ผลการป้องกันของ Cistanche Deserticola ต่อการบาดเจ็บที่ตับ: การบาดเจ็บที่ตับจากแอลกอฮอล์

เชิงนามธรรม:จากการศึกษาทางเภสัชวิทยาสมัยใหม่พบว่าCistancheDeserticola (C. deserticola) มีผลในการป้องกันตับ แต่ส่วนที่ใช้งานและกลไกไม่ชัดเจน เพื่อระบุส่วนที่มีประสิทธิภาพของ C. deserticola YC Ma แบบจำลองการบาดเจ็บที่ตับจากแอลกอฮอล์เฉียบพลันในหนูเมาส์จึงถูกสร้างขึ้นด้วย 56-หลักฐาน Erguotou และสารสกัดที่เป็นเศษส่วนต่างๆ ของ C. deserticola YC Ma (ไกลโคไซด์ทั้งหมด โพลีแซคคาไรด์ และโอลิโกแซ็กคาไรด์) ) ถูกบริหาร หลังจาก 14 วันของการบริหารช่องปาก พยาธิวิทยาของตับและการสะสมของไขมันถูกวัดและการแสดงออกของปัจจัยที่เกี่ยวข้องกับนิวเคลียส E2-ปัจจัยที่เกี่ยวข้อง (Nrf-2), โปรตีนที่เกี่ยวข้องกับ ECH คล้ายเคลช์-1 ( Keap-1) และโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับถุงน้ำในพลาสมาเลมา-1 (PV1) ถูกวัดโดยอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์ ระดับของอะลานีนอะมิโนทรานสเฟอเรส (ALT), แอสพาเทตอะมิโนทรานสเฟอเรส (AST), เอนโดท็อกซิน (ET), ไดอามีนออกซิเดส (DAO) และกรด D-lactic (D-LA) ในซีรัม และซูเปอร์ออกไซด์ดิสมิวเตส (SOD), กลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส (GSH) -Px), catalase (CAT) และ malondialdehyde (MDA) ในตับถูกวัดโดย ELISA การทดลองกับสัตว์ทั้งหมดได้ดำเนินการโดยได้รับอนุมัติจากคณะกรรมการจริยธรรมด้านสวัสดิภาพสัตว์ทดลองของศูนย์วิทยาศาสตร์สุขภาพมหาวิทยาลัยปักกิ่ง ผลการศึกษาพบว่าไกลโคไซด์ทั้งหมดของ C. deserticola YC Ma (400 มก.·กก.-1) สามารถลดพยาธิสภาพของตับ ลดเอนโดทอกซินในซีรัม ไดอะมีนออกซิเดส และกรด D-lactic และลดการสะสมของไขมันในตับ ไกลโคไซด์ทั้งหมดยังส่งเสริมการถ่ายโอน Nrf-2 ไปยังนิวเคลียสและลดการแสดงออกของ Keap-1 และ PV1 โดยสรุป ไกลโคไซด์ทั้งหมดของ C. deserticola YC Ma มีผลในการป้องกันการบาดเจ็บที่ตับเฉียบพลันจากแอลกอฮอล์ และกลไกนี้อาจเกี่ยวข้องกับการกระตุ้นวิถี Nrf-2/Keap-1 การปรับปรุงลำไส้ ความสมบูรณ์ของผนังและการยับยั้งการขนส่งสารอันตรายเข้าสู่ตับ

คำสำคัญ:CistancheDeserticola YC หม่า; โรคตับจากแอลกอฮอล์ ไกลโคไซด์ทั้งหมดของ C. deserticola YCMa; การป้องกันตับ เส้นทาง Nrf-2/Keap-1

ป้องกัน เอฟเฟกต์ ของ ที่ ทั้งหมด ไกลโคไซด์ ของ Cistanche ทะเลทราย Y. C. หม่า ใน แอลกอฮอล์ ตับ บาดเจ็บ ใน หนู

ติดต่อ: ali.ma@wecistanche.com

โรคตับจากแอลกอฮอล์ (ALD) หมายถึงโรคตับที่เกิดจากการดื่มหนักเป็นเวลานาน ซึ่งมักจะปรากฏเป็นไขมันพอกตับจากแอลกอฮอล์ในระยะเริ่มแรก แล้วพัฒนาเป็นตับอักเสบจากแอลกอฮอล์ พังผืดในตับ ตับแข็ง และแม้กระทั่งตับวาย[1] ]. ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา ด้วยมาตรฐานการครองชีพของผู้คนที่พัฒนาขึ้น สัดส่วนของผู้ป่วยโรคตับจากแอลกอฮอล์เพิ่มขึ้น เป็นอันตรายต่อสุขภาพของประชาชนอย่างร้ายแรง [2] การศึกษาพบว่า ALD ส่วนใหญ่เป็นผลมาจากการทำงานร่วมกันของปัจจัยหลายอย่าง เช่น การตอบสนองต่อการอักเสบ ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน และสารพิษจากลำไส้ที่เกิดจากเอธานอลและสารเมตาโบไลต์ของมันโดยตรงหรือโดยอ้อม ฟังก์ชันสิ่งกีดขวาง Endotoxemia และการกระตุ้น endotoxin ของเซลล์ Kupffer มีบทบาทสำคัญในการเกิดขึ้นและการพัฒนาของ ALD [3]

ยาจีนโบราณCistancheเป็นลำต้นที่ชุ่มฉ่ำของCistancheDeserticola (C. deserticola) YC Ma หรือCistanchetubulosa(Schenk) R. Wight ของพืช Lidanaceae มีใบเป็นสะเก็ดแห้ง จากการศึกษาพบว่า Cistanche สามารถเพิ่มประสิทธิภาพการทำงานของภูมิคุ้มกันของร่างกาย ต่อต้านริ้วรอย ต่อต้านรังสี ต่อต้านอนุมูลอิสระ และต่อต้านไขมันเปอร์ออกซิเดชัน และป้องกันความเสียหายของตับจากแอลกอฮอล์ [4-7] การศึกษาก่อนหน้านี้มุ่งเน้นไปที่ Cistanche deserticola เป็นหลัก และผลต่อตับของ Cistanche deserticola และส่วนประกอบที่ใช้งานยังไม่ชัดเจน ในบทความนี้ อ้างอิงจากแบบจำลองการบาดเจ็บที่ตับเฉียบพลันจากแอลกอฮอล์ ผลของการป้องกันตับและกลไกของสารสกัดจากส่วนต่างๆ ของ Cistanche deserticola ได้ถูกกล่าวถึง และได้จัดเตรียมพื้นฐานทางทฤษฎีสำหรับการวิจัยและพัฒนา Cistanche Deserticola ในด้านการปกป้องตับในภายหลัง

วัสดุและวิธีการ

หนูเมาส์ Kunming ที่มีสุขภาพดีสำหรับสัตว์ในห้องปฏิบัติการ เพศผู้ น้ำหนัก (22 ± 5) กรัม ถูกซื้อจาก Beijing Weitong Lihua Laboratory Animal Technology Co., Ltd. หมายเลขใบอนุญาตคือ SCXK (ปักกิ่ง) 2016-0011 และเลี้ยงในสัตว์ ศูนย์การทดลองการแพทย์มหาวิทยาลัยปักกิ่ง อุณหภูมิห้อง 20 ~ 25 องศา ความชื้น 56 เปอร์เซ็นต์ ~ 60 เปอร์เซ็นต์ การดำเนินการทั้งหมดเกี่ยวกับสัตว์ทดลองได้ดำเนินการอย่างเคร่งครัดตามมาตรฐานของคณะกรรมการจริยธรรมสัตว์ของคณะแพทยศาสตร์มหาวิทยาลัยปักกิ่ง (LA2019123)

สำหรับการจัดเตรียมและกำหนดเนื้อหาของCistancheสารสกัดเดซิโคลา วิธีการเตรียมและวิธีการกำหนดเนื้อหาของCistancheสารสกัด Deserticola ที่รายงานโดยกลุ่มวิจัยก่อนหน้านี้ถูกอ้างถึง [8-10] สกัด Cistanche deserticola 10 กก. ด้วยน้ำและการตกตะกอนของเอทานอลเพื่อให้ได้พอลิแซ็กคาไรด์ 3.7 เปอร์เซ็นต์ และสารละลายในน้ำบริสุทธิ์ถูกทำให้เข้มข้นเพื่อให้ได้โอลิโกแซ็กคาไรด์ทั้งหมดที่มีความหนา 38 เปอร์เซ็นต์ และเอทานอล 40 เปอร์เซ็นต์ถูกชะล้างและทำให้แห้งเพื่อให้ได้ไกลโคไซด์ทั้งหมด 3.7 เปอร์เซ็นต์ . สารสกัดทั้ง 3 ชนิดนี้ถูกนำมาใช้ในการวิจัยเชิงทดลองตามลำดับ

(G1260), ชุดตรวจจับกิจกรรมอะลานีนอะมิโนทรานส์เฟอเรส (ALT) (หมายเลขแบทช์ BC1555) และชุดตรวจจับกิจกรรมแอสพาเทตอะมิโนทรานส์เฟอเรส (AST) (หมายเลขแบทช์ BC1560) จาก Beijing Soleibo Biotechnology Co., Ltd. Company; ชุด Superoxide Dismutase (SOD) (ล็อต A001-3), ชุด Glutathione Peroxidase (GSH-Px) (Lot A005), ชุด Malondialde (Lot A005) ‐ hyde, MDA) (Lot A003-1), ชุดตรวจหา catalase (catalase, CAT) (A007-1), ชุดตรวจเอนโดท็อกซิน (ET) (E039- 1- 1) , ชุดตรวจไดเอมีนออกซิเดส (DAO) (A088-2-1) และกรด D-lactic ชุดเครื่องมือ (D-LA) (H263) ทั้งหมดมาจากสถาบันวิศวกรรมชีวภาพหนานจิง เจี้ยนเฉิง Biphenyl Diester (bifendate, BIF, หมายเลขแบทช์: S4890) จัดทำโดย Shanghai Lanmu Chemical Co. , Ltd.; 56 เปอร์เซ็นต์ (ปริมาณแอลกอฮอล์ 56 ​​เปอร์เซ็นต์) Hongxing Erguotou ให้บริการโดย Beijing Hongxing Co., Ltd.; โปรตีนที่เกี่ยวข้องกับถุงน้ำในพลาสมาเมมเบรน 1 (ถุงน้ำในพลาสมา) - โปรตีนที่เกี่ยวข้อง-1, PV1) แอนติบอดี (ab32570), ปัจจัยที่เกี่ยวข้องกับปัจจัยนิวเคลียร์ E2 (Nrf-2) แอนติบอดีและ ECH-asso ที่มีลักษณะคล้ายเคลช์ ซื้อโปรตีน -ciated-1 (Keap) -1) (ab66620) จาก Abcam

เครื่องมือทดลอง Paraffin microtome (Leica, Germany); เครื่องอ่านไมโครเพลท Sunrise-Basic (TECAN, สวิตเซอร์แลนด์); เครื่องหมุนเหวี่ยงเย็นความเร็วสูง (Beckman, USA); กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงกลับหัว (IX73) (Olympus, Japan).

การเตรียมและการจัดกลุ่มแบบจำลองหนูเมาส์ของการบาดเจ็บที่ตับจากแอลกอฮอล์เฉียบพลัน หนูเมาส์คุนหมิงที่มีสุขภาพดีจำนวนหกสิบตัวถูกชั่งน้ำหนัก 10 ในกลุ่มปกติ (NOR) และหนูที่เหลือได้รับ Hongxing Erguotou โดยการให้อาหาร [9], ที่ขนาดยา 0.01 มล. ก. - 1 โดยให้ยาทางสายยาง วันละครั้งเป็นเวลา 7 วันติดต่อกัน หลังจาก 7 วัน พวกมันถูกสุ่มแบ่งออกเป็นกลุ่มแบบจำลอง (MOD) กลุ่มไบเดนเทต (BIF, 0.9 มก. กก.-1) และกลุ่มไกลโคไซด์ทั้งหมด (TG, 400 มก. กก.-1) ตามน้ำหนักตัว ),CistancheDeserticola polysaccharide group (PSs, 400 mg·kg-1) และ Cistanche deserticola oligosaccharide group (OSs, 400 mg·kg-1) และกำหนดขนาดยาตามการวิจัยก่อนหน้านี้ของกลุ่มวิจัย[ 11]. แต่ละกลุ่มได้รับน้ำเกลือปกติ ไบฟีนิลไดเอสเตอร์ รวมกลูโคไซด์ทั้งหมดCistancheDeserticola, polysaccharide ของ Cistanche deserticola และ oligosaccharide ของ Cistanche deserticola ตามลำดับโดยวิธีทางสายยางเป็นเวลา 14 วัน ยาทั้งหมดเตรียมด้วยน้ำเกลือปกติ เนื่องจากการหลั่งแอลกอฮอล์อย่างต่อเนื่อง หนูบางตัวตาย และการบริหารครั้งสุดท้าย รีเอเจนต์ทดลอง HE สารละลายย้อม HE (G1120) สารละลายย้อม O สีแดงน้ำมัน 8 ต่อกลุ่ม

30 นาทีหลังจากการบริหารครั้งสุดท้าย ได้รับค่าสัมประสิทธิ์อวัยวะแต่ละส่วนของหนู และแต่ละอวัยวะได้รับตามสูตรนี้: ค่าสัมประสิทธิ์อวัยวะ=[น้ำหนักเปียกของอวัยวะ (g)/น้ำหนักตัวของหนู (g) )] × 100 เปอร์เซ็นต์ในการคำนวณแต่ละอวัยวะ การวิเคราะห์ทางสถิติดำเนินการโดยใช้ซอฟต์แวร์ SPSS 19.0

การย้อมสี HE หลังจากที่เนื้อเยื่อตับที่กล่าวถึงข้างต้นได้รับการแก้ไขด้วยการตรึงเนื้อเยื่อ ส่วนต่างๆ ถูกฝังเป็นประจำในพาราฟิน ย้อมด้วยฮีมาทอกซิลิน-อีโอซิน (HE) และสังเกตการเปลี่ยนแปลงทางจุลพยาธิวิทยาภายใต้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง

สำหรับการตรวจหาดัชนี ใช้ซีรั่มของหนูในแต่ละกลุ่ม และตรวจพบเนื้อหาของ ALT, AST, ET, DAO และ D-LA ตามคำแนะนำของชุดอุปกรณ์ หนูถูกสังเวยเพื่อเอาตับออก และเตรียมเนื้อเยื่อตับให้เป็นเนื้อเดียวกัน ตามคำแนะนำของชุดคิท กิจกรรม CAT, SOD, GSH- Px และเนื้อหา MDA

การย้อม O สีแดงด้วยน้ำมัน นำเนื้อเยื่อตับของหนูเมาส์ที่ตายตัวมาวางไว้ในสารละลายซูโครส 30 เปอร์เซ็นต์ หลังจากที่เนื้อเยื่อตับตกลงไปที่ด้านล่าง มันถูกถ่ายโอนไปยังสารละลายซูโครส 20 เปอร์เซ็นต์ , ความหนาของแผ่นคือ 100 μm. เติม 1×PBS หยดลงไปเพื่อล้างเป็นเวลา 10 นาที จากนั้นใส่ลงในไอโซโพรพานอล 60 เปอร์เซ็นต์ แช่เป็นเวลา 20-30 วินาที; จากนั้นเติมลงในสารละลายการย้อมสี O สีแดงของน้ำมันดัดแปลง และผนึกไว้ 10-15 นาที ใส่ในสารละลายไอโซโพรพานอลร้อยละ 60 สักครู่ ล้างเพื่อขจัดสารละลายย้อม ล้างด้วยน้ำประปาเป็นเวลา 10 นาที ติดด้วยเจลาตินกลีเซอรอล และสังเกตและถ่ายภาพภายใต้กล้องจุลทรรศน์

ส่วนของพาราฟินถูกล้างออกและคืนสภาพสำหรับการย้อมด้วยสารเคมีอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์ และดึงแอนติเจนด้วยโซเดียมซิเตรต แอนติบอดีปฐมภูมิ PV1 (1:200), Nrf-2 (1:100) และ Keap-1 (1:200) ถูกเติมแบบหยด และเซลล์ถูกบ่มที่ 4 องศาในชั่วข้ามคืน ล้างด้วย PBS เติม TRITC fluorescent secondary antibody (1:100) หยดลงไป แล้วฟักเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องในที่มืด นิวเคลียสถูกย้อมด้วย Hoechst 33258 ซึ่งถูกติดตั้งด้วยภูเขาที่สลายตัวต้านการเรืองแสงในที่มืด และถ่ายภาพภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง

ส่วนของพาราฟินที่ย้อมด้วย TUNEL ถูกกำจัดออกและคืนน้ำ 20 ug·mL-1 ของการเจือจางโปรตีเอส K ที่ปราศจาก DNase ถูกเติมแบบหยด ปฏิกิริยาถูกดำเนินการที่ 37 องศาเป็นเวลา 30 นาที และจากนั้น 3 เปอร์เซ็นต์สารละลาย H2O2 ถูกเติมแบบหยดและบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 20 นาที ล้างสามครั้งด้วยสารละลายบัฟเฟอร์ PBS 0.01 โมล·L- 1 เติมสารละลายการติดฉลากไบโอติน 50 ไมโครลิตรแบบหยด ฟักที่อุณหภูมิ 37 องศาเป็นเวลา 60 นาทีเพื่อหยุดปฏิกิริยา เพิ่ม 50 μL streptavidin-TRITC working solution dropwise ฟักที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาทีในความมืด นิวเคลียสถูกย้อมด้วย DAPI ติดตั้งบนสไลด์ สังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์ และถ่ายภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง

การวิเคราะห์ทางสถิติดำเนินการโดยใช้ซอฟต์แวร์ SPSS 190 ข้อมูลการวัดแสดงเป็นค่าเฉลี่ย±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (x-±s) และข้อมูลการวัดที่มีการแจกแจงแบบปกติถูกเปรียบเทียบโดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว (ANOVA) ระหว่างกลุ่ม หากความแปรปรวนเป็นเนื้อเดียวกัน วิธี SNK จะถูกนำมาใช้ และหากความแปรปรวนไม่เท่ากัน ก็จะใช้วิธีของดันเนตต์ วิธี T3 นับข้อมูลโดยใช้การทดสอบไคสแควร์ (การทดสอบไคสแควร์) โดยใช้ GraphPad Prism 5 สำหรับการทำแผนที่ข้อมูล กำหนดระดับความแตกต่างที่มีนัยสำคัญน้อยที่สุดที่ P <>

ผลลัพธ์

1 TG สามารถลดค่าสัมประสิทธิ์ตับของหนูที่มีอาการบาดเจ็บที่ตับจากแอลกอฮอล์ได้อย่างมีนัยสำคัญ ดังแสดงในรูปที่ 1 เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม NOR ค่าสัมประสิทธิ์ตับของกลุ่ม MOD มีนัยสำคัญ

เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม MOD ค่าสัมประสิทธิ์ของตับลดลงอย่างมีนัยสำคัญหลังจากการแทรกแซงของ TG ในขณะที่ PS และ OS ไม่มีผลต่อค่าสัมประสิทธิ์ของตับ และไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่าง TG และ BIF

2 TG สามารถปรับปรุงลักษณะทางพยาธิวิทยาของเนื้อเยื่อตับในหนูที่มีอาการบาดเจ็บที่ตับจากแอลกอฮอล์ได้อย่างมีนัยสำคัญ

ผลการย้อมสี HE แสดงให้เห็นว่าเซลล์เนื้อเยื่อตับในกลุ่ม NOR มีสัณฐานวิทยาปกติ เซลล์ที่จัดเรียงอย่างเรียบร้อย การย้อมสีสม่ำเสมอ โครงสร้างเซลล์ที่สมบูรณ์ และช่องว่างระหว่างเซลล์หนาแน่น กลุ่ม MOD มีโครงสร้างที่ไม่เป็นระเบียบ การจัดเรียงเซลล์ไม่ปกติ ช่องว่างระหว่างเซลล์หลวม และขอบเขตของเซลล์ไม่ชัดเจน BIF และ TG หลังจากการแทรกแซง การเปลี่ยนแปลงของสัณฐานวิทยาของเซลล์ดีกว่ากลุ่มแบบจำลองอย่างมีนัยสำคัญ และจำนวนเซลล์มากกว่ากลุ่มแบบจำลอง ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่าง TG และ BIF และกลุ่ม PS และ OSs ไม่มีการปรับปรุงอย่างมีนัยสำคัญทางสัณฐานวิทยาทางพยาธิวิทยาของตับ ซึ่งบ่งชี้ว่า TG มีผลในการป้องกันตับ อย่างไรก็ตาม PS และ OS ไม่มีการปรับปรุงอย่างมีนัยสำคัญ ดังแสดงในรูปที่ 2

TG 3 ตัวสามารถลดการสะสมของไขมันในตับในหนูที่มีอาการบาดเจ็บที่ตับจากแอลกอฮอล์ได้อย่างมาก

การย้อมสี O สีแดงด้วยน้ำมันแสดงให้เห็นว่ามีการสะสมของไขมันในกลุ่ม NOR เพียงเล็กน้อย ในขณะที่การสะสมของไขมันในกลุ่ม MOD เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม MOD การสะสมของไขมันลดลงอย่างมีนัยสำคัญหลังจากการแทรกแซงของ TG ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่าง TG และ BIF PS และ OSs ไม่ได้เปลี่ยนแปลงการสะสมของไขมันในตับอย่างมีนัยสำคัญ ผลการทดลองแสดงให้เห็นว่า TG สามารถลดการสะสมของไขมันในตับในหนูที่ได้รับบาดเจ็บที่ตับจากแอลกอฮอล์ ในขณะที่ PS และ OS ไม่ได้ปรับปรุงการสะสมของไขมันในตับในหนูที่ได้รับบาดเจ็บที่ตับจากแอลกอฮอล์ และไม่มีผลในการลดไขมัน (รูปที่ 3)

4 TGs สามารถลดระดับ ALT และ AST ของตับในหนูที่มีอาการบาดเจ็บที่ตับจากแอลกอฮอล์ได้อย่างมาก

ผลลัพธ์ที่แสดงในรูปที่ 4 แสดงให้เห็นว่าเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม NOR ระดับ ALT และ AST ในกลุ่ม MOD เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ เมื่อเทียบกับกลุ่ม MOD ระดับ ALT และ AST ในกลุ่ม TG ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่าง TG และ BIF ระดับของ ALT และ AST ไม่เปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งบ่งชี้ว่า TG ยับยั้งความเสียหายของตับและมีผลในการป้องกันตับ

5 TG สามารถยับยั้งการตายของเซลล์ตับในหนูที่มีอาการบาดเจ็บที่ตับจากแอลกอฮอล์ได้อย่างมีนัยสำคัญ

หลังจากที่แอลกอฮอล์ทำลายเซลล์ตับ ดีเอ็นเอในนิวเคลียสจะถูกทำลาย และการย้อมสี TUNEL จะแสดงการแสดงออกในเชิงบวก ดังแสดงในรูปที่ 5 เซลล์จำนวนมากในตับของกลุ่ม MOD ได้รับการตายของเซลล์ เมื่อเทียบกับกลุ่ม MOD การตายของเซลล์ของกลุ่ม TG ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ และไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่าง TG และ BIF ไม่มีการเปลี่ยนแปลงที่สำคัญ ซึ่งบ่งชี้ว่า TG สามารถยับยั้งการตายของเซลล์ได้

6 TG สามารถปรับปรุงลักษณะทางพยาธิวิทยาของลำไส้เล็กในหนูที่มีอาการบาดเจ็บที่ตับจากแอลกอฮอล์ได้อย่างมีนัยสำคัญ

ผลการย้อมสี HE แสดงให้เห็นว่าเซลล์เนื้อเยื่อวิทยาลำไส้เล็กในกลุ่ม NOR มีสัณฐานวิทยาปกติ วิลลี่ที่จัดเรียงอย่างเรียบร้อย ผนังลำไส้ที่สม่ำเสมอ โครงสร้างเซลล์ที่ไม่บุบสลาย และช่องว่างระหว่างเซลล์หนาแน่น กลุ่ม MOD มีโครงสร้างไม่เป็นระเบียบ วิลลี่จัดเรียงไม่เป็นระเบียบ ผนังลำไส้แตกร้าว และบาง BIF และ TG หลังจากการแทรกแซง สัณฐานวิทยาของเซลล์มีการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญ และผนังลำไส้ก็หนาขึ้น กลุ่ม PSs และ OSs ไม่ได้ปรับปรุงลักษณะทางสัณฐานวิทยาทางพยาธิวิทยาของลำไส้เล็กอย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งบ่งชี้ว่า TG มีผลในการป้องกันความสมบูรณ์ของผนังลำไส้และวิลลี่ดังแสดงในรูปที่ 6

7 TGs ลดการแสดงออกของโปรตีน PV1 ในผนังลำไส้เล็กของหนูที่มีอาการบาดเจ็บที่ตับจากแอลกอฮอล์อย่างมีนัยสำคัญ

โปรตีน PV1 เป็นไกลโคโปรตีนเมมเบรนชนิดที่ 2 ซึ่งเป็นตัวบ่งชี้การซึมผ่านของสิ่งกีดขวางของหลอดเลือดในลำไส้ และตรวจพบการแสดงออกโดยการย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์เพื่อสังเกตผลของสารสกัด Cistanche deserticola ต่อการซึมผ่านของผนังลำไส้ ดังแสดงในรูปที่ 7 เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม NOR ระดับการแสดงออกของโปรตีน PV1 ในผนังลำไส้เล็กของกลุ่ม MOD เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ เมื่อเทียบกับกลุ่ม MOD ระดับการแสดงออกของโปรตีน PV1 ของกลุ่ม TG ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ TG มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับ BIF; ในขณะที่ PSs ไม่มีการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญในการแสดงออกของโปรตีน PV1 ระหว่างทั้งสองกลุ่มและกลุ่ม OSs ซึ่งบ่งชี้ว่า TG สามารถส่งเสริมการซ่อมแซมผนังลำไส้เล็กได้

8 TG สามารถปรับปรุงเนื้อหา ET, DAO และ D-LA ในซีรัมในหนูที่มีอาการบาดเจ็บที่ตับจากแอลกอฮอล์ได้อย่างมาก

ผลลัพธ์ที่แสดงในรูปที่ 8 แสดงให้เห็นว่าเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม NOR ระดับซีรั่มของ ET, DAO และ D-LA ในกลุ่ม MOD เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ เมื่อเทียบกับกลุ่ม MOD ระดับ ET, DAO และ D-LA ในกลุ่ม TG ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ ไม่มีการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญในเนื้อหาของตัวชี้วัดเหล่านี้ในกลุ่ม

9 TG เปิดใช้งานเส้นทางการส่งสัญญาณ Nrf-2/Keap-1 ในเนื้อเยื่อตับของหนูที่มีอาการบาดเจ็บที่ตับจากแอลกอฮอล์

ผลของการย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์แสดงให้เห็นว่าเมื่อเทียบกับกลุ่ม NOR อัตราการเข้าของนิวเคลียร์ Nrf-2 ในตับของกลุ่ม MOD ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ ระดับการแสดงออกของโปรตีนของ Keap-1 เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม MOD อัตราการเข้าสู่นิวเคลียร์ Nrf-2 ของกลุ่ม TG เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ Keap-1 ระดับการแสดงออกของโปรตีนลดลงอย่างมีนัยสำคัญ TG ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับ BIF; กลุ่ม PS และ OS ไม่มีผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญต่อการป้อนนิวเคลียร์ Nrf-2 และการแสดงออกของ Keap-1 ดังแสดงในรูปที่ 9

10 TGs สามารถปรับปรุงระดับของปัจจัยความเครียดออกซิเดชันในเนื้อเยื่อตับของหนูที่มีอาการบาดเจ็บที่ตับจากแอลกอฮอล์ได้อย่างมาก

การศึกษาทดลองนี้แสดงให้เห็นว่าเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม NOR กิจกรรมของ SOD, CAT และ GSH-Px ในกลุ่ม MOD ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ และเนื้อหาของ MDA เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม MOD กิจกรรมของ SOD, CAT และ GSH-Px เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญหลังจากการแทรกแซงของ BIF และ TG เพิ่มขึ้น เนื้อหา MDA ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ ดังแสดงในรูปที่ 10

การอภิปราย

ในการศึกษานี้ แบบจำลองหนูเมาส์ของการบาดเจ็บที่ตับเฉียบพลันจากแอลกอฮอล์ถูกใช้เพื่อตรวจสอบผลของสารสกัดจากส่วนต่างๆ ของ Cistanche Deserticola ต่ออาการบาดเจ็บที่ตับเฉียบพลันจากแอลกอฮอล์เมื่อให้ยาเป็นเวลา 14 วัน , ปริมาณ ALT และ AST ในซีรัมและปริมาณ MDA ในเนื้อเยื่อตับ, เพิ่มการทำงานของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระ SOD, CAT และ GSH-Px อย่างมีนัยสำคัญ, ปรับปรุงโครงสร้างทางสัณฐานวิทยาของเนื้อเยื่อตับและการซึมผ่านของผนังลำไส้, ET, DAO และ D ในซีรัมลดลง -เนื้อหา LA ยับยั้งการถ่ายโอนสารทุติยภูมิของแบคทีเรียไปยังตับ ในเวลาเดียวกัน กลูโคไซด์ทั้งหมดของ Cistanche deserticola สามารถส่งเสริมการเข้าสู่นิวเคลียสของ Nrf-2 อย่างมีนัยสำคัญ ยับยั้งการแสดงออกของโปรตีน Keap-1 และโปรตีน PV1 ในผนังลำไส้ ซึ่งบ่งชี้ว่ากลูโคไซด์ทั้งหมดของ Cistanche Deserticola สามารถกระตุ้นเส้นทางการส่งสัญญาณ Nrf-2/Keap-1 และซ่อมแซมผนังลำไส้ . ความเสียหายเพื่อให้ได้รับการปกป้องตับ

ยาจีนโบราณ Cistanche เป็นก้านแห้งและเป็นสะเก็ดของ Cistanche deserticola หรือ Cistanche Cistanche และกลัยโคไซด์ทั้งหมดของ Cistanche ทั้งสองชนิดนี้ในการปกป้องตับสามารถปรับปรุงสัณฐานวิทยาของเนื้อเยื่อตับและลดระดับการเกิดพังผืดในหนูที่เป็นพังผืด [12] กลุ่มวิจัยของ Luo Huiying [13] ได้ทำการศึกษาเกี่ยวกับ Cistanche Deserticola และผลการวิจัยพบว่ากลูโคไซด์ทั้งหมดของ Cistanche Deserticola สามารถเพิ่มประสิทธิภาพการทำงานของ SOD, GSH-Px และ CAT ในเนื้อเยื่อตับของหนูที่มีอาการบาดเจ็บที่ตับจากแอลกอฮอล์ ซึ่งเป็น เช่นเดียวกับผลการศึกษาครั้งนี้ องค์ประกอบทางเคมีของทั้งสองมีความแตกต่างกันเฉพาะในเนื้อหาของ phenylethanoid glycosides และการศึกษามากที่สุดคือ Cistanche piensis การศึกษาพบว่าส่วนประกอบในการป้องกันตับของ Cistanche deserticola ส่วนใหญ่เป็น phenylethanoid glycosides แต่เนื่องจากเนื้อหาของ phenylethanoid glycosides ใน Cistanche deserticola ต่ำกว่าของ Cistanche deserticola จึงมีเพียงไม่กี่คนที่ศึกษามัน หากเนื้อหาต่ำกว่า Cistanche Cistanche แสดงว่ายังคงมีผลในการป้องกันตับอยู่หรือไม่ ได้ทำการศึกษาเปรียบเทียบส่วนประกอบอื่นๆ เพื่อชี้แจงส่วนประกอบในการป้องกันตับ และเพื่อให้เป็นพื้นฐานในการทดลองสำหรับผลของ Cistanche Deserticola ในการปกป้องตับ และเพื่อเป็นพื้นฐานทางทฤษฎีสำหรับการพัฒนาผลิตภัณฑ์ในภายหลัง

การพัฒนาของโรคตับมีความสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับวิถีการส่งสัญญาณ Nrf-2/Keap-1 โดยเฉพาะอย่างยิ่งอาการบาดเจ็บที่ตับจากแอลกอฮอล์ การศึกษาพบว่าเอทานอลสามารถกระตุ้นการแสดงออกของโปรตีนซึ่งจับองค์ประกอบควบคุมสเตอรอล 1 (SREBP-1) ในหนูทดลอง Nrf-2-/- และยังสามารถเพิ่มระดับไตรกลีเซอไรด์ในซีรัมได้อย่างมีนัยสำคัญ[14] การบริโภคแอลกอฮอล์ในระยะยาวสามารถนำไปสู่การกระตุ้น Nrf-2 ในตับของหนูทดลอง ซึ่งจะช่วยลดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันที่เกิดจากเอทานอล ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันยังสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับการเกิดและการพัฒนาของโรคตับ เมื่อร่างกายอยู่ในสภาวะของความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน Nrf-2 จะจับกับองค์ประกอบการตอบสนองของสารต้านอนุมูลอิสระนิวเคลียร์ (AREs) แล้วเริ่มการแสดงออกของยีนต้านอนุมูลอิสระที่ปลายน้ำ เมื่อเทียบกับหนูป่า หนู Nrf-2-/- มีความไวต่อความเสียหายของตับมากกว่าเนื่องจากความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระที่ลดลงและไวต่อสิ่งเร้าภายนอกมากกว่า อย่างไรก็ตาม การแสดงออกที่มากเกินไปของโปรตีน Nrf-2 พบว่าไม่มีอาการบาดเจ็บที่ตับอย่างเห็นได้ชัด[15] จะเห็นได้ว่าการกระตุ้น Nrf-2 อาจเป็นเป้าหมายและแนวทางการรักษาที่เป็นไปได้ใหม่สำหรับการบาดเจ็บที่ตับ ในการศึกษานี้ โดยการเปรียบเทียบผลของสารสกัดสามชนิดของ Cistanche deserticola ต่ออาการบาดเจ็บที่ตับเฉียบพลันจากแอลกอฮอล์ พบว่ากลูโคไซด์ทั้งหมดของ Cistanche deserticola สามารถเพิ่มกิจกรรมของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระ SOD, CAT และ GSH-Px โดยการกระตุ้น Nrf{{ 19}}/Keap-1 เส้นทางการส่งสัญญาณและมีบทบาทในการเปิดใช้งานเส้นทางการส่งสัญญาณ Nrf-2/Keap-1 บทบาทของการป้องกันตับ

การใช้แอลกอฮอล์ในทางที่ผิดเป็นปัจจัยสำคัญที่ทำให้เกิดการบาดเจ็บที่ตับจากแอลกอฮอล์ และแอลกอฮอล์สามารถส่งเสริมการเติบโตของแบคทีเรียแกรมลบในลำไส้ของผู้ป่วยที่มีอาการบาดเจ็บที่ตับเรื้อรัง หลอดเลือดดำพอร์ทัลไปถึงตับ ซึ่งทำให้เกิดความเสียหายของตับรุนแรงขึ้น[16] จากการศึกษาพบว่าในผู้ป่วย ALD และสัตว์จำลอง ทั้งแอลกอฮอล์และอะซีตัลดีไฮด์เมตาโบไลต์ของมันสามารถเพิ่มการซึมผ่านของลำไส้และทำให้สารอันตราย เช่น ไลโปโพลีแซ็กคาไรด์ (LPS) และ D-LA เข้าสู่กระแสเลือดได้ [17] การศึกษานี้พบว่ากลูโคไซด์ทั้งหมดของ Cistanche deserticola สามารถลดความสามารถในการซึมผ่านของแอลกอฮอล์ในลำไส้ ซึ่งจะช่วยลดปริมาณ LPS, DAO และ D-LA ในเลือด และป้องกันสารอันตรายเข้าสู่ตับผ่านทางหลอดเลือดดำพอร์ทัล จึงมีบทบาทในการปกป้องตับ

Bifendate เป็นยาตัวแรกสำหรับรักษาโรคตับอักเสบในประเทศของฉัน มีผลทางเภสัชวิทยา เช่น ลดเอนไซม์ ต่อต้านอนุมูลอิสระ และควบคุมภูมิคุ้มกัน การศึกษานี้ยังพบว่า bidentate มีผลอย่างมากต่อการสะสมของไขมัน และผลของมันก็อาจเกี่ยวข้องกับผลต้านการอักเสบของมัน การเกิดออกซิเดชันเกี่ยวข้องกับการปรับปรุงเนื้อเยื่อตับที่เสียหาย ซึ่งจะช่วยปรับปรุงการเผาผลาญไขมันในตับ แต่ยังไม่ได้มีการรายงานถึงการควบคุมการเผาผลาญไขมันโดยตรงหรือไม่ ในเวลาเดียวกัน จะเห็นได้จากผลลัพธ์ว่าผล hepatoprotective ของ Total glucosides ของ Cistanche Deserticola นั้นไม่แตกต่างจากของ bidentate อย่างมีนัยสำคัญ และทั้งสองมีผลต้านอนุมูลอิสระและลดเนื้อหาของ ET, DAO และ D-LA ใน เซรั่มซึ่งหมายความว่ากลูโคไซด์ทั้งหมดของ Cistanche deserticola ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญ การป้องกันตับที่คล้ายคลึงกันระหว่าง glycosides และ bidentate ซึ่งบ่งชี้ว่า bidentate ไม่มีผลอย่างมีนัยสำคัญต่อการลดการซึมผ่านของลำไส้ และกลไกของการลด ET, DAO และ D-LA ในซีรัมยังคงต้องศึกษาเพิ่มเติม

สรุป กลูโคไซด์ทั้งหมดของ Cistanche deserticola เป็นแหล่งสำคัญของยาจีนโบราณ Cistanche deserticola ซึ่งสามารถลดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันในตับและยับยั้งการเข้าสู่ลำไส้ของสารที่เป็นอันตรายในตับ และมีบทบาทในการป้องกันแอลกอฮอล์เฉียบพลัน อาการบาดเจ็บที่ตับ กลไกของมันอาจเกี่ยวข้องกับ มันเกี่ยวข้องกับการเปิดใช้งานเส้นทางการส่งสัญญาณ Nrf-2/Keap-1 ในขณะที่ Cistanche deserticola polysaccharides และ oligosaccharides ไม่มีผลในการป้องกันการบาดเจ็บที่ตับเฉียบพลันจากแอลกอฮอล์ ผลการวิจัยที่เกี่ยวข้องเป็นข้อมูลอ้างอิงที่เป็นประโยชน์สำหรับการวิจัยและพัฒนา Cistanche Deserticola ต่อไป

ปกป้องตับด้วย cistanche para que sirve

อ้างอิง

[1] Zhang YW, Li YJ, Hu BF, และคณะ การประเมินแบบจำลองสัตว์ระยะสั้นของโรคตับจากแอลกอฮอล์ [J] Acta Pharm Sin, 2018, 53: 236-243.

[2] Vonghia L, Leggio L, Ferrulli A และอื่น ๆ พิษสุราเฉียบพลัน [J] Eur J Intern Med, 2008, 19: 561-567.

[3] Hou J, Lu Y, Zhang DK. ความสัมพันธ์ระหว่าง dysbacteriosis ในลำไส้และโรคตับ [J] J Clin Hepatol, 2018, 34: 1128- 1132.

[4] Liu Y, Wang H, Yang M, และคณะ Cistanche deserticola polysaccharides ปกป้องเซลล์ PC12 จากการบาดเจ็บที่เกิดจาก OGD/RP [J] Biomed Pharmacother, 2018, 99: 671-680.

[5] เพลง DZ, Cao Z, Liu ZB, et al. Cistanche deserticola polysaccharide ลดทอน osteoclastogenesis และการสลายของกระดูกผ่านการยับยั้งการส่งสัญญาณ RANKL และการผลิตออกซิเจนชนิดปฏิกิริยา [J] เจเซลล์ Physiol, 2018, 233: 9674-9684.

[6] Zhang AL, Yang XM, Li QX, และคณะ ฤทธิ์กระตุ้นภูมิคุ้มกันของพอลิแซ็กคาไรด์ที่สกัดได้ด้วยน้ำจาก Cistanche Deserticola ในฐานะสารเสริมพืช ในหลอดทดลอง และในร่างกาย [J] โปรดหนึ่ง 2018, 13: e0191356.

[7] Zhang H, Xiang Z, Duan X และอื่น ๆ ฤทธิ์ต้านเนื้องอกและฤทธิ์ต้านการอักเสบของโอลิโกแซ็กคาไรด์จากสารสกัด Cistanche deserticola ต่ออาการบาดเจ็บที่ไขสันหลัง [J] Int J Biol Macromol, 2019, 124: 360-367.

[8] Li RY, Zhao MB, Tu PF, และคณะ การหาค่าฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ห้าชนิดพร้อมกันใน Cistanches Herba โดยใช้การวิเคราะห์เชิงปริมาณของหลายองค์ประกอบด้วยเครื่องหมายเดียว [J] เจ ชิน ฟาร์มวิทย์, 2019, 28: 537-546.

[9] Li SQ, Lu HJ, Wang P และอื่น ๆ การศึกษาเวลาของการตายของเซลล์ในการบาดเจ็บที่ตับจากแอลกอฮอล์ในหนูทดลอง [J] Chin J Clin Pharmacol, 2017, 33: 2154-2157.

[10] Shi ZY, Wu Y, Zhu YM และอื่น ๆ การหาปริมาณของเบทาอีน แมนนิทอล ฟรุกโตส กลูโคส และซูโครสใน Cistanches 2019, 21: 1641- 1646

[11] Gao YJ, Jiang Y, Dai F และอื่น ๆ การศึกษาองค์ประกอบยาระบายใน Cistanche deserticola YC Ma [J] Mod Chin Med, 2015, 17: 307-310.

[12] คุณ SP, Zhao J, Ma L, et al. ผลและกลไกของ Cistanche phenylethanoid glycosides ต่อหนูที่มีภูมิคุ้มกันโรคพังผืดในตับ [J] ชิน เจ Pharmacol Toxicol, 2016, 30: 504-510.

[13] Luo HY, Liu Y, Xi GZ และอื่น ๆ ผลการป้องกันของ Cistanchis glycosides ต่อความเสียหายของตับที่เกิดจากเอธานอลในหนูทดลอง [J] Chin J Clin Pharmacol Ther, 2009, 14:1225- 1228.

[14] Wu KC, Liu J, Klaassen CD. บทบาทของ Nrf2 ในการป้องกันความเครียดออกซิเดชันที่เกิดจากเอธานอลและการสะสมของไขมัน [J] Toxicol Appl Pharmacol, 2012, 262: 321-329.

[15] Qu Q, Liu J, Zhou HH และอื่น ๆ Nrf2 ป้องกันพิษต่อตับที่เกิดจาก furosemide [J] พิษวิทยา 2014, 324: 35-42.

[16] Zhang L, Zu XP, Xie HS, และคณะ ความคืบหน้าการวิจัยกลไกจุลินทรีย์ในลำไส้ในโรคของมนุษย์ [J] Acta Pharm Sin, 2016, 51: 843-852.

[17] Parlesak A, Schäfer C, Schütz T, และคณะ เพิ่มการซึมผ่านของลำไส้ต่อโมเลกุลขนาดใหญ่และเอนโดท็อกซีเมียในผู้ป่วยที่มีการใช้แอลกอฮอล์ในทางที่ผิดในระยะต่างๆ ของโรคตับที่เกิดจากแอลกอฮอล์ [J] เจ เฮปาทอล 2000, 32: 742-747.