ผลของการทำให้ผิวขาวของ Ectoine ผ่านการปราบปรามของ -MSH-stimulated Melanogenesis และการกระตุ้นเส้นทางของสารต้านอนุมูลอิสระ Nrf2 ใน Keratinocytes ที่ฉายรังสี UVA

ติดต่อ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 อีเมล:audrey.hu@wecistanche.com

You-Cheng Hseu 1,2,3,4, Xuan-Zao Chen 1, Yugandhar Vudhya Gowrisankar 1, Hung-Rong Yen 3,4,5,6, Jing-Yuan Chuang 7 และ Hsin-Ling Yang 8,*

เชิงนามธรรม:รังสีอัลตราไวโอเลต A (UVA) - การผลิตออกซิเจนที่เกิดปฏิกิริยา (ROS) ที่เกิดจากการฉายรังสีมากเกินไปการสร้างเม็ดสีในเซลล์ผิวที่นำไปสู่การสร้างเม็ดสี เราแสดงให้เห็นถึงผลกระทบของการขจัดเม็ดสีและต่อต้านการสร้างเม็ดสีของ Ectoine ซึ่งเป็นออสโมไลต์ของแบคทีเรียตามธรรมชาติใน keratinocytes ที่ฉายรังสี UVA-irradiatedhuman (HaCaT) และกลไกระดับโมเลกุลที่อยู่เบื้องล่างได้รับการอธิบายอย่างชัดเจน HaCaTcells ได้รับการบำบัดล่วงหน้าด้วย Ectoine ที่มีความเข้มข้นต่ำ (0.5–1.5 µM) และทำการทดสอบสำหรับพารามิเตอร์ต่างๆ ของ depigmenting และ anti-melanogenic การบำบัดล่วงหน้านี้ปรับลดการสร้าง ROS, -การผลิตฮอร์โมนกระตุ้นเมลาโนไซต์ ( -MSH) ลงอย่างมีนัยสำคัญ และการแสดงออกของโปรโอพิโอเมลาโนคอร์ติน (POMC) ในเซลล์ HaCaT ที่ฉายรังสี UVA อีกด้วย,สารต้านอนุมูลอิสระการแสดงออกของโปรตีน heme oxygenase-1 (HO-1),NAD(P)H dehydrogenase [quinone 1] (NQO-1) และ -glutamate-cysteine ​​ligase catalytic subunit( -GCLC) ไกล่เกลี่ยผ่านการเคลื่อนย้ายนิวเคลียร์ของปัจจัยนิวเคลียร์อีรีทรอยด์2-ปัจจัยที่เกี่ยวข้อง 2 (Nrf2) ซึ่งการล้มลงอย่างแท้จริงทำให้ผลกระทบนี้บกพร่องซึ่งบ่งบอกถึงความสำคัญของวิถี Nrf2 Ectoine เป็นสื่อกลางในการกระตุ้น Nrf2 ผ่านทาง p38, โปรตีน kinase B (หรือที่เรียกว่า AKT), โปรตีน kinase C (PKC) และวิถีโปรตีน casein kinase II (CKII) สารปรับสภาพที่ได้รับจากเซลล์ HaCaT ที่ผ่านการบำบัดด้วย Ectoine และรังสี UVA ที่ฉายรังสีลดระดับการควบคุมไทโรซิเนส, โปรตีนที่เกี่ยวข้องกับไทโรซิเนส-1 และ -2 (TRP-1/-2), ไซคลิก AMP (c-AMP) โปรตีนไคเนส, โปรตีนการจับองค์ประกอบ c-AMP (CREB) ) และการแสดงออกของปัจจัยการถอดรหัสที่เกี่ยวข้องกับไมโครพทาลเมีย (MITF) ที่นำไปสู่เซลล์เมลาโนมา B16F10 ซึ่งยับยั้งการสังเคราะห์เมลานิน ที่น่าสนใจคือ ฤทธิ์ต้านการสร้างเม็ดสีในเซลล์ B16F10 ที่กระตุ้นด้วย -MSH สามารถสังเกตได้เฉพาะที่ความเข้มข้น 50–400 ไมโครเมตรของ Ectoine เท่านั้น ซึ่งแสดงถึงบทบาทสำคัญของผิวหนังเคราติโนไซต์ที่ได้รับการบำบัดด้วย Ectoine (0.5–1 µM)ไวท์เทนนิ่งผลกระทบ เราสรุปได้ว่า Ectoine สามารถใช้เป็นเครื่องสำอางธรรมชาติเฉพาะจุดที่มีประสิทธิผลด้วยประสิทธิภาพในการขจัดเม็ดสีและต่อต้านการสร้างเม็ดสี

คำสำคัญ:เอ็กตวน; keratinocytes;การสร้างเม็ดสี; ไทโรซิเนส; -MSH; Nrf2

Cistanche มีฤทธิ์ต้านออกซิเดชัน

1. บทนำ

การเปิดเผยผิวหนังของมนุษย์ต่อรังสี UVA จะกระตุ้นการสร้าง ROS และยังสร้างเซลล์ผิวที่สร้างเมลานินินมากเกินไป การผลิต ROS ที่ไม่สามารถควบคุมได้อาจนำไปสู่ภาวะเนื้องอกได้เช่นกัน สารฟอกสีผิวส่วนใหญ่กำหนดเป้าหมายและพยายามลดการสร้างเม็ดสีผ่านกระบวนการยับยั้ง -MSH และไทโรซิเนสโปรดักชั่น [1]. ครีมปรับสีผิวให้ขาวขึ้นส่วนใหญ่ประกอบด้วยไฮโดรควิโนน [2] หรือไฮโดรคอร์ติโซน [3] ซึ่งทราบกันดีว่าช่วยลดการสร้างเมลานินแต่ยังสัมพันธ์กับผลข้างเคียงที่รุนแรง ตัวอย่างเช่น สิว ผิวเป็นขุยและคัน ผิวเปลี่ยนเป็นสีน้ำเงินและดำ คล้ำเสีย แสบร้อนและแสบผิว แม้กระทั่งการอักเสบ อย่างไรก็ตาม ผิวหนังไวท์เทนนิ่งสารจากแหล่งธรรมชาติ เช่น กรด Kojic (อนุพันธ์ของเชื้อราที่ได้จากสายพันธุ์ Penicillium และ Aspergillus) มีรายงานว่าทำให้เกิด 'โรคผิวหนังอักเสบติดต่อ' บุคคลที่มีผิวบอบบาง ในบุคคลเหล่านี้ มากกว่า 1 เปอร์เซ็นต์ของกรดโคจิกอาจทำให้เกิดผลข้างเคียงที่แพ้ง่ายอย่างรุนแรง [4,5] จึงมีผิวที่ผลิตจากธรรมชาติเพียงไม่กี่ชนิดเท่านั้นไวท์เทนนิ่งผลิตภัณฑ์ (โอลีโอซิน สารสกัดจากชะเอม กรดแอสคอร์บิก โปรตีนถั่วเหลือง N-acetyl กลูโคซามีน ฯลฯ) กำลังถูกนำไปใช้ในอุตสาหกรรมเครื่องสำอาง [6] อย่างไรก็ตาม ผลิตภัณฑ์ดูแลผิวที่มุ่งเป้าไปที่คุณสมบัติการดีดผิวเป็นหลักนั้น บางครั้งล้มเหลวในการมุ่งเน้นไปที่การต่อต้านผลที่เป็นอันตรายที่เกิดจากการผลิต ROS ที่เกิดจากการฉายรังสี UVA ทำให้เกิดส่วนเกินการสร้างเม็ดสีในเซลล์ผิว

Ectoine เป็น 'extremolyte ตามธรรมชาติ' ที่ผลิตจากจุลินทรีย์หลายชนิดภายใต้สภาวะกดดัน [7,8] สารประกอบนี้ถูกแยกได้จากแบคทีเรียสายพันธุ์ Ectothiorhodospira ที่อาศัยอยู่ในทะเลทรายอียิปต์เป็นครั้งแรก น้ำตกของยีน ect operon (ectA, ectB, ectC หรือ ectD) มีส่วนเกี่ยวข้องในการผลิตสารประกอบนี้ Ectoine ถูกกำหนดทางเคมีเป็น 1,4,5,6-tetrahydro-2-methyl-4-pyrimidinecarboxylic acid [9] เป็นสารยึดเกาะความชื้น Ectoine ช่วยปรับโครงสร้างเยื่อหุ้มเซลล์ผิว [10] ป้องกันความเสียหายจากรังสียูวีและมลภาวะ [11,12] ให้ความชุ่มชื่นแก่ผิว [13] ชะลอการเกิดริ้วรอยก่อนวัยของผิว [14] เป็นต้น นอกจากนี้ สำหรับบทบาทในการปกป้องผิว Ectoine ได้แสดงให้เห็นว่ามีประโยชน์ในการรักษาโรคผิวหนังภูมิแพ้ [15], อัลไซเมอร์ [16], เช่นเดียวกับการยับยั้งการจำลองแบบของ HIV [17], วิทยุและเคมีบำบัด [18] และโรคตับแข็ง [ 19]. คาดว่า Ectoine จะแสดงคุณสมบัติในการทำให้สีผิวคล้ำและขาวขึ้นโดยไม่ก่อให้เกิดผลข้างเคียงที่ไม่พึงประสงค์ [20] ในทางตรงกันข้าม กลไกระดับโมเลกุลที่เกิดจาก Ectoine นั้นไม่เป็นที่รู้จัก ดังนั้น วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้คือเพื่ออธิบายกลไกการขจัดเม็ดสีและการต่อต้านเมลาโนเจนที่เกิดจาก Ectoine ที่เกิดขึ้นใน keratinocytes ของมนุษย์ที่ฉายรังสี UVA (HaCaT) เป็นระบบแบบจำลองเซลล์ ผลของสารคัดหลั่งที่เกิดจากสารปกป้องผิวหนังจากเซลล์ HaCaT ไปยังอาหารเลี้ยงเชื้อ (ตัวกลางที่ปรับสภาพ) ยังได้รับการทดสอบโดยใช้สายเซลล์มะเร็งผิวหนังทั่วไป (B16F10) เช่นกัน

2. วัสดุและวิธีการ

2.1. รีเอเจนต์และแอนติบอดี

ซื้อ Ectoine (หมายเลขผลิตภัณฑ์: 81619 ความบริสุทธิ์มากกว่าหรือเท่ากับ 95 เปอร์เซ็นต์) จาก Sigma-Aldrich (Taufkichen, Germany) ซื้อซีรั่มโคในทารกในครรภ์ (FBS), เพนิซิลลิน/สเตรปโตมัยซิน, Eagle'smedium ดัดแปลงของ Dulbecco และแอล-กลูตามีนจาก Invitrogen/Gibco BRL (Carlsbad, CA, USA) l-DOPA, melanin, 3-4,5-dimethyl-2-yl-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) และ -MSH จัดหาจาก Sigma Chemical Co (เซนต์หลุยส์ มิสซูรี สหรัฐอเมริกา). N-อะซีติลซิสเทอีน (NAC) และ20,70-ไดคลอโรฟลูออเรสซีน-ไดอะซิเตต (DCFH2-DA) ถูกจัดหาจากซิกมา-อัลดริช (เซนต์หลุยส์ รัฐมิสซูรี สหรัฐอเมริกา) สารยับยั้งทางเภสัชวิทยาทั้งหมดที่จำเป็นสำหรับ JNK (SP600125), ERK1/2 (PD98059), p38 (SB203580),PKC (GF109203X) และ CKII ได้รับจาก Calbiochem (La Jolla, CA, USA) PI3K/AKT inhibitor (LY294002) จาก Sigma-Aldrich (เซนต์หลุยส์ รัฐมิสซูรี สหรัฐอเมริกา) แอนติบอดีทั้งหมดสำหรับ POMC, CREB, -actin,ไทโรซิเนส, Nrf2, p-CREB, NQO-1, PKC, โปรตีนที่เกี่ยวข้องกับ ECH คล้ายเคลช์-1 (Keap-1), และTRP-1, TRP-2 ได้มาจาก Santa Cruz Biotechnology Inc. (ไฮเดลเบิร์ก ประเทศเยอรมนี) แอนติบอดีต้าน -GCLC และ HO-1 ถูกจัดหาจาก Gene Tex Inc. (ซานอันโตนิโอ, เท็กซัส, สหรัฐอเมริกา) เราได้รับแอนติบอดีต่อไคเนสโปรตีน c-AMP และ CKII จาก Abcam (เคมบริดจ์, แมสซาชูเซตส์, สหรัฐอเมริกา) Histones,MITF, p-p38, p38, p-AKT และ AKT ได้มาจาก Cell Signal Technology (Beverly, MA, USA) รีเอเจนต์การตรวจหาเคมีลูมิเนสเซนส์ที่ปรับปรุงแล้ว (ECL) ได้มาจาก Millipore, (Billerica, MA,USA) รีเอเจนต์อื่นๆ ทั้งหมด (ที่เกรด HPLC) ซื้อมาจาก Sigma-Aldrich หรือ Merck & Co.,Inc. (ดาร์มสตัดท์ ประเทศเยอรมนี).

2.2. การเพาะเลี้ยงเซลล์

เราได้รับ keratinocyte HaCaT ของผิวหนังมนุษย์ที่เป็นอมตะและเซลล์ murine melanoma B16F10 จากทั้ง Cell Line Services (CLS, Eppelheim, Germany) และ American Type Culture Collection (ATCC, VA, USA) เซลล์ถูกเพาะเลี้ยงใน DMEM ที่เสริมด้วย FBS ที่กระตุ้นด้วยความร้อน 10 เปอร์เซ็นต์, สเตรปโตมัยซิน/เพนิซิลลิน 1 เปอร์เซ็นต์ และแอล-กลูตามีน 2 มิลลิโมลาร์ในตู้อบที่มีความชื้นซึ่งเสริมด้วย CO2 ที่ 37 ◦C 5 เปอร์เซ็นต์

2.3. การรักษาเซลล์และการฉายรังสี UVA

ก่อนการฉายรังสี UVA เซลล์ถูกบำบัดล่วงหน้าด้วยเอคตวน (0.5–1.5 ไมโครโมลาร์ เป็นเวลา 24 ชั่วโมง) หรือกระสายยา(PBS) หลังการฟักไข่ เซลล์ที่ล้างด้วย PBS สัมผัสกับรังสี UVA 3 J/cm2 (เป็นเวลา 27 นาที, λmax,365 นาโนเมตร, ไม่มีการปล่อยมลพิษที่ตรวจจับได้ต่ำกว่า 320 นาโนเมตร) โดยใช้ UV CROSS-LINKER CL-508 (UVITEc,Cambridge, สหราชอาณาจักร) [21].

2.4. การทดสอบ ROS ภายในเซลล์

เซลล์ HaCaT ถูกเพาะที่ความหนาแน่น 1.5 × 105 ใน 8-หลุม Lab Teck หลุมที่มี DMEM เสริมด้วย FBS 10 เปอร์เซ็นต์ และเติบโตถึง 80 เปอร์เซ็นต์ที่บรรจบกัน ในขั้นแรก เซลล์เหล่านี้ได้รับการรักษาด้วย Ectoine 1.5 µM ตามด้วยการฉายรังสี UVA 3 J/cm2 ตามระยะเวลาที่กำหนด ล้างเซลล์ด้วย PBS และใช้วิธีการ DCFH2-DA เพื่อกำหนด ROSproduction ภายในเซลล์ โดยใช้ซอฟต์แวร์โซลูชันซอฟต์แวร์โอลิมปัสสำหรับแต่ละเงื่อนไข [21]

2.5. ปริมาณเมลานิน

ในจานหลุม6-หลุม เซลล์เมลาโนมาของหนู B16F10 ถูกเพาะที่ความหนาแน่น 2.5 × 105 เซลล์/หลุม พวกมันถูกปรับสภาพด้วย Ectoine 100, 200 และ 400 ไมโครโมลาร์เป็นเวลา 2 ชั่วโมงในกรณีที่ไม่มีหรือมี -MSH (1 ไมโครโมลาร์) โปรโตคอลที่ใช้ในการหาปริมาณเมลานินเป็นไปตามวิธีการที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [21] เราวัดปริมาณเมลานินด้วยเครื่องอ่านไมโครเพลท ELISA ที่มีความยาวคลื่นดูดกลืนแสง 470 นาโนเมตร

cistanche ยับยั้งการสร้างเม็ดสีเมลานิน

2.7. Western Blot

HaCaT (1 × 106 เซลล์/10 ซม. จาน) หรือ B16F10 (จาน 1 × 106 เซลล์/10 ซม.) ถูกบำบัดล่วงหน้าด้วยความเข้มข้นที่แตกต่างกันของ Ectoine (0.5, 1 และ 1.5 µM) หรือ -MSH (1 µM) ตามด้วยการฉายรังสีในกรณีที่ไม่มีหรือมี UVA ในระยะเวลาที่กำหนด เซลล์ที่ถูกล้างด้วย PBS ถูกเก็บเกี่ยว ปริมาณโปรตีน (นิวเคลียร์และไซโตซอล) ถูกแยกออกหลังการบำบัด จากนั้นจึงนำเซลล์ไปใช้วิธี Western blot ที่ใช้ก่อนหน้านี้ในการกำหนดการแสดงออกของโปรตีนนิวเคลียร์และไซโตซอลชนิดต่างๆ [21]

2.8. การสกัด RNA และ RT-PCR

เซลล์ HaCaT ที่บำบัดด้วยเอคทอนล่วงหน้า (1.5 ไมโครโมลาร์, 24 ชั่วโมง) ถูกนำไปยังรีเอเจนต์ TRIzol (Invitrogen,Carlsbad) เพื่อแยก RNA ทั้งหมดออกจากเซลล์เหล่านี้ RNA ทั้งหมด 1 ไมโครกรัมและรีเอเจนต์ที่จัดหาโดย SuperScript-III One-Step RT-PCR platinum Taq kit (Invitrogen, Carlsbad) ถูกใช้ในการทดลอง PCR ด้วยเครื่องมือ Bio-Rad iCycler PCR (Bio-Rad, Hercules, CA, สหรัฐอเมริกา) ไพรเมอร์ไปข้างหน้าและย้อนกลับสำหรับ Nrf2 ที่ใช้คือ: F: 50-AAACCAGTGGATCTGCCAAC-30,R-50-GCAATGAAGACTGGGCTCTC-30 ไพรเมอร์ไปข้างหน้าและย้อนกลับสำหรับ GAPDH ที่ใช้คือ:F: 50-GCATCCTGGGCTACACTGA-30, R: 50-CCACCACCCTGTTGCTGTA-30 ในตอนท้ายของการทดลอง วิเคราะห์ผลิตภัณฑ์ PCR โดยใช้เจลอะกาโรส 1 เปอร์เซ็นต์ จากนั้นจึงมองเห็นภาพด้วยการย้อมสีเอทิเดียมโบรไมด์ ในการควบคุมภายใน เราใช้ GAPDH [22]

2.9. การทดสอบอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์

เซลล์ HaCaT ได้รับการเพาะเลี้ยงที่ความหนาแน่น 1 × 104 เซลล์/หลุมในการเสริม DMEM ด้วย FBS 10 เปอร์เซ็นต์ในห้องแล็บ Tek 8-หลุม (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) เราปรับสภาพเซลล์ด้วย Ectoine 1.5 µM ตามเวลาที่ระบุตามด้วยการฉายรังสีในกรณีที่ไม่มีหรือมี UVA เซลล์ได้รับการทดสอบอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์ ซึ่งใช้วิธีการที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [21]

2.10. การวิเคราะห์ทางสถิติ

เราใช้ค่าเฉลี่ย ± ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (ค่าเฉลี่ย ± SD) สำหรับผลลัพธ์ทั้งหมดที่ใช้ในการศึกษานี้ ข้อมูลทั้งหมดได้รับการวิเคราะห์ด้วยการวิเคราะห์ความแปรปรวน (ANOVA) ตามด้วยการทดสอบของ Dunnett สำหรับการเปรียบเทียบแบบคู่และนำเสนอเป็นค่าเฉลี่ย± SD ของสาม หรือการทดลองที่เป็นอิสระมากขึ้น กำหนดนัยสำคัญทางสถิติที่ * p < 0.05;="" **="" p="">< 0.01;="" ***="" p="">< 0.001="" เมื่อเปรียบเทียบกับเซลล์ควบคุมที่ไม่ได้รับการรักษา="" และ="" #="" p="">< 0.05;="" ##="" พี="">< 0.01;="" ###="" p="">< 0.001="" เมื่อเปรียบเทียบกับเซลล์="" hacat="" ที่สัมผัส="" uva="" หรือเซลล์="" b16f10="" ที่บำบัดด้วย="">

3. ผลลัพธ์

3.1. Ectoine Inhibited UVA-Induced ROS Generation ในเซลล์ HaCaT

ขั้นแรก เราทดสอบผลของความเป็นพิษต่อเซลล์ของ Ectoine (รูปที่ 1A) ในเซลล์ HaCaT ที่ฉายรังสี UVA ข้อมูล MTT ของเราระบุว่าเมื่อเปรียบเทียบกับเซลล์ควบคุมที่ไม่ได้รับการรักษา Ectoine pre-treated (0.5–1.5 µM) และเซลล์ HaCaT ที่สัมผัสรังสี UVA 3 J/cm2 ไม่สามารถแสดงการลดลงอย่างมีนัยสำคัญในความสามารถในการมีชีวิตของเซลล์ (รูปที่ 1B) นอกจากนี้ การปรับสภาพเอคตวนทำให้การตายของเซลล์ที่เหนี่ยวนำโดย UVA (3 J/cm2) อ่อนลงในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา (รูปที่ 1B) นอกเหนือจากข้อมูลการเรืองแสงของเรา ซึ่งระบุว่าเมื่อเทียบกับเซลล์ควบคุม การฉายรังสี UVA 3 J/cm2 และการบำบัดด้วย Ectoine เพียงอย่างเดียว (1.5 µM) เพิ่มระดับ ROS ที่มีการควบคุมอย่างมีนัยสำคัญโดย 5- และ 2-เท่า ตามลำดับ อย่างไรก็ตาม ในกรณีของ Ectoinepretreatment ROS มีการปรับลดระดับ ROS อย่างมีนัยสำคัญ และเราสามารถอนุมานได้ว่า Ectoine มีสารต้านอนุมูลอิสระมีผลต่อการฉายรังสี UVA นอกจากนี้ยังก่อให้เกิดระดับพื้นฐานของ ROS ในเซลล์ HaCaT (รูปที่ 1C, D)

3.2. Ectoine ระงับการแสดงออกของ POMC และ -MSH ในเซลล์ HaCaT ที่ฉายรังสี UVA

keratinocytes ที่สัมผัสรังสี UVA ถูกกระตุ้นสำหรับ POMC ที่เป็นสื่อกลาง ROS-p53 และฮอร์โมนเปปไทด์ขนาดเล็ก -MSH ที่ได้มาจาก POMC [23] ดังนั้นเราจึงกำหนดรูปแบบการแสดงออกของการเปลี่ยนแปลงของ -MSH, POMC และโปรตีนที่เกี่ยวข้องอื่นๆ ในเซลล์ HaCaT ที่บำบัดด้วย Ectoine ก่อนแล้วจึงสัมผัสกับรังสี UVA (3 J/cm2) ข้อมูล Western blot ระบุว่าการควบคุมการแสดงออกของ -MSH และ POMC ที่เหนี่ยวนำโดย UVA ถูกปรับลดลงโดยการปรับสภาพของ Ectoine; ในขณะที่การรักษาด้วย Ectoinetreatment ที่ไม่มีการฉายรังสี UVA ได้ยับยั้งการแสดงออกของ -MSH และ POMC ของเซลล์ HaCaT ที่ไม่ผ่านการฉายรังสีอย่างสมบูรณ์ (รูปที่ 2A) ต่อมา เราได้ทดสอบผลของ 'สารปรับสภาพ-ปานกลาง' (จานขนาด 10 มล./100 มม.) ที่ได้รับจากเซลล์ HaCaT ที่ผ่านการบำบัดด้วย Ectoine และรังสี UVA บนการสร้างเม็ดสีของเซลล์เมลาโนมา B16F10 รูปที่ 2B แสดงตัวกลางที่ปรับสภาพนี้ลดระดับลงไทโรซิเนส, TRP-1, TRP-2, ระดับโปรตีน c-AMP, p-CREB, CREB และ MITF ในเซลล์ B16F10

3.3. การแสดงออกของเมลานินและไทโรซิเนสที่ปรับลดระดับเอคโทอีนในเซลล์ B16F10 ที่กระตุ้น -MSH

ครั้งแรกที่เซลล์มะเร็งผิวหนัง B16F10 อยู่ภายใต้ความเข้มข้นของ Ectoine ที่สูงขึ้น และผลของความเป็นพิษต่อเซลล์ถูกกำหนดโดยใช้การทดสอบ MTT รูปที่ 3A แสดงว่า Ectoine ไม่มีผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญต่อความมีชีวิตของเซลล์ B16F10 ที่ความเข้มข้นที่สูงขึ้น (100–400 μM เป็นเวลา 72 ชั่วโมง) อย่างไรก็ตาม ความอยู่รอดของเซลล์ไม่ได้รับผลกระทบที่ 24 และ 48 ชั่วโมงของการรักษาด้วย Ectoine (ไม่แสดงข้อมูล) ดังนั้น ความเข้มข้นเหล่านี้จึงถูกใช้เพื่อกำหนดผลของ Ectoine ต่อ -MSH-stimulatedการสร้างเม็ดสีในเซลล์ B16F10 ข้อมูลการหาปริมาณเมลานินแสดงให้เห็นว่า เมื่อเทียบกับเซลล์ควบคุม การรักษาด้วย -MSH (1 ไมโครโมลาร์) เพียงอย่างเดียวทำให้ระดับเมลานินเพิ่มขึ้นมากกว่าร้อยละ 25 อย่างมีนัยสำคัญ อย่างไรก็ตาม เมื่อเทียบกับการรักษาด้วย -MSH เพียงอย่างเดียว เซลล์ที่สัมผัสกับความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้นของ Ectoine (100–400 μM ที่ 72 ชั่วโมง) ขึ้นอยู่กับขนาดยาและปรับลดเปอร์เซ็นต์ของปริมาณเมลานินอย่างมีนัยสำคัญด้วยการปรับลดสูงสุดเพียง 85 เปอร์เซ็นต์ (หรือ −15 เปอร์เซ็นต์จากที่ไม่ได้รับการรักษา กลุ่มควบคุม) ถูกสังเกตพบที่ 400 ไมโครโมลาร์ของการปรับสภาพเอคตวน (รูปที่ 3B) นอกจากนี้ ข้อมูล Western blot ของเรายังแสดงให้เห็นว่า -MSH ถูกกระตุ้นไทโรซิเนสการแสดงออก (24 ชั่วโมง) และ p-CREB (2 ชั่วโมง) ถูกปรับลดอย่างมีนัยสำคัญด้วยความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้นของการปรับสภาพเอคตวนในเซลล์มะเร็งผิวหนังเหล่านี้ (รูปที่ 3C)

3.4. เอคโทอีนเพิ่มการควบคุมการแสดงออกของโปรตีน HO-1, NQO-1 และ -GCLC ในเซลล์ HaCaT

เพื่อกำหนดหาผลของเวลาต่อการเคลื่อนย้ายนิวเคลียร์ที่เป็นสื่อกลางของ Ectoine ของ Nrf2 และการแสดงออกที่ปลายน้ำที่ตามมาของโปรตีน HO-1, NQO-1 และ -GCLC เซลล์ HaCaT ถูกเปิดเผยต่อ Ectoine 1.5 µM และโปรตีนในเซลล์ถูกเก็บเกี่ยว 0.5, 1, 2, 4, 8 หรือ 12 ชั่วโมงหลังการรักษาด้วย Ectoinetreatment ข้อมูล Western blot ระบุว่ายกเว้นโปรตีน -GCLC, 1.5 µM Ectoine ทำให้เกิดการแสดงออกสูงสุดของโปรตีน HO-1, Nrf2 และ NQO-1 ที่จุดเวลา 4 ชั่วโมง -GCLC ถูกแสดงที่จุดเวลา 8 ชั่วโมง (รูปที่ 5A) ข้อมูลที่ได้จากเส้นเวลานำเราไปสู่การทดสอบผลของความเข้มข้นของ Ectoine ต่อการแสดงออกของสารต้านอนุมูลอิสระโปรตีนที่จุดเวลา 4 ชั่วโมง รูปที่ 5B แสดงว่าโปรตีนสารต้านอนุมูลอิสระทั้งสามตัวแสดงการแสดงออกสูงสุดที่ 1.5 ไมโครโมลาร์ของความเข้มข้นของ Ectoine ต่อมา ผลของการเตรียม Ectoine ก่อนการบำบัดถูกทดสอบบนการแสดงออกของอัตราส่วน Nrf2 และ Keap-1 ในเซลล์ HaCaT ที่ฉายรังสี UVA การวิเคราะห์ข้อมูลแบบตะวันตกระบุว่าการบำบัดล่วงหน้าด้วย Ectoine 1.5 µM แสดงอัตราส่วนของ Nrf2/Keap-1 ที่เพิ่มขึ้นในเซลล์ HaCaT ที่ฉายรังสี UVA (รูปที่ 5C) นอกจากนี้เรายังเห็นข้อมูลที่สอดคล้องกับการแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของ NQO โปรตีน -1, H2O-1 และ -GCLC ในเซลล์ HaCaT ที่บำบัดล่วงหน้าด้วยอีคโทอีนที่ถูกฉายรังสีด้วย 3 J/cm2 UVA (รูปที่ 5D) ข้อมูลนี้อนุมานได้ว่าการเตรียม Ectoine ล่วงหน้ามีบทบาทในการป้องกันในเซลล์ HaCaT ที่ฉายรังสี UVA

3.5. เส้นทางการส่งสัญญาณที่หลากหลายเกี่ยวข้องกับการกระตุ้น Nrf2 ในเซลล์ HaCaT ที่บำบัดด้วย Ectoine

เรากำหนดเส้นทางการส่งสัญญาณที่เกี่ยวข้องกับการเคลื่อนย้ายนิวเคลียร์ที่อาศัย Ectoine ของ Nrf2 เซลล์ HaCaT ได้รับการบำบัดล่วงหน้าด้วยตัวยับยั้งทางเภสัชวิทยาของวิถีการส่งสัญญาณ PI3K/AKT, ERK, p38, JNK, PKC, ROS และ CKII ตามด้วย Ectoine 1.5 ไมโครโมลาร์ ข้อมูล Western blot ของนิวเคลียร์ Nrf2 แสดงให้เห็นว่า p38 MAPK, PI3K/AKT, PKC และ CKII pathways เกี่ยวข้องกับกลไกนี้ (รูปที่ 6A) จากข้อมูลที่ได้รับ เรายังได้กำหนดผลของการเตรียม Ectoine ล่วงหน้าต่อบทบาทของวิถีเหล่านี้ในการแสดงออกของโปรตีนต้านอนุมูลอิสระ รูปที่ 6B แสดงให้เห็นว่าการยับยั้งทางเภสัชวิทยาของวิถีทาง MAPK, p38, PI3K/AKT, CKII และ PKC ที่ควบคุมการแสดงออกของ NQO-1, HO-1 และ -GCLCสารต้านอนุมูลอิสระโปรตีนในเซลล์ HaCaT ยิ่งไปกว่านั้น เวลาที่ใช้สำหรับฟอสโฟรีเลชั่นของ AKT, p38 และการแสดงออกของ PKC และ CKII ในขณะที่สัมผัสกับ Ectoine บ่งชี้ว่า ยกเว้น p-AKT ฟอสโฟรีเลชั่นของ p38 และการแสดงออกของ PKC และ CKII เกิดขึ้นในภายหลัง จุดเวลาเท่านั้น (หลังจาก 30 นาที) (รูปที่ 6C) ในกรณีของ AKT สังเกตฟอสโฟรีเลชันจากจุดเวลา 15 นาทีที่ถึงจุดสูงสุดที่ 30 นาที (รูปที่ 6C) ในกรณีของ AKT พบฟอสโฟรีเลชันจากจุดเวลา 15 นาทีที่ถึงจุดสูงสุดที่ 30 นาที (รูปที่ 6C) ผลสะสมเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าเส้นทางส่งสัญญาณ p38, AKT, PKC และ CKII กระตุ้นสารต้านอนุมูลอิสระ Ectoine เป็นสื่อกลางในการเคลื่อนย้ายนิวเคลียร์ของ Nrf2 นำไปสู่การแสดงออกของโปรตีนต้านอนุมูลอิสระ

3.6. Ectoine Mediated Anti-Melanogenic Effect ถูกระงับเนื่องจากการล้มลงของ Nrf2

บทบาทของ Nrf2 ในการต่อต้าน Ectoine-mediatedการสร้างเม็ดสีถูกกำหนดโดยการปิดเสียง Nrf2 ในเซลล์ HaCaT ข้อมูลจาก Western blot ระบุว่าเซลล์ที่ล้มลง Nrf2 ที่สัมผัสกับ 1.5 μM Ectoine แสดงการแสดงออกขั้นต่ำของ NQO-1, HO-1 และ -GCLCสารต้านอนุมูลอิสระโปรตีน (รูปที่ 7A) ต่อมา เราได้ทดสอบผลของการทำให้ล้มลง Nrf2 ต่อการแสดงออกของระดับ -MSH ในเซลล์ HaCaT ที่ฉายรังสี UVA (3 J/cm2) ผล Western blot ระบุว่าเพื่อควบคุมเซลล์ที่ทรานส์เฟก siRNA การฉายรังสี UVA มีความสำคัญในการควบคุมการแสดงออกของระดับ -MSH ในเซลล์ที่ไม่ถูกเปิดเผยต่อ Ectoine (รูปที่ 7B) อย่างไรก็ตาม 1.5 μM Ectoine ได้ระงับผลกระทบนี้ สำหรับอีกกรณีหนึ่ง เซลล์ที่ทรานส์เฟกด้วย siNrf2 แสดงการแสดงออกของระดับ -MSH ที่ลดลงทั้งในเซลล์ที่ไม่บำบัดและที่บำบัด (รูปที่ 7B) เช่นเดียวกับข้อมูล -MSH ข้อมูลการเรืองแสงของเรายังระบุด้วยว่าการฉายรังสี UVA ควบคุมการผลิต ROS อย่างมีนัยสำคัญในเซลล์ siRNA ควบคุมที่ไม่ผ่านการบำบัดของ Ectoine (รูปที่ 7C, D) อย่างไรก็ตาม ผลกระทบนี้ถูกระงับอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเซลล์สัมผัสกับ Ectoine 1.5 µM ในทางกลับกัน เซลล์ HaCaT ที่ทรานส์เฟก Nrf2 และเซลล์ HaCaT ที่ฉายรังสี UVA แสดงระดับ ROS ที่เพิ่มขึ้นประมาณ 8- เท่าเมื่อเทียบกับเซลล์ที่ทรานส์เฟกด้วย Nrf2 ที่ไม่ถูกฉายรังสีด้วย UVA แต่สัมผัสกับการบำบัดด้วย Ectoine (รูปที่ 7C, D) ข้อมูลทั้งหมดนี้บ่งชี้ถึงบทบาทการป้องกันของ Ectoine ที่เป็นสื่อกลางของ Nrf2 ในการลดการผลิตเมลานินในเซลล์ HaCaT ที่ฉายรังสี UVA สารต้านอนุมูลอิสระ 2020, 9, x สำหรับการทบทวนโดย PEER 11 จาก 15 ที่ฉายรังสี UVA แต่สัมผัสกับการรักษาด้วย Ectoine (รูปที่ 7C, D) . ข้อมูลทั้งหมดนี้แสดงถึงบทบาทในการป้องกันของ Ectoine ที่เป็นสื่อกลางของ Nrf2 ในการลดการผลิตเมลานินในเซลล์ HaCaT ที่ฉายรังสี UVA

ประโยชน์ cistanche: ผิวขาวกระจ่างใส

4. การอภิปราย

ผิวต่างๆ-ไวท์เทนนิ่งมีการใช้ตัวแทนในอุตสาหกรรมเครื่องสำอาง สารเหล่านี้จำนวนมากมาจากแหล่งกำเนิดทางเคมีและกำลังทุกข์ทรมานจากข้อจำกัดในการก่อให้เกิดผลข้างเคียงต่างๆ รวมทั้งมะเร็ง [24–26] ดังนั้นการระบุสารฟอกสีผิวที่ปลอดภัยและเป็นธรรมชาติจึงแสดงถึงความต้องการในชั่วโมงนั้นๆ เป็นที่ทราบกันดีว่า Ectoine (รูปที่ 1A) ถูกใช้เป็นสารออกฤทธิ์ในครีมทาหน้าและเครื่องสำอางอื่นๆ ซึ่งทำหน้าที่เป็นสารให้ความชุ่มชื้นแก่ผิวและยังถือว่าเป็นการชะลอการเกิดริ้วรอยก่อนวัยของผิวอีกด้วย [27] สารฟอกสีผิวที่เป็นที่รู้จักเกือบทั้งหมดมุ่งเป้าไปที่การปรับลดไทโรซิเนสกิจกรรมของเอนไซม์ในเซลล์ที่ฉายรังสี UV ที่ลดการสร้างเม็ดสีในเซลล์ผิว Yao et al. แสดงให้เห็นไวท์เทนนิ่งคุณสมบัติของ Ectoine ที่สังเคราะห์ทางชีวภาพและแนะนำว่าเป็นสารฟอกสีฟันแบบ aputative ในการศึกษาของพวกเขา พวกเขาทดสอบความเข้มข้นสูง (500 µM) ของ Ectoine สำหรับผลการฟอกสีฟันในเซลล์มะเร็งผิวหนังของหนูเมาส์ (B16F0) และมะเร็งผิวหนังของมนุษย์ (A2058) และได้ข้อสรุปว่า Ectoine มีความปลอดภัยและ สารที่มีศักยภาพสำหรับการใช้เครื่องสำอางและทางคลินิก [20]. อย่างไรก็ตาม ในการศึกษานี้ เราได้ทดสอบเพิ่มเติมถึงผลดีของความเข้มข้นต่ำของ Ectoine (0.5–1.5 µM) ต่อเซลล์ HaCaT ที่ฉายรังสี UVA และกลไกระดับโมเลกุลที่อยู่เบื้องล่างถูกถอดรหัส ในการศึกษาของเรา พบว่า Ectoine ผ่านวิถี Nrf2/ARE ไม่เพียงแต่กระตุ้นการแสดงออกของการแสดงออกของยีนสารต้านอนุมูลอิสระ แต่ยังปรับลดระดับ -MSH ในเซลล์ HaCaT ที่ฉายรังสี UVA ผ่านการปราบปรามของ POMC การลดลงของระดับ -MSH มีความสัมพันธ์กับการปรับลดการทำงานของเอนไซม์ไทโรซิเนสทำให้การผลิตเมลานินลดลง จากความรู้ของเรา นี่เป็นรายงานแรกที่แสดงหลักฐานโดยกลไกที่เกิดจาก Ectoine ในเซลล์ UVA-irradiatedHaCaT การศึกษานี้อธิบายกลไกระดับโมเลกุลที่แสดงโดย Ectoine ในเซลล์ HaCaT เป็นระบบแบบจำลองเซลล์

ขั้นแรก เรากำหนดความเข้มข้นย่อยของ Ectoine ที่อันตรายถึงชีวิตรวมถึงผลกระทบของรังสี UVA ต่อความมีชีวิตของเซลล์ HaCaT ข้อมูล MTT ของเราระบุว่า Ectoine ที่มีความเข้มข้นต่ำ (0.5–1.5 µM) ไม่มีผลอย่างมีนัยสำคัญต่อความอยู่รอดของเซลล์ HaCaT (รูปที่ 1B) การบำบัดล่วงหน้าด้วย Ectoine เพิ่มความอยู่รอดของเซลล์ HaCaT ที่ฉายรังสี UVA 3 J/cm2 (รูปที่ 1B) จากการสังเกตเหล่านี้ เรายังคงทำการทดลองต่อไปโดยใช้ 1.5 µM ของการเตรียม Ectoine และการฉายรังสี UVA ที่ปริมาณ 3 J/cm2

การผลิต ROS ที่เกิดจากรังสี UVA ใน keratinocytes ของผิวหนังเป็นความจริงที่รู้จักกันดี [28] ดังนั้นเราจึงทดสอบผลที่เป็นประโยชน์ใดๆ จากการเตรียม Ectoine ล่วงหน้าในการผลิต ROS ที่เกิดจากรังสี UVA ในเซลล์ HaCaT ข้อมูลความเข้มของการเรืองแสง DCF ของเราบ่งชี้ว่าการบำบัดล่วงหน้าด้วย Ectoine 1.5 µM ปรับลดปริมาณรังสี UVA ที่เหนี่ยวนำให้เกิด ROS อย่างมีนัยสำคัญ นอกจากนี้ยังสามารถสังเกตได้ว่า 1.5 ไมโครโมลาร์ของ Ectoine อาจทำให้ระดับพื้นฐานเพิ่มขึ้นในระดับ theROS ในเซลล์ HaCaT ที่แสดงว่ามีนัยสำคัญทางสถิติ (รูปที่ 1D, E)

รุสโซ และคณะ รายงานว่า POMC ถูกหลั่งโดย keratinocytes ผิวหนังชั้นนอกของมนุษย์และ melanocytes และได้กระตุ้นการสร้างเม็ดสี[29]. เมื่อคำนึงถึงสิ่งนี้ เราก็ได้ทดสอบผลของการฉายรังสี UVA และการเตรียม Ectoine ล่วงหน้าต่อโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับการสร้างเม็ดสีในเซลล์ HaCaT ข้อมูล Western blot ของเราบ่งชี้ถึงการปรับลดการแสดงออกของโปรตีน -MSH และ POMC ที่ขึ้นกับขนาดยาในเซลล์ HaCaT ที่ฉายรังสี UVA เกิดจากการปรับสภาพด้วย Ectoine ในทางกลับกัน การบำบัดล่วงหน้าด้วย Ectoine มีผลต่อรูปแบบการแสดงออกของการสร้างเม็ดสี- โปรตีนที่เกี่ยวข้อง โดยเฉพาะอย่างยิ่ง โปรตีนที่ทดสอบเกือบทั้งหมด (ไทโรซิเนส, TRP-1, TRP-2, c-AMP โปรตีนไคเนส, CREB และ MITF) แสดงการแสดงออกที่ลดลงด้วยความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้นของการบำบัดด้วย Ectoinepre ในเซลล์ HaCaT ที่ฉายรังสี UVA (รูปที่ 2A, B) ข้อมูลนี้แสดงถึงข้อเท็จจริงที่ว่า Ectoine มีคุณสมบัติต่อต้านการสร้างเม็ดสีในเซลล์ HaCaT ที่ฉายรังสี UVA

ประสิทธิภาพในการต่อต้านเมลาโนเจนของ Ectoine ได้รับการทดสอบเพิ่มเติมในเซลล์ B16F10 ซึ่งเป็นกลุ่มเซลล์มะเร็งผิวหนังที่รู้จักกันดีในการสร้างเม็ดสีการศึกษา [30]. การสังเกตที่น่าสังเกตอย่างหนึ่งในการศึกษาของเราคือ ตรงกันข้ามกับเซลล์ HaCaT ความเข้มข้นสูงของ Ectoine (100–400 µM) เป็นสิ่งจำเป็นในการยับยั้งการสังเคราะห์เมลานินในเซลล์ B16F10 ที่กระตุ้นด้วย -MSH (รูปที่ 3B) Western blotdata ของเราระบุว่า Ectoine ลดระดับการแสดงออกของไทโรซิเนสและ p-CREBproteins ในเซลล์ B16F10 ที่กระตุ้นด้วย -MSH ซึ่งนำไปสู่ผลดังกล่าว (รูปที่ 3C) ดังนั้นเราจึงทดสอบด้วยว่า Ectoine ที่มีความเข้มข้นสูงเหล่านี้อาจส่งผลต่อความมีชีวิตของเซลล์ B16F10 หรือไม่ MTTresults ของเราระบุว่า Ectoine ที่มีความเข้มข้นสูง (100–400 µM) ไม่มีผลต่อความมีชีวิตของเซลล์ B16F10 (รูปที่ 3A) ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า keratinocytes มีบทบาทสำคัญใน Ectoine-mediatedanti-การสร้างเม็ดสีและผลกระทบจากการทำให้คล้ำ

บทบาทของปัจจัยการถอดรหัส Nrf2 ในการเผาผลาญของเซลล์ผิวหนังได้รับการบันทึกไว้เป็นอย่างดี [31] ดังนั้นเราจึงทำการทดสอบกลไกที่เล่นโดยวิถี Nrf2/Keap-1 ใน Ectoine mediated effectsin keratinocytes รูปที่ 4A แสดงให้เห็นว่าอัตราส่วน Nrf2/Keap-1 ขึ้นอยู่กับขนาดยา Ectoine ที่เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญโดยมีผลสูงสุดถูกสังเกตพบที่ความเข้มข้น 1.5 ไมโครโมลาร์ของ Ectoine นอกจากนี้ยังพบว่า Ectoine 1.5 µM สนับสนุนการย้ายนิวเคลียสของโปรตีน Nrf2 ที่มีการแสดงออกสูงสุดของ Nrf2 จากเศษโปรตีนนิวเคลียร์ที่สังเกตได้ ณ เวลา 2 ชั่วโมง (รูปที่ 4B) ข้อมูลที่ได้จากการย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์ของเซลล์ HaCaT ก็สนับสนุนผลกระทบนี้เช่นกัน (รูปที่ 4D)

ในเซลล์ melanocytes และ keratinocytes ของมนุษย์ Marrot et al. และคนอื่น ๆ ได้อธิบายความสำคัญของเส้นทางการป้องกัน Nrf2 ในการตอบสนองต่อความเครียดจากแสงออกซิเดชัน [32] เราก็ได้ศึกษาผลของการแสดงออกของโปรตีนสารต้านอนุมูลอิสระ Ectoinemediated ในเซลล์ HaCaT ด้วย ข้อมูลเส้นโค้งเวลาของเราบ่งชี้ว่าการแสดงออกของ Ectoinemediated ของโปรตีนต่อต้านอนุมูลอิสระทั้งสาม (HO-1, NQO-1, -GCLC) และ Nrf2 ถูกแสดงในลักษณะไบฟาซิกด้วยเวลาที่เพิ่มขึ้น ({{ 8}}.5–12 ชั่วโมง) โดยมีผลที่สังเกตได้ถูกบันทึกไว้ที่จุดเวลา 4 ชั่วโมง (รูปที่ 5A) จากนี้ กราฟความเข้มข้นที่ใช้วัดผลกระทบของความเข้มข้นของ Ectoine ต่อสารต้านอนุมูลอิสระการแสดงออกของโปรตีนยังถูกกำหนดหาที่จุดเวลา 4 ชั่วโมงอีกด้วย รูปที่ 5B แสดงให้เห็นว่าเมื่อเปรียบเทียบกับเซลล์ที่ไม่ถูกบำบัด การบำบัดด้วยเอคทอนมีการแสดงออกที่เพิ่มขึ้นโดยขึ้นกับขนาดยาของโปรตีน HO-1, NQO-1, -GCLC นอกจากนี้เรายังวัดว่าความเข้มข้นของ Ectoine แสดงผลการป้องกันในเซลล์ HaCaT ที่ได้รับรังสี UVA อย่างไร ข้อมูล Western blot แสดงให้เห็นว่า Ectoine เพิ่มการแสดงออกของโปรตีนต่อต้านอนุมูลอิสระโดยขึ้นกับขนาดยาด้วยการควบคุมที่เพิ่มขึ้นอย่างมากในอัตราส่วน Nrf2/Keap-1 เช่นกัน (รูปที่ 5C, D) ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า Ectoinepretreatment (1.5 µM, 4 ชม.) มีผลที่อาจกระตุ้นการแสดงออกของโปรตีนสารต้านอนุมูลอิสระใน HaCaTcells ที่สามารถต่อต้านผลที่เป็นอันตรายที่เกิดจากการสัมผัส UVA

สารต้านอนุมูลอิสระ cistanche

5. สรุปผลการวิจัย

จากข้อมูลข้างต้น เราสรุปได้ว่าความเข้มข้นต่ำของ Ectoine (0.5–1.5 µM) สามารถควบคุมการผลิต -MSH และเมลานินผ่านการยับยั้ง POMC และไทโรซิเนสpathwayin UVA ฉายรังสีเซลล์ HaCaT ซึ่งบ่งชี้ว่าต่อต้านการสร้างเม็ดสีประสิทธิภาพ นอกจากนี้ Ectoine ยังมีส่วนร่วมในการปราบปรามการผลิต ROS ภายในเซลล์ในเซลล์ HaCaT ซึ่งแตกต่างจากเซลล์ HaCaT ความเข้มข้นสูงของ Ectoine (50–400 µM) สามารถแสดงผลที่คล้ายกันใน B16F10 melanomacells ซึ่งแสดงถึงความจริงที่ว่า keratinocytes สามารถมีบทบาทสำคัญใน Ectoine mediatedanti-การสร้างเม็ดสีและผิว-ไวท์เทนนิ่งผลกระทบต่อเซลล์ผิว สิ่งสำคัญที่สุดคือ Ectoine ไกล่เกลี่ยผลกระทบจากการกระตุ้นเส้นทาง Nrf2 ซึ่งกระตุ้นการแสดงออกของสารต้านอนุมูลอิสระโปรตีน HO-1, NQO-1 และ -GCLC AKT แสดงให้เห็นว่าเป็นเส้นทางส่งสัญญาณแรกที่เริ่มต้นการเปิดใช้งาน Nrf2 ตามด้วยเส้นทางอื่น (p38, PKC และ CKII) สุดท้าย การปิดเสียงของ Nrf2 ได้ให้หลักฐานโดยตรงว่า Nrf2 มีบทบาทสำคัญในการควบคุม ROS ภายในเซลล์เช่นเดียวกับการผลิต -MSH เราสรุปได้ว่ากลไกการฟอกสีฟันหลักของ Ectoine ควรให้เหตุผลโดยการยับยั้งเส้นทาง ROS-p53/POMC- -MSH ในเซลล์ HaCaT ที่ฉายรังสี UVA ดังนั้น Ectoine หรืออนุพันธ์ของ Ectoine อาจเป็นสารออกฤทธิ์ในสารให้ความชุ่มชื้นและโลชั่น ที่ใช้เป็นผิวที่มีศักยภาพและเป็นธรรมชาติไวท์เทนนิ่งตัวแทนในอุตสาหกรรมเครื่องสำอาง

สารต้านอนุมูลอิสระ cistanche อาหารเสริม