Wen-Lan Li, Jing-Xin Ding, Jing Bai, Yang Hu, Hui Song, Xiang-Ming Sun, Yu-Bin Ji

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติมกรุณาติดต่อ:Joanna.jia@wecistanche.com

เชิงนามธรรม

LC Technology เป็นวิธีการที่ได้รับการยอมรับทั่วโลกในการประเมินคุณภาพของยาจีนโบราณ (TCM) คุณภาพของ TCM มีผลกระทบโดยตรงต่อประสิทธิภาพ ดังนั้น เพื่อให้เปิดเผยอย่างถี่ถ้วนว่า TCM ใช้ประสิทธิภาพของมันอย่างไร อย่างแรกเลย จำเป็นต้องเข้าใจพื้นฐานของวัสดุสำหรับประสิทธิภาพ แล้วจึงควบคุมคุณภาพของสารออกฤทธิ์ การประยุกต์ใช้วิธีความสัมพันธ์ระหว่างเอฟเฟกต์สเปกตรัมมีความสำคัญต่อการพิจารณาพื้นฐานของวัสดุทางเภสัชวิทยา เป้าหมายของบทความนี้คือเพื่อศึกษาความสัมพันธ์ที่แฝงอยู่ระหว่างโปรไฟล์ทางเคมีกับกิจกรรมเอสโตรเจนของCistancheเพื่อเผยให้เห็นสารออกฤทธิ์ โปรไฟล์ทางเคมีของCistancheถูกบันทึกโดยใช้ HPLC/Q-TOF-MS/MS และฤทธิ์ของฮอร์โมนเอสโตรเจนถูกกำหนดหาโดยการทดสอบการเจริญเติบโตของมดลูกและการสอบวิเคราะห์ MTT จากนั้นรวมผลการวิเคราะห์ไบวาเรียต การวิเคราะห์องค์ประกอบหลัก และวิธีการวิเคราะห์สหสัมพันธ์สีเทา ระบุสารประกอบออกฤทธิ์ 15 ชนิด พวกมันคือ 8-กรดเอพิโลแกนิก, ซาลิโดรไซด์, ไซริงกาไลด์ A 3'- -l-rhamnopyranoside, ซิสตาโนไซด์ A, อิไคนาโคไซด์, ซิสตาโนไซด์ F, ซิสตาโนไซด์ B, ซิสตาโนไซด์ C, ออสมันธุไซด์ B, แอคทีโอไซด์, ไอโซแอคทีโอไซด์, ทูบูโลไซด์ B, 2 '-acetylacteoside และสารประกอบที่ไม่รู้จักสองชนิด การศึกษานี้เป็นการวางรากฐานสำหรับการศึกษาในร่างกายของCistancheและสำหรับการพัฒนาการใช้งานทางคลินิก

Cistanchetubulosa

คำสำคัญ:Cistancheทะเลทรายโกลา; LC/Q-TOF-MS; กิจกรรมเอสโตรเจน; การวิเคราะห์องค์ประกอบหลัก (PCA); การทดสอบการเจริญเติบโตของมดลูก

ตัวย่อ

TCM: การแพทย์แผนจีน

HPLC/Q-TOF-MS: โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง/แมสสเปกโตรเมตรีเวลาของเที่ยวบินควอดรูโพล

BA: การวิเคราะห์สองตัวแปร

PCA: การวิเคราะห์องค์ประกอบหลัก

GCAM: วิธีการวิเคราะห์สหสัมพันธ์สีเทา

MTT :ทริปซิน, 3-(4, 5-ไดเมทิลไทอะซอล-2-อิล)-2, 5-ไดฟีนิลเตตราโซเลียมโบรไมด์

DMSO: ไดเมทิลซัลฟอกไซด์

RPMI1640 สถาบันอนุสรณ์ Roswell Park 1640

1. บทนำ

เมื่อเร็วๆ นี้ TCM ได้รับความนิยมมากขึ้นเรื่อยๆ ในประเทศแถบเอเชียและประเทศตะวันตก เนื่องจากมีผลการรักษาที่คงที่และความเป็นพิษต่ำในคลินิก ด้วยเหตุนี้ จึงจำเป็นต้องพัฒนาชนิดใหม่ของ TCM และเพื่อทำความเข้าใจองค์ประกอบที่มีประสิทธิผลที่ใช้ระหว่างการประยุกต์ใช้ทางคลินิกของพวกมัน [1-6]

ประการแรก ศึกษาความสัมพันธ์ระหว่างผลกระทบของสเปกตรัมเพื่อแยกแยะความสัมพันธ์ระหว่างลายนิ้วมือโครมาโตกราฟีกับประสิทธิภาพทางเภสัชพลศาสตร์ จากนั้นใช้ความสัมพันธ์เพื่อค้นหาองค์ประกอบที่มีประสิทธิภาพใน TCM และกำหนดมาตรฐานการควบคุมเพื่อสะท้อนถึงคุณภาพภายใน ความสัมพันธ์ระหว่างผลกระทบของสเปกตรัมถูกนำมาใช้ในหลาย ๆ ด้านของการวิจัย TCM เช่น พื้นฐานวัสดุของ TCM เดี่ยวและสารประกอบ ความเข้ากันได้ของส่วนประกอบ กลไกการประมวลผล การพยากรณ์ผลกระทบทางเภสัชวิทยา และการเพิ่มประสิทธิภาพเทคโนโลยี [7-12] ความสัมพันธ์ระหว่างผลกระทบของสเปกตรัมใช้เพื่อเสนอแนวคิดและวิธีการใหม่ในการสำรวจสารออกฤทธิ์ ปรับสูตรให้เหมาะสม ปรับปรุงกระบวนการเตรียมการ ติดตามและแยกส่วนผสมเป้าหมาย และสำหรับการพัฒนายา TCM ใหม่ [13-17]

Cistancheมีการใช้กันอย่างแพร่หลายในการรักษาความผิดปกติทางเพศ อาการท้องผูก ต่อมลูกหมากอักเสบ และภาวะไตบกพร่อง มีฤทธิ์ทางชีวภาพที่หลากหลาย รวมทั้งผลของเอสโตรเจน ต่อต้านริ้วรอย ต้านอนุมูลอิสระ และการทำงานของภูมิคุ้มกัน [18-19] โดยทั่วไป phenylethanoid glycosides (เช่น cistanoside A, tubuloside A), lignans และ iridoid glycosides ถือเป็นองค์ประกอบทางเภสัชวิทยาและเครื่องหมายทางเคมีสำหรับการควบคุมคุณภาพของ Cistanche และผลิตภัณฑ์ของ Cistanche [20-21] สเปกตรัมเคมีของ Cistanche จากพื้นที่ต่างๆ ถูกบันทึกโดยใช้โครมาโตกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง (HPLC) [22-23] ในการศึกษานี้ เราเลือกการทดสอบการเจริญเติบโตของมดลูกและการทดสอบการเพิ่มจำนวนเซลล์ MCF7 เพื่อประเมินกิจกรรมเกี่ยวกับฮอร์โมนเอสโตรเจน การวิเคราะห์องค์ประกอบหลัก การวิเคราะห์สองตัวแปร และวิธีการวิเคราะห์สหสัมพันธ์สีเทา ถูกนำมาใช้เพื่อเชื่อมโยงกิจกรรมของฮอร์โมนเอสโตรเจนกับส่วนประกอบแต่ละส่วน การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อระบุสารประกอบออกฤทธิ์ทางชีวภาพของ Cistanche ที่มีผลต่อฮอร์โมนเอสโตรเจนในร่างกาย การศึกษานี้เป็นการวางรากฐานสำหรับการศึกษาเชิงลึกเกี่ยวกับ Cistanche

ขั้นตอนการทดลองทั้งหมดได้รับการตรวจสอบและอนุมัติโดยคณะกรรมการจริยธรรมของสัตว์แห่งมหาวิทยาลัยพาณิชย์ฮาร์บิน

CistancheDeserticola (cd-20120227-005) ถูกซื้อจากตลาดยาและระบุโดย Prof. Zhang Delian (Harbin University of Commerce) ซื้อ Diethylstilbestrol จาก HEFEI JIULIAN PHARMACEUTICAL CO., LTD. RPMI1640 และ RPMI1640 ที่ไม่มีฟีนอลเรดถูกซื้อมาจากบริษัท HyClone (สหรัฐอเมริกา) MTT และ DMSO ล้วนซื้อมาจาก Sigma-Aldrich Co. LLC (เซนต์หลุยส์ สหรัฐอเมริกา) เซลล์มะเร็งเต้านม MCF7 ของมนุษย์จัดทำโดยศูนย์วิจัยวิทยาศาสตร์เพื่อชีวิตและวิทยาศาสตร์สิ่งแวดล้อม (มหาวิทยาลัยพาณิชย์ฮาร์บิน) มาตรฐานที่ใช้มีดังนี้: acteoside (111530- 200505), echinacoside (111670-200503) และ salidroside (110736-200628) ได้รับจาก National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products (ปักกิ่ง) , จีน). อะซิโตไนไตรล์ เมทานอล และกรดฟอร์มิกเป็นเกรด MS ในขณะที่น้ำบริสุทธิ์มาก รีเอเจนต์อื่นๆ มีระดับการวิเคราะห์และมีจำหน่ายในเชิงพาณิชย์

2 ขั้นตอนการทดลอง

2.1 วัสดุ

ระบบ Agilent 1290 HPLC, ระบบ Agilent 6530 Series Quadrupole Time-of-Flight LC/MS (Q-TOF) และระบบ HPLC ทางเคมี-3D ถูกใช้สำหรับการทดลองทางเคมีเชิงวิเคราะห์และการประมวลผลข้อมูล น้ำบริสุทธิ์พิเศษระดับ Milli-Q ใช้สำหรับการเตรียมตัวอย่างและมาตรฐาน เครื่องมือเพิ่มเติม ได้แก่ Analytical Balance AR1140 (Ohaus International Ltd), 680 Microplate Reader (Bio-Rad Corporation) และเครื่องหมุนเหวี่ยงความเร็วสูง 64R (Beckman Coulter Allegra)

หนูคุนหมิงเพศเมียที่ยังไม่บรรลุนิติภาวะ (อายุคลอดประมาณ 21 วัน หย่านม) น้ำหนัก (12 ± 2) กรัม ซื้อมาจากศูนย์สัตว์ทดลองในห้องปฏิบัติการฐานอุตสาหกรรมชีวภาพแห่งชาติฉางชุน (ฉางชุน ประเทศจีน) หนูถูกเลี้ยงไว้ในห้องที่มีการควบคุมอุณหภูมิ (22 ± 2 องศา) โดยสามารถเข้าถึงอาหารและน้ำได้ไม่จำกัด การทดลองกับสัตว์เริ่มต้นขึ้นหลังจากปรับตัวให้ชินกับสภาพแวดล้อมได้ห้าวัน หนูถูกอดอาหารในชั่วข้ามคืนโดยสามารถเข้าถึงน้ำได้ฟรีก่อนที่จะให้สารละลายทดสอบ การศึกษานี้ดำเนินการอย่างเคร่งครัดตามคำแนะนำในแนวทางการดูแลและการใช้สัตว์ทดลองของสถาบันสุขภาพแห่งชาติ

2.2 การเตรียมสารละลายตัวอย่าง

Cistancheเก็บตัวอย่างจากแหล่งที่อยู่อาศัยที่หลากหลาย 10 แห่ง ได้แก่ Neimeng, Xinjiang, Ningxia, Guizhou, Chaidamu, Xizang, Alashan, Qinghai, Sichuan และ Hubei Province

สารละลาย (1.0 ก./มล.) ของCistancheตัวอย่างถูกเตรียมในน้ำกลั่นสำหรับการบริหารช่องปาก ความเข้มข้นของไดเอทิลสติลโบเอสโทรลคือ 20ไมโครกรัม/มิลลิลิตร และถูกใช้เป็นสารละลายกลุ่มควบคุมเชิงบวก สารละลาย (1.0 ก./มล.) ของตัวอย่าง Cistanche ถูกเตรียมในอะซิโตไนไทรล์ 50 เปอร์เซ็นต์ Acteoside, echinacoside และ salidroside (2.0 มก. แต่ละตัว) ถูกละลายใน 10 มล. ของสารละลายอะซิโตไนไตรล์ 50 เปอร์เซ็นต์ ทั้งตัวอย่างและสารละลายมาตรฐานถูกกรองโดยใช้ตัวกรองขนาด 0.45-μm ก่อนการวิเคราะห์

2.3 เงื่อนไข LC-MS

Waters Symmetry Shield RP18 (3.9 มม.×150 มม., 5μm; Waters Corporation, Milford, MA, USA) ถูกใช้เพื่อวิเคราะห์ตัวอย่าง เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยอะซีโตไนไตรล์ (A) และ 0.2 เปอร์เซ็นต์ (v/v) สารละลายในน้ำกรดฟอร์มิก (B) และถูกสูบที่อัตราการไหล 0.5 มล./นาที ปริมาตรการฉีดของแต่ละตัวอย่างคือ 10 ไมโครลิตร โปรแกรมการชะเกรเดียนต์เป็นดังนี้: เฟสเคลื่อนที่ A เริ่มต้นที่ 5 เปอร์เซ็นต์ และเพิ่มขึ้นเชิงเส้นเป็น 23 เปอร์เซ็นต์ ที่ 35 นาที ต่อมาสารละลาย A ถูกเพิ่มเป็น 25 เปอร์เซ็นต์ (35 ถึง 65 นาที) ระยะเคลื่อนที่ A ลดลงเหลือ 5 เปอร์เซ็นต์ในช่วง 5 นาทีสุดท้ายของการวิ่ง (65 ถึง 70 นาที) อุณหภูมิคอลัมน์ถูกคงไว้ที่ 30 องศา โครมาโตแกรมถูกเฝ้าติดตามที่ 254 นาโนเมตร แรงดันแก๊สการทำให้เป็นละอองคือ 30 psi และแรงดันของเส้นเลือดฝอยคือ 3.5 kV อัตราการไหลของก๊าซแห้งตั้งไว้ที่ 8 ลิตร/นาที โดยมีอุณหภูมิ 30 องศา แมสสเปกตรัมถูกบันทึกภายในช่วงการสแกนที่ 100- 3,000 Da และอยู่ในโหมดการสแกนไอออนลบ

2.4 การประเมินลายนิ้วมือ

ลายนิ้วมือ LC ของตัวอย่างที่รวบรวมจาก 10 ชุดที่แตกต่างกันถูกสร้างขึ้นและจับคู่โดยอัตโนมัติโดยใช้ระบบการประเมินความคล้ายคลึงกันสำหรับลายนิ้วมือโครมาโตกราฟีของ TCM (เวอร์ชัน 2012; China Pharmacopoeia Committee, Beijing, China) นอกจากนี้ แผนที่โครมาโตแกรมอ้างอิงยังถูกสร้างขึ้นโดยใช้วิธีมัธยฐาน นอกจากนี้ยังใช้การวิเคราะห์กลุ่มเพื่อประเมินคุณภาพของตัวอย่างจากแหล่งที่อยู่อาศัยที่หลากหลายสิบแห่ง

2.5 การวิเคราะห์องค์ประกอบหลัก (PCA)

PCA เป็นวิธีการทางสถิติหลายตัวแปร สามารถเก็บข้อมูลจากการได้มาซึ่งข้อมูลได้อย่างเพียงพอ ในการศึกษานี้ พีคที่มีลักษณะเฉพาะจากโครมาโตแกรมของ LC ถูกคัดกรองเพิ่มเติมโดย PCA และมีวัตถุประสงค์เพื่อระบุสารประกอบออกฤทธิ์ตามความสัมพันธ์ระหว่างผลกระทบของสเปกตรัม

2.6 การทดสอบการเจริญเติบโตของมดลูก

หนูเมาส์ถูกแบ่งออกเป็น 12 กลุ่ม (10 ต่อกลุ่ม) สารละลายตัวอย่างที่เตรียมจาก Cistanche ถูกรวบรวมจากแหล่งอาศัยที่หลากหลายสิบแห่ง และบริหารให้วันละสองครั้ง (เช้าและเย็น) โดยทางสายยางที่ขนาดยา 30 กรัม/กก. ของน้ำหนักตัวเป็นเวลาสี่วัน กลุ่มควบคุมที่ว่างเปล่าและกลุ่มควบคุมเชิงบวกประกอบด้วยปริมาตรที่เท่ากันของน้ำกลั่นและสารละลายไดเอทิลสติลโบเอสตรอลและถูกบริหารให้วันละสองครั้งเป็นเวลาสี่วัน ในวันที่ห้า ตัวอย่างเลือดที่ประกอบด้วยยาถูกถอนออกจากหนูที่ดมยาสลบ ตัวอย่างถูกหมุนเหวี่ยง (5,{5}} รอบต่อนาที, 10 นาที) และส่วนลอยเหนือตะกอน (ตัวอย่างในซีรัมที่ประกอบด้วยยา) ถูกแยกออก ตัวอย่างซีรัมที่ประกอบด้วยยาถูกทำให้หมดฤทธิ์โดยการให้ความร้อนที่ 56 องศาในอ่างน้ำเป็นเวลา 30 นาที และถูกกรองผ่านตัวกรอง 0.22-μm ก่อนการสอบวิเคราะห์ MTT พร้อมกันนั้น มดลูกของหนูจะถูกตัดออกทันทีและชั่งน้ำหนักเพื่อคำนวณดัชนีน้ำหนักมดลูก การทดลองกับสัตว์เริ่มต้นขึ้นหลังจากปรับตัวให้ชินกับสภาพแวดล้อมได้ห้าวัน หนูได้อดอาหารข้ามคืนโดยสามารถเข้าถึงน้ำได้ฟรีก่อนที่จะให้สารละลายทดสอบ การศึกษานี้ดำเนินการอย่างเคร่งครัดตามคำแนะนำของคู่มือการดูแลและการใช้สัตว์ทดลองของสถาบันสุขภาพแห่งชาติ ขั้นตอนการทดลองทั้งหมดได้รับการตรวจสอบและอนุมัติโดยคณะกรรมการจริยธรรมของสัตว์แห่งมหาวิทยาลัยพาณิชย์ฮาร์บิน ขั้นตอนที่อาจก่อให้เกิดความเครียดทั้งหมดได้ดำเนินการภายใต้การดมยาสลบโซเดียมเพนโทบาร์บิทัล

2.7 การทดสอบ MTT

เซลล์ MCF7 ถูกเพาะเลี้ยงร่วมกันด้วย RPMI 1640 โดยไม่มีฟีนอลเรด (ซึ่งมี CDT-FBS 5 เปอร์เซ็นต์) เป็นเวลาสี่วัน เซลล์ถูกเพาะในจาน 96-หลุมที่ความหนาแน่น 2,000 เซลล์/หลุม การเพาะเลี้ยงที่ยึดติดได้สำเร็จและหลังจากการเพาะเลี้ยง 72 ชั่วโมง เซลล์ถูกเพาะเลี้ยงร่วมกันในตัวกลาง RPMI 1640 ที่มีตัวอย่างซีรัมจากที่บำบัดด้วย Cistanche ของหนูเมาส์ การทดลองดำเนินการในหกซ้ำ ต่อมา สารละลาย MTT 20 ไมโครลิตร (5 มก./มล. ใน PBS) ถูกเติมในแต่ละหลุม และเซลล์ถูกบ่มเป็นเวลา 4 ชั่วโมง หลังการกำจัดแบบปานกลาง DMSO 150 ไมโครลิตรถูกเติมเพื่อผลิตผลิตภัณฑ์ฟอร์มาซาน และเพลตถูกเขย่าในที่มืดเพื่อละลายอย่างสมบูรณ์ วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 570 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท อัตราการงอกขยายคำนวณเป็นค่าการดูดกลืนแสงเฉลี่ยของกลุ่มซีรัมที่ประกอบด้วยยาหารด้วยค่าการดูดกลืนแสงเฉลี่ยของกลุ่มควบคุมที่ว่างเปล่า (เซลล์ที่เพาะเลี้ยงร่วมกันใน RPMI 1640 ที่ไม่มีซีรัม)

2.8 การวิเคราะห์ทางสถิติ

การทดสอบ t-test แบบจับคู่ (แบบสองด้าน) ใช้เพื่อระบุความแตกต่างที่มีนัยสำคัญทางสถิติระหว่างค่าในกลุ่มควบคุมว่างและกลุ่มทดลอง ความแตกต่างได้รับการพิจารณาอย่างมีนัยสำคัญที่ระดับความเชื่อมั่น 95 เปอร์เซ็นต์ (p <>

PCA ใช้ในการประเมินพื้นที่พีคที่มีลักษณะเฉพาะในโครมาโตแกรมของตัวอย่างจากแหล่งที่อยู่อาศัยที่หลากหลายสิบแห่ง การวิเคราะห์แบบสองตัวแปรและการวิเคราะห์สหสัมพันธ์สีเทาถูกใช้เพื่อประเมินความสัมพันธ์ของพื้นที่พีคและกิจกรรมเอสโตรเจนของพวกมัน ความสัมพันธ์คำนวณโดยสถิติซอฟต์แวร์สถิติ SPSS (SPSS สำหรับ Windows 21.0, SPSS Inc., USA) ความแตกต่างได้รับการพิจารณาอย่างมีนัยสำคัญที่ระดับความเชื่อมั่น 95 เปอร์เซ็นต์ (สองด้าน)

การอนุมัติทางจริยธรรม: การวิจัยที่ดำเนินการไม่เกี่ยวข้องกับการใช้ของมนุษย์หรือสัตว์

3 ผลลัพธ์และการอภิปราย

3.1 การวิเคราะห์คลัสเตอร์และการประเมินความคล้ายคลึงกัน

ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ของเวลาเก็บรักษาและพื้นที่พีคของพีคที่มีลักษณะเฉพาะคือ {{0}}.58 และ 0.34 เปอร์เซ็นต์สำหรับความแม่นยำ 0.52 และ {{8} }.31 เปอร์เซ็นต์สำหรับการทำซ้ำ และ {{10}}.19 และ 0.13 เปอร์เซ็นต์สำหรับความเสถียรตามลำดับ การค้นพบนี้ชี้ให้เห็นว่าวิธีการสร้างลายนิ้วมือด้วย LC ของเรานั้นสมเหตุสมผลและเชื่อถือได้ ความคล้ายคลึงกันของโครมาโตแกรมของตัวอย่างสิบตัวอย่างมีค่ามากกว่า 0.9 พีคทั่วไปสำหรับตัวอย่างทั้งหมดไม่สามารถแสดงองค์ประกอบที่มีลักษณะเฉพาะของ Cistanche ได้อย่างเต็มที่ เนื่องจากยอดอาจสูญหายได้ ดังนั้น หมายเลขการจับคู่ตัวอย่างจึงถูกปรับจาก 26 เป็น 20 เพื่อให้ได้แผนที่โครมาโตแกรมที่แม่นยำยิ่งขึ้น ได้พีคทั้งหมด 26 พีค และผลรวมของพื้นที่ของพวกมันมากกว่า 0.8 เมื่อเทียบกับพื้นที่พีคโดยรวมในกลุ่มตัวอย่าง ดังนั้นเราจึงสรุปได้ว่าพีคโครมาโตกราฟีเหล่านี้สามารถสะท้อนองค์ประกอบทางเคมีหลักของ Cistanche ได้อย่างมีประสิทธิภาพ ผลของการวิเคราะห์แบบคลัสเตอร์แสดงไว้ในรูปที่ 1 แหล่งที่อยู่อาศัยที่หลากหลายทั้งหมดสิบแห่งแบ่งออกเป็นสามประเภทดังนี้: (A) 2, กุ้ยโจว; 3 ชิงไห่; 4, ไชดามู; 10, เหน่ยเหิง; 7, ซินเจียงและ 6, เสฉวน (B) 1, ซีซ่าง; 8, Ningxia และ 5, Alashan (C) 9, หูเป่ย. แนวโน้มของการวิเคราะห์แบบคลัสเตอร์แสดงให้เห็นว่าแหล่งที่อยู่อาศัยของสมุนไพรมีความคล้ายคลึงกันเมื่ออยู่ที่ด้านล่างของธรณีประตู แต่ด้วยการเพิ่มธรณีประตู สภาพภูมิอากาศและสภาพการเจริญเติบโตของแหล่งที่อยู่อาศัยก็ใกล้เคียงกัน แสดงให้เห็นว่าการวิเคราะห์แบบคลัสเตอร์ไม่เพียงแต่แยกแยะแหล่งที่อยู่อาศัยที่หลากหลายเท่านั้น แต่ยังสะท้อนถึงความสัมพันธ์ระหว่างพวกมันด้วย

3.2 การระบุองค์ประกอบทางเคมี

Based on the synergy between components, TCM exerted pharmacological effects. Certain studies have been conducted to identify the chemical compositions of C. deserticola [24-26]. The correlation of inherent constituents with their activities indicated that they could be identified based on the combination of LC with the corresponding indices of pharmacological activity. Q-TOF-MS is suitable for multi-constituent identification of TCM since it can provide the exact molecular mass because of its high resolution. A total of 26 compounds were identified by analyzing the primary and secondary MS data. PCA was used to assess whether these compounds concerning their oestrogenic activity. A contribution of the activity is indicated by an eigenvalue higher than 1 (> 1) and a cumulative contribution rate of variables higher than 0.8 (>0.8). ยิ่งค่าสัมบูรณ์ของโหลด Eigen ยิ่งสูง อิทธิพลของสารประกอบที่มีต่อดัชนีเอสโตรเจนก็จะยิ่งสูงขึ้น

โครมาโตแกรมของ Cistanche และตัวอย่างมาตรฐานถูกเปรียบเทียบเพื่อระบุส่วนประกอบแต่ละส่วนภายใต้สภาวะ LC-MS เดียวกัน ตามที่แสดงในตารางที่ 1 องค์ประกอบทั้งหมด 26 รายการถูกระบุตามเวลาเก็บรักษาและข้อมูล MS [24-26] ส่วนผสมออกฤทธิ์จะถูกบริหารด้วยปากเปล่าในรูปแบบของสารผสมมากกว่าโมโนเมอร์ เนื่องจากยาจีนโบราณอยู่ในรูปแบบของส่วนผสมที่มีบทบาทในการรักษา สารประกอบเดี่ยวหลังจากแยกจากกันไม่พบว่ามีบทบาท เป้าหมายของเราคือการเปิดเผยสารประกอบที่มีฤทธิ์เอสโตรเจนในส่วนประกอบที่รู้จักของ Cistanche [23-30] ดังนั้นจึงไม่ได้เลือก NMR และวิธีการทางเทคนิคอื่น ๆ เพื่อยืนยันตัวตนของพวกมัน พีค 1 ระบุไอออนที่มีโปรตอนเหนือกว่าด้วยอัตราส่วน m/z เท่ากับ 373 (C16H22O10) ซึ่งเหมือนกันกับองค์ประกอบองค์ประกอบของกรดเจนิโพซิดิก สิ่งนี้ได้รับการสนับสนุนโดยการสูญเสียมอยอิตีของกลูโคสซึ่งให้ผลเป็นแฟรกเมนต์ไอออนที่มีอัตราส่วน m/z ที่ 211 ค่าสูงสุดที่ 2 ระบุไอออนที่ลดโปรตอนเด่นด้วยอัตราส่วน m/z ที่ 461 (C20H30O12) ซึ่งเหมือนกันกับองค์ประกอบองค์ประกอบ และได้รับการสนับสนุนจากการสูญเสีย rhamnosyl moiety ทำให้เกิดการแตกแฟรกเมนต์ด้วยอัตราส่วน m/z ที่ 315 ค่าสูงสุด 4 ระบุไอออนที่ลดโปรตอนที่โดดเด่นด้วยอัตราส่วน m/z ที่ 375 (C16H24O10) ซึ่งเหมือนกันกับ องค์ประกอบของธาตุ 8-กรดอีพิโลกานิก การสูญเสียมอยอิตีของกลูโคสทำให้เกิดการแตกแฟรกเมนต์ด้วยอัตราส่วน m/z ที่ 213 ซึ่งสนับสนุนการอนุมานเพิ่มเติม พีค 6 ระบุไอออนที่ลดโปรตอนที่โดดเด่นด้วยอัตราส่วน m/z ที่ 607 (C29H36O14) ซึ่งเหมือนกันกับองค์ประกอบองค์ประกอบของไซริงกาไลด์ A3'- - l-rhamnopyranoside

การสูญเสียคัฟมอยอิตีทำให้เกิดแฟรกเมนต์ไอออนที่มีอัตราส่วน m/z ที่ 445 สนับสนุนการอนุมานเพิ่มเติม พีค 8 ระบุไอออนที่ลดโปรตอนที่โดดเด่นด้วยอัตราส่วน m/z ที่ 799 (C36H48O20) ซึ่งเหมือนกันกับองค์ประกอบของซิสตาโนไซด์ A การสูญเสียมอยอิตีของ caff ก่อให้เกิดแฟรกเมนต์ไอออนที่มีอัตราส่วน m/z เท่ากับ 637 สนับสนุนการอนุมานต่อไป จุดสูงสุด 11 ระบุไอออนที่ลดโปรตอนที่โดดเด่นด้วยอัตราส่วน m/z ที่ 487 (C21H28O13 ) ซึ่งเหมือนกันกับองค์ประกอบองค์ประกอบของซิสตาโนไซด์ F ซึ่งได้รับการสนับสนุนโดยการสูญเสียมอยอิตีของแรมโนซิลที่ให้เศษไอออนที่มี m/z อัตราส่วน 341 และการสูญเสียมอยอิตีของ caff อื่นก่อให้เกิดแฟรกเมนต์ไอออนที่มีอัตราส่วน m/z ที่ 179 ซึ่งสนับสนุนการอนุมานเพิ่มเติม พีค 12 ระบุไอออนที่ลดโปรตอนที่โดดเด่นด้วยอัตราส่วน m/z เท่ากับ 813 (C37H50O20) ซึ่งเหมือนกันกับองค์ประกอบองค์ประกอบของซิสตาโนไซด์ บี การสูญเสียมอยอิตีของกลูโคสทำให้เกิดแฟรกเมนต์ไอออนที่มีอัตราส่วน m/z เท่ากับ 651 สนับสนุนการอนุมานต่อไป พีค 13 ระบุไอออนที่ลดโปรตอนเด่นด้วยอัตราส่วน m/z เท่ากับ 827 (C37H48O21) ซึ่งเหมือนกันกับองค์ประกอบธาตุของทูบูโลไซด์ A การสูญเสีย rhamnosyl moiety ทำให้เกิดการแตกแฟรกเมนต์ด้วยอัตราส่วน m/z ที่ 681 เพิ่มเติม สนับสนุนการอนุมาน พีค 14 ระบุไอออนที่ลดโปรตอนที่โดดเด่นด้วยอัตราส่วน m/z ที่ 637 (C30H38O15) ซึ่งเหมือนกันกับองค์ประกอบองค์ประกอบของซิสตาโนไซด์ C การสูญเสีย rhamnosyl moiety ก่อให้เกิดแฟรกเมนต์ไอออนที่มีอัตราส่วน m/z ที่ 491 สนับสนุนการอนุมานต่อไป

จุดสูงสุด 15 ระบุไอออนที่ลดโปรตอนที่โดดเด่นด้วยอัตราส่วน m/z ที่ 591 (C29H36O13) ซึ่งเหมือนกันกับองค์ประกอบองค์ประกอบของ osmanthuside B การสูญเสีย rhamnosyl moiety ก่อให้เกิดแฟรกเมนต์ไอออนที่มีอัตราส่วน m/z ที่ 445 สนับสนุนการอนุมานต่อไป พีค 16 ระบุไอออนที่ลดโปรตอนที่โดดเด่นด้วยอัตราส่วน m/z เท่ากับ 623 (C29H36O15) ซึ่งเหมือนกันกับองค์ประกอบองค์ประกอบของแอกทีโอไซด์ การสูญเสียคัฟมอยอิตีทำให้เกิดแฟรกเมนต์ไอออนที่มีอัตราส่วน m/z เท่ากับ 461 ซึ่งสนับสนุนการอนุมานเพิ่มเติม พีค 18 บ่งชี้ว่าไอออนดีโปรตอนเด่นที่มีอัตราส่วน m/z เท่ากับ 623 (C29H36O15) ซึ่งเหมือนกันกับองค์ประกอบองค์ประกอบของไอโซแอคทีโอไซด์ การสูญเสียมอยอิตีของ caff, forepeak 15 บ่งชี้ว่ามีไอออนที่มีโปรตอนเหนือกว่าที่มีอัตราส่วน m/z เท่ากับ 591 (C29H36O13) ซึ่งเหมือนกันกับองค์ประกอบของธาตุของ osmanthuside B การสูญเสียของ rhamnosyl moiety ทำให้เกิดแฟรกเมนต์ไอออนด้วย อัตราส่วน m/z ที่ 445 สนับสนุนการอนุมานเพิ่มเติม พีค 16 ระบุไอออนที่ลดโปรตอนที่โดดเด่นด้วยอัตราส่วน m/z เท่ากับ 623 (C29H36O15) ซึ่งเหมือนกันกับองค์ประกอบองค์ประกอบของแอกทีโอไซด์ การสูญเสียคัฟมอยอิตีทำให้เกิดแฟรกเมนต์ไอออนที่มีอัตราส่วน m/z เท่ากับ 461 ซึ่งสนับสนุนการอนุมานเพิ่มเติม พีค 17 บ่งชี้ว่ามีไอออนดีโปรตอนเด่นที่มีอัตราส่วน m/z เท่ากับ 623 (C29H36O15) ซึ่งเหมือนกันกับองค์ประกอบองค์ประกอบของซิส-แอคทีโอไซด์ การสูญเสียคัฟมอยอิตีทำให้เกิดแฟรกเมนต์ iod เป็นแฟรกเมนต์ไอออนที่มีอัตราส่วน m/z เท่ากับ 461 สนับสนุนการอนุมานเพิ่มเติม พีค 21 ระบุไอออนที่ลดโปรตอนที่โดดเด่นด้วยอัตราส่วน m/z เท่ากับ 653 (C30H38O16) ซึ่งเหมือนกันกับองค์ประกอบองค์ประกอบของแคมป์นีโอไซด์ Ⅰ

การสูญเสียคัฟมอยอิตีก่อให้เกิดแฟรกเมนต์ไอออนที่มีอัตราส่วน m/z เท่ากับ 491 และการสูญเสียมอยอิตีของแรมโนซิลอีกตัวก่อให้เกิดแฟรกเมนต์ไอออนที่มีอัตราส่วน m/z เท่ากับ 345 ซึ่งสนับสนุนการอนุมานเพิ่มเติม พีค 22 ระบุไอออนที่ลดโปรตอนที่โดดเด่นด้วยอัตราส่วน m/z เท่ากับ 665 (C31H38O16) ซึ่งเหมือนกันกับองค์ประกอบองค์ประกอบของทูบูโลไซด์ บี การสูญเสียมอยอิตี CH3 CO ก่อให้เกิดแฟรกเมนต์ไอออนที่มีอัตราส่วน m/z เท่ากับ 623 และการสูญเสียมอยอิตีของ caff อื่นทำให้เกิดแฟรกเมนต์ไอออนที่มีอัตราส่วน m/z ที่ 461 ซึ่งสนับสนุนการอนุมานเพิ่มเติม พีค 23 ระบุไอออนที่ลดโปรตอนที่โดดเด่นด้วยอัตราส่วน m/z เท่ากับ 639 (C29H36O16) ซึ่งเหมือนกันกับองค์ประกอบองค์ประกอบของแคมป์นีโอไซด์ การสูญเสียแรมโนซิล มอยอิตี ทำให้เกิดแฟรกเมนต์ไอออนที่มีอัตราส่วน m/z เท่ากับ 493 สนับสนุนการอนุมานเพิ่มเติม พีค 24 บ่งชี้ว่ามีไอออนดีโปรตอนเด่นที่มีอัตราส่วน m/z เท่ากับ 665 (C31H38O16) ซึ่งเหมือนกันกับองค์ประกอบองค์ประกอบของ 2'-อะซิติแลคติโอไซด์ การสูญเสียมอยอิตี Ac ก่อรูปแฟรกเมนต์ไอออนที่มีอัตราส่วน m/z เท่ากับ 623 และการสูญเสียมอยอิตีของ caff อื่นก่อให้เกิดแฟรกเมนต์ไอออนที่มีอัตราส่วน m/z เท่ากับ 461 ซึ่งสนับสนุนการอนุมานเพิ่มเติม พีค 25 ระบุไอออนที่ลดโปรตอนที่โดดเด่นด้วยอัตราส่วน m/z ที่ 445 (C20H30O11) ซึ่งเหมือนกันกับองค์ประกอบองค์ประกอบของซิสตาโนไซด์ G การสูญเสียแรมโนซิล มอยอิตี ก่อตัวเป็นแฟรกเมนต์ไอออนที่มีอัตราส่วน m/z ที่ 299 สนับสนุนการอนุมานต่อไป โครงสร้างของสารประกอบแสดงไว้ในรูปที่ 2

3.3 PCA

As shown in Table 2, the eigenvalues of the first eight principal components were higher than 1(> 1), and the cumulative contribution rate of the first six principal components was 93.417%. Therefore, the first six principal components were evaluated further. Table 2 indicates their eigenvalues and factor loadings. The first principal component exhibited a higher load based on the eigenvalues of the eight peaks (>0.9). พีคเหล่านี้มีดังนี้: 9, 12, 14 และ 15 ดังนั้น echinacoside, cistanoside B, osmanthuside B และ acteoside ที่สอดคล้องกับยอดทั้งหมด 4 พีคจึงถูกเลือกเป็นตัวแปรที่เป็นตัวแทนสำหรับการทำงานของเอสโตรเจน (รูปที่ 3)

.

3.4 การกำหนดกิจกรรมเอสโตรเจน

อัตราส่วนของน้ำหนักเปียกของมดลูกต่อน้ำหนักตัวของหนูแต่ละตัวถูกคำนวณ (รูปที่ 4) สัตว์ที่สัมผัสกับ Cistanche จากแหล่งที่อยู่อาศัย 9 แห่งแสดงกิจกรรมเกี่ยวกับฮอร์โมนเอสโตรเจนอย่างมีนัยสำคัญโดยการเพิ่มน้ำหนักมดลูกเมื่อเทียบกับหนูในกลุ่มควบคุมที่ว่างเปล่า รูปที่ 4 แสดงเพิ่มเติมถึงอัตราการงอกของเซลล์ MCF7 ที่บำบัดด้วยซีรัมของหนูเมาส์ที่ได้รับการรักษาด้วย Cistanche เซลล์ที่บำบัดด้วยซีรั่มของหนูที่ได้รับ Cistanche จากแหล่งที่อยู่อาศัย 10 แห่งมีการเติบโตที่สูงกว่าอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับเซลล์ที่ปราศจากการรักษา

3.5 การวิเคราะห์สองตัวแปร

ในการศึกษานี้ เราสังเกตว่าน้ำหนักมดลูกของหนูคุนหมิงเพศเมียที่ยังไม่บรรลุนิติภาวะเพิ่มขึ้น และการเพิ่มจำนวนของเซลล์มะเร็งเต้านมในมนุษย์ MCF7 ได้รับการส่งเสริม การค้นพบนี้ยืนยันกิจกรรมเกี่ยวกับฮอร์โมนเอสโตรเจนของ Cistanche รูปที่ 5 ระบุดัชนีมดลูกและอัตราการงอกขยายของเซลล์ MCF7 ขององค์ประกอบเหล่านี้ ค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ของเพียร์สันใช้ในการคำนวณพื้นที่พีคสัมพัทธ์ ซึ่งสอดคล้องกับกิจกรรมเอสโตรเจนของตัวอย่าง ค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ที่สูงกว่า 0.3 ถือว่ามีนัยสำคัญ (p < 0.05)="" ในขณะที่ค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ที่สูงกว่า="" 05="" ถือว่ามีนัยสำคัญอย่างมาก="" (p="">< 0.01).="" จากผลการศึกษาพบว่า="" cistanche="">

สารประกอบทั้งหมดเก้าชนิดมีความสัมพันธ์อย่างมีนัยสำคัญกับการเพิ่มขึ้นของน้ำหนักมดลูก (p < {0}}.05)="" ในขณะที่สารประกอบสิบชนิดมีความสัมพันธ์อย่างมีนัยสำคัญกับการเพิ่มจำนวนเซลล์ของ="" mcf7="" (p="">< 0.05)="" สารประกอบที่มีความสัมพันธ์กับน้ำหนักของมดลูกและการเพิ่มจำนวนเซลล์อย่างมีนัยสำคัญคือ="" 8-กรดเอพิโลกานิก,="" ซาลิโดรไซด์,="" ไซริงกาไลด์="" a3'-="" -="" l-rhamnopyranoside,="" ซิสตาโนไซด์="" a,="" ซิสตาโนไซด์="" b,="" ซิสตาโนไซด์="" c,="" ออสมันทุไซด์บี,="" แอกทีโอไซด์,="" ไอโซแอคทีโอไซด์,="" ทูบา="" b,="" 2'-อะซิติแลคติโอไซด์="" และสารประกอบที่ไม่รู้จักสองตัว="" (รูปที่="" 5)="">

3.6 วิธีการวิเคราะห์สหสัมพันธ์สีเทา

รูปที่ 6 แสดงความสัมพันธ์สัมพัทธ์ของพีคที่มีลักษณะเฉพาะของสารประกอบ 26 ตัวที่มีดัชนีของมดลูก และรูปที่ 7 แสดงความสัมพันธ์สัมพัทธ์ของพีคที่มีลักษณะเฉพาะของสารประกอบ 26 ตัวที่มีอัตราการงอกขยายของเซลล์ของพวกมัน สารประกอบทั้งหมดสามชนิดมีความสัมพันธ์สูงสุดกับดัชนีของมดลูก ได้แก่ 8-กรดเอพิโลกานิก, ซิสตาโนไซด์ F และแอคทีโอไซด์ (รูปที่ 6, เรียงจากมากไปน้อย); ในขณะที่สารประกอบหกชนิดที่มีความสัมพันธ์สูงสุดกับการเพิ่มจำนวนเซลล์ MCF7 คือ อิชินาโคไซด์, ซิสตาโนไซด์ F, ซิสตาโนไซด์ บี, ออสมันทูไซด์ บี, ไอโซแอคทีโอไซด์ และทูบูโลไซด์ บี (รูปที่ 7, เรียงจากมากไปน้อย) ความสัมพันธ์สัมพัทธ์ของ echinacoside, osmanthuside B, acteoside และ isoacteoside สูงกว่า 0.5

3.7 การเพิ่มประสิทธิภาพของเงื่อนไข LC-MS

เพื่อให้ได้แผนที่โครมาโตแกรมที่ดีขึ้น เปรียบเทียบเมทานอลและอะซิโตไนไทรล์ ในที่สุด การรวมกันของกรดฟอร์มิกในน้ำ (0.2 เปอร์เซ็นต์ , v/v) - อะซีโตไนไตรล์เป็นเฟสเคลื่อนที่ที่ดีที่สุดสำหรับการแยกสาร โดยในช่วงของการสแกนความยาวคลื่นเต็ม 200-400นาโนเมตร 254 นาโนเมตรได้รับเลือกเป็นค่าที่เหมาะสมที่สุด นอกจากนี้ พารามิเตอร์ MS ยังได้รับการปรับปรุงอีกด้วย เลือกโหมดการสแกนไอออนลบเนื่องจากปรับปรุงค่าการตอบสนองของส่วนผสมส่วนใหญ่ใน Cistanche

4 บทสรุป

เทคโนโลยี LC-Q-TOF-MS ถูกใช้เพื่อระบุองค์ประกอบที่ออกฤทธิ์ของเอสโตรเจนของ Cistanche การศึกษานี้แสดงให้เห็นว่า 8-กรดเอพิโลกานิก, ซาลิโดรไซด์, ไซริงกาไลด์A3'- -l-rhamnopyranoside, ซิสตาโนไซด์ A, echinacoside, ซิสตาโนไซด์ F, ซิสตาโนไซด์ B, ซิสตาโนไซด์ C, ออสมันธุไซด์ B, แอกเตโอไซด์, ไอโซแอคทีโอไซด์, ทูบูโลไซด์ 2'-acetylacteoside และสารประกอบที่ไม่รู้จัก 2 ชนิดเป็นส่วนประกอบสำคัญของ Cistanche อย่างไรก็ตาม การค้นพบนี้จำเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมเพื่อสำรวจผลกระทบภายในร่างกายและกลไกการออกฤทธิ์ขององค์ประกอบ

รับทราบ:

โครงการนี้ได้รับการสนับสนุนโดยมูลนิธิวิทยาศาสตร์ธรรมชาติแห่งชาติของจีน (หมายเลข 81073015) มูลนิธิวิทยาศาสตร์ธรรมชาติแห่งมณฑลเฮยหลงเจียง (ZD2017014) และแผนฝึกอบรมผู้มีความสามารถด้านนวัตกรรมรุ่นใหม่ของวิทยาลัยในมณฑลเฮยหลงเจียง (UNPYSCT-2017209) . ผู้เขียนขอประกาศว่าไม่มีความขัดแย้งทางผลประโยชน์เกี่ยวกับการตีพิมพ์บทความนี้

อ้างอิง

[1] Wang Z. , Xia Q. , Liu X. , Liu W. , Huang W. , Mei X. , Luo J. , Shan M. , Lin R. , Zou D. , Ma Z. , ไฟโตเคมี , เภสัชวิทยา , การควบคุมคุณภาพและการวิจัยในอนาคตของ Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl: A review, J. Ethnopharmacol., 2018, 210, 318- 339

[2] Shu Y. , Liu Z. , Zhao S. , Song Z. , He D. , Wang M. , Zeng H. , Lu C. , Lu A. , Liu Y. , ใช้กลยุทธ์เมตาบอลิซึมแบบบูรณาการและทั่วโลก เพื่อคัดกรองเครื่องหมายควบคุมคุณภาพของ Citrus TCMs, Anal ไบโอทางทวารหนัก เคมี, 2017, 409(20), 4849-4865.

[3] Yang B. , Wang Y. , Shan L. , Zou J. , Wu Y. , Yang F. , Zhang Y. , Li Y. , Zhang Y. , นวนิยายและโครมาโตกราฟีเชิงปฏิบัติ "Fingerprint-ROC-SVM กลยุทธ์ที่ใช้กับการวิเคราะห์คุณภาพของยาแผนจีนแบบฉีด: การใช้การฉีด KuDieZi เป็นกรณีศึกษา โมเลกุล, 2017, 22

(7). PII: E1237.[4] Zhuo L. , Peng J. , Zhao Y. , Li D. , Xie X. , Tong L. , Yu Z. , การคัดกรองเครื่องหมายควบคุมคุณภาพที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพของยาหยด QiShenYiQi ตามความสัมพันธ์ระหว่างลายนิ้วมือโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงพิเศษ และกิจกรรมป้องกันหลอดเลือด, J. Sep. Sci., 2017, 40(20), 4076-4084.

[5] Liu N. , Li J. , Li BG, การประยุกต์ใช้การวิเคราะห์ทางสถิติหลายตัวแปรและการคิดในการควบคุมคุณภาพของยาจีน, Zhongguo จง. ยาว. ซา Zhi., 2014, 39 ปี

(21), 4268-4271.

[6] Wang DD, Liang J. , Yang WZ, Hou JJ, Yang M. , Da J. , Wang Y. , Jiang BH, Liu X. , Wu WY, Guo DA, HPLC/qTOF-MS ข้อมูลส่วนประกอบที่เป็นลักษณะเฉพาะ ชุดและการวิเคราะห์ทางเคมีสำหรับการควบคุมคุณภาพแบบองค์รวมของการเตรียม TCM ที่ซับซ้อน: ยา Niuhuang Shangqing เป็นตัวอย่าง J. Pharm ไบโอเมด ก้น, 2014, 89, 130-141. [7] Hernaez R., Thrift AP, ค่าทำนายผลเชิงลบสูง, ความชุกต่ำ, และเอฟเฟกต์สเปกตรัม: ข้อควรระวังในการตีความ, Clin. ระบบทางเดินอาหาร Hepatol., 2017, 15(9), 1355-1358.

[8] Liang J. , Chen Y. , Ren G. , Dong W. , Shi M. , Xiong L. , Li J. , Dong J. , Li F. , Yuan J. , การคัดกรองส่วนประกอบที่เป็นพิษต่อตับใน Euodia rutaecarpa โดย UHPLC-QTOF/MS ตามความสัมพันธ์ระหว่างสเปกตรัมและความเป็นพิษ โมเลกุล 2017, 22(8) PII: E1264.

[9] Li W. , Sun X. , Liu B. , Zhang L. , Fan Z. , Ji Y. , การคัดกรองและการระบุส่วนประกอบที่เป็นพิษต่อตับใน Evodia rutaecarpa ตามความสัมพันธ์ของเอฟเฟกต์สเปกตรัมและ UPLC-Q-TOFMS, Biomed . Chromatogr., 2016, 30(12), 1975-1983.

[10] Chopard G. , Puyraveau M. , Binetruy M. , Meyer A. , Vandel P. , Magnin E. , Berger E. , Galmiche J. , Mauny F. , Spectrum Effect และ Spectrum Bias ในการทดสอบการคัดกรองสำหรับ การด้อยค่าทางปัญญาเล็กน้อยจากการลบล้าง: ผลกระทบทางคลินิกคืออะไร, เจ. อัลไซเมอร์. Dis., 2015, 48(2), 385-393.

[11] Xu GL, Xie M. , Yang XY, Song Y. , Yan C. , Yang Y. , Zhang X. , Liu ZZ, Tian YX, Wang Y. , Jiang R. , Liu WR, Wang XH, She GM, ความสัมพันธ์ระหว่างผลกระทบของสเปกตรัมในฐานะแนวทางที่เป็นระบบในการวิจัยการแพทย์แผนจีน: สถานะปัจจุบันและมุมมองในอนาคต, โมเลกุล, 2014, 19(11), 17897-17925

[12] Zheng Q. , Zhao Y. , Wang J. , Liu T. , Zhang B. , Gong M. , Li J. , Liu H. , Han B. , Zhang Y. , Song X. , Li Y. , Xiao X., ความสัมพันธ์ระหว่างผลสเปกตรัมระหว่างลายนิ้วมือ UPLC และฤทธิ์ทางชีวภาพของรากทุติยภูมิอย่างหยาบของ Aconitum carmichaelii Debeaux (Fuzi) และผลิตภัณฑ์แปรรูปสามรายการต่อการเจริญเติบโตของยลควบคู่ไปกับการวิเคราะห์สหสัมพันธ์ตามรูปแบบบัญญัติ, J. Ethnopharmacol., 2014,153(3) , 615-623.

[13] Shi Z. , Liu Z. , Liu C. , Wu M. , Su H. , Ma X. , Zang Y. , Wang J. , Zhao Y. , Xiao X. , ความสัมพันธ์ระหว่างสเปกตรัมและเอฟเฟกต์ระหว่างลายนิ้วมือเคมี และผลต้านเชื้อแบคทีเรียของ Lonicerae Japonicae Flos และ Lonicerae Flos Base บน UPLC และ Microcalorimetry ด้านหน้า เภสัช., 2559, 7, 12.

[14] Usher-Smith JA, Sharp SJ, Griffin SJ, ผลกระทบของสเปกตรัมในการทดสอบการทำนายความเสี่ยง การตรวจคัดกรอง และการวินิจฉัย BMJ, 2016, 353, i3139

[15] Chen Y. , Yu H. , Wu H. , Pan Y. , Wang K. , Liu L. , Jin Y. , Zhang C. , การติดตามสารประกอบห้ามเลือดแบบใหม่จากผลิตภัณฑ์ทำความร้อนของฟลาโวนอยด์ทั้งหมดใน Flos Sophorae ตามสเปกตรัม ความสัมพันธ์ -effect และคอลัมน์โครมาโตกราฟี, J. Sep. Sci., 2015, 38(10), 1691-1699.

[16] Liu X. , Wang XL, Wu L. , Li H. , Qin KM, Cai H. , Pei K. , Liu T. , Cai BC, การสืบสวนความสัมพันธ์ของสเปกตรัมและเอฟเฟกต์ของ Da-Huang-Fu- Zi-Tang ในหนูโดยวิธี UHPLC-ESI-Q-TOF-MS, J. Ethnopharmacol., 2014, 154(3), 606-612

[17] Xie RF, Zhou X. , Shi ZN, Li YM, Li ZC, ศึกษาความสัมพันธ์ระหว่างเอฟเฟกต์สเปกตรัมของ rhizoma Rhei, cortex Magnoliae Officinalis, Fructus Aurantii Immaturus และสูตรของพวกมัน, J. Chromatogr วิทย์, 2013, 51(6), 524-532. [18] Li F. , Yang X. , Yang Y. , Guo C. , Zhang C. , Yang Z. , Li P. , กิจกรรมการต่อต้านโรคกระดูกพรุนของ echinacoside ในหนูที่ตัดรังไข่, Phytomedicine., 2013, 20(6), { {9}}.

[19] Xiong WT, Gu L. , Wang C. , Sun HX, Liu X., ฤทธิ์ต้านน้ำตาลในเลือดสูงและฤทธิ์ลดไขมันในเลือดของ Cistanche tubulosa ในหนู DB/DB ที่เป็นเบาหวานชนิดที่ 2, J. Ethnopharmacol., 2013, 150 (3) , 935- 945.

[20] Morikawa T. , Ninomiya K. , Imamura M. , Akaki J. , Fujikura S. , Pan Y. , Yuan D. , Yoshikawa M. , Jia X. , Li Z. , Muraoka O. , Acylated phenylethanoid glycosides , echinacoside และ acteoside จาก Cistanche tubulosa ปรับปรุงความทนทานต่อกลูโคสในหนู J. Nat. Med., 2014, 68(3), 561-566.

[21] Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Zhao MB, Jiang Y. , Tu PF, Phenylethanoid glycosides ที่มีฤทธิ์ต้านการอักเสบจากลำต้นของ Cistanche deserticola ที่เพาะเลี้ยงในทะเลทราย Tarim, Fitoterapia., 2013, 89, {{4 }}.

[22] Lu D. , Zhang J. , Yang Z. , Liu H. , Li S. , Wu B. , Ma Z. , การวิเคราะห์เชิงปริมาณของ Cistanches Herba โดยใช้โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงควบคู่ไปกับการตรวจจับอาร์เรย์ไดโอดและ resolution mass spectrometry รวมกับวิธีเคมี, J. Sep. Sci., 2013, 36(12), 1945-1952.

[23] Han L. , Boakye-Yiadom M. , Liu E. , Zhang Y. , Li W. , Song X. , Fu F. , Gao X. , ลักษณะโครงสร้างและการระบุของ phenylethanoid glycosides จาก Cistanches deserticola YC Ma โดย UHPLC/ESI-QTOF-MS/MS, ไฟโตเคม ก้น, 2012, 23(6), 668-676.

[24] Xiang Y. , Jing Z. , Haixia W. , Ruitao Y. , Huaixiu W. , Zenggen L. , Lijuan M. , Yiping W. , Yanduo T. , Antiproliferative Activity ของ Phenylpropanoids ที่แยกได้จาก Lagotis brevituba Maxim, Phytother . Res., 2017, 31(10), 1509-1520.

[25] Yan Y. , Song Q. , Chen X. , Li J. , Li P. , Wang Y. , Liu T. , Song Y. , Tu P. , การกำหนดส่วนประกอบพร้อมกันด้วยขั้วกว้างและช่วงเนื้อหาใน Cistanche tubulosa โดยใช้ปฏิกิริยาโครมาโตกราฟีแบบรีเวิร์สเฟส-ชอบน้ำ-ควบคู่กันแบบอนุกรม J. Chromatogr A., 2017, 1501, 39-50.

[26] Zou P. , Song Y. , Lei W. , Li J. , Tu P. , Jiang Y. , การประยุกต์ใช้เมตาโบโลมิกส์แบบ 1H NMR สำหรับการเลือกปฏิบัติของส่วนต่างๆ และการพัฒนาเวิร์กโฟลว์การประมวลผลใหม่สำหรับ Cistanche Deserticola แอคตา เภสัช. บาป. B., 2017, 7(6), 647-656.

[27] Pan YN, ศึกษาองค์ประกอบและฤทธิ์ทางชีวภาพของ Cistanche tubulosa สด, Ph.D. วิทยานิพนธ์, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang, China, 2011.

[28] Cui Q. , Pan Y. , Xu X. , Zhang W. , Wu X. , Qu S. , Liu X. , รายละเอียดการเผาผลาญของ acteoside ที่ผลิตโดยแบคทีเรียในลำไส้ของมนุษย์หรือหนูหนูหรือเอนไซม์ในลำไส้ ในหลอดทดลอง ใช้ UPLC Q-TOF–MS, Fitoterapia., 2016, 109, 67-74.

[29] Cui Q. , Pan Y. , Bai X. , Zhang W. , Chen L. , Liu X. , การจำแนกลักษณะเฉพาะอย่างเป็นระบบของสารเมตาบอไลต์ของ echinacoside และ acteoside จาก Cistanche tubulosa ในพลาสมาของหนู น้ำดี ปัสสาวะ และอุจจาระ UPLC-ESI-Q-TOF-MS, ไบโอเมด Chromatogr., 2016(9), 1406-1415.

[30] Cui Q. , Pan Y. , Yan X. , Qu B. , Liu X. , Xiao W. , วิธีเมตาบอลิซึมเพื่อตรวจสอบอุปสรรคที่เกี่ยวข้องซึ่งทำให้เกิดการดูดซึมที่ไม่ดีในการส่งมอบ isoacteoside ในช่องปากในหนูโดยใช้โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงพิเศษ / แมสสเปกโตรเมตรีแบบตีคู่ของเวลาบินสี่เท่า แบบรวดเร็ว คอมมูนิตี้ มวล. สเปกตรัม, 2017(4), 371-380.