Contact:jerry.he@wecistanche.com

หงปิงหลิว1

ได้รับ: 17 พฤศจิกายน 2019 / ยอมรับ: 10 พฤศจิกายน 2020 / เผยแพร่ออนไลน์: 4 มกราคม 2021

©ผู้เขียน (s) 2020

Cistanche สามารถปรับปรุงการทํางานของไตได้

นามธรรม

Histone deacetylases (HDACs) เป็นสารควบคุม epigenetic ที่สําคัญซึ่งเป็นสื่อกลางในการกําจัดความเสื่อมของโปรตีนทั้งฮิสโตนและโปรตีนที่ไม่ใช่ฮิสโตน HDACs โดยเฉพาะ HDACs คลาส I มีการแสดงออกอย่างมากในการพัฒนาไตและอยู่ภายใต้การควบคุมพัฒนาการ HDACs มีบทบาทสําคัญในไตการก่อตัวโดยเฉพาะอย่างยิ่งการบํารุงรักษาต้นกําเนิดของ nephron และความแตกต่าง หลักฐานหลายบรรทัดสนับสนุนบทบาทที่สําคัญของ HDACs ในการพัฒนาและความก้าวหน้าของต่างๆไตโรค สารยับยั้ง HDAC (HDACis) มีประสิทธิภาพมากในการป้องกันและรักษาโรคไต (รวมถึงไตมะเร็ง) ความเข้าใจที่ดีขึ้นเกี่ยวกับกลไกระดับโมเลกุลที่เป็นรากฐานของบทบาทของ HDACs ในการเกิดโรคและความก้าวหน้าของโรคไตมีแนวโน้มที่จะช่วยได้มากในการพัฒนาสารยับยั้ง HDAC แบบเลือกที่มีประสิทธิภาพมากขึ้นและเป็นพิษน้อยลงและการรักษาแบบผสมผสาน

คําสําคัญ: ไฮสโตนดีอะซิติเลส · สารยับยั้งไฮสโตนดีอะซิติเลส · โรคไต มะเร็งไต

แนะ นำ

Epigenetics หมายถึงการศึกษาการเปลี่ยนแปลงทางพันธุกรรมในการแสดงออกของยีนและการควบคุมที่เป็นอิสระจากลําดับดีเอ็นเอ ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมาได้เห็นความตระหนักที่เกิดขึ้นใหม่เกี่ยวกับบทบาทสําคัญของกลไก epigenetic ในด้านสุขภาพและโรค [1] ในระหว่างการพัฒนา modifcations epigenetic เช่น DNA methylation, histone acetylation และ histone meth- ylation จะถูกตั้งค่าในโครมาตินเพื่อกําหนดการเขียนโปรแกรมจีโนมในเซลล์เฉพาะโดยการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างโครมาตินและทําให้สามารถเข้าถึง DNA ไปยังเครื่องจักรถอดความได้ การหยุดชะงักของ modifcations epigenetic เหล่านี้ที่เกิดจากการสัมผัสสิ่งแวดล้อม (เช่นอาหารสารพิษยาเสพติดการติดเชื้อไวรัส) สามารถนําไปสู่ dysregulation ของการทํางานของยีนโดยไม่เปลี่ยนแปลงลําดับดีเอ็นเอตัวเอง [1–3] เนื่องจากความผิดปกติของ epigenetic ขึ้นอยู่กับการทํางานร่วมกันระหว่างยีนและสิ่งแวดล้อมพวกมันมักจะแปรผันฟีโนไทป์ซึ่งเข้ากันได้ดีกับปรากฏการณ์ฟีโนไทป์ที่กว้าง - trum ของความผิดปกติ แต่กําเนิดของไตและทางเดินปัสสาวะ (CAKUT) และโรคไตอีกโรคหนึ่ง [4–9] เพราะฉะนั้น

* หงปิงหลิว

hliu8@tulane.edu

ภาควิชากุมารเวชศาสตร์และศูนย์ความเป็นเลิศด้านความดันโลหิตสูงทูเลนและไต, คณะแพทยศาสตร์มหาวิทยาลัยทูเลน, SL-37, 1430 Tulane Avenue, New Orleans,

LA 70112, สหรัฐอเมริกา

การทําความเข้าใจพื้นฐาน epigenetic ของการพัฒนาไตอาจให้ข้อมูลเชิงลึกใหม่ ๆ เกี่ยวกับกลไกทางพยาธิวิทยา - nisms ของไตและหวังว่าจะเปิดช่องทางใหม่ในการรักษาหรือป้องกัน CAKUT ผ่านตัวแทนยาที่กําหนดเป้าหมาย modifers epigenetic ยา epigenetic ดังกล่าวมีอยู่แล้วในการใช้งานทางคลินิกหรืออยู่ระหว่างการตรวจสอบสําหรับการรักษาโรคมะเร็งเช่นเดียวกับโรคอื่น ๆ [10]

อะซิติเลชั่น Histone นําไปสู่การเพิ่มโควาเลนต์ของกลุ่มอะซิทิลลงในไลซีน การเพิ่มดังกล่าวส่งผลให้โครมาตินแบบเปิดในท้องถิ่นซึ่งเป็นเครื่องหมายของการถอดความที่ใช้งานอยู่โดยการวางตัวเป็นกลางโดยการปรับประจุบวกสุทธิของหางฮิสโตนและลดการจับกับดีเอ็นเอที่มีประจุลบ ในทางตรงกันข้ามฮิสโตนที่ล่าช้าของ deacety มีปฏิสัมพันธ์อย่างมากกับ DNA และส่งผลให้โครมาตินปิดในท้องถิ่นซึ่งเป็นเครื่องหมายของการถอดความที่ไม่ได้ใช้งาน Diferen- tial acetylation ของโปรโมเตอร์และฮิสโตนเสริมมีบทบาทด้านกฎระเบียบที่สําคัญมากในกระบวนการพัฒนาการเพิ่มจํานวนเซลล์และการแบ่งแยก Aberrant acetyla- tion หรือ deacetylation นําไปสู่ความผิดปกติที่หลากหลายเช่น leuke- mia, มะเร็งเยื่อบุผิว, กลุ่มอาการ X ที่เปราะบางและกลุ่มอาการ Rubinstein- Taybi [11] Histone deacetylases (HDACs) เป็นตระกูลเอนไซม์ขนาดใหญ่ที่ได้รับการอนุรักษ์วิวัฒนาการซึ่งเร่งการกําจัดกลุ่มอะซิทิลออกจากหางฮิสโตน การกระทําของ HDACs ถูกต่อต้านโดย histone acetyltrans- ferases (HATs) ซึ่งอะซิติเลตหางฮิสโตน จนถึงปัจจุบัน HDACs ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม 18 ตัวได้รับการระบุตัวตน ตามการวิเคราะห์ phy- logenetic และหน้าที่ของพวกเขา HDACs แบ่งออกเป็นสี่คลาส: คลาส 1 (Hdac1-3 และ 8), คลาส II (Hdac4-7,9–10), คลาส III (Sir2/Sirt 1–7) และคลาส IV (Hdac11) คลาส I, II และ IV ต้องการสังกะสีสําหรับกิจกรรมเร่งปฏิกิริยาในขณะที่สมาชิกคลาส III พึ่งพา NAD สําหรับกิจกรรม ในหมู่พวกเขา HDACs คลาส I ได้รับการศึกษาอย่างกว้างขวางและมีลักษณะนิสัย ระบุว่า acetylation histone มักเกี่ยวข้องกับการถอดความที่ใช้งานอยู่ HDACs จึงถูกมองว่าเป็นผู้ปราบปรามร่วมการถอดความทั่วไป อย่างไรก็ตาม ในภายหลังเป็นที่ชัดเจนว่า HDACs ควบคุมการแสดงออกของยีนด้วยวิธีที่เลือกอย่างสูงและแสดงทั้งการปราบปรามและ acti- vating efects [12] เนื่องจากขาดกิจกรรมที่มีผลผูกพันดีเอ็นเอภายใน HDACs จึงไม่สามารถทํางานคนเดียวเพื่อทําหน้าที่ในกระบวนการทางชีวภาพพื้นฐานต่างๆ ได้ [12]

เป็นที่ชัดเจนว่า HDACs สามารถทําหน้าที่บนพื้นผิวจํานวนมากนอกเหนือจาก histones มันเป็น difcult เพื่อตรวจสอบ specifcity พื้นผิว histone ของ HDACs ที่แตกต่างกัน เหตุผลหลักคือ HDACs บริสุทธิ์จํานวนมากมีกิจกรรม deacetylation ต่ํามากและความซ้ําซ้อนในการทํางานของ difer- ent HDACs [13] การสูญเสียหรือการน็อคดาวน์ของสมาชิกคนหนึ่งของ HDACs อาจไม่เพียงพอที่จะเปลี่ยนอะซิติเลชั่นฮิสโตนโดยรวม นอกจากนี้ HDACs ยังได้รับการคัดเลือกให้กําหนดเป้าหมายยีนผ่านการเชื่อมโยงกับคอมเพล็กซ์การถอดความ (เช่น Sin3 complex, NuRD complex และ Co-REST complex) [14] ดังนั้นความจําเพาะของ HDACs ในการควบคุมยีนจึงขึ้นอยู่กับโปรตีนพันธมิตรที่พวกเขาเชื่อมโยงภายในเซลล์ชนิดที่แตกต่างกัน แม้ว่าสมาชิกสามคนของคลาส I HDACs (HDAC1, HDAC2 และ HDAC3) โดยทั่วไปจะมีลําดับ fea- tures ที่คล้ายคลึงกัน แต่การศึกษาบางชิ้นแสดงให้เห็นว่า HDAC3 (และบางทีอาจเป็น HDACs คลาส I ทั้งหมด) มีความจําเพาะของพื้นผิวที่แตกต่างกัน [15, 16] เป็นไปได้มากว่า HDAC แต่ละตัวจะมีเป้าหมาย specifc profle ในพื้นผิว cer- tain ซึ่งต้องมี inves- tigation ที่ครอบคลุมมากขึ้น เช่นเดียวกับเอนไซม์เกือบทั้งหมด HDACs ได้รับการควบคุมการทํางานสําหรับกิจกรรมของพวกเขา ในบรรดากลไกการควบคุมจํานวนมากในระดับที่แตกต่างกันปฏิสัมพันธ์ระหว่างโปรตีนกับโปรตีนและโมดิเฟเคชันหลังการแปล (PTMs) เป็นกลไกสองอย่างที่ fned ดี HDACs จํานวนมากไม่ทํางานเพียงอย่างเดียว แต่ทําหน้าที่เป็นส่วนประกอบในคอมเพล็กซ์ multiprotein ซึ่งช่วยให้ HDAC แต่ละตัวสามารถออกแรงเร่งปฏิกิริยาในลักษณะที่มีประสิทธิภาพและเฉพาะเจาะจงมากขึ้น [17] เป็นเรื่องปกติมากที่ HDACs จะทํางานผ่านการก่อตัวของโปรตีนเชิงซ้อนขนาดใหญ่ การวิเคราะห์ทางชีวเคมีอย่างกว้างขวางแสดงให้เห็นว่า HDAC1 และ HDAC2 มีอยู่ร่วมกันในคอมเพล็กซ์การกดขี่ร่วมแบบมัลติโปรตีนที่สําคัญสามประการ: Sin3, NuRD (นิวคลีโอโซม remod- eling และ deacetylation) และ CoREST (ผู้ปราบปรามร่วมสําหรับปัจจัยการถอดความแบบแยกเสียงขององค์ประกอบ-1-silencing) [14] HDACs ไม่ได้เป็นเพียงโมดิเฟอร์โปรตีนเท่านั้น แต่ยังสามารถเป็นเรื่องของ PTMs ต่างๆ ฟอสโฟรีเลชั่นเป็น modifcation แบบสตั๊ดที่กว้างขวางที่สุด HDAC1 สามารถเป็นฟอสโฟรีเลทโดยเคซีนไคเนส (CK2) และไคเนส PKA ที่ขึ้นกับ cAMP [18] ฟอส- โฟรีเลชั่นที่ทั้งซีรีน (S) 421 และ S423 เป็นสิ่งจําเป็นสําหรับกิจกรรมของเอนไซม์ของ HDAC1 และการกลายพันธุ์ของทั้งสองไซต์นี้ช่วยลดกิจกรรมและความซับซ้อนสําหรับ - mation CK2 ยังสามารถฟอสฟอริเลต HDAC2 บนไซต์ 422 และ 424 (คําพ้องเสียงถึง S421 และ S423 ของHDAC1) และบน S394 ไซต์ฟอสโฟรีเลชั่นหลักของ HDAC2 [19] เรายังพบว่ามีฟอสโฟรีล S394- ated Hdac2 ในการพัฒนาไตผ่านการวิเคราะห์มวลสเปกโตรเมตรี (Liu et al., ไม่ได้ตีพิมพ์) นอกจากนี้ ฟอสฟอรีลา- tion ของ HDAC1 และ HDAC2 ยังถูกควบคุมโดยโปรตีนฟอสฟาเทส PP1 [20] การศึกษายังเปิดเผยว่า PP2A ควบคุมการตอบสนองแบบ hypertrophic โดย dephospho- rylating S394 ของ HDAC2 ในหัวใจมนุษย์ [21] Collec- tively, HDACs เป็นโมดูเลเตอร์ epigenetic ที่สําคัญและมีบทบาทในกระบวนการทางชีวภาพที่หลากหลาย กิจกรรมของพวกเขาถูกควบคุมโดยกลไกหลายอย่างอย่างแน่นหนา เช่น ปฏิสัมพันธ์ระหว่างโปร- ทีน-โปรตีน และ PTMs การก่อตัวของคอมเพล็กซ์ mul- tiprotein ไม่เพียง แต่กําหนดกิจกรรมของ HDACs เท่านั้น แต่ยังรวมถึงความจําเพาะของสารตั้งต้นด้วย การเปลี่ยนแปลงระดับโมเลกุลโดย HDACs มีแนวโน้มที่จะออกแรงผลกระทบที่มีความหมายต่อสุขภาพของมนุษย์และโรค ในการตรวจสอบนี้เราต้องการอธิบายบทบาทของ HDACs ในไตการพัฒนาและโรค

บทบาทของ HDACs ในการพัฒนาไต

การแสดงออกที่แพร่หลายและกิจกรรม deacetylase สูงของคลาส I HDAC นั้นสอดคล้องกับความหมายการทํางานของพวกเขา หนูน็อคเอาท์ทั่วไป HDAC1 เป็นอันตรายถึงชีวิตในตัวอ่อน ส่งผลให้เกิดข้อบกพร่องในการแพร่กระจายอย่างรุนแรงและการชะลอการเจริญเติบโต [22] น่าแปลกที่การเคาะแบบมีเงื่อนไขของ HDAC1 นั้นได้รับการยอมรับอย่างดีในเนื้อเยื่อหลายชิ้นและหนูก็ทํางานได้เป็นไปได้มากเนื่องจากความซ้ําซ้อนในการทํางานของ HDAC1 และ HDAC2 ในการพัฒนาในภายหลังและชีวิตหลังคลอด [22] การลบ HDAC 1 และ HDAC2 ร่วมกันเป็นอันตรายต่อเนื้อเยื่อทั้งหมดที่ตรวจ [22] นอกจากนี้หนู HDAC2-null จะตายหลังคลอดภายใน 24 ชั่วโมงเนื่องจากความผิดปกติของหัวใจ [22] ในไต, HDACs เป็นที่แพร่หลายและแสดงออกอย่างสูง การวิเคราะห์ RT-PCR บ่งชี้ว่า HDAC1, 2, 3, 4, 7, 9 อยู่ภายใต้การควบคุมพัฒนาการและลดลงอย่างมีความหมายในระหว่างการสุกจากตัวอ่อนไปจนถึงทารกแรกเกิดและชีวิตในวัยผู้ใหญ่ [23] การวิเคราะห์ blot ตะวันตกของไตไลเสตนิวเคลียร์ยืนยันเพิ่มเติมว่าโปรตีน Hdac1-3 มีความอุดมสมบูรณ์สูงในตัวอ่อนไตและมีการควบคุมลงหลังคลอด [23] การสร้างภูมิคุ้มกันพบว่า Hdac 1 และ 2 มีการแสดงออกอย่างมากในประชากรที่แตกต่างกันของไตที่กําลังพัฒนาที่ไตของหนูแรกเกิด (P0) รวมถึง mesenchyme metanephric ที่ไม่ได้รับการผูกมัด, ตาท่อไตที่แตกแขนงและสโตรมา (รูปที่ 1) Hdac1 และ 2 มีการทับซ้อนกันและเฉพาะในนิวเคลียร์ที่แสดงในการพัฒนาและไต P21 (รูปที่ 1) การแสดงออกสูงของ Hdac3 ยังถูกตรวจพบในการพัฒนาไตรวมถึงโพโพไซต์ ในทางตรงกันข้าม Hdac 5, 6 และ 8 จะแสดงออกมาเป็นส่วนประกอบ การเพาะเลี้ยงหลอดเลือดขนาดเล็กของไตเป็นการแสดงออกถึง Hdac 7, 8 และ 9 [24] เรียกรวมกันว่ายีน HDAC คลาส I และคลาส II ได้รับการควบคุมที่แตกต่างกันในระหว่างไตพัฒนาการ การแสดงออกของ HDACs ทั้งหมดในไตได้รับการบันทึกไว้อย่างดีจากการทบทวนล่าสุด [25]

รูปที่ 1 การแสดงออกสูงและการแปลนิวเคลียร์ของ Hdac1 และ Hdac2 ในไตของหนูเกิดใหม่ (P0) (a, b) และ P21 (c, d) ตามลําดับ

อย่างไรก็ตาม การกระจาย HDACs ที่จํากัดเชิงพื้นที่และชั่วคราวไม่ได้เปลี่ยนระดับอะซิติเลชั่นทั่วโลกของฮิสโตน H3 และ H4 ซึ่งบ่งบอกถึงการมีเพศสัมพันธ์ที่แน่นหนาของฟังก์ชัน HAT และ HDAC ในระหว่างการพัฒนาปกติ [23]

ในบรรดาคลาส I HDACs, HDAC1 และ HDAC2 มี evo- เกี่ยวข้องกันอย่างน่าสังเวชและทั้งสองมีความเกลียดชังมาก - แสดงออกอย่างตรงไปตรงมาในเนื้อเยื่อจํานวนมาก HDAC1 และ HDAC2 สามารถสร้างโฮโมหรือเฮเทอโรไดเมอร์และพบได้ร่วมกันในคอมเพล็กซ์โปรตีนนิวเคลียร์เกือบทั้งหมด รวมถึงคอมเพล็กซ์ผู้ปราบปรามร่วมที่โดดเด่นสามแห่ง ได้แก่ Sin3, NuRD และ Co-REST [14, 26] โดยการลบแบบมีเงื่อนไขของ Hdac1 และ Hdac2 ในเชื้อสาย ureteric bud (UB) ที่มี Hoxb7-Cre การศึกษาพบว่าหนูที่มีอัลลีลที่ถูกลบไม่เกินสามตัวของ Hdac1 และ Hdac2 ไม่มีสัญญาณ abnor- malities ในการพัฒนาไต [27] หนูเหล่านี้สามารถเอาชนะความเป็นผู้ใหญ่ได้โดยไม่มีความผิดปกติใด ๆ ในการเจริญเติบโตหรือพัฒนาการ ในทางตรงกันข้ามการลบอัลลีลทั้งสี่ของ Hdac1 และ Hdac2 พร้อมกันจะส่งผลให้เกิดภาวะร้ายแรงหลังคลอดในระยะเริ่มต้นเมื่ออายุ 2-4 สัปดาห์ [27] การไตเนื้อเยื่อของหนูที่น่าพิศวงที่ P0 แสดงให้เห็นว่าไม่มีโซน nephrogenic การขาดรูปแบบเยื่อหุ้มสมอง - ไขกระดูกและการก่อตัวของซีสต์เยื่อบุผิวหลาย ple ซึ่งบ่งบอกถึงบทบาทที่สําคัญและความซ้ําซ้อนในการทํางานของ Hdac1 และ Hdac2 ในไตการก่อตัวและหน้าที่ [27] การศึกษายังแสดงให้เห็นว่าการสูญเสีย Hdac1 และ Hdac2 ในเยื่อบุผิว UB นําไปสู่การทําเครื่องหมาย hypera- cetylation ของโปรตีนยับยั้งเนื้องอก p53 เพื่อเพิ่มความเสถียรของ p53 และกิจกรรมการถอดความ [27] แม้ว่า p53 จะเป็นตัวยับยั้งเนื้องอกที่สําคัญมาก แต่กิจกรรม p53 ที่ไม่มีข้อจํากัดนั้นเป็นอันตรายต่อการก่อตัวของไต ซึ่งส่วนใหญ่เกิดจากการเสียชีวิตของเซลล์ inap- propriate หรือข้อบกพร่องในการแพร่กระจาย [28]

การไตมีเซลล์พิเศษหลายประเภทที่มีฟังก์ชั่นทางสรีรวิทยาของอําเภอไตการก่อตัวใน mam- mals เริ่มต้นโดยปฏิสัมพันธ์ซึ่งกันและกันระหว่างสองประเภท tis- sues, ตาท่อไตและ metanephric mesenchyme [5, 29–31] Six2 + cap mesenchyme เป็นเซลล์ต้นกําเนิดของเนฟรอน (NPCs) ที่ต่ออายุตัวเองได้หลายเซลล์ซึ่งก่อให้เกิดเยื่อบุผิวเนฟรอนที่ใช้งานได้ [30] เพื่อให้ได้ข้อมูลเชิงลึกเกี่ยวกับบทบาทของ HDAC1/2 ในการบํารุงรักษา NPC และการแยกส่วน เราจึงลบ Hdac1 และ Hdac2 ด้วยเมาส์ Six2eGFPCre (Six2TGC) อย่างมีเงื่อนไข [30] หนูที่มี NPC- specifc การลบสองครั้งของ HDAC1 และ HDAC2 (อัลลีลทั้งสี่ตัว) เกิดในอัตราส่วน Mendelian ปกติ แต่เสียชีวิตไม่นานหลังคลอด [4] ไตกลายพันธุ์ในวันหลังคลอด (P) 0 มีขนาดเล็กไตขนาด, ไม่มีโซน nephrogenic,ขาด nephrons ตั้งไข่และ glomeruli, และการก่อตัวของซีสต์หลาย [4]. เช่นเดียวกับการลบ Hdac1 และ Hdac2 ในเชื้อสาย UB อัลลีลหนึ่งอัลลีลของ HDAC1 หรือ HDAC2 นั้นมีประสิทธิภาพเพื่อให้แน่ใจว่าไต [4] ผลการวิจัยของเราแสดงให้เห็นว่า histone deacetylases 1 และ 2 (HDAC1/2) มีความจําเป็นในการควบคุมโปรแกรมการถอดความของต้นกําเนิดเนฟรอนและถุงไต [4] HDAC1/2 มีบทบาทสองอย่างเพื่อปรับสมดุลการต่ออายุตนเองและการแบ่งแยกของ NPC ในช่วง nephro- genesis (รูปที่ 2): ในแง่หนึ่ง HDAC1/2 จําเป็นสําหรับการแสดงออกของยีนเครื่องหมายทั้งหมด (เช่น Six2, Sall1 และ Osr1) ใน NPC และการต่ออายุตัวเองของเซลล์เหล่านี้ ในทางกลับกันพวกเขายังมีความสําคัญในการปราบปรามการแสดงออกของยีนเป้าหมาย Wnt ตามบัญญัติและป้องกันไม่ให้ NPC จากการแยกตัวก่อนครบกําหนด การวิเคราะห์ทางชีวเคมีและ ChIP ของเรายังเปิดเผยว่า HDAC1 และ HDAC2 ทําหน้าที่ระหว่าง Six2, Osr1 และ Sall1 ซึ่งเป็นเครือข่ายของหน่วยงานกํากับดูแลการถอดความที่รักษาสมดุลของการแพร่กระจายของ NPC และ diferentiation [4] Six2 เป็นปัจจัยการถอดความหลักในไตที่กําลังพัฒนาและมีบทบาทสําคัญในการรักษากลุ่มการทํางานของการต่ออายุตนเองโดยการปราบปราม NPC แบบคู่และผลักดันการต่ออายุตนเอง Six2 และ HDAC1/2 เป็นการแสดงออกร่วมกันใน NPC ที่ไม่ได้อ้างอิงและทั้งหมดจําเป็นสําหรับการบํารุงรักษาเซลล์ต้นกําเนิดของเนฟรอนและการป้องกันการ diferentiation ก่อนวัยอันควร [4] เราให้เหตุผลว่า HDAC1 / 2 เป็นสิ่งจําเป็นสําหรับ Six2 ′s ฟังก์ชั่นคู่ได้อย่างแม่นยําในการควบคุมการต่ออายุตัวเองและ diferentiation ของ NPCs. HDACs สามารถ deacetylate ไม่เพียง แต่โปรตีน histone แต่ยังไม่ใช่โปรตีน histone [12]. การทํานายในซิลิโกโดยโปรแกรมคอมพิวเตอร์ที่ใช้การเพิ่มคุณค่าของชุด acetylation (ASEB) [32] ระบุไซต์ที่มีศักยภาพหลายแห่งที่รับผิดชอบในการ acetylation Six2 โดย p300 และ deacetylation โดย Hdac1/2 (ตารางที่ 1) ในหมู่พวกเขาไลซีน (K) 46, K52 และ K71 ตั้งอยู่ที่โดเมน Six (1-124) ของ Six2 และ K138 ตั้งอยู่ที่ homeodomain ของ Six2 [33] การศึกษาแสดงให้เห็นว่าโดเมน Six มีแนวโน้มที่จะเป็นนิวเคลียสที่แข็งแกร่งกว่ามาก

การสะสมและโปรตีนที่ประกอบด้วยโดเมนหกและ homeodomain พบว่าอยู่ที่นิวเคลียสเท่านั้น [33] ดังนั้น acetylation ของไซต์ที่มีศักยภาพเหล่านี้จะเกี่ยวข้องกับการแปลนิวเคลียสของโปรตีน Six2 และ / หรือกิจกรรมการถอดความ เมื่อเร็ว ๆ นี้การวิเคราะห์ทั้งจีโนมของเราแสดงให้เห็นว่า Hdac1 และ Six2 co- ครอบครองบริเวณตัวเพิ่มของยีนต่ออายุ NPC และการผูกของ Hdac1 บ่งบอกถึงโครมาตินแบบเปิดที่บริเวณโปรมอร์เตอร์ของยีนที่ถอดความอย่างแข็งขันใน NPC [34] วิธีที่ HDAC1/2 ควบคุมฟังก์ชัน Six2 สําหรับไตการพัฒนาแน่นอนใบสําคัญแสดงสิทธิการสอบสวนต่อไป

สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมไตพัฒนาจากปฏิสัมพันธ์ซึ่งกันและกันระหว่างเมเซนไคม์ metanephric และตาท่อไต สโตรมาซึ่งเป็นเชื้อสายที่สามซึ่งเติมช่องว่างคั่นระหว่างหน้านั้นมาจากบรรพบุรุษที่แตกต่างกันซึ่งแสดงปัจจัยการถอดความ Foxd1 [35] การศึกษาแสดงให้เห็นว่า Foxd1 ที่แสดง stroma เยื่อหุ้มสมองเป็นประชากรต้นกําเนิดที่ต่ออายุตัวเองหลายอํานาจซึ่งจะก่อให้เกิดเซลล์คั่นระหว่างหน้าเยื่อหุ้มสมองและไขกระดูกเซลล์ mesangial และ pericytes ของไต[35]. HDAC1 และ HDAC2 ยังแสดงออกได้สูงกว่าในสโตรมาของการพัฒนาไต[4, 23, 27]. เพื่อตรวจสอบบทบาทของ HDACs สองตัวในเชื้อสายสโตรมาเรากําลังใช้โมเดลเมาส์เพื่อลบ HDAC1 และ HDAC2 แบบมีเงื่อนไขด้วย Foxd1-Cre [36] ของเรา

รูปที่ 2 HDAC1/2 มีบทบาทสองอย่างเพื่อสร้างสมดุลระหว่างการต่ออายุตนเองและการแบ่งแยก NPC ระหว่างการสร้างไต

ผลเบื้องต้นแสดงให้เห็นว่า specifc HDAC1/2 dele- tion ในบรรพบุรุษ stromal นําไปสู่การขยายตัวที่ผิดปกติของต้นกําเนิด nephron (รูปที่ 3) ฟีโนไทป์ที่คล้ายกันที่พบในการลบ Sall1 ที่ขับเคลื่อนด้วย Foxd1-Cre หรือการระเหยของสโตรมาไต [37, 38] ลักษณะเพิ่มเติมเกี่ยวกับวิธีที่ stromal HDAC1/2 เพื่อ จํากัด และควบคุม nephron ที่ขยายตัวมากเกินไปจะช่วยพัฒนาความเข้าใจของเราที่มีต่อ epi- การควบคุมทางพันธุกรรมของการก่อตัวของไตและการพูดคุยข้ามระหว่าง stromal และ nephron

HDACs และพังผืดคั่นระหว่างหน้าของไต

โรคไตเรื้อรัง (CKD) เป็นปัญหาสาธารณสุขที่เพิ่มมากขึ้นและถูกทําเครื่องหมายด้วยการลดลงอย่างค่อยเป็นค่อยไปและไม่สามารถย้อนกลับได้ในการทํางานของไต หลอดลมคั่นระหว่างหน้าของไตเป็นจุดเด่นของโรคไตวายเรื้อรัง ไตคั่นระหว่างหน้า fbro- sis มีลักษณะการฝ่อท่อไต, การสะสมที่ผิดปกติของเมทริกซ์นอกเซลล์ (ECM) และการขยายตัวของ progres- sive ของ fbroblasts กลไกที่ทําให้เกิดโรคพื้นฐานมีความซับซ้อนและหลากหลาย การสะสม evi- dence ได้แสดงให้เห็นว่า HDACs มีส่วนร่วมใน pathog- enies ของ fbrosis คั่นระหว่างไตและการยับยั้ง HDAC ออกแรง efects ต่อต้าน fbrotic ส่วนใหญ่ผ่าน mecha- nisms ต่อไปนี้: (1) การยับยั้งการส่งสัญญาณ TGF-β pro-fbrotic, (2) การป้องกันการตายของเซลล์ epithelia ท่อและ (3) เพิ่มการแสดงออกของโปรตีน morphogenesis ของกระดูก 7 (BMP7) [39] การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเจริญเติบโตเบต้า (TGF-β) เป็นสมาชิกของปัจจัยการเจริญเติบโตที่เปลี่ยนแปลงซึ่งเป็นสิ่งจําเป็นในการควบคุมกระบวนการทางชีวภาพต่างๆ ในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมมีไอโซฟอร์มสามแบบของ TGF-β ได้รับการเลี้ยงดูแบบ identi- ในไต: TGF-β1, TGF-β2 และ TGF-β3 ในหมู่พวกเขา TGF-β1 ออกแรงกิจกรรมทางชีวภาพผ่านเส้นทาง Smad และไม่ใช่ Smad และบทบาทในการพังผืดของไตเป็นลักษณะที่ดีที่สุด (Yu et al. 2003; Yu et al. 2003; Yu et al. 2003; Yu et al. 2003; Yu et al. 2003; Yu et al. 2003; Yu et al. 2003; Yu et al. 2003; Yu et al. 2003; Yu et al. 2003; Yu et al. 2003; Yu et al. 2003; Yu Meng et al. 2016). การเปิดใช้งานที่ผิดปกติของ TGF-β1 ในไตทําให้เกิดการพังผืดระหว่าง stitial โดยการส่งเสริมการเพิ่มจํานวน fbroblast และการสะสมของเมทริกซ์นอกเซลล์ที่ผิดปกติ [40] การศึกษาก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่าการรักษาด้วย trichostatin A (TSA) ซึ่งเป็นสารยับยั้ง HDAC แบบแพน (HDACi) สําหรับทั้งคลาส I และคลาส II HDACs ช่วยลดการเกิดพังผืดของไตในแบบจําลองเมาส์อุดตันท่อไตข้างเดียว (UUO) [41] TSA treat- ment ยังหมายถึง fbroblasts ที่ไม่ได้ใช้งาน นอกจากนี้ การปิดเสียงของ HDAC1 หรือ HDAC2 ยังปิดกั้นการแพร่กระจายของฟโบรบลาสต์ของไตโดยการลดฟอสโฟรีเลชั่นของ STAT3 (sig- nal transducer และ activator of transcription 3) โมเลกุลส่งสัญญาณที่เกี่ยวข้องกับการแพร่กระจายของการระเบิดของไตและการพัฒนาของการแข็งตัวของไต [42] การศึกษาเพิ่มเติมแสดงให้เห็นว่าการรักษาด้วย TSA ยังกระตุ้นการแสดงออกของ BMP-7 และลดทอนเชื้อโรค - esis ของการบาดเจ็บที่ไต [43, 44] เนื่องจาก BMP-7 ก่อให้เกิด protec- tion กับ TGF-β-mediated renal fbrosis การฟื้นฟูการแสดงออกของ BMP-7 เป็นอีกกลไกสําคัญที่การยับยั้ง HDAC ป้องกัน CKD ที่ก้าวหน้า [44] นอกจากนี้การให้ MS-275 หรือ Fk228 (สารยับยั้งแบบเลือกได้ของ HDACs คลาส I) ยังช่วยลดการลุกลามของการเกิดพังผืดของไตโดยการยับยั้งการกระตุ้นและการแพร่กระจายของ fbroblast ของไตซึ่งชี้ให้เห็นว่า HDACs คลาส I มีบทบาทสําคัญในการแข็งตัวของไต [45, 46]

โดยรวมแล้ว HDACs มีบทบาทสําคัญในการกระตุ้นการทํางานของไต fbro- blast และการเกิดพังผืดคั่นระหว่างหน้าของไตและการใช้สารยับยั้ง HDACs (โดยเฉพาะ HDACs คลาส I) จึงอาจให้การรักษาด้วย efective เพื่อบรรเทาและรักษาพังผืดของไต

HDACs และผู้ป่วยโรคเบาหวานไตโรค

โรคเบาหวานมีมากกว่า 451 ล้านคนในโลกและโรคไตโรคเบาหวาน (DN,ไตโรคในโรคเบาหวาน) เป็นสาเหตุที่พบบ่อยที่สุดของโรคไตเรื้อรัง ขั้นตอนสุดท้ายไตdis-ease (ESKD) เป็นขั้นตอนสุดท้ายของโรคไตเรื้อรัง นี่คือเวลาที่ไตทั้งสองไม่สามารถรองรับความต้องการของร่างกายในชีวิตประจําวันได้อีกต่อไป สาเหตุที่พบบ่อยที่สุดของ ESRD ในสหรัฐอเมริกาคือโรคเบาหวานและความดันโลหิตสูง [47] Progres- การสะสมของ ECM ในเมซังเจียมไตและ tubulointerstitium เป็นจุดเด่นของ DN การศึกษาพรีคลินิกจํานวนหนึ่งได้แสดงให้เห็นถึงประสิทธิภาพของการยับยั้ง HDAC ในรูปแบบการทดลองของโรคโรคเบาหวานเด็ก -- ney [48, 49] การศึกษาระยะแรกรายงานการเพิ่มขึ้นของกิจกรรม HDAC2 ในสเตรปโตโซโตซิน (STZ) - dia- betic ที่เกิดจากไตและเซลล์ epithelia ท่อใกล้เคียงไตหนู (NRK-52E) สัมผัสกับ TGF-β1 [50] siRNA เคาะลงของ HDAC2 ลดการแสดงออกของ fibronectin และ α-SMA ในเซลล์ NRK-52E การรักษา TSA ลดการแสดงออกของส่วนประกอบ ECM และป้องกัน epithe- lial-mesenchymal-transition (EMT) กรด Valproic (VPA) (สารยับยั้ง HDACI/II อีกตัวหนึ่ง) หรือ SK704 (สารยับยั้ง HDAC ระดับ I แบบเลือก) ถูกสังเกตว่ามี efects ที่คล้ายกันในเซลล์ NRK-52E ซึ่งสนับสนุนบทบาทสําคัญของ HDACs คลาส I ในการพัฒนาโรคไตเบาหวาน [50]

ความเครียดเอนโดพลาสซึมเรติคูลัม (ER) ที่เกิดจากสายพันธุ์ออกซิเจนที่ทําปฏิกิริยา (ROS) มีความสัมพันธ์กับการพัฒนา DN [51] ตัวรับปัจจัยการเจริญเติบโตของผิวหนัง (EGFR) เป็นสื่อกลางของความเครียดออกซิเดชันและการกระตุ้น EGFR มีส่วนเกี่ยวข้องในหนูเบาหวาน การส่งสัญญาณความเครียด EGFR/AKT/ROS/ER มีบทบาทสําคัญในความก้าวหน้าของ DN และการยับยั้ง EGFR อาจทําหน้าที่เป็นกลยุทธ์การรักษาที่มีศักยภาพใน DN [51] การศึกษาพบว่าการรักษาหนูเบาหวานด้วย vori- nostat เป็นเวลา 4 สัปดาห์ลดระดับ EGFR และอดกลั้นไตการเจริญเติบโตและยั่วยวนของไต, indi- cating ที่ HDACs อาจมีบทบาทในช่วงต้น DN ผ่านการเปิดใช้งาน EGFR [48]

โพโพไซต์เป็นเซลล์ epithelia ที่แตกต่างกันขั้วและนําเสนอองค์ประกอบที่สําคัญของไตอุปสรรคการระบาย [52] ความเสียหายของ Podocyte เร่งการลุกลามของ DN ผ่านการสูญเสียความสมบูรณ์ของสิ่งกีดขวางการหลุดลอกของไตส่งผลให้โปรตีนไหลออกสู่ปัสสาวะ (proteinuria) [52] ด้วยการวิเคราะห์ฐานข้อมูลกิจกรรม HDAC1 และ HDAC2 ที่สูงขึ้นถูกตรวจพบใน microarray จาก glomeruli ของหนูโปรตีน (Inoue et al. 2019) การศึกษาเมื่อเร็ว ๆ นี้แสดงให้เห็นถึงบทบาทสําคัญของกิจกรรม podo- cyte HDAC ในการควบคุม murine และโรคไตของมนุษย์และแนะนําอย่างยิ่งว่าการยับยั้งกิจกรรม HDAC1 และ HDAC2 อาจยับยั้ง progres- sion ของโรคไตโปรตีนของมนุษย์ การให้ VPA (สารยับยั้ง HDAC ประเภทที่ 1, ยาที่ได้รับการรับรองจาก FDA) และกรด suberanilohydroxamic (SAHA) ช่วยบรรเทาภาวะ teinuria และลดการพัฒนาภาวะไตในภาวะไตในหนูหลายชนิด หนูระเหย Podocye-spe- cifc HDAC1 และ HDAC2 มีความทนทานต่อภาวะหลอดเลือดหัวใจตีบแบบก้าวหน้า นอกจากนี้ การวิเคราะห์ longitudi- nal ของผู้เข้าร่วม 120,000 คนในการศึกษากลุ่มผู้สูงวัยรุ่นเก๋ายังแสดงให้เห็นถึงประสิทธิภาพการป้องกันที่แข็งแกร่งของการรักษาด้วย VPA เกี่ยวกับการลดลงของอัตราการไล่ระดับชั้นของไตโดยประมาณ [52]

โดยสรุปโรคไตเนื่องจากโรคเบาหวานยังคงเป็นสาเหตุที่พบบ่อยที่สุดของไตวายเรื้อรังและ HDACi ให้การต้อนรับทางคลินิกสําหรับการรักษาโรคไตโรคเบาหวาน

HDACs และมะเร็งไต

สารยับยั้ง HDAC ได้รับการศึกษาอย่างกว้างขวางในมะเร็งประเภทต่างๆ มะเร็งเซลล์ไต (RCC) เป็นมะเร็งที่พบมากที่สุดไตมะเร็งและคิดเป็น 2-3% ของผู้ใหญ่สามารถ cers ในสหรัฐอเมริกา [53] HDACs คลาส I โดยเฉพาะ HDAC1, 2 และ 3 แสดงออกอย่างมากใน RCC ทําให้เป็นเป้าหมายที่น่าสนใจสําหรับการบําบัด [54] การศึกษาล่าสุดแสดงให้เห็นว่า HDAC1 และ HDAC2 จําเป็นสําหรับการเจริญเติบโตและการอยู่รอดของเซลล์มะเร็งไต [55] HDACis นําไปสู่การลดลงของ E-cadherin (โมเลกุลการยึดเกาะของเซลล์) และตัวรับปัจจัยการเจริญเติบโตที่ได้จากเกล็ดเลือด β (PDGFR ซึ่งเป็นตัวขับเคลื่อนหลักของการสร้างการแพร่กระจายของ RCC) [55] มะเร็งเซลล์ไตเซลล์ใส (ccRCC) เป็นรูปแบบที่พบบ่อยที่สุดของมะเร็งเซลล์ไต ccRCC เป็นลักษณะการยับยั้งของยีนยับยั้งเนื้องอกฟอน Hippel Lindau (VHL) [56] การศึกษาพบว่า HDAC1 และ 6 มีการแสดงออกสูงและปรับการบุกรุกและการย้ายถิ่นของเซลล์ใน ccRCC [56] เมื่อเร็ว ๆ นี้เรายังตรวจพบกิจกรรมที่สูงขึ้นของ HDAC1 และ HDAC2 ใน Wilms Tumor ซึ่งเป็นเนื้องอกมะเร็งที่เป็นของแข็งของไตที่เกิดขึ้นจากเด็กที่ยังไม่บรรลุนิติภาวะney cells (Liu et al., unpublished). ด้วยการกําหนดเป้าหมายทั้ง histone และ non-histone pro- teins ทําให้ HDACs มีบทบาทสําคัญในการเจริญเติบโตและ progres- sion ของเนื้องอกที่เป็นของแข็ง [57] HDACi ได้รับการพิสูจน์แล้วว่าทําให้เกิดการจับกุมการเจริญเติบโตการตายของเซลล์และ diferentia- tion ของเซลล์มะเร็งและการยับยั้งการสร้างเส้นเลือดใหม่ของเนื้องอก [57, 58]

การสะสมหลักฐานแสดงให้เห็นว่า HDACi ยับยั้งการเพิ่มจํานวนเซลล์มะเร็งและกระตุ้นการจับกุมวัฏจักรเซลล์ [57, 58] การรักษา VPA ของเซลล์ RCC นําไปสู่การจับกุม G1 โดยการเพิ่ม p21 [59] นอกจากนี้ LBH589 (พาโนบิโนสแตท; ฟารีดัก®, โนวาร์ติส ฟาร์มส์ คอร์ป) ทําให้เกิดการจับกุมเซลล์ RCC G2/M โดยการสูญเสียแสงออโรร่า A และ B และการลดลงของ Survivin [60] ซึ่งถูกไกล่เกลี่ยเป็นพิเศษผ่าน HDAC3 และ 6 [60] Aurora A และ B เป็นซีรีน/ทรีโอนีนไคเนสที่ได้รับการอนุรักษ์ไว้อย่างสูง ซึ่งมีบทบาทสําคัญในไมโทซิสและไมโอซิส โดยเฉพาะอย่างยิ่งในวงจรเซลล์ G2-M progres- sion Survivin เป็นสมาชิกของตัวยับยั้งการตายของเซลล์ (IAP) ซึ่งทําหน้าที่ยับยั้งการตายของเซลล์หรือการตายของเซลล์ pro- grammed การจับกุม G2/M ยังเกิดจาก KBH-A145 ซึ่งเป็นอนุพันธ์ของกรดไฮดรอกซามิกที่ใช้γแลคตัมที่ยับยั้ง HDAC [61] ในเซลล์มะเร็งไตของมนุษย์ KBH- A145 เพิ่ม p21 โดยยับยั้งการสรรหา HDAC1 ให้กับโปรโมเตอร์ p21 [61] โดยรวมแล้ว fndings เหล่านี้ indi- cate ที่สารยับยั้ง HDAC ทําให้เกิดการจับกุมวงจรใน RCC โดย afecting ตัวควบคุมวงจรเซลล์เช่น p21, aurora A และ aurora B

แม้ว่า FDA จะได้รับการอนุมัติให้รักษา can- cers จํานวนมาก แต่การใช้สารยับยั้ง HDAC (HDACi) ในการรักษาเพียงครั้งเดียวก็มีประสิทธิภาพในการรักษาที่ จํากัด ต่อเนื้องอกที่เป็นของแข็ง [62] การศึกษาจํานวนมากได้แสดงให้เห็นถึงความกรุณาของการใช้ HDACis แบบ combi- natorial กับตัวแทนมะเร็งอื่น ๆ ในการรักษา RCC [58] ตัวอย่างเช่น VPA ร่วมกับ interferon α ขนาดต่ําหรือ AEE788 (ตัวรับไทโรซีนไคเนสยับยั้ง) หรือ RAD001 (ตัวยับยั้ง ofmTOR) มีประสิทธิภาพมากกว่าในการยับยั้งกิจกรรม HDAC และการเพิ่มจํานวนเซลล์ในเซลล์ RCC [63] ผลการศึกษาระยะที่ 1/2 แบบแขนเดียวแสดงให้เห็นว่าการเพิ่มสารยับยั้ง HDAC ระดับ 1 entinostat ให้กับการรักษา IL-2 ขนาดสูงในผู้ป่วยที่มี ccRCC ระยะแพร่กระจายอาจเป็นภาวะอ่อนโยน [64] กลุ่มเดียวกันยังรายงานด้วยว่าการรวมตัวของ vorinostat สารยับยั้ง HDAC คลาส II และตัวบล็อก VEGF bevacizumab นั้นค่อนข้างดีในการทดลองทางคลินิกระยะที่ 1/II แบบแขนเดียว [65]

การศึกษาเหล่านี้แนะนําอย่างยิ่งว่าการยับยั้ง HADC โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อใช้ร่วมกับตัวแทนการรักษาเพิ่มเติมอาจให้วิธีการที่มีประสิทธิภาพในการรักษา RCC

ข้อสรุปและแนวโน้ม

HDACs โดยเฉพาะ HDACs คลาส I ได้รับการพิสูจน์แล้วว่ามีบทบาทสําคัญในการไตการพัฒนา [4, 23, 27, 9] ระดับการแสดงออกที่ผิดปกติและกิจกรรมของ HDACs มีความสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับการเกิดโรคและความก้าวหน้าของโรคไตต่างๆ HDACi จํานวนมากได้รับการพิสูจน์แล้วว่ามีประสิทธิภาพมากในการรักษาไตโรค ข้อมูลที่ครอบคลุมเกี่ยวกับผลการรักษาของสารยับยั้ง histone deacetylase ต่อโรคไตมีให้ในเอกสารทบทวน (Chun, 2018) จําเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมเพื่อทําความเข้าใจกลไกระดับโมเลกุลของ HDACs ในภาวะปกติไตการก่อตัวและโรคไต HDACs และ HDACi ควบคุม (หรือเปลี่ยนแปลง) การแสดงออกของยีนโดยการเปลี่ยนอะซิติเลชั่นโปรตีน ปัจจุบันโปรไฟล์ของอะซิติเลชั่นโปรตีนที่ปรับ HDAC หรือ HDCAi เป็นสื่อกลางในไต(ที่เงื่อนไขทางสรีรวิทยาหรือพยาธิวิทยา) ไม่เป็นที่รู้จักกันดี การวิเคราะห์อย่างกว้างขวางของโปรตีนทั่วโลกไลซีน acetylation ในการตอบสนองต่อการน็อคเอาท์ HDAC หรือการยับยั้ง HDAC โดยใช้วิธีการโปรตีโอมิกจะให้ข้อมูลเชิงลึกใหม่เกี่ยวกับกลไกการควบคุมของ HDACs ในการพัฒนาไตและเปิดช่องทางการรักษาใหม่สําหรับการป้องกันและรักษาโรคไตและโรคไตและโรคหัวใจและหลอดเลือดที่เกี่ยวข้อง การศึกษาจํานวนมากประสบความสําเร็จในการสาธิตผล renoprotective ของสารยับยั้ง HDAC อย่างไรก็ตามส่วนใหญ่เป็นสารยับยั้ง pan-HDAC การยับยั้ง HDAC ในวงกว้างมีแนวโน้มที่จะทําให้เกิดพิษต่อไตและการพัฒนาสารยับยั้ง HDAC ที่เฉพาะเจาะจงเป็นสิ่งจําเป็นเพื่อปรับปรุงผลลัพธ์ทางคลินิกและลดความเป็นพิษ การบําบัดแบบผสมผสานโดยการผสมสารยับยั้ง HDAC กับสารเพิ่มเติมจะเป็นประโยชน์ต่อการรักษา นอกจากนี้ความเข้าใจที่ครอบคลุมเกี่ยวกับบทบาทของ HDACs และสารยับยั้ง HDAC จะช่วยได้มากสําหรับการพัฒนาเครื่องมือใหม่ ๆ เพื่อสรุปการสร้างไตในเวชศาสตร์ฟื้นฟู

การตอบรับขอขอบคุณดร. El-Dahr ที่อ่านและแก้ไขต้นฉบับนี้อย่างมีวิจารณญาณ งานวิจัยที่รายงานในเอกสารนี้ได้รับการสนับสนุนจากสมาคมโรคหัวใจแห่งสหรัฐอเมริกา (17SDG33660072) สถาบันสุขภาพแห่งชาติให้ทุน P50 DK096373-03 และ P30GM103337

Open Access บทความนี้ได้รับอนุญาตภายใต้สัญญาอนุญาตระหว่างประเทศ Creative Commons Attribution 4.0 ซึ่งอนุญาตให้ใช้ แชร์ ดัดแปลง แจกจ่าย และทําซ้ําในสื่อหรือรูปแบบใดๆ ตราบใดที่คุณให้เครดิตที่เหมาะสมแก่ผู้เขียนต้นฉบับและแหล่งที่มา ให้ลิงก์ไปยังใบอนุญาตครีเอทีฟคอมมอนส์ และระบุว่ามีการเปลี่ยนแปลงหรือไม่ รูปภาพหรือเนื้อหาของบุคคลที่สามอื่น ๆ ในบทความนี้จะรวมอยู่ในใบอนุญาตครีเอทีฟคอมมอนส์ของบทความเว้นแต่จะระบุไว้เป็นอย่างอื่นในวงเงินเครดิตของเนื้อหา หากเนื้อหาไม่รวมอยู่ในใบอนุญาตครีเอทีฟคอมมอนส์ของบทความและการใช้งานที่คุณตั้งใจไว้ไม่ได้รับอนุญาตโดยกฎระเบียบทางกฎหมายหรือเกินกว่าการใช้งานที่ได้รับอนุญาตคุณจะต้องได้รับอนุญาตโดยตรงจากผู้ถือลิขสิทธิ์ หากต้องการดูสําเนาของใบอนุญาตนี้ โปรดไปที่ http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/