J] แพลนตา เมด, 1984, 50(6): 530.

[17] โบรอส แคลิฟอร์เนีย, สเตอร์มิทซ์ FR. อิริดอยด์ รีวิวที่ปรับปรุงใหม่ ส่วนที่ 1 [J] เจ แนท โปรด, 1990, 53(5):1055-1147.

[18] Jian R, Zeng KW, Tu PF และอื่น ๆ ส่วนประกอบต้านการอักเสบจากหน่อไม้ฝรั่ง cochinchinensis [J] Fitoterapia, 2013, 84: 80-84.

[19] Nan ZD, Zeng KW, Shi SP และอื่น ๆ Phenylethanoid glycosides ที่มีฤทธิ์ต้านการอักเสบจากลำต้นของCistanche deserticolaเพาะเลี้ยงในทะเลทรายทาริม [J] Fitoterapia, 2013, 89: 167-174.