ผลการลดกรดยูริคและกลไกของ acteoside และ echinacoside ที่สกัดจาก cistanche tubulosa

เชิงนามธรรม:ตั้งเป้าหมายที่จะสำรวจผลการลดกรดยูริคและกลไกของ acteoside (AS) และ echinacoside (ECH) ที่สกัดจากcistanche tubulosa.

วิธีการแบบจำลองหนู hyperuricemia (HUA) ถูกสร้างขึ้นโดยใช้โพแทสเซียม oxonate (1.5 g · kg -1 · d -1) รวมกับ adenine (100 mg · kg -1 · d {-1) หนูตัวแบบ HUA ถูกสุ่มแบ่งออกเป็นกลุ่มควบคุมแบบจำลองกลุ่ม allopurinol (30 mg · kg -1 · d -1) ต่ำและสูง (50, 100 mg · kg -1 · d -1 mg · kg -1 · d -1) กลุ่มปริมาณ ก่อนหน้านี้กลุ่มควบคุมปกติถูกจัดตั้งขึ้นก่อนหน้านี้ หลังจากสี่สัปดาห์ของการบริหารเครื่องวิเคราะห์ชีวเคมีในเลือดถูกใช้เพื่อตรวจจับ SUA urea, Crea, adenosine deaminase (ADA) และระดับกรดยูริค (UUA) ในปัสสาวะ การทดสอบอิมมูโนซอร์เบนท์ที่เชื่อมโยงของเอนไซม์ใช้ในการตรวจจับระดับ xanthine oxidase (XOD) ในซีรั่ม รวบรวมเนื้อเยื่อไตและมีการชั่งน้ำหนักค่าสัมประสิทธิ์ไตและคำนวณ hematoxylin eosin (HE) การย้อมสีถูกใช้เพื่อสังเกตการเปลี่ยนแปลงทางพยาธิวิทยาของไต Immunohistochemistry (IHC) และ PCR แบบเรียลไทม์ถูกนำมาใช้ในการตรวจจับระดับโปรตีนและ mRNA ของการแสดงออกของ mRNA ของ transporter 1 (URAT1), การขนส่งกลูโคส 9 (GLUT9), การขนส่งประจุลบอินทรีย์ 1 (OAT1) และ transporter ประจุลบอินทรีย์ 3 (OAT3) ผลลัพธ์ AS และ ECH สามารถปรับปรุงการทำงานของไตในหนูแบบจำลอง HUA ลดระดับกรดยูริคในเลือดส่งเสริมการขับถ่ายกรดยูริคลดระดับซีรั่มของ ADA และ XOD และเพิ่มการแสดงออกของโปรตีนและ mRNA ของ URAT1 และ GLUT9 ในเนื้อเยื่อไต

บทสรุป phenylethanoid ไกลโคไซด์เป็นและ ECH จาก cistanche tubulosa อาจออกฤทธิ์เพิ่มผลกรดยูริคโดยการปรับปรุงการทำงานของไตในหนูตัวแบบ HUA ลดระดับ ADA และ XOD และควบคุมการแสดงออกของ URAT1, GLUT9, OAT1 และ OAT3

คำสำคัญ: cistanche tubulosa; acteoside- Echinacoside; ภาวะ hyperuricemia; ลดกรดยูริค กลไก

 

 

 

Cistanche tubulosa สารสกัดด้วย 16% acteoside

ติดต่อเราตอนนี้

 

 

 

hyperuricemia (HUA) เป็นโรคเมตาบอลิซึมที่เกิดจากการเผาผลาญ purine ที่ไม่เป็นระเบียบในร่างกายมนุษย์นำไปสู่ระดับกรดยูริคเลือดสูง [1] โดยทั่วไปแล้วจะได้รับการวินิจฉัยเมื่อระดับกรด Uric ในเลือดเกิน 7. 0 mg ·dl⁻⁻ (416. 0 μmol·l⁻) ในผู้ชายและ 6. 0 mg ·dl⁻ (357 การพัฒนาของภาวะ hyperuricemia ส่วนใหญ่เกี่ยวข้องกับปัจจัยต่าง ๆ เช่นอาหารที่มีความบริสุทธิ์สูงการบริโภคแอลกอฮอล์เรื้อรังการใช้ยาและภาวะไทรอยด์ทำงาน ไม่เพียง แต่เพิ่มความเสี่ยงของโรคหัวใจและหลอดเลือดเบาหวานและความดันโลหิตสูง [3-4] แต่ยังส่งผลกระทบต่อสุขภาพของผู้ป่วยอย่างมีนัยสำคัญ

ปัจจุบันการรักษาทางคลินิกสำหรับภาวะ hyperuricemia ส่วนใหญ่รวมถึงยาที่ยับยั้งการผลิตกรดยูริคและส่งเสริมการขับถ่ายกรดยูริค อย่างไรก็ตามการรักษาเหล่านี้มีข้อ จำกัด บางประการสำหรับผู้ป่วยที่มีการทำงานของตับหรือไตที่บกพร่อง [5-6] ดังนั้นการสำรวจยาที่มีประสิทธิภาพที่มีผลข้างเคียงต่ำจึงมีความสำคัญอย่างยิ่งสำหรับการป้องกันและรักษาภาวะเลือดคั่งในเลือดสูง

Cistanche Tubulosa (Schenk) R. Wightใช้กันทั่วไปในการแพทย์แผนจีนเป็นสมุนไพรที่มีไตที่มีการปรับไตใช้ในการรักษาสภาพเช่นความอ่อนแอการมีบุตรยากการขาดสาระสำคัญและเลือดความอ่อนแอในหลังส่วนล่างและหัวเข่าความอ่อนแอของกล้ามเนื้อและอาการท้องผูกเนื่องจากความแห้งกร้านของลำไส้ [7] การศึกษาได้แสดงให้เห็นว่าcistanche tubulosaมีระบบประสาท [8], ต้านการอักเสบ [9], การเผาผลาญของกระดูก [10] และผลการเพิ่มประสิทธิภาพในการรักษาด้วยเคมีบำบัดสำหรับผู้ป่วยมะเร็ง [11] ในบรรดาองค์ประกอบที่ใช้งานต่าง ๆ phenylethanoid ไกลโคไซด์นั้นมีมากที่สุด

Acteoside (AS) และ echinacoside (ECH), glycosides phenylethanoid สองตัวที่มีเนื้อหาสูงในcistanche tubulosaแสดงกิจกรรมทางชีวภาพที่แข็งแกร่งและมีศักยภาพที่สำคัญสำหรับการพัฒนาและการประยุกต์ใช้ ดังนั้นกลุ่มวิจัยของเราจึงเลือกเป็นและ ECH สำหรับการศึกษาต่อไป ผ่านการทำนายเภสัชวิทยาเครือข่ายและการทดลองล่วงหน้าในหนูเราค้นพบว่าสารสกัดจาก phenylethanoid glycoside จากcistanche tubulosaอาจมีผลการลดกรดยูริค อย่างไรก็ตามเส้นทางและกลไกของผลกระทบเหล่านี้ยังไม่ชัดเจน

ดังนั้นการใช้กลไกของการผลิตกรดยูริคและเส้นทางการขับถ่ายหลักในฐานะที่เป็นจุดสนใจการวิจัยเราได้ตรวจสอบผลการลดกรดยูริคของสารสกัดจาก phenylethanoid glycoside และ ECH การศึกษาครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่ออธิบายเส้นทางและกลไกที่ AS และ ECH ออกแรงเอฟเฟกต์การลดกรดยูริค

1 วัสดุ

1.1 สัตว์ทดลอง

หนู Sprague-Dawley (SD) เจ็ดสิบคนซึ่งมีน้ำหนัก 150–180 กรัมถูกซื้อจากศูนย์สัตว์ทดลองของมหาวิทยาลัยการแพทย์ซินเจียง หมายเลขใบอนุญาตการผลิตสัตว์: SCXK (XIN) 2023-0001 การทดลองนี้ได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการจริยธรรมสัตว์ของสถาบันวิจัยการแพทย์ Uygur ในเขตปกครองตนเองของ Xinjiang โดยมีหมายเลขอนุมัติจริยธรรมสัตว์: IACUC- (Zhun) -2024-009

1.2 ยาและรีเอเจนต์

สารสกัด phenylethanoid glycoside (AS และ ECH)จากcistanche tubulosa (purity >98%, ตรวจสอบโดยโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง) ได้รับการสกัดบริสุทธิ์และจัดทำโดยห้องปฏิบัติการสำคัญของวิทยาศาสตร์การกำหนด Uygur, สถาบันวิจัยการแพทย์ Uygur ในเขตปกครองตนเอง Xinjiang หมายเลขแบทช์: 20220617 (AS) และ 20220526 (ECH)

แท็บเล็ต allopurinol, หมายเลขแบทช์: 62208726 ผลิตโดย Jiangsu Wanbang Biochemical Pharmaceutical Group Co. , Ltd.

โพแทสเซียมออกซิเจนและadenine, หมายเลขแบทช์: I2130050 และ C2202255, ซื้อจาก Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co. , Ltd.

CREA (creatinine), UA (กรดยูริค), ยูเรียและ ADA (adenosine deaminase) ชุดทดสอบ, หมายเลขแบทช์: 141123010, 141223004, 141323008 และ 043624005 ซื้อจาก Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co. , Ltd.

ชุดทดสอบกิจกรรม XOD (xanthine oxidase), หมายเลขแบทช์: Y10001219, ซื้อจาก บริษัท Shanghai Macklin Biochemical Technology, Ltd.

แอนติบอดี (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3), หมายเลขแบทช์: 3I5723 0, 92F0296/4, 0F33081/2I44618, ซื้อจาก Affinity Biosciences

IgG anti-anti-labited HRP, หมายเลขแบทช์: 245440113, ซื้อจาก ZSGB-Bio

สารละลายการย้อมสี hematoxylin, หมายเลขแบทช์: 24135741H, ซื้อจาก บริษัท ปักกิ่ง Lanjieke Technology Co. , Ltd.

DAB Chromogenic Reagent Kit, หมายเลขแบทช์: 240010512, ซื้อจาก ZSGB-Bio

Depc (diethyl pyrocarbonate), หมายเลขแคตตาล็อก: d 60029-500 ml, ซื้อจาก Amresco (USA)

M5 HICLEAR DL2000 DNA marker, หมายเลขแคตตาล็อก: MF025, ซื้อจากปักกิ่ง Genomics Biotechnology Co. , Ltd.

รีเอเจนต์ Trizol ™, หมายเลขแคตตาล็อก: 15596026, ซื้อจาก Thermo Fisher Scientific (USA)

5x all-in-one rt mastermixและEvagreen Express 2 × QPCR Mastermix-Low Rox, หมายเลขแคตตาล็อก: G492 และ G891, ทั้งคู่ซื้อจากวัสดุชีวภาพประยุกต์ (ABM)

2 วิธี

2.1 รูปแบบการจัดตั้งและการจัดกลุ่ม

หนูตัวผู้เจ็ดสิบตัว-Dawley (SD) ถูกปรับตัวและแบ่งออกเป็นสองกลุ่ม: กลุ่มควบคุมปกติ (1 0} หนู) และกลุ่มควบคุมแบบจำลอง (หนู 60 หนู) กลุ่มควบคุมปกติได้รับการจัดการ 0.5% CMC-Na ผ่าน Gavage กลุ่มควบคุมแบบจำลองได้รับการจัดการโพแทสเซียมออกซิเจน (1.5 g ·kg⁻) รวมกับ adenine (100 mg ·kg⁻⁻) ในขนาด 10 มล. ·kg⁻, วันละครั้งเป็นเวลา 14 วันติดต่อกัน แบบจำลองนี้ได้รับการพิจารณาว่าประสบความสำเร็จเมื่อระดับยูเรีย, Crea และ SUA เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญซึ่งวัดโดยเครื่องวิเคราะห์ทางชีวเคมี

หนูแบบจำลองภาวะ hyperuricemia ถูกแบ่งออกเป็นกลุ่มต่อไปนี้ตามระดับ SUA, ยูเรียและระดับ Crea: กลุ่มควบคุมแบบจำลอง, กลุ่ม allopurinol (3 0 mg ·kg⁻), ขนาดต่ำ (50 mg ·kg⁻) ECH Group (100 mg ·kg⁻) โดยมีหนู 10 ตัวในแต่ละกลุ่ม เพื่อรักษาภาวะ hyperuricemia ที่มีเสถียรภาพทุกกลุ่มยกเว้นกลุ่มควบคุมปกติได้รับการบริหารโพแทสเซียม oxonate (500 mg ·kg⁻) รวมกับ adenine (100 mg ·kg⁻) ผ่าน gavage ในตอนเช้าตามด้วยการบริหารยาที่เกี่ยวข้องในแต่ละกลุ่มการรักษาในช่วงบ่าย กลุ่มควบคุมปกติได้รับสารละลาย CMC-NA 0.5% ในตอนเช้าและน้ำดื่มในตอนบ่ายในขนาด 10 มล. ·กิโลกรัม⁻วันละครั้งเป็นเวลา 14 วันติดต่อกัน หลังจากนั้นการบริหารของตัวแทนการสร้างแบบจำลองก็หยุดลงและยาที่เกี่ยวข้องได้รับการบริหารอย่างต่อเนื่องทุกวันเป็นเวลา 14 วัน

 

2.2 การรวบรวมตัวอย่าง

หลังจากปริมาณครั้งสุดท้ายหนูถูกอดอาหารข้ามคืน (น้ำไม่ จำกัด ) ปัสสาวะจากแต่ละกลุ่มถูกรวบรวมสำหรับการทดสอบกรดยูริค น้ำหนักตัวถูกวัดหลังการอดอาหารและเก็บตัวอย่างเลือดภายใต้การดมยาสลบ เซรั่มถูกคั่นด้วยการหมุนเหวี่ยงและเก็บไว้เพื่อการใช้งานในอนาคต เนื้อเยื่อไตถูกรวบรวมและชั่งน้ำหนัก ไตหนึ่งได้รับการแก้ไขในสารละลายพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 4% ในขณะที่อีกตัวหนึ่งถูกแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวเพื่อการวิเคราะห์เพิ่มเติม

 

2.3 การวัดกรดยูริคในปัสสาวะหนู

ตัวอย่างปัสสาวะจากแต่ละกลุ่มถูกปั่นเหวี่ยง (3, 000 r ·min⁻, 10 นาที, รัศมีการหมุนเหวี่ยง 14 ซม.) และรวบรวม supernatant ตัวอย่างปัสสาวะถูกเจือจาง 1: 9 ด้วยน้ำเกลือและวิเคราะห์ปริมาณกรดยูริคโดยใช้เครื่องวิเคราะห์ทางชีวเคมี

2.4 การวัด ADA, Urea, Crea และ Sua ในเซรั่มหนู

ตัวอย่างเลือดจากแต่ละกลุ่มถูกปั่นแยก (3, 000 r ·min⁻, 10 นาที, รัศมีการหมุนเหวี่ยง 14 ซม.) และรวบรวมเซรั่ม ระดับ ADA, ยูเรีย, Crea และ SUA ในซีรั่มถูกวัดโดยใช้เครื่องวิเคราะห์ทางชีวเคมี

 

2.5 การวัด XOD ในเซรั่มหนู

การเปลี่ยนแปลงระดับ XOD ในเซรั่มหนูถูกวัดโดยใช้การทดสอบเอนไซม์ตามคำแนะนำของผู้ผลิต การดูดกลืนแสงเริ่มต้น (A₁) และการดูดซับครั้งสุดท้าย (A₂) ที่ 290 nm ถูกบันทึกและคำนวณΔA (ΔA=A₂ - A₁) ΔAถูกแทนที่เป็นสูตร:
xod (nmol⁻⁻·min⁻⁻·ml⁻⁻)=[ΔA×ระบบปฏิกิริยาปริมาตรรวมปริมาตร÷ (ค่าสัมประสิทธิ์การสูญพันธุ์ของกรดยูริค×ความยาวเส้นทางแสง) ×10⁹] ÷ปริมาตรตัวอย่าง,
ในการคำนวณปริมาณของกรดยูริคเร่งปฏิกิริยาต่อนาทีต่อมิลลิลิตรของซีรั่ม

 

2.6 การวัดค่าสัมประสิทธิ์ไต

เนื้อเยื่อไตถูกรวบรวมล้างด้วยน้ำเกลือและน้ำส่วนเกินถูกกำจัดออกไป น้ำหนักอวัยวะถูกวัดอย่างแม่นยำและค่าสัมประสิทธิ์ไตถูกคำนวณดังนี้:
ค่าสัมประสิทธิ์ไต=น้ำหนักไต (MG) / น้ำหนักตัว (G)

 

2.7 การสังเกตทางจุลพยาธิวิทยาของเนื้อเยื่อไตโดยการย้อมสี

เนื้อเยื่อของไตคงที่ในสารละลายพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 4% ถูกทำให้แห้งด้วยความเข้มข้นของเอทานอลเกรดล้างด้วยไซลีนฝังอยู่ในพาราฟินและแบ่งออกเป็นชิ้น 4- μm ส่วนที่ถูก deparaffinized ด้วยไซลีนชุ่มชื้นด้วยเอทานอลเกรดเปื้อนด้วย hematoxylin และ eosin (HE) และปิดผนึกด้วยหมากฝรั่งที่เป็นกลาง การเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาในเนื้อเยื่อไตถูกตรวจพบภายใต้กล้องจุลทรรศน์แสงและภาพถูกจับที่ 400 ×กำลังขยาย

 

2.8 การตรวจหา URAT1, GLUT9, OAT1 และการแสดงออกของโปรตีน OAT3 ในเนื้อเยื่อไตโดย IHC

เนื้อเยื่อไตคงที่ในสารละลายพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 4% ถูกทำให้แห้งด้วยความเข้มข้นของเอทานอลอย่างให้คะแนนล้างด้วยไซลีนฝังอยู่ในพาราฟินและแบ่งส่วน ทำการดึงแอนติเจนและการบล็อกเซรั่มแพะ แอนติบอดีปฐมภูมิ (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3) ถูกเพิ่มที่การเจือจาง 1: 200 และบ่มข้ามคืนที่ 4 องศา ในวันถัดไปส่วนที่ถูกล้างด้วย PBS, อากาศแห้งและบ่มด้วย IgG ต่อต้านกระต่าย Biotin ที่ติดฉลากไบโอตินที่ 37 องศาเป็นเวลา 30 นาที ส่วนที่ถูกล้างด้วย PBS และบ่มด้วยน้ำรีเอเจนต์ chromogenic DAB เป็นเวลา 10 นาทีตามด้วยการล้าง PBS, การย้อมสี hematoxylin เป็นเวลา 3 นาที, ความแตกต่างกับสารละลายเอทานอลกรดไฮโดรคลอริก, ลิเธียมคาร์บอเนตบลู

สำหรับหนูแต่ละตัวสุ่มสอง 4 0 0 ×ฟิลด์ของส่วนไตถูกเลือก วิเคราะห์การย้อมสีบวก (สีน้ำตาลเหลือง) และวัดความหนาแน่นของแสงแบบบูรณาการ (IOD) ของแต่ละฟิลด์โดยใช้ Image-Pro Plus 6.0 สำหรับการวิเคราะห์ทางสถิติ