บทบาทสำคัญของการเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเจริญเติบโต (TGF-) ในการพัฒนาภาวะไตวาย

ติดต่อ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 อีเมล:audrey.hu@wecistanche.com

ตอนที่ Ⅰ: บทบาทของไฟโบรบลาสต์ไตปฐมภูมิของมนุษย์ใน TGF- 1-อุปกรณ์เลียนแบบการพังผืดที่เป็นสื่อกลาง

Seong-Hye Hwang, Yun-Mi Lee และคณะ

1. บทนำ

พังผืดของไตซึ่งเป็นวิถีทั่วไปขั้นสุดท้ายของโรคไตที่ลุกลามอย่างรวดเร็วนับไม่ถ้วน มีลักษณะเฉพาะโดยการเพิ่มการผลิตโปรตีนเมทริกซ์นอกเซลล์ (ECM) การเสื่อมสภาพของเมทริกซ์ที่ลดลง ความผิดปกติของปฏิสัมพันธ์ระหว่างเซลล์กับเมทริกซ์ การเปลี่ยนแปลงของเซลล์ที่อยู่อาศัย และการแทรกซึมของเซลล์อักเสบการเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-(TGF-) เป็นเปปไทด์ไดเมอร์แบบมัลติฟังก์ชั่นที่ควบคุมกระบวนการทางชีววิทยา เช่น การเพิ่มจำนวนเซลล์ การแยกความแตกต่าง และการตอบสนองทางภูมิคุ้มกัน [1] ท่ามกลางปัจจัยไฟโบรเจนิกมากมาย TGF- (การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-) มีบทบาทสำคัญและมีฤทธิ์ต้านการอักเสบ ทีจีเอฟ- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)- หนูที่บกพร่องตายจากการอักเสบครั้งใหญ่ หนูเมาส์แปลงพันธุ์แสดง TGF มากเกินไป- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)แทบไม่ได้รับการปกป้องจากการพัฒนาพยาธิสภาพของไฟโบรติกในไต ส่วนใหญ่ผ่านฤทธิ์ต้านการอักเสบ [2] คุณสมบัติ profibrotic และต้านการอักเสบของ TGF-(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)เป็นดาบสองคมเกี่ยวกับการประยุกต์ใช้ TGF- ในการรักษา(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)การยับยั้ง มีความพยายามอย่างน่าทึ่งในการขัดขวาง TGF-(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)การกระทำที่ขัดขวางความก้าวหน้าของไตพังผืด[3]. แม้ว่าจะมีการใช้วิธีการมากมายในการต่อสู้ไตพังผืดแบบจำลองการทดลองเพื่อประเมินยาที่มีอยู่ในปัจจุบันนั้นไม่เหมาะ

สมุนไพร Cistanche ป้องกันโรคไต

โดยทั่วไป การศึกษาในสัตว์ทดลองมีบทบาทสำคัญในการทดสอบพรีคลินิกในการทำนายเภสัชจลนศาสตร์และประสิทธิภาพของยา อย่างไรก็ตาม สัตว์และมนุษย์มีความแตกต่างกันหลายอย่าง ซึ่งทำให้เราต้องตั้งคำถามถึงความถูกต้องของการทดสอบประสิทธิภาพยาจากสัตว์และการทดสอบความปลอดภัย 4. รายงานก่อนหน้านี้ขึ้นอยู่กับการศึกษาในสัตว์ทดลองก่อนคลินิกในระหว่างการพัฒนายาเพื่อประเมินความเป็นพิษต่อไตและความปลอดภัยของยา การทำงานของไตของสัตว์มากกว่าสองเท่าของไตของมนุษย์ ดังนั้น ยาจะถูกเผาผลาญเร็วกว่าในสัตว์เร็วกว่าในมนุษย์ ทำให้ยากต่อการอธิบายผลการทดสอบความเป็นพิษของยาโดยใช้การศึกษาในสัตว์ทดลอง นอกจากนี้ ผลการทดลองในสัตว์ไม่สามารถใช้ทำนายการตอบสนองของยาในมนุษย์ได้ เนื่องจากสัตว์มีหน้าที่ทางสรีรวิทยาที่แตกต่างกัน อิงจากสัตว์พังผืดของไตตัวแบบมีปัญหาในการสืบพันธุ์ของมนุษย์พังผืดของไต; ด้วยเหตุนี้ การวิจัยจึงกำลังดำเนินการเพื่อเอาชนะอุปสรรคในปัจจุบันและเพิ่มประสิทธิภาพแพลตฟอร์มการค้นพบยา [5]

เทคโนโลยี Organ-on-a-chip (OoC) ได้กลายเป็นแนวคิดใหม่ในการแก้ปัญหาเหล่านี้ แพลตฟอร์มนี้ได้รับการออกแบบโดยคำนึงถึงข้อบกพร่องในปัจจุบัน และได้แสดงให้เห็นสัญญาที่ดีในด้านโรคไต [6] นอกจากนี้ แบบจำลอง OoC ยังมีศักยภาพที่ดีในการแทนที่แบบจำลองสัตว์ทดลอง ให้วิธีแก้ปัญหาสำหรับความแตกต่างระหว่างสายพันธุ์ และสามารถช่วยยุติการทารุณสัตว์และการอภิปรายทางจริยธรรม [7] มีโมเดลในหลอดทดลองไม่กี่แบบที่ใช้ไฟโบรบลาสต์ของไตปฐมภูมิพร้อมๆ กันกับเซลล์บุผนังหลอดเลือดและเยื่อบุผิว ซึ่งเป็นเซลล์ที่สำคัญในไตพังผืด. บทบาทของแต่ละเซลล์ในพังผืดกำลังศึกษาแยกกัน อย่างไรก็ตาม มีความรู้จำกัดเกี่ยวกับปฏิสัมพันธ์ของเซลล์

ในการศึกษานี้เราได้พัฒนาพังผืด- อุปกรณ์เลียนแบบโดยใช้ไฟโบรบลาสต์หลักของมนุษย์ เรายืนยันว่า TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)การรักษามีผลต่างๆ ต่อพังผืดของไตแบบอย่าง. โดยเฉพาะอย่างยิ่ง ไฟโบรบลาสต์มีบทบาทสำคัญในฐานะเซลล์เอฟเฟกเตอร์ ส่งเสริมการก่อตัวของสภาพแวดล้อมจุลภาคโปรไฟโบรติก และคัดหลั่งโกรทแฟคเตอร์และไซโตไคน์ ดังนั้น ด้วยวิธีการใหม่นี้ ไฟโบรบลาสต์อาจให้ระบบแบบจำลองเซลล์ในอุดมคติในการศึกษาโรคไต เราประเมินว่าไฟโบรบลาสต์ที่เกิดจากโรคไตวายเรื้อรังส่งผลต่อความสมบูรณ์ของเซลล์ที่เพาะเลี้ยงในสามมิติ (3D) หรือไม่ สุดท้ายนี้ เราขอนำเสนอการศึกษาพิสูจน์หลักการที่แสดงให้เห็นถึงศักยภาพของมนุษย์พังผืดของไต- การเลียนแบบอุปกรณ์ต่างๆ เพื่อเป็นต้นแบบในการทำนายการตอบสนองของมนุษย์พังผืดของไต.

ผลของ cistanche: รักษาโรคไต

2. ผลลัพธ์

2.1.การระบุ Alpha Smooth Muscle Actin(a-SMA) และ Keratin-8(KRT-8) โดย TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)ใน HK-2 เซลล์

ในระยะแรก เราตรวจสอบเครื่องหมายที่รู้จักของพังผืดและโครงร่างเซลล์ในวัฒนธรรมสองมิติ (2D) การสอบวิเคราะห์การย้อมด้วยภูมิคุ้มกันบกพร่องถูกดำเนินการเพื่อประเมินการแสดงออก -SMA ของการเกิดพังผืดและเยื่อบุผิวแบบท่อกับเครื่องหมายการเปลี่ยนแปลงมีเซนไคม์ (EMT) และระดับ KRT8 เป็นเครื่องหมายของโครงร่างโครงกระดูก การย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์แสดงให้เห็นว่าการแสดงออกของ -SMA เดิมอ่อนแอและระดับ KRT8 สูงในเซลล์เยื่อบุผิว HK-2 แบบโมโนเลเยอร์ ไม่มีการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญในความเข้มของการเรืองแสงโดย TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)(5 นาโนกรัม/มิลลิลิตร)หรือการบำบัดด้วยตัวยับยั้งจำเพาะของเซลล์เยื่อบุผิว HK-2 เป็นเวลา 24 ชั่วโมง (รูปที่ 1)

รูปที่ 1 อิมมูโนฟลูออเรสเซนส์แสดงให้เห็นว่าการแสดงออกของอัลฟา-SMA และเคราติน-8(KRT8) ถูกคงสภาพไว้โดยการบำบัดด้วย TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)หรือตัวยับยั้งในเซลล์ HK-2(A) การแสดงออกของ alpha-SMA และ (B)CCK-8 ไม่มีผลกับ HK-2เซลล์โดย TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)(5 นาโนกรัม/มิลลิลิตร) หรือตัวยับยั้ง เดิมเซลล์ถูกชุบที่ความหนาแน่น 1×10 องศาต่อหลุม (ac) กลุ่มควบคุมที่ไม่ผ่านการบำบัดและ （df）กระตุ้นด้วย 5ng/mL TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-) หรือ (gi) ตัวยับยั้ง 10 μM (SB431542) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงและตรึงด้วยพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 4 เปอร์เซ็นต์ จากนั้นเซลล์ถูกย้อมด้วยสารต้าน- -SMA และสารต้านไซโตเคราติน-8 เป็นเวลา 20 นาที ทำการย้อมสีร่วมกับสีย้อม Hoechst H33342 เพื่อระบุนิวเคลียสของเซลล์ แถบมาตราส่วนในไมโครกราฟระบุ 200 um

ผง cistanche ช่วยเพิ่มการทำงานของไต

2.2. นิพจน์ KRT8 ลดลงโดย TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)บนชิป

ต่อไป เราประเมินระดับการแสดงออกของ -SMA และ KRT8 ใน HK ที่เพาะเลี้ยง 3 มิติ-2 และความยาวรวมของเซลล์บุผนังหลอดเลือดที่สายสะดือของมนุษย์ GFP (HUVEC) ที่รับการรักษาด้วย TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)และสารยับยั้งจำเพาะ ในการทำสิ่งนี้ให้สำเร็จ ก่อนอื่นเราได้สร้างรูปแบบเศษเนื้อเยื่อที่ประกอบด้วยเซลล์สองประเภท ได้แก่ เซลล์เยื่อบุผิว HK-2 และ GFP-HUVEC หลังจากยืนยันโครงสร้างแล้ว เราได้เปิดเผยชิปเนื้อเยื่อด้วย TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)(5 นาโนกรัม/มิลลิลิตร) หรือตัวยับยั้งจำเพาะ (10 ไมโครกรัม SB431542) เป็นเวลา 24 ชั่วโมง

ดังแสดงในรูปที่ 2A-C นิพจน์ของ -SMA ไม่ได้เปลี่ยนแปลงอย่างจำเพาะโดย TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)หรือการรักษาตัวยับยั้งเฉพาะ อย่างไรก็ตาม การแสดงออกของ KRT8 ลดลงในชิปที่เพาะเลี้ยงร่วมประเภทสองเซลล์ นอกจากนี้ การเพิ่มตัวยับยั้ง TGF-ß1 ยังเพิ่มการแสดงออกของ KRT8

เราตรวจสอบการก่อตัวของเครือข่ายที่มีลักษณะคล้ายเส้นเลือดฝอย 3 มิติโดย TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)การรักษาใน HUVEC เนื่องจากเซลล์บุผนังหลอดเลือดสามารถสร้างโครงข่ายคล้ายเส้นเลือดฝอย 3 มิติได้เองตามธรรมชาติ ตามเงื่อนไขทางวัฒนธรรมของเรา การก่อตัวของเส้นหนาลดลงอย่างมีนัยสำคัญ อย่างไรก็ตาม เส้นบางที่เหมือนเส้นเลือดฝอยเพิ่มขึ้นใน TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)GFP-HUVEC ที่ได้รับการบำบัด ในกรณีของ TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)การบำบัดด้วยตัวยับยั้งบนชิปที่เพาะเลี้ยง 3 มิติ ความยาวรวมของเส้นหนาและหนามีแนวโน้มย้อนกลับไปยัง TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)การรักษา. สังเกตเห็นการเพิ่มขึ้นของความยาวของเส้นหนาเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมที่ไม่ได้รับการรักษา พบรูปแบบที่คล้ายกันในเส้นผ่านศูนย์กลางของเส้นหนาใน GFP-HUVEC หลัง TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)การรักษาและการรักษาตัวยับยั้ง เส้นผ่านศูนย์กลางของ GFP-HUVEC ถูกระงับโดย TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)การบำบัดแต่เพิ่มขึ้นโดยไม่คำนึงถึงความหนาของเส้นโดยตัวยับยั้งเมื่อเปรียบเทียบกับทั้งกลุ่มควบคุมและ TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-). ความยาวและเส้นผ่านศูนย์กลางโดยรวมของเส้นหนาเพิ่มขึ้นอย่างมากโดยการบำบัดด้วย TGF- 1 ตัวยับยั้งเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมที่ไม่บำบัดและการบำบัดด้วย TGF- 1 โดยเฉพาะอย่างยิ่ง ผลลัพธ์ที่ได้บ่งชี้ถึงความหนาแน่นที่เพิ่มขึ้นของเรือขนาดเล็กใน TGF-(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)-กลุ่มที่ได้รับการบำบัดเทียบกับกลุ่มที่ไม่ได้รับการรักษา ในทางตรงกันข้าม ความหนาแน่นของเส้นเลือดหนาใน TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)กลุ่มบำบัดต่ำกว่าในกลุ่มควบคุมที่ไม่ได้รับการรักษา (รูปที่ 2D, E)

รูปที่ 2 การแสดงออก KRT8 ใน HK-2 และความยาวและเส้นผ่านศูนย์กลางรวมของ HUVEC(A)อิมมูโนฟลูออเรสเซนส์แสดงว่าการแสดงออกของ -SMA ถูกคงรักษาไว้ และการแสดงออกของ KRT8 ลดลงอย่างมากโดยการบำบัด TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)ในฮ่องกง-2 เซลล์ถูกชุบและกระตุ้นด้วย 5ng/mL TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)หรือตัวยับยั้ง 10 ไมโครเมตร (SB 431542) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงและตรึงด้วยพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 4 เปอร์เซ็นต์ เซลล์ถูกย้อมด้วยสารต้าน- -SMA และสารต้านไซโตเคราติน-8 เป็นเวลา 20 นาที ทำการย้อมสีร่วมกับสีย้อม Hoechst H33342 เพื่อระบุนิวเคลียสของเซลล์ การแสดงออกของ -SMA(ac) ไม่มีการเปลี่ยนแปลง แต่ KRT8(df) ในเซลล์ HK-2 และ GFP ในการแสดงออกของ HUVEC (gi) ถูกเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญโดย TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)(5 ng/mL) และตัวยับยั้ง (B, C) ในความยาวทั้งหมดของ HUVEC ภาชนะบาง ๆ เพิ่มขึ้น แต่ภาชนะหนาลดลงโดย TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-). เส้นผ่านศูนย์กลางเพิ่มขึ้นในภาชนะที่บางและหนา ผลลัพธ์เหล่านี้ถูกย้อนกลับโดยตัวยับยั้ง SB431542 (D, E) แถบมาตราส่วนในไมโครกราฟระบุ 100 μm.*p<><><0.001 versus="" the="" control=""><><0.001 versus="" the="" tgf-β1="" group.="" each="" value="" represents="" three="" technical="" replicates="" of="" each="" of="" the="" three="" biological="" replicates.="" statistical="" significance="" of="" the="" length="" compared="" to="" the="" non-treated="" cells="" is="" represented="" in="" the="" graph.="" thin="" vessels="" mean="" a="" length="" shorter="" than="" 50="" um="" and="" thick="" vessels="" represent="" a="" length="" longer="" than="" 50="">

cistanche ใช้สำหรับอะไร: รักษาโรคไตเรื้อรัง

2.3. ทีจีเอฟ- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)ส่งผลกระทบต่อเซลล์สามประเภทของชิปที่มีโครงสร้างหลายช่อง

เพื่อศึกษา TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)การตอบสนองของชิป 3D ที่เสนอ เราทำการสร้างภูมิคุ้มกันในแต่ละช่องแยกกัน (รูปที่ 3) ไฟโบรบลาสต์ในไตของมนุษย์ปฐมภูมิถูกนำมาใช้ในการวิเคราะห์นี้ ตัวอย่างถูกวิเคราะห์โดยใช้ FACS และยืนยันว่าเป็นผลบวกสำหรับแอนติบอดีตัวทำเครื่องหมายไฟโบรบลาสต์ หลังจากการฟักตัวของเซลล์ทั้งสามประเภทด้วย TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ทำการสร้างภูมิคุ้มกันเพื่อประเมินการแสดงออกของ -SMA และ KRT8 การแสดงออกของ a-SMA ถูกควบคุมโดยการบำบัดด้วย TGF-1 และสังเกตผลลัพธ์ที่ตรงกันข้ามกับ TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)การรักษาสารยับยั้ง ในทางกลับกัน การแสดงออกของ KRT8 ถูกควบคุมโดย TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)และแสดงการตอบสนองที่ตรงกันข้ามกับ TGF-(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)ตัวยับยั้ง (รูปที่ 4A-C)

รูปที่ 3 ภาพตัวอย่างพร้อมการสาธิตแผนผังอุปกรณ์ของการผลิตและกำหนดการทดลอง(A) สองภาพบนสุดแสดงการจัดวาง ภาพด้านซ้ายแสดงภาพถ่ายจากบนลงล่างโดยรวมของอุปกรณ์ ภาพด้านล่างแสดงภาพตัดขวาง มุมมองแผนผังแสดงรายละเอียดขนาดของตัวนำของเหลว (B) รูปนี้อธิบายตารางการทดลองสำหรับพังผืด- อุปกรณ์เลียนแบบ กระบวนการโหลดสี่ขั้นตอนสำหรับแต่ละหลุม ตำแหน่งของพื้นที่สร้างลวดลายไฮโดรเจลแต่ละแห่ง ตลอดจนการจัดวางตัวกลางในส่วนตัดขวางจากบนลงล่างและภาพตัดขวางแบบมีมิติเท่ากัน (1) ไฮโดรเจล 1 ทั้งหมด 1.5 uL ถูกนำเข้าสู่ช่องกลางตามธรรมชาติ (2) ช่องกลางเต็มไปด้วยไฮโดรเจล 5uL (3) ไฮโดรเจล 3 ทั้งหมด 10uL มีลวดลายบนพื้นอ่างเก็บน้ำ （4）จ่ายสื่อทั้งหมด200μL แถบมาตราส่วนสีแดง=9 มม.

ดังที่แสดงไว้ในรูปที่ 4D-G ความยาวของเส้นบางคล้ายเส้นเลือดฝอยเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญโดย TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)การรักษาใน GFP-HUVECs อย่างไรก็ตาม ความหนาของเส้นหนาลดลงใน TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)HUVEC ที่ได้รับการบำบัด เส้นผ่านศูนย์กลางลดลงโดยเฉลี่ยสำหรับภาชนะบางและหนาใน HUVEC ในกรณีของ TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)การบำบัดด้วยตัวยับยั้งบนชิปที่เพาะเลี้ยง 3 มิติ ความยาวทั้งหมดของเส้นหนาและหนามีแนวโน้มตรงกันข้ามกับการบำบัดด้วย TGF- 1 นอกจากนี้ ความยาวของเส้นหนาเพิ่มขึ้นเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุมที่ไม่ถูกบำบัด

รูปที่ 4 การเปลี่ยนแปลงของ HK-2 และ HUVEC ที่เพาะเลี้ยง 3 มิติด้วยไฟโบรบลาสต์ของไตปฐมภูมิเซลล์ทั้งหมดถูกชุบที่ความหนาแน่น 5×10 องศาต่อชิป 3 มิติ และกระตุ้นด้วย 5 ng/mL TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)หรือตัวยับยั้ง 10 ไมโครเมตร (SB 431542) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงและตรึงด้วยพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 4 เปอร์เซ็นต์ (A) เซลล์ในชิป 3 มิติถูกย้อมด้วยแอนติ-o -SMA และแอนติ-ไซโตเคราติน-8 การแสดงออกของ -SMA (ac) เพิ่มขึ้นและการแสดงออกของ KRT8(df) ลดลงโดย TGF- 1(5 ng/mL) อย่างมีนัยสำคัญ ความยาวรวมของ HUVEC; ภาชนะบางเพิ่มขึ้นอย่างมากและภาชนะที่หนาลดลงโดยTGF-ß1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)(ด, อี). เส้นผ่านศูนย์กลางลดลงสำหรับภาชนะบางและหนา (F, G) ผลลัพธ์เหล่านี้ถูกย้อนกลับโดยตัวยับยั้ง SB431542 แถบมาตราส่วนในไมโครกราฟระบุ 100 μm.*p<><0.01,and **=""><0.001 versus="" the="" control=""><><><0.001 versus="" the="" tgf-β1="" group.="" each="" value="" represents="" three="" technical="" replicates="" of="" each="" of="" the="" three="" biological="" replicates.="" thin="" vessels="" mean="" a="" length="" shorter="" than="" 50="" um="" and="" thick="" vessels="" represent="" a="" length="" longer="" than="" 50="">

2.4.TGF-81 ปรับผู้ไกล่เกลี่ยการอักเสบและปัจจัยการเจริญเติบโต

ต่อไป เราตรวจสอบการอักเสบของไซโตไคน์และปัจจัยการเจริญเติบโตในส่วนลอยเหนือตะกอน IL-1 , FGF-2, TGF- 2(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)และ TGF- 3(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)การหลั่งโปรตีนในชิปที่เพาะเลี้ยง 3 มิตินั้นสูงกว่าการเพาะเลี้ยงไฟโบรบลาสต์ 2 มิติอย่างมาก แม้ว่าจะมีจำนวนเซลล์ทั้งหมดเท่ากันก็ตาม อย่างไรก็ตาม TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-) ระดับใกล้เคียงกัน เนื่องจากแบบจำลองการเพาะเลี้ยงแบบ 2 มิติหรือ 3 มิติได้รับการบำบัดด้วยความเข้มข้นของ TGF ที่ใกล้เคียงกัน- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)(รูปที่ 5A-E). โดยเฉพาะอย่างยิ่ง การปลดปล่อย FGF-2 จากไฟโบรบลาสต์ของไตปฐมภูมิของมนุษย์คือ 20.9 ± 0.4 pg/วัน/5× 10 องศาเซลล์ของการเพาะเลี้ยงแบบชั้นเดียว 2 มิติและ 3094.8± 0.2 pg/วัน/5× 10 องศา เซลล์ รวมถึง HUVEC และ HK-2 ของชิปที่เพาะเลี้ยง 3 มิติในกลุ่มควบคุมที่ไม่ผ่านการบำบัด การหลั่ง FGF-2 โดย TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)การกระตุ้นคือ 31.0±0.2pg/วัน/5×10 ดีกรีเซลล์สำหรับการเพาะเลี้ยง 2D และ 3683.9± 0.8 pg/วัน/5×10 องศาเซลล์สำหรับ 3D - ชิปที่เพาะเลี้ยง การเพิ่มขึ้นของการผลิตโปรตีน FGF-2 ในการเพาะเลี้ยง 2 มิติแบบโมโนเลเยอร์นี้ควบคู่ไปกับการเพิ่มขึ้นของแบบจำลองชิปที่เพาะเลี้ยง 3 มิติโดย TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)การรักษา (รูปที่ 5B)

รูปที่ 5. การเปรียบเทียบแบบจำลองการเพาะเลี้ยง 2 มิติและ 3 มิติในฐานะแพลตฟอร์มเลียนแบบการเกิดพังผืดของไตเซลล์ถูกเคลือบที่ความหนาแน่น 5×10 องศาต่อหลุม 2 มิติหรือชิป 3 มิติ และกระตุ้นด้วย TGF 5ng/mL- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)หรือตัวยับยั้ง 10 um (SB 431542) เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ไฟโบรบลาสต์ของไตปฐมภูมิของมนุษย์ถูกใช้ในการเพาะเลี้ยง 2 มิติและในแบบจำลองการเพาะเลี้ยง 3 มิติ ไฟโบรบลาสต์ถูกใช้ที่ความหนาแน่น 8× 10* ที่เพาะเลี้ยงด้วย HUVEC และ HK-2 อัตราส่วนไฟโบรบลาสต์ต่อ HUVEC ของไตปฐมภูมิของมนุษย์หรืออัตราส่วน F: H คือ 1:5 สำหรับการประเมินพังผืด.HK-2 เซลล์ถูกใช้ที่ความหนาแน่น 2×104 การตรวจหา(A)IL-1 ,(B)ปัจจัยการเจริญของไฟโบรบลาสต์พื้นฐาน (FGF-2) และ(CE)TGF-เบตา 1, 2 และ 3 ในส่วนลอยเหนือตะกอนถูกดำเนินการโดยการวิเคราะห์แบบมัลติเพล็กซ์ของ ไซโตไคน์และอิมมูโนแอสเซย์มัลติเพล็กซ์บีด แต่ละแท่งแสดงถึงค่าเฉลี่ย± SE.*p<0.05,***><0.001 versus=""><0.01,##><0.001 versus="">(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-).

ประโยชน์ของ cistanche tubolosa: รักษาโรคไต

นอกจากนี้ เราประเมินการแสดงออกของ mRNA ของไซโตไคน์ที่ก่อให้เกิดการอักเสบ เช่น IL-1 , IL-6, IL-8 และ TNF- ผลลัพธ์ถูกปรับลดอย่างมีนัยสำคัญโดย TGF ของมนุษย์ลูกผสม- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)การบำบัดในชิปเพาะเลี้ยง 3 มิติในฐานะคุณสมบัติต้านการอักเสบของ TGF-(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-). เราพบว่าการแสดงออกของ mRNA ถูกควบคุมโดย TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)ตัวยับยั้ง (SB431542) นอกจากนี้ การแสดงออกที่อาศัยตัวยับยั้งของ IL-6, IL-8 และ TNF- ถูกปรับลดลงอย่างจำเพาะเมื่อเปรียบเทียบกับในกลุ่มควบคุมที่ไม่ได้รับการรักษา (รูปที่ 6A-D) ระดับ mRNA ของ VEGF ซึ่งเป็นปัจจัยไฟโบรติกเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญโดย TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)การรักษา. ระดับ mRNA ของ VEGF ลดลงโดยตัวยับยั้ง TGF- 1 (รูปที่ 6E) ในขณะที่การแสดงออกของ mRNA ของ IL-10 ที่มีผลต้านการเกิดพังผืดลดลงในสภาวะไฟโบรติกที่เหนี่ยวนำโดย TGF- 1 . ในทางตรงกันข้าม การแสดงออกของ I-10mRNA เพิ่มขึ้นโดยการบำบัดด้วย TGF- 1ตัวยับยั้ง (รูปที่ 6F)

รูปที่ 6 Real-time PCR แสดงนิพจน์ mRNA โดยรวมของชิป 3Dเซลล์ถูกชุบที่ความหนาแน่น 5×10 องศาต่อชิป 3 มิติ และกระตุ้นด้วย 5ng/mL TGF- 1(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)หรือตัวยับยั้ง 10 um (SB431542) เป็นเวลา 24 ชั่วโมง RNA ทั้งหมดที่สกัดจากชิปที่เพาะเลี้ยง 3 มิติ การแสดงออก mRNA ของ(A)IL-1 ,(B)TNF- ,(C)IL-6 และ (D)IL-8 แสดงถึงผลต้านการอักเสบของ TGF{ {10}}(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-)การรักษา. (E)การแสดงออกของ VEGF เป็นปัจจัยสร้างเส้นเลือดใหม่เพิ่มขึ้น (F)IL-10 การแสดงออกในฐานะปัจจัยต้านการเกิดพังผืดลดลงอย่างมีนัยสำคัญโดย TGF- 1.*p<><><0.001 versus=""><><><0.001 versus="">(การเปลี่ยนแปลงปัจจัยการเติบโต-).

คลิกที่นี่เพื่อเป็นส่วนหนึ่ง Ⅰ Ⅱ