การวิจัยทางเภสัชวิทยาของ Acteoside เกี่ยวกับการกระทำที่ยับยั้งเริ่มต้น Prostatic Hyperlasia ในหนู

การวิจัยทางเภสัชวิทยาของแอกทีโอไซด์ในการยับยั้งการออกฤทธิ์เริ่มต้นต่อมลูกหมากโตในหนูแรท

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม:ali.ma@wecistanche.com

บทคัดย่อ:มีการสร้างแบบจำลองหนูทดลองต่อมลูกหมากโต (BPH) และกลุ่มยาสามกลุ่มของแอคทีโอไซด์ได้รับการบริหารด้วยปากเปล่าเป็นเวลา 4 สัปดาห์ เพื่อศึกษาผลของแอกทิโอไซด์ที่กลั่นจาก Cistanche tubulosa ต่อการตายของเซลล์ต่อมลูกหมากในหนูที่มีเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาล การเปลี่ยนแปลงโครงสร้างพื้นฐานของต่อมลูกหมากสังเกตได้จากกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน ผลปรากฏว่าอะพอพโทซิสของต่อมลูกหมากของหนูปกติไม่ชัดเจน มีอัตรา pro-state ต่ำอะพอพโทซิสในกลุ่มแบบจำลอง ในการรักษา acteoside ปริมาณสูง หนู pro-stateอะพอพโทซิสสูงกว่ากลุ่มโมเดลอย่างมีนัยสำคัญแอคทีโอไซด์สามารถส่งเสริมต่อมลูกหมากโตของหนู และมีบทบาทในการยับยั้งต่อมลูกหมากโตที่ไม่เป็นพิษเป็นภัย

คีย์เวิร์ด:แอคทีโอไซด์, ซิสแทนเช่, เริ่มต้นต่อมลูกหมากโต

คลิกเพื่อกำหนดปริมาณ cistanche tubulosa และผลิตภัณฑ์ Cistanche

Apoptosis ระหว่างต่อมลูกหมากโต (BPH) เป็นหนึ่งในกลไกที่เกี่ยวข้องมากกว่าในปัจจุบัน ซึ่งมีการเข้ารหัสทางพันธุกรรม และทำให้เซลล์สามารถควบคุมการตายของเซลล์โดยการตอบสนองต่อสัญญาณที่เฉพาะเจาะจง หลังจากที่ต่อมลูกหมากโตจนโตเต็มวัย อัตราการแพร่กระจายของเซลล์ต่อมลูกหมากจะคงอยู่ที่ 1 เปอร์เซ็นต์ - 2 เปอร์เซ็นต์ โดยการกระทำที่สมดุลของอัตราเฉลี่ยของการตายของเซลล์ และเมื่อความสมดุลนี้ถูกทำลาย จะถือเป็นสาเหตุจูงใจ ของเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาล ภายใต้สภาวะปกติ ระดับของเพศหญิงและแอนโดรเจนในต่อมลูกหมากและการไหลเวียนตามปกติเป็นสภาวะสมดุลระหว่างการเพิ่มจำนวนและการตายของเซลล์ เมื่อการงอกขยายไม่สมดุลกับการตายของเซลล์ มันจะนำไปสู่การเจริญเติบโตและการขยายตัวของต่อม ส่วนใหญ่จะยอมให้การขยายตัวของช่องระหว่างเซลล์เยื่อบุผิวเกิดขึ้น ในการทดสอบนี้ เราสังเกตและวิเคราะห์ผลกระทบของหนึ่งในองค์ประกอบทางเคมีของCistanche, แอคทีโอไซด์(เช่น phyllode) เกี่ยวกับการตายของเซลล์และการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างย่อยในต่อมลูกหมากของหนูโดยการสร้างแบบจำลองหนูของต่อมลูกหมากโต เพื่อประเมินประโยชน์ของแอกทีโอไซด์ในการยับยั้งต่อมลูกหมากโต และเพื่อให้มีพื้นฐานทางวิทยาศาสตร์สำหรับการพัฒนาการใช้ใหม่Cistanche,ยาจีน.

1 วัสดุและวิธีการ

1. สัตว์ทดลอง 1 ตัว

หนู SD เพศผู้ 50 ตัวอายุ 6-7 สัปดาห์ เกรดสะอาด น้ำหนัก 80-100 กรัม จัดหาให้โดยศูนย์การแพทย์เปรียบเทียบของมหาวิทยาลัยหยางโจว

1. น้ำยา 2 ตัวกับยา

การฉีดฮอร์โมนเทสโทสเตอโรนโพรพิโอเนตผลิตโดย Shanghai General Pharmaceutical Co., Ltd. ข้อมูลจำเพาะ 25 มก. · ML - 1 ล็อต 060708 ศูนย์ทดสอบของมหาวิทยาลัยหยางโจวจัดหาสารละลายย้อม PI เนื้อหาแอคทีโอไซด์ 945 ก. · กก. - 1 จัดทำขึ้นในภาควิชาวิเคราะห์การแพทย์แผนจีน มหาวิทยาลัยยาจีน

1. เครื่องมือทดลอง 3 เครื่อง

Philips TECNAI 12 กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน Dutch Philips; Facsaria flow cytometer ผลิตขึ้นสำหรับ Becton Dickinson

1. 4 การจัดกลุ่มและการสร้างแบบจำลอง

แบบจำลองต่อมลูกหมากโตถูกสร้างขึ้นโดยการฉีดฮอร์โมนเทสโทสเตอโรนโพรไพโอเนตเข้าใต้ผิวหนังที่หลังหนูเป็นเวลา 4 สัปดาห์ตามวิธีการในวรรณคดี สุ่มตัวอย่างหนูทดลองออกเป็นสี่กลุ่ม: กลุ่มโมเดล กลุ่มตัวอย่าง acteoside กลุ่มขนาดสูง กลุ่มตัวอย่าง acteoside ขนาดปานกลาง กลุ่มแบบจำลอง acteoside ต่ำ โดย 10 หนูในแต่ละกลุ่ม หนูปกติอีก 10 ตัวถูกจับเป็นกลุ่มควบคุม

1. 5 วิธีในการบริหาร

หนึ่งสัปดาห์หลังการสร้างแบบจำลอง หนูในกลุ่มที่ได้รับขนาดสูง - กลาง - และต่ำได้รับ 60, 30 และ 15 มก. · (กก. · d) - 1 โดยทางสายยางตามลำดับ แบบจำลองและกลุ่มควบคุมได้รับการบริหารในทางเดินอาหารด้วยน้ำเกลือปกติที่มีปริมาตรเท่ากัน วันละครั้งเป็นเวลา 4 สัปดาห์ และชั่งน้ำหนักน้ำหนักตัวสัปดาห์ละครั้งเพื่อปรับขนาดยาตามน้ำหนักตัว

1. การรวบรวมและการประมวลผลตัวอย่าง 6 ตัวอย่าง

1) ตัวอย่างและการเตรียมการ: 24 ชั่วโมงหลังการให้นมครั้งสุดท้าย ชั่งน้ำหนักหนูที่อดอาหาร และหนูถูกสังเวยโดยปากมดลูกเคลื่อน ช่องท้องส่วนล่างเปิดออกทันที เนื้อเยื่อต่อมลูกหมากโดยรอบถูกเอาออก และต่อมลูกหมากอิสระ ถูกกำจัดออกไป และต่อมลูกหมากบางตัวก็ถูกทำให้เป็นเนื้อเดียวกันในเครื่องทำให้เป็นเนื้อเดียวกันในอ่างน้ำแข็งเพื่อเตรียมสารแขวนลอยเซลล์เดียวของต่อมลูกหมาก ซึ่งถูกย้อมด้วยโพรพิเดียม ไอโอไดด์ในขั้นตอนเดียว อีกส่วนหนึ่งของเนื้อเยื่อต่อมลูกหมากถูกตรึงในกลูตาราลดีไฮด์ 25 กรัม · L - 1 และเตรียมส่วนที่บางเฉียบ

2) การเตรียมสารแขวนลอยเซลล์เดียว: นำต่อมลูกหมากของหนูที่ยังไม่เสียหายออกในภาชนะภายใต้สภาวะปลอดเชื้อ ล้างเลือดและก้อนเลือดบนพื้นผิวของเนื้อเยื่อต่อมลูกหมากด้วย PBS เพื่อขจัดไขมันที่อยู่รอบข้างและเยื่อเส้นใยและไซโตพลาสซึมส่วนเกิน และเนื้อเยื่อต่อมลูกหมากสดขนาดประมาณ 0.5 ซม. 3 ถูกเก็บเกี่ยวจากต่อมลูกหมากของหนูตัวเดียวกัน สับละเอียด และเตรียมสารแขวนลอยเซลล์ต่อมลูกหมาก

บล็อกของเนื้อเยื่อต่อมลูกหมากถูกวางไว้ในจานเพาะเชื้อและเติม PBS จำนวนเล็กน้อย เนื้อเยื่อถูกตัดด้วยกรรไกรสำหรับโรคตาในอ่างน้ำแข็ง โฮโมจีไนเซอร์บดกับสารแขวนลอย เติม PBS 10 มล. เนื้อเยื่อที่เป็นเนื้อเดียวกันถูกสำลักโดยปิเปต กรองลงในหลอดทดลองที่มีรูพรุน 0.074 มม. ขนาดตาข่ายไนลอน หมุนเหวี่ยงที่ 1500 R · นาที - 1 เป็นเวลา 3 นาที และล้างเม็ดด้วย PBS อีกสามครั้ง แต่ละครั้งด้วยการหมุนเหวี่ยงความเร็วต่ำ 500 R · นาที - 1 ในช่วงเวลาสั้นๆ ถึง ขจัดเศษเซลล์ และกรองตาข่ายไนลอนขนาดรูพรุน 0.037 มม. เพื่อขจัดก้อนเซลล์ เซลล์ถูกนับและปรับให้มีความเข้มข้นของเซลล์เท่ากับ 2 × 109 · L - 1 ย้อมด้วยสารละลาย PI 1 มล. เป็นเวลา 10 นาที ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส ในที่มืด

3) การเตรียมส่วน Ultrathin: การเตรียมส่วนเนื้อเยื่อบางเฉียบ

2 ผลลัพธ์และการวิเคราะห์

เป็นที่ทราบกันดีอยู่แล้วว่าแอกทิโอไซด์มีฤทธิ์ในโพรอะพอพโทซิส การวิเคราะห์ทางสถิติของผลลัพธ์ของการตายของเซลล์แบบอะพอพโทซิสพบว่าอัตราการตายของเซลล์ในหนูที่ได้รับแอกทิโอไซด์ในปริมาณสูง ปานกลาง และต่ำตามลำดับเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ และความแตกต่างเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มปกติ กลุ่มตัวอย่าง และกลุ่มที่เป็นบวกนั้นชัดเจนมาก . มันบ่งชี้ว่าแอกทีโอไซด์สามารถกระตุ้นการตายของเซลล์ และผลที่ได้นั้นแข็งแกร่งกว่ายาอัลพรอสตาดิลกลุ่มควบคุมเชิงบวกอย่างมีนัยสำคัญ

ผลของแอคทีโอไซด์ต่อโครงสร้างพื้นฐานของเซลล์ต่อมลูกหมากโตนั้นแสดงให้เห็นโดยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน: ในต่อมลูกหมากของหนูปกติ นิวเคลียสที่มองเห็นได้นั้นไม่บุบสลาย นิวเคลียสนั้นชัดเจน และการกระจายโครมาตินของนิวเคลียสจะเท่ากัน เอ็นโดพลาสมิกเรติเคิลที่หยาบมีขนาดสม่ำเสมอ จัดเรียงอย่างเป็นระเบียบ ไม่มีปรากฏการณ์ vacuolization ไม่มีไมโครวิลไลที่ยื่นออกมาเหมือนนิ้วบนผิวเยื่อบุผิว ไม่พบปรากฏการณ์การบวมของไมโทคอนเดรีย และมีสารคัดหลั่งจากลูเมนเพียงเล็กน้อย ในกลุ่มแบบจำลอง นิวเคลียสของเซลล์ต่อมลูกหมากมีรูปร่างผิดปกติและหดตัวอย่างเห็นได้ชัด และไซโตพลาสซึมมีมากมาย เอ็นโดพลาสมิกเรติคูลัมแบบหยาบถูกขยายสูงและมีการแวคิวโอเลตอย่างชัดเจน และถุงน้ำก็เต็มไปด้วยเม็ดโปรตีนความหนาแน่นสูง ไมโตคอนเดรียบวมเล็กน้อยและมีสารคัดหลั่งหนาแน่นปานกลางในลูเมน และพบเม็ดสารคัดหลั่งในบางเซลล์ ในหนูที่ได้รับการรักษาด้วยแอกทิโอไซด์ นิวเคลียสนั้นไม่บุบสลายเมื่อเทียบกับในกลุ่มแบบจำลอง โดยมีนิวเคลียสที่ควบแน่นเล็กน้อย ความกระชับของนิวเคลียร์ที่เพิ่มขึ้น การสะสมของเฮเทอโรโครมาติน แวคิวโอลบางตัวในไซโตพลาสซึม และแวคิวโอลจำนวนน้อยลงในเอนโดพลาสซึมเรติเคิลหยาบ ในกลุ่มแอกทิโอไซด์ขนาดต่ำ นิวเคลียสหดตัวเล็กน้อย ไม่สม่ำเสมอ และไซโตพลาสซึมมีมากขึ้น และเอนโดพลาสมิกเรติเคิลแบบหยาบลดลง

3 การอภิปราย

การตรวจหาเซลล์ apoptotic ในเชิงปริมาณโดย FCM นั้นง่าย รวดเร็ว และมีวัตถุประสงค์ และสามารถทำได้ด้วยการทดสอบแบบหลายพารามิเตอร์ เพื่อให้เข้าใจถึงการเปลี่ยนแปลงของการตายของเซลล์อะพอพโทซิสและกลไกการกำกับดูแลที่เป็นไปได้อย่างลึกซึ้งยิ่งขึ้น

อะพอพโทซิสเป็นกระบวนการตายของเซลล์ที่ตั้งโปรแกรมไว้ในสิ่งมีชีวิตหลายเซลล์เพื่อควบคุมการพัฒนาของสิ่งมีชีวิต และการรักษาสภาวะสมดุลซึ่งกำหนดโดยรหัสยีน เซลล์อะพอพโทติกมีลักษณะทางสัณฐานวิทยาและชีวภาพที่เป็นเอกลักษณ์: pyknosis ของโครมาตินในนิวเคลียส การเสื่อมสลายอย่างกว้างขวางของดีเอ็นเอแตก การหดตัวอย่างทั่วถึงของเซลล์ การหดตัวของเยื่อหุ้มเซลล์ด้วยกระบวนการภายนอกที่ห่อหุ้มออร์แกเนลล์ เพื่อให้เซลล์ apoptotic ไม่เพียงแต่รักษาโครงสร้างและหน้าที่ของเยื่อหุ้มเซลล์ที่ไม่บุบสลายเท่านั้น แต่ยังรวมถึงความสมบูรณ์ของโครงสร้างออร์แกเนลล์ซึ่งแตกต่างจากเนื้อร้ายของเซลล์ กลไกระดับโมเลกุลของอะพอพโทซิสยังไม่ได้รับการอธิบายอย่างสมบูรณ์จนถึงปัจจุบัน และจากการศึกษาพบว่ายีนต่างๆ มีส่วนเกี่ยวข้องในการควบคุมยีนที่เกี่ยวข้องกับการตายของเซลล์

กระบวนการอะพอพโทซิสเป็นที่สนใจมากขึ้นในกระบวนการของเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาล ซึ่งมีการเข้ารหัสทางพันธุกรรมและทำให้เซลล์สามารถควบคุมการตายของเซลล์โดยการตอบสนองต่อสัญญาณเฉพาะ หลังจากที่ต่อมลูกหมากโตจนโตเต็มวัย อัตราการแพร่กระจายของเซลล์ต่อมลูกหมากจะคงอยู่ที่ 1 เปอร์เซ็นต์ - 2 เปอร์เซ็นต์โดยการกระทำที่สมดุลของอัตราการตายของเซลล์ และการหยุดชะงักของความสมดุลนี้ได้รับการพิจารณาว่าเป็นสาเหตุของเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาล . ภายใต้สภาวะปกติ ระดับฮอร์โมนเอสโตรเจนถึงแอนโดรเจนภายในต่อมลูกหมากและการหมุนเวียนตามปกติคือสภาวะของสภาวะสมดุลที่เกิดขึ้นระหว่างกระบวนการงอกขยายและการตายของเซลล์ เมื่อการงอกขยายไม่สมดุลกับอะพอพโทซิส จะนำไปสู่การเจริญเติบโตและการขยายตัวของต่อม ส่วนใหญ่โดยการขยายตัวระหว่างผนังกั้นเซลล์เยื่อบุผิว การหยุดชะงักของความสมดุลนี้อาจเกิดจากการเปลี่ยนแปลงในระดับหรือการทำงานของแอนโดรเจน การตอบสนองทั้งสองอย่างอาจเกิดขึ้นจากการกระตุ้น DHT โดย AR หรือจากการเปลี่ยนแปลงในระดับปัจจัยการเจริญเติบโตที่อาศัยโดย DHT ในการศึกษานี้ ใช้ FCM เพื่อตรวจหาการตายของเซลล์ และพบว่าอัตราการตายของเซลล์ในต่อมลูกหมากของหนูที่ได้รับแอกทีโอไซด์ในปริมาณสูงนั้นเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับกลุ่มแบบจำลอง กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแสดงให้เห็นว่านิวเคลียสของเซลล์ต่อมลูกหมากในกลุ่มแบบจำลองมีรูปร่างผิดปกติ เอนโดพลาสมิกเรติเคิลที่หยาบถูกขยายอย่างมากในถุงน้ำ ถุงเต็มไปด้วยอนุภาคโปรตีนความหนาแน่นสูง และการทำให้เป็นสุญญากาศได้ชัดเจน ไมโตคอนเดรียบวมเล็กน้อย สอดคล้องกับรายงานจากการศึกษาที่เกี่ยวข้อง

ระดับของต่อมลูกหมากโตในหนูลดลงอย่างมีนัยสำคัญหลังจากการแทรกแซงของแอกทีโอไซด์ กลุ่มที่ได้รับยาในขนาดสูงยังพัฒนาสัญญาณเริ่มต้นของการตายของเซลล์: นิวเคลียสของเซลล์ต่อมลูกหมากยังคงไม่บุบสลายเป็นส่วนใหญ่ และ endoplasmic reticulum vacuoles ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ นิวเคลียสถูกควบแน่นด้วยความแน่นของนิวเคลียสที่เพิ่มขึ้นและการสะสมเฮเทอโรโครมาติน คล้ายกับลักษณะเฉพาะของเซลล์จากเนื้อเยื่อต่อมลูกหมากหลังการตัดหัตถการในหนูแรท แสดงให้เห็นว่าแอกทีโอไซด์สามารถกระตุ้นการตายของเซลล์ต่อมลูกหมากในหนูที่มีต่อมลูกหมากโต ควบคุมและฟื้นฟูสมดุลระหว่างการตายของเซลล์อะพอพโทซิสและการเพิ่มจำนวนของเซลล์ต่อมลูกหมาก และมีผลยับยั้งการเพิ่มจำนวนของเซลล์ต่อมลูกหมาก ผลการศึกษาในปัจจุบันและการศึกษาก่อนหน้านี้ชี้ให้เห็นว่าการยับยั้งการเกิดต่อมลูกหมากโตโดยส่วนประกอบทางเคมีของ Cistanche, acteoside, อาจเกี่ยวข้องกับการส่งเสริมการตายของเซลล์และการลดการแสดงออกของ AR และ tgf-ur1 และกลไกที่มีรายละเอียดยังคงต้องได้รับการตรวจสอบอย่างเต็มที่