ศึกษากลไกของประโยชน์ของ Cistanches ในการรักษาการป้องกันตับ

เชิงนามธรรม:เพื่อศึกษากลไกการทำงานของสารออกฤทธิ์ของCistanchesHerba ในการรักษาตับพังผืดในมุมมองของยา โรค และเป้าหมาย ส่วนประกอบที่มีประสิทธิภาพของ Cistanches Herba ถูกรวบรวมผ่านฐานข้อมูลเภสัชวิทยาระบบการแพทย์แผนจีนและแพลตฟอร์มการวิเคราะห์ (TCMSP) ฐานข้อมูลสารานุกรมการแพทย์แผนจีน (ETCM) ฐานข้อมูลครอบคลุมการวิจัยยาจีนโบราณ (TCMID) ฐานข้อมูล CNKI PubMed และฐานข้อมูลอื่น ๆ ยีนเป้าหมายของส่วนประกอบที่ใช้งานของซิสตันเชส เฮอร์บาได้มาจากฐานข้อมูล Uniprot และยีนโรคของพังผืดในตับถูกรวบรวมโดยฐานข้อมูล GeneCards และฐานข้อมูล OMIM เป้าหมายขององค์ประกอบที่ใช้งานจะถูกตัดด้วยตับพังผืดเป้าหมายและเครือข่ายยาจีน-ส่วนประกอบ-โรค. เครือข่ายปฏิสัมพันธ์ของโปรตีน (PPI) ถูกสร้างขึ้นโดยฐานข้อมูลสตริงและซอฟต์แวร์ Cytoscape 3.7.1 ฟังก์ชัน GO และเส้นทาง KEGG ถูกเสริมด้วยฐานข้อมูล DAVID

โมเดลสัตว์ของตับพังผืดก่อตั้งขึ้น เนื้อหาของ LN, HA, PCIII และ Col IV ในเนื้อเยื่อตับของหนูถูกตรวจพบโดยชุดอุปกรณ์ ELISA, การเปลี่ยนแปลงทางจุลพยาธิวิทยาของตับถูกสังเกตโดยการย้อมสี HE และ Masson และการถอดรหัสของ PI3K และ AKT mRNA ถูกตรวจพบโดยการเรืองแสงแบบเรียลไทม์ PCR เชิงปริมาณ แปดองค์ประกอบที่ใช้งานของ Cistanches Herba, 157 เป้าหมายและ 1 005 เป้าหมายของตับพังผืดถูกรวบรวมและคัดกรอง และ 92 เป้าหมายที่ตัดกัน ซึ่งเกี่ยวข้องกับเส้นทางสัญญาณหลัก 5 ทาง รวมถึงเส้นทางสัญญาณมะเร็ง เส้นทางสัญญาณไวรัสตับอักเสบบี เส้นทางสัญญาณ PI3K-AKT เส้นทางสัญญาณปัจจัยเนื้อร้ายของเนื้องอก โปรตีโอไกลแคน และมะเร็ง การทดลองในสัตว์ทดลองพบว่าเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มตัวอย่าง กลุ่มที่มีปริมาณรังสีสูง กลาง และต่ำของปริมาณทั้งหมดฟีนิลเอทานอลไกลโคไซด์ที่มีแอกทิโอไซด์ของ Cistanches Herba (700, 350, 175 มก./กก.) สามารถลดปริมาณ LN, HA, PCIII และ Col IV ในเนื้อเยื่อตับของหนูที่เป็นพังผืดในตับได้อย่างมีนัยสำคัญ การสังเกตทางพยาธิสภาพของเนื้อเยื่อตับพบว่าทั้งหมดphenylethanol glycosides ของ Cistanches Herbs ประโยชน์:สามารถลดอาการบาดเจ็บที่ตับและเพิ่มประสิทธิภาพระบบต่อต้านริ้วรอย. การตรวจจับ PCR เชิงปริมาณเรืองแสงแบบเรียลไทม์แสดงให้เห็นว่าการแสดงออกของ mRNA ของ PI3K และ AKT ในเนื้อเยื่อตับของกลุ่มแบบจำลองได้รับการควบคุมอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับกลุ่มปกติ เมื่อเทียบกับกลุ่มแบบจำลอง การแสดงออกของ mRNA ของ PI3K และ AKT ในกลุ่มปริมาณสูง กลาง และต่ำของฟีนิลเอธานอลไกลโคไซด์ทั้งหมดของ Cistanches Herba ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ และกลไกของมันอาจทำให้การลุกลามของพังผืดในตับล่าช้าโดยการยับยั้งการกระตุ้นทางเดิน PI3K-AKT . ฟีนิลเอธานอลไกลโคไซด์ทั้งหมดของ Cistanches Herba มีผลต่อชะลอความแก่ของตับซึ่งวางรากฐานสำหรับการศึกษาเพิ่มเติมเกี่ยวกับผลทางเภสัชวิทยาของซิสตันเชส เฮอร์บา. 

(คลิกที่นี่เพื่อดูประโยชน์ของ cistanche)

คำสำคัญ:ซิสตันเชส เฮอร์บา; เภสัชวิทยาเครือข่าย การเทียบท่าระดับโมเลกุลตับพังผืด;การป้องกันตับ

ผู้เขียน:ZHANG Bo-rui1, MA Qian-qian1, WANG Wen-yi1, ZHANG Shi-lei1, LIU Tao1, ZHAO Jun2, MA Long1*

คณะสาธารณสุขศาสตร์ มหาวิทยาลัยการแพทย์ซินเจียง เมืองอุรุมชี 830054 ประเทศจีน; 2Key Laboratory of Uygur Medicine, Xinjiang Pharmaceutical Research Institute, Urumqi 830004, China

ตับเป็นต่อมย่อยอาหารที่สำคัญในร่างกายมนุษย์ และเมื่อเกิดโรคขึ้น มันจะส่งผลต่อการทำงานของการเผาผลาญตามปกติของร่างกายมนุษย์ จากการศึกษาพบว่าวิธีที่สำคัญในการสร้างมะเร็งตับคือการเป็นพังผืดของตับเมื่อตับถูกกระตุ้น เซลล์ภูมิคุ้มกันจะหลั่งปัจจัยควบคุมภูมิคุ้มกันจำนวนมาก นำไปสู่การกระตุ้นและการขยายตัวของเซลล์ตับ stellate การสังเคราะห์คอลลาเจนจำนวนมาก และการสะสมของเมทริกซ์นอกเซลล์จำนวนมากในตับ ส่งผลให้ การก่อตัวของพังผืด ดังนั้นการควบคุมโรคตับในระยะใดระยะหนึ่งอาจลดความเสียหายของโรคตับลงได้ และการวิจัยเกี่ยวกับการรักษาโรคตับพังผืดเป็นสิ่งสำคัญมาก

ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา จากการศึกษาพบว่าCistancheมีผลการรักษาที่ชัดเจนในการรักษาโรคตับและแสดงให้เห็นข้อดีที่ชัดเจนในการรักษาพังผืดในตับ

Cistanches Herba ยารักษาโรคของแท้ในซินเจียง เป็นที่รู้จักในชื่อ "โสมทะเลทราย" และมีการใช้ทางการแพทย์มาเป็นเวลาหลายพันปี

ประโยชน์ของ Cistanche

การวิจัยสมัยใหม่พบว่ามีกิจกรรมทางชีวภาพต่างๆ เช่นต่อต้านริ้วรอย,ปกป้องตับ,บรรเทาความเมื่อยล้า,ป้องกันโรคกระดูกพรุน,ยาระบายและอื่นๆ.คุณและคณะ [8] แสดงให้เห็นว่าCistanchephenylethanoid สามารถบรรเทาระดับของการเกิดพังผืดในตับ Zhang et al[9] พบว่าการกระตุ้นเซลล์ตับและการเกิดพังผืดของตับสามารถยับยั้งได้โดยCistancheฟีนิลเลทานอยด์ไลโปโซม อย่างไรก็ตาม ฤทธิ์ทางเภสัชวิทยาของCistancheในการรักษาภาวะพังผืดในตับและกลไกการทำงานของมันยังไม่ชัดเจนและยังคงต้องอธิบายให้กระจ่าง

ในการศึกษานี้ เภสัชวิทยาของเครือข่ายถูกใช้เพื่อสร้างแผนภาพเครือข่าย "องค์ประกอบ-โรค-เป้าหมาย-เส้นทาง" [10] จากนั้นจึงใช้ปฏิกิริยาระหว่างโปรตีนและการวิเคราะห์การเพิ่มคุณค่าเป้าหมาย [11] เพื่อทำนายเป้าหมายและเป้าหมายที่เกี่ยวข้องของCistancheในการรักษาตับพังผืด. วิถีทางผ่านเทคโนโลยีการเชื่อมต่อระดับโมเลกุลและการทดลองกับสัตว์ เป็นพื้นฐานสำหรับผลทางเภสัชวิทยาของส่วนผสมออกฤทธิ์ของCistancheในการรักษาพังผืดของตับ

1 วัสดุและวิธีการของ Cistanche

1.1 การคัดกรองเป้าหมายที่เกี่ยวข้องของส่วนประกอบที่ใช้งานของ Cistanche deserticola

1.1.1 การคัดกรองส่วนประกอบที่ออกฤทธิ์ทางเคมีของ Cistanche

การใช้ "Cistanche" เป็นคำค้นหา การดูดซึมทางปาก (OB) มากกว่าหรือเท่ากับ 30 เปอร์เซ็นต์ ความเหมือนยา (ความเหมือนยา) ถูกคัดกรองในแพลตฟอร์มการวิเคราะห์เภสัชวิทยาระบบการแพทย์แผนจีน (TCMSP) . , DL) มากกว่าหรือเท่ากับ 0.18 เป็นส่วนผสมออกฤทธิ์ แล้วรวมกับฐานข้อมูลสารานุกรมการแพทย์แผนจีน (ETCM) ฐานข้อมูลครอบคลุมการวิจัยการแพทย์แผนจีน (TCMID) ฐานข้อมูล CNKI ฐานข้อมูล PubMed เพื่อเสริมส่วนประกอบที่เกี่ยวข้องของ Cistanche

1.1.2 ส่วนประกอบที่ใช้งานของเป้าหมายโรค Cistanche และโรคพังผืดในตับ

โดยใช้ฐานข้อมูล Uniprot เป้าหมายของโปรตีนที่สอดคล้องกับส่วนประกอบที่ใช้งานของ Cistanche ถูกคัดกรอง จากนั้น ฐานข้อมูลคำอธิบายประกอบของจีโนมและฐานข้อมูลทางพันธุกรรมของ Mendelian ถูกใช้เพื่อค้นหา "พังผืดในตับ" เป็นคีย์เวิร์ดเพื่อให้ได้เป้าหมายโปรตีนที่เกี่ยวข้องในฐานข้อมูล และในที่สุดก็ได้เป้าหมายโปรตีนร่วมกันของทั้งสอง

1.1.3 การสร้างและการวิเคราะห์เครือข่ายของ "ส่วนประกอบที่ออกฤทธิ์ของ Cistanche - เป้าหมายของการเกิดพังผืดในตับ - โปรตีน" ฐานข้อมูล String ถูกใช้เพื่อสร้างเครือข่ายของ "ส่วนประกอบที่ใช้งานของ Cistanche - ตับพังผืด - เป้าหมายโปรตีน" สำหรับการแสดงภาพ แต่ละโหนดแสดงถึงยีน โปรตีน หรือส่วนประกอบที่ใช้งานอยู่ และการเชื่อมต่อระหว่างโหนดแสดงถึงการเชื่อมต่อระหว่างส่วนประกอบที่ใช้งานอยู่กับเป้าหมายที่เกี่ยวข้อง ยีนหลักในเครือข่ายได้รับการวิเคราะห์ตามระดับของเครือข่าย และในที่สุดก็ได้เครือข่ายปฏิสัมพันธ์ของโปรตีน .

1.1.4 การวิเคราะห์การเพิ่มสมรรถนะ GO และ KEGG

ฐานข้อมูลของ David นำเข้าเป้าหมายของ Cistanche ในการรักษาพังผืดในตับ ดำเนินการวิเคราะห์ GO และ KEGG เสริมสมรรถนะ และคัดกรองตามค่า Count

1.1.5 การเทียบท่าระดับโมเลกุล

รับโครงสร้างทางเคมี 2 มิติของส่วนประกอบออกฤทธิ์หลักของ Cistanche Cistanche ผ่านฐานข้อมูล PubChem ค้นหาโครงสร้าง 3 มิติของโปรตีนเป้าหมายหลักที่เกี่ยวข้องในฐานข้อมูล PDB ทำการเทียบท่าระดับโมเลกุลผ่านซอฟต์แวร์ Autodock เพื่อให้ได้ไซต์ที่มีพลังงานยึดเหนี่ยวสูงสุด และ ในที่สุดก็เห็นภาพมันผ่านการประมวลผลซอฟต์แวร์ Pymol

1.2 การทดลองกับสัตว์ในประโยชน์ของ Cistanche

1.2.1 สัตว์ทดลอง

หนูคุนหมิงเพศผู้ 60 ตัว เกรด SPF น้ำหนัก 18-22 กรัม ซื้อจากศูนย์สัตว์ทดลองของมหาวิทยาลัยการแพทย์ซินเจียง หมายเลขใบอนุญาตใช้งานจริงคือ SCXK (ใหม่) 2018-0002 หมายเลขใบอนุญาตใช้งานคือ SYXK (ใหม่) 2018-0003 และหมายเลขอนุมัติด้านจริยธรรม: IACUC-20210326-10

1.2.2 น้ำยาหลัก

Cistanche phenethanoid glycosides (CPhGs) (ซื้อจาก Xinjiang Hetian Dichen Pharmaceutical and Biological Co., Ltd., หมายเลขแบทช์: 20180502); Compound Biejia Ruangan Tablets (ผลิตภัณฑ์ของ Mongolia Furui Technology Co., Ltd.); ลามินินของเมาส์ (LN), กรดไฮยาลูโรนิกของเมาส์ (HA), โปรคอลลาเจนของเมาส์ชนิด III (PCIII), คอลลาเจน IV ชนิดเมาส์ (Col IV) ชุด ELISA

(Beijing Jianglai Reagent Co., Ltd., หมายเลขแบทช์: JL20286-96T, JL2406-96T, JL20169-96T, JL20128-96T); น้ำยาย้อมสี Masson Trichrome (Zhuhai Besso, หมายเลขแบทช์: 20210115); ชุดย้อมสี Hematoxylin และ eosin (HE) (Solebo HE dyedColor Kit G1120); SuperReal Fluorescence Quantitation Master Mix Reagent Color Edition (SYBR Green, Tiangen FP205-02); FastKing RT Kit (ด้วย gDNase, Tiangen KR116-02); Transzol ขึ้น (ทองคำเต็ม ET111-01)

1.2.3 เครื่องมือหลัก

HZQ-C เครื่องปั่นอุณหภูมิคงที่แบบเต็มความชื้น (Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.); DK-8D อ่างน้ำร้อนอุณหภูมิคงที่ไฟฟ้า (Jiangsu Jinyi Instrument Technology Co., Ltd.); HC-3018R เครื่องหมุนเหวี่ยงเย็นความเร็วสูง (Anhui Zhongke Zhongjia Science and Technology Co., Ltd.) Instrument Co., Ltd.); เครื่องอ่านไมโครเพลท Varioskan Flash, เครื่องมือ PCR แบบเรียลไทม์ QuantStudio 6 (Thermo Fisher Scientific, สหรัฐอเมริกา); Retsch เครื่องบดกระดาษทิชชูกำลังสูง MM400; เครื่องย้อมสีอเนกประสงค์ ST5020 (Shanghai Leica Trading Co., Ltd. )

1.2.4 วิธีการทดลอง

สัตว์ถูกแบ่งแบบสุ่มเป็นกลุ่มควบคุมปกติ, กลุ่มแบบจำลอง, กลุ่มควบคุมเชิงบวก (840 มก./กก.), กลุ่มที่มีปริมาณการใช้สูงของ CPhGs (CPhGs-H, 700 มก./กก.), กลุ่มที่มีขนาดยาปานกลาง (CPhGs-M, 350 มก./กก.) , กลุ่มขนาดต่ำ (CPhGs-L, 175 มก./กก.);

กลุ่มควบคุมเชิงบวกได้รับเม็ดยา Compound Biejia Ruangan ซึ่งอ้างอิงถึงคำแนะนำของยา (ครั้งละ 4 เม็ด วันละ 3 ครั้ง; 0.5 กรัมต่อเม็ด) และ "บทแนะนำการทดลองเกี่ยวกับการทำงาน" ที่เผยแพร่โดย สำนักพิมพ์การแพทย์ทหารของประชาชน การแปลง; กลุ่มที่ได้รับยา CPhG สูง ปานกลาง และต่ำอ้างอิงจากเอกสารที่เกี่ยวข้อง [17] และผลก่อนการทดลอง และกลุ่ม CPhG สูง ปานกลาง และต่ำของหนู (500, 250, 125 มก./กก.) จะถูกแปลงตามปริมาณของหนู และหนูเมาส์ อัตราส่วน 1:1.4 ถูกแปลงเป็นกลุ่ม CPhG ในขนาดสูง ปานกลาง และต่ำ (700, 350, 175 มก./กก.), หนู 10 ตัวในแต่ละกลุ่ม; กลุ่มควบคุมปกติถูกฉีดด้วยน้ำเกลือปกติในปริมาณเท่ากัน และหนูในกลุ่มอื่น ๆ ถูกฉีด หนูทั้งหมดถูกฉีดเข้าช่องท้องด้วยสารละลายน้ำมันมะกอก CCl4 10 เปอร์เซ็นต์ (5 มล./กก.) สองครั้งต่อสัปดาห์เป็นเวลา 8 สัปดาห์ เพื่อสร้างแบบจำลองเมาส์พังผืดในตับ กลุ่มควบคุมปกติและกลุ่มแบบจำลองได้รับน้ำกลั่นโดยวิธีทางสายยาง และกลุ่มอื่นๆ ได้รับน้ำกลั่นโดยวิธีทางสายยาง ทั้งหมดถูกบริหารให้โดยทางสายยางที่ขนาดยาที่ตั้งไว้เป็นเวลา 8 สัปดาห์

1.2.5 การตรวจจับดัชนีทางชีวเคมี

เนื้อหาของ LN, HA, PCIII และ Col IV ในเนื้อเยื่อตับถูกตรวจพบโดยวิธี ELISA ด้วยเครื่องอ่านไมโครเพลท และปฏิบัติตามคำแนะนำของชุดอุปกรณ์อย่างเคร่งครัด

1.2.6 การสังเกตทางจุลพยาธิวิทยาของตับ

เนื้อเยื่อตับได้รับการแก้ไขด้วยสารละลายพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 4 เปอร์เซ็นต์ ถูกทำให้แห้งในเอทานอล ฝังในพาราฟิน จากนั้นแบ่งส่วน และย้อมด้วย HE และ Masson เพื่อสังเกตส่วนเนื้อเยื่อตับ

1.2.7 การตรวจจับการถอดรหัส PI3K และ AKT mRNA ด้วย PCR เชิงปริมาณการเรืองแสงแบบเรียลไทม์

เนื้อเยื่อตับของหนูเมาส์ถูกเอาออกและเติมด้วยรีเอเจนต์ Transzol เพื่อแยก RNA ทั้งหมดของเนื้อเยื่อตับของหนูเมาส์ RT-PCR ถูกใช้เพื่อตรวจสอบการถอดรหัส mRNA ของ PI3K และ AKT ในตับของหนูเมาส์ ลำดับยีนที่เกี่ยวข้องแสดงในตารางที่ 1

1.2.8 วิธีการทางสถิติ

SPSS 21.0 ใช้สำหรับการวิเคราะห์ทางสถิติ และข้อมูลถูกแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (x ± s);

ANOVA ทางเดียวสำหรับการเปรียบเทียบค่าเฉลี่ยระหว่างกลุ่ม มิฉะนั้น จะใช้การทดสอบผลรวมอันดับ และระดับการทดสอบคือ=0.05

2 ผลลัพธ์ของการทดสอบฟังก์ชัน Cistanche

2.1 การคัดกรองสารออกฤทธิ์ของ Cistanche

รวม 75 องค์ประกอบที่รู้จักของCistancheถูกคัดออก และ OB มากกว่าหรือเท่ากับ 30 เปอร์เซ็นต์ และ DL ที่มากกว่าหรือเท่ากับ 0.18 ถูกตั้งค่าเป็นเกณฑ์การคัดกรอง และได้ส่วนประกอบออกฤทธิ์ที่เข้าเงื่อนไข 8 อย่าง: -ซิโทสเตอรอลและอะราคิโดเนต , Suzilactone (suchilactone), Liriodendron resin B dimethyl ether (yangambiin), quercetin (quercetin), dipicaine (marckine), verbascoside (acteoside), echinacoside (echinacoside) , ได้ฐานข้อมูลเป้าหมายทั้งหมด 157 ตัวจากฐานข้อมูล Uniprot

(ดูรูปที่ 1)

รูปที่ 1 แผนที่เป้าหมายส่วนผสมออกฤทธิ์ของ Cistanches Herba

2.2 การสร้างเครือข่ายและการวิเคราะห์ "ส่วนประกอบที่ใช้งานของ Cistanche deserticola - พังผืดในตับ - เป้าหมายโปรตีน"

The GeneCards and OMIM databases were searched to obtain 1 005 targets related to liver fibrosis, and the 157 potential protein targets of Cistanche deserticola and 1 005 protein targets related to liver fibrosis were deduplicated, and Venn diagrams were drawn ( See Figure 2), import 92 common targets into the String database, and perform visual processing to construct a network of "active components of Cistanche deserticola - liver fibrosis - protein targets" (see Figure 3), in which the core targets are: AKT, ICAM1, MMP9, BCL-2, ADRB2, CASP3, JUN, PON1, PIK3CG, RXRA, CASP8, PPARG, BAX, NOS3, PRKCA, TGFB1, CASP9, etc. degree>50 ถูกใช้เป็นธรณีประตู และไดอะแกรมเครือข่ายอันตรกิริยาของโปรตีนถูกวาดขึ้นตามค่าของดีกรีและคะแนนรวม (ดูรูปที่ 4)

รูปที่ 2 แผนภาพเวนน์ของเป้าหมายทั่วไปของยาและโรคของ Cistanches Herba ในการรักษาภาวะพังผืดของตับ

รูปที่ 3 แผนภาพเครือข่ายของ "โรคเป้าหมายทั่วไปที่เป็นส่วนประกอบ" ของ Cistanches Herba ในการรักษาภาวะพังผืดในตับ

2.2 การสร้างเครือข่ายและการวิเคราะห์ "ส่วนประกอบที่ใช้งานของเป้าหมาย Cistanche -ตับ fibrosis-protein"

ฐานข้อมูล GeneCards และ OMIM ได้รับ 1 005 เป้าหมายที่เกี่ยวข้องกับการเกิดพังผืดในตับ ขจัดเป้าหมายโปรตีนที่เป็นไปได้ 157 เป้าหมายของ Cistanche deserticola และ 1 005 เป้าหมายโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับโรคพังผืดในตับ และวาดแผนภาพเวนน์ (ดูรูปที่ 2) นำเข้า 92 เป้าหมายทั่วไปในฐานข้อมูล String และทำการประมวลผลภาพเพื่อสร้างเครือข่าย "ส่วนประกอบที่ใช้งานของ Cistanche deserticola - ตับพังผืด - เป้าหมายโปรตีน" (ดูรูปที่ 3) ซึ่งเป้าหมายหลักคือ: AKT, ICAM1, MMP9 , BCL{ {10}}, ADRB2, CASP3, JUN, PON1, PIK3CG, RXRA, CASP8, PPRG, BAX, NOS3, PRKCA

หมายเหตุ: พื้นที่โหนดในรูปแสดงค่าองศา และความหนาของการเชื่อมต่อแสดงถึงค่าคะแนนรวม

2.3 การวิเคราะห์การเพิ่มสมรรถนะ GO และ KEGG

จากฐานข้อมูลของ David เป้าหมายของโปรตีน 92 รายการในการรักษาภาวะพังผืดในตับถูกนำเข้าไปยังฐานข้อมูลเพื่อการวิเคราะห์การเสริมสมรรถนะ (ดูรูปที่ 5) เลือกสิบอันดับแรกด้วยค่า Count ของส่วนประกอบเซลล์ กระบวนการทางชีววิทยา และหน้าที่ระดับโมเลกุล ในหมู่พวกเขา กระบวนการทางชีววิทยาเกี่ยวข้องกับการควบคุมเชิงบวกของการถอดรหัสดีเอ็นเอ การควบคุมเชิงลบของการตายของเซลล์ การแก่ชรา การตอบสนองต่อการอักเสบ การควบคุมเชิงบวกของการเพิ่มจำนวนเซลล์ การตายของเซลล์ การตายของเซลล์ การส่งสัญญาณ ฯลฯ หน้าที่ระดับโมเลกุลส่วนใหญ่รวมถึงการผูกมัดของเอนไซม์ โปรตีน ปัจจัยการถอดรหัสและ โปรตีนที่เหมือนกัน การจับ DNA การจับไอออนของสังกะสี ฯลฯ ส่วนประกอบของเซลล์ส่วนใหญ่ประกอบด้วยนิวเคลียส ไซโทพลาซึม สภาพแวดล้อมภายนอกเซลล์ พลาสมาเมมเบรน เยื่อหุ้มเซลล์ ไมโทคอนเดรีย ฯลฯ

เส้นทาง 20 อันดับแรกถูกคัดกรองโดยอิงจากฐานข้อมูลของ David และค่า Count และการวิเคราะห์การเสริมสมรรถนะของทางเดินได้ดำเนินการกับเป้าหมายที่เป็นไปได้ของ Cistanche Deserticola ในการรักษาภาวะพังผืดในตับ (ดูรูปที่ 6) เส้นทางหลักที่ได้รับ ได้แก่ PI3K-AKT (ดูรูปที่ 7) เส้นทางการส่งสัญญาณ TNF เส้นทางการส่งสัญญาณ HBV เป็นต้น

รูปที่ 5 การวิเคราะห์ GO ของเป้าหมายที่เป็นไปได้ของ Cistanches Herba ในการรักษาภาวะพังผืดในตับ

รูปที่ 6 การวิเคราะห์การเพิ่มคุณค่าของเส้นทางสัญญาณ KEGG

รูปที่ 7 เส้นทาง PI3K-AKT ของ Cistanches Herba ในการรักษาภาวะพังผืดในตับ

2.4 การสร้างเครือข่ายเส้นทางการพังผืดของสารออกฤทธิ์ - ตับ - เป้าหมาย - ทางเดินของ Cistanche

การประมวลผลภาพเพื่อสร้างเครือข่าย "ส่วนประกอบที่ใช้งานของ Cistanche deserticola-liver fibrosis-target-pathway" (ดูรูปที่ 8)

รูปที่ 8 สารออกฤทธิ์ของ Cistanches Herba-liver fibrosis-protein target-pathway

หมายเหตุ: สีแดงแสดงถึงการเกิดพังผืดของตับ สีเขียวแสดงถึงองค์ประกอบที่ใช้งานของ Cistanches Herba; สีส้มแสดงถึงทางเดิน สีน้ำเงินแสดงถึงเป้าหมายของโปรตีน และส่วนของเส้นแสดงถึงความสัมพันธ์ระหว่าง Cistanches Herba กับการเกิดพังผืดของตับ

2.5 ผลการเทียบท่าระดับโมเลกุลของส่วนประกอบออกฤทธิ์ของ Cistanche ในการรักษาภาวะพังผืดของตับ

สององค์ประกอบที่สำคัญที่สุดของCistanche, Verascoside และ Echinacea เชื่อมต่อระดับโมเลกุลกับอัลบูมินเป้าหมาย ICAM1, AKT1 และ MMP9 โดยซอฟต์แวร์ Autodock พลังงานยึดเหนี่ยวแสดงในตารางที่ 2 ผลลัพธ์ถูกนำเข้าไปยังซอฟต์แวร์ Pymol สำหรับการแสดงภาพ และผลการเทียบท่าระดับโมเลกุลแสดงให้เห็นว่า verbasin และ AKT ก่อให้เกิดพันธะไฮโดรเจนที่ตำแหน่งของ ASN-54, TYR-272 และ LYS-297; สร้างพันธะไฮโดรเจนที่ตำแหน่ง 10; Verbasin และ MMP9 ก่อให้เกิดพันธะไฮโดรเจนที่ LEU-188, ALA-189, GLU-227, HIS-230, HIS-236, HIS-226 ตำแหน่ง;

Echinacea สร้างพันธะไฮโดรเจนกับ AKT ที่ตำแหน่ง GLU-356, HIS-297, ASN-296, ALA-226, LYS-294 และ GLU-228 ; อิไคนาโคไซด์ก่อรูปพันธะไฮโดรเจนกับ ICAM1 ที่ตำแหน่ง DA-7, DT-8 , DT-11, DT-12 และ DC-13 ก่อรูปพันธะไฮโดรเจน

เวอร์เบซินสร้างพันธะไฮโดรเจนด้วย MMP9 ที่ตำแหน่ง HIS-230, HIS-236, HIS-226, GLU-227, ALA-189, LEU-188, TYR-248 (ดูรูปที่ 9)

ตารางที่ 2 การจับพลังงานระหว่างส่วนประกอบออกฤทธิ์หลักและเป้าหมายของโปรตีนหลัก (กิโลจูล/โมล)

รูปที่ 9 ผลลัพธ์ของการเทียบท่าโมเลกุล

หมายเหตุ: AF คือไดอะแกรมการเทียบท่าระดับโมเลกุลของแอกทีโอไซด์และ AKT, แอคทีโอไซด์และ ICAM1, แอกทิโอไซด์และMMP9, echinacoside และ AKT, echinacoside และ ICAM1 และ echinacoside และ MMP9 ตามลำดับ

2.6 ความแตกต่างในเนื้อหาของ LN, HA, PCIII และ Col IV ในแต่ละกลุ่มของหนู

เมื่อเทียบกับกลุ่มปกติ เนื้อหาของ LN, HA, PCIII และ Col IV ในกลุ่มโมเดลเพิ่มขึ้น และความแตกต่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (P<0.01). the="" contents="" of="" pciii="" and="" col="" iv="" (p="" <="" 0.01)="" indicated="" that="" cphgs="" had="" an="" anti-hepatic="" fibrosis="" effect="" (see="" table="" 3,="" figure="">

ตารางที่ 3 ความแตกต่างในเนื้อหาของ LN, HA, PCIII และ Col IV ในหนูกลุ่มต่างๆ (x  ± s, n = 9)

หมายเหตุ: เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมปกติ#P<0.01; compared="" with="" model="" group,="">**P<>

2.7 การสังเกตทางจุลพยาธิวิทยาของตับ

การย้อมสี HE (ดูรูปที่ 10): ในกลุ่มปกติ สัณฐานวิทยาของเซลล์ตับเป็นปกติ ก้อนตับไม่บุบสลาย และไม่มีการกระจายของความเสื่อมและเนื้อร้ายของเซลล์ตับและเซลล์อักเสบ บริเวณประตูมิติมองเห็นได้ชัดเจน และมีเซลล์ตับที่จัดเรียงไว้อย่างเป็นระเบียบรอบเส้นเลือดส่วนกลาง กลุ่มแบบจำลองมีเนื้อร้าย punctate ตับแข็ง การเพิ่มจำนวน บวมน้ำ การแทรกซึมของเซลล์อักเสบ และเม็ด eosinophilic จำนวนมาก กลุ่มที่ให้ยาสูง ปานกลาง และต่ำ และคู่บวก

ในกลุ่มควบคุม ระดับของเนื้อร้ายของตับอ่อนและเม็ด eosinophilic ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ

การย้อมสี Masson (ดูรูปที่ 11): กลุ่มปกติมีโครงสร้างทางสัณฐานวิทยาที่สมบูรณ์ของ hepatocytes และมีเส้นใยคอลลาเจนเพียงไม่กี่เส้นเท่านั้นที่เห็นในผนังหลอดเลือดหลังจากการย้อมสีคอลลาเจน ในกลุ่มแบบจำลอง pseudolobules จำนวนมากที่เกิดจากเส้นใยสีน้ำเงินล้อมรอบพื้นที่พอร์ทัลและเห็นแวคิวโอลจำนวนมาก กลุ่มที่มีปริมาณรังสีสูง ปานกลาง และต่ำ และกลุ่มควบคุมเชิงบวกสามารถลดระดับการเกิดพังผืดในตับในเนื้อเยื่อตับได้อย่างมีนัยสำคัญ และเส้นใยสีน้ำเงินรอบๆ บริเวณพอร์ทัลลดลงอย่างมีนัยสำคัญ

รูปที่ 10 ผลของ CPhG ต่อการเปลี่ยนแปลงทางจุลพยาธิวิทยาของตับในหนูเมาส์ที่มีการเกิดพังผืดในตับที่เกิดจาก CCl4

หมายเหตุ: A: ปกติ; B: รุ่น; C: กลุ่มควบคุมเชิงบวก; D: CPhGs-H; E: CPhGs-M; F: CPhGs-L. ข้างล่างเหมือนกัน

รูปที่ 11 ผลของ CPhG ต่อการเปลี่ยนแปลงของเส้นใยคอลลาเจนในเนื้อเยื่อตับของหนูที่มีพังผืดในตับที่เกิดจาก CCl4

2.8 การตรวจจับการแสดงออกของ PI3K และ AKT mRNA ด้วย PCR เชิงปริมาณการเรืองแสงแบบเรียลไทม์

เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุมปกติ การแสดงออกของ PI3K และ AKT mRNA ในเนื้อเยื่อตับของหนูในกลุ่มแบบจำลองได้รับการควบคุมอย่างมีนัยสำคัญ (P<>

เมื่อเทียบกับกลุ่มแบบจำลอง การแสดงออกของ mRNA ของ PI3K และ AKT ในกลุ่มควบคุมเชิงบวกและกลุ่มที่มีขนาดยาสูง ปานกลาง และต่ำของปริมาณไกลโคไซด์ทั้งหมดของฟีนอลแอลกอฮอล์จาก Cistanche deserticola ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (P<0.01) (table="">

ตารางที่ 4 การถอดความของ PI3K และ AKT mRNA ในเนื้อเยื่อตับของหนูเมาส์ (x± s, n = 9)

หมายเหตุ: เปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมปกติ #P<0.01; compared="" with="" model="" group,=""><>

3 การอภิปรายและข้อสรุป

กระบวนการพัฒนาของการเกิดพังผืดในตับนั้นซับซ้อน และไซโตไคน์และวิถีทางของเซลล์ต่างๆ "สื่อสาร" และมีอิทธิพลซึ่งกันและกัน ทำให้เกิดเครือข่ายปฏิสัมพันธ์ที่ซับซ้อน ดังนั้นการบำบัดแบบกำหนดเป้าหมายเดียวและแบบช่องทางเดียวจึงเป็นเรื่องยากที่จะทำงาน การแพทย์แผนจีนมีลักษณะของการกระทำหลายองค์ประกอบ หลายเป้าหมาย และซับซ้อน เพื่อควบคุมร่างกายมนุษย์อย่างเป็นระบบ Cistanche deserticola มีฤทธิ์ปกป้องตับ ส่วนผสมออกฤทธิ์ของ Cistanche deserticola ได้มาจากฐานข้อมูลของยาจีนโบราณ TCMSP และฐานข้อมูลอื่น ๆ : Verbasin, echinacoside, -sitosterol, กรด arachidonic, suzilactone, Liriodendron Resinol B dimethyl ether , quercetin, dipicaine

การศึกษาพบว่า phenylethanoid glycosides ของCistancheเป็นส่วนประกอบสำคัญของCistancheโดยที่เอไคนาโคไซด์และเวอร์บาสโคไซด์ถือเป็นส่วนประกอบออกฤทธิ์ทางชีวภาพหลักของCistanche. ผลของเบญจมาศไกลโคไซด์สัมพันธ์กับปัญหาตับ

กำหนดเป้าหมายและตรวจสอบโดยการเชื่อมต่อระดับโมเลกุล

Echinaceaและverbascosideในฐานะที่เป็นส่วนประกอบหลักใน Cistanche ให้ฤทธิ์ต้านการเกิดพังผืดของตับโดยควบคุมอะพอพโทซิสของเซลล์ตับ ICAM1, AKT และ MMP9 อาจเป็นเป้าหมายของ echinacoside และ verbasin ในการรักษาพังผืดในตับ ในฐานะที่เป็นปัจจัยการยึดเกาะของเซลล์ ICAM1 จะแสดงออกมาอย่างมากมายในกรณีที่มีอาการบาดเจ็บที่ตับ สามารถยับยั้งการเกิดพังผืดของตับได้โดยการยับยั้งการแสดงออกของ ICAM1 มากเกินไป การพัฒนา. ซีรีน/ทรีโอนีนโปรตีนไคเนส (AKT) เป็นไคเนสเป้าหมายที่สำคัญที่ปลายน้ำของ PI3K เปิดใช้งาน AKT เพิ่มเติมเพื่อส่งเสริมการแพร่กระจายของเซลล์ตับ stellate และเร่งการลุกลามของพังผืดในตับ

ในทางตรงกันข้าม การยับยั้ง AKT จะยับยั้งการลุกลามของการเกิดพังผืดในตับ MMP-9 สามารถย่อยสลายคอลลาเจนในตับตามปกติ ทำลายสภาพแวดล้อมภายในของเซลล์ตับ ส่งเสริมการกระตุ้นเซลล์ตับ stellate หลั่งคอลลาเจนจำนวนมาก และส่งเสริมการพัฒนาของพังผืดในตับ การเกิดพังผืดของตับ; ในการทดลองนี้ การใช้ CCl4 เพื่อสร้างแบบจำลองเมาส์ของการเกิดพังผืดในตับเป็นหนึ่งในวิธีการสร้างแบบจำลองแบบคลาสสิก CCl4 ถูกฉีดเข้าไปในร่างกายของสัตว์โดยการฉีดเข้าช่องท้อง เนื้อหาของ PCIII และ Col IV เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ เมื่อเทียบกับกลุ่มแบบจำลอง กลุ่มที่ได้รับ CPhGs สูง ปานกลาง และต่ำลดเนื้อหาของ LN, HA, PCIII และ Col IV อย่างมีนัยสำคัญ ผลการทดสอบ HE และ Masson พบว่าเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มแบบจำลอง CPhGs สูง ปานกลาง และในกลุ่มที่ได้รับยาขนาดต่ำ ระดับของเนื้อร้ายในตับไม่รุนแรง เม็ด eosinophilic ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ และเส้นใยสีน้ำเงินรอบ ๆ บริเวณพอร์ทัลมีค่า ลดลงอย่างมาก ผลลัพธ์ข้างต้นบ่งชี้ว่าการยับยั้งการเกิดพังผืดของตับโดยกลูโคไซด์ทั้งหมดของ Cistanche Deserticola อาจเกี่ยวข้องกับเป้าหมายของ ICAM1, AKT และ MMP9 และจำเป็นต้องตรวจพบการแสดงออกของโปรตีนที่เกี่ยวข้องเพิ่มเติม

การเกิดพังผืดในตับเกิดได้จากหลายปัจจัย ในหมู่พวกเขา เส้นทาง PI3K-AKT เป็นเส้นทางอันดับต้นๆ ที่ได้รับจากการวิเคราะห์การตกแต่งเส้นทาง เส้นทางการส่งสัญญาณ PI3K-AKT มีส่วนเกี่ยวข้องในการควบคุมการเพิ่มจำนวนเซลล์และการตายของเซลล์ การกระตุ้นการสร้างเนื้องอกในมนุษย์ และยีน HBV เป็นหนึ่งในเส้นทางที่สำคัญสำหรับการรักษาภาวะพังผืดในตับ ทางเดินของ PI3K-AKT สามารถกระตุ้นการสร้างหลอดเลือดในตับ ปรับปรุงปริมาณเลือด สร้างเมทริกซ์นอกเซลล์ ควบคุม autophagy ยับยั้งการตายของเซลล์ตับ และส่งเสริมการเพิ่มจำนวนของเซลล์ตับ ซึ่งจะทำให้เกิดพังผืดในตับ

Echinaceaและเวอร์บาสิโคสสามารถยับยั้งการเพิ่มจำนวนและกระตุ้นการทำงานของเซลล์ตับโดยควบคุมเป้าหมายของ ICAM1, AKT และ MMP9 ตามลำดับและทั้งหมดแอคทีโอไซด์ในฟีนิลเอทิลกลูโคไซด์ของCistancheอาจรบกวนการทำงานของเส้นใยตับโดยมีส่วนร่วมในการเผาผลาญพลังงานการเพิ่มจำนวนและการตายของเซลล์ตับ. เมื่อเทียบกับกลุ่มปกติ ระดับการแสดงออกของ PI3K และ AKT mRNA ในเนื้อเยื่อตับของหนูในกลุ่มแบบจำลองนั้นได้รับการควบคุมอย่างมีนัยสำคัญ เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มแบบจำลอง พบว่ามีฟีนิลเอธานอลไกลโคไซด์รวมของ Cistanche deserticola สูง ปานกลาง และต่ำ การแสดงออกของ mRNA ของ PI3K และ AKT ลดลงอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่มขนาดยา และกลไกอาจยับยั้งการกระตุ้นเส้นทาง PI3K-AKT และชะลอการลุกลามของการเกิดพังผืดในตับ

แอคทีโอไซด์เรียกอีกอย่างว่า ergosteroside และ verbascoside เป็นของสารประกอบฟีนิลโพรพานอยด์ไกลโคไซด์ สกัดจากลำต้นเนื้อแห้งที่มีใบเป็นสะเก็ดของCistanche tubulosaวายซี หม่า. เป็นหนึ่งในส่วนผสมที่มีประสิทธิภาพหลักของสารสกัดจาก Cistanche

แอคทีโอไซด์เป็นสารประกอบกลุ่มหนึ่งที่มีฤทธิ์ทางชีวภาพที่แข็งแกร่ง ซึ่งมีผลทางสรีรวิทยาต่างๆ เช่น ต้านการอักเสบ เสริมสร้างภูมิคุ้มกัน ต่อต้านการขาดออกซิเจน ขับอนุมูลอิสระ ซ่อมแซมฐาน DNA และรักษาโรคพังผืดในตับ

คลิกที่นี่เพื่อทราบประโยชน์ของ Cistanche ต่อการกัดของตับ

โดยสรุปรวมฟีนิลเอทานอลไกลโคไซด์ของ Cistancheสามารถบรรเทาการเกิดพังผืดในตับที่เหนี่ยวนำโดย CCl4-ในหนูเมาส์ได้อย่างมีประสิทธิผล และกลไกอาจเกี่ยวข้องกับการเพิ่มจำนวนและการกระตุ้นเซลล์สเตลเลตในตับที่มีสื่อกลางโดยวิถีการส่งสัญญาณ PI3K-AKT วางรากฐานสำหรับผลทางเภสัชวิทยาของ Cistanche