ผิวหนังมีบทบาทสำคัญในการปรับอุณหภูมิของร่างกาย รับรู้ความเจ็บปวดและความกดดัน

โปรดติดต่อoscar.xiao@wecistanche.comสำหรับข้อมูลเพิ่มเติม

บทคัดย่อ

พื้นหลัง:ถั่วเขียวของกาแฟอาราบิก้า แอล. ครอบครัว: Rubiaceae เป็นแหล่งที่อุดมไปด้วยโพลีฟีนอลที่ป้องกันความเสียหายต่อผิวหนังจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน ในการศึกษานี้ ไลโปโซมถูกกำหนดให้เป็นพาหะของยาเพื่อเพิ่มการซึมผ่านของโพลีฟีนอลสำหรับการบริหารเฉพาะที่ วัสดุและวิธีการ: สารสกัดจากเมล็ดกาแฟเขียวเตรียมโดยแปรผันอัตราส่วนของเมทานอลและน้ำ การวิเคราะห์ไฟโตเคมิคอลและการประเมินสารต้านอนุมูลอิสระในหลอดทดลองได้ดำเนินการกับสารสกัดทั้งหมดเพื่อเลือกสารสกัดที่ดีที่สุดสำหรับการศึกษาต่อไป ศักยภาพในการเกิดพิษต่อเซลล์ (MTT assay) และฤทธิ์ต้านอีลาสเทสของสารสกัดที่เลือกได้รับการประเมินในสายพันธุ์ของเซลล์ L929 โดยใช้โฟลว์ไซโตมิเตอร์ ไลโปโซมของสารสกัดถูกจัดเตรียมโดยวิธีไฮเดรชั่นฟิล์มบางและปรับให้เหมาะสมโดยการเปลี่ยนแปลงอัตราส่วนฟอสฟาติดิลโคลีนต่อโคเลสเตอรอลและค่อยๆ เพิ่มปริมาณของสารสกัด สูตร liposomal ถูกแปลงเป็นเจลโดยใช้ carbopol "974P เป็นสารก่อเจล สารแขวนลอย liposomal ที่เตรียมไว้และ liposomal gel ได้รับการประเมินสำหรับพารามิเตอร์การกำหนดสูตรต่างๆ ผลลัพธ์: ผลของการวิเคราะห์พฤกษเคมี การทดสอบสารต้านอนุมูลอิสระในหลอดทดลอง และการประเมินในหลอดทดลองใน เซลล์ L929 สรุปว่าสารสกัดเมทานอล 25 เปอร์เซ็นต์ไม่เป็นพิษโดยมีฟีนอลสูงที่สุดและมีฤทธิ์ต้านอีลาสเทสที่ดี ประสิทธิภาพการห่อหุ้มของกรดคลอโรจีนิกในสูตรไลโปโซมที่เหมาะสมคือ 75 เปอร์เซ็นต์ เจลไลโปโซมแสดงการปลดปล่อยยาอย่างต่อเนื่องนานถึง 12 ชม. เทียบกับ 6-7 ชม. ของสูตรทั่วไป สรุป: เจลจากไลโปโซมที่สกัดจากเมล็ดกาแฟเขียวที่สกัดจากเมล็ดกาแฟอาจเป็นตัวพาที่มีศักยภาพในการต่อต้านริ้วรอย

คำสำคัญ:เมล็ดกาแฟเขียว (GCB), กรดคลอโรจีนิก, สารสกัด, ไลโปโซม, สารต้านอนุมูลอิสระ, แอนตี้เอจจิ้ง

การแนะนำ

ผิวหนังมีบทบาทสำคัญในการปรับอุณหภูมิของร่างกาย รับรู้ความเจ็บปวดและความกดดัน และทำหน้าที่เป็นอุปสรรคสำคัญต่อการดูหมิ่นมลภาวะต่อสิ่งแวดล้อมที่ทำให้ผิวแก่ก่อนวัยอย่างเห็นได้ชัด1 การได้รับรังสีอัลตราไวโอเลตที่ผิวหนังในระยะยาวจะทำให้เกิดอนุมูลอิสระซึ่งก่อให้เกิดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันบนผิว ผิวที่นำไปสู่การพัฒนาของการถ่ายภาพ การถูกแดดเผา การสร้างเมลาโนเจเนซิส การกดภูมิคุ้มกัน และการเกิดมะเร็งด้วยแสง² อนุมูลอิสระเป็นโมเลกุลออกซิเจนที่มีปฏิกิริยารุนแรงซึ่งมีส่วนร่วมในการสร้างการเชื่อมโยงข้ามกับโมเลกุลคอลลาเจนที่นำไปสู่การสูญเสียความยืดหยุ่นของผิวหนัง3 การแก่ชราแสดงออกด้วยการหย่อนคล้อย ผอมบาง แห้ง และมีรอยด่างบนผิวหนัง ดังนั้น ด้วยความปรารถนาที่จะดูอ่อนเยาว์ ผลิตภัณฑ์ต่อต้านวัยจึงเป็นที่ต้องการอย่างมาก สารต้านอนุมูลอิสระจากสมุนไพรได้รับความสำคัญในอุตสาหกรรมเครื่องสำอาง สารต้านอนุมูลอิสระช่วยในการซ่อมแซมและป้องกันความเสียหายที่เกิดจากอนุมูลอิสระ ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของสมุนไพรส่วนใหญ่เกิดจากคุณสมบัติรีดอกซ์ของสารประกอบฟีนอลิก ดังนั้น สารต้านอนุมูลอิสระจึงมีแนวโน้มที่จะชะลอสัญญาณแห่งวัย เช่น ริ้วรอย จุดด่างดำ และริ้วรอย

เมล็ดกาแฟสีเขียว (Coffea arabica L, Rubiaceae) เป็นแหล่งที่อุดมไปด้วยโพลีฟีนอล เช่น กรดคลอโรจีนิกและสารประกอบที่เกี่ยวข้อง เช่น กรดคาเฟอีน กรดคูมาริก และกรดเฟรูลิกที่ปกป้องผิวจากความเสียหายจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน จากการศึกษาพบว่า สารสกัดจาก C. arabica มีคุณสมบัติต้านแบคทีเรีย 5 ตัวต้านไวรัส 6 ตัวต้านการอักเสบ 6 สมานแผลที่ผิวหนัง และ' ลดความเสียหายจากปฏิกิริยาออกซิเดชันต่อโมเลกุลขนาดใหญ่? และฤทธิ์ยับยั้งการแสดงออกของเมทัลโลโปรตีน10

กรดคลอโรเจนิกซึ่งเป็นสารประกอบโพลีฟีนอลที่สำคัญของเมล็ดกาแฟเขียวมีคุณสมบัติต้านอนุมูลอิสระและเสื่อมสภาพและยับยั้งการทำลายผิวที่เกิดจากรังสียูวี I2 จากการศึกษาทางวิทยาศาสตร์ เมล็ดกาแฟเขียวมีกรดคลอโรจีนิกในปริมาณที่สูงกว่าเมล็ดกาแฟคั่วและพืชชนิดอื่นๆ "3

กรุณาคลิกที่นี่เพื่อทราบข้อมูลเพิ่มเติม

การส่งโพลีฟีนอลผ่านผิวหนังไม่ได้ผลเนื่องจากการแทรกซึมที่จำกัด ดังนั้นต้องใช้สูตรพื้นฐานหรือสารเพิ่มการแทรกซึมที่ช่วยเพิ่มการแทรกซึม" ดังนั้นไลโปโซมจึงได้รับเลือกให้เป็นพาหะของยาเนื่องจากมีลักษณะเป็นสะเทินน้ำสะเทินบกและโมเลกุลที่ชอบน้ำสามารถฝังลงใน bilayers ที่มีศูนย์กลางได้ง่าย Liposomes ที่มีลักษณะคล้ายกับเยื่อหุ้มเซลล์ไม่ใช่ -เป็นพิษในธรรมชาติ การปรากฏตัวของฟอสโฟลิปิดในไลโปโซมช่วยเพิ่มการดูดซึมเฉพาะของยาจากหนังกำพร้าสู่ชั้นล่างเนื่องจากการยึดเกาะที่เพิ่มขึ้นของยาฟอสโฟลิปิดเชิงซ้อนบนผิวหนัง'5 จุดมุ่งหมายของการศึกษาครั้งนี้คือเพื่อพัฒนา เจลที่ประกอบด้วยไลโปโซมที่สกัดจากเมล็ดกาแฟเขียวเพื่อใช้เป็นสูตรเครื่องสำอางที่มีสารต้านอนุมูลอิสระสำหรับการต่อต้านริ้วรอย

วัสดุและวิธีการ วัสดุ

เมล็ดกาแฟเขียวอาราบิก้า L ได้มาจากตลาดท้องถิ่นของมุมไบในเดือนสิงหาคม 2019 และได้รับการรับรองโดย Dr. Harshad M. Pandit อดีตหัวหน้าและรองศาสตราจารย์ด้านพฤกษศาสตร์ Guru Nanak Khalsa College เมืองมุมไบ ประเทศอินเดีย ซื้อฟอสฟาติดิลโคลีนจาก HiMedia Laboratories Pvt Ltd, คอเลสเตอรอล 99 เปอร์เซ็นต์ซื้อจาก Loba Chemie Pvt Ltd, 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) และซื้อกรดคลอโรจีนิกจาก Otto Chemie Pvt Ltd, มุมไบ . กรดแกลลิกและกรดแอสคอร์บิกถูกจัดหาจาก SD Fine Chemicals Ltd เมืองมุมไบ สารเคมีทั้งหมดที่ใช้ในการศึกษานี้เป็นเกรด AR ผลิตไลโปโซมโดยใช้เครื่องระเหยแบบหมุน Rotaeva Equitron และ UV-Visible Spectrophotometer โดย Shimadzu 1800 ใช้สำหรับประเมินไลโปโซม

Cistanche สามารถต่อต้านริ้วรอย

วิธีการ

วิธีการสกัด

เมล็ดกาแฟสีเขียวแบบผงถูกสกัดไขมันโดยใช้ปิโตรเลียมอีเทอร์ 40-60 องศา (1:6 เปอร์เซ็นต์น้ำหนัก/ปริมาตร) เป็นเวลา 3 ชั่วโมงในอุปกรณ์แบบซอกเล็ท สกัดผงกาแฟเขียวที่สกัดออกด้วยตัวทำละลายต่างๆ เช่น น้ำ เมทานอล 25% เมทานอล 50 เปอร์เซ็นต์ เมทานอล 75 เปอร์เซ็นต์ และเมทานอล 100 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 2 ชั่วโมงโดยใช้ระบบซอคเลต สารสกัดที่เป็นผลลัพธ์ถูกทำให้เข้มข้นในจานลายครามบนอ่างน้ำไฟฟ้าที่ 80 องศาเพื่อเอาตัวทำละลายออก สารสกัดที่เตรียมไว้ใช้สำหรับการวิเคราะห์เชิงคุณภาพและเชิงปริมาณ

เนื้อหาฟีนอลิกทั้งหมด

ปริมาณฟีนอลิกทั้งหมดถูกกำหนดโดยวิธีรีเอเจนต์ Folin-Ciocalteu โดยใช้ขั้นตอนมาตรฐาน กรดแกลลิกถูกใช้เป็นมาตรฐานและปริมาณโพลีฟีนอลทั้งหมดแสดงเป็น mg/g เทียบเท่ากรดแกลลิก (GAE) จากกราฟการปรับเทียบของกรดแกลลิก16

สเปกตรัมซ้อนทับ

ใช้วิธี UV spectrometric เพื่อตรวจสอบการมีอยู่ของกรดคลอโรจีนิกในสารสกัด สำหรับการเตรียมสารละลายมาตรฐาน Img/ml ของกรดคลอโรจีนิกมาตรฐานถูกละลายในบัฟเฟอร์ฟอสเฟตและเตรียมการเจือจางเพิ่มเติมเพื่อให้ได้สารละลายมาตรฐาน 10 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร สำหรับสารละลายตัวอย่าง 25 เปอร์เซ็นต์ของสารสกัดเมทานอล 1 มก./มล. ถูกละลายในบัฟเฟอร์ฟอสเฟตและเตรียมการเจือจางเพิ่มเติมเพื่อให้ได้สารละลายมาตรฐาน 10 ไมโครกรัม/มล. ได้สเปกตรัมการซ้อนทับของสารละลายทั้งสองโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตเมตรี UV-Vis

การหาปริมาณกรดคลอโรเจนิกในแต่ละสารสกัด การเตรียมสารละลายมาตรฐาน

กรดคลอโรจีนิกมาตรฐานถูกละลายในตัวทำละลาย เช่น น้ำ เมทานอล 25% เมทานอล 50 เปอร์เซ็นต์ เมทานอล 75 เปอร์เซ็นต์ และเมทานอล 100 เปอร์เซ็นต์ เพื่อลดข้อผิดพลาดในขั้นตอนการเตรียมการเตรียม สารละลายกรดคลอโรจีนิก 10 ppm ถูกเตรียมในแต่ละตัวทำละลายข้างต้น จากนั้นจึงเตรียมการเจือจางที่สอดคล้องกันซึ่งมีช่วงความเข้มข้น 2 ถึง 10 ppm กราฟเชิงเส้นถูกสร้างขึ้นโดยการบันทึกการดูดกลืนแสงที่ 324 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV-Vis

การเตรียมสารละลายตัวอย่าง

สำหรับการเตรียมสารละลายตัวอย่าง สารสกัดถูกละลายในตัวทำละลายตามลำดับและทำสารละลาย 10 ppm การดูดกลืนแสงสำหรับสารละลายตัวอย่างถูกบันทึกที่ 324 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV-Vis ค่าการดูดกลืนแสงที่ได้รับถูกอนุมานในแผนภาพเชิงเส้นเพื่อหาความเข้มข้นของกรดคลอโรจีนิกในแต่ละสารสกัด

ความมุ่งมั่นของกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระ

การทดสอบสารต้านอนุมูลอิสระ PDF (2,2-diphenyl -1-picrylhydrazyl) สารต้านอนุมูลอิสระ Radical scavenging activity ของสารสกัดต่ออนุมูล DPPH โดยปฏิบัติตามวิธีมาตรฐาน" ใช้กรด Ascorbic เป็นมาตรฐาน การทดลองดำเนินการเป็น 3 เท่า เปอร์เซ็นต์ของกิจกรรมการกำจัดอนุมูลอิสระของ DPPH ถูกวางแผนเทียบกับความเข้มข้นของสารสกัดแต่ละชนิดและหาค่า IC

กิจกรรมการกำจัดอนุมูลอิสระของไนตริกออกไซด์ถูกตรวจสอบโดยการใช้ปฏิกิริยา Griess Illosvoyอาณาจักรที่สาบสูญ cistanchel8 กรดแอสคอร์บิกถูกใช้เป็นมาตรฐาน ทำการทดลองเป็นสามเท่า เปอร์เซ็นต์ของกิจกรรมการกำจัดอนุมูลอิสระของไนตริกออกไซด์ถูกวางแผนเทียบกับความเข้มข้นของสารสกัดแต่ละชนิด และการยับยั้งร้อยละ IC สำหรับการศึกษาสารต้านอนุมูลอิสระทั้งสองถูกคำนวณโดยใช้สูตรที่กล่าวถึงด้านล่าง กิจกรรมการขจัดถูกแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์การยับยั้งที่คำนวณโดยใช้สูตรต่อไปนี้:

การหาค่าความมีชีวิตของเซลล์โดย MTT Assay สารสกัดจากเมล็ดกาแฟเขียว ได้แก่ สารสกัดเมทานอล 25 เปอร์เซ็นต์ ถูกคัดกรองสำหรับการศึกษาความเป็นพิษต่อเซลล์เทียบกับสายพันธุ์ของเซลล์ L929200 ul ของสารแขวนลอยของเซลล์ถูกเพาะในจานหลุม 96-หลุมที่มี ความหนาแน่นของเซลล์ (20,{5}} เซลล์ต่อหลุม) โดยไม่มีสารทดสอบ เซลล์ได้รับอนุญาตให้เติบโตประมาณ 24 ชั่วโมง เติมความเข้มข้นที่เหมาะสมของสารทดสอบ (สารสกัดเมทานอล 25 เปอร์เซ็นต์) จานถูกบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่ 37 องศาใน CO 5 เปอร์เซ็นต์ บรรยากาศ และสื่อที่ใช้แล้วถูกกำจัด รีเอเจนต์ MTT ถูกเติมไปยังความเข้มข้นสุดท้ายที่ (0.5 มก./มล.) ของปริมาตรทั้งหมด และเพลตถูกบ่มเป็นเวลา 2-3 ชม. ในสภาวะที่มืด 100 ul ของ DMSO ถูกเติมหลังจากการเอาออกของรีเอเจนต์ MIT และเขย่าเบาๆ การดูดกลืนแสงถูกวัดที่ 570nm และ 630nm โดยใช้สเปกโตรโฟโตมิเตอร์บนเครื่องอ่าน ELISA ค่า IC.o ถูกกำหนดโดยใช้สมการถดถอยเชิงเส้น สูตรที่ใช้ในการศึกษา:

การกำหนดฤทธิ์ต้านอีลาสเทส

เซลล์ถูกเพาะเลี้ยงที่ความหนาแน่น 3×105 เซลล์/2 มล. และบ่มใน CO บ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่ 37 องศา 1 สำหรับการศึกษาการต่อต้านอีลาสเทส เซลล์ที่บำบัดด้วยอีพิกัลโลคาเทชินแกลเลต (EGCG) 250uM ถูกใช้เป็นกลุ่มควบคุมเชิงบวก เซลล์ที่บำบัดด้วย 200ug/ml ของ ใช้สารสกัดเมทานอล 25 เปอร์เซ็นต์เป็นตัวอย่างทดสอบ (ตารางที่ 6) และใช้เฉพาะเซลล์ที่มีอาหารเลี้ยงเชื้อเป็นตัวควบคุมเชิงลบและถูกบ่มในอาหารเลี้ยงเชื้อ 2 มล. เป็นเวลา 24 ชั่วโมง หลอดถูกหมุนเหวี่ยงเป็นเวลาห้านาทีที่ 300x g ที่ 25 องศา และเซลล์ถูกล้างด้วย PBS สารละลาย BD Cytofix/Cytoperm 0.5 มล. ถูกเติมหลังจากกำจัด PBS และหลอดไม่ถูกรบกวนเป็นเวลา 10 นาที 0.5 เปอร์เซ็นต์ของ bovine serum albumin (BSA) ใน 'S[PO OU] USEM Ol pes sem op ตามเปอร์เซ็นต์ I'O pue SEd 20 μL ของ Mouse Anti-Human Neutrophil Elastase/ELA2 Alexa Fluor® 647-คอนจูเกตโมโนโคลนัลแอนติบอดีถูกเติม ผสมและบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้องภายใต้สภาวะที่มืด เซลล์ได้รับการบำบัดด้วยโซเดียมเอไซด์ 0.1 เปอร์เซ็นต์และ PBS 0.5 มล. และวิเคราะห์โดย Flow Cytometry ด้วยการกระตุ้นและการปล่อย 650 นาโนเมตรและ 668 นาโนเมตรตามลำดับ ในการศึกษานี้ ใช้สารประกอบทดสอบ ได้แก่ สารสกัดจากเมล็ดกาแฟเขียว (สารสกัดเมทานอล 25 เปอร์เซ็นต์) และยา Epigallocatechin gallate (EGCG) มาตรฐานเพื่อประเมินผลของสารดังกล่าวต่อการแสดงออกของ ELA-2 (คอนจูเกตแอนติบอดีต่อแอนติบอดีต่ออีลาสเทสของมนุษย์) ในเซลล์ L929 เส้น

การเตรียมสารสกัดจากเมล็ดกาแฟเขียว โหลดไลโปโซม

วิธีการไฮเดรชั่นแบบฟิล์มบางตามที่ Bangham และคณะ 1 Degree อธิบายไว้ถูกใช้เพื่อกำหนดสูตรไลโปโซม ส่วนผสมของไขมันถูกเตรียมโดยการละลายฟอสฟาติดิลโคลีนและโคเลสเตอรอลในคลอโรฟอร์มและเมทานอล (2:1) ในขวดก้นกลม (RBF) และเติมเม็ดแก้วสำหรับการสร้างฟิล์มที่เป็นเนื้อเดียวกัน RBF ถูกติดเข้ากับเครื่องระเหยแบบแฟลชแบบหมุน (Roteva, สมการ) และปล่อยให้หมุนที่ 80 รอบต่อนาที/นาทีในอ่างน้ำที่มีอุณหภูมิ 40 องศา ตัวทำละลายอินทรีย์ถูกกำจัดออกโดยการใช้สุญญากาศอย่างช้าๆ ซึ่งนำไปสู่การก่อรูปฟิล์มไขมันที่เป็นเนื้อเดียวกัน 100 เปอร์เซ็นต์บนผนังของขวด ฟิล์มได้รับอนุญาตให้แห้งสำหรับ LH สำหรับการกำจัดตัวทำละลายอินทรีย์โดยสมบูรณ์ ฟิล์มไขมันแห้งถูกไฮเดรทด้วยบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (pH: 5.4) ที่มีสารสกัดละลาย (25 เปอร์เซ็นต์ของสารสกัดเมทานอล) จากนั้นหมุน RBF ที่ 150 รอบต่อนาที/นาทีในอ่างน้ำที่มีอุณหภูมิคงที่ที่ 46 องศาซึ่งสูงกว่าอุณหภูมิการเปลี่ยนแปลง ของไขมัน การหมุนดำเนินต่อไปเป็นเวลา 60 นาทีจนกระทั่งได้สารแขวนลอยที่เป็นเนื้อเดียวกัน ไลโปโซมที่ผลิตโดยใช้วิธีนี้มีขนาดใหญ่และมีขนาดต่างกัน ดังนั้นจึงใช้วิธีบาธโซนิเคชั่นเป็นเวลา 30 นาทีเพื่อลดขนาดไลโปโซม สารแขวนลอยไลโปโซมที่สกัดจากเมล็ดกาแฟเขียวได้รับอนุญาตให้ยืนเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องเพื่อให้แน่ใจว่ามีความชุ่มชื้นอย่างสมบูรณ์ สารแขวนลอยของ liposomal ถูกเก็บไว้ในขวดแก้วสีเหลืองอำพันในตู้เย็นจนกว่าจะใช้ต่อไป

ลักษณะของไลโปโซม

ต่อไปนี้เป็นพารามิเตอร์ที่มีลักษณะเฉพาะของไลโปโซมที่เตรียมไว้

การหาค่าประสิทธิภาพการห่อหุ้มด้วย UV-Vis spectrophotometer ถูกนำมาใช้เพื่อประเมินประสิทธิภาพการห่อหุ้มของกรดคลอโรจีนิกในไลโปโซมที่บรรจุสารสกัดจากเมล็ดกาแฟเขียว การดูดกลืนแสงของกรดคลอโรจีนิกที่เหลืออยู่ในส่วนลอยเหนือตะกอนหลังการหมุนเหวี่ยงถูกวัดที่ 324 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV-Visเศษฟลาโวนอยด์บริสุทธิ์ micronized 1000 มก. ใช้จากนั้นคำนวณความเข้มข้นจากแผนภาพการสอบเทียบที่ได้รับสำหรับกรดคลอโรจีนิกมาตรฐาน

ปริมาณยาทั้งหมดที่เพิ่มเข้าไปในกล้องจุลทรรศน์ออปติคัล

วาง liposomal กันกระเทือนบนสไลด์แก้วที่สะอาดและสังเกตได้ภายใต้พลังของกล้องจุลทรรศน์แบบออปติคัล 45X และ 100X (กล้องจุลทรรศน์ Motic) การกำหนดขนาดถุง ดัชนี Polydispersibility (PDI) และศักยภาพซีตา

ขนาดถุงและดัชนี Polydispersibility วิเคราะห์โดยใช้เครื่องมือการกระเจิงแสงแบบไดนามิกด้วยระบบตรวจสอบด้วยคอมพิวเตอร์ (เครื่องวิเคราะห์ขนาดอนุภาค Malvern) แบตช์ไลโปโซมที่เตรียมใหม่ถูกเจือจางในอัตราส่วน 1:100 ด้วยน้ำที่ปราศจากไอออน การวัดทั้งหมดทำเป็น 3 เท่า ที่ 25±0.5 องศา สารแขวนลอยของ liposomal ถูกเจือจางด้วยน้ำปราศจากไอออนและกำหนดศักยภาพของซีตาโดยใช้ Malvern Zetasizer

การวิเคราะห์ด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเลคตรอนแบบส่งผ่าน (TEM) TEM ดำเนินการสำหรับสารแขวนลอยบรรจุยาที่เหมาะสมที่สุดโดยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน (Tecnai T20,200Kev, FEI) วางระบบกันกระเทือนด้วยไมโครปิเปตบนตะแกรง ตะแกรงแห้งดี ตารางที่แห้งซึ่งมีตัวอย่างถูกทิ้งระเบิดด้วยอิเล็กตรอนเร่งที่ 200 VK จากนั้นขนาดถุงและสัณฐานวิทยาของไลโปโซมถูกมองเห็นโดย TEM ภายใต้สุญญากาศ (รูปที่ 1) การเตรียมไลโปโซมเจล

สารสกัดจากเมล็ดกาแฟเขียวสกัด liposomal gel ถูกเตรียมโดยใช้ carbopol@974P gel base ชั่งน้ำหนัก 0.5 เปอร์เซ็นต์ของ carbopol@974P อย่างแม่นยำและเก็บกักความชุ่มชื้นไว้ในน้ำกลั่นสองครั้งที่มีสารกันบูดในชั่วข้ามคืน เม็ดไลโปโซมที่ได้รับหลังจากการปั่นเหวี่ยงถูกกระจายไปในน้ำกลั่นโดยโซนิเคชันและเติมสารละลายคาร์โบโพลไฮเดรตด้วยการกวน ทำให้เกิดเจลโดยการทำให้เป็นกลางโดยใช้ไตรเอทาโนลามีน (TEA) เจลได้รับการประเมินสำหรับสี เนื้อสัมผัส (ความเรียบเนียนและความมัน) pH ความหนืด ปริมาณยา ความสามารถในการแพร่กระจาย และในการศึกษายาเพื่อปลดปล่อย

การศึกษาการปลดปล่อยยาในหลอดทดลอง

เครื่องมือเซลล์ Franz diffusion ที่มีความจุช่องตัวรับ 22 มล. และพื้นที่ผิว 3.91 ซม. 2 ถูกใช้เพื่อประมาณการเมมเบรนล้างไตที่ปลดปล่อยยาในหลอดทดลอง (จุดตัดน้ำหนักโมเลกุล 12,000-14,000) ซึ่ง ถูกไฮเดรตล่วงหน้าโดยการแช่ในบัฟเฟอร์ข้ามคืนถูกติดตั้งบนเซลล์ บัฟเฟอร์ฟอสเฟต pH 5.4 (37 องศา ±0.5 องศา ) ถูกใช้เป็นสารตัวรับ สารละลายในอ่างเก็บน้ำถูกกวนที่ 100 รอบต่อนาที/นาทีโดยใช้เม็ดบีดแม่เหล็ก ใส่เจล 0.5 กรัมในช่องผู้บริจาคบนเมมเบรน อะลิควอตถูกเก็บที่ช่วง 1,2, 3, 4, 5,6,7,8,12 และ 24 ชั่วโมง และวิเคราะห์โดย UV-Vis spectrophotometer ที่ 324 นาโนเมตร

ผลลัพธ์และการอภิปราย วิธีการสกัด

ผลผลิตร้อยละของสารสกัดจากเมล็ดกาแฟอาราบิก้าแอลสีเขียวแสดงไว้ในตารางที่ 3 ลักษณะทางกายภาพของสารสกัดทั้งหมดมีสีเหลืองเข้มและสีน้ำตาลเข้ม สารสกัดเมทานอล 25 เปอร์เซ็นต์ให้ผลผลิตเป็นเปอร์เซ็นต์สูงสุดที่ 26.54±0.13 เมื่อเปรียบเทียบกับสารสกัดอื่นทั้งหมด

เนื้อหาฟีนอลิกทั้งหมด

วิธี Folin-Ciocalteu ใช้เพื่อประเมินปริมาณฟีนอลิกทั้งหมดของสารสกัดทั้งหมด TPC ของสารสกัดทั้งหมดแสดงในรูปของกรดแกลลิกเทียบเท่า (สมการเส้นโค้งมาตรฐาน: y= 0.0031 บวก 0.3477,r2=0.9953)ที่กล่าวถึงในตารางที่ 1 ในบรรดาสารสกัดทั้งหมดมีปริมาณฟีนอลิกที่สำคัญประมาณร้อยละ 25 ของสารสกัดเมทานอล Spectral Overlay Quantification ของกรดคลอโรจีนิกในแต่ละสารสกัด ปริมาณกรดคลอโรจีนิกที่มีอยู่ในสารสกัดแต่ละชนิดถูกกล่าวถึงในตารางที่ 3 และรูปที่ 2สารโอเทฟลาโวนอยด์จากผลการศึกษาพบว่ามีปริมาณกรดคลอโรจีนิกสูงสุดร้อยละ 25 ของสารสกัดเมทานอล

จากผลที่ได้จากปริมาณฟีนอลิกทั้งหมด การหาปริมาณกรดคลอโรจีนิก และการทดสอบสารต้านอนุมูลอิสระ 25 เปอร์เซ็นต์สารสกัดเมทานอลพบว่ามีปริมาณฟีนอลิกสูงสุด ปริมาณกรดคลอโรจีนิกที่มากกว่า และกิจกรรมการขับอนุมูลอิสระสูงสุดเมื่อเทียบกับสารสกัดอื่นๆ

การหาความมีชีวิตของเซลล์โดย MTT Assay การทดสอบความมีชีวิตเป็นการทดสอบที่กำหนดความสามารถของเนื้อเยื่อ เซลล์ หรืออวัยวะในการรักษาหรือฟื้นฟูสภาวะการอยู่รอด การศึกษาความเป็นพิษต่อเซลล์ของสารประกอบทดสอบ สารสกัดจากเมล็ดกาแฟเขียวเทียบกับเซลล์ L929 ในข้อมูลทางสถิติของการศึกษาความเป็นพิษต่อเซลล์ของเซลล์โดยเครื่องอ่าน ELISA ชี้ให้เห็นว่าสารสกัดจากเมล็ดกาแฟเขียวมีคุณสมบัติที่มีศักยภาพในการเป็นพิษต่อเซลล์ในระดับปานกลางโดยมีความเข้มข้นในการยับยั้ง (IC) ที่ 306.38 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร เมื่อเปรียบเทียบกับมาตรฐาน ยา Camptothecin ที่มี 23ug/ml ตารางที่ 5 การสังเกตแสดงให้เห็นอย่างชัดเจนว่าสารสกัดจากเมล็ดกาแฟเขียวไม่มีศักยภาพในการเป็นพิษต่อเซลล์อย่างมีนัยสำคัญ โดยมีความเข้มข้นตั้งแต่ 125-200 ug/ml ตามลำดับ โดยมีระยะฟักตัว 24 ชั่วโมงที่ 37 องศา (กราฟ 1).

การกำหนดฤทธิ์ต้านอีลาสเทส

เอนไซม์อีลาสเทสสามารถสลายอีลาสติน ซึ่งเป็นโปรตีนเส้นใยยืดหยุ่นที่ไม่ละลายน้ำ ร่วมกับคอลลาเจนมีส่วนช่วยในความแข็งแรงเชิงกลของเนื้อเยื่อเกี่ยวพัน จากการศึกษาหลายชิ้นชี้ว่าทั้งการแก่ก่อนวัยของผิวหนังและการต่อต้านริ้วรอยนั้นสัมพันธ์กับกิจกรรมอีลาสเทสที่ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ จึงมีการศึกษาการต่อต้านอีลาสเทสเพื่อยืนยันประโยชน์ของสารสกัดจากเมล็ดกาแฟเขียวเป็นสารต่อต้านริ้วรอย ในการศึกษานี้ สารประกอบทดสอบคือสารสกัดจากเมล็ดกาแฟเขียวและ Std, EGCG ถูกใช้เพื่อประเมินผลของพวกมันต่อการแสดงออกของ ELA-2 (แอนติบอดีต่อ Elastase แอนติบอดีของมนุษย์ที่ควบคู่ไปกับเมาส์) ในสายเซลล์ L929 ความเข้มข้นของสารประกอบที่ใช้ในการทดลองมีดังนี้

สารสกัด GC bean ของสารประกอบทดสอบที่กำหนดยับยั้งการแสดงออกของ ELA-2 ในสายเซลล์ L929 ค่าความเข้มของการเรืองแสงเฉลี่ยสัมพัทธ์ของ ELA-2 เกือบจะลดลงในทำนองเดียวกันใน std, Epigallocatechin gallate และสารสกัดจากเมล็ดกาแฟเขียวในการทดสอบ (ตารางที่ 7 รูปที่ 3 และฮิสโตแกรม 1) ดังนั้น GC bean จึงถือได้ว่าเป็นสารต้านอีลาสเทสที่ดี การเตรียมสารสกัดจากเมล็ดกาแฟเขียว โหลดไลโปโซม

ในการศึกษานี้ใช้วิธีการให้น้ำแบบฟิล์มบางเพื่อสร้างไลโปโซมเพียวริแทน วิตามินซีเหตุผลที่เลือกสิ่งนี้

วิธีนี้เป็นวิธีที่ง่ายที่สุดในการเตรียมถุงน้ำหลายชั้นและสามารถบรรจุโมเลกุลที่ชอบน้ำในปริมาณที่มากขึ้น เช่น กรดคลอโรจีนิก เมื่อเปรียบเทียบกับถุงน้ำ Unilamellar พบว่าวิธีการให้ความชุ่มชื้นแบบฟิล์มบางสามารถให้ประสิทธิภาพการห่อหุ้ม 75 เปอร์เซ็นต์สำหรับกรดคลอโรจีนิกที่มีอยู่ในสารสกัดในตารางที่ 2 ดังนั้น วิธีนี้จึงถูกนำมาใช้ในการเตรียมไลโปโซม

การจำแนกลักษณะของไลโปโซมด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบออปติคัล

ถุง multilamellar สังเกตได้ชัดเจน (รูปที่ 4) การสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์ถูกใช้เพื่อประเมินรูปร่างและขนาดของถุงน้ำที่บันทึกไว้สำหรับแบทช์ที่เตรียมไว้ทั้งหมด

การหาค่าดัชนีความสามารถในการกระจายตัวของสารหลายตัว (PDI) ศักยภาพของซีตา และขนาดถุง

โดยทั่วไปแล้ว PDI จะปรากฏสำหรับการกระจายขนาดของถุงน้ำในตัวอย่างที่กำหนดsistancheค่าตัวเลขของ PDI เริ่มต้นจาก {{0}}}.0 (ขนาดอนุภาคสม่ำเสมออย่างสมบูรณ์แบบ) ถึง 1.1 (ขนาดอนุภาคโพลีดิสเพอร์สสูง) ในกรณีของระบบพาหะที่มีไขมันเป็นพื้นฐาน เช่น ไลโปโซมและ นาโนไลโปโซมที่มีขนาด 0.3 และต่ำกว่าเป็นที่ยอมรับได้ เนื่องจากเป็นการบ่งชี้ว่ามีจำนวนถุงฟอสโฟลิปิดที่เป็นเนื้อเดียวกัน 21 ศักยภาพของซีตาเป็นเทคนิคการจำแนกลักษณะเฉพาะที่สำคัญซึ่งใช้เพื่อทำความเข้าใจความเสถียรทางกายภาพของอนุภาค โดยทั่วไป ค่าตั้งแต่ -30 mV ถึงบวก 30mV ถือว่ามีแรงผลักที่เพียงพอเพื่อให้มีความคงตัวของคอลลอยด์ทางกายภาพที่ดีขึ้น

วิธีการให้ความชุ่มชื้นแบบฟิล์มบางช่วยให้ถุงน้ำหลายชั้นขนาดใหญ่และแตกต่างกัน การวิเคราะห์ขนาดของไลโปโซมที่ผลิตได้เผยให้เห็นขนาด z- เฉลี่ย (d.nm) เท่ากับ 864.2 นาโนเมตร, PDI เท่ากับ 0.375 และศักยภาพซีตาของ -12.4 ที่ดี ประสิทธิภาพการดักจับ

กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน (TEM) การวิเคราะห์ทางสัณฐานวิทยาของไลโปโซมเหล่านี้โดย TEM แสดงให้เห็นไลโปโซมรูปทรงกลม การเตรียมไลโปโซมเจล

การกระจายตัวของไลโปโซมเพียงแค่ผสมกับพอลิเมอร์เพื่อให้เจลที่สอดคล้องกัน สูตรเจลไลโปโซมมีประโยชน์เนื่องจากการหลอมรวมของถุงน้ำสามารถหลีกเลี่ยงหรือลดขนาดได้อย่างมีประสิทธิภาพเนื่องจากโพลีเมอร์ทำหน้าที่เป็นตัวเว้นวรรคระหว่างไลโปโซม ดังนั้นขนาดของถุงจะไม่ได้รับผลกระทบเนื่องจากเป็นกระบวนการควบคุมปฏิกิริยาระหว่างโพลีเมอร์/ไลโปโซม สูตรครีมที่ใช้ liposomal ไม่ได้ถูกเลือกเนื่องจากมีการรายงานปัญหาความคงตัวในผลิตภัณฑ์ที่ใช้อิมัลชันเนื่องจากเป็นวิธีการที่ง่ายที่สุดในการเตรียมถุงน้ำ multilamellar และสามารถบรรจุโมเลกุลที่ชอบน้ำในปริมาณที่มากขึ้น เช่น กรดคลอโรจีนิก เมื่อเปรียบเทียบกับ ถุงน้ำเดียว พบว่าวิธีการให้ความชุ่มชื้นแบบฟิล์มบางสามารถให้ประสิทธิภาพการห่อหุ้ม 75 เปอร์เซ็นต์สำหรับกรดคลอโรจีนิกที่มีอยู่ในสารสกัดในตารางที่ 2 ดังนั้น วิธีนี้จึงถูกนำมาใช้ในการเตรียมไลโปโซม

การจำแนกลักษณะของไลโปโซมด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบออปติคัล

ถุง multilamellar สังเกตได้ชัดเจน (รูปที่ 4) การสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์ถูกใช้เพื่อประเมินรูปร่างและขนาดของถุงน้ำที่บันทึกไว้สำหรับแบทช์ที่เตรียมไว้ทั้งหมด

การหาค่าดัชนีความสามารถในการกระจายตัวของสารหลายตัว (PDI) ศักยภาพของซีตา และขนาดถุง

โดยทั่วไปแล้ว PDI จะปรากฏสำหรับการกระจายขนาดของถุงน้ำในตัวอย่างที่กำหนด ค่าตัวเลขของ PDI เริ่มต้นจาก {{0}}}.0 (ขนาดอนุภาคสม่ำเสมออย่างสมบูรณ์แบบ) ถึง 1.1 (ขนาดอนุภาคโพลีดิสเพอร์สสูง) ในกรณีของระบบพาหะที่มีไขมันเป็นพื้นฐาน เช่น ไลโปโซมและ นาโนไลโปโซมที่มีขนาด 0.3 หรือต่ำกว่านั้นเป็นที่ยอมรับได้ เนื่องจากเป็นการบ่งชี้ว่ามีจำนวนถุงฟอสโฟลิปิดเป็นเนื้อเดียวกัน21 ศักยภาพของซีตาเป็นเทคนิคการจำแนกลักษณะเฉพาะที่สำคัญซึ่งใช้เพื่อทำความเข้าใจความเสถียรทางกายภาพของอนุภาค โดยทั่วไป ค่าตั้งแต่ -30 mV ถึงบวก 30mV ถือว่ามีแรงผลักที่เพียงพอเพื่อให้มีความคงตัวของคอลลอยด์ทางกายภาพที่ดีขึ้น 2

วิธีการให้ความชุ่มชื้นแบบฟิล์มบางช่วยให้ถุงน้ำหลายชั้นขนาดใหญ่และแตกต่างกัน การวิเคราะห์ขนาดของไลโปโซมที่ผลิตได้เผยให้เห็นขนาด z- เฉลี่ย (d.nm) ที่ 864.2 นาโนเมตร, PDI เท่ากับ 0.375 และศักยภาพซีตาของ -12.4 ที่ดี ประสิทธิภาพการดักจับ

กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน (TEM) การวิเคราะห์ทางสัณฐานวิทยาของไลโปโซมเหล่านี้โดย TEM แสดงให้เห็นไลโปโซมรูปทรงกลม

การเตรียมไลโปโซมเจล

การกระจายตัวของไลโปโซมเพียงแค่ผสมกับพอลิเมอร์เพื่อให้เจลที่สอดคล้องกัน สูตรเจลไลโปโซมมีประโยชน์เนื่องจากการหลอมรวมของถุงน้ำสามารถหลีกเลี่ยงหรือลดขนาดได้อย่างมีประสิทธิภาพเนื่องจากโพลีเมอร์ทำหน้าที่เป็นตัวเว้นวรรคระหว่างไลโปโซม ดังนั้นขนาดของถุงจะไม่ได้รับผลกระทบเนื่องจากเป็นกระบวนการควบคุมปฏิกิริยาระหว่างโพลีเมอร์/ไลโปโซม สูตรครีมที่ใช้ liposomal ไม่ได้ถูกเลือกเนื่องจากมีการรายงานปัญหาความคงตัวในผลิตภัณฑ์ที่ใช้อิมัลชันเนื่องจาก

การปรากฏตัวของสารลดแรงตึงผิวและน้ำมันส่วนเกินซึ่งอาจทำปฏิกิริยากับถุงน้ำ คุณสมบัติต่างๆ เช่น ความหนืดสามารถควบคุมได้ง่ายโดยการเปลี่ยนความเข้มข้นของพอลิเมอร์หรือเปลี่ยนชนิดของพอลิเมอร์ ดังนั้นไลโปโซมเจลจึงถูกเตรียมขึ้นเพื่อหลีกเลี่ยงปัญหาความคงตัว ควบคุมการปลดปล่อย ง่ายต่อการเตรียม และมีความสวยงามเหมือนเป็นเครื่องสำอางบำรุงผิว23 ไลโปเจลที่เตรียมไว้มีสีเหลืองซีดและทึบแสง 0.5 เปอร์เซ็นต์ของน้ำหนัก carbopol@974P พบว่ามีความสม่ำเสมอที่ดีและมีลักษณะที่ราบรื่นปราศจากการรวมตัวใดๆ ปริมาณยาสำหรับ liposomal gel พบว่าเป็น 94.16±1.3 โดยมีความหนืดของเจลอยู่ในช่วง 13,500 cps ถึง 16,500 cps และความสามารถในการแพร่กระจายประมาณ 7-8 g.cm/s

รายละเอียดการปลดปล่อยยาในหลอดทดลอง

ชั้นนอกสุดของผิวหนังคือ stratum corneum และประกอบด้วยโปรตีนเคราตินและไขมันเป็นส่วนใหญ่ ไขมันระหว่างเซลล์มีบทบาทสำคัญในการควบคุมการดูดซึมทางผิวหนัง ลิพิดระหว่างเซลล์อาจมีปฏิกิริยากับฟอสโฟลิปิดที่มีอยู่ในไลโปโซมและด้วยเหตุนี้จึงทำให้เกิดการบวมของลิพิดโดยไม่เปลี่ยนแปลงโครงสร้างหลายชั้นของชั้น corneum ไขมันที่บวมเหล่านี้ทำให้ยาสะสมและก่อตัวเป็นคลังเก็บในผิวหนัง แม้ว่ากลไกของไลโปโซมที่ใช้ทาเฉพาะจะยังไม่เป็นที่เข้าใจอย่างถ่องแท้ แต่องค์ประกอบของลิปิด ประจุที่พื้นผิว และไลโปโซม lamellarity ส่วนใหญ่มีบทบาทสำคัญในการจำหน่ายยา จากการศึกษายังพบว่าการให้ยาเฉพาะที่ยังได้รับอิทธิพลจากขนาดของไลโปโซมด้วย24 การปล่อยยาในหลอดทดลองดำเนินการโดยใช้เมมเบรนสำหรับการฟอกไต การศึกษาการปลดปล่อยเจลไลโปโซมในหลอดทดลอง =ในหลอดทดลอง แสดงผลการปลดปล่อยอย่างต่อเนื่องนานถึง 12 ชั่วโมง เมื่อเทียบกับ 7-8 ชั่วโมงของเจลทั่วไปในกราฟที่ 2

บทสรุป

สารสกัดเมล็ดกาแฟอาราบิก้าสีเขียวถูกคัดกรองสำหรับปริมาณฟีนอลิกทั้งหมด การหาปริมาณของกรดคลอโรจีนิก และการทดสอบสารต้านอนุมูลอิสระ จากผลการศึกษาที่ได้รับจากการศึกษาเหล่านี้ 25% ของสารสกัดเมทานอลได้รับเลือกให้รวมเข้ากับไลโปโซม เนื่องจากได้แสดงปริมาณฟีนอลิกสูงสุด ปริมาณกรดคลอโรจีนิกที่มากขึ้น และกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระที่ดีขึ้น ก่อนผสมสารสกัดเข้าไปในไลโปโซม ตรวจคัดกรอง MTT และการทดสอบแอนติอีลาสเทส จากการทดสอบ MT สารสกัดไม่มีศักยภาพในการเกิดพิษต่อเซลล์ และจากการทดสอบแอนตีอีลาสเทส สารสกัดมีฤทธิ์ต้านอีลาสเทส ดังนั้นสารสกัดนี้จึงสามารถนำไปใช้สร้างไลโปโซมต่อต้านวัยได้ ถุง multilamellar ถูกเตรียมโดยใช้วิธีไฮเดรชั่นแบบฟิล์มบาง ไลโปโซมที่เตรียมไว้มีประสิทธิภาพการห่อหุ้มที่ดีและมีเสถียรภาพทางกายภาพที่ดีขึ้น สารแขวนลอยไลโปโซมที่มีสารสกัดเป็นหลักถูกสร้างเป็นเจลไลโปโซม จากการศึกษาการปลดปล่อยยาในหลอดทดลอง เจล liposomal แสดงผลการปลดปล่อยเป็นเวลานานถึง 12 ชั่วโมงเมื่อเทียบกับเจลทั่วไป ดังนั้น ไลโปโซมที่สกัดจากเมล็ดกาแฟเขียวจึงถือได้ว่าเป็นพาหะที่มีประสิทธิภาพสำหรับการนำส่งยาเฉพาะที่ที่มีศักยภาพในการต่อต้านวัย

การรับทราบ

ผู้เขียนรู้สึกขอบคุณ Stellixir Biotechechnology, Bengaluru และ Karnataka สำหรับความช่วยเหลือในการทำการทดสอบ MTT และการศึกษาการทดสอบ Anti-elastase เรายังขอขอบคุณโซลูชันการทดสอบ Sprint มุมไบสำหรับการถ่ายภาพ TEM และวิทยาลัยเภสัชศาสตร์ Dr.Bhanuben Nanavati ของ SVKM สำหรับวิทยาลัยของเรา ให้สิ่งอำนวยความสะดวกที่ดีที่สุดในการดำเนินการศึกษานี้

ขัดผลประโยชน์

ผู้เขียนประกาศไม่มีความขัดแย้งทางผลประโยชน์

ตัวย่อ:

TPC: ปริมาณฟีนอลิกทั้งหมด; DPPH:2,2-ไดฟีนิล -1-พิคริลไฮดราซิล; GAE: เทียบเท่ากรด Gallic; GC: กาแฟสีเขียว; GCB: เมล็ดกาแฟสีเขียว; ELA-2 (แอนติบอดีต่อต้าน Elastase ของมนุษย์ที่คอนจูเกตเมาส์):นิวโทรฟิลอีลาสเทส; EGCG: Epigallocatechin gallate;PC: Phosphatidylcholine;CH:คอเลสเตอรอล;RBF:ขวดก้นกลม; TEM: กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน; MTT: 3-(4,5-diemthylthiazol-2-อิล)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide; PDI: Polydispersibility Index;IC": Half-Maximal Inhibitory Concentration.

บทความนี้คัดลอกจาก Desai และ Mallya.: การพัฒนา Green Coffee Beans Extract โหลด Anti-aging Liposomal Gel