ผลประโยชน์ของสารสกัด Cistanche Tubulosa ต่อการปรับปรุงการซึมผ่านของลำไส้ต่ำของ Echinacoside (ECH) และ Acteoside (ACT)

ติดต่อ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 อีเมล:audrey.hu@wecistanche.com

ทาดาโทชิ ทานิโนะอา, โนริอากิ นางาอิบ และ โยชิโนริ ฟุนาคามิบ

* คณะเภสัชศาสตร์, Tokushima Bunri University, Tokushima และ b คณะเภสัชศาสตร์, Kinki University, Osaka, Japan

เชิงนามธรรม

วัตถุประสงค์วัตถุประสงค์ของการศึกษาครั้งนี้คือเพื่อจัดการกับผลประโยชน์ของCistanchetubulosaสารสกัดการปรับปรุงการซึมผ่านของลำไส้ต่ำของ echinacoside (ECH) และ acteoside (ACT)วิธีการการดูดซึมของ ECH และ ACT ในสารสกัด C. tubulosa ถูกแสดงคุณลักษณะโดยใช้โมโนเลเยอร์ของเซลล์ Caco-2 ในลำไส้ของมนุษย์ที่มีสารประกอบที่ไม่เสียหาย การดูดซึม ECH และ ACT ขึ้นอยู่กับตัวขนส่งกลูโคสได้รับการยืนยันโดยเทคนิคการถ่ายเลือดในลำไส้ข้อค้นพบที่สำคัญการซึมผ่านที่ชัดเจน (Papp) ไม่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญระหว่าง ECH ที่ไม่บุบสลายและ ACT ที่ไม่เสียหาย เมื่อมี phloridzin Papp ของ ECH และ ACT ในปริมาณที่สูงลดลงเหลือ 20 เปอร์เซ็นต์ของการไม่รักษาตามลำดับ แต่ไม่ได้เปลี่ยนแปลงโดย phloretin และ verapamil สารสกัด C. tubulosa ในปริมาณต่ำและสูงช่วยเพิ่มประสิทธิภาพ Papp ของ ECH และ ACT (เพิ่มขึ้นสามเท่า) ส่งผลให้มีส่วนร่วมอย่างมากในการดูดซึมกลูโคสที่ขึ้นกับโซเดียมโดยอิสระ ที่ความเข้มข้นต่ำ ระดับ ECH และ ACT ร่วมกันในเลือดพอร์ทัลถูกระงับโดย phloridzin อย่างมีนัยสำคัญบทสรุปอาหารและยา C.tubulosaสารสกัดการเพิ่มการดูดซึมในลำไส้ของ ECH และ ACT อาจทำหน้าที่ในการจัดการสุขภาพของมนุษย์ได้ดีขึ้น แม้ว่าควรลดการมีส่วนร่วมของการขนส่งที่ไวต่อยา phloridzin

คีย์เวิร์ดแอคทีโอไซด์; Caco-2 ชั้นเดียวของเซลล์;Cistanchetubulosaสารสกัด; อิชินาโคไซด์; สารขนส่งกลูโคสที่ไวต่อคลอริดซิน

สารสกัดจากซิสแทนเช่ทูโบโลซ่า

บทนำ

รากของCistanchetubulosaนิยมนำมาทำยาและอาหาร สารสกัดจาก C. tubulosa เป็นที่ทราบกันดีว่ามีผลทางเภสัชวิทยาในโรคทางสมองต่างๆ การต่อต้านริ้วรอย การเผาผลาญไขมัน และการเจริญเติบโตของเส้นผม[1-4] เมื่อเร็ว ๆ นี้ สารสกัดจาก C. tubulosa, monoterpenoids, phenylethanoid glycosides และ lignans . [5,6] Phenylethanoid glycosides ซึ่งเป็นกลุ่มของสารประกอบโพลีฟีนอลเป็นส่วนประกอบทางเคมีหลักในCistancheสปีชีส์ [7] แม้ว่าปริมาณของพวกมันจะแตกต่างกันไปตามสปีชีส์ที่แตกต่างกัน Echinacoside (ECH; รูปที่ 1) เป็นหนึ่งใน phenylethanoid glycosides ที่สำคัญใน Herba Cistanchis มันถูกไฮโดรไลซ์ไปเป็นแอกทิโอไซด์ (ACT หรือที่เรียกว่า verbascoside) โดยเอนไซม์ที่มีต้นกำเนิดจากแบคทีเรียในลำไส้ใหญ่ [8,9] ECH และ ACT มีกิจกรรมที่เป็นประโยชน์ในการปกป้องตับ [10] และต้านการอักเสบ [11] ในสัตว์ฟันแทะ น่าแปลกที่ ECH ที่ละลายน้ำได้สูงช่วยปรับปรุงผลลัพธ์ทางพฤติกรรมและเคมีประสาทในแบบจำลองหนูของโรคพาร์กินสันและยับยั้งการกระตุ้น caspase-3 และ caspase-8 ในเซลล์ประสาทเม็ดเล็กในสมองน้อย[9] เป็นที่ทราบกันดีว่าอุปสรรคเลือดสมองจำกัดการเข้าและการกระจายของซีโนไบโอติกเข้าสู่สมองจากเลือดอย่างเคร่งครัด วูและคณะ [12] ยังแสดงให้เห็นว่า ACT ที่ละลายน้ำได้กระจายอย่างรวดเร็วในเนื้อเยื่อสมองของหนู ดังนั้น ECH และ ACT จึงสามารถขนส่งไปยังสมอง ลำไส้ และตับได้ด้วยระบบเฉพาะ

รูปที่ 1 โครงสร้างทางเคมีของอิชินาโคไซด์และแอกทิโอไซด์

แม้ว่าจะมีหลักฐานที่แน่ชัดที่ชี้ว่าการบริโภคสารสกัด C. tubulosa นั้นมีประโยชน์ต่อสุขภาพของมนุษย์ แต่ความสามารถในการซึมผ่านของ ECH บริสุทธิ์ทั่วทั้งเซลล์เดี่ยวของ Caco{0}} ที่ความเข้มข้นปลายสุดที่ 8.4 ± 1.6 ug/ml คือ เท่ากับหรือต่ำกว่า mannitol เครื่องหมายการขนส่งพาราเซลลูลาร์[13] เมื่อให้ ECH บริสุทธิ์ทางปากแก่หนู (ขนาด 1{{10}}0 มก./กก.) การดูดซึมจะเร็วมาก (Tmax, 15 นาที) และความเข้มข้นของซีรัมสูงสุดจะสูงมาก ต่ำ (Cmax, 0.61 ± 0.32 ug/ml)[14] การดูดซึมสัมบูรณ์ของ ECH เพียง 0.83 เปอร์เซ็นต์ ในทำนองเดียวกัน เมื่อเซลล์ Caco-2 ถูกบ่มด้วยเศษฟีนอลที่ทำให้บริสุทธิ์บางส่วนจากน้ำเสียจากโรงงานมะกอก การดูดซึม ACT ที่บริสุทธิ์จะรวดเร็วโดยมีการสะสมสูงสุดเกิดขึ้นหลังจาก 30 นาที และประสิทธิภาพการสะสมรวม 0.1 เปอร์เซ็นต์ ให้ ระดับภายในเซลล์ของโปรตีนเซลล์ 130 pmol/mg[15] ในหนูแรท ความเข้มข้นสูงสุด (0.13 ± 0.03 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ของ ACT บริสุทธิ์ถึงภายใน 30 นาทีหลังการให้ยาทางปากที่ 100 มก./กก. [12] ซึ่งแสดงถึงการดูดซึมของลำไส้อย่างรวดเร็ว การดูดซึมทางปากของ ACT เช่นเดียวกับ ECH ค่อนข้างต่ำ (0.12 ± 0.04 เปอร์เซ็นต์ ) ซึ่งบ่งชี้ถึงความเป็นไปได้ที่จะเกิดผลกระทบครั้งแรกในลำไส้และตับ ในน้ำดีของหนู methylation และ glucuronidation conjugates ของ ECH เป็นสารเมแทบอไลต์ที่สำคัญ [16] แม้ว่าระดับการเผาผลาญของตับจะยังไม่ชัดเจน เราพบเบื้องต้นว่า ECH และ ACT ค่อนข้างคงที่ใน homogenates ของเยื่อบุลำไส้ของหนูและกรดในกระเพาะอาหารเทียม (ไม่แสดงข้อมูล) นาจาร์และคณะ [17] แสดงให้เห็นว่า ACT ยับยั้งการทำงานของ P-glycoprotein (P-GP)-ATPase ในลักษณะที่คล้ายกับ verapamil (ตัวยับยั้ง P-gp ที่เป็นตัวแทน) ซึ่งหมายถึงตัวปรับ P-gp; อย่างไรก็ตาม ไม่แน่ใจว่า ACT มีให้เป็นสารตั้งต้น P-gp หรือไม่ ที่น่าสนใจ การค้นพบล่าสุดของสารฟลาโวนอยด์-D-กลูโคไซด์ในอาหารแสดงให้เห็นว่าโปรตีนดื้อยาหลายชนิด (MRP2) ปกปิดตัวขนส่งกลูโคสที่ขึ้นกับโซเดียม (SGLT)1- การดูดซึมของเควอซิติน 4′-O- -กลูโคสที่เป็นสื่อกลาง [18,19] ซึ่งมีหน้าที่ดูดซึมได้ไม่ดีนัก อย่างไรก็ตาม ไม่ค่อยมีใครทราบเกี่ยวกับความไวของโพลีฟีนอลกลูโคไซด์ต่อสารขนส่งที่ดูดซึม ซึ่งรวมถึงตัวขนส่งกลูโคส ข้อมูลเกี่ยวกับลักษณะการดูดซึมของเควอซิทิน 4′-กลูโคไซด์และ ECH ที่ซึมผ่านเลือดและสมองอย่างรวดเร็ว กระตุ้นให้เราตรวจสอบการดูดซึมฟีนิลลิทานอยด์ไกลโคไซด์ที่ไวต่อการขนส่งในสารสกัด C. tubulosa ในอาหาร

ในการศึกษานี้ เราตรวจสอบการดูดซึมของ ECH และ ACT ที่ไม่บุบสลายโดยอาศัยตัวขนส่งกลูโคสโดยใช้ monolayers ของเซลล์ Caco-2 ในลำไส้ของมนุษย์ พร้อมกันนี้ การขนส่งการดูดซึมของ ECH และ ACT ควบคู่ไปกับสารสกัด C. tubulosa ในอาหาร มีลักษณะเฉพาะด้วยแบบจำลองในหลอดทดลอง และระบบไหลเวียนของลำไส้ในแหล่งกำเนิดด้วยการสุ่มตัวอย่างเลือดจากพอร์ทัล ซึ่งสามารถแยกความแตกต่างระหว่างขอบเขตของการดูดซึมและการหลีกเลี่ยงตับได้ก่อน -ผ่านจำหน่าย

วัสดุและวิธีการ

วัสดุ

Intact ECH และ ACT เป็นของขวัญจาก Eishin Trading Co., Ltd (โอซาก้า ประเทศญี่ปุ่น) Phloridzin และ phloretin ซื้อมาจาก Tokyo Kasei Co., Ltd. (โตเกียว ประเทศญี่ปุ่น) Verapamil และ p-coumaric acid ซึ่งใช้เป็นมาตรฐานภายในสำหรับการทดสอบโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC) ได้มาจาก Sigma-Aldrich (St Louis, MO, USA) สารเคมีอื่น ๆ ทั้งหมดที่ใช้นั้นเป็นเกรดวิเคราะห์และมีจำหน่ายในท้องตลาด

วัสดุจากพืชและการเตรียมสารสกัดเมทานอล

C. tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) เป็นพืชกาฝากยืนต้นที่เติบโตบนรากของสายพันธุ์ Salvadora หรือ Calotropis และจำหน่ายในประเทศแอฟริกาเหนือ อาหรับ และเอเชีย ลำต้นแห้งของ C. tubulosa ถูกทำให้เป็นผงและสกัดสามครั้งด้วยเมทานอลภายใต้การไหลย้อนเป็นเวลา 3 ชั่วโมง การระเหยของตัวทำละลายภายใต้แรงดันที่ลดลงทำให้สารสกัดเมทานอล สารสกัดเมทานอล (เกรดเชิงพาณิชย์ Batch No. 20070130;

จดทะเบียนชื่อทางการค้า Sabaku Ninnjinn Kanka) เป็นของขวัญจากใจจาก Eishin Trading Co., Ltd ผ่านทาง Muraoka และ Morikawa (มหาวิทยาลัย Kinki ประเทศญี่ปุ่น) และการระบุทางพฤกษศาสตร์ดำเนินการโดยศาสตราจารย์ Jia Xiaoguang ในสถาบัน Xinjiang Institute of Traditional Chinese และ ยาชาติพันธุ์วิทยา.

การวิเคราะห์สารสกัดจากพืช: โครมาโตกราฟี

เรากำหนดเนื้อหา ECH และ ACT ในสารสกัด C. tubulosa (หมายเลขรุ่น 20070130) โดยการวิเคราะห์ HPLC ที่อธิบายด้านล่าง ข้อมูลที่ได้รับแสดงไว้ในตารางที่ 1

การเพาะเลี้ยงเซลล์

เซลล์ Caco{{0}} เซลล์ที่ซื้อจาก American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA) ถูกนำมาใช้ในข้อ 38–53 พวกมันถูกปลูกในอาหารเลี้ยงเชื้อซึ่งประกอบด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อ Eagle's modified ของ Dulbecco (DMEM, Nacalai Tesque Co., Kyoto, Japan) เสริมด้วยกรดอะมิโนที่ไม่จำเป็น 1 mM, 10 เปอร์เซ็นต์เซรั่มโคนมในครรภ์ที่หยุดการทำงานด้วยความร้อน, 100 U/ml เพนิซิลลิน จี และสเตรปโตมัยซิน ซัลเฟต 0.1 มก./มล.

การศึกษาด้านการขนส่ง

เซลล์ Caco-2 ถูกชุบที่ความหนาแน่น 6.4 × 103 เซลล์/ซม2 บนตัวกรองโพลีคาร์บอเนต โมโนเลเยอร์ใช้สำหรับการทดลองขนส่ง 21-25 วันหลังจากเพาะเมล็ด Intact ECH และ ACT ที่เทียบเท่ากับเนื้อหาในCistanchetubulosa สารสกัด(4.5 and 13.5 mg/ml) were mixed with DMEM medium containing 0.5% dimethylsulfoxide to maintain the integrity of the cell monolayer over the periods of the experiments. Intact ACT equivalent to ECH content in the extract was also dosed in the incubation medium. The extract was suspended in a DMEM medium and was centrifuged to remove insoluble components. Supernatants were loaded to the apical side. At the indicated times, an aliquot of the incubation medium was withdrawn from the basolateral side and was mixed with acetonitrile containing an internal standard for the assay. In separate experiments, phloridzin (fifinal concentration, 1 mM) and verapamil (fifinal concentration, 0.2 mM) was added to the apical side of the monolayer; however, phloretin (fifinal concentration, 0.3 mM) was treated on both sides of the monolayer. The integrity of monolayers was monitored by transepithelial electrical resistance (TEER) using Millicell-ERS (Millipore, Bedford, MA, USA) before and after transport experiments. TEER values of monolayers used were >300 Ω·cm2

การไหลเวียนของลำไส้ในแหล่งกำเนิด

หนู Wistar เพศผู้ (23{{20}}–250 ก.) ได้รับจาก SLC Japan (ฮามามัตสึ ประเทศญี่ปุ่น) สัตว์ถูกเลี้ยงไว้ในห้องปรับอากาศภายใต้วงจรแสง/ความมืด 12 ชั่วโมงเป็นเวลา 1 สัปดาห์ก่อนใช้งาน หนูได้รับอาหารห้องปฏิบัติการมาตรฐาน (Oriental Yeast Co., Ltd., Tokyo, Japan) โดยดื่มน้ำเปล่าและอดอาหารข้ามคืนก่อนการทดสอบ การศึกษาการไหลเวียนโลหิตหมุนเวียนในแหล่งกำเนิดได้ดำเนินการตามขั้นตอนการปรับเปลี่ยนที่อธิบายไว้โดย Mihara et al [20] โดยสังเขป หนูถูกวางยาสลบด้วยสารละลายยูรีเทน 25 เปอร์เซ็นต์ (1 มก./กก.) เพื่อหลีกเลี่ยงไม่ให้ความดันโลหิตลดลง มีการทำแผลในช่องท้องตรงกลางและลำไส้เล็กถูกเปิดออก ท่อน้ำดีถูกมัดเพื่อหลีกเลี่ยงการหลั่งน้ำดีเข้าไปใน perfusate ล้างลำไส้เล็กทั้งหมดเป็นส่วนเดียว (จากลำไส้เล็กส่วนต้นไปยังลำไส้เล็กส่วนต้น) ด้วยน้ำเกลือปกติที่ 37 องศาเป็นเวลา 10 นาที จนกว่าการล้างจะใส ท่อแก้วที่เชื่อมต่อกับท่อซิลิโคนถูกสอดเข้าไปในปลายทั้งสองของลำไส้เล็กและยึดด้วยด้ายเย็บ จากนั้นลำไส้เล็กก็ถูกแทนที่ในช่องท้องและเชื่อมต่อ cannulas กับปั๊มรีดท่อ หลอดเลือดดำพอร์ทัลถูก cannulated ด้วยท่อโพลีเอทิลีน (PE10) สารสกัด C. tubulosa ที่มีจำหน่ายในท้องตลาดถูกระงับใน Krebs– Henseleit bicarbonate buffer (pH 7.4) เพื่อให้ได้ผลความเข้มข้นขั้นสุดท้ายที่ 4.5 มก./มล. และถูกหมุนเหวี่ยงเป็นเวลา 10 นาทีที่ 8000 รอบต่อนาที เพื่อขจัดส่วนประกอบที่ไม่ละลายน้ำ ส่วนลอยเหนือตะกอนในกรณีที่ไม่มีหรือมีอยู่ของ phloridzin (1 mM) ถูกเก็บไว้ในอ่างเก็บน้ำซึ่งถูกคงไว้ที่อุณหภูมิ 37 ± 0.5 องศาตลอดการทดลอง ตามเวลาที่กำหนด เลือดถูกถ่ายผ่านท่อลำเลียงพอร์ทัล หลังจากการปั่นแยกตัวอย่างเลือด พลาสมาที่เป็นผลลัพธ์ถูกลดโปรตีนด้วยอะซิโตไนไทรล์ที่มีมาตรฐานภายในและหมุนเหวี่ยงที่ 3000 รอบต่อนาที ส่วนลอยเหนือตะกอนถูกระเหย และเรซิดิวได้รับการแก้ไขด้วยเฟสเคลื่อนที่ซึ่งประกอบด้วยอะซีโตไนไทรล์และกรดอะซิติก 0.5 เปอร์เซ็นต์ สารละลายผสมถูกบรรจุลงในคอลัมน์ HPLC หนูถูกนำมาใช้ตามกระบวนการทางจริยธรรมตามแนวทางการดูแลและการใช้สัตว์ทดลองที่ออกโดยรัฐบาลญี่ปุ่นและมหาวิทยาลัยคินกิ

การวิเคราะห์ HPLC

การวิเคราะห์ HPLC ถูกดำเนินการบนระบบที่ติดตั้ง Shimadzu SPD{0}}A, เครื่องตรวจจับ UV, Shimadzu LC-10A ปั๊ม และผู้รวมโครโนโทปิก Shimadzu C-R4A (เกียวโต ประเทศญี่ปุ่น) ECH และ ACT ถูกแยกโดยใช้คอลัมน์ Inertsil ODS (5 μm, 4.6 × 150 mm, GL Sciences Inc., Osaka, Japan) ใช้เฟสเคลื่อนที่ของอะซีโตไนไทรล์และกรดอะซิติก 0.5 เปอร์เซ็นต์ในอัตราส่วน 15:85 (ปริมาตร/ปริมาตร) ที่อัตราการไหล 1.0 มล./นาที การตรวจจับถูกดำเนินการที่ 334 นาโนเมตร

การวิเคราะห์จลนศาสตร์

ค่าสัมประสิทธิ์การซึมผ่านที่ชัดเจน (Papp) ถูกประมาณจากความชันของส่วนเชิงเส้นของเส้นทางเวลาของการขนส่งสารประกอบผ่านโมโนเลเยอร์ของเซลล์ Caco-2 ดังต่อไปนี้:

แป๊ป{{0}} （dQ/dt）/ A1C0)

โดยที่ dQ/dt คืออัตราการซึมผ่าน C0 คือความเข้มข้นเริ่มต้นของตัวถูกละลายในห้องผู้ให้ และ A คือพื้นที่ผิวของเมมเบรน (4.7 cm2)

ในการศึกษาการไหลเวียนของเลือดในลำไส้ในหนูทดลอง พื้นที่ใต้กราฟความเข้มข้น-เวลาในพลาสมา (AUC0–90) ในหลอดเลือดดำพอร์ทัลจากเวลาที่เป็นศูนย์จนถึงการวัดครั้งสุดท้ายถูกคำนวณตามกฎสี่เหลี่ยมคางหมูเชิงเส้น

คุณสมบัติทางเคมีกายภาพ

พื้นที่ผิวขั้วและพื้นที่ผิวไม่มีขั้วของสารประกอบคำนวณโดยใช้โปรแกรม SAS (เวอร์ชัน 0.8, Olsson, T.; Sherbukhin, V., Synthesis and Structure Administration, 1997–2001, AstraZeneca, Cary , NC, สหรัฐอเมริกา). ค่า log P และ pKa ที่กำหนดโดยการทดลองได้มาจากวรรณกรรม

การวิเคราะห์ทางสถิติ

วิเคราะห์ข้อมูลโดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียวตามด้วยการทดสอบหลังสิ้นสุดของทูคีย์ ค่าความน่าจะเป็นน้อยกว่า 5 เปอร์เซ็นต์ถือว่ามีนัยสำคัญ

ผลลัพธ์

การขนส่งแบบดูดซับของเอไคนาโคไซด์และแอคทีโอไซด์ผ่านเซลล์โมโนเลเยอร์ของ Caco-2

ในหนูและหนูแรท ECH[1{{20}},14] และ ACT[12,21] ที่ไม่บุบสลายจะได้รับการบริหารทางปากที่ขนาด 100–1{{ 39}}00 มก./กก. สารสกัด C. tubulosa ที่ใช้มี ECH ประมาณ 30 เปอร์เซ็นต์และ ACT 15 เปอร์เซ็นต์ต่อโดส เนื่องจากสารสกัดเปลี่ยนแรงดันออสโมติกและ pH ในอาหารเลี้ยงเชื้อ ความเข้มข้น 4.5 และ 13.5 มก./มล. ถูกกำหนดโดยพิจารณาจากปริมาณการใช้ทางปาก (สารประกอบที่ไม่เสียหาย: 2–20 มก./20 ก. ร่างกาย น้ำหนัก) ในหนู สารสกัดที่ปริมาณต่ำ (4.5 มก./มล.) และปริมาณสูง (13.5 มก./มล.) มี 2.0 และ 6.1 มก. สำหรับ ECH และ 1.0 และ 3.0 มก. สำหรับ ACT ตามลำดับ เราใช้สารสกัด C. tubulosa ในปริมาณที่ต่ำกว่าปริมาณ ECH และ ACT ในช่องปากที่รายงานในมนุษย์มาก (ค่าอาหารเสริมที่แนะนำสำหรับสารสกัด: 150 มก. มีประมาณ 45 มก. สำหรับ ECH และ 22.5 มก. สำหรับ ACT) ที่ปริมาณสารประกอบที่ไม่เสียหายในปริมาณต่ำและสูง โปรไฟล์การดูดซึม (รูปที่ 2) และ Papp ไม่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญระหว่าง ECH และ ACT ที่เทียบเท่า ECH (ตารางที่ 2) เมื่อใส่สารสกัด C. tubulosa ในปริมาณสูง 13.5 มก./มล. ลงในอาหาร ค่า Papp (1.27 ± 0.13 และ 0.34 ± 0.03 × 10−6 ซม./วินาที ตามลำดับ) ของสาร ECH และ ACT ควบคู่กันไปจะสูงกว่าค่าเหล่านั้นถึงสามเท่า (0.38 ± 0.09 และ 0.10 ± 0.03 × 10−6 ซม./วินาที ตามลำดับ) ของ ECH และ ACT ที่ไม่เสียหาย (ตารางที่ 2) สารสกัดซึ่งแตกต่างจากสารประกอบที่ไม่เสียหาย ช่วยเพิ่มการขนส่งการดูดซึมของ ECH และ ACT ได้อย่างมีนัยสำคัญ

รูปที่ 2 การขนส่งแบบดูดซับของเอไคนาโคไซด์และแอกทิโอไซด์ผ่านโมโนเลเยอร์ของเซลล์ของ Caco-2 ในระบบทรานส์เวลล์ ตรวจสอบการขนส่งจากยอดถึงเบโซไซด์ สัญลักษณ์ปิดคือ echinacoside (วงกลม) และ acteoside (สี่เหลี่ยม) จากCistanchetubulosaสารสกัดที่มีความเข้มข้นต่ำและสูง 4.5 (a) และ 13.5 มก./มล. (b) สัญลักษณ์เปิดคือ echinacoside (วงกลม) ที่ไม่บุบสลายและ Acteoside (สี่เหลี่ยมจัตุรัส) ที่ไม่บุบสลายซึ่งสอดคล้องกับเนื้อหา echinacoside และ acteoside ในCistanchetubulosaสารสกัดให้ยาตามลำดับ นอกจากนี้ ยังมีการโหลดแอกทิโอไซด์ที่ไม่บุบสลาย (สามเหลี่ยมเปิด) ในตัวกลางด้วยขนาดยาที่เทียบเท่ากับอิชินาโคไซด์ที่ไม่เสียหาย (วงกลมเปิด) ผลลัพธ์จะได้รับโดยมีค่าเบี่ยงเบนมาตรฐาน (n=3)

ผลการยับยั้งของ phloridzin, phloretin และ verapamil

To characterize the intestinal absorption of ECH and ACT, Caco-2 cell monolayers were incubated with representative inhibitors. Apical glucose transporter 1-sensitive phloridzin dramatically reduced the Papp of intact ECH and ACT to 20% of non-treatment at the high dose (Table 2). Basolateral glucose transporter (GLUT) 2-sensitive phloretin did not decrease the transport of intact ECH and ACT (Figure 3). In this study, higher concentrations (>0.3 mM) ของ phloretin ไม่สามารถใช้ได้เนื่องจากความเป็นพิษของเซลล์ที่เห็นได้ชัดเจน นอกจากนี้ P-gp ยังได้รับการระบุว่ามีบทบาทสำคัญในการมีปฏิสัมพันธ์ระหว่างยาสมุนไพรและสารตั้งต้น P-gp ที่มีความสำคัญทางคลินิก เวราปามิลไม่ได้ปรับปรุงการขนส่งดูดซับของสารประกอบที่ไม่บุบสลาย (รูปที่ 3)

การขนส่งการดูดซึมของ ECH และ ACT ในสารสกัด (ขนาดต่ำ) ถูกยับยั้งโดย phloridzin อย่างมีนัยสำคัญ (ตารางที่ 2 และรูปที่ 4) สารสกัดในขนาดสูงยับยั้งการยับยั้ง phloridzin-sensitive แม้ว่าการขนส่ง ECH และ ACT ที่ไม่บุบสลายจะไวต่อ phloridzin มากกว่า (ตารางที่ 2)

รูปที่ 3 ผลของ phloretin และ verapamil ต่อการขนส่งการดูดซึมของ echinacoside และ acteoside ที่ไม่บุบสลาย การขนส่งจากปลายสู่เบโซไซด์ถูกเฝ้าติดตามหลังจากใช้อิชินาโคไซด์ที่ไม่บุบสลายซึ่งสอดคล้องกับปริมาณอิชินาโคไซด์ในสารสกัด 13.5 มก./มล. ที่ด้านปลายสุด (n=3) แอคทีโอไซด์ (สี่เหลี่ยมจัตุรัสปิด) เทียบเท่ากับขนาดยาอีชินาโคไซด์ที่ไม่บุบสลาย (วงกลมปิด) ในกรณีที่ไม่มีตัวยับยั้ง (n=3) เพชรแบบเปิดและแบบปิดแสดงการขนส่งต่อหน้า verapamil 0.2 mM และ phloretin 0.3 mM ตามลำดับ ทำการทดลองการยับยั้งซ้ำซ้อน

การศึกษาการกระจายของลำไส้ในแหล่งกำเนิด

ในการศึกษาในแหล่งกำเนิด เราทดสอบว่า ECH และ ACT ในสารสกัด C. tubulosa ถูกขนส่งโดย SGLT1 ที่บริเวณปลายสุดของลำไส้เล็กหรือไม่ เมื่อสารสกัดจากอาหารในขนาดต่ำ (4.5 มก./มล.) ถูกทำให้บริสุทธิ์ ECH และ ACT ปรากฏขึ้นอย่างรวดเร็วในเลือดพอร์ทัล (รูปที่ 5) AUC ถูกกำหนดเป็น 2702.8 ± 384.1 μm·min สำหรับ ECH และ 698.3 ± 197.2 μm·min สำหรับ ACT หลังจากที่ AUC ถูกทำให้เป็นมาตรฐานด้วยเนื้อหาจากสารสกัด C. tubulosa ปริมาณที่ดูดซึมไม่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญระหว่าง ECH และ ACT SGLT1-ฟลอริดซินที่ละเอียดอ่อนซึ่งแตกต่างจาก phloretin ยับยั้งการขนส่งแบบดูดซับของ ECH ร่วมกันอย่างมีนัยสำคัญ (AUC, 649.4 ± 248.2 ไมโครเมตร·นาที) และ ACT (ตรวจไม่พบ)

การอภิปราย

สมุนไพรบางชนิดเป็นสารตั้งต้นของ P-gp ที่แสดงออกอย่างมากในตับ ลำไส้ สมอง และไต P-gp เป็นปัจจัยกำหนดสำหรับการดูดซึมในร่างกาย การจำหน่าย และการกระจายของสมุนไพร รวมทั้งสาโทเซนต์จอห์น เคอร์คูมิน อิชินาเซีย โสม แปะก๊วย และขิง[22,23] การดูดซึมของเจนิสไตน์{{5} }glucoside ซึ่งเป็นอนุพันธ์ของฟลาโวนอยด์ ถูกจำกัดโดยตัวขนส่ง MRP2 ในลำไส้ด้วย[24] ดังนั้น การศึกษานี้จึงได้รับการออกแบบมาเพื่อตรวจสอบคุณสมบัติการดูดซึมของ ECH และ ACT ควบคู่ไปกับสารสกัด C. tubulosa ทางอาหารและยา

Polarized Caco{{0}} monolayers ของเซลล์ เช่นเดียวกับลำไส้[25] แสดงตัวขนส่งยา efflflux ในลำไส้ที่สำคัญ เช่น P-gp, MRP และโปรตีนต้านทานมะเร็งเต้านม[26] สารฟลาโวนอยด์ในอาหารของเควอซิติน[27] และไมริซิติน[28] แสดงให้เห็นว่าสามารถยับยั้งการไหลออกของสาร P-gp-mediated ทั้งในสายพันธุ์ของเซลล์และแบบจำลองในสัตว์ Verapamil ซึ่งเป็นตัวยับยั้ง P-gp ไม่ได้เปลี่ยนแปลงการซึมผ่านของ ACT และ ECH ในโมโนเลเยอร์ของเซลล์ของ Caco-2 (รูปที่ 3) ซึ่งบ่งชี้ว่า ECH และ ACT ที่ไม่เสียหายไม่ได้ถูกจำกัดโดยปั๊ม P-gp efflflux การศึกษาก่อนหน้านี้ของเราแสดงให้เห็นว่าโปรตีน MRP2 ไม่ได้แสดงออกในเซลล์โมโนเลเยอร์ของ Caco-2 P-gp และ MRP2- efflflux ที่เป็นสื่อกลางสามารถยกเว้นในการขนส่ง ECH และ ACT ไกลโคไซด์ของเควอซิทินบางชนิดที่มีไขมันต่ำสามารถดูดซึมได้ดีกว่าเควอซิทินเอง[30] สิ่งสำคัญคือต้องสังเกตว่า ACT ที่มีมอยอิตีน้ำตาลจะกระจายอย่างรวดเร็วในเนื้อเยื่อสมอง ความสนใจของเรามุ่งเน้นไปที่การทำงานร่วมกันของการขนส่งกลูโคสสองตัวใน enterocytes: SGLT ในเมมเบรนขอบแปรงและการขนส่งกลูโคสแบบแพร่กระจาย (GLUT) ที่อำนวยความสะดวกในเมมเบรน basolateral การเพาะเลี้ยงเซลล์ Caco-2 สามารถใช้เป็นแบบจำลองในการศึกษา GLUT2 ที่ไวต่อ phloretin และสาร SGLT1 ที่ไวต่อ phloridzin และตัวขนส่ง 2 ตัว [31-44] กลูโคสถูกขนส่งจากปลายยอดไปยังด้านเบโซด้านข้างของ Caco{{27 }} monolayers ในอัตราที่สูงด้วย Papp 36.8 ± 1.1×10−6 ซม./วินาที[35] มันมี Papp ที่สูงกว่าโพรพาโนลอลสำหรับการขนส่งข้ามเซลล์ (23.4 ± 2.8 × 10−6 ซม./วินาที) ดังแสดงในตารางที่ 2 ECH และ ACT ที่ไม่บุบสลายมี Papp ต่ำกว่าที่รายงานในกลูโคสและโพรพาโนลอลแบบพาสซีฟมาก เราคำนวณลอการิทึมของค่าสัมประสิทธิ์พาร์ติชัน (octanol-water) บันทึก P คำนวณเป็น −2.32 และ 0.077 สำหรับ ECH และ ACT ตามลำดับ เชื่อกันว่าสารประกอบที่มีขั้วหรือชอบน้ำถูกขนส่งผ่านวิถีทางพาราเซลลูลาร์ (ข้ามทางแยกที่คับแคบ) phenylethanoid glycosides ทั้งสองชนิด เช่น mannitol ดูเหมือนจะถูกขนส่งผ่านเส้นทางพาราเซลลูลาร์ อย่างไรก็ตาม phloridzin ลดการซึมผ่านของ ECH และ ACT ที่ไม่บุบสลายลงอย่างมาก (ตารางที่ 2) ซึ่งบ่งชี้ว่า SGLT1 ปลายมีบทบาทสำคัญในการดูดซึมลำไส้ของ ECH และ ACT ที่ไม่บุบสลาย ที่ขนาดยาที่เท่ากัน การซึมผ่านของ ACT ที่ไม่ชอบน้ำที่สูงขึ้นนั้นใกล้เคียงกับความสามารถในการซึมผ่านของ ECH (รูปที่ 2 และตารางที่ 2) โยชิกาวะและคณะ [36] ได้แสดงให้เห็นว่าการขนส่งอำนวยความสะดวก (GLUT 1 และ 2) เช่นเดียวกับ SGLT1 ที่ไวต่อ phloridzin นั้นแสดงออกอย่างเข้มข้นในลำไส้เล็ก เนื่องจากปริมาณสารประกอบที่ดูดซึมนั้นขึ้นอยู่กับความสมดุลของมวลระหว่างการดูดซึมและการกำจัด เราจึงประเมินการมีส่วนร่วมของ GLUT2 กลูโคสตัดผ่านเยื่อหุ้มปลายของเอนเทอโรไซต์โดย SGLT1 ด้วยสัมพรรคภาพสูงและความจุต่ำ และออกจากเยื่อหุ้มเซลล์เบโซไซด์ผ่าน GLUT2 ที่มีสัมพรรคภาพต่ำและความจุสูง Phloretin (ตัวยับยั้งจำเพาะของ GLUT2) ไม่ได้ยกเลิกการขนส่ง ECH และ ACT ที่ไม่เสียหาย (รูปที่ 3) Funes และคณะ [37] แสดงให้เห็นว่า ACT มีปฏิสัมพันธ์อย่างรุนแรงกับกลุ่มฟอสเฟตของเยื่อฟอสโฟลิปิด เนื่องจากหมู่ไฮดรอกซิลมีอยู่มากมายในโครงสร้าง ACT พันธะไฮโดรเจนระหว่างกลุ่มเหล่านี้กับหัวขั้วกลีเซอรอลหรือกลุ่มฟอสเฟตของฟอสโฟลิปิดจึงเป็นปฏิกิริยาที่น่าจะเกิดขึ้นมากที่สุด เมื่อ ECH ที่ไม่เสียหายและ ACT ที่เท่ากันถูกบ่มด้วยโมโนเลเยอร์ของ Caco-2 เป็นเวลา 11 ชั่วโมง การสะสมในเซลล์ของ ACT (0.24 ± 0.04 นาโนเมตร/ซม2) นั้นมากกว่าของ ECH สามเท่า (0.07 ± 0.01 nmol/cm2 ) เราคิดว่า ECH และ ACT ที่มีความละเอียดอ่อนของ SGLT1- ถูกย้ายจาก enterocytes ไปยังกระแสเลือดอย่างช้าๆ ซึ่งอาจนำไปสู่ ​​Papp ที่ต่ำที่สังเกตได้ เมื่อเทียบกับ ECH ที่ชอบน้ำสูง การซึมผ่านต่ำของ ACT อาจเกิดจากการแทรกซึมเข้าไปในเยื่อหุ้มเซลล์

สารประกอบโพลีฟีนอลมีการบริโภคในส่วนผสมของสมุนไพรในระหว่างการใช้งานทางคลินิกและมีจำหน่ายในเชิงพาณิชย์เป็นผลิตภัณฑ์เสริมอาหาร ในการศึกษาในหลอดทดลอง แสดงให้เห็นว่าการดูดซึมของฟีนอลิกอีพิคาเทชินไม่ได้รับอิทธิพลจากองค์ประกอบส่วนผสมของวัสดุอาหารเครื่องดื่ม ในทางตรงกันข้าม เมทริกซ์ผลิตภัณฑ์ Hypericum perforatum L. ส่งผลต่อการขนส่งเคอร์ซิตินกลูโคไซด์ (รูตินและไอโซเควอซิทริน) และไฮเปอร์โรไซด์ในเซลล์ Caco-2 เนื่องจากความแตกต่างในองค์ประกอบพฤกษเคมีและลักษณะการขนส่งของเมทริกซ์ เช่น การถ่ายโอนพาราเซลลูลาร์และสารพาหะเป็นสื่อกลางหรือออกฤทธิ์ ขนส่ง. [39] ในการศึกษานี้ C. tubulosa ให้การขนส่ง transepithelial สูงกว่า ECH และ ACT ที่ไม่เสียหายสามเท่า (รูปที่ 2 และตารางที่ 2) เราคาดการณ์ว่าส่วนประกอบในสารสกัด C. tubulosa จะกระตุ้นการขนส่งที่ไวต่อ phloridzin และ/หรือเร่งการกำจัด ECH และ ACT ภายในเซลล์ สารสกัด C. tubulosa ในปริมาณสูงดูเหมือนจะปกปิดศักยภาพของการขนส่งที่ไวต่อคลอริดซินอย่างมาก (ตารางที่ 2) คาร์โบไฮเดรตในอาหาร [40] และโปรตีน [41] ทำปฏิกิริยากับโพลีฟีนอลบางชนิดในทางเดินอาหาร โมริกาวะและคณะ [10] แสดงให้เห็นว่าห้า iridoids, kankanosides AD, และ kankanol, monoterpene glycoside, kankanoside E, phenylethanoid oligoglycosides สองชนิด, kankanosides F และ G และน้ำตาล acylated oligo, kankanose สามารถแยกได้จากสารสกัด C. tubulosa ที่ใช้อยู่ในปัจจุบัน ส่วนผสมอื่นๆ รวมถึงโปรตีนในสารสกัด C. tubulosa ยังคงไม่ชัดเจน ด้วยการเก็งกำไรข้างต้น เราได้รับการออกแบบมาเพื่อตรวจสอบว่ามีส่วนประกอบอื่นๆ โต้ตอบกับ SGLT1 หรือไม่ และยับยั้งการดูดซึมของ ECH และ ACT

In-vivo experiments cannot easily distinguish between the extent of absorption and avoidance of first-pass disposition through the liver. The in-situ intestinal perfusion model has an advantage over in-vivo and in-vitro models due to the easy control of experiment parameters exclusion of the impact of other organs and maintenance of an intact intestinal blood supply.[22] The involvement of the phloridzin-sensitive glucose transporter was evaluated in an in-situ intestinal perfusion system. As shown in Figure 5, absorbed amounts of ECH and ACT concomitants in C. tubulosa extract (low dose) were greatly abolished by phloridzin, which agrees with our in-vitro data (Figure 4). Using peptides and 20 drugs passively absorbed, a good correlation is obtained between in-vivo drug absorption and the drug permeability of Caco-2 monolayers.[42] Drugs with a Papp of >1 × 10−6 ซม./วินาที ถูกดูดซึมอย่างสมบูรณ์ในมนุษย์ ในขณะที่ยาและเปปไทด์ที่ดูดซึมได้ไม่ดี (<1% of="" dose)="" have="" papp="" values="" of=""><1 ×="" 10−7="" cm/s.="" surprisingly,="" the="" papp="" of="" the="" ech="" concomitant="" (high="" dose)="" was="">1 × 10−6 ซม./วินาที (ตารางที่ 2) บ่งชี้ว่าการดูดซึมทางปากสูงในสัตว์และมนุษย์ Crespy และคณะ [43] แสดงให้เห็นว่าการไหลออกในการศึกษาการไหลเวียนของลำไส้ในแหล่งกำเนิดไม่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญระหว่าง phloridzin และ phloretin พวกเขา [44] ยังแสดงให้เห็นว่าการดูดซึมทางปากของ phloridzin ที่มีความไวต่อ SGLT1 สูงมีเพียง 10 เปอร์เซ็นต์ในหนู การศึกษาในอนาคตจำเป็นต้องประเมินความสามารถในการดูดซึมและผลตับครั้งแรกของยา ECH ที่ใช้ร่วมกับ ECH หลังจากได้รับสารสกัดจากอาหารในปริมาณที่สูง ผลลัพธ์ในแหล่งกำเนิดบ่งชี้ว่าการบริโภคสารสกัด C. tubulosa อาจปรับปรุงการดูดซึม ECH และ ACT ที่ไม่เสียหายในช่องปากในระดับต่ำ

รูปที่ 4 ผลการยับยั้งของ phloridzin ต่อการขนส่งการดูดซึมของ echinacoside และ acteoside ในCistanchetubulosaสารสกัด. ตรวจสอบการขนส่งจากยอดถึงเบโซไซด์ วงกลมและสี่เหลี่ยมปิดคือ echinacoside (a) และ acteoside (b) ในสารสกัด 4.5 มก./มล. ที่ไม่มี phloridzin ตามลำดับ เพชรปิดแสดงการบำบัดด้วยสารสกัด 4.5 มก./มล. รวมทั้งฟลอริดซิน 1 มิลลิโมลาร์ ผลลัพธ์จะได้รับโดยมีค่าเบี่ยงเบนมาตรฐาน (n=3)

รูปที่ 5 ระยะเวลาของความเข้มข้นของ echinacoside และ acteoside ในเลือดพอร์ทัลในระหว่างการหมุนเวียนเลือดในลำไส้ของหนู สัญลักษณ์วงกลมและสี่เหลี่ยมคือ echinacoside และ acteoside ตามลำดับCistanchetubulosaสารสกัดที่ความเข้มข้น 4.5 มก./มล. ถูกทำให้ฟุ้งซ่านในกรณีที่ไม่มีอยู่ (สัญลักษณ์ปิด) หรือการมีอยู่ (สัญลักษณ์เปิด) ของฟลอริดซิน 1 มิลลิโมลาร์ที่ 37 องศา ผลลัพธ์จะได้รับโดยมีค่าเบี่ยงเบนมาตรฐาน (n=3–4) *P < 0.05="" เทียบกับสารสกัดในอาหารที่มี="">

บทสรุป

สารสกัด C. tubulosa ในอาหารและยาที่ช่วยเพิ่มการดูดซึมในลำไส้ของ ECH และ ACT อาจทำหน้าที่ในการจัดการสุขภาพของมนุษย์ได้ดีขึ้น แม้ว่าการมีส่วนร่วมของการขนส่งที่ไวต่อ phloridzin ควรลดลง

การประกาศความขัดแย้งทางผลประโยชน์

ผู้เขียนประกาศว่าพวกเขาไม่มีผลประโยชน์ทับซ้อนที่จะเปิดเผย

เงินทุน

งานนี้ได้รับการสนับสนุนส่วนหนึ่งโดยศูนย์วิจัยไฮเทคจากมหาวิทยาลัยคินกิ

รับทราบ

ผู้เขียนขอขอบคุณ Osamu Muraoka (Kinki University, Osaka, Japan) และ Toshio Morikawa (Kinki University, Osaka, Japan) สำหรับการจัดหาCistanchetubulosaสารสกัดและองค์ประกอบที่บริสุทธิ์ เรารู้สึกขอบคุณมากที่ Masahiro Iwaki (มหาวิทยาลัย Kinki) ให้การสนับสนุนด้านการศึกษา

อ้างอิง

1. Tanaka J และคณะ ผลกระทบของCistanchetubulosa สารสกัดเกี่ยวกับโรคทางสมองต่างๆ รูปแบบอาหาร 21 2008; 12: 24–26.
2. ทานากะ เจ และคณะ ฟังก์ชันต่อต้านริ้วรอยของCistanchetubulosa สารสกัด. รูปแบบอาหาร 21 2008; 12: 27–29.

3. ทานากะ เจ และคณะ ฟังก์ชั่นความงามและการเจริญเติบโตของเส้นผมของCistanchetubulosaสารสกัด. รูปแบบอาหาร 21 2008; 12: 29–32.
4. ทานากะ เจ และคณะ ผลการเผาผลาญไขมันของCistanchetubulosaสารสกัด. รูปแบบอาหาร 21 2008; 12: 30–33.
5. Yoshizawa F และคณะ ส่วนประกอบของCistanchetubulosaSchrenk (ตะขอ) f.II. การแยกตัวและโครงสร้างของ phenylethanoid glycoside ใหม่และ neolignan glycoside ใหม่ เคมี Pharm Bull 1990; 38: 1927–1930.
6. Yoshikawa M และคณะ Phenylethanoid aminoglycosides และ acylated oligosugars ที่มีฤทธิ์ vasorelaxant จากCistanchetubulosa. Bioorg Med Chem 2006; 14: 7468–7475.
7. Tu PF และคณะ การวิเคราะห์ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ของเฮอร์บาซิสแทนช์โดย RP-HPLC เหยา Xue Xue เปา 1997; 32: 294–300.
8. Lei L และคณะ การควบคุมการเผาผลาญของฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์จากเฮอร์บาcistanchesในทางเดินอาหารของสุนัข เหยา Xue Xue เปา 2001; 36: 432–435.
9. Geng X และคณะ ผลกระทบต่อระบบประสาทของ echinacoside ในรูปแบบ MPTP ของหนูเมาส์ของโรคพาร์กินสัน Eur J Pharmacol 2007; 564: 66–74.
10. โมริกาว่า T และคณะ Acylated phenylethanoid aminoglycosides ที่มีฤทธิ์ปกป้องตับจากพืชทะเลทรายCistanchetubulosa. Bioorg Med Chem 2010; 18: 1882–1890.
11. Paola RD และคณะ ผลของ verbascoside ที่ทำให้บริสุทธิ์ด้วยเทคโนโลยีชีวภาพโดยการเพาะเลี้ยงเซลล์พืช syringa Vulgaris ในรูปแบบหนูของโรคปริทันต์อักเสบ เจ Pharm Pharmacol 2011; 63: 707–717.
12. Wu YT และคณะ ความมุ่งมั่นของแอคทีโอไซด์ในCistancheDeserticola และ Boschniakia rossica และเภสัชจลนศาสตร์ในหนูที่เคลื่อนไหวอย่างอิสระโดยใช้ LC-MS/MS J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2006; 844: 89–95.
13. Matthias A และคณะ การศึกษาการซึมผ่านของอัลคิลลาไมด์และคอนจูเกตกรดคาเฟอีนจากอิชินาเซียโดยใช้แบบจำลองเซลล์โมโนเลเยอร์ caco-2 J Clin Pharm Therapeut 2004; 29: 7–13.
14. เจียซีและคณะ การหาค่าอีไคนาโคไซด์ในซีรัมของหนูโดยวิธีโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงแบบย้อนกลับเฟสที่มีการตรวจหาอัลตราไวโอเลตและการประยุกต์ใช้กับเภสัชจลนศาสตร์และการดูดซึม เจ Chromatogr 2006; 844: 308–313.
15. พระคาร์ดินัลเอและคณะ เวอร์บาสโคไซด์จากน้ำโรงสีมะกอก: การประเมินความสามารถในการเข้าถึงทางชีวภาพและการดูดซึมในลำไส้โดยใช้ระบบแบบจำลองการย่อยอาหารในหลอดทดลอง/caco-2 เจ ฟู้ด วิทย์ 2011; 176: H48–H54.
16. เจียซีและคณะ เมแทบอลิซึมของอิไคนาโคไซด์ซึ่งเป็นสารต้านอนุมูลอิสระที่ดีในหนู: การแยกและการระบุสารเมตาโบไลต์ของทางเดินน้ำดี ยา Metab Dispos 2009; 37: 431–438.
17. Najar IA และคณะ การปรับกิจกรรม P-glycoprotein ATPase โดยองค์ประกอบพืชบางชนิด Phytother Res 2009; 24: 454–458.
18. Walgren RA และคณะ การไหลออกของสารฟลาโวนอยด์ เควอซิทิน 4′-เบตา-กลูโคไซด์ในอาหารผ่านเซลล์คาโค่ในลำไส้ของมนุษย์-2ชั้นเดียวโดยโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับการดื้อยาหลายขนานส่วนปลาย-2 เจ Pharmacol Exp เธอ 2000a; 294: 830– 836.
19. Walgren RA และคณะ การดูดซึมระดับเซลล์ของอาหารฟลาโวนอยด์ เควอซิติน 4′-เบตา-กลูโคซิเดสในอาหารโดยสารขนส่งกลูโคสที่ขึ้นกับโซเดียม SGLT1 เจ Pharmacol Exp เธอ 2000b; 294: 837– 843.
20. มิฮาระ เค และคณะ การเผาผลาญอาหารผ่านลำไส้ครั้งแรกของ eperisone ในหนูแรท Pharm Res 2001; 18: 1131–1137.
21. Isacchi B และคณะ ฤทธิ์ลดไข้ของ verbascoside ในสองรูปแบบของอาการปวดเมื่อยตามระบบประสาท เจ Pharm Pharmacol 2011; 63: 594–601
22. คุก TJ และคณะ การซึมผ่านของลำไส้ของคลอร์ไพริฟอสโดยใช้วิธีการกระจายลำไส้ผ่านครั้งเดียวในหนูแรท พิษวิทยา 2546; 184: 125–133.23. Kumar YS และคณะ P-ไกลโคโปรตีน- และไซโตโครม P-450-อันตรกิริยาระหว่างยาสมุนไพร ยา Metabol Drug Interact 2010; 25: 3–16.
24. Walle สหราชอาณาจักรและคณะ การขนส่งเจนิสไตน์- 7-กลูโคไซด์โดยเซลล์ CACO ในลำไส้ของมนุษย์-2: บทบาทที่เป็นไปได้สำหรับ MRP2 Res ชุมชน Mol Pathol Pharmacol 1999; 103: 45–56.
25. อิโต้ เค และคณะ การแสดงออกของพื้นผิวด้านบน/ด้านล่างของตัวขนส่งยาและบทบาทในการขนส่งยาที่เป็นพาหะ Pharm Res 2005; 22: 1559–1577.
26. Laitinen L et al. การเพาะเลี้ยงเซลล์ Caco-2 ในการประเมินการดูดซึมในลำไส้: ผลของยาบางตัวที่ใช้ร่วมกับยาและสารประกอบตามธรรมชาติในเมทริกซ์ทางชีววิทยา (University of Helsinki, Finland, 2006) Academic Dissertation, pp. 1–66.
27. Scambia G และคณะ เควอซิทินกระตุ้นผลของ adriamycin ในเซลล์มะเร็งเต้านมของมนุษย์ MCF-7 ที่ดื้อต่อยาหลายชนิด: P-glycoprotein เป็นเป้าหมายที่เป็นไปได้ เคมีบำบัดมะเร็ง Pharmacol 1994; 34: 459– 464.
28. ชอย DH และคณะ ผลของไมริซิติน สารต้านอนุมูลอิสระต่อเภสัชจลนศาสตร์ของโลซาร์แทนและสารออกฤทธิ์ EXP-3174 ในหนู: บทบาทที่เป็นไปได้ของไซโตโครม P450 3A4, ไซโตโครม P450 2C9 และ P- การยับยั้งไกลโคโปรตีนโดยไมริซิติน เจ Pharm Pharmacol 2010; 62: 908–914.
29. Tanino T และคณะ Paclitaxel-2′- เอทิลคาร์บอเนตโปรดรักสามารถหลีกเลี่ยงการไหลออกของเซลล์ที่อาศัย P-glycoprotein เพื่อเพิ่มความเป็นพิษต่อเซลล์ของยา Pharm Res 2007; 24: 555–565.
30. Hollman PC และคณะ การดูดซึมของ quercetin glycosides และ quercetin ในอาหารของอาสาสมัคร ileostomy ที่มีสุขภาพดี Am J Clin Nutr 1995; 62: 1276– 1282.
31. Kellett GL และคณะ ส่วนประกอบที่กระจายตัวของการดูดซึมกลูโคสในลำไส้เป็นสื่อกลางโดยการจัดหา GLUT2 ที่เหนี่ยวนำให้เกิดกลูโคสไปยังเมมเบรนของบอร์ดแปรง ไบโอเคม เจ 2000; 350: 155–162.
32. เรื่อง K และคณะ การคัดแยกโปรตีนจากเยื่อหุ้มเซลล์ภายในร่างกายเกิดขึ้นจากสองตำแหน่งในเซลล์เยื่อบุผิวในลำไส้ของมนุษย์ที่เพาะเลี้ยง (Caco-2) เซลล์ 1990; 60: 429–437.
33. Mahraoui L et al. การมีอยู่และการแสดงออกที่แตกต่างกันของ SGLT1, GLUT1, GLUT2, GLUT3 และ GLUT5 hexose transporter mRNAs ในสำเนาพันธุ์ของเซลล์ Caco-2 ที่เกี่ยวข้องกับการเจริญเติบโตของเซลล์และการบริโภคกลูโคส ไบโอเคม เจ 1994; 298: 629–633.
34. Mesonero J และคณะ การแสดงออกที่ขึ้นกับน้ำตาลของสารขนส่งฟรุกโตส GLUT 5 ในเซลล์ Cac-2 ไบโอเคม เจ 1995; 312: 757–762.
35. Walgren RA และคณะ การขนส่งเควอซิทินและกลูโคไซด์ผ่านเซลล์ Caco-2 ของเยื่อบุผิวในลำไส้ของมนุษย์ Biochem Pharmacol 1998; 55: 1721–1727.
36. Yoshikawa T และคณะ การแสดงออกเปรียบเทียบของสารขนส่งเฮกโซส (SGLT1, GLUT1, GLUT2 และ GLUT5) ทั่วทางเดินอาหารของหนูเมาส์ ฮิสโตเคม เซลล์ ไบโอล 2011; 135: 183–194.
37. Funes L et al. ผลของ verbascoside ซึ่งเป็นฟีนิลโพรพานอยด์ไกลโคไซด์จากเลมอนเวอร์บีน่า ต่อเยื่อหุ้มแบบจำลองฟอสโฟลิปิด เคมีฟิสิกส์ไขมัน 2010; 163: 190–199.
38. Neilson AP และคณะ อิทธิพลขององค์ประกอบเมทริกซ์ช็อกโกแลตต่อรสโกโก้-3-การเข้าถึงทางชีวภาพในหลอดทดลองและการดูดซึมในมนุษย์ เจ Agric Food Chem 2009; 57: 9418–9426.
39. Gao S และคณะ ปริมาณฟีนอลิกที่แปรผันสูงในผลิตภัณฑ์สาโทเซนต์จอห์นส่งผลต่อการขนส่งในแบบจำลองเซลล์ Caco-2 ในลำไส้ของมนุษย์: เหตุผลทางเภสัชกรรมและชีวเภสัชภัณฑ์สำหรับการกำหนดมาตรฐานผลิตภัณฑ์ เจ Agric อาหารเคมี 2010; 58: 6650–6659
40. Schramm DD และคณะ ผลของอาหารต่อการดูดซึมและเภสัชจลนศาสตร์ของโกโก้ฟลาโวนอล วิทย์ชีวิต 2003; 73: 857–869.
41. Laurent C และคณะ เมทริกซ์ไวน์ปลอดสารเอทานอลและโพลีฟีนอลกระตุ้นการสร้างความแตกต่างของเซลล์ Caco-2 ในลำไส้ของมนุษย์ อิทธิพลของความสัมพันธ์กับสารสกัดจากเมล็ดองุ่นที่อุดมด้วยโพรไซยานิดิน เจ Agric Food Chem 2005; 53: 5541–5548.
42. Artursson P และคณะ ความสัมพันธ์ระหว่างการดูดซึมยาในช่องปากในมนุษย์และสัมประสิทธิ์การซึมผ่านของยาที่เห็นได้ชัดในเซลล์เยื่อบุผิวภายในของมนุษย์ (Caco-2) ชุมชน Biochem Biophys Res 1991; 175: 880–885.

43. Crespy V และคณะ การเปรียบเทียบการดูดซึมของเควอซิทิน ฟลอเรติน และกลูโคไซด์ในหนูในลำไส้ เจ Nutr 2001a; 131: 2109–2114.

44. Crespy V และคณะ การดูดซึมของ phloretin และ phloridzin ในหนูทดลอง เจ Nutr 2001b; 131: 3227–3230.