Tubuloside B จาก Cistanche Salsa ช่วยชีวิต PC12 Neuronal Cells จาก 1-Methyl-4-phenylpyridinium Ion-Induced Apoptosis และ Oxidative stress

ติดต่อ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 อีเมล:audrey.hu@wecistanche.com

Guoqing Zheng, Xiaoping Pu, Li Lei, Pengfei Tu, Changling Li

เชิงนามธรรม:

สารป้องกันประสาทผลของ tubuloside B จาก cistancheฟีนิลทานอยด์ชนิดหนึ่งที่แยกได้จากจีนยาสมุนไพร Cistanche salsa, บน 1-เมทิล-4-ฟีนิลไพริดิเนียมไอออน (MPP บวก ) ที่เหนี่ยวนำให้เกิดการตายของเซลล์และความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันในเซลล์ประสาท PC12 ถูกตรวจสอบ เซลล์ PC12 ที่รับการรักษาด้วย MPP ＋ได้รับการตายแบบอะพอพโทติกตามที่กำหนดโดยการทดสอบ MTF, โฟลว์ไซโตเมทรี และ DNA agarose gel electrophoresis การสะสมภายในเซลล์ของชนิดออกซิเจนที่เกิดปฏิกิริยา (ROS) ถูกวัดโดยการย้อมสี DCFH-DA ด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบส่องกราดด้วยเลเซอร์ (LSCM) การรักษาพร้อมกันด้วย tuhuloside B ช่วยลดทอนความเป็นพิษต่อเซลล์ที่เกิดจากMPP＋ การกระจายตัวของดีเอ็นเอ และการสะสม ROS ภายในเซลล์ ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้อย่างชัดเจนว่าทูบูโลไซด์บีช่วยป้องกันการตายของเซลล์ที่เกิดจาก MPP และความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน Tubuloside B อาจใช้เป็น anต้านโรคพาร์กินสันตัวแทน

บทนำ

ในทางพยาธิวิทยา โรคพาร์กินสัน (PD) เป็นระยะๆ มักมีลักษณะเฉพาะโดยการสูญเสียเซลล์ประสาท catecholaminergic โดยเฉพาะอย่างยิ่งเซลล์ประสาท dopaminergic ของ substantia nigra pars compacta (SNc) และการปรากฏตัวของ intraneurona ที่มีลักษณะเฉพาะ| การรวมที่เรียกว่าร่างกาย Lewy ในบริเวณสมองที่ได้รับผลกระทบ แม้จะมีปัจจัยหลายอย่างที่เกี่ยวข้องในการเกิดโรคของ PD แต่กลไกที่เกี่ยวข้องกับการเริ่มต้นและความก้าวหน้าของ PD ยังคงไม่แน่นอน แม้ว่าสาเหตุของ PD จะยังคงได้รับคำตอบ หลักฐานหลายบรรทัดชี้ให้เห็นถึงการมีส่วนร่วมของความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน ในที่สุดก็นำไปสู่ ต่อการตายของเซลล์ประสาทหรือการตายของเซลล์โดยการสร้างอนุมูลอิสระที่มากเกินไป [1 ], [2], [3] ความจริงที่ว่าระบบโดปามีนเนอร์จิกไนกรัมสามารถผลิตอนุมูลอิสระในระดับสูงและมีระบบป้องกันสารต้านอนุมูลอิสระในระดับที่ค่อนข้างต่ำสนับสนุนสมมติฐานนี้ต่อไป การศึกษาทั้ง ในร่างกาย และ ในหลอดทดลอง แสดงให้เห็นถึงความเป็นพิษต่อระบบประสาทที่เกิดจากความเครียด ออกซิเดชัน ของ MPP＋ ซึ่งเป็นสารออกฤทธิ์ของ l-methyl-4-phenyl-l,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP) ในเซลล์ประสาทโดปามีน [4 ], [5]. การมีส่วนร่วมของอนุมูลอิสระที่เกิดจากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันมากเกินไปเป็นสาเหตุใกล้เคียงของความผิดปกติของระบบประสาทเช่น PD แสดงให้เห็นบทบาทสำคัญของสารต้านอนุมูลอิสระ Tubuloside B (รูปที่ l) เป็นหนึ่งในสารประกอบฟีนิลทานอยด์ที่แยกได้จากลำต้นของซิสแทนเช่ ซัลซ่า. การศึกษาก่อนหน้านี้พบว่าฟีนิลทานอยด์หลายชนิดรวมทั้งทูบูโลไซด์บีแสดงฤทธิ์การขับอนุมูลอิสระที่รุนแรง[6], [7]

เมื่อพิจารณาจากการค้นพบนี้ เราได้ตรวจสอบในการศึกษาปัจจุบันถึงผลกระทบของ tubu]nside B ต่อ MPP บวกกับความเป็นพิษต่อระบบประสาทในหลอดทดลอง โดยใช้ PC12 เซลล์ประสาทซิมพาเทติก pheochromocytoma ที่ประสบความสำเร็จในการศึกษาการทำงานของเซลล์ประสาทตลอดหลายปีที่ผ่านมา [8], [9].

โรคพาร์กินสัน:cistanche

วัสดุและวิธีการ

วัสดุ

Tubuloside B จากซิสแทนเช่ ซัลซ่าได้รับความกรุณาจาก Dr. Li Lei (Department of Natural Products, School of Pharmaceutical Sciences, Peking University, Beijing, China) ความบริสุทธิ์ของสารประกอบมากกว่า 98 เปอร์เซ็นต์โดยการวิเคราะห์ HPLC อาหารกลางของ Eagle (DMEM) ดัดแปลงของ Dulbecco เซรั่มม้า และเซรั่มลูกวัวของทารกในครรภ์ถูกซื้อจาก GIBCO BRL 1-เมทิล~-ฟีนิลไพริดิเนียมไอออน (MPP plus ), โพลี-L-ไลซีน, 3-(4, 5 -ไดเมทิลไทอะซอล-2 -อิล)-2,5- ไดฟีนิลเตตตราโซเลียมโบรไมด์ (MTT), โพรพิเดียม ไอโอไดด์ (PI), RNase A, โปรตีเอส K และ 2;7'-ไดคลอโรฟลูออเรสซีน ไดอะซิเตต (DCFH-DA) ซื้อมาจากซิกมา

การเพาะเลี้ยงเซลล์

เซลล์ PCI2 ถูกคงสภาพไว้ใน DMEM ที่เสริมด้วยซีรัมของม้า 10 เปอร์เซ็นต์, ซีรัมของลูกวัว 5 เปอร์เซ็นต์, เพนิซิลลิน 100U/มล และสเตรปโตมัยซิน 100 มก./มล. เซลล์ถูกเพาะเลี้ยงในตู้อบที่มีความชื้นซึ่งถูกเติมอากาศด้วยอากาศ 95 เปอร์เซ็นต์และ CO2 5% ที่ 37 องศา การทดลองทั้งหมดดำเนินการ 24-48 ชั่วโมงหลังจากเซลล์ถูกเพาะ เซลล์ถูกเก็บเกี่ยวเป็นประจำโดยทริปซิไนเซชั่น 0.25 เปอร์เซ็นต์ เมื่อเซลล์เข้าใกล้ระยะการบรรจบกันย่อยและเคลือบในขวดเพาะเลี้ยงขนาด 25 ซม. แยกออกที่ 1: 8

การวิเคราะห์ความมีชีวิตของเซลล์

ความอยู่รอดของเซลล์ถูกกำหนดหาโดยใช้การสอบวิเคราะห์ MTT ที่ดัดแปลงตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [10] โดยสังเขป เซลล์ PC12 ถูกเพาะในเพลต 96-หลุมที่ความหนาแน่น I × 104 เพดานต่อหลุม เพาะเลี้ยงเป็นเวลา 48 ชั่วโมง จากนั้นจึงเปลี่ยนอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีความเข้มข้นต่าง ๆ ของ tubulnside B หรือ MPP＋ หลังจากการฟักตัวนานถึง 48 ชม. และ 72 ชม. สารละลาย MTr (5 มก./มล. ใน DMEM) ถูกเติมลงในเพลต 96-หลุม และเซลล์ถูกปล่อยให้ฟักตัวเป็นเวลา 4 ชม. ที่ 37 องศา หลังจากที่นำสื่อออกแล้ว เซลล์และผลึกของสีย้อมถูกละลายโดยการเพิ่ม 200μL ของ DMSO และวัดการดูดกลืนที่ 570 นาโนเมตร (540 นาโนเมตรเป็นข้อมูลอ้างอิง) ด้วยเครื่องอ่านไมโครเพลทรุ่น 550 (Bio-Rad) ความอยู่รอดของเซลล์ยังถูกวิเคราะห์โดยใช้วิธีการแยกทริปแพนบลู เซลล์ถูกรวบรวม อัดเป็นก้อนเบา ๆ และย้อมด้วยสารละลายทริปแพนบลู 0.6 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 3 สายฝน เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ที่ไม่มีสีได้รับการประเมินในภายหลังในสิบช่องกล้องจุลทรรศน์ที่เลือกแบบสุ่ม เป็นยาที่ให้ผลบวก ใช้ 100 ng／ml epidermal growth factor (EGF)

การตรวจหาอะพอพโทซิสโดยโฟลว์ไซโตเมทรี

เซลล์อะพอพโทติกตรวจพบโดยโฟลว์ไซโตเมทรีโดยใช้โพรพิเดียมไอโอไดด์ (PI) [11] โดยสังเขป ประมาณ 1 × 106 เซลล์ที่ถูกบ่มด้วยสารทดสอบถูกเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยงและถูกล้างหนึ่งครั้งด้วย PBS เซลล์ถูกตรึงด้วยเอทานอล 70 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่ - 20 องศาและล้างหนึ่งครั้งด้วย PBS จากนั้นเซลล์ถูกแขวนลอยใหม่ใน 300μL ของ PBS ที่มี RNase 0.5 มก./มล. และ PI 0.5 มก./มล. หลังจากการบ่มต่อไปเป็นเวลา 30 นาทีในความมืด โฟลว์ไซโตเมทรีถูกดำเนินการด้วย FACScan (Becton Dickinson, Heidelberg, Germany)

เราใช้โปรโตคอลของมัวร์ [12] ที่แยกเฉพาะ DNA ที่แยกส่วนและการทดลองถูกทำให้เป็นมาตรฐานโดยใช้จำนวนวัฒนธรรมที่เท่ากันจากแต่ละกลุ่มทดสอบ โดยสังเขป เซลล์ประสาท 3 × 106 เซลล์จากตัวอย่างที่บำบัดแต่ละตัวอย่างถูกล้างในสารละลายเกลือที่สมดุลของแฮงค์ (1000ก. เป็นเวลา 10 นาที) และเม็ดที่เกิดขึ้นที่ด้านล่างของหลอดถูกทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน ด้วยบัฟเฟอร์ lysis 1 มล. (10 mM Tris ที่ pH 7.4 5 mM EDTA, 1 เปอร์เซ็นต์ Triton X-100) เป็นเวลา 20 นาทีบนน้ำแข็ง หลังจากการปั่นแยกที่ 11 000 g เป็นเวลา 20 ฝนที่ 4 องศา เหนือตะกอนที่มี DNA แยกส่วนจะถูกลบออกและย่อยด้วย RNase A 20 มก./มล. ที่ 37 องศาเป็นเวลา 1 ชั่วโมง และโปรตีเอสเค 0.1 มก./มล. ที่ 56 องศา ต่ออีก 1 ชม. DNA ที่แยกส่วนถูกสกัดโดยใช้ฟีนอลและคลอโรฟอร์มและปั่นแยกที่ 1O,000g เป็นเวลา 1 ฝนที่ 4 C เฟสที่เป็นน้ำถูกถ่ายโอนไปยังหลอด Eppendorf ใหม่ ผสมกับเอทานอลที่เย็นจัด 2 ปริมาตร จากนั้น วางไว้ที่ -20 องศาเป็นเวลาอย่างน้อย 1 ชั่วโมงเพื่อให้ DNA ตกตะกอน หลังจากการปั่นแยกที่ 15,000g เป็นเวลา 20 นาทีที่ 4 องศา , supernatants จะถูกลบออก และเม็ด DNA ถูกล้างด้วยเอทานอล 80 เปอร์เซ็นต์หนึ่งครั้ง (15,000 g เป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 องศา ) ให้แห้งในอากาศ และละลายใน 20μL TE บัฟเฟอร์ที่ pH 7.6 จากนั้นตัวอย่างทั้งหมดจะถูกอิเล็กโตรโฟรีสบนเจลอะกาโรส 1.5 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 85 โวลต์ เจลได้รับการตรวจสอบและถ่ายภาพโดยระบบเอกสาร Ultra Violet Products Gel (GELDOC-2000, Bio-Rad, USA)

การวัดการก่อตัวของ ROS ภายในเซลล์

ตรวจพบการก่อตัวของเปอร์ออกไซด์ภายในเซลล์ด้วยกล้องจุลทรรศน์เลเซอร์สแกนคอนโฟคอลโดยใช้สารประกอบที่ไม่เรืองแสง 2"7"-ไดคลอโรฟลูออเรสเซนไดอะซิเตต (DCFH-DA) [13] ซึ่งถูกทำให้เป็นเอสเทอร์ภายในเซลล์โดยเอสเทอเรสภายในเซลล์ไปยังกรดอิสระที่แตกตัวเป็นไอออน 2 ;7"-dichlorofluorescein. 2",7-Dichlorofiuorescin สามารถถูกออกซิไดซ์เป็นฟลูออเรสเซนต์ 2"7"-dichlorofluorescein (DCF) ด้วยสารไฮโดรแอนติออกซิแดนท์ เซลล์ถูกบ่มด้วย DCFH-DA 10 ไมโครโมลาร์ เป็นเวลา 30 นาทีที่ 37 องศา วัฒนธรรมถูกล้างสองครั้งด้วยสารละลายเกลือที่สมดุลของแฮงค์และถ่ายภาพในตัวกลางเดียวกัน การถ่ายภาพทำได้โดยใช้กล้องจุลทรรศน์เลเซอร์สแกนคอนโฟคอล DCF ตื่นเต้นที่ 488 นาโนเมตร และตัวกรองการปล่อยแสงเป็นฟิลเตอร์กั้น 510 นาโนเมตร เพื่อให้การเปรียบเทียบที่ถูกต้อง พารามิเตอร์การได้มาแบบเดียวกันจึงถูกนำมาใช้สำหรับการสังเกตทั้งหมด ตำแหน่งแนวตั้งที่เหมาะสมที่สุดตรงกลางเซลล์ถูกตั้งค่า จากนั้นฟิลด์จะถูกสแกนอย่างรวดเร็ว เนื่องจากการส่องสว่างที่ความยาวคลื่นกระตุ้นที่ 488 นาโนเมตรทำให้เกิดการเรืองแสงเพิ่มขึ้นเนื่องจากการเกิดออกซิเดชันของสีย้อมนี้ แต่ละสนามจึงได้รับแสงในเวลาเดียวกันทุกประการ ค่าพื้นฐานจากเซลล์ที่ไม่ถูกกระตุ้นถูกใช้เป็นค่าควบคุมเพื่อเปรียบเทียบกับเซลล์ที่ได้รับการบำบัดด้วย MPP โดยมีหรือไม่มีทูบูโลไซด์ บี หลังจากการสแกน ความเข้มของการเรืองแสงสัมพัทธ์โดยเฉลี่ยในเซลล์ประสาท 15-20 ตัวของเซลล์ประสาทต่อช่องกล้องจุลทรรศน์ถูกหาปริมาณในสี่ แยกวัฒนธรรมตามเงื่อนไขการรักษา

cistanche

การวิเคราะห์ทางสถิติ

ค่าทั้งหมดที่ได้รับแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ±SD นัยสำคัญทางสถิติของความแตกต่างระหว่างกลุ่มถูกกำหนดโดยการทดสอบ t ของนักเรียน ค่า p ที่คำนวณได้น้อยกว่า 0.05 ถือว่ามีนัยสำคัญทางสถิติ

ผลลัพธ์

ดังแสดงในรูปที่ 2 MPP plus ทำให้ความอยู่รอดของเซลล์ PCI2 ลดลงตามขนาดยา ในทางตรงกันข้าม EGF ซึ่งเป็นปัจจัยเกี่ยวกับโรคประสาทที่รู้จักกันดี ให้การป้องกันที่สำคัญของการมีชีวิตของเซลล์ที่ผลที่เป็นพิษต่อเซลล์ที่เกิดจาก MPP＋ 100ng/mL ก็ถูกลดทอนเช่นกันเมื่อมีทูบูโลไซด์บี (5, 10, 50 หรือ100ug-มล.-1 ) แม้ว่าจะมีศักยภาพน้อยกว่ายาอ้างอิง (รูปที่.3). Tubuloside B ที่ความเข้มข้นเหล่านี้แสดงผล cytoprotective ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา และสารประกอบเพียงอย่างเดียวไม่ก่อให้เกิดความเป็นพิษต่อเซลล์ (ไม่แสดงข้อมูล) เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสของสารสกัด DNA จากเซลล์ PCI 2 ที่บำบัดด้วย MPP 200 µM บวกเป็นเวลา 48 ชม. แสดงให้เห็นแลดเดอร์ของ DNA เครื่องหมายรับรองคุณภาพแบบคลาสสิกของอะพอพโทซิส ทูบูโลไซด์ บี ที่ขนาด 10 และ100μ ก·มล-1การศึกษาการก่อตัวของดีเอ็นเอแลดเดอร์(รูปที่.4)．รูปที่.5 แสดงฮิสโทแกรมทั่วไปของการวิเคราะห์โฟลว์ไซโตเมตริกของการตายของเซลล์อะพอพโทติกที่เกิดจาก MPP＋ ในเซลล์ PC12 เมื่อมีหรือไม่มี tubuloside B. การหาปริมาณของโปรไฟล์ของวัฏจักรเซลล์ด้วย PI เปิดเผยจำนวนเซลล์ที่มีลักษณะ subdiploid (ภูมิภาค M1) ซึ่งบ่งชี้ถึงการกระจายตัวของ DNA apoptotic ในเซลล์ที่ไม่ได้รับการรักษา เศษส่วนย่อยของอะพอพโทติกมีค่าน้อยที่สุดถึง 5.94％ ของทั้งหมด 10,000 เซลล์ (รูปที่.5 A)． หลังจากได้รับ MPP＋ 48 ชั่วโมง เปอร์เซ็นต์ของการตายของเซลล์เพิ่มขึ้นเป็น 43.02;j;(รูปที่ 5 B)． เมื่อเพิ่มเข้าไปในการเพาะเลี้ยงเซลล์ ทูบูโลไซด์ บี จะยับยั้งการตายของเซลล์ที่เหนี่ยวนำโดย MPP＋ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา ที่ความเข้มข้น 10 ug·ml-1การป้องกันโดย tubuloside B ไม่มีนัยสำคัญทางสถิติ แต่ที่ 50 และ 1 00ug·ml-1 ลดลง 45％ และ 63％ ตามลำดับ พบว่าส่งผลให้เปอร์เซ็นต์ของเซลล์รอดชีวิตเพิ่มขึ้น (รูปที่ 5D, E)

สามารถตรวจพบการสะสมของ ROS ภายในเซลล์โดยใช้เซลล์ DCFH—DA．PC12 ที่บำบัดด้วย MPP＋ 200 uM เป็นเวลา 48 ชั่วโมง ซึ่งแสดงการเรืองแสงที่รุนแรงภายในเซลล์หลังจากการย้อมด้วยสีย้อม DCFH-DA (รูปที่.6)． การรักษาพร้อมกันด้วยทูบูโลไซด์บี (ที่ขนาด 10 และ 100 ไมโครกรัม·มล.) ยับยั้งการผลิต ROS ที่เหนี่ยวนำโดย MPP＋一 (เปอร์เซ็นต์ที่ลดลงคือ 24.52％และ 55.63％ ตามลำดับ)．

การอภิปราย

การเกิดโรคของ PD เกี่ยวข้องกับความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันที่รุนแรง ระดับสารต้านอนุมูลอิสระที่ลดลง และข้อบกพร่องของไมโตคอนเดรีย ทั้งหมดรู้จักกันในการทำให้เกิดการตายของเซลล์ในระบบเซลล์ต่างๆ โดยเฉพาะอย่างยิ่ง อนุมูลอิสระได้แสดงให้เห็นว่ากระตุ้นการตายของเซลล์ที่ใช้งานอยู่ในเซลล์ประสาท[14]． MPTP สร้างกลุ่มอาการคล้ายพาร์กินโซเนียนที่ไม่สามารถย้อนกลับได้และรุนแรงซึ่งเป็นสาเหตุของการเสื่อมสภาพที่เลือกของเซลล์ประสาทโดปามีน nigrostriatal ในมนุษย์ neurotoxin นี้ถูกใช้เพื่อสร้างแบบจำลองสัตว์ของ PD[15]．MPTP ถูกแปลงโดย monoamine oxidase B เป็น MPP＋ ซึ่งสะสมอยู่ในไมโตคอนเดรีย ที่ซึ่งยับยั้งคอมเพล็กซ์ไมโตคอนเดรีย 1 และวันของไมโตคอนเดรีย ฟังก์ชันทำให้เกิดการตายของเซลล์ [16] ดังนั้น MPP บวก 一 เกิดความเป็นพิษต่อระบบประสาทในเซลล์ประสาทโดปามีนจึงถูกใช้อย่างกว้างขวางในรูปแบบสาเหตุของ PD สำหรับการตรวจคัดกรองสารป้องกันระบบประสาท

ในการศึกษานี้ เราได้แสดงให้เห็นว่าการตายของเซลล์ที่เกิดจาก MPP บวกด้วยความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันในเซลล์ PC12 นั้นลดลงโดยทูบูโลไซด์ บี นอกจากนี้ เราแสดงให้เห็นว่าทูบูโลไซด์บียังได้รับการปกป้องในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยาจากขั้นบันไดดีเอ็นเอที่เหนี่ยวนำโดย MPP บวก และอะพอพโทซิสที่วัดโดยใช้ดีเอ็นเอเจลอิเล็กโตรโฟรีซิสและการวิเคราะห์โฟลว์ไซโตเมทริก นอกจากนี้ การรักษาพร้อมกันด้วยความเข้มข้นที่สูงขึ้นของทูบูโลไซด์ บี ยังยับยั้งการผลิต ROS ที่เกิดจาก MPP ดังนั้น tubuloside B ได้แสดงผลหลายหน้าที่ของ neuroprotective กลไกหลายอย่างแยกกันหรือรวมกันอาจเกี่ยวข้องกับการกระทำของ tubuloside B. ผลของสารต้านอนุมูลอิสระเป็นกลไกที่เป็นไปได้สำหรับการป้องกันระบบประสาทของ tubuloside B-mediated Xiong Q พบว่า tubuloside B แสดงฤทธิ์ในการขับอนุมูลอิสระอย่างแรงบน 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical และ xanthine]xanthine oxidase สร้าง superoxide anion radical [6]

เมื่อเร็ว ๆ นี้รายงานว่ามีสารฟีนิลทานอยด์หลายชนิดที่มีคุณสมบัติในการขับอนุมูลอิสระและป้องกันการบาดเจ็บที่เป็นพิษที่เกิดจากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน ROS ที่ผลิตโดย MPP plus เช่น ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ ซูเปอร์ออกไซด์แอนไอออน และไฮดรอกซิลเรดิคัล สามารถทำลายโมเลกุลทางชีววิทยาได้อย่างง่ายดาย ซึ่งสามารถนำไปสู่การตายของเซลล์ apoptotic หรือ necrotic ได้ในที่สุด ดังนั้น tubuloside B อาจมีผลโดยตรงต่อ ROS แม้ว่าข้อมูลของเราไม่ได้ระบุตำแหน่งที่แน่นอนที่ tubuloside B ทำหน้าที่ยับยั้งการสะสม ROS พวกเขาแนะนำว่ากลไกการป้องกันระบบประสาทเกี่ยวข้องกับการกระตุ้นเส้นทางของสารต้านอนุมูลอิสระ การศึกษาโครงสร้างโมเลกุลของทูบูโลไซด์ บี ยังระบุด้วยว่ามีคุณสมบัติที่มีศักยภาพในการกำจัดอนุมูลอิสระ (การสื่อสารส่วนบุคคล)

กลไกอื่นๆ อาจเกี่ยวข้องด้วย ตัวอย่างเช่น ทูบูโลไซด์ บี อาจมีความสามารถในการต่อต้านความเป็นพิษของ MPP＋ โดยการยับยั้งการเปิดรูพรุนการเปลี่ยนแปลงความสามารถในการซึมผ่านของไมโตคอนเดรียและความผิดปกติ นอกจากนี้ ควรพิจารณาว่า tubuloside B มีผลส่งเสริมการเจริญเติบโตโดยตรงต่อเซลล์ประสาทหรือไม่ กลไกที่แน่ชัดของการกระทำที่ป้องกันระบบประสาทของทูบูโลไซด์ บี ยังคงไม่ชัดเจน จำเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมเพื่ออธิบายภาพรวมของผลกระทบต่อระบบประสาท

สรุปได้ว่า tubuloside B จากสารสกัด Cistanche salsa มีผลในการป้องกันที่เห็นได้ชัดต่อ MPP บวกกับการตายของเซลล์และความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน ผลต่อระบบประสาทต่อความเป็นพิษของ MPP ＋ อาจมีความสำคัญและแนะนำว่าอาจมีศักยภาพในการรักษาในการป้องกันและรักษา PD

การรักษา PD: cistanche

อ้างอิง

7. Xiong Q, Tezuka Y, Kaneko 1", Li H, Tran LQ Hase K, Namba T, Kadota S. การยับยั้งไนตริกออกไซด์โดย phenylethanoids ในแมคโครฟาจที่กระตุ้น Eur J Pharmaco12000; 400:137 –44

8. กรีน แอลเอ, ทิชเลอร์ เอเอส การก่อตัวของ noradrenergic clonal line ของเซลล์ adrenal pheochromocytoma ซึ่งตอบสนองต่อปัจจัยการเจริญเติบโตของเส้นประสาท Proc Nat Acad Sci 1976; 73:2424-8

9. Yao Z, Drieu K, Szweda LI, Papadopoulos V. อนุมูลอิสระและลิพิดเปอร์ออกซิเดชันไม่ได้ไกล่เกลี่ย - อะไมลอยด์ที่ก่อให้เกิดการตายของเซลล์ประสาท ความละเอียดของสมอง 1999; 847: 203- 10

10. Yamamoto T, Yuyama K, Nakamura K, Kato T, Yamamoto H. ลักษณะทางจลนศาสตร์ของความเป็นพิษของไนตริกออกไซด์สำหรับเซลล์ PC12: ผลของเวลาครึ่งชีวิตของ NO release Eur J Pharmacol 2000; 397:25-33

11. Nicoletti l, Migliorati G, Pagliacci MC, Grignani E Riccardi C. วิธีการที่รวดเร็วและง่ายดายในการวัดการตายของเซลล์ไทโมไซต์โดยการย้อมสีโพรพิเดียมไอโอไดด์และโฟลว์ไซโตเมทรี วิธี J Immunol 1991; 139: 271-9

12. Moore KJ, Matlashewski C. การติดเชื้อภายในเซลล์โดย Leishmania do nova ยับยั้งการตายของเซลล์มาโครฟาจ เจ อิมมูนอล 1994; 152: 2930- 7

13. Mark RJ, Keller JN, Kruman I, Mattson MP. FGF พื้นฐานลดความเครียดออกซิเดชันที่เกิดจากอะไมลอยด์เปปไทด์ ความผิดปกติของไมโตคอนเดรีย และการด้อยค่าของกิจกรรม Na ＋-K ＋-ATPase ในเซลล์ประสาทฮิปโปแคมปัส การวิจัยสมอง 1997; 756: 205-14

14. Merad-Boudia M, Nicole A, Santiard-Baron D, Saille C, CeballosPicot L การด้อยค่าของไมโตคอนเดรียเป็นเหตุการณ์แรกเริ่มในกระบวนการอะพอพโทซิสที่เกิดจากการสูญเสียกลูตาไธโอนในเซลล์ประสาท: ความเกี่ยวข้องกับโรคพาร์กินสัน Biochem Pharmaco11998; 56: 645-55

15. Langston JW, Ballard P, Tetrud JW, Irwin I. โรคพาร์กินสันเรื้อรังในมนุษย์เนื่องจากการสังเคราะห์ meperidine-analog วิทยาศาสตร์ 2526; 219:979-80

16. Mizuno Y, Sone N, Suzuki K, Saitoh T. ศึกษาความเป็นพิษของ 1-me ethyl-4-phenylpyridinium ion (MPP ＋) ต่อไมโตคอนเดรียของสมองของหนู J Neurol Sci 1988; 86: 97-110