ผลของสารฮิวมิกในอาหารต่อภูมิคุ้มกันของเซลล์และลักษณะเลือดในลูกสุกร

เชิงนามธรรม: การศึกษาครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อตรวจสอบผลกระทบของสารฮิวมิกในอาหารต่อการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกันและโปรไฟล์เลือดในลูกสุกร ลูกสุกรลูกผสมทั้งหมด 24 ตัว (สโลวาเกียไวท์ × แลนด์เรซ; อายุ 35 วัน; น้ำหนักตัวเฉลี่ย 11.67 กก.) ได้รับการจัดสรรให้กับกลุ่มอาหารสองกลุ่มที่มี (ทดลอง; 5 กรัม·กก.−1 ) หรือไม่มี (ควบคุม; 0 g·kg−1 ) การเสริมสารฮิวมิกตามธรรมชาติ ในการศึกษานี้ เราสังเกตเห็นการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในสัดส่วนของ CD4+CD8- ลิมโฟไซต์ (p < {{10}}.001) ในกลุ่มทดลอง ผลลัพธ์ยังแสดงให้เห็นถึงแนวโน้มสำหรับการเพิ่มขึ้นของการออกฤทธิ์ของฟาโกไซติกและความสามารถในการกลืนของฟาโกไซต์และจำนวนของกลุ่มย่อยของลิมโฟไซต์ที่ถูกติดตามอื่นๆ (CD3+, CD21+, CD4-D 8+, CD4+CD8+, CD4+CD25+) ในลูกสุกรในกลุ่มทดลองเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม การเสริมสารฮิวมิกทำให้ซีรั่มอัลคาไลน์ฟอสฟาเตสเพิ่มขึ้นเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม (p < 0.05) พารามิเตอร์เลือดที่ได้รับการตรวจติดตามอื่นๆ ไม่ได้รับผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญจากการรักษาด้วยอาหาร โดยสรุปว่าการรวมสารฮิวมิกในอาหารของลูกสุกรอาจมีผลกระตุ้นภูมิคุ้มกันของเซลล์ โดยไม่ส่งผลเสียต่อพารามิเตอร์ทางโลหิตวิทยาและชีวเคมี

คำสำคัญ: สารฮิวมิก; ฟาโกไซโตซิส; ลิมโฟไซต์; ชีวเคมีในเลือด โลหิตวิทยา; ลูกหมู

ประโยชน์ของอาหารเสริม Cistanche-วิธีเสริมสร้างระบบภูมิคุ้มกัน

1. บทนำ

สารฮิวมิก (HS) เป็นกลุ่มของสารประกอบออกฤทธิ์ทางชีวภาพตามธรรมชาติที่ไม่มีคุณค่าทางโภชนาการที่เกิดขึ้นในดิน [1] เป็นส่วนประกอบสำคัญของฮิวมัสซึ่งมีหน้าที่หลักในการถ่ายทอดสารอาหารจากดินสู่สิ่งมีชีวิต HS รวมกรดฮิวมิก กรดฟุลวิค และฮิวมินเป็นองค์ประกอบหลักโดยเฉพาะ [2] ส่วนประกอบเหล่านี้จำเป็นต่อการเจริญเติบโตของพืช [3] และสามารถส่งเสริมการใช้สารอาหารของพืชอย่างมีประสิทธิภาพ [4] เนื่องจากการห้ามใช้ยาปฏิชีวนะเป็นสารส่งเสริมการเจริญเติบโตในสหภาพยุโรป ความสนใจในสารปรุงแต่งอาหารสัตว์ทางเลือกสำหรับการผลิตสัตว์จึงเพิ่มขึ้น [5] ในช่วงสองทศวรรษที่ผ่านมา ความสนใจในการใช้ HS ในโภชนาการสัตว์เพิ่มขึ้น [2,6] ผู้เขียนหลายคนสังเกตเห็นการปรับปรุงพารามิเตอร์การผลิตหลังจากการเติม HS ลงในวัตถุดิบในระหว่างการศึกษา ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา แสดงให้เห็นว่าการเพิ่ม HS ในอาหารสัตว์ที่มีกระเพาะเดี่ยว เช่น สุกร สัตว์ปีก และกระต่าย ส่งเสริมการเจริญเติบโต [7–10] นอกจากนี้ HS ยังถูกใช้เป็นสารกระตุ้นภูมิคุ้มกัน ยาแก้ท้องร่วง ยาแก้ปวด และยาต้านจุลชีพในการปฏิบัติงานด้านสัตวแพทย์ [11–13] การเติมอาหารเสริมออกฤทธิ์ทางชีวภาพที่มีลักษณะฮิวมิกในอาหารของสัตว์ช่วยกระตุ้นกระบวนการเผาผลาญและการย่อยได้ของสารอาหาร และยังกระตุ้นการดูดซึมแร่ธาตุบางชนิดด้วย [14] การศึกษาอื่นๆ พบว่า HS ช่วยลดการขับแอมโมเนียออกจากปุ๋ยคอก และเพิ่มจำนวนเซลล์เม็ดเลือดขาวในเลือดสัมพันธ์กัน การปรับเปลี่ยนที่กล่าวมาข้างต้นช่วยให้สัตว์มีภูมิคุ้มกัน [2,8,15] อย่างไรก็ตาม เนื่องจากแหล่งที่มาและประเภทของการเตรียม HS ที่แตกต่างกัน ตลอดจนความจริงที่ว่าไม่มีมาตรฐานเดียวในการวัดผลกระทบของ HS ของแท้ ผลกระทบทางชีวภาพของสารดังกล่าวจึงขึ้นอยู่กับข้อกำหนดเฉพาะ จากผลลัพธ์และประสบการณ์ก่อนหน้าของเราจากการศึกษาเกี่ยวกับสัตว์ปีก (ไก่เนื้อและไก่ไข่) ต่อผลกระทบของสารฮิวมิก (ในระดับความเข้มข้น 0.8% และ 0.5% ตามลำดับ) ต่อสถานะภูมิคุ้มกัน และการตอบสนองทางภูมิคุ้มกัน เราจึงตัดสินใจตรวจสอบผลกระทบนี้ในลูกสุกร เราสังเกตเห็นการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในการทำงานของฟาโกไซต์และการตอบสนองของเซลล์บี รวมถึงการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในอัตราส่วนลิมโฟไซต์ของ CD4+:CD8+ [16,17] โดยทั่วไป การเสริมเป็นอาหารเสริมในสุกรไม่ได้รับการรายงานที่ดีนักเมื่อเปรียบเทียบกับสัตว์ปีก และการศึกษาทางวิทยาศาสตร์เกี่ยวกับอิทธิพลของการเสริม HS ในอาหารของสุกรต่อภูมิคุ้มกันและเมแทบอลิซึมยังมีจำกัด ดังนั้น การศึกษานี้เป็นการทดลองนำร่องเพื่อประเมินผลของการเสริม HS 0.5% ต่อตัวบ่งชี้ภูมิคุ้มกัน รวมถึงตัวแปรทางชีวเคมีและโลหิตวิทยาในเลือดของลูกสุกร

ประโยชน์ของอาหารเสริม Cistanche-วิธีเสริมสร้างระบบภูมิคุ้มกัน

คลิกที่นี่เพื่อดูผลิตภัณฑ์ Cistanche Enhance Immunity

【สอบถามเพิ่มเติม】 อีเมล:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2. วัสดุและวิธีการ

2.1. การออกแบบการทดลอง

การทดลองดำเนินการตาม "คำสั่งของยุโรปว่าด้วยการคุ้มครองสัตว์ที่ใช้เพื่อวัตถุประสงค์ทางวิทยาศาสตร์" [18] สัตว์เหล่านี้ถูกเลี้ยงไว้ในคอกม้าที่ได้รับการรับรองของ Department of Animal Nutrition and Husbandry at the University of Veterinary Medicine ในเมืองโคชิเซ ประเทศสโลวาเกีย ภายใต้เงื่อนไขด้านสุขอนามัยสัตว์ที่กำหนด ในระหว่างการทดลอง อุณหภูมิเฉลี่ยในคอกอยู่ที่ 20.2 ± 1.5 °C และความชื้นสัมพัทธ์คือ 68.5 ± 4.8% การทดลองนี้ได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการจริยธรรมของมหาวิทยาลัยสัตวแพทยศาสตร์และเภสัชศาสตร์ในโคชิตเซ (โปรโตคอลหมายเลข EKV/2022-11) ลูกหมูลูกผสมทั้งหมด 24 ตัว (สโลวาเกียไวท์ x แลนด์เรซ) 35-ลูกสุกรอายุหนึ่งวันถูกแบ่งออกเป็นสองกลุ่ม (n=12; 50% ตัวผู้และ 50% ตัวเมียในทั้งสองกลุ่ม) ก่อนเริ่มการทดลอง น้ำหนักตัวสัตว์เฉลี่ยเริ่มต้น (BW) อยู่ที่ 11.68 ± 1.35 กิโลกรัม ในกลุ่มควบคุม และ 11.65 ± 1.34 กิโลกรัม ในกลุ่มทดลอง กลุ่มทดลองต่อไปนี้ถูกรวมอยู่ในการศึกษา: กลุ่มควบคุมและกลุ่มทดลอง โดยเสริมอาหารของกลุ่มทดลองด้วยอาหารเสริม HS 0.5% การทดลองกินเวลานาน 4 สัปดาห์ การทดลองใช้อาหารเดียวกันสำหรับทั้งสองกลุ่ม (ตารางที่ 1) การแนะนำอาหารเสริม HS ในอาหารเกิดขึ้นได้โดยไม่ต้องใช้ข้าวบาร์เลย์ในกลุ่มทดลอง ให้อาหารสุกรวันละสองครั้งโดยใช้อาหารผสมครบถ้วน สัตว์สามารถดื่มน้ำได้โดยไม่จำกัดตลอดระยะเวลาการทดลอง ส่วนผสมอาหารสัตว์ที่สมบูรณ์ในการทดลองได้รับการกำหนดสูตรตามความต้องการทางโภชนาการโดย Šimeˇcek และคณะ [19]. ผลิตภัณฑ์เสริมอาหาร HS จากธรรมชาติ (HUMAC® Natur AFM; Humac, Ltd., Košice, สโลวาเกีย) ได้รับการบดและทำให้บริสุทธิ์ทางกายภาพด้วย Leonardite โดยไม่ต้องใช้สารเคมี ส่วนผสมอาหารสัตว์ที่สมบูรณ์ได้รับการวิเคราะห์เพื่อหาวัตถุแห้ง โปรตีนดิบ เส้นใยดิบ เถ้าทั้งหมด แป้ง และฟอสฟอรัสทั้งหมด ตามระเบียบของคณะกรรมการ EC 152/2009 [20] วิเคราะห์ระดับแคลเซียมและโซเดียมในอาหารโดยใช้วิธีเปลวไฟของสเปกโตรมิเตอร์การดูดซึมอะตอม (Unicam Solar 939, Camberley, Surrey, UK) ค่าพลังงานที่สามารถเผาผลาญได้ของส่วนผสมอาหารสัตว์ที่สมบูรณ์ได้รับการคำนวณด้วยสูตรตามŠimeˇcek และคณะ [19].

2.2. การสุ่มตัวอย่างและการวัด

ในสัปดาห์ที่ 4 ในตอนเช้าของวันสุดท้ายของการทดลอง ตัวอย่างเลือดถูกนำโดยการเจาะไซนัสในวงโคจรจากสุกรทุกตัวแยกกันในทั้งสองกลุ่มเพื่อการวิเคราะห์ในภายหลัง ได้รับซีรัมโดยการหมุนเหวี่ยง (3000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 นาที) และเก็บไว้ที่ −20 ◦C จนกระทั่งทำการวิเคราะห์ เลือดที่ได้รับเฮปารินถูกนำมาใช้เพื่อกำหนดพารามิเตอร์ทางโลหิตวิทยา ทดสอบการทำงานของฟาโกไซต์ และระบุประชากรย่อยของลิมโฟไซต์

ตารางที่ 1 สูตรและองค์ประกอบทางเคมีของอาหารผสมสำหรับสุกร (แบบให้อาหาร)

2.2.1. พารามิเตอร์ทางชีวเคมีทางโลหิตวิทยาและซีรั่ม

ทำการนับเม็ดเลือดโดยสมบูรณ์ด้วยเครื่องวิเคราะห์โลหิตวิทยาอัตโนมัติ (scil Vet ABC™ Hematology Analyzer ประเทศเยอรมนี) ตัวแปรที่ได้รับการประเมินในการศึกษาของเรา ได้แก่ ค่าฮีมาโตคริต (HCT) ความเข้มข้นของฮีโมโกลบิน (Hb) จำนวนเม็ดเลือดแดง (RBC) ปริมาตรร่างกายเฉลี่ย (MCV) และจำนวนเม็ดเลือดขาวทั้งหมด (WBC) พารามิเตอร์ทางชีวเคมีในซีรั่ม - โปรตีนทั้งหมด, อัลบูมิน, กลูโคส, ยูเรีย, ไตรกลีเซอไรด์, โคเลสเตอรอล, ครีเอตินีน, แอสพาเทตอะมิโนทรานสเฟอเรส (AST), อัลคาไลน์ฟอสฟาเตส (ALP) และฟอสฟอรัสถูกวัดโดยใช้เครื่องวิเคราะห์แบบตั้งโต๊ะอัตโนมัติแบบเข้าถึงได้เต็มรูปแบบ (Ellipse, อิตาลี) ความเข้มข้นของแคลเซียมในซีรั่มถูกกำหนดโดยสเปกโตรมิเตอร์การดูดซึมอะตอมของเปลวไฟ (Unicam Solar 939, Camberley, Surrey, UK)

2.2.2. ตัวชี้วัดทางชีวภาพของ Lipid Peroxidation

ความเข้มข้นของผลิตภัณฑ์ lipid peroxidation (ระดับ malondialdehyde, MDA) ในซีรั่มถูกวัดเป็นสารที่ทำปฏิกิริยากับกรดไทโอบาร์บิทูริก (TBARs) ตามวิธีการดัดแปลงสเปกโตรโฟโตเมตริกที่อธิบายโดย Costa และคณะ [21]. โดยสรุป ตัวอย่างซีรั่มถูกผสมกับสารละลายที่ประกอบด้วยกรดไตรคลอโรอะซิติก (15%; เมอร์ค, ดาร์มสตัดท์, เยอรมนี), กรดไทโอบาร์บิทูริก (0.38%; Sigma-Aldrich, เซนต์หลุยส์, มิสซูรี่, สหรัฐอเมริกา) และ กรดไฮโดรคลอริก (0.25 N; Mikrochem, Pezinok, สโลวาเกีย) และให้ความร้อนเป็นเวลา 30 นาทีในอ่างน้ำเดือด หลังจากทำให้เย็นลงในน้ำน้ำแข็งและการปั่นแยกแล้ว วัดค่าการดูดกลืนแสงของส่วนลอยเหนือตะกอนที่ 535 นาโนเมตร ความเข้มข้นของ TBAR ถูกกำหนดจากเส้นโค้งมาตรฐานที่เตรียมโดยใช้ 1,1,3,3-เตตระเมธ ออกซี โพรเพน (malondialdehyde-bis (ไดเมทิลอะซีตัล); Acros Organics, Geel, เบลเยียม) ผลลัพธ์ถูกแสดงเป็น nmol ของ MDA/mL ของซีรั่ม

cistanche พืชเพิ่มระบบภูมิคุ้มกัน

2.2.3. การทดสอบกิจกรรม Phagocyte และการระบุประชากรย่อยของเม็ดเลือดขาว

การทดสอบ Phagotest® เชิงพาณิชย์ (Celonic, มิวนิก, เยอรมนี) ถูกนำมาใช้เพื่อกำหนดฤทธิ์ของฟาโกไซต์และความสามารถในการกลืนกินของฟาโกไซต์ ปฏิบัติตามคำแนะนำของผู้ผลิตเมื่อทำการทดสอบ การสอบวิเคราะห์การย้อมภูมิคุ้มกันโดยตรงถูกนำมาใช้เพื่อระบุประชากรย่อยที่เลือกไว้ของลิมโฟไซต์ โมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อต้านสุกรของเมาส์คอนจูเกตสองชุด: CD3e/CD21 และ CD4/CD8a/CD25 ถูกนำมาใช้ตามข้อกำหนดเฉพาะที่ให้ไว้ในตารางที่ 2 เลือดเฮปารินไนซ์ในปริมาณ 50 ไมโครลิตรถูกบ่มด้วยโมโนโคลนอล แอนติบอดีเป็นเวลา 15 นาทีในความมืด ที่อุณหภูมิห้องปฏิบัติการ หลังจากการบ่ม สารละลายสลาย BD FACS 1 มิลลิลิตรถูกเติมไปยังหลอด หลอดถูกบ่มเพิ่มอีก 20 นาทีในที่มืดที่อุณหภูมิห้องปฏิบัติการ จากนั้นจึงปั่นเหวี่ยง (300× กรัม เป็นเวลา 5 นาที) จากนั้นล้างเม็ดเซลล์และปั่นแยกสองครั้งด้วยน้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 1 มล. (PBS; MP Biomedicals, Illkirch-Graffenstaden, ฝรั่งเศส) ที่ 300 × g เป็นเวลา 5 นาที ในที่สุด เซลล์ถูกแขวนลอยใหม่ใน 200 ไมโครลิตรของ PBS สำหรับการวิเคราะห์ทางไซโตเมทริกที่ตามมา

ตารางที่ 2 ข้อมูลจำเพาะและปริมาณของโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อต้านสุกรในหนูเมาส์ที่ใช้

การวิเคราะห์กิจกรรม Phagocytic เช่นเดียวกับการระบุประชากรย่อยของเม็ดเลือดขาวได้ดำเนินการบนโฟลว์ไซโตมิเตอร์ BD FACSCantoTM หกสี (Becton Dickinson Biosciences, San Jose, CA, USA) โดยใช้ซอฟต์แวร์ BD FACS DivaTM ตำแหน่งของเซลล์ที่วิเคราะห์ถูกควบคุมใน FSC เทียบกับ SSC dot plots แกรนูโลไซต์, มอนอไซต์ และประชากรเซลล์ทั้งสองรวมกัน ตามลำดับ ถูกควบคุมสำหรับการวิเคราะห์แอคติวิตีฟาโกไซติก จากปริมาณ DNA ที่ต่ำในฮิสโตแกรมเรืองแสงสีแดง (FL-2) การรวมตัวของแบคทีเรียจึงถูกแยกออกจากการวิเคราะห์เพิ่มเติม เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ฟาโกไซต์ที่ทำงานอยู่และความเข้มของฟลูออเรสเซนซ์เฉลี่ยถูกกำหนดในฮิสโตแกรมเรืองแสงสีเขียว (FL-1) ลิมโฟไซต์แบบมีรั้วรอบขอบชิด (รูปที่ 1a, b) ถูกนำมาใช้เพื่อระบุประชากรย่อยของลิมโฟไซต์ ลิมโฟไซต์ CD3+ แสดงถึงทีลิมโฟไซต์และลิมโฟไซต์ CD21+ B (รูปที่ 1c) ประชากรย่อย CD4+CD8- ได้รับการประเมินเป็นทีเฮลเปอร์ลิมโฟไซต์, CD4-CD8+ เป็นลิมโฟไซต์ที่เป็นพิษต่อเซลล์, CD4+CD8+ เป็น ทีลิมโฟไซต์ที่ให้ผลบวกสองเท่า (รูปที่ 1d) และ CD4+CD25+ เป็นทีลิมโฟไซต์ควบคุม (รูปที่ 1e) สัดส่วนของเซลล์เม็ดเลือดขาวแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์

2.3. การวิเคราะห์ทางสถิติ

ผลลัพธ์ได้รับการประเมินทางสถิติโดยการทดสอบทีแบบ unpaired กับซอฟต์แวร์ทางสถิติ GraphPad Prism 80 ค่า p < 0.05 ถือว่ามีนัยสำคัญทางสถิติ ผลลัพธ์ที่ได้จากการทดลองนี้แสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± ความคลาดเคลื่อนมาตรฐานของค่าเฉลี่ย (SEM)

รูปที่ 1 กลยุทธ์การเกต: (a) การกำหนดตำแหน่งของลิมโฟไซต์ (สีแดง) บนจุดพื้นฐาน (FSC-A เทียบกับ SSC-A); (b) การแยกดับเบิ้ลต์และกลุ่มก้อนออกจากการวิเคราะห์ (c) การวิเคราะห์การแสดงแทนของลิมโฟไซต์ CD3+ และ CD21+ (d) การวิเคราะห์การแสดงแทนของลิมโฟไซต์ CD4+ และ CD8+ (e) การกำหนดแทนของลิมโฟไซต์ CD4+CD25+ บนฮิสโตแกรมจากเซลล์บวก CD4+ (ที่มีรั้วสีเขียว)

3. ผลลัพธ์

3.1. พารามิเตอร์ทางชีวเคมีทางโลหิตวิทยาและซีรั่ม

ผลกระทบของ HS ต่อโปรไฟล์ทางโลหิตวิทยาและชีวเคมีแสดงไว้ในตารางที่ 3 พารามิเตอร์ของเลือดที่กำหนดซึ่งรวมถึงปริมาณของเซลล์เม็ดเลือดแดง เซลล์เม็ดเลือดขาว ฮีโมโกลบิน ฮีมาโตคริต ปริมาตรร่างกายเฉลี่ย โปรตีนทั้งหมด อัลบูมิน กลูโคส ยูเรีย ไตรกลีเซอไรด์ , โคเลสเตอรอล, ครีเอตินีน, AST, Ca และ P ไม่ได้รับผลกระทบจากการรักษาด้วย HS ในอาหาร อย่างไรก็ตาม การเสริมอาหารด้วย HS เพิ่มการทำงานของ ALP (p < 0.05)

ตารางที่ 3 ผลของสารฮิวมิกต่อพารามิเตอร์ทางโลหิตวิทยาและซีรัมทางชีวเคมีในลูกสุกร

ระดับ TBAR ในซีรั่ม ซึ่งเป็นผลิตภัณฑ์รองของการเกิดออกซิเดชันของไขมัน (ซึ่งเป็นพารามิเตอร์สำคัญที่ใช้ในการกำหนดของการเกิดออกซิเดชันของไขมัน) ไม่ได้รับผลกระทบจากการเติม HS

3.2. การตอบสนองทางภูมิคุ้มกันของเซลล์

การเติม HS ในอาหารของลูกสุกรไม่มีผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญต่อเปอร์เซ็นต์ของเซลล์ฟาโกไซต์ที่ทำงานอยู่ (ตารางที่ 4) และความสามารถในการกลืนของเซลล์ฟาโกไซต์ (ตารางที่ 5) พบค่าที่สูงกว่าของพารามิเตอร์การตอบสนองทางภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติเหล่านี้ในกลุ่มทดลองเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม

ตารางที่ 4. ผลของสารฮิวมิกต่อการทำงานของฟาโกไซต์ในเลือดของลูกสุกร ประเมินเป็นเปอร์เซ็นต์ของฟาโกไซต์ที่ทำงานอยู่—กิจกรรมฟาโกไซติก

ตารางที่ 5. ผลของสารฮิวมิกต่อความสามารถในการดูดซับของฟาโกไซต์ที่แสดงเป็นความเข้มของแสงฟลูออเรสเซนซ์เฉลี่ย (MFI)

รูปที่ 2 ต่อ

รูปที่ 2 ผลของสารฮิวมิกต่อเปอร์เซ็นต์ของลิมโฟไซต์: (a) CD3+; (b) ซีดี21+; (ค) ซีดี4+ซีดี8-; (ง) ซีดี4-ซีดี8+; (จ) ซีดี4+ซีดี8+; (f) ซีดี4+ซีดี{{10}}; และ (g) อัตราส่วนของ CD4:CD8 ลิมโฟไซต์ในเลือดของลูกสุกร คอลัมน์ที่มีเครื่องหมายดอกจันแตกต่างจากคอลัมน์ควบคุมอย่างมีนัยสำคัญ (*** p < 0.001)

4. การอภิปราย

4.1. การตอบสนองทางภูมิคุ้มกันของเซลล์

วัตถุประสงค์หลักของการศึกษาของเราคือเพื่อติดตามว่าสารฮิวมิก (HS) ส่งผลต่อตัวบ่งชี้ภูมิคุ้มกันของเซลล์ที่แตกต่างกันอย่างไร เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ฟาโกไซต์ที่ทำงานอยู่และความสามารถในการกลืนของพวกมันถูกเลือกเป็นตัวบ่งชี้สำหรับการติดตามผลต่อภูมิคุ้มกันของเซลล์โดยธรรมชาติ ในการศึกษาก่อนหน้านี้ พบว่าการเพิ่ม HS ในอาหาร ({{0}}.8%) ของไก่เนื้อเพิ่มกิจกรรมฟาโกไซติกอย่างมีนัยสำคัญรวมถึงความเข้มของแสงฟลูออเรสเซนต์เฉลี่ย [16] นอกจากนี้ ELnaggar และ El-Kelawy [22] ยังสังเกตเห็นการเพิ่มขึ้นของกิจกรรมฟาโกไซติกและดัชนีฟาโกไซติกหลังจากการเสริมกรดฮิวมิกในอาหาร (0.1, 0.2 และ 0 4%) ของไก่ Sacco ผลการวิจัยที่คล้ายกันนี้เกิดขึ้นกับแม่ไก่ไข่ [17] ในการศึกษาปัจจุบัน การเสริม HS ในอาหารของลูกสุกรไม่มีผลกระทบที่มีนัยสำคัญต่อเซลล์ทำลายเซลล์ อย่างไรก็ตาม เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ฟาโกไซต์ที่ทำงานอยู่ตลอดจนความสามารถในการกลืนของพวกมันในลูกสุกรที่เสริมด้วย HS นั้นสูงกว่าในลูกสุกรในกลุ่มควบคุมในเชิงตัวเลข จากข้อมูลของ Sanmiguel และ Rondón [23] ผลของ HS ต่อ phagocytes ขึ้นอยู่กับเวลา พวกเขาพบว่าการเสริม HS ในอาหาร (0.1 และ 0.2%) ของแม่ไก่ไข่ช่วยเพิ่มดัชนีฟาโกไซติกในวันที่ 8 และ 30 ของการใช้ แต่เปรียบเทียบกัน ถึงชาววังและคณะ [2] ซึ่งพบว่าสุกรที่กินอาหารโดยเติม HS เข้าไป 10% มีจำนวนลิมโฟไซต์สัมพันธ์ที่สูงกว่า ผลลัพธ์ที่คล้ายกันนี้เกิดขึ้นกับสัตว์ปีกที่ได้รับอาหารเสริมด้วยฮิวมิก 0.15% [24] หรือเสริมด้วยกรดฮิวมิก 20 มก./น้ำหนักตัว 1 กก. ในน้ำดื่ม [25] ตามข้อมูลของ Cetin และคณะ [24] การเสริมอาหารของแม่ไก่ไข่ด้วยสารประกอบฮิวมิกส่งผลให้จำนวนเม็ดเลือดขาวเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งอาจเป็นผลมาจากการผลิต IL-2 ที่เพิ่มขึ้น เช่นเดียวกับการแสดงออกของ IL{{29} } รีเซพเตอร์บนลิมโฟไซต์ สารฮิวมิกดูเหมือนจะเพิ่มประสิทธิภาพการทำงานของ IL-2-การสร้างเซลล์ อย่างไรก็ตาม ผู้เขียนคนอื่นๆ ไม่ได้สังเกตเห็นผลกระทบที่มีนัยสำคัญต่อจำนวนเม็ดเลือดขาวในสุกรที่ได้รับอาหารเสริมกรดฮิวมิก [26] เช่นเดียวกับในไก่ที่ได้รับกรดฮิวมิกในน้ำดื่ม [27] หรือในอาหารของพวกเขา [22] . ผลลัพธ์ของเราคล้ายกับการสังเกตของ Mudro ˇnová และคณะ [16] ซึ่งพบว่าเปอร์เซ็นต์ของเซลล์เม็ดเลือดขาว CD4 เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญสำหรับไก่เนื้อที่เลี้ยงด้วยอาหารเสริม HS (0.8%) เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม พวกเขายังสังเกตเห็นการลดลงอย่างมีนัยสำคัญในลิมโฟไซต์ CD8+ (ทีเซลล์ลิมโฟไซต์ที่เป็นพิษต่อเซลล์) ซึ่งส่งผลให้อัตราส่วน CD4:CD8 สูงขึ้นทางสถิติ ซึ่งใช้เป็นเครื่องหมายของการกระตุ้นภูมิคุ้มกัน ในทางกลับกัน การให้อาหารแม่ไก่ไข่ด้วยอาหาร 0.5% HS เพิ่มสัดส่วนของ IgM+ ลิมโฟไซต์ที่เป็นตัวแทนของประชากรย่อยของ B ลิมโฟไซต์อย่างมีนัยสำคัญ และลดสัดส่วนของลิมโฟไซต์ CD3+ ที่เป็นตัวแทนของ T ลิมโฟไซต์ทั้งหมดอย่างมีนัยสำคัญ สัดส่วนของ T helper และ T lymphocytes ที่เป็นพิษต่อเซลล์ไม่ได้รับผลกระทบ [17] จากผลลัพธ์ของเรา รวมถึงการศึกษาต่างๆ พบว่า HS สามารถมีผลในการกระตุ้นภูมิคุ้มกันซึ่งอาจได้รับอิทธิพลจากองค์ประกอบและปริมาณของฮิวเมตที่ใช้ วิธีการบริหาร ชนิดของสัตว์ และตามข้อมูลของ ELnaggar และ El -Kelawy [22] โดยการเลี้ยงสัตว์ในภูมิภาคต่างๆ ของโลก ซึ่งมีสภาพอากาศต่างกัน การปรับภูมิคุ้มกันของ HS ในทางทฤษฎีอาจประกอบด้วยการก่อตัวของสารเชิงซ้อนของฮิวเมตกับแซ็กคาไรด์ สารเชิงซ้อนเหล่านี้จับกับพื้นผิวของทีลิมโฟไซต์และเซลล์ NK และส่งผลต่อการทำงานของพวกมัน รวมถึงการผลิตไซโตไคน์ ซึ่งมีอิทธิพลต่อเซลล์อื่นๆ ของระบบภูมิคุ้มกันต่อไป [28]

cistanche tubulosa-ปรับปรุงระบบภูมิคุ้มกัน

4.2. พารามิเตอร์ทางชีวเคมีทางโลหิตวิทยาและซีรั่ม

วัตถุประสงค์อีกประการหนึ่งของการศึกษานี้คือเพื่อประเมินพารามิเตอร์ทางโลหิตวิทยาและทางชีวเคมีที่เลือกสรรของอาหารที่เลี้ยงลูกสุกรเสริมด้วย HS ไม่พบความแตกต่างที่มีนัยสำคัญในตัวแปรที่เลือกของโปรตีน พลังงาน และเมแทบอลิซึมของแร่ธาตุ ตลอดจนดัชนีทางโลหิตวิทยา พบระหว่างกลุ่มทดลองของสัตว์ที่ได้รับอาหารเสริม HS ในอาหาร และกลุ่มควบคุม ยกเว้นกิจกรรม ALP ในการศึกษาปัจจุบัน ตัวชี้วัดทางชีวเคมีในการศึกษาของเราอยู่ในช่วงอ้างอิงในลูกสุกรทุกตัว ตามข้อมูลของ Doubek และคณะ [29] และคราฟท์และดูร์ [30] การค้นพบของเราสอดคล้องกับงานก่อนหน้าของ Wang และคณะ [2] ซึ่งไม่พบการเปลี่ยนแปลงที่มีนัยสำคัญในเซลล์เม็ดเลือดแดงและเม็ดเลือดขาวในระหว่างการทดลองในการศึกษา เพื่อค้นหาผลกระทบของ HS ต่อตัวแปรในเลือดในสุกรขั้นสุดท้าย หลังการรักษาด้วยอาหารที่มี HS Herzig และคณะ [31] และ Šamudovská และ Demeterová [32] พบว่ากิจกรรมของ ALP ในไก่เพิ่มขึ้นอย่างไม่มีนัยสำคัญ ในการสืบสวนของเรา เราพบว่ากลุ่มทดลองมีกิจกรรม ALP สูงกว่ากลุ่มควบคุมอย่างมีนัยสำคัญ ในขณะเดียวกันค่าของพวกเขายังคงอยู่ในช่วงอ้างอิงสำหรับระดับ ALP ของสุกร (2–17 kat·L −1 ) [29,30] ในทางกลับกัน Jad'uttová และคณะ [33] และราธ และคณะ [34] สังเกตเห็นการลดลงอย่างมีนัยสำคัญของกิจกรรม ALP ในไก่หลังจากให้อาหารด้วย HS ผู้เขียนเหล่านี้ระบุว่าระดับ ALP ในเลือดในไก่เนื้อที่ได้รับอาหารเสริม HS 1.00% ลดลง แม้ว่าค่ากิจกรรม ALP ใน Rath และคณะจะลดลง การศึกษามีความแตกต่างจากกลุ่มควบคุมในทางสถิติ โดยไม่ได้สะท้อนถึงผลกระทบที่เป็นพิษของ HS ต่ออวัยวะที่เลือกสรร (กล้ามเนื้อ ไต หัวใจ หรือตับ) ปริมาณ HS ที่ได้จากอาหารอาจส่งผลต่อความเข้มข้นของแร่ธาตุในเลือด ระดับแคลเซียมและฟอสฟอรัสในเลือดของลูกสุกรไม่ได้รับผลกระทบจากการให้ HS ที่ความเข้มข้น 0.5% ความสามารถของ H2S ในการคีเลตโลหะ ซึ่งได้รับอิทธิพลจากโซ่ด้านข้างของกรดคาร์บอกซิลิกในปริมาณที่มีนัยสำคัญ อาจเป็นสาเหตุของการลดลงของความเข้มข้นของแร่ธาตุในซีรั่ม [34] ในการศึกษาของเรา ความเข้มข้นของแคลเซียมและฟอสฟอรัสในเลือดลูกสุกรไม่ลดลงต่ำกว่าค่าอ้างอิงโดยการเติม HS ลงในส่วนผสมอาหารของกลุ่มทดลอง MDA เป็นผลิตภัณฑ์ของการเกิด lipid peroxidation ที่เกิดจากอนุมูลอิสระของออกซิเจน ซึ่งสามารถใช้เป็นเครื่องหมายในการประเมินสถานะสารต้านอนุมูลอิสระและการเกิด lipid peroxidation [35] MDA ถูกกำหนดให้เป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพของความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันโดยการวัดระดับของสารที่ทำปฏิกิริยากับกรดไทโอบาร์บิทูริก (TBAR) ในเลือด ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชั่นที่ลดลงนั้นมีลักษณะเฉพาะคือการลดลงของระดับ MDA การวิจัยก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่า HS อาจมีคุณสมบัติต้านอนุมูลอิสระ ซึ่งป้องกันความผิดปกติต่างๆ ที่เกี่ยวข้องกับความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชั่นที่มักเกิดจากอนุมูลอิสระ ตัวอย่างเช่น Wang และคณะ [15] พบว่าการเสริมอาหารด้วยโซเดียมฮิเมต (2000 มก.·กก.−1 ) สามารถปรับปรุงสถานะต้านอนุมูลอิสระของลูกสุกรหย่านมได้ พวกเขาสังเกตเห็นการลดลงอย่างมีนัยสำคัญของปริมาณ MDA ในซีรั่ม เช่นเดียวกับการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญของความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระทั้งหมด อย่างไรก็ตาม HS เป็นวัสดุธรรมชาติที่มีองค์ประกอบแปรผัน ซึ่งอาจทำให้เกิดประสิทธิภาพที่แตกต่างกัน ซึ่งอาจขึ้นอยู่กับปริมาณที่จ่ายเข้าไปด้วย ในการทดลองปัจจุบัน ไม่พบการเปลี่ยนแปลงในระดับ MDA ในซีรั่ม (TBARs) ของลูกสุกรที่เลี้ยง HS เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม ผลลัพธ์ของเราสอดคล้องกับ Zhang และคณะ [36] ซึ่งพบว่าการเติมโซเดียมฮิเมตในอาหาร (0.1, 0.3 และ 0.5%) ของแม่ไก่ไข่ไม่ส่งผลต่อความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระรวมในซีรั่มและค่า MDA

ประโยชน์ของอาหารเสริม Cistanche-วิธีเสริมสร้างระบบภูมิคุ้มกัน

5. สรุปผลการวิจัย

จากผลลัพธ์ที่ได้รับในการศึกษานี้อาจสรุปได้ว่าการเสริมอาหารที่มีสารฮิวมิก 0.5% อาจมีผลกระตุ้นต่อเซลล์ภูมิคุ้มกันบางชนิดในลูกสุกร มีการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในสัดส่วนของ CD4+CD8- ลิมโฟไซต์ในเลือด การเสริมด้วยสารฮิวมิกทำให้ซีรั่ม ALP เพิ่มขึ้น อย่างไรก็ตาม ค่าเหล่านี้ยังอยู่ในช่วงอ้างอิง ผลการวิจัยพบว่าแม้ความเข้มข้นของ HS ที่ต่ำเช่นนี้ก็สามารถส่งผลเชิงบวกต่อภูมิคุ้มกันของเซลล์ในลูกสุกรได้ เนื่องจากความเข้มข้นของสารฮิวมิกที่เราเลือกมีผลอย่างมีนัยสำคัญต่อตัวบ่งชี้ภูมิคุ้มกันของเซลล์บางประการเท่านั้น การศึกษาเพิ่มเติมจึงจำเป็นต้องเลือกความเข้มข้นที่เหมาะสมและยืนยันผลการกระตุ้นภูมิคุ้มกันในสัตว์ประเภทนี้

อ้างอิง

1. เปนญา-เม็นเดซ, EM; ฮาเวล เจ.; Patoˇcka, J. สารฮิวมิก-สารประกอบที่ยังไม่ทราบโครงสร้าง: การประยุกต์ในการเกษตร อุตสาหกรรม สิ่งแวดล้อม และชีวเวชศาสตร์ เจ. แอพพลิเคชั่น ชีวการแพทย์ 2548, 3, 13–24. [ครอสอ้างอิง]

2. วังคิว.; เฉิน วายเจ; ยู เจเอส; คิม ฮจ.; โช เจเอช; Kim, IH ผลของสารฮิวมิกเสริมต่อประสิทธิภาพการเจริญเติบโต ลักษณะเลือด และคุณภาพเนื้อสัตว์ในสุกรตกแต่ง มีชีวิตชีวา วิทยาศาสตร์ 2008, 117, 270–274. [ครอสอ้างอิง]

3. Visser, SA ผลของสารฮิวมิกต่อสัตว์และมนุษย์ที่สูงขึ้น การใช้สารประกอบฮิวมิกในการรักษาพยาบาลที่เป็นไปได้ ใน รายงานการประชุมของสมาคมกรดฮิวมิกนานาชาติ, เซบียา, สเปน, 1988; พี 27.

4. สตีเวนสัน, FJ ฮิวมัสเคมี: ปฐมกาล องค์ประกอบ ปฏิกิริยา; ไวลีย์-อินเตอร์-วิทยาศาสตร์: นิวยอร์ก, นิวยอร์ก, สหรัฐอเมริกา, 1994; หน้า 34–41.

5. ฮัสซัน HMA; โมฮาเหม็ด, แมสซาชูเซตส์; ยุสเซฟ, AW; Hassan, ER ผลของการใช้กรดอินทรีย์เพื่อทดแทนสารเร่งการเจริญเติบโตของยาปฏิชีวนะต่อประสิทธิภาพและจุลินทรีย์ในลำไส้ของไก่เนื้อ เอเชีย-ออสเตรเลีย เจ.แอนิม. วิทยาศาสตร์ 2010, 23, 1348–1353. [ครอสอ้างอิง]

6. กาลิก บ.; ฮร์นคาร์, C.; กาปาโรวีค, ม.; โรลิเนค ม.; Hanušovský, O.; จูราเชค, ม.; ชิมโก ม.; ซาบรานสกี้, L.; Kovacik, A. ผลของสารฮิวมิกต่อคุณภาพเนื้อสัตว์ในการขุนไก่ฟ้าในฟาร์ม (Phasianus colchicus) เกษตร 2023, 13, 295. [CrossRef]

7. คาราโอกลู ม.; มาซิท ม.; เอเซนบูกา น.; เดอร์แด็ก เอช.; ตุรกุต ล.; Bilgin, OC ผลของฮิวเมตเสริมในระดับต่างๆ ต่อประสิทธิภาพการเจริญเติบโต การฆ่า และลักษณะซากของไก่เนื้อ นานาชาติ เจ. โพล. วิทยาศาสตร์ 2004, 3, 406–410.

8. จีเอฟ.; แมคโกลน เจเจ ; Kim, SW ผลของสารฮิวมิกในอาหารต่อการเจริญเติบโตของสุกร ลักษณะซาก และการปล่อยแอมโมเนีย เจ.แอนิม. วิทยาศาสตร์ 2549, 84, 2482–2490. [ครอสอ้างอิง]

9. Lacková, Z.; ซิโก้ ฟ.; Farkašová, Z.; Ondrašoviˇcová, S. ผลของสารฮิวมิกในฐานะอาหารเสริมออร์แกนิกต่อประสิทธิภาพการขุน คุณภาพของเนื้อสัตว์ และพารามิเตอร์ทางชีวเคมีที่เลือกของกระต่าย ชีวิต 2022, 12, 1016 [CrossRef]

10. เคฟสกา ม.; ลอเรนโควา, อ.; วิเดนสกา ป.; เซดลาร์, เค.; โปรวาซนิค, I.; Trckova, M. ผลของโซเดียมฮิเมตและซิงค์ออกไซด์ที่ใช้ในการป้องกันโรคท้องร่วงหลังหย่านมต่อองค์ประกอบของจุลินทรีย์ในอุจจาระในลูกสุกรหย่านม สัตวแพทย์ ยา 2016, 61, 328–336. [ครอสอ้างอิง]

11. ตรโควา ม.; มัตโลวา, ล.; ฮัดโควา, เอช.; มาร์ติน เอฟ.; ซราลี, ซ.; ดวอร์สกา, ล.; เบรัน, ว.; Pavlik, I. Peat เป็นอาหารเสริมสำหรับสัตว์: บทวิจารณ์ สัตวแพทย์ ยา -เช็ก 2548, 50, 361–377. [ครอสอ้างอิง]

12. เวเบอร์ เท็กซัส; ฟาน ซัมบีก, DM; เกเบลอร์ เอ็นเค; เคอร์ บีเจ; มอร์แลนด์ ส.; โจฮาล ส.; Edmonds, MS ผลของฮิวมิกและกรดบิวริกในอาหารต่อประสิทธิภาพการเจริญเติบโตและการตอบสนองต่อไลโปโพลีแซ็กคาไรด์ในลูกหมู เจ.แอนิม. วิทยาศาสตร์ 2014, 92, 4172–4179. [ครอสอ้างอิง]

13. เหมา, วาย. การปรับประสิทธิภาพการเจริญเติบโต องค์ประกอบของเนื้อสัตว์ สถานะออกซิเดชัน และภูมิคุ้มกันของไก่เนื้อด้วยกรดฟุลวิคในอาหาร โพล วิทยาศาสตร์ 2019, 98, 4509–4513. [CrossRef] [PubMed]

14. Stepchenko, LM บทบาทของการเตรียมฮิวมิกในการจัดการกระบวนการเมแทบอลิซึมในการสร้างผลิตภัณฑ์ทางชีวภาพของสัตว์เกษตร ใน ความสำเร็จและอนาคตสำหรับการใช้สารฮิวมิกในการเกษตร; สำนักพิมพ์ของสถาบันเกษตร: Dnepropetrovsk, ยูเครน, 2551; หน้า 70–74. (เป็นภาษารัสเซีย)

15. วัง คิว.; หญิงเจ.; โซ, ป.; โจว ย.; วัง บ.; ยู ด.; หลี่วว.; Zhan, X. ผลของการเสริมอาหารของโซเดียมกรดฮิวมิกและซิงค์ออกไซด์ต่อประสิทธิภาพการเจริญเติบโต สถานะภูมิคุ้มกัน และความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของลูกสุกรหย่านม สัตว์ 2020, 10, 2104 [CrossRef] [PubMed]

16. มูโดร ˇnová, D.; คาราฟโฟวา, วี.; เปชูโลวา ต.; Košˇcová, เจ.; มารุชคาโควา ไอซี; บาร์ตคอฟสกี้ ม.; Marcinˇcáková, D.; Ševˇcíková, Z.; Marcinˇcák, S. ผลของสารฮิวมิกต่อจุลินทรีย์ในลำไส้และการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันของไก่เนื้อ อาหารเกษตร. อิมมูนอล. 2020, 31, 137–149. [ครอสอ้างอิง]

17. มูโดร ˇnová, D.; คาราฟโฟวา, วี.; เซมจอน บ.; นัด',พี.; Košˇcová, เจ.; บาร์ตคอฟสกี้ ม.; มาคิช, อ.; บุจ ˇnak, L.; นากี้ เจ.; โมจซิโชวา, เจ.; และคณะ ผลของการเสริมสารฮิวมิกในอาหารต่อพารามิเตอร์การผลิต ภาวะภูมิคุ้มกัน และจุลินทรีย์ในลำไส้ของแม่ไก่ไข่ เกษตร 2021, 11, 744. [CrossRef]

18. คณะกรรมาธิการยุโรป Directive 2010/63/EU ของรัฐสภายุโรปและคณะมนตรีลงวันที่ 22 กันยายน 2010 ว่าด้วยการคุ้มครองสัตว์ที่ใช้เพื่อวัตถุประสงค์ทางวิทยาศาสตร์ ปิด. เจ.เออ. ยูเนี่ยน 2010, 276, 33–79

19. ชิเมเชค เค.; ซีแมน, ล.; Heger, J. ความต้องการสารอาหารและตารางคุณค่าทางโภชนาการของอาหารสุกร, ฉบับที่ 3; สถาบันวิทยาศาสตร์การเกษตรเช็ก: เบอร์โน สาธารณรัฐเช็ก 2000; 125น. (ในภาษาเช็ก)

20. คณะกรรมาธิการยุโรป กฎข้อบังคับของคณะกรรมาธิการ (EC) เลขที่ 152/2009 วันที่ 27 มกราคม 2552 กำหนดวิธีการสุ่มตัวอย่างและการวิเคราะห์เพื่อการควบคุมอาหารสัตว์อย่างเป็นทางการ ปิด. เจ.เออ. ยูเนี่ยน 2552, 54, 2–54.

21. คอสตา CM; ซานโตส, RCC; Lima, ES ขั้นตอนอัตโนมัติอย่างง่ายสำหรับการวัดไทออลในตัวอย่างซีรั่มของมนุษย์ เจ.บราส. ปตท. ยา แล็บ. 2549, 42, 345–350. [ครอสอ้างอิง]

22. เอลนักการ์ อส; เอล-เคลาวี มิชิแกน ผลของการเสริมกรดฮิวมิกต่อประสิทธิภาพการผลิต ส่วนประกอบของเลือด การตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกัน และลักษณะซากของไก่ Sasso อียิปต์. เจ.แอนิม. แยง. 2018, 55, 75–84.

23. ซานมิเกล ประชาสัมพันธ์; Rondón, BI การเสริมด้วยสารฮิวมิกส่งผลต่อภูมิคุ้มกันโดยกำเนิดในแม่ไก่ไข่ในระยะอดอาหาร รายได้ MVZ Córdoba 2016, 21, 5198–5210 [ครอสอ้างอิง]

24. เซติน อี.; กูคลู, กรุงเทพฯ; Cetin, N. ผลของการเสริมฮิวเมตในอาหารและกรดอินทรีย์ต่อความเครียดทางสังคมที่เกิดจากความหนาแน่นของฝูงไก่ไข่สูง เจ.แอนิม. สัตวแพทย์ โฆษณา 2011, 10, 2402–2407.

25. ซาลาห์, ฮ.; มานซูร์ อี.; เรแฮม RR; Abd El Hamid, ES การศึกษาผลของกรดฮิวมิกต่อประสิทธิภาพการเจริญเติบโต ภูมิคุ้มกัน พารามิเตอร์บางอย่างของเลือด และการควบคุมคลอสตริเดียมในลำไส้ในไก่เนื้อ แซก. สัตวแพทย์ เจ. 2015, 43, 102–109. [ครอสอ้างอิง]

26. คิม ก.; แบ้ ฉัน.; โช เจ.; ชอย ย.; ฮ่า เจ.; Choi, J. ผลของการเสริมกรดฮิวมิกและผงใบบลูเบอร์รี่ในอาหารต่อผลผลิต คุณภาพเลือดและเนื้อของสุกรขั้นสุดท้าย วิทยาศาสตร์การอาหาร แอนิเมชั่น. ทรัพยากร 2019, 39, 276–285. [CrossRef] [PubMed]

27. ลาล่า เอโอ; อ็อคเวลัม น.; อิเรคอร์, OT; โอกุนเลด, บริติชแอร์เวย์; อดิกัน, AA; เอเลเบด ลุยเซียนา; Oyedeji, MM พารามิเตอร์ทางโลหิตวิทยาและชีวเคมีของไก่เนื้อที่เสริมด้วยกรดฮิวมิกในน้ำดื่ม ใบสมัคร ทรอป. เกษตร. 2016, 21, 74–78.

28. Terratol, LLC ผลกระทบของกรดฮิวมิกต่อสัตว์และมนุษย์ พร้อมใช้งานออนไลน์: https://fulvic.info/wp-content/uploads/2019 /01/M-Terratrol_บทความ-1.pdf (เข้าถึงเมื่อวันที่ 10 สิงหาคม 2022)

29. ดูเบ็ก เจ.; Šlosárková, ส.; ˇReháková, K.; บูดา เจ.; เชียร์ พี.; Piperisová, I.; Tomenendálová, เจ.; Matalová, E. การตีความการค้นพบทางชีวเคมีและโลหิตวิทยาขั้นพื้นฐานในสัตว์, ฉบับที่ 2; โนวิโก: เบอร์โน สาธารณรัฐเช็ก 2010; พี 102. (ภาษาเช็ก)

30. คราฟท์ ว.; Dürr, UM Klinická Laboratórna Diagnostika จาก Veterinárnej Medicíne, 1st ed.; ฮัจโก & ฮัจโควา: บราติสลาวา สโลวาเกีย 2544; หน้า 1–380. (ในภาษาสโลวัก)

31. เฮอร์ซิก ไอ.; Navrátilová, ม.; โทตูเชค เจ.; ซูชี่ ป.; เวเซเรก, วี.; บลาโฮวา เจ.; Zralý, Z. ผลของกรดฮิวมิกต่อการสะสมสังกะสีในเนื้อเยื่อไก่เนื้อ เช็ก เจ. แอนิม. วิทยาศาสตร์ 2552, 54, 121–127. [ครอสอ้างอิง]

32. Šamudovská, A.; Demeterová, M. ผลของอาหารที่เสริมด้วยสารประกอบฮิวมิกธรรมชาติและโซเดียมฮิเมตต่อประสิทธิภาพและตัวแปรเมตาบอลิซึมที่เลือกในไก่เนื้อ แอคต้า เวท. เบอร์โน 2010, 79, 385–393. [ครอสอ้างอิง]

33. Jad'uttová, I.; Marcinˇcáková, D.; บาร์ตคอฟสกี้ ม.; เซมจอน บ.; Harˇcárová, ม.; นาเกียววา, อ.; วัคซี, ป.; Marcinˇcák, S. ผลของสารฮิวมิกในอาหารต่อประสิทธิภาพการขุน ผลผลิตซาก พารามิเตอร์ทางชีวเคมีในเลือด และโปรไฟล์แร่กระดูกของไก่เนื้อ แอคต้า เวท. เบอร์โน 2019, 88, 307–313. [ครอสอ้างอิง]

34. ราธ นอร์ทแคโรไลนา; ฮัฟฟ์ เรา; Huff, GR ผลกระทบของกรดฮิวมิกต่อไก่เนื้อ โพล วิทยาศาสตร์ 2549, 85, 410–414. [ครอสอ้างอิง]

35. สุมิดะ ส.; ทานาคา, ก.; คิทาโอะ, ฮ.; Nakadomo, F. การเกิดออกซิเดชันของไขมันที่เกิดจากการออกกำลังกายและการรั่วไหลของเอนไซม์ก่อนและหลังการเสริมวิตามินอี นานาชาติ เจ. ไบโอเคม. 1989, 21, 835–838. [ครอสอ้างอิง]

36. จาง, AR; เพียร์ซาโด, เซาท์แคโรไลนา; หลิว GH; เฉิน แซดเอ็ม; ช้าง, WH; ไค, HY; ไบรเดน, เวสต์เวอร์จิเนีย; Zheng, AJ การเสริมอาหารด้วยโซเดียมฮิเมตช่วยเพิ่มคุณภาพไข่และการทำงานของระบบภูมิคุ้มกันของแม่ไก่ไข่ เจ. แอพพลิเคชั่น แอนิเมชั่น. นูทริ 2020, 8, 93–99. [ครอสอ้างอิง]