สารสกัดจากไข่มุกที่ละลายน้ำได้ช่วยให้ผิวกระจ่างใสขึ้นด้วยการทำให้ Endothelin ต่อต้าน

ติดต่อ:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

จิงหวัง MD1|Zhixiong Chen MSc2|เหยาเจียลู่ BSc2|Lihua Zhang BSc3|เจียหวน โม BSc2|Fumin Cao BSc2|Min Xie BSc3|Xinzhong Shen BSc3|Anquan Yang BSc3

เชิงนามธรรม

พื้นหลัง:อุบัติการณ์ของความผิดปกติของเม็ดสีผิวได้เพิ่มขึ้นทั่วโลก สิ่งนี้เรียกร้องให้มีผลิตภัณฑ์ลดน้ำหนักและกำจัดกระเพื่อผิวที่ปลอดภัยและมีประสิทธิภาพมากขึ้น ในการศึกษานี้เราตั้งสมมติฐานว่าสารสกัดจากไข่มุกที่ละลายน้ำได้(SPE) อาจมีสารต้านเอ็นโดเทลินที่มีผิวดีไวท์เทนนิ่งผลกระทบ

วัตถุประสงค์: (ก) เพื่อกำหนดผลกระทบและกลไกของสเปบน ET-1-เซลล์เมลาโนมา B16 ที่บำบัดรักษา (b) เพื่อสำรวจผลกระทบที่เป็นพิษต่อเซลล์ของ SPE ต่อเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16

วิธีการ:ทำการทดสอบ CCK-8 เพื่อพิจารณาว่า SPE และ ET-1 ส่งผลต่ออัตราการงอกของเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 อย่างไร การทดสอบการสลายของ NaOH ได้ดำเนินการเพื่อหาปริมาณเนื้อหาของเมลานินในขณะที่กิจกรรมของไทโรซิเนสถูกกำหนดโดยการออกซิเดชันของ DOPA ทดสอบ. ระดับการแสดงออกของ mRNA และโปรตีนของ TYR และ TRP-1 ถูกกำหนดหาโดยการสอบวิเคราะห์ qRT-PCR และการทดสอบ Western blot ตามลำดับ

ผลลัพธ์:เราพบว่าสเปที่ความเข้มข้น 0.1 และ 1 ไมโครกรัม/มิลลิลิตรไม่มีผลต่อการเพิ่มจำนวนของเซลล์และ 10 นาโนโมล/ลิตร ET-1 ที่ส่งเสริมการงอกขยายของเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 โดยเฉพาะอย่างยิ่ง เซลล์เมลาโนมา B16 ที่บำบัดด้วย 10 นาโนโมล/ลิตร ET-1 แสดงการสังเคราะห์เมลานินที่สูงขึ้น การออกฤทธิ์ของไทโรซิเนส TYR และ TRP-1 mRNA ในระดับที่สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับเซลล์ที่ไม่ได้รับการรักษา หมายเหตุ ผลของการรักษา 10 นาโนโมล/ลิตร ET-1 ถูกยกเลิกด้วย SPE ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา

สรุป:SPE ยับยั้ง endothelin ได้อย่างปลอดภัยและมีประสิทธิภาพโดย lightening ผิวโดย antagonizing endothelin นอกจากนี้ SPE ยังปลอดภัยและมีประสิทธิภาพ

คีย์เวิร์ด:บี16 เซลล์เมลาโนมา, เอ็นโดเทลิน-1, สารสกัดจากไข่มุกที่ละลายน้ำได้,ไวท์เทนนิ่ง

Cistanche herbaเป็นส่วนผสมที่ทำให้ผิวขาว

1|การแนะนำ

ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา ผิวใหม่และมีประสิทธิภาพไวท์เทนนิ่งเครื่องสำอางสำหรับใช้ภายนอกได้ออกสู่ตลาดแล้ว เป็นผลมาจากการพัฒนาเศรษฐกิจและความต้องการวิถีชีวิตที่เปลี่ยนแปลงไปของคนทุกรุ่น สกินที่ใช้อยู่ในปัจจุบันไวท์เทนนิ่งสารต่างๆ ได้แก่ ไฮโดรควิโนน กรดโคจิก ฟอสโฟไลเปส D1 รก และวิตามินเอ ความผิดปกติของเม็ดสีผิวส่วนใหญ่เกี่ยวข้องกับการผลิตเมลานิน มันถูกสังเคราะห์ผ่านกระบวนการที่ริเริ่มโดยการแปลงไทโรซีนเป็นโดปาที่เร่งปฏิกิริยาโดยไทโรซิเนส Dopa เริ่มต้นชุดของปฏิกิริยาทางชีวเคมีที่ซับซ้อนซึ่งนำไปสู่การสังเคราะห์เมลานิน กลไกการฟอกสีฟันของกรด ic หน่อไม้ฝรั่งไดไฮโดร 1 ไฮโดรควิโนน และกรดโคจิก เกี่ยวข้องกับการยับยั้งการทำงานของไทโรซิเนส ซึ่งเป็นเอนไซม์จำกัดอัตราในการสังเคราะห์เมลานิน2 ในทำนองเดียวกัน สารเหล่านี้จะลดการผลิตเมลานินส่งผลให้ผิวขาวขึ้น 3 ในทางตรงกันข้าม phospholipase D1, placenta และ retinoic acid ทำหน้าที่โดยการลดปริมาณการสังเคราะห์ของ tyrosinase4แม้ว่าสารเหล่านี้จะทำให้ผิวขาวขึ้นในระดับหนึ่ง แต่กลไกการฟอกสีฟันของพวกมันก็ยังไม่ชัดเจน อีกทั้งยังเป็นพิษและใช้เวลานานกว่าจะทำให้ผิวขาวขึ้น

ดังนั้นจึงจำเป็นต้องค้นหาผิวที่ปลอดภัยและมีประสิทธิภาพมากขึ้นไวท์เทนนิ่งตัวแทน การวิจัยเกี่ยวกับการฟอกสีผิวได้จ่ายผลตอบแทนสูงให้กับปฏิสัมพันธ์ระหว่างไซโตไคน์และเมลาโนไซต์เป็นหนทางในการพัฒนาสารฟอกสีผิวที่มีประสิทธิภาพ Keratinocytes หลั่ง cytokines เช่น endothelin (ET) เมื่อสัมผัสกับรังสีอัลตราไวโอเลต ไซโตไคน์เหล่านี้มีอิทธิพลต่อการย้ายถิ่นของเมลาโนไซต์ การพัฒนาเดนไดรต์ และการผลิตเมลานิน5 ด้วยเหตุนี้ การเป็นปรปักษ์กับไซต์ที่ออกฤทธิ์ของไซโตไคน์เหล่านี้จะนำไปสู่ผิวที่ขาวขึ้น6 Shi et al (2011) รายงานว่า resveratrol ซึ่งเป็นปรปักษ์ของเอ็นโดเทลินตัวใหม่ทำให้ผิวขาวขึ้น ผิวหนังผ่านกลไกที่เกี่ยวข้องกับการยับยั้งการทำงานของไทโรซิเนสใน B16 melanocytes.7 Yang et al (2000) พบว่า resveratrol มุ่งเป้าไปที่เยื่อหุ้มเซลล์เมลาโนไซต์ นี่หมายความว่ามันจะผ่านเฉพาะเยื่อหุ้มเมลาโนไซต์และเมมเบรนเมลาโนโซมเพื่อไปยังบริเวณที่ยับยั้งการผลิตเมลานิน8 ไทโรซิเนสตั้งอยู่ในเมลาโนโซม ดังนั้นสารยับยั้งของมันจะต้องสำรวจสี่ชั้น (สตราตัมคอร์เนียม, หนังกำพร้าลึก, เยื่อเมลาโนไซต์และเยื่อเมลาโนโซม) เพื่อป้องกันผลกระทบของมัน9 เรสเวอราทรอลเกินสองชั้นเท่านั้น (สตราตัมคอร์เนียมและชั้นหนังกำพร้าลึก) ในการยับยั้งการทำงานของไทโรซิเนส10 ซึ่งจะทำให้ระยะเวลาการฟอกสีฟันสั้นลง

ฮาร์เลย์ (2536) พบว่าไข่มุกในน้ำจืดสก็อตแลนด์ ออสเตรเลีย และน้ำทะเลศรีลังกามีองค์ประกอบทางเคมีที่คล้ายคลึงกัน กล่าวคือ แคลเซียมคาร์บอเนต 91.72 เปอร์เซ็นต์ สารอินทรีย์ 5.94 เปอร์เซ็นต์ น้ำ 2.23 เปอร์เซ็นต์ และสารอื่นๆ {{ 7}}.11 เปอร์เซ็นต์ .11 ที่อื่น Zhang et al (2018) พบว่าสารสกัดจากไข่มุกให้ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระอย่างมีนัยสำคัญในหลอดทดลอง 12,13 Yang et al (2016) พบว่าสารสกัดจากไข่มุกสามารถยับยั้งการทำงานของไทโรซิเนสในเซลล์ B16F10 ซึ่งจะช่วยลด การผลิตเมลานิน 14 แสดงว่าสารสกัดจากไข่มุกอาจมีผิวหนังไวท์เทนนิ่งผลกระทบ แต่ยังไม่ได้มีการศึกษากลไกที่เกี่ยวข้อง ในที่นี้เราตั้งสมมติฐานว่าสเปantagonizes endothelin เปลี่ยนแปลงการสังเคราะห์ของ melanin และ tyrosinase activity ของเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 ผลลัพธ์ของเราแสดงให้เห็นว่าสารสกัดจากไข่มุกที่ละลายน้ำได้ทำให้เอนโดเทลินเป็นปฏิปักษ์ทำให้ผิวขาวขึ้น

2|วัสดุและวิธีการ

2.1|การเตรียมและการวิเคราะห์องค์ประกอบของสารสกัดไข่มุกที่ละลายน้ำได้ (SPE)

ผงไข่มุกถูกละลายในกรดแลคติก และ pH ของของผสมถูกปรับเป็น 7.0 ด้วย PBS ไฮโดรไลซิสด้วยเอนไซม์เริ่มต้นด้วยการเติมโปรตีเอส และสารสกัดถูกกรองด้วยกระดาษกรองคุณภาพ 10 ไมโครเมตร ได้รับ supernatant และ lyophilized เพื่อเตรียมสารสกัดจากไข่มุกที่ละลายน้ำได้

2.2|การวิเคราะห์องค์ประกอบของผงไลโอฟิไลซ์

โดยสังเขปความชื้นของสเปวัดด้วยวิธีการทำให้แห้งในบรรยากาศ ตัวอย่างปริมาณจำเพาะถูกให้ความร้อนในเตาอบเพื่อการทำให้แห้งที่ 95-105 องศาเป็นเวลา 3 ชั่วโมงและชั่งน้ำหนัก ตัวอย่างถูกทำให้แห้งซ้ำหลายครั้งเพื่อให้ได้น้ำหนักคงที่ ปริมาณความชื้นถูกกำหนดเป็นความแตกต่างของมวลก่อนและหลังการให้ความร้อน ตัวอย่างถูกเผาทำให้เกิดสารอนินทรีย์ที่เรียกว่าเถ้า วิธีการชั่งน้ำหนักที่เผาไหม้ใช้เพื่อวัดคุณภาพของเถ้า ซึ่งพิจารณาความแตกต่างของคุณภาพก่อนและหลังการเผาไหม้เป็นปริมาณเถ้า วิธีการแบบเจลดาห์ลถูกใช้เพื่อกำหนดหาปริมาณโปรตีนของ SPE ปริมาณเปปไทด์ถูกประเมินตามที่อธิบายก่อนหน้านี้15 หาปริมาณพอลิแซ็กคาไรด์โดยใช้วิธีกรดแอนทราโนน-ซัลฟิวริก

cistancheสารสกัด

2.3|การเพาะเลี้ยงเซลล์

เซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16 ของหนู (กรุณาให้โดย Stem Cell Bank, Chinese Academy of Sciences) ได้รับการเพาะเลี้ยงในสื่อ Modified Eagle (DMEM) ของ Dulbecco ที่มีซีรั่มวัวในครรภ์ 10 เปอร์เซ็นต์และเพนิซิลลิน/สเตรปโตมัยซิน 1 เปอร์เซ็นต์ในตู้ฟักไข่ (BB150 Thermo Fisher Scientific) ตั้งค่าเป็น 37 องศาและ 5 เปอร์เซ็นต์ CO2 หลังจากเพาะเลี้ยง 3 วัน เซลล์จะอยู่ในสภาพที่เกือบหลอมรวมและโดยทั่วไปจะกระจายไปทั่วจาน ล้างเซลล์ด้วยน้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (PBS) และผ่านโดยการย่อยด้วยทริปซิน 0.25 เปอร์เซ็นต์ เซลล์ถูกนับโดยใช้แผ่นตรวจนับเซลล์และสารแขวนลอยของเซลล์ที่เตรียมที่ความเข้มข้นที่เหมาะสม สารแขวนลอยของเซลล์ถูกเพาะเลี้ยงในตู้ฟักเซลล์สำหรับการทดลองที่ตามมา

2.4|การตรวจหาการเพิ่มจำนวนเซลล์หลังการรักษาด้วย SPE และ ET-1 โดย CCK-8 assay

เซลล์ในระยะการเจริญเติบโตแบบลอการิทึมถูกเพาะเลี้ยงในเพลต {0}}หลุมที่ความเข้มข้น 1 × 104 เซลล์/มล. ในตู้ฟักที่ตั้งค่าไว้ที่ 37 องศาและ 5 เปอร์เซ็นต์ CO2 เป็นเวลา 24 ชั่วโมง . ความเข้มข้นที่แตกต่างกันของ SPE ({{10}}, 0.01, 0.1, 1 และ 10 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ถูกเติมลงในหลุมและปล่อยทิ้งไว้เป็นเวลา 24 ชั่วโมง 10 เปอร์เซ็นต์ของชุดตรวจนับเซลล์-8 (CCK-8) รีเอเจนต์ (Jian Cheng Bioengineering Co.) ถูกเติมในแต่ละหลุมเพื่อวัดอัตราการงอกของเซลล์ อ่านค่าการดูดกลืนแสงของแต่ละหลุมที่ความยาวคลื่น 490 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท แต่ละกลุ่มได้รับการทดสอบเป็นสามซ้ำ ผลของ ET-1 (0.1, 1, 10 และ 100 นาโนเมตร) ต่อการเพิ่มจำนวนเซลล์ได้รับการประเมินตามโปรโตคอลเดียวกัน จากนั้นเซลล์ถูกแบ่งออกเป็นสามกลุ่ม: กลุ่มควบคุม (ไม่ได้รับการบำบัด), กลุ่ม ET-1 (เซลล์ถูกบำบัดด้วย 10 nmoL ET-1 เป็นเวลา 24 ชั่วโมง) และสเปกลุ่ม (เซลล์ถูกบำบัดด้วย 10 nmoL ET-1 เป็นเวลา 24 ชั่วโมง และจากนั้นบำบัดด้วย 0.1, 1 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร SPE เป็นเวลา 24 ชั่วโมง)

ซิสทานเช ทูบูโลซาเป็นสารยับยั้งไทโรซิเนส

2.5|การทดสอบกิจกรรมของไทโรซิเนส

10 ไมโครลิตรของเซลล์ (ถูกทรีทต่างกัน) ถูกเพาะในแต่ละหลุมของจาน 96-หลุมที่ความหนาแน่นของเซลล์ที่ (5-10) × 104 เซลล์/มล. และ 100 ไมโครลิตรของอาหารเลี้ยงเชื้อถูกเติมลงใน แต่ละอย่างกัน จากนั้นเซลล์ถูกเพาะเลี้ยงล่วงหน้าในตู้ฟักที่อุณหภูมิ 37 องศาและคาร์บอนไดออกไซด์ 5 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 24 ชั่วโมง เพลตถูกหมุนเหวี่ยงที่ 2,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 2 นาที และส่วนลอยเหนือตะกอนถูกทิ้ง เซลล์ถูกล้างสามครั้งด้วย PBS หลังจากนั้น และ 50 ไมโครลิตรของสารละลาย 1 เปอร์เซ็นต์ Triton X-100 (Jian Cheng Bioengineering Co.) ถูกเติมลงในแต่ละหลุม เซลล์ถูกเก็บไว้ทันทีที่ −80 องศาเป็นเวลา 30 นาที แล้วละลายที่อุณหภูมิห้องเพื่อให้เซลล์แตกอย่างสมบูรณ์ จากนั้นเซลล์ถูกทำให้ร้อนที่ 37 องศาเป็นเวลา 5 นาที และเติมสารละลาย L -DOPA 10 ไมโครลิตร 1 เปอร์เซ็นต์ เซลล์ถูกปล่อยให้ยืนอยู่ที่ 37 องศาเป็นเวลา 2 ชั่วโมง และการดูดกลืนแสงของเพลตถูกวัดที่ความยาวคลื่น 490 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท

2.6|การทดสอบปริมาณเมลานิน

เซลล์ถูกเพาะเลี้ยงในเพลต {{0}}หลุมที่ความหนาแน่น (5-10) ×104 ต่อหลุม แต่ละหลุมมีสารเร่งการเจริญเติบโต 2 มล. เซลล์ถูกบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงในตู้ฟักที่ตั้งค่าไว้ที่ 37 องศาและคาร์บอนไดออกไซด์ 5 เปอร์เซ็นต์ ส่วนลอยเหนือตะกอนถูกทิ้ง และเมลาโนไซต์ได้รับการรักษาด้วยทริปซิน 0.25 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 3 นาที 2 มล. 10 เปอร์เซ็นต์ที่ประกอบด้วย DMEM ที่มี FBS 10 เปอร์เซ็นต์ถูกเติมในเวลาต่อมาเพื่อหยุดปฏิกิริยา เมลาโนไซต์ถูกรวบรวมไปในหลอดสำหรับการปั่นแยกขนาด 15 มล., หมุนเหวี่ยงที่ 1,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาที และส่วนลอยเหนือตะกอนถูกละทิ้ง เมลาโนไซต์ถูกล้างด้วย PBS และใส่ในหลอดที่มีเอทานอล/สารละลายอีเทอร์ 500 ไมโครลิตรผสมในอัตราส่วน 1:1 และผสมให้เข้ากันโดยการเขย่า ของผสมถูกปล่อยให้ยืนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาทีและจากนั้นหมุนเหวี่ยงที่ 3000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาที ส่วนลอยเหนือตะกอนถูกทิ้ง และ 300 ไมโครลิตรของ 1N NaOH (ซึ่งมี DMSO 10 เปอร์เซ็นต์) ถูกเติมไปยังเซลล์ ส่วนผสมนี้ถูกปล่อยให้ทำปฏิกิริยาในอ่างน้ำที่ตั้งไว้ที่ 80 องศาเป็นเวลา 40 นาทีเพื่อให้เมลานินละลายหมด จากนั้น 200 ไมโครลิตรของเมลานินที่ละลายแล้วถูกถ่ายโอนไปยังเพลต 96-หลุม และการดูดกลืนแสงถูกวัดที่ความยาวคลื่น 405 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท

2.7|การวิเคราะห์ PCR แบบเรียลไทม์เชิงปริมาณ (qRT-PCR)

RNA ทั้งหมดถูกสกัดจากเซลล์ของทั้งสามกลุ่ม (กลุ่มควบคุม, ET-1, และสเปกลุ่ม) โดยใช้ชุดเครื่องมือ RNAiso Plus (TaKaRa Bio) และถอดรหัสย้อนกลับเป็น cDNA โดยใช้ PrimeScript™ RT reagent Kit (TaKaRa Bio) การสอบวิเคราะห์ qRT-PCR ถูกดำเนินการเพื่อตรวจจับการแสดงออกของ -แอกตินในแต่ละตัวอย่าง ทำได้โดยใช้สีย้อมสีเขียว SYBR ลำดับไพรเมอร์ 16 ที่ใช้ (TaKaRa Bio) แสดงไว้ในตารางที่ 1 เงื่อนไข PCR คืออุณหภูมิการทำให้เสียสภาพเริ่มต้นที่ 95 องศาเป็นเวลา 30 วินาที การเสื่อมสภาพ 40 รอบ อุณหภูมิการหลอมที่ตั้งไว้ที่ 95 องศาเป็นเวลา 5 วินาที และ 60 องศาสำหรับ 34 วินาที ตามลำดับ ซึ่งดำเนินการในระบบ StepOne บวกกับ PCR แบบเรียลไทม์ (Applied Biosystems) ผลลัพธ์ของ qRT-PCR ถูกวิเคราะห์และแสดงออกเป็นการแสดงออกของ mRNA สัมพัทธ์ที่อิงตามค่า CT (รอบของเกณฑ์) ที่ถูกแปลงในภายหลังเป็นการเปลี่ยนแปลงแบบพับ

2.8|การวิเคราะห์ Western blot

โปรตีนทั้งหมดถูกสกัดจากเซลล์โดยใช้ Radio-Immunoprecipitation Assay (RIPA) (Solarbio Science & Technology Co., Ltd.) ความเข้มข้นของสารสกัดโปรตีนถูกกำหนดด้วย Bicinchoninic Acid Assay kit (BCA) (Solarbio Science & Technology Co., Ltd.) จากนั้นแยกโปรตีนโดย Sodium dodecylsulphate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) และแถบอิเล็กโตรโฟเรชันที่เป็นผลลัพธ์ถูกถ่ายโอนไปยังเมมเบรน Polyvinylidene Fluoride (PVDF) จากนั้นเมมเบรนถูกบล็อกด้วยนมผงพร่องมันเนย 5 เปอร์เซ็นต์ และบ่มด้วยแอนติบอดีต้าน TYR, TRP-1 และ -แอคติน (เทคโนโลยีชีวภาพซานตาครูซ) ที่ 4 องศาเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ถัดไป เยื่อหุ้มเซลล์ถูกบ่มด้วยแอนติบอดีทุติยภูมิ (Goat Anti-Mouse IgG Abmart) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง ตรวจพบแถบโปรตีนโดยใช้การเสริมเคมีลูมิเนสเซนซ์ (ECL) (Solarbio Science & Technology Co., Ltd.) การวิเคราะห์การสแกนแถบดำเนินการโดยใช้ระบบการวิเคราะห์ Image J -Actin ถูกใช้เป็นข้อมูลอ้างอิงภายในในการวิเคราะห์การแสดงออกของโปรตีน ตัวอย่างถูกเรียกใช้เป็นการทำซ้ำแบบอิสระซ้ำสามครั้งสำหรับแต่ละกลุ่ม

2.9|การวิเคราะห์ทางสถิติ

การวิเคราะห์ทางสถิติดำเนินการโดยใช้ซอฟต์แวร์ GraphPad prism8 เปรียบเทียบความแตกต่างของกลุ่มโดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว (ANOVA) และแสดงผลลัพธ์เป็นค่าเฉลี่ย ± SD P<.05 was="" considered="" statistically="">

ขาย cistanche: cistanche เป็นเซรั่มไวท์เทนนิ่ง

3|ผลลัพธ์

3.1|การวิเคราะห์องค์ประกอบของ SPE

ลักษณะทางเคมีพบว่าสเปมีความชื้น 6.03 ± 0.16 เปอร์เซ็นต์ ปริมาณเถ้า 1.55 ± {{10}}.11 เปอร์เซ็นต์ ปริมาณเปปไทด์ 7.52 ± {{16 }}.03 เปอร์เซ็นต์ ปริมาณโปรตีน 54.12 ± 0.18 เปอร์เซ็นต์ และปริมาณพอลิแซ็กคาไรด์ 0.09 ± 0.005 เปอร์เซ็นต์ ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่าโปรตีนมีมากที่สุดในอินทรียวัตถุของ SPE

3.2|ผลของ SPE ต่อการเพิ่มจำนวนของเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16

หลังจากที่เซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 ได้รับการรักษาด้วยความเข้มข้นที่ต่างกัน (0, 0.01, 0.1, 1 และ 10 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ของ SPE เป็นเวลา 24 ชั่วโมง การเพิ่มจำนวนเซลล์ถูกประเมินโดยการสอบวิเคราะห์ CCK-8 (รูปที่ 1A) เราพบว่าการเพิ่มจำนวนของเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 ที่รักษาด้วย SPE 0.01 ug/mL นั้นสูงกว่ากลุ่มที่ว่างเปล่า (P<.01). 0.1="" and="" 1="" μg/ml="" spe="" had="" no="" effect="" on="" the="" proliferation="" of="" the="" cells.="" however,="" 10="" μg/ml="" of="" spe="" significantly="" inhibited="" the="" proliferation="" of="" b16="" melanoma="" cells="" (p=""><.01). thus,="" 0.1="" and="" 1="" μg/ml="" of="">สเปถูกนำมาใช้ในการทดลองครั้งต่อไป โดยคำนึงถึงความปลอดภัยเป็นส่วนประกอบตามธรรมชาติของไวท์เทนนิ่งเครื่องสำอาง SPE ไม่เป็นพิษต่อเซลล์ที่ความเข้มข้นทั้งสองนี้ ดังนั้นจึงปลอดภัยในระดับหนึ่ง

3.3|ผลของ ET-1 ต่อการเพิ่มจำนวนเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16

เซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 ได้รับการรักษาด้วยความเข้มข้นของ ET-1 ที่ต่างกันเป็นเวลา 24 ชั่วโมง และการเพิ่มจำนวนของเซลล์ถูกประเมินโดยการสอบวิเคราะห์ CCK-8 โดยเฉพาะอย่างยิ่ง การรักษาเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 ด้วย 0.1, 1 และ 10 นาโนโมล/ลิตรของ ET-1 ส่งเสริมการเพิ่มจำนวนในลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้นด้วย 10 นาโนโมล/ลิตรของ ET{{12} } ทำให้เกิดอัตราการงอกสูงสุด (P<.001). by="" contrast,="" 100="" nmol/l="" of="" et-1="" decreased="" the="" proliferation="" of="" cells="" (figure="" 1b).="" therefore,="" 10="" nmol/l="" was="" used="" in="" subsequent="">

3.4|SPE ยับยั้งการทำงานของ Tyrosinase ในเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16

เพื่อสำรวจเพิ่มเติมกลไกการยับยั้งของสเปในการสังเคราะห์เมลานิน เราได้วิเคราะห์ผลกระทบต่อเอ็นไซม์จำกัดอัตรา (ไทโรซิเนส) ในกระบวนการสังเคราะห์เมลานิน กิจกรรมของไทโรซิเนสในเซลล์ถูกตรวจพบโดยวิธีออกซิเดชัน L-dopa เซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 ที่บำบัดด้วย 10 nmol/L ET-1 แสดงกิจกรรมของไทโรซิเนสภายในเซลล์ที่สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับเซลล์ที่ไม่ได้รับการรักษา (P < .01)="" อย่างไรก็ตาม="" กิจกรรมของไทโรซิเนสในเซลล์ที่บำบัดด้วยการบำบัดด้วย="" spe="" 0.1="" ไมโครกรัม/มิลลิลิตรและ="" 1="" ไมโครกรัม/มิลลิลิตรด้วย="" spe="" ต่ำกว่าในเซลล์ที่ไม่ได้รับการรักษา="" (p="">< .05,="" p="">< .01)="" ผลลัพธ์เหล่านี้แสดงว่า="" spe="" ยับยั้งการออกฤทธิ์ของไทโรซิเนสในลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้น="" (รูปที่="">

3.5|SPE ยับยั้งการสังเคราะห์เมลานินในเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16

เราทดสอบเพิ่มเติมว่าผลกระทบของ SPE ต่อการผลิตเมลานินในเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 นั้นถูกอาศัยสื่อกลางโดย ET-1 โดยใช้วิธีการสลายของ NaOH หรือไม่ ผลการศึกษาพบว่าปริมาณเมลานินในเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญหลังการรักษาด้วย ET 10 นาโนโมล/ลิตร-1 เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม (P<.01). however,="" the="" melanin="" content="" in="" cells="" treated="" with="" the="" 0.1="" μg/ml="" and="" 1="" μg/ml="" of="" spe="" was="" significantly="" lower="" than="" in="" cells="" of="" the="" control="" group.="" moreover,="" the="" inhibitory="" effects="" of="">สเปในการผลิตเมลานินขึ้นอยู่กับขนาดยา ผลกระทบของ SPE ต่อปริมาณเมลานินและกิจกรรมของไทโรซิเนสมีความคล้ายคลึงกัน (รูปที่ 2B) เนื่องจากว่า 0.1 ไมโครกรัม/มิลลิลิตรและ 1 ไมโครกรัม/มิลลิลิตรของ SPE ไม่ได้เปลี่ยนแปลงการเพิ่มจำนวนของเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 การลดลงของปริมาณเมลานินที่ความเข้มข้นทั้งสองนี้อาจเกิดขึ้นได้จากกลไกที่ไม่ทราบสาเหตุ

3.6|ผลของ SPE ต่อระดับ TYR และ TRP-1 mRNA

กลไกที่ SPE เปลี่ยนผลของ ET-1 ต่อเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 ถูกกำหนดหาโดยการวัดระดับ mRNA ของ TYR และ TRP-1 ในเซลล์ที่ได้รับการรักษาที่ต่างกัน ระดับ mRNA ของ TYR และ TRP-1 ในเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (P<.01 and="" p=""><.001, respectively)="" after="" treatment="" with="" 10="" nmol/l="" et-1="" compared="" to="" cells="" of="" the="" control="" group.="" interestingly,="" spe="" treatment="" effectively="" inhibited="" the="" expression="" of="" tyr="" and="" trp-1="" mrna="" (p=""><.05, p=""><.05 for="" 0.1="" μg/ml,="" and="" p="" <="" .01,="" p="" <="" .01="" for="" 1="" μg/ml,="" respectively).="" altogether,="" these="" results="" show="" that="" treatment="" with="">สเปยับยั้งระดับการแสดงออกของ TYR และ TRP-1 mRNA ในลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้น

3.7|ผลของ SPE ต่อระดับโปรตีน TYR และ TRP-1 ในเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16

การแสดงออกของโปรตีน TYR และ TRP-1 ในเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 ตรวจพบโดย Western blot เราพบระดับโปรตีนที่สูงขึ้นของ TYR และ TRP-1 ในเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 ที่ได้รับการรักษาด้วย 10 nmoL ET- 1 เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม (P<.05 and="" p=""><.01, respectively).="" this="" indicated="" that="" 10="" nmol/l="" et-1="" promoted="" the="" synthesis="" of="" melanin="" in="" the="" cells.="" this="" indicates="" that="" et-1="" may="" promote="" the="" synthesis="" of="" melanin="" by="" activating="" tyr="" and="" trp-1="" signaling="" pathways.="" in="" contrast,="" cells="" (treated="" with="" 10="" nmol="" et-1="" for="" 24="" hours="" and="" then="" treated="" with="">สเปเป็นเวลา 24 ชั่วโมง) มีระดับโปรตีนที่ต่ำกว่าอย่างมีนัยสำคัญของ TYR และ TRP-1 (P<.001 and="" p=""><.001, respectively)="" than="" cells="" treated="" with="" 10="" nmol/l="" et-1.="" this="" indicated="" that="" spe="" antagonized="" the="" effect="" of="" et-1="" thereby="" inhibiting="" melanin="" synthesis="" (figure="">

4|อภิปรายผล

Endothelin (ET) เป็นเปปไทด์ที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพตามธรรมชาติที่สังเคราะห์โดยเซลล์บุผนังหลอดเลือดในร่างกายมนุษย์ ประกอบด้วยไอโซเมอร์สามตัว: ET{{0}}, ET-2 และ ET-3 ที่ส่งสัญญาณผ่านตัวรับ ET สามตัว: ETA, ETB และ ETC.17 ETA และ ETB คือ ตัวรับหลักที่แสดงออกในระบบ ET ของมนุษย์18 ET ถูกปลดปล่อยออกจากเซลล์เคราติโนไซต์เมื่อสัมผัสกับรังสีอัลตราไวโอเลต B (UVB) เมื่อ ET จับกับตัวรับเมลาโนไซต์ มันจะกระตุ้นการสังเคราะห์ DNA และเพิ่มกิจกรรมของไทโรซิเนส สิ่งนี้ส่งเสริมการเพิ่มจำนวนอย่างรวดเร็วของเมลาโนไซต์และการสังเคราะห์เมลานิน19 ET-l ส่งเสริมการงอกขยายของเมลาโนไซต์ การสร้างเดนไดรต์ การยึดเกาะ และการย้ายถิ่น20 ในที่นี้ เราพบว่า 0.1, 1, 10 และ 100 nmol/L ET-1 ส่งเสริมการเพิ่มจำนวนเซลล์อย่างมีนัยสำคัญ การงอกขยายสูงสุดที่ 10 nmol/L ET-1 ซึ่งสอดคล้องกับผลลัพธ์ที่รายงานโดย Geng et al (2011) ซึ่งพบว่า ET-1 เพิ่มการงอกขยายและการสังเคราะห์เมลานินของเมลาโนไซต์ของผิวหนังอัลปาก้าที่เพาะเลี้ยง ยีน 21 TYR และ TRP-1 มีบทบาทในการผลิตเมลานิน อันที่จริง การศึกษาก่อนหน้านี้พบว่าผลของเอ็นโดเทลิน-1ต่อกิจกรรมของไทโรซิเนสนั้นอาศัยตัวรับ ETA เป็นสื่อกลาง22 10 nmol/L ของ ET-1 การรักษาในเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 เพิ่มกิจกรรมของไทโรซิเนสและปริมาณเมลานิน . ผลลัพธ์ของ qRT-PCR เปิดเผยว่าระดับ mRNA ของ TYR และ TRP-1 ในเซลล์ที่บำบัดด้วย 10 nmol/L ET-1 สูงกว่าในกลุ่มควบคุม สิ่งนี้ยืนยันว่า ET-1 ส่งเสริมการผลิตเมลานิน

นอกจากนี้,สเปยับยั้งผลของเอ็นโดเทลินต่อเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 ที่ความเข้มข้น 10 ug/mL มีผลเป็นพิษและด้วยเหตุนี้จึงยับยั้งการแพร่กระจายของเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 อย่างไรก็ตาม SPE ไม่ได้เปลี่ยนแปลงการเพิ่มจำนวนของเซลล์ที่ความเข้มข้น 0.1 และ 1 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร อย่างไรก็ตาม ที่ความเข้มข้น {{10}}.01 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร มันส่งเสริมการเพิ่มจำนวนเซลล์อย่างมีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า SPE มีความปลอดภัยที่ความเข้มข้นต่ำกว่า 1 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร SPE ยับยั้งการผลิตเมลานิน ET-1- ที่ความเข้มข้น 0.1 และ 1 ไมโครกรัม/มิลลิลิตรในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา นอกจากนี้ การบำบัดด้วย SPE 0.1 และ 1 ไมโครกรัม/มิลลิลิตรยังส่งผลให้ระดับ TYR และ TRP-1 mRNA ลดลงเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม นอกจากนี้ ผลการยับยั้งของ SPE ยังขึ้นกับความเข้มข้น การวิเคราะห์ Western blot เผยให้เห็นถึงผลกระทบที่คล้ายคลึงกันของ SPE ที่ความเข้มข้นทั้งสอง (0.1 และ 1 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ต่อระดับโปรตีนของ TYR และ TRP-1

ในเมลาโนไซต์ ET-1 จะจับกับรีเซพเตอร์ Endothelin Receptor type B (EDNRB) ที่นำไปสู่การกระตุ้นของฟอสโฟลิเปสซี (PLC)23 สิ่งนี้จะไฮโดรไลซ์ฟอสฟาติดิลลิโนซิทอลไดฟอสเฟต (PIP2) และกระตุ้นโปรตีนไคเนส C (PKC) ซึ่งเปลี่ยนแปลงไป การซึมผ่านของช่องไอออน24 การเปลี่ยนแปลงในการซึมผ่านนำไปสู่การกระตุ้นของช่องสัญญาณ Ca2 plus ที่ขึ้นกับแรงดันไฟฟ้าและฟอสโฟไลเปส A (PLA) 25 ในที่สุด สิ่งนี้จะกระตุ้นการสังเคราะห์เมลานิน26 ในที่นี้ กลไกที่ SPE เป็นปฏิปักษ์กับ ET{{ 8}} เพื่อยับยั้งการผลิตเมลานินได้รับการศึกษาในเบื้องต้นเท่านั้น ด้วยเหตุนี้ การแสดงออกของตัวรับ EDNRB ตลอดจนแง่มุมอื่นๆ ของการสังเคราะห์เมลานิน เช่น PKC, PKA และ KIT27 สมควรได้รับการตรวจสอบเพิ่มเติม

ส่วนประกอบทางเคมีหลักในผงไข่มุก ได้แก่ แคลเซียมคาร์บอเนตและโปรตีน ในขณะที่สารอื่นๆ เช่น พอร์ไฟรินและทอรีนมีปริมาณน้อยกว่า28 ผงไข่มุกที่สกัดด้วยน้ำส่วนใหญ่ประกอบด้วยโปรตีน ฮาร์ดเคราตินเป็นโปรตีนหลักในสารสกัดจากน้ำ อย่างไรก็ตาม สารสกัดจากน้ำอาจมีองค์ประกอบเพียงเล็กน้อย 29 การวิจัยทางเภสัชวิทยาสมัยใหม่ชี้ให้เห็นว่าไข่มุกสามารถส่งเสริมอัตราการเผาผลาญของร่างกายมนุษย์ เพิ่มการมีชีวิตของเซลล์ผิวหนังชั้นนอก ชะลอความชราของเซลล์ และยับยั้งการผลิตเมลานิน รวมทั้งผลทางเภสัชวิทยาอื่นๆ เช่น ฝ้ากระและการล้างพิษ30 การวิเคราะห์ลักษณะทางเคมีพบว่าโปรตีนเป็นชีวโมเลกุลที่มีปริมาณมากที่สุดในแง่ของอินทรียวัตถุของ SPE เราจึงตั้งสมมติฐานว่าสเปก็จะมีไวท์เทนนิ่งผลกระทบในเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 ผลลัพธ์ของเรายืนยันสมมติฐานนี้

เหล่านี้คือcistancheแท็บเล็ตสำหรับผิว-ไวท์เทนนิ่ง. กรุณาคลิกที่ภาพและรับรายละเอียด

5|บทสรุปและมุมมอง

ET{{0}} ส่งเสริมการเพิ่มจำนวนเซลล์เมลาโนมา B16 และการสังเคราะห์เมลานินโดยกระตุ้นวิถีการส่งสัญญาณ TYR และ TRP-1 SPE ที่ความเข้มข้น 0.1 และ 1 ug/mL ยับยั้งการสังเคราะห์เมลานิน ดังนั้นจึงเป็นปฏิปักษ์กับผลกระทบของ ET-1 โดยไม่มีผลต่อเซลล์มะเร็งในเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 ดังกล่าวสเปเป็นสารต่อต้านเอ็นโดเทลินที่มีศักยภาพซึ่งสามารถใช้เป็นสารปรับผิวให้ขาวกระจ่างใสได้อย่างปลอดภัยและมีประสิทธิภาพ

ข้อมูลอ้างอิง

1. Venditti A, Mandrone M, Serrilli M และอื่น ๆ กรดไดไฮโดรแอสพารากัสซิก: ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระและยับยั้งไทโรซิเนสและการสังเคราะห์ที่ดีขึ้น เจ Agric เคมีอาหาร. 2013;61(28):6848-6855.

2. Jean-Paul O. คุณสมบัติป้องกันแสงของผิวเมลานิน บริท เจ เดอร์มาทอล 2002;146(61):7-10.

3. Maeda K, Fukuda M. Invitro ประสิทธิภาพของส่วนประกอบเครื่องสำอางฟอกสีฟันหลายชนิดในเมลาโนไซต์ของมนุษย์ เจ ซอค คอสเมต์ เคม. 1991;42(6):361-368.

4. Sato K, Morita M, Ichikawa C, Takahashi H, Toriyama M. กลไกการขจัดเม็ดสีของกรดเรติโนอิกทรานส์ทั้งหมดและเรตินอลในเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 เจ ไบโอซี ไบโอเทค ไบโอช. 2014;72(10):2589-2597.

5. Ching-Shuang W, Chia-Li Y, Chieh-Shan W, Lan Cheng-Che E, Hsin-Su Y. อัลตราไวโอเลต B วงแคบช่วยกระตุ้นการแพร่กระจายและการอพยพของ melanocytes ที่เพาะเลี้ยง เจเอ็กซ์พี เดอร์มาทอล 2004;13(12):755-763.

6. ฟอน Koschembahr AM, Swope VB, Starner RJ, Abdel-Malek ZA เอนโดเทลิน-1 ปกป้องเมลาโนไซต์ของมนุษย์จากความเสียหายของดีเอ็นเอที่เกิดจากรังสียูวีโดยกระตุ้นเส้นทางการส่งสัญญาณ JNK และ p38 เจเอ็กซ์พี เดอร์มาทอล 2015;24(4):269-274.

7. Shi XM, Yan ZM, Xie JH, Zhou HF, He HX, Duan MX. การวิจัยเบื้องต้นเกี่ยวกับผลการฟอกสีฟันของเรสเวอราทรอล เจ รส น้ำหอม เครื่องสำอาง 2011;10(05):37-39.

8. Yang LC, Wang F, Liu M, และคณะ ฤทธิ์ต้านเอนโดเทลิน-1ของ Cissus assamica ยาจีนใหม่ J. 2000;12(07):455-458.

9. Serre C, Busuttil V, Botto JM การควบคุมภายในและภายนอกของการสร้างเม็ดสีและการสร้างเม็ดสีของผิวหนังมนุษย์ Int J Cosmet วิทย์ 2018;40(4):328-347.

10. Cabanes J, Chazarra S, Garcia-Carmona F. Kojic acid สารฟอกสีผิวเครื่องสำอาง เป็นตัวยับยั้งการออกฤทธิ์ช้าของกิจกรรม catecholase ของ tyrosinase เจ ฟาร์มาโค. 1994;46(12):982-985.

11. Kun GF, สตีเวนสัน CH. หนังสือไข่มุก. นิวยอร์ก: สิ่งพิมพ์โดเวอร์; 1993:13-125.

12. Zhang LH, Shen YQ, Yang AQ, Mo JH, Chen ZX, Wang J. ศึกษาฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระในหลอดแก้วของสารสกัดจากไข่มุกที่แช่เยือกแข็ง เจ ฟลาฟ แฟรก คอสม 2018;13(04):26-29.

13. Yang YL, Chang CH, Huang CC, Liu HW. ฤทธิ์ต้านการอักเสบและต่อต้านการตายของเซลล์ของสารสกัดจากไข่มุกต่อเซลล์ HaCaT ที่ฉายรังสี UVB เจ ไบโอเมด เมเตอร์ 2015;26(Suppl 1): S139-S145.

14. Yang AQ, Wang J, Zhang LH, Mo JH, Chen ZX, เซิน YQ เอฟเฟกต์แสงของสารสกัดจากไข่มุกต่อเมลาโนไซต์ในหลอดทดลอง เจ ฟาร์มา ไบโอเทคโนโลยี. 2016;23(2):146-149.

15. Lu W, Ren GP, ​​เพลง JM การหาปริมาณโปรตีนไฮโดรไลเสตเปปไทด์ซิน เจ ฟู้ด วิทย์. 2005;12(07):169-171.

16. Chia-Hua L. Ov-16 [4-(3,4-dihydroxybenzoyloxymethyl)phenyl-O- -D-glucopyranoside] ยับยั้งการสังเคราะห์เมลานินโดยควบคุมการแสดงออกของ melanogenesis- ยีนและโปรตีนควบคุม เจเอ็กซ์พี เดอร์มาทอล 2011;20(9):743-748.

17. Yanagisawa M, Kurihara H, Kimura S และอื่น ๆ vasoconstrict หรือเปปไทด์ที่มีศักยภาพใหม่ที่ผลิตโดยเซลล์บุผนังหลอดเลือด เจ เนเจอร์. 1988;332:411-415.

18. Hou L, Pavan WJ, Shin MK และอื่น ๆ การส่งสัญญาณแบบอิสระของเซลล์และแบบไม่ใช้เซลล์ผ่านตัวรับเอนโดเทลิน B ระหว่างการพัฒนาเมลาโนไซต์ เจ พัฒนา. 2004;131(14):3239-3247.

19. Imokawa G, Yada Y, Miyagishi M. Endothelins ที่หลั่งจาก keratinocytes ของมนุษย์เป็น mitogens ที่แท้จริงสำหรับ melanocytes ของมนุษย์ เจ ไบโอล เคม. 1992;267(34):24675-24680.

20. Tada A, Suzuki I, Im S และอื่น ๆ Endothelin-1 เป็นปัจจัยการเจริญเติบโตของพาราไครน์ที่ปรับเปลี่ยนการสร้างเม็ดสีของเมลาโนไซต์ของมนุษย์และมีส่วนร่วมในการตอบสนองต่อรังสีอัลตราไวโอเลต เจเซลล์เติบโตแตกต่าง 1998;9(7):575-584

21. Geng JJ, Zhang J, Mu XL และอื่น ๆ ผลของ ET-1 ต่อการเพิ่มจำนวนและการสังเคราะห์เมลานินของเมลาโนไซต์ของผิวหนังอัลปากาในหลอดทดลอง จีน J Animal Veter Sci. 2011;42(07):932-938.

22. Monji A, Inoue H, Oshima H และอื่น ๆ การชักนำและการยับยั้งไทโรซิเนสในเมลาโนไซต์ของมนุษย์ที่เพาะเลี้ยงปกติโดยเอนโดเทลิน-1 J Int J ปฏิกิริยาเนื้อเยื่อ. 2005;27(2):41-49.

23. Takeshi S, Masashi Y, Tomoh M. ลักษณะโมเลกุลของตัวรับเอนโดเทลิน เจ ทิปส์. 1992;13(3):103-108.

24. Georgia K, Ali B, Bou DG, Srivastava AK. บทบาทมอดูเลตของระบบไนตริกออกไซด์/cGMP ในเอนโดเทลิน-1-กระตุ้นการตอบสนองการส่งสัญญาณในเซลล์กล้ามเนื้อเรียบของหลอดเลือด J Curr Cardiol Rev. 2010;6(4):247-254.

25. Sp H, Angela C. Endothelin ส่งสัญญาณใน myocyte หัวใจและความเกี่ยวข้องทางพยาธิสรีรวิทยา J Curr Vasc Pharmacol. 2005;3(4):343-351.

26. Clouthier DE, Hosoda K, Richardson JA และอื่น ๆ ข้อบกพร่องของยอดประสาทกะโหลกศีรษะและหัวใจในหนูที่ขาดตัวรับ endothelin-A เจ พัฒนา. 1998;125(5):813-824.

27. Imokawa G, Yada Y, Kimura M และอื่น ๆ กลไกการส่งสัญญาณของการสร้างไมโทเจเนซิสและการสร้างเม็ดสีที่เกิดจากเอ็นโดเทลินในเมลาโนไซต์ของมนุษย์ Biochem J. 1996;314(Pt 1):305-312.

28. Zhang C, Xie LP, Huang J และอื่น ๆ ตระกูลโปรตีนเมทริกซ์แบบใหม่ที่มีส่วนร่วมในการสร้างเฟรมเวิร์กเลเยอร์ปริซึมของหอยมุก พินทาดา ฟูคาตา. Biochem Bioph Res Co. 2006;344(3):735-740.

29. Wu WL, Zhang LP, Yang ZJ และอื่น ๆ ส่วนประกอบและโครงสร้างพื้นฐานที่มีการก่อตัวของลูกแพร์ ตัวแทน J Mater 2011;025(021):79-85

30. Shao DZ, วัง CK, วัง HJ และอื่น ๆ บทคัดย่อ: การเปรียบเทียบความชุ่มชื้น ความต้านทานต่อไทโรซิเนส และการกระตุ้นสารต้านอนุมูลอิสระในผงไข่มุก 3 ชนิด Int J Cosmet วิทย์ 2010;32(5):396.