Homozygous Dab1−// เป็นนวนิยายที่อาจเป็นสาเหตุของความผิดปกติแต่กำเนิดแบบถดถอยแบบ autosomal ของไตหนูและทางเดินปัสสาวะ

edmund.chen@wecistanche.com

บทนำ

หนูกลายพันธุ์ Yotari ที่ได้จากการได้มาซึ่งการกลายพันธุ์ที่เกิดขึ้นเองในยีน Dab1 แสดงความผิดปกติทางเนื้อเยื่อวิทยาในระบบประสาทส่วนกลาง [1,2] ซึ่งคล้ายกับหนูรีลเลอร์มาก (รีลลิน//) บ่งชี้ว่ารีลลินและ DAB1 เป็นของ เส้นทางการส่งสัญญาณเดียวกัน [1–4] มีรายงานว่าความคลาดเคลื่อนในเส้นทางรีลลิน/DAB1 เกี่ยวข้องกับความผิดปกติทางจิตเวชต่างๆ [5–7] ที่น่าสนใจ นอกจากระบบประสาทส่วนกลางแล้ว การมีอยู่ของโปรตีน DAB1 และรีลลินยังได้รับการยืนยันในระบบประสาทส่วนปลายและเนื้อเยื่อภายนอกบางส่วนอีกด้วย พบการมีอยู่ของ DAB1 ในเซลล์พอดไซต์ของหนู [8] และทารกในครรภ์ของมนุษย์ไต[9] ในขณะที่มีการรายงานการแสดงออกของเรลินในระหว่างการพัฒนาของหนูเมาส์และทารกในครรภ์ของมนุษย์ เช่นเดียวกับในเซลล์บุผนังหลอดเลือดบางเซลล์ตามหลอดเลือดในหนูตัวเต็มวัย [9–11] วิถีของ Canonical Reelin/DAB1 อาจกระตุ้นโปรตีนปลายน้ำที่แตกต่างกัน ซึ่งรวมถึงตัวรับ NOTCH2 ซึ่งมีบทบาทสำคัญในการตัดสินใจเกี่ยวกับชะตากรรมของเซลล์และการสร้างความแตกต่างระหว่างไตพัฒนาการ [12–14]. ตัวรับ NOTCH2 จำเป็นสำหรับการสร้าง tubules และ podocytes ใกล้เคียง [13] แต่เมื่อถึงการเจริญเติบโตของ nephron ทางเดินนี้ส่วนใหญ่จะเงียบ [15] ในสภาวะเฉียบพลันโรคไต,การแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของ NOTCH2 อาจมีส่วนทำให้เกิดการงอกใหม่ ในขณะที่การแสดงออกอย่างต่อเนื่องมีความสัมพันธ์เชิงสาเหตุกับการเกิดพังผืดคั่นระหว่างหน้าและโรคหลอดเลือดตีบตัน [15] การลดระดับของสัญญาณ NOTCH สามารถลด autophagy ได้อย่างมากและทำให้เกิดการด้อยค่าของ podocyte differentiation ในระหว่างการพัฒนา [16]

ดังนั้น podocytes ที่ผิดปกติจึงมีบทบาทสำคัญในโรคไต โดยเฉพาะอย่างยิ่งในกลุ่มอาการของโรคไตที่ไม่ทราบสาเหตุของมนุษย์ [17,18] และในโรคไตที่เปลี่ยนแปลงน้อยที่สุด (MCNS) [19] ดังนั้น autophagy จะรักษาสภาวะสมดุลของเซลล์ภายใต้สภาวะทางสรีรวิทยาปกติ ในขณะที่ในสภาวะทางพยาธิวิทยา มันสามารถพัฒนาไปสู่การตายของ autophagic [20] autophagy biomarker ที่ใช้กันอย่างแพร่หลายคือ LC3B ซึ่งเป็นโปรตีนโครงสร้างของเยื่อหุ้มเซลล์ autophagosomal [21] crosstalk ที่ซับซ้อนระหว่าง autophagy และ apoptosis ยังมีส่วนช่วยในการรักษาสมดุลของ homeostatic เพื่อตอบสนองต่อสภาวะแวดล้อมจุลภาคของเซลล์ เป็นที่ทราบกันดีว่าเหตุการณ์ apoptotic มีจำนวนเพิ่มขึ้นในช่วงไตการพัฒนา [22] และลดลงอย่างมากเมื่อครบกำหนด ยกเว้นในเงื่อนไขของอาการบาดเจ็บที่ไต[23]. ไม่อาจปฏิเสธได้ว่าการตายของเซลล์อะพอพโทซิสเป็นกลไกที่ซับซ้อนซึ่งควบคุมผ่านการทำงานร่วมกันของวิถีทางต่างๆ แต่ส่วนใหญ่จะสิ้นสุดด้วยการกระตุ้น caspase3 (CASP3) ซึ่งการเปิดใช้งานเป็นหนึ่งในเครื่องหมายที่ใช้บ่อยที่สุดสำหรับการตรวจหาอะพอพโทซิส [23]

ในรายงานนี้ เรามุ่งที่จะวิเคราะห์ว่ายีน Dab1 มีผลต่อการยับยั้งการทำงานของยีนอย่างไรไตสัณฐานวิทยาและการแสดงออกและการแปลของ reelin, NOTCH2, LC3B และโปรตีน CASP3 ที่แยกออกในหนูหลังคลอดไต. เราคิดว่าโปรตีนเหล่านี้แสดงออกในหนูเมาส์หลังคลอดไต,และการทำงานร่วมกันตามหน้าที่มีส่วนช่วยในการบำรุงรักษาโครงสร้างและหน้าที่ นอกจากนี้ เนื่องจากการปรากฏตัวของ DAB1 ได้รับการยืนยันระหว่างมนุษย์ในครรภ์ไตพัฒนาการ [9] สันนิษฐานได้ว่าการหยุดทำงานอาจทำให้เกิดความผิดปกติในวงกว้างของความผิดปกติแต่กำเนิดของไตและทางเดินปัสสาวะ (CAKUT)

คำสำคัญ:โยตาริ; การทำงานของไต การพัฒนาไตหลังคลอด การย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนต์ กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน

CISTANCHE จะปรับปรุงการทำงานของไต/ไต

วัสดุและวิธีการ

การเก็บตัวอย่างเนื่องจาก Dab1 null กลายพันธุ์ธรรมดา เราใช้ yotari (Dab1/ ) หนูที่ Howell et al อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [24]. ไพรเมอร์ PCR ที่ใช้สำหรับการสร้างยีนของหนูคือ yotari: GCC CTTCAGCATCACCATGCT และ CAGTGAGTACATATTGTGTGAGTTCC, Dab1 locus ชนิดพันธุ์ป่า: GCCCTTCAGCATCACCATGCT และ CCTTGTTTCTTTGCTTTAA-GGCTGT [5] หนูเมาส์ C57BL/6 N ถูกเลี้ยงและจัดเป็นกลุ่มในกรงโพลีคาร์บอเนตมาตรฐาน (รวมถึงอย่างน้อยหนึ่งจีโนไทป์) ที่มีการเข้าถึงอาหารและน้ำในห้องควบคุมอุณหภูมิ (23 ± 2 ◦C) ด้วยแสง 12 ชั่วโมง/ วงจรมืด ในวันที่ 4, 11 และ 14 (P4, P11 และ P14) หลังคลอด หนูทดลองได้รับการดมยาสลบอย่างล้ำลึกด้วย pentobarbital และถ่ายผ่านช่องหัวใจเป็นเวลา 10 นาทีด้วยสารละลายบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (PBS, pH 7.2) และพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 4 เปอร์เซ็นต์ (PFA) ) ใน 0.1 M PBSไตถูกนำออกและแก้ไขด้วย PFA 4 เปอร์เซ็นต์ใน 0.1 M PBS ในชั่วข้ามคืนสำหรับการวิเคราะห์ทางจุลกายวิภาคทั่วไป (ฮีมาทอกซิลิน–อีโอซิน (H&E) การย้อมอิมมูโนฮิสโตเคมีและอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์) และในสารผสม PFA 2 เปอร์เซ็นต์ บวก 2.5 เปอร์เซ็นต์ของกลูตาราลดีไฮด์ (GA) สำหรับการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน หลังจากการตรึงเนื้อเยื่อถูกเตรียมสำหรับการตรวจเนื้อเยื่อเพิ่มเติมดังที่เราได้อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [25,26]

การย้อมสีอิมมูโนเฟลฟลูออเรสเซนส์และการย้อมสีอิมมูโนเพอออกซิเดสหลังจากการแยกพาราฟฟินิเซชันและการให้น้ำอีกครั้ง ส่วนต่างๆ ถูกให้ความร้อนเป็นเวลา 20 นาทีในบัฟเฟอร์ซิเตรต 0.01 โมลาร์ (pH 6.0) ในเครื่องนึ่งไอน้ำ และหลังจากนั้น ถูกทำให้เย็นลงจนถึงอุณหภูมิห้อง บัฟเฟอร์การบล็อก (ab 64226, Abcam, Cambridge, UK) ถูกนำไปใช้เป็นเวลา 30 นาทีเพื่อแยกการย้อมสีที่ไม่เฉพาะเจาะจง จากนั้นส่วนต่างๆ ถูกบ่มในห้องความชื้นข้ามคืนด้วยแอนติบอดีปฐมภูมิ (ตารางที่ 1) หลังจากการล้างใน PBS แอนติบอดีทุติยภูมิ (ตารางที่ 1) ถูกใช้เป็นเวลาหนึ่งชั่วโมงและล้างใน PBS อีกครั้ง จากนั้น นิวเคลียสถูกย้อมด้วย 4060 -diamidino-2-phenylindole (DAPI) เป็นเวลา 2 นาที ล้างใน PBS และปิดฝา เราทำการทดสอบการดูดซับล่วงหน้าเพื่อให้แอนติบอดีปฐมภูมิแต่ละตัวถูกใช้กับเปปไทด์ที่สอดคล้องกันและนำส่วนผสมของพวกมันไปใช้กับส่วนต่างๆ ผลการวิจัยพบว่าไม่มีการย้อมสีแอนติบอดี นอกจากนี้ การควบคุมด้วยการละเว้นของแอนติบอดีปฐมภูมิเพื่อกำหนดระดับของการจับที่ไม่จำเพาะของแอนติบอดีทุติยภูมิถูกดำเนินการ

สำหรับการย้อมสีอิมมูโนเปอร์ออกซิเดส กระต่ายโพลีโคลนอลแอนตี้-CASP3 (1:100 การเจือจาง, ab13847, Abcam, เคมบริดจ์, สหราชอาณาจักร) ถูกนำไปใช้เป็นแอนติบอดีหลักเป็นเวลาหนึ่งชั่วโมงในห้องที่มีความชื้นหลังการบำบัดในส่วนที่มี 0.1 เปอร์เซ็นต์ H2O2 หลังจากล้างด้วย PBS แล้ว การตรวจจับรองได้ดำเนินการโดยใช้ลิงก์และสเตรปทาวิดิน เปอร์ออกซิเดส แต่ละครั้งเป็นเวลาสิบห้านาที (DakoCytomation, CA 93013 USA, LOT 03477) และไดอะมิโนเบนซิดีน (Dako, CA 93013 USA, LOT 10051369) ควบคุมอย่างระมัดระวังเพื่อหลีกเลี่ยงการย้อมสีพื้นหลังมากเกินไป นิวเคลียสถูกย้อมด้วยฮีมาทอกซิลิน, ล้างในน้ำประปาเป็นเวลา 10 นาที, ถูกทำให้แห้งโดยสรุปในชุดสารละลายเอทานอลจากน้อยไปมาก, และปิดฝาไว้

การเตรียมเนื้อเยื่อสำหรับกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน (TEM)หลังจากการตรึงด้วยของผสมของ PFA 2 เปอร์เซ็นต์และ GA 2.5 เปอร์เซ็นต์ใน 0.1 M PBS เป็นเวลา 2 ชั่วโมง ตัวอย่างถูกล้างด้วย PBS และโพสต์ฟิกซ์ในสารละลายที่มีน้ำเป็น 2 เปอร์เซ็นต์ osmium tetroxide เป็นเวลา 2 ชั่วโมง ตัวอย่างทั้งหมดถูกล้างสองครั้งใน PBS ถูกทำให้แห้งในเอธานอลเกรดจากน้อยไปมาก และฝังอยู่ใน Epon 812 (TAAB Laboratories Equipment, Reading, UK) ส่วนแบบอนุกรม (ความหนา 70 นาโนเมตร) ถูกตัดบน Ultracut UCT ultramicrotome (Leica Microsystems, Wetzlar, Germany) และย้อมด้วย uranyl acetate 1 เปอร์เซ็นต์และตะกั่วซิเตรต

การได้มาซึ่งข้อมูลและการวิเคราะห์การวิเคราะห์ดำเนินการด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด (Olympus BX51, โตเกียว, ญี่ปุ่น) ที่ติดตั้งกล้องดิจิตอล DP71 (Olympus), กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน JEM 1400 (JEOL, โตเกียว, ญี่ปุ่น) ดำเนินการที่ 80 kV และถ่ายภาพด้วยประจุ JEOL- ระบบกล้องคู่ (CCD) (เทคนิคกล้องจุลทรรศน์ขั้นสูง, Danvers, MA, USA) และสุดท้ายคือกล้องจุลทรรศน์แบบส่องไฟ (BX40, Olympus, Tokyo, Japan) ภาพที่วิเคราะห์ทั้งหมดได้รับการประมวลผลด้วยซอฟต์แวร์ ImageJ และ Adobe Photoshop (Adobe, San Jose, CA, USA) ต่อกลุ่มที่ตรวจสอบ เราใช้สัตว์สามถึงสี่ตัว สะสมทั้งหมดไตตัดที่ส่วนหนา 5 µm และสูงสุดไต length determined by using these samples was reported. Mean proximal convoluted tubules (PCT), distal convoluted tubules (DCT) and glomeruli diameters were determined by averaging 100 structure diameters per analyzed sample. As nephron segments have irregular shapes, we took the largest diameter of every examined segment as representative. The staining intensity was semiquantitatively evaluated at four degrees: the absence of any reactivity (( ), mild reactivity (+), moderate reactivity (++), and strong reactivity (+++) (Table 2). The number of DAB1, reelin, NOTCH2, LC3B, and cleaved CASP3 immunoreactive cells was counted and expressed as a percentage of total cells. For each sample, we analyzed twenty PCT, DCT, and G at ×40 objective magnifification. We averaged the number of positive cells per group. Any level of nuclear, cytoplasmic, or membrane staining was regarded as positive. Three investigators analyzed the images independently. Interrater agreement was tested with interclass correlation analysis, which yielded a coeffificient >0.75 ซึ่งแสดงถึงข้อตกลงที่ดีเยี่ยม [27]

การวิเคราะห์ทางสถิติทำการทดสอบ t แบบสองทางเพื่อวิเคราะห์ความแตกต่างของเส้นผ่านศูนย์กลางเฉลี่ยระหว่าง PCT, DCT และ G ของสัตว์ประเภท wild และ yotari เส้นผ่านศูนย์กลางแสดงเป็นค่าเฉลี่ย±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD) ระดับความสำคัญถูกกำหนดไว้ที่ p < 0.05.="" การทดสอบ="" anova="" แบบสองทางตามด้วยการทดสอบเปรียบเทียบหลายรายการของ="" tukey="" ถูกใช้เพื่อตรวจสอบความแตกต่างในเปอร์เซ็นต์ของเซลล์บวกระหว่าง="" pct,="" dct="" และ="" glomeruli="" ตลอดเวลา="" เปอร์เซ็นต์ของเซลล์บวกถูกแสดงเป็นค่าเฉลี่ย="" ±="" ความคลาดเคลื่อนมาตรฐานของค่าเฉลี่ย="" (sem)="" ระดับความสำคัญถูกกำหนดไว้ที่="" p="">< 0.05="" การวิเคราะห์ดำเนินการในซอฟต์แวร์="" graphpad="" (ซอฟต์แวร์="" graphpad,="" la="" jolla,="" ca,="">

ผลลัพธ์

การย้อมสี Hematoxylin-Eosin (H&E) และการวัดเส้นผ่านศูนย์กลางไตการย้อมสี H&E ของส่วน midsagittal ของไตที่จุดเวลาที่ตรวจสอบทั้งหมดเน้นที่เล็กไตฟีโนไทป์ของหนู yotari เมื่อเปรียบเทียบกับพันธุ์ป่า (รูปที่ 1a) ที่ 4P หมายถึงไตเส้นผ่านศูนย์กลางของสัตว์โยตาริประมาณ 55 µm มากกว่าประมาณ 75 µm นอกจากนี้ ความแตกต่างนี้สังเกตเห็นได้ชัดเจนในเวลาต่อมาเนื่องจากการเติบโตที่ช้าลงของไตในโยตาริเมื่อเทียบกับการเติบโตแบบก้าวหน้าของไตในสัตว์ป่าชนิดต่างๆ เพื่อตรวจสอบว่าการลดลงโดยรวมไตขนาดเกิดจากการลดลงของขนาดเซ็กเมนต์ nephron เราเฉลี่ยเส้นผ่านศูนย์กลางของ PCT, DCT และ G ต่อกลุ่ม อันที่จริง มีเส้นผ่านศูนย์กลางเฉลี่ย G, PCT และ DCT ลดลงในกลุ่มโยตาริเมื่อเปรียบเทียบกับชนิดพันธุ์ป่า (รูปที่ 1b, p < 0.05)="" นอกจากนี้="" การย้อมสี="" h&e="">ไตการขยายกระดูกเชิงกรานในสัตว์โยตาริและ DCT ขยายเล็กน้อยที่ 14P โครงสร้างพื้นฐานและรูปแบบของการเจริญเติบโตของไตจะเหมือนกันในสัตว์ทั้งสองกลุ่มที่ตรวจ

การวิเคราะห์ทางเนื้อเยื่อเชิงพรรณนาตาม TEM Microphotographsบนไมโครโฟโต้ ได้จาก TEM โกลเมอรูลีของหนูป่าแสดงลักษณะทั่วไปของทุกส่วนของการกรองซึ่งปกติแล้วได้รับการพัฒนาและจดจำได้ (รูปที่ 2a) Podocytes, กระบวนการและก้านของ podocyte foot, fifiltration slits, glomerular basement membranes และ capillary lumen ที่มี endothelium fenestrated สามารถแยกแยะได้ง่าย (รูปที่ 2a) ในอีกทางหนึ่ง ในโกลเมอรูลีของหนู yotari ความเสียหายของโพโดไซต์แบบโปรเกรสซีฟด้วยการคลายกระบวนการที่เท้าและการขาดรอยแยกการกรองสามารถสังเกตได้ (รูปที่ 2b–d) การเปลี่ยนแปลงโครงสร้างพื้นฐานเหล่านี้พบได้ในทั้งหมดไตตรวจสอบและเกี่ยวข้องกับ glomeruli ที่ตรวจสอบส่วนใหญ่ ไม่พบความผิดปกติใน PCT หรือ DCT ของหนู yotari มากกว่าสัตว์ป่า (รูปที่ 2e–h) ใน PCT อินเทอร์เฟซของเซลล์ถูกกำหนดได้ไม่ดีเนื่องจากความผิดปกติของเยื่อหุ้มเซลล์และการเชื่อมโยงเซลล์กับเพื่อนบ้าน ไซโตพลาสซึมมีมากมาย ประกอบด้วยนิวเคลียสที่โดดเด่น ไมโทคอนเดรียที่ยืดออก ฐานพับ และหลุมท่อจำนวนมากระหว่างไมโครวิลลี ซึ่งก่อตัวเป็นขอบแปรงที่เยื่อหุ้มปลาย กำลังขยายที่สูงขึ้นเผยให้เห็นพื้นผิวปลายของเซลล์เยื่อบุผิว PCT ที่มีไมโครวิลไลยาวเพื่อสร้างเส้นขอบแปรงและรอยต่อที่แน่นหนาระหว่างเส้นขอบเซลล์ลูมินัลของเซลล์เยื่อบุผิวท่อที่อยู่ใกล้เคียง (รูปที่ 2e,f) ในทางกลับกัน พื้นผิวปลายยอดของเซลล์เยื่อบุผิว DCT มีไมโครวิลไลสั้นจำนวนหนึ่งและถุงน้ำจำนวนมาก (รูปที่ 2g,h)

รูปที่ 2 ไมโครโฟโตกราฟีแบบทรานสมิทอิเล็กตรอนไมโครสโคป (TEM) ชนิดไวด์และโยตาริไต.Glomeruli ของสัตว์ป่า (a) แสดงสิ่งกีดขวางการกรองที่พัฒนาขึ้นตามปกติโดยมี endothelium ที่เป็น fenestrated (E) ของ capillary (C) เยื่อหุ้มชั้นใต้ดิน (BM) podocytes (P) ที่มี pedicles (PE) และ fifiltration slits (FS ). ในไตของสัตว์ yotari สามารถสังเกตเห็น effacement ของ pedicles และขาด fifiltration slits (เครื่องหมายดอกจัน b–d) ไม่พบความผิดปกติในหลอดอาหารแบบซับซ้อนส่วนต้น (PCT) หรือหลอดส่วนปลายส่วนปลาย (DCT) ของหนู yotari เมื่อเปรียบเทียบกับสัตว์ในธรรมชาติ (e–h) ใน PCT ไซโตพลาสซึมมีมากมาย ประกอบด้วยนิวเคลียสที่โดดเด่น (N) ไมโทคอนเดรียที่ยืดออก (M) ฐานพับ (BI) และหลุมท่อจำนวนมาก (TP) ระหว่างไมโครวิลลีซึ่งก่อตัวเป็นเส้นขอบแปรง (BB) ที่ เยื่อหุ้มปลาย (e,f). กำลังขยายที่สูงขึ้นเผยให้เห็นพื้นผิวปลายของเซลล์เยื่อบุผิว PCT ที่มี microvilli ยาวเพื่อสร้างเส้นขอบแปรงและรอยต่อที่แน่น (TJ) ระหว่างเส้นขอบเซลล์ luminal ของเซลล์เยื่อบุผิวท่อที่อยู่ใกล้เคียง (e,f) ในทางกลับกัน พื้นผิวปลายยอดของเซลล์เยื่อบุผิว DCT ที่มีไมโครวิลไลสั้นจำนวนหนึ่งและถุงน้ำจำนวนมาก (g,h) แถบมาตราส่วนในภาพ (a–d) และส่วนแทรก (e–h) คือ 1 µm; แถบมาตราส่วนในภาพ (e–h) คือ 2 µm

โลคัลไลเซชันและโคโลคัลไลเซชันของ Reelin และ DAB1Reelin แสดงออกอย่างอ่อนด้วยปฏิกิริยาเล็กน้อยถึงปานกลาง (ตารางที่ 2) ใน glomeruli และ DCT ของสัตว์ที่ตรวจสอบทั้งหมด ณ จุดที่สังเกตได้ทั้งหมด (p < 005,="" รูปที่="" 3a)="" เฉพาะใน="" pct="" ของหนูเมาส์="" yotari="" เท่านั้นที่มีเปอร์เซ็นต์ของเซลล์บวกที่สูงกว่าสัตว์ชนิดอื่นอย่างมีนัยสำคัญ="" (p="">< 0.05,="" รูปที่="" 3a)="" ในเซลล์ไต="" การแปลความหมายของการย้อมสีเป็นนิวเคลียร์ปริกำเนิด="" ขณะที่ใน="" pct="" และ="" dct="" นั้นกระจัดกระจายไปทั่วไซโตพลาสซึม="" (รูปที่="">

igure 4. การย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์ของโยตาริ .หลังคลอดไตด้วยรีลลินมาร์กเกอร์ (a) และการย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์สองครั้งของ postnatal wild-typeไตด้วย DAB1 และเครื่องหมายรีลลิน (b) (a,b) การย้อมสี DNA DAPI นิวเคลียร์ที่ผสานกับ DAB1 และรีลลินอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์แสดงในลักษณะคู่ขนาน (ผสาน) จุดที่สังเกตได้คือ P4, P11, P14 การแสดงออกของเครื่องหมายที่ตรวจสอบใน glomeruli (G), proximal convoluted tubules (PCT) และ distal convoluted tubules (DCT) จะถูกทำเครื่องหมายด้วยลูกศร ในขณะที่เครื่องหมายดอกจันแสดงการแสดงออกของ reelin ในเมทริกซ์นอกเซลล์ (a) ส่วนแทรกแสดงนิพจน์ที่โดดเด่นที่สุดในรูปภาพ การย้อมสีด้วยนิวเคลียร์ของ DAPI เผยให้เห็นการโคโลคัลไลเซชันของ DAB1 และรีลลินที่ไม่ดี โดยส่วนใหญ่อยู่ใน DCT (หัวลูกศร) แถบมาตราส่วนคือ 20 µm และอ้างอิงถึงรูปภาพทั้งหมด

แทบไม่มีปฏิกิริยาทางภูมิคุ้มกันของ DAB1 ในโกลเมอรูไลและ PCT ของสัตว์ป่าที่ P4 ในขณะที่เปอร์เซ็นต์ของเซลล์เชิงบวกที่มีปฏิกิริยาไม่รุนแรง (ตารางที่ 2) เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญที่ P11 และ P14 (p < 0.05,="" รูปที่="" 3b)="" ใน="" dct,="" dab1="" ถูกแสดงออกเป็นส่วนใหญ่ที่ส่วนปลายและส่วนด้านข้างของเยื่อหุ้มเซลล์="" (รูปที่="" 4b)="" ที่มีปฏิกิริยารุนแรง="" (ตารางที่="" 2)="" เปอร์เซ็นต์ของเซลล์บวกมีค่ามากกว่าในโครงสร้างก่อนหน้านี้อย่างมีนัยสำคัญ="" ประมาณ="" 60="" เปอร์เซ็นต์="" (รูปที่="" 3b)="" โดยเฉพาะอย่างยิ่งในจุดภาพชัด="" (รูปที่="" 4b)="" แทบไม่มีการโคโลคัลไลเซชันของ="" dab1="" และรีลลิน="" ยกเว้นใน="" dct="" ของสัตว์ชนิดพันธุ์ป่าที่="" p14="" (หัวลูกศร,="" รูปที่="" 4b)="" ชีวโมเลกุล="" 2564,="" 11,="" 609="" 8="" จาก="" 14="" รูปที่="" 4="">ไตด้วยรีลลินมาร์กเกอร์ (a) และการย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์สองครั้งของ postnatal wild-typeไตด้วย DAB1 และเครื่องหมายรีลลิน (b) (a,b) การย้อมสี DNA DAPI นิวเคลียร์ที่ผสานกับ DAB1 และรีลลินอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์ถูกแสดงในลักษณะคู่ขนาน (ผสาน) จุดที่สังเกตได้คือ P4, P11, P14 การแสดงออกของเครื่องหมายที่ตรวจสอบใน glomeruli (G), proximal convoluted tubules (PCT) และ distal convoluted tubules (DCT) จะถูกทำเครื่องหมายด้วยลูกศร ในขณะที่เครื่องหมายดอกจันแสดงการแสดงออกของ reelin ในเมทริกซ์นอกเซลล์ (a) ส่วนแทรกแสดงนิพจน์ที่โดดเด่นที่สุดในรูปภาพ การย้อมสีด้วยนิวเคลียร์ของ DAPI เผยให้เห็นการโคโลคัลไลเซชันของ DAB1 และรีลลินที่ไม่ดี โดยส่วนใหญ่อยู่ใน DCT (หัวลูกศร) แถบมาตราส่วนคือ 20 µm และอ้างอิงถึงรูปภาพทั้งหมด แทบไม่มีปฏิกิริยาทางภูมิคุ้มกันของ DAB1 ในโกลเมอรูไลและ PCT ของสัตว์ประเภทสัตว์ป่าที่ P4 ในขณะที่เปอร์เซ็นต์ของเซลล์เชิงบวกที่มีปฏิกิริยาไม่รุนแรง (ตารางที่ 2) เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญที่ P11 และ P14 (p < 0.05="" รูปที่="" 3b)="" ใน="" dct,="" dab1="" ถูกแสดงออกเป็นส่วนใหญ่ที่ส่วนปลายและส่วนด้านข้างของเยื่อหุ้มเซลล์="" (รูปที่="" 4b)="" ที่มีปฏิกิริยารุนแรง="" (ตารางที่="" 2)="" เปอร์เซ็นต์ของเซลล์บวกมีค่ามากกว่าในโครงสร้างก่อนหน้านี้อย่างมีนัยสำคัญ="" ประมาณ="" 60="" เปอร์เซ็นต์="" (รูปที่="" 3b)="" โดยเฉพาะอย่างยิ่งในจุดภาพชัด="" (รูปที่="" 4b)="" แทบไม่มีการโคโลคัลไลเซชันของ="" dab1="" และรีลลิน="" ยกเว้นใน="" dct="" ของสัตว์ป่าที่="" p14="" (หัวลูกศร,="" รูปที่="">

รูปแบบนิพจน์เชิงพื้นที่และเวลาของ NOTCH2 และ LC3Bเปอร์เซ็นต์ของเซลล์บวกของ NOTCH{{0}}ค่าบวกมีค่าน้อยกว่า 20 เปอร์เซ็นต์ในโกลเมอรูไลของจีโนไทป์ของสัตว์ทั้งสองที่จุดที่สังเกตพบทั้งหมด เฉพาะที่เปอร์เซ็นต์ P14 ของเซลล์บวกเท่านั้นที่มีโกลเมอรูไลของสัตว์โยตาริสูงกว่าสัตว์ประเภทธรรมชาติอย่างมีนัยสำคัญ (p < 0.05,="" รูปที่="" 3c)="" ความเข้มของการย้อมสีอ่อนถึงปานกลาง="" (ตารางที่="" 2)="" ซึ่งส่วนใหญ่อยู่บริเวณรอบนิวเคลียร์="" (รูปที่="" 5a–f)="" ใน="" pct="" และ="" dct="" ของจีโนไทป์ของสัตว์ทั้งสองเปอร์เซ็นต์ของเซลล์บวกเพิ่มขึ้นเมื่อเวลาผ่านไป="" ที่="" p14="" เปอร์เซ็นต์ของเซลล์บวกใน="" pct="" และ="" dct="" ของสัตว์="" yotari="" สูงกว่า="" pct="" และ="" dct="" ของสัตว์ประเภท="" wild-type="" อย่างมีนัยสำคัญ="" (p="">< 0.05,="" รูปที่="" 3c)="" ความเข้มของสัญญาณในทุกจุดที่สังเกตพบมีน้อยถึงปานกลาง="" (ตารางที่="" 2)="" และกระจัดกระจายไปทั่วไซโตพลาสซึม="" (รูปที่="" 5a–f)="" รูปที่="" 5.="">ไตด้วยเครื่องหมาย NOTCH2 และ LC3B และการย้อมสีอิมมูโนเปอร์ออกซิเดสด้วยเครื่องหมาย caspase3 (CASP3) แบบแยก (a–f) การย้อม DNA DAPI ของ DNA นิวเคลียร์ถูกรวมเข้ากับ NOTCH2 และ LC3B จุดที่สังเกตได้คือ P4, P11, P14 การแสดงออกของเครื่องหมาย NOTCH2 และ LC3B ในโกลเมอรูไล (G), ท่อย่อยส่วนปลาย (PCT) และท่อส่วนปลายที่โค้งงอ (DCT) ถูกทำเครื่องหมายด้วยลูกศร ปฏิกิริยา LC3B ที่แรงเป็นพิเศษสามารถสังเกตพบได้ในแคปซูล Bowman ของกลูเมรูไลที่เน่าเปื่อย (เครื่องหมายดอกจัน e) ส่วนแทรกแสดงนิพจน์ที่โดดเด่นที่สุดในรูปภาพ CASP3 แสดงออกได้ไม่ดีในทุกจุดที่สังเกตได้ การแสดงออกที่สำคัญเพียงอย่างเดียวคือใน glomeruli ของหนู yotari บน P14 (ลูกศร) แถบมาตราส่วนคือ 20 µm และอ้างอิงถึงรูปภาพทั้งหมด ชีวโมเลกุล 2021, 11, 609 9 จาก 14 3.4 รูปแบบการแสดงออกเชิงพื้นที่และเวลาของ NOTCH2 และ LC3B เปอร์เซ็นต์ของเซลล์บวกของ NOTCH2-เซลล์บวกน้อยกว่า 20 เปอร์เซ็นต์ในโกลเมอรูไลของยีนของสัตว์ทั้งสองที่จุดเวลาที่สังเกตทั้งหมด เฉพาะที่เปอร์เซ็นต์ P14 ของเซลล์บวกเท่านั้นที่มีโกลเมอรูไลของสัตว์ yotari สูงกว่าสัตว์ประเภทธรรมชาติอย่างมีนัยสำคัญ (p < 0.05,="" รูปที่="" 3c)="" ความเข้มของการย้อมสีอ่อนถึงปานกลาง="" (ตารางที่="" 2)="" ซึ่งส่วนใหญ่อยู่บริเวณรอบนิวเคลียร์="" (รูปที่="" 5a–f)="" ใน="" pct="" และ="" dct="" ของจีโนไทป์ของสัตว์ทั้งสองเปอร์เซ็นต์ของเซลล์บวกเพิ่มขึ้นเมื่อเวลาผ่านไป="" ที่="" p14="" เปอร์เซ็นต์ของเซลล์บวกมีนัยสำคัญใน="" pct="" และ="" dct="" ของสัตว์โยตาริมากกว่า="" pct="" และ="" dct="" ของสัตว์ประเภทป่า="" (p="">< 0.05,="" รูปที่="" 3c)="" ความเข้มของสัญญาณในทุกจุดที่สังเกตพบมีน้อยถึงปานกลาง="" (ตารางที่="" 2)="" และกระจัดกระจายไปทั่วไซโตพลาสซึม="" (รูปที่="">

รูปที่ 5. การย้อมสีอิมมูโนเฟลฟลูออเรสเซนซ์ของชนิดไวด์หลังคลอดและโยตาริไตด้วยเครื่องหมาย NOTCH2 และ LC3B และการย้อมสีอิมมูโนเปอร์ออกซิเดสด้วยเครื่องหมาย caspase3 (CASP3) แบบแยก (a–f) การย้อม DNA DAPI ของ DNA นิวเคลียร์ถูกรวมเข้ากับ NOTCH2 และ LC3B จุดที่สังเกตได้คือ P4, P11, P14 การแสดงออกของเครื่องหมาย NOTCH2 และ LC3B ในโกลเมอรูไล (G), ท่อย่อยส่วนปลาย (PCT) และท่อส่วนปลายที่โค้งงอ (DCT) ถูกทำเครื่องหมายด้วยลูกศร ปฏิกิริยา LC3B ที่แรงเป็นพิเศษสามารถสังเกตพบได้ในแคปซูล Bowman ของกลูเมรูไลที่เน่าเปื่อย (เครื่องหมายดอกจัน e) ส่วนแทรกแสดงนิพจน์ที่โดดเด่นที่สุดในรูปภาพ CASP3 แสดงออกได้ไม่ดีในทุกจุดที่สังเกตได้ การแสดงออกที่สำคัญเพียงอย่างเดียวคือในโกลเมอรูไลของหนูโยตาริบน P14 (ลูกศร) แถบมาตราส่วนคือ 20 µm และอ้างอิงถึงรูปภาพทั้งหมด

ในโกลเมอรูไลและ DCT ของยีนของสัตว์ทั้งสองชนิด เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ที่เป็นบวก LC3B เพิ่มขึ้นตลอดเวลา (p < 0.05,="" รูปที่="" 3d)="" ที่="" p11="" และ="" p14="" เปอร์เซ็นต์ของเซลล์บวกในโกลเมอรูไลของสัตว์โยตาริสูงกว่าโกลเมอรูไลของสัตว์ประเภทธรรมชาติอย่างมีนัยสำคัญ="" (p="">< 0.05,="" รูปที่="" 3d)="" ใน="" glomeruli="" ของสัตว์="" yotari="" ความเข้มของการย้อมสีส่วนใหญ่อยู่ในระดับปานกลางถึงรุนแรง="" (ตารางที่="" 2)="" ซึ่งอยู่ใน="" perinuclear="" และพื้นที่นิวเคลียร์="" (รูปที่="" 5a–f)="" ทุกจุดที่สังเกตได้ในขณะที่="" glomeruli="" ของหนูป่า="" ความเข้มคือ="" ส่วนใหญ่อยู่ในระดับปานกลาง="" (ตารางที่="" 2)="" pct="" ของ="" yotari="" และสัตว์ป่ามีเซลล์บวกประมาณ="" 20="" เปอร์เซ็นต์="" ณ="" จุดเวลาที่สังเกตทั้งหมด="" (p="">< 0.05,="" รูปที่="">

CASP แยก-3 นิพจน์แทบไม่มีการแสดงออกของ CASP ที่เปิดใช้งาน-3ในไตของสัตว์ป่านานาชนิด ณ จุดที่สังเกตได้ทั้งหมด ใน PCT และ DCT ของหนูเมาส์ yotari เซลล์แต่ละเซลล์เป็น CASP-3-ค่าบวก (รูปที่ 3e) เฉพาะในโกลเมอรูลีของไตโยตาริที่ P14 (รูปที่ 5e) เปอร์เซ็นต์ของเซลล์บวกเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับไตของหนูเมาส์ชนิดพันธุ์ป่า (p < 0.05, รูปที่ 3e)

การอภิปราย

ไตmorphogenesis และการพัฒนาเป็นกระบวนการที่ซับซ้อนซึ่งประสานกันอย่างแม่นยำผ่านการมีปฏิสัมพันธ์ของยีนจำนวนมาก ความผิดปกติแต่กำเนิดของไตและทางเดินปัสสาวะ (CAKUT) เป็นความผิดปกติแต่กำเนิดที่พบได้บ่อยที่สุด ซึ่งคิดเป็นร้อยละ 23 ของข้อบกพร่องดังกล่าวทั้งหมด และเป็นสาเหตุสำคัญของการเกิดระยะสุดท้ายโรคไตในเด็ก [28,29]. ความผิดปกติของยีนเดี่ยวอาจเป็นสาเหตุหลักของ CAKUT และจนถึงปัจจุบัน การกลายพันธุ์ในยีนมากกว่า 20 ยีนได้รับการระบุว่าเป็นสาเหตุของ CAKUT [30] เนื่องจากงานก่อนหน้านี้ของเราแสดงให้เห็นการแสดงออกที่ดีของ DAB1 ระหว่างมนุษย์ในครรภ์ปกติไตพัฒนาการ [9] เราคิดว่า DAB1 อาจมีบทบาทสำคัญในระหว่างสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมไตการพัฒนา. เพื่อพิสูจน์สมมติฐานของเรา เราได้ตรวจสอบไตสัณฐานวิทยาและรูปแบบการแสดงออกของโปรตีน Reelin, NOTCH2, LC3B และ CASP3 ที่กระตุ้นในหนูทดลอง Dab1

CISTANCHE จะช่วยเพิ่มอาการปวดไต/ไต

ผ่าผ่านหนูโยตาริไตเผยให้เห็นคอร์เทกซ์ที่บางลงและค่าเฉลี่ยที่เล็กลงอย่างเห็นได้ชัดไตและ PCT, DCT และ G เส้นผ่านศูนย์กลางเมื่อเทียบกับสัตว์ป่า ลดลงในไตขนาดที่เกิดจากการบริจาคไตไม่เพียงพอเรียกว่าไตhypoplasia ซึ่งเป็นโรค CAKUT ที่พบได้บ่อยที่สุดชนิดหนึ่ง ซึ่งทำให้เกิดความดันโลหิตสูงในผู้ใหญ่และโรคไตเรื้อรัง [31] นอกจากนี้ ไมโครโฟโตกราฟที่จับภาพด้วย TEM เผยให้เห็นว่าหนู yotari แสดงความเสียหายของ podocyte อย่างเด่นชัดด้วยการหลุดลอกของกระบวนการที่เท้า และไม่มีรอยแยกการกรอง หลังจากได้รับบาดเจ็บ podocytes จะผ่านกระบวนการ effacement ซึ่งพวกมันสูญเสียโครงสร้าง นำไปสู่การลดการทำงานของสิ่งกีดขวางการกรอง [32] โรคไตทุกรูปแบบ เช่นเดียวกับ focal segmental glomerulosclerosis (FSGS) มีลักษณะเฉพาะโดยข้อบกพร่องในโครงสร้างหรือหน้าที่ของ podocyte [33]

การศึกษาในปัจจุบันของเราแสดงให้เห็นการแสดงออกสูงสุดของ DAB1 ที่ส่วนปลายและส่วนด้านข้างของเยื่อหุ้มเซลล์ของ DCT ในขณะที่ REELIN ส่วนใหญ่กระจัดกระจายไปทั่วไซโตพลาสซึมของ PCT ที่จุดเวลาที่ทำการตรวจสอบ ไม่พบการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาใน tubuli ของหนู yotari แต่จำเป็นต้องมีการตรวจสอบเพิ่มเติมเพื่ออธิบายบทบาทของ DAB1 ในช่องระหว่าง tubulointerstitial มีการโคโลคัลไลเซชันของโปรตีน DAB1 และ REELIN เป็นครั้งคราว ส่วนใหญ่อยู่ใน DCT การค้นพบนี้กำลังติดตามงานก่อนหน้าของเราเกี่ยวกับการแสดงออกของโปรตีนทั้งสองนี้ระหว่างมนุษย์ในครรภ์ไตพัฒนาการ [9]. นี่อาจแนะนำว่า DAB1 และ Reelin มีบทบาทคล้ายคลึงกันในมนุษย์และเมาส์ไตโดยการเปิดใช้งานเส้นทางปลายน้ำบางส่วน เช่น Crk, MAPK และ PI3K/Akt/mTOR การส่งสัญญาณลดหลั่น [34–36] ข้อมูลของเรายังเผยให้เห็นการแสดงออกของรีลลินที่เพิ่มขึ้นในโกลเมอรูไลของหนูโยตาริ ที่น่าสนใจคือ การศึกษาก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่าฟอสโฟรีเลชั่น DAB1 และการแสดงออกของรีลที่เพิ่มขึ้นในโกลเมอรูไลนั้นมาพร้อมกับความดันโลหิตสูง โปรตีนในปัสสาวะ และการบาดเจ็บของพอโดไซต์ในหนูที่ได้รับเชื้อ Ang II [10]

นอกจากนี้ การย้อมสีด้วยอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์เผยให้เห็นการแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของตัวรับ NOTCH2 ในโกลเมอรูลีของหนู P14 yotari เป็นที่ทราบกันดีว่าการแสดงออกของ NOTCH2 จะถูกปรับลดลงเมื่อเกิดการสุกของเนฟรอน ยกเว้นในสภาวะของอาการบาดเจ็บที่ไต,เช่น โรคไตจากเบาหวาน และ FSGS [15,37] หนูที่เป็นโรคไตที่เกิดจาก Adriamycin ยังแสดงการแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของ NOTCH2 ที่กระตุ้นซึ่งช่วยบรรเทาการเกิดพังผืด [38] ณ จุดเวลาที่ตรวจสอบ เราไม่ได้สังเกตเห็นการเกิดพังผืดที่เพิ่มขึ้น แต่ยังคงต้องอธิบายบทบาทที่แน่นอนของ NOTCH2 ที่แสดงออกมาในโยตาริหลังคลอดไตการสังเกตเพิ่มเติมว่าการเปลี่ยนแปลง fifibrotic เกิดขึ้นในระยะหลัง ๆ นั้นจำเป็นหรือไม่ อย่างไรก็ตาม มีการค้นพบบางอย่างที่ชี้ว่าผลกระทบในระยะสั้นของการกระตุ้น NOTCH2 ที่เพิ่มขึ้นนั้นสัมพันธ์กับผลประโยชน์การเอาชีวิตรอดที่แข็งแกร่งสำหรับ podocytes ที่ได้รับบาดเจ็บ ซึ่งสูญหายไปในแบบจำลองระยะยาว เช่น โรคไตจากเบาหวาน [39]

การแสดงออกของ LC3B ที่สูงขึ้นใน glomeruli ของหนู P11 และ P14 yotari อาจสะท้อนถึงการสะสมของ autophagosomes ใน podocytes เพื่อแสดงให้เห็นชัดเจนว่า autophagy ถูกเร่ง จำเป็นต้องวิเคราะห์อัตราส่วนของการแสดงออกของโปรตีน LC3-II และ LC3-I ภายใต้สภาวะปกติ autophagy เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับปกติการทำงานของไต[40] โดยเฉพาะอย่างยิ่งใน podocytes เนื่องจากความจุที่จำกัดสำหรับการแบ่งเซลล์และการเปลี่ยนเซลล์ พวกมันจึงแสดงระดับ autophagy พื้นฐานในระดับสูง [41] แม้จะมีการค้นพบเหล่านี้ แต่มีรายงานการยกระดับในการแสดงออกของ LC3B ในโรคไตหลายชนิด [42–44] ส่วนใหญ่เกี่ยวข้องกับการหลุดลอกของกระบวนการทางเท้าและการพัฒนากลุ่มอาการไต ดังที่เห็นในหนูทดลองที่น่าพิศวง prorenin receptor แบบมีเงื่อนไข [45,46] การศึกษาทั้งหมดเหล่านี้ชี้ให้เห็นถึงบทบาทในการป้องกันของ autophagy ที่เพิ่มขึ้นในสภาวะทางพยาธิวิทยา ซึ่งได้รับการสนับสนุนเพิ่มเติมจากการค้นพบของโรคไตที่เกิดจาก Adriamycin ซึ่ง autophagy จะถูกกระตุ้นเพื่อป้องกันการบาดเจ็บของ podocyte [43] เช่นเดียวกับในโรคไตที่ขึ้นกับอายุซึ่งเกิดความล่าช้า การลดลงของการทำงานแบบก้าวหน้าของการทำงานของไต[40]. การวิเคราะห์ของมนุษย์ไตการตรวจชิ้นเนื้อยังแสดงให้เห็นหลักฐานของ autophagy ที่เพิ่มขึ้นซึ่งสัมพันธ์กับการเกิด foot process effacement ในโรคไตหลายชนิด รวมถึงโรคไตที่เปลี่ยนแปลงน้อยที่สุด (MCNS) ซึ่งเป็นหนึ่งในสาเหตุที่พบบ่อยที่สุดของโรคไตที่ไม่ทราบสาเหตุ [19] ในภาวะโรคไตจากเบาหวานและภาวะเฉียบพลันที่เกิดจากไลโปโพลีแซ็กคาไรด์อาการบาดเจ็บที่ไต,การเพิ่มประสิทธิภาพ autophagy ด้วยการรักษาบางอย่างผ่านการยับยั้งเส้นทาง PI3K/AKT/mTOR ทำให้การทำงานของไตดีขึ้น [47,48] การค้นพบทั้งหมดเหล่านี้บ่งบอกว่า autophagy มีบทบาท cytoprotective ที่ขาดไม่ได้สำหรับการปรับตัวความเครียดในอาการบาดเจ็บที่ไตและการมอดูเลตของมันอาจเป็นกลยุทธ์การรักษาที่มีแนวโน้ม ถึงแม้ว่าในบางกรณี autophagy อาจเป็นอันตรายและก้าวหน้าไปสู่การตายของเซลล์

CISTANCHE จะปรับปรุงไต/ความล้มเหลวของไต

ยกเว้นการเพิ่มขึ้นของ autophagy ระดับ apoptosis ที่เพิ่มขึ้นสามารถสังเกตได้ใน glomeruli ของหนู P14 yotari Autophagy มักจะป้องกัน apoptosis แต่ภายใต้สถานการณ์ทางพยาธิวิทยาเฉพาะ มันสามารถมีผลตรงกันข้ามต่อการอยู่รอดของเซลล์โดยการเพิ่มและส่งเสริมการตายของเซลล์ [42] หลังคลอด Apoptosis ในไตลดลงอย่างมาก เว้นแต่ในเงื่อนไขของอาการบาดเจ็บที่ไต,เช่น โรคไตที่ไม่ทราบสาเหตุซึ่งก่อให้เกิดโรค [23] สาเหตุใหม่ที่อาจเกิดขึ้นของความผิดปกติ แต่กำเนิดแบบถอย autosomal ของไตและทางเดินปัสสาวะ อย่างไรก็ตาม บทบาทหลักของ DAB1 ในช่วงไตการพัฒนายังไม่ชัดเจน นอกจากนี้ หนูเหล่านี้ยังแสดงความผิดปกติของกระบวนการที่เท้าและระดับของรีลลินที่เพิ่มขึ้น, NOTCH2, LC3B และโปรตีน CASP3 ที่แยกออกในโกลเมอรูลีที่อาจนำไปสู่การบาดเจ็บของไต เช่น โรคไต ซึ่งสัมพันธ์กับภาวะ hypoplasia อาจเป็นสาเหตุการตาย ของสัตว์เหล่านี้ในช่วงหย่านม เพื่อยืนยันสมมติฐานนี้ จำเป็นต้องให้ข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับความดันโลหิตและพารามิเตอร์ทางคลินิกและห้องปฏิบัติการอื่นๆ เช่น ระดับของซีรั่มครีเอตินีน อัลบูมิน และโปรตีน