การขนส่งที่ไวต่อ Phloridzin ของ Echinacoside และ Acteoside และเส้นทางการดูดซึมของลำไส้ที่เปลี่ยนแปลงไปหลังจากการใช้สารสกัด Cistanche Tubulosa
Mar 15, 2022
สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม:ali.ma@wecistanche.com
ทาดาโทชิ ทานิโนะ และคณะ
บทคัดย่อวัตถุประสงค์
วัตถุประสงค์ของการศึกษาครั้งนี้คือเพื่อจัดการกับผลประโยชน์ของสารสกัดจาก Cistanche tubulosaการปรับปรุงการซึมผ่านของลำไส้ต่ำของเอคินาโคไซด์ (ECH) และแอกทิโอไซด์ (ACT)
วิธีการ
การดูดซึมของ ECH และ ACT ในสารสกัดจาก Cistanche tubulosaมีลักษณะเฉพาะโดยใช้โมโนเลเยอร์ของเซลล์ Caco-2 เซลล์ที่มีสารประกอบที่ไม่เสียหาย การดูดซึม ECH และ ACT ขึ้นอยู่กับกลูโคสทรานส์พอร์ตเตอร์ได้รับการยืนยันโดยเทคนิคการให้เลือดไปเลี้ยงในช่องท้อง
ข้อค้นพบที่สำคัญ
การซึมผ่านที่ชัดเจน (Papp) ไม่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญระหว่าง ECH ที่ไม่เสียหายและ ACT ที่ไม่เสียหาย เมื่อมี phloridzin Papp ของ ECH และ ACT ในปริมาณที่สูงลดลงเหลือ 20 เปอร์เซ็นต์ของการไม่รักษาตามลำดับ แต่ไม่ได้เปลี่ยนแปลงโดย phloretin และ verapamilสารสกัดจาก Cistanche tubulosaในปริมาณที่ต่ำและสูงทำให้ Papp ของ ECH และ ACT เพิ่มขึ้น (เพิ่มขึ้นสามเท่า) ส่งผลให้มีส่วนร่วมในการดูดซึมกลูโคสที่ขึ้นกับโซเดียมโดยอิสระ ที่ความเข้มข้นต่ำ ระดับ ECH และ ACT ร่วมกันในเลือดพอร์ทัลถูกระงับอย่างมีนัยสำคัญโดย phloridzin
บทสรุป
อาหารและยาสารสกัดจาก Cistanche tubulosaการเพิ่มการดูดซึมในลำไส้ของ ECH และ ACT อาจช่วยจัดการสุขภาพของมนุษย์ได้ดีขึ้น แม้ว่าควรลดการมีส่วนร่วมของการขนส่งที่ไวต่อยา phloridzin
คีย์เวิร์ดแอคทีโอไซด์; Caco-2 ชั้นเดียวของเซลล์;สารสกัดจาก Cistanchetubulosa; เอ็กไคนาโคไซด์;สารขนส่งกลูโคสที่ไวต่อคลอริดซิน
สารสกัดจาก Cistanche tubulosa
คลิกเพื่อผง Cistanche tubulosa
บทนำ
รากของ Cistanche tubulosa ถูกนำมาใช้เป็นยาและอาหารสารสกัดจาก Cistanche tubulosaเป็นที่ทราบกันดีว่ามีผลทางเภสัชวิทยาในโรคทางสมองต่างๆ หน้าที่การต่อต้านวัย การเผาผลาญไขมัน และการเจริญเติบโตของเส้นผม[1-4]เมื่อเร็วๆ นี้ ยาไอริดอยด์ โมโนเทอร์พีนอยด์ ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ และลิกแนน ได้ถูกแยกออกจากกันCistanche tubulosa.[5,6] Phenylethanoid glycosides ซึ่งเป็นกลุ่มของสารประกอบโพลีฟีนอลเป็นส่วนประกอบทางเคมีหลักในสายพันธุ์ Cistanche [7] แม้ว่าปริมาณของพวกมันจะแตกต่างกันไปในแต่ละสายพันธุ์ Echinacoside (ECH; รูปที่ 1) เป็นหนึ่งในฟีนิลเลทานอยด์ไกลโคไซด์ที่สำคัญใน HerbaCistachis มันถูกไฮโดรไลซ์ไปเป็นแอกทิโอไซด์ (ACT เรียกอีกอย่างว่าverbascoside) โดยเอนไซม์ที่มีต้นกำเนิดจากแบคทีเรียในลำไส้ใหญ่ [8,9] ECH และ ACT มีกิจกรรมที่เป็นประโยชน์ของการป้องกันตับ [10] และต้านการอักเสบ [11] ในสัตว์ฟันแทะ น่าแปลกใจที่ ECH ที่ละลายน้ำได้สูงช่วยปรับปรุงผลทางพฤติกรรมและเคมีประสาทในแบบจำลองหนูของโรคพาร์กินสันและยับยั้งการกระตุ้น caspase-3 และแคสเปส-8 ในเซลล์ประสาทเม็ดเล็กในสมองน้อย[9] เป็นที่ทราบกันดีว่าอุปสรรคเลือดและสมองจำกัดการเข้าและการกระจายของซีโนไบโอติกเข้าสู่สมองจากเลือดอย่างเคร่งครัด อู๋และคณะ[12] ยังแสดงให้เห็นว่า ACT ที่ละลายน้ำได้กระจายอย่างรวดเร็วในเนื้อเยื่อสมองของหนู ดังนั้น ECHand ACT จึงอาจถูกขนส่งไปยังสมอง ลำไส้ และตับโดยระบบเฉพาะ
แม้ว่าจะมีหลักฐานที่แน่ชัดว่าการบริโภคของสารสกัดจาก Cistanche tubulosaเป็นประโยชน์ต่อสุขภาพของมนุษย์ การซึมผ่านของ ECH บริสุทธิ์ทั่ว Caco{0}} cellmonolayers ที่ความเข้มข้นปลายสุดที่ 8.4 ± 1.6 ug/ml เท่ากับหรือต่ำกว่าค่าของมาร์กเกอร์แมนนิทอลสำหรับการขนส่งพาราเซลลูลาร์[13] เมื่อให้ ECH บริสุทธิ์ทางปากแก่หนู (ขนาด 1{{10}}0 มก./กก.) การดูดซึมจะเร็วมาก (Tmax,15 นาที) และความเข้มข้นของซีรัมสูงสุดจะต่ำมาก (Cmax, 0.61 ± 0.32 ug/ml)[14] การดูดซึมสัมบูรณ์ของ ECH เพียง 0.83 เปอร์เซ็นต์ ในทำนองเดียวกัน เมื่อเซลล์ Caco-2 ถูกบ่มด้วยเศษฟีนอลที่ทำให้บริสุทธิ์บางส่วนจากน้ำเสียจากโรงงานมะกอก การดูดซึม ACT ที่บริสุทธิ์จะรวดเร็วด้วยการสะสมสูงสุดที่เกิดขึ้นหลังจาก 30 นาที และประสิทธิภาพการสะสมรวม 0.1 เปอร์เซ็นต์ ให้ระดับภายในเซลล์ 130 โปรตีนเซลล์ pmol/มก.[15] ในหนูแรท ความเข้มข้นสูงสุด (0.13 ± 0.03 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ของ ACT บริสุทธิ์ถึงภายใน 30 นาทีหลังการให้ยาทางปากที่ 100 มก./กก. [12] ซึ่งแสดงถึงการดูดซึมอย่างรวดเร็วในลำไส้ การดูดซึมทางปากของ ACT เช่นเดียวกับ ECH ค่อนข้างต่ำ (0.12 ± 0.04 เปอร์เซ็นต์ ) ซึ่งบ่งชี้ถึงความเป็นไปได้ของผลกระทบครั้งแรกในลำไส้และตับ ในน้ำดีของหนู methylation และ glucuronidation conjugates ของ ECH เป็นสารเมแทบอไลต์ที่สำคัญ [16] แม้ว่าระดับเมแทบอลิซึมของตับจะยังไม่ชัดเจน เราเบื้องต้นพบว่า ECH และ ACT ค่อนข้างคงที่ใน thehomogenates ของเยื่อบุลำไส้ของหนูและกรดกระเพาะเทียม (ไม่แสดงข้อมูล) นาจาร์และคณะ[17] แสดงให้เห็นว่าACT ยับยั้งการทำงานของ P-glycoprotein (P-gp)-ATPase ในลักษณะที่คล้ายกับ verapamil (ตัวแทนยับยั้ง P-gp ที่เป็นตัวแทน) ซึ่งหมายถึงตัวปรับ P-gp; อย่างไรก็ตาม ยังไม่มีความชัดเจนว่า ACT จะใช้เป็นสารตั้งต้น P-gp ได้หรือไม่ ที่น่าสนใจ การค้นพบล่าสุดของ flavonoid-D-glucosides ในอาหารแสดงให้เห็นว่าโปรตีนดื้อยาหลายตัว (MRP2) ปกปิดตัวขนส่งกลูโคสที่ขึ้นกับโซเดียม (SGLT)1-การไกล่เกลี่ยของการรับ quercetin 4′-O- -glucose,[18 ,19] ซึ่งรับผิดชอบการดูดซึมได้ไม่ดี อย่างไรก็ตาม ยังไม่ค่อยมีใครทราบเกี่ยวกับความไวของโพลีฟีนอลกลูโคไซด์ในการลำเลียงสารดูดซับ ซึ่งรวมถึงสารขนส่งกลูโคส ข้อมูลเกี่ยวกับลักษณะการดูดซึมของเควอซิติน4′-กลูโคไซด์และการซึมผ่านของเลือดและสมองอย่างรวดเร็ว ECH กระตุ้นให้เราตรวจสอบการดูดซึมฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ที่ไวต่อการขนส่งในอาหาร C . ทูบูโลซ่า.
ในการศึกษานี้ เราตรวจสอบการดูดซึมของ ECH และ ACT ที่ไม่บุบสลายโดยอาศัยตัวขนส่งกลูโคสโดยใช้ monolayers ของเซลล์ Caco-2 ของมนุษย์ พร้อมกัน การขนส่งการดูดซึมของ ECH และ ACT ร่วมกับอาหารที่ไม่ย่อยสารสกัดจาก Cistanche tubulosaมีลักษณะเฉพาะโดยแบบจำลองในหลอดทดลองและระบบไหลเวียนของลำไส้ในแหล่งกำเนิดด้วยการเก็บตัวอย่างเลือดพอร์ทัล ซึ่งสามารถแยกความแตกต่างระหว่างขอบเขตของการดูดซึมและการหลีกเลี่ยงการส่งผ่านครั้งแรกของตับได้อย่างง่ายดาย
วัสดุและวิธีการ
วัสดุ
Intact ECH และ ACT เป็นของขวัญจาก EishinTrading Co., Ltd (โอซาก้า ประเทศญี่ปุ่น) Phloridzin และ phloretin ถูกซื้อจาก Tokyo Kasei Co., Ltd. (โตเกียว ประเทศญี่ปุ่น) Verapamil และ p-coumaric acid ซึ่งใช้เป็นมาตรฐานภายในสำหรับการทดสอบโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC) ได้จาก Sigma-Aldrich (St Louis, MO) ,สหรัฐอเมริกา). สารเคมีอื่นๆ ที่ใช้ทั้งหมดเป็นเกรดวิเคราะห์และมีจำหน่ายในเชิงพาณิชย์
วัสดุจากพืชและการเตรียมสารสกัดเมทานอล
C. tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) เป็นไม้ยืนต้นที่เติบโตบนรากของสายพันธุ์ Salvadoraor Calotropis และจำหน่ายในประเทศแอฟริกาเหนือ อาหรับ และเอเชีย ลำต้นแห้งของซี. การระเหยของตัวทำละลายที่มีแรงดันต่ำกว่าเกณฑ์ทำให้ได้สารสกัดเมทานอล สารสกัด Themethanolic (เกรดเชิงพาณิชย์ Batch No. 20070130; register trade name, Sabaku Ninnjinn Kanka) เป็นของขวัญมากมายจาก Eishin Trading Co., Ltd ผ่าน Muraoka และMorikawa (มหาวิทยาลัย Kinki ประเทศญี่ปุ่น) และการระบุทางพฤกษศาสตร์ดำเนินการโดย Professor Jia Xiaoguang ใน สถาบัน Xinjiang Institute of Traditional Chinese and Ethnologic Medicines
การวิเคราะห์สารสกัดจากพืช: โครมาโตกราฟี
เรากำหนดเนื้อหา ECH และ ACT ในสารสกัดจาก Cistanche tubulosa(รุ่นเลขที่ 20070130) โดยการวิเคราะห์ HPLC ที่อธิบายไว้ด้านล่าง ข้อมูลที่ได้รับแสดงไว้ในตารางที่ 1
การเพาะเลี้ยงเซลล์
Caco{{0}} เซลล์ที่ซื้อจาก American Type CultureCollection (ATCC, Rockville, MD, USA) ถูกใช้ที่ข้อ 38–53 ปลูกในอาหารเลี้ยงเชื้อที่ประกอบด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อ Eagle's modified ของ Dulbecco (DMEM,Nacalai Tesque Co., Kyoto, Japan) เสริมด้วยกรดอะมิโนที่ไม่จำเป็น 1 mM, ซีรั่มโควีนในครรภ์ที่ยับยั้งความร้อน 10 เปอร์เซ็นต์, 100 U/มล. เพนิซิลลิน จี และ 0.1 มก./มล.สเตรปโตมัยซิน ซัลเฟต
การศึกษาด้านการขนส่ง
เซลล์ Caco-2 ถูกชุบที่ความหนาแน่น 6.4 × 103 เซลล์/ซม2 บนตัวกรองโพลีคาร์บอเนต โมโนเลเยอร์ใช้สำหรับการทดลองขนส่ง 21-25 วันหลังจากเพาะเมล็ด ECH และACT ที่สมบูรณ์ซึ่งเทียบเท่ากับเนื้อหาในสารสกัดจาก Cistanche tubulosa (4.5 and 13.5 mg/ml) were mixed with DMEM medium containing 0.5% dimethylsulfoxide to maintain the integrity of the cell monolayer over the periods of the experiments. Intact ACT equivalent to ECH content in the extract was also dosed in the incubation medium. The extract was suspended in a DMEM medium and was centrifuged to remove insoluble components. Supernatants were loaded to the apical side. At the indicated times, an aliquot of the incubation medium was withdrawn from the basolateral side and was mixed with acetonitrile containing an internal standard for the assay. In separate experiments, phloridzin (final concentration, 1 mM) and verapamil (final concentration, 0.2 mM) was added to the apical side of the monolayer; however, phloretin (final concentration, 0.3 mM) was treated on both sides of the monolayer. The integrity of monolayers was monitored by transepithelial electrical resistance (TEER) using Millicell-ERS (Millipore, Bedford, MA, USA) before and after transport experiments. TEER values of monolayers used were >300 Ω·cm2
Echinacoside ในสารสกัดจาก Cistanche tubulosa
การไหลเวียนของลำไส้ในแหล่งกำเนิด
หนูวิสตาร์เพศผู้ (230–250 กรัม) ได้มาจาก SLCJapan (ฮามามัตสึ ประเทศญี่ปุ่น) สัตว์ถูกเลี้ยงไว้ในห้องปรับอากาศภายใต้วงจรแสง/ความมืด 12 ชั่วโมงเป็นเวลา 1 สัปดาห์ก่อนการใช้งาน หนูได้รับอาหารห้องปฏิบัติการมาตรฐาน (Oriental Yeast Co., Ltd., Tokyo, Japan) โดยให้น้ำเปล่าและอดอาหารข้ามคืนก่อนการทดสอบ การศึกษาการไหลเวียนโลหิตภายในร่างกายดำเนินการตามขั้นตอนการแก้ไขที่อธิบายโดย Mihara et al. [20] สั้น ๆ หนูถูกระงับความรู้สึกด้วยสารละลายยูรีเทน 25 เปอร์เซ็นต์ (1 มก./กก.) เพื่อหลีกเลี่ยงการลดความดันโลหิต มีการทำแผลตรงกลางช่องท้องและลำไส้เล็กได้รับแสง ท่อน้ำดีถูกผูกมัดเพื่อหลีกเลี่ยงการหลั่งน้ำดีเข้าไปใน perfusate ล้างลำไส้เล็กส่วนย่อยทั้งหมด (จากลำไส้เล็กส่วนต้นไปยังลำไส้เล็กส่วนต้น) ด้วยน้ำเกลือปกติที่ 37 องศาเป็นเวลา 10 นาทีจนกว่าการซักจะใส ท่อแก้วที่เชื่อมต่อกับท่อซิลิโคนถูกใส่เข้าไปในปลายทั้งสองของลำไส้เล็กและยึดด้วยด้ายเย็บ จากนั้นลำไส้เล็กก็ถูกแทนที่ในช่องท้องและเชื่อมต่อ cannulas กับปั๊มรีดท่อ หลอดเลือดดำพอร์ทัลถูกฉีดด้วยท่อโพลีเอทิลีน (PE10)สารสกัดจาก Cistanche tubulosaที่มีจำหน่ายในท้องตลาดถูกแขวนลอยใน Krebs–Henseleit bicarbonate buffer (pH 7.4) เพื่อให้ผลความเข้มข้นสุดท้ายที่ 4.5 มก./มล. และถูกหมุนเหวี่ยงเป็นเวลา 10 นาทีที่8000 รอบต่อนาที เพื่อขจัดส่วนประกอบที่ไม่ละลายน้ำ ส่วนลอยเหนือตะกอนในกรณีที่ไม่มีหรือมีอยู่ของ phloridzin (1 mM) ถูกเก็บไว้ในอ่างเก็บน้ำซึ่งถูกคงไว้ที่อุณหภูมิ 37 ± 0.5 องศาตลอดการทดลอง ตามเวลาที่ระบุ เลือดถูกถ่ายผ่าน cannula หลอดเลือดดำพอร์ทัล หลังจากการปั่นแยกตัวอย่างเลือด พลาสมาที่เป็นผลลัพธ์ถูกลดโปรตีนด้วยอะซิโตไนไตรล์ที่มีมาตรฐานภายในและถูกหมุนเหวี่ยงที่ 3000 รอบต่อนาที ส่วนลอยเหนือตะกอนถูกระเหย และเรซิดิวถูกแยกออกด้วยเฟสเคลื่อนที่ซึ่งประกอบด้วยโอซิโตไนไตรล์และกรดอะซิติก 0.5 เปอร์เซ็นต์ สารละลายผสมถูกบรรจุลงบนคอลัมน์ HPLC หนูถูกนำมาใช้ตามกระบวนการทางจริยธรรมตามแนวทางการดูแลและการใช้สัตว์ทดลองที่ออกโดยรัฐบาลญี่ปุ่นและมหาวิทยาลัยคินกิ
การวิเคราะห์ HPLC
การวิเคราะห์ HPLC ถูกดำเนินการบนระบบที่ติดตั้งด้วย aShimadzu SPD{0}}A, เครื่องตรวจจับ UV, Shimadzu LC-10A ปั๊ม และผู้รวมโครมาโทแพก Shimadzu C-R4A (เกียวโต ญี่ปุ่น) ECH และ ACT แยกจากกันโดยใช้คอลัมน์ Inertsil ODS (5 µm, 4.6 × 150 mm, GL Sciences Inc., Osaka, Japan) ใช้เฟสเคลื่อนที่ของอะซีโตไนไทรล์และ 0.5 เปอร์เซ็นต์ของกรดอะซิติกในอัตราส่วน 15:85 (ปริมาตร/ปริมาตร) ที่อัตราการไหล 1.0 มล./นาที การตรวจจับดำเนินการที่ 334 nm
การวิเคราะห์จลนศาสตร์
ค่าสัมประสิทธิ์การซึมผ่านที่ชัดเจน (Papp) ถูกประมาณจากความชันของส่วนเชิงเส้นของระยะเวลาของการขนส่งแบบผสมข้าม Caco-2 monolayers ของเซลล์ ดังต่อไปนี้: P dQ dt AC app=( ) ( )
โดยที่ dQ/dt คืออัตราการซึมผ่าน C0 คือความเข้มข้นเริ่มต้นของตัวถูกละลายในห้องผู้ให้ และ A คือพื้นที่ผิวของเมมเบรน (4.7 ซม.2)
ในการศึกษาการกระจายเลือดในลำไส้ของหนูในแหล่งกำเนิด พื้นที่ภายใต้กราฟความเข้มข้น-เวลาในพลาสมา (AUC0–90) ในหลอดเลือดดำพอร์ทัลจากเวลาที่เป็นศูนย์จนถึงการวัดครั้งสุดท้ายถูกคำนวณตามกฎสี่เหลี่ยมคางหมูเชิงเส้น
แอคทีโอไซด์ในสารสกัดจาก Cistanche tubulosa
คุณสมบัติทางเคมีกายภาพ
พื้นที่ผิวขั้วและพื้นที่ผิวไม่มีขั้วของสารประกอบคำนวณโดยใช้โปรแกรม SAS (รุ่น 0.8,Olsson, T.; Sherbukhin, V., Synthesis and Structure Administration, 1997–2001, AstraZeneca, Cary , NC, สหรัฐอเมริกา). ค่า log P และ pKa ที่กำหนดโดยการทดลองได้มาจากวรรณกรรม
การวิเคราะห์ทางสถิติ
ข้อมูลถูกวิเคราะห์โดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียวตามด้วยการทดสอบหลังเฉพาะกิจของ Tukey ค่าความน่าจะเป็นน้อยกว่า 5 เปอร์เซ็นต์ถือว่ามีนัยสำคัญ
ผลลัพธ์
การขนส่งแบบดูดซับของเอไคนาโคไซด์และแอคทีโอไซด์ผ่านเซลล์โมโนเลเยอร์ของ Caco-2
ในหนูและหนู ECH[10,14] และ ACT[12,21] ที่ไม่บุบสลายจะรับประทานในขนาด 100–1000 มก./กก. ดิสารสกัดจาก Cistanche tubulosaที่ใช้มี ECH ประมาณ 30 เปอร์เซ็นต์และ ACT 15 เปอร์เซ็นต์ต่อขนาดยา เนื่องจากสารสกัดเปลี่ยนความดันออสโมติกและ pH ในตัวกลางในการฟักไข่ ความเข้มข้น 4.5 และ13.5 มก./มล. ถูกกำหนดโดยพิจารณาจากปริมาณการใช้ทางปาก (สารประกอบที่ไม่เสียหาย: 2–20 มก./2{{2{{31} }}} กรัมของน้ำหนักตัว) ในหนู สารสกัดที่ปริมาณต่ำ (4.5 มก./มล.) และสูง (13.5 มก./มล.) ประกอบด้วย 2.0 และ 6.1 มก. สำหรับ ECH และ 1.0 และ 3.0 มก. สำหรับACT ตามลำดับ เราใช้สารสกัด C. tubulosa ในปริมาณที่ต่ำกว่าปริมาณรับประทานของ ECH และ ACT ที่รายงานในมนุษย์มาก (ค่าอาหารที่แนะนำสำหรับสารสกัด: 150 มก. ที่มี ECH ประมาณ 45 มก. และ 22.5 มก. สำหรับ ACT) ที่ขนาดต่ำและสูงของสารประกอบที่ไม่เสียหาย โปรไฟล์การดูดซึม (รูปที่ 2) และ Papp ไม่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญระหว่าง ECH และ ACT ที่เทียบเท่ากับ ECH (ตารางที่ 2) เมื่อใส่สารสกัด C. tubulosa ในปริมาณสูง 13.5 มก./มล. ลงในอาหารกลาง Pappvalues (1.27 ± 0.13 และ 0.34 ± 0.03 × 10−6 ซม./วินาที ตามลำดับ) ของ ECH และ ACT ที่ควบคู่กันมีค่ามากกว่าสามเท่า (0.38 ± 0.09 และ 0.10 ± 0.03 × 10−6 ซม. / วินาทีตามลำดับ) ของ ECH และ ACT ที่ไม่เสียหาย (ตารางที่ 2) สารสกัดซึ่งแตกต่างจากสารประกอบที่ไม่เสียหาย ช่วยเพิ่มการขนส่งการดูดซึมของ ECH และ ACT ได้อย่างมีนัยสำคัญ
ผลการยับยั้งของ phloridzin, phloretin และ verapamil
To characterize the intestinal absorption of ECH and ACT, Caco-2 cell monolayers were incubated with representative inhibitors. Apical glucose transporter 1-sensitive phloridzin dramatically reduced the Papp of intact ECH and ACT to 20% of non-treatment at the high dose (Table 2). Basolateral glucose transporter (GLUT) 2-sensitive phloretin did not decrease the transport of intact ECH and ACT (Figure 3). In this study, higher concentrations (>0.3 mM) ของ phloretin ไม่สามารถใช้ได้เนื่องจากความเป็นพิษของเซลล์ที่สังเกตได้ นอกจากนี้ P-gp ยังได้รับการระบุว่ามีบทบาทสำคัญในการมีปฏิสัมพันธ์ระหว่างยาสมุนไพรและสาร P-gpsubstrates ที่มีความสำคัญทางคลินิก เวราปามิลไม่ได้เพิ่มประสิทธิภาพการขนส่งการดูดซึมของสารประกอบที่ไม่บุบสลาย (รูปที่ 3)
การขนส่งการดูดซึมของ ECH และ ACT ในสารสกัด (ขนาดต่ำ) ถูกยับยั้งโดย phloridzin อย่างมีนัยสำคัญ (ตารางที่ 2 และรูปที่ 4) สารสกัดในขนาดสูงยับยั้งการยับยั้งที่ไวต่อสารคลอริดซิน แม้ว่าการขนส่งของ ECH และ ACT ที่ไม่บุบสลายจะไวต่อ phloridzin มากกว่า (ตารางที่ 2)
การศึกษาการกระจายของลำไส้ในแหล่งกำเนิด
ในการศึกษาในสถานที่จริง เราได้ทดสอบว่า ECH และ ACT ในสารสกัดจาก Cistanche tubulosaถูกลำเลียงโดย SGLT1 ซึ่งอยู่ที่ปลายยอดของลำไส้เล็ก เมื่อสารสกัดจากอาหารเสริมในขนาดต่ำ (4.5 มก./มล.) ถูกทำให้บริสุทธิ์ ECH และ ACT ปรากฏขึ้นอย่างรวดเร็วในเลือดพอร์ทัล (รูปที่ 5) AUC ถูกกำหนดเป็น 2702.8 ± 384.1 μm·min สำหรับ ECH และ 698.3 ± 197.2 μm·min สำหรับ ACT หลังจากที่ AUC ถูกทำให้เป็นมาตรฐานด้วยเนื้อหาจากสารสกัดจาก Cistanche tubulosaปริมาณการดูดซึมไม่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญระหว่าง ECH และ ACT SGLT1-ฟลอริดซินที่ละเอียดอ่อนซึ่งแตกต่างจาก phloretin ยับยั้งการขนส่งที่ดูดซับของ ECH ร่วมกันได้อย่างมีนัยสำคัญ (AUC, 649.4 ± 248.2 ไมโครเมตร·นาที) และ ACT (ตรวจไม่พบ)
การอภิปราย
ส่วนผสมจากสมุนไพรบางชนิดเป็นสารตั้งต้นของ P-gp ที่แสดงออกอย่างมากในตับ ลำไส้ สมอง และไต P-gp เป็นปัจจัยกำหนดสำหรับการดูดซึมในร่างกาย การจำหน่าย และการกระจายของสมุนไพร รวมทั้งสาโทเซนต์จอห์น เคอร์คูมิน อิชินาเซีย โสม แปะก๊วย และขิง[22,23]การดูดซึมของเจนิสไตน์{{5} }กลูโคไซด์ ซึ่งเป็นอนุพันธ์ของฟลาโวนอยด์ ถูกจำกัดโดยตัวขนส่ง MRP2 ในลำไส้ด้วย[24] ดังนั้นการศึกษานี้จึงได้รับการออกแบบมาเพื่อตรวจสอบคุณสมบัติการดูดซึมของ ECH และ ACT ร่วมกับอาหารและยาสารสกัดจาก Cistanche tubulosa.
โพลาไรซ์คาโค{{0}} monolayers ของเซลล์ เช่นเดียวกับลำไส้[25] แสดงตัวขนส่งยาที่ไหลออกจากลำไส้ที่สำคัญ เช่น P-gp, MRP และโปรตีนต้านทานมะเร็งเต้านม[26]ฟลาโวนอยด์ในอาหาร ของ quercetin[27] และ myricetin[28] แสดงให้เห็นว่าสามารถยับยั้งการไหลออกของ P-gp-mediated ทั้งในเซลล์และแบบจำลองของสัตว์ Verapamil ซึ่งเป็นสารยับยั้ง P-gp ไม่ได้เปลี่ยนแปลงการซึมผ่านของ ACT และ ECH ในโมโนเลเยอร์ของเซลล์ของ Caco-2 (รูปที่ 3) ซึ่งบ่งชี้ว่า ECH และACT ที่ไม่เสียหายไม่ได้ถูกจำกัดโดยปั๊ม P-gp efflux การศึกษาก่อนหน้านี้ของเราแสดงให้เห็นว่าโปรตีน MRP2 ไม่ได้แสดงออกในเซลล์โมโนเลเยอร์ของ Caco-2 P-gp และ MRP2- efflux ที่เป็นสื่อกลางสามารถยกเว้นในการขนส่ง ECH และ ACT Someglycosides ของ quercetin ที่มี lipophilicity ต่ำถูกดูดซึมได้ดีกว่าตัว quercetin เอง [30] สิ่งสำคัญคือต้องสังเกตว่า ACT ที่มีมอยอิตีน้ำตาลจะกระจายอย่างรวดเร็วในเนื้อเยื่อสมอง ความสนใจของเรามุ่งเน้นไปที่การทำงานร่วมกันของสองเซลล์ภายในเซลล์ขนส่งกลูโคส: SGLT ในเมมเบรนขอบแปรงและการขนส่งกลูโคสแบบแพร่กระจาย (GLUT) ที่อำนวยความสะดวกในเยื่อหุ้มเซลล์ การเพาะเลี้ยงเซลล์ Caco-2 สามารถใช้แบบจำลอง asa สำหรับการศึกษา GLUT2 ที่ไวต่อ phloretin, SGLT1 ที่ไวต่อ phloridzin และสารขนส่ง 2 ตัว [31]–34 กลูโคสถูกขนส่งจากปลายยอดไปยัง basolateralside ของ Caco-2 monolayers ในอัตราที่สูงด้วย Pappof 36.8 ± 1.1×10−6 cm/s.[35] มันมี Papp สูงกว่าโพรพาโนลอลเครื่องหมายการขนส่งข้ามเซลล์ (23.4 ± 2.8 × 10−6 ซม./วินาที) ดังที่แสดงในตารางที่ 2 ECHand ACT ที่ไม่บุบสลายมี Papp ต่ำกว่าที่รายงานในกลูโคสและโพรพาโนลอลแบบพาสซีฟมาก เราคำนวณลอการิทึมของสัมประสิทธิ์การแบ่งส่วน (ออกทานอล-น้ำ) บันทึก P คำนวณเป็น −2.32 และ 0.077 สำหรับ ECH และ ACT ตามลำดับ เชื่อกันว่าสารประกอบที่ชอบน้ำของโพลาเลอร์ถูกขนส่งผ่านวิถีทางพาราเซลลูลาร์ (ข้ามทางแยกที่คับแคบ) twophenylethanoid glycosides เช่น mannitol ดูเหมือนจะถูกส่งผ่านเส้นทางพาราเซลลูลาร์ อย่างไรก็ตาม phloridzin ลดการซึมผ่านของ ECH และ ACT ที่ไม่บุบสลายลงอย่างมาก (ตารางที่ 2) ซึ่งบ่งชี้ว่า apicalSGLT1 มีบทบาทสำคัญในการดูดซึมของ ECH และ ACT ที่ไม่เสียหายในลำไส้ ในปริมาณที่เท่ากัน การซึมผ่านของ ACT ที่ไม่ชอบน้ำที่สูงขึ้นนั้นใกล้เคียงกับการซึมผ่านของ ECH (รูปที่ 2 และตารางที่ 2) Yoshikawa et al. [36] ได้แสดงให้เห็นว่าสารเคลื่อนย้ายอำนวยความสะดวก (GLUT 1 และ 2) เช่นเดียวกับ SGLT1 ที่ไวต่อ phloridzin นั้นแสดงออกอย่างเข้มข้นในลำไส้เล็ก เนื่องจากปริมาณสารประกอบที่ดูดซึมนั้นขึ้นอยู่กับความสมดุลของมวลระหว่างการดูดซึมและการกำจัด เราจึงประเมินการมีส่วนร่วมของ GLUT2 กลูโคสตัดผ่านเยื่อหุ้มปลายของเอนเทอโรไซต์โดย SGLT1 ด้วยสัมพรรคภาพสูงและความจุต่ำ และออกจากเยื่อหุ้มเซลล์เบโซด้านข้างผ่าน GLUT2 ที่มีสัมพรรคภาพต่ำและความจุสูง Phloretin (ตัวยับยั้งจำเพาะของ GLUT2) ไม่ได้ยกเลิกการขนส่ง ECH และACT ที่ไม่บุบสลาย (รูปที่ 3) Funes และคณะ [37] แสดงให้เห็นว่า ACT มีปฏิสัมพันธ์กับกลุ่มฟอสเฟตของเยื่อหุ้มฟอสโฟลิปิดอย่างมาก เนื่องจากกลุ่มไฮดรอกซิลมีมากมายในโครงสร้าง ACT พันธะไฮโดรเจนระหว่างกลุ่มเหล่านี้กับหัวขั้วกลีเซอรอลหรือกลุ่มฟอสเฟตของฟอสโฟลิปิดจึงเป็นปฏิกิริยาที่น่าจะเกิดขึ้นมากที่สุด เมื่อ ECH ที่ไม่สมบูรณ์และ ACT ที่เท่ากันถูกบ่มด้วยโมโนเลเยอร์ของ Caco-2 เป็นเวลา 11 ชั่วโมง การสะสมในเซลล์ของ ACT(0.24 ± 0.04 นาโนเมตร/ซม.2) นั้นมากกว่า ECH (0.07 ± 0.01 นาโนเมตร/ซม2) ถึงสามเท่า เราคิดว่า ECH และ ACT ที่ละเอียดอ่อนของ SGLT1- ถูกย้ายอย่างช้าๆ จากเซลล์เข้าสู่กระแสเลือด ซึ่งอาจนำไปสู่ lowPapp ที่สังเกตพบ เมื่อเทียบกับ ECH ที่ชอบน้ำสูง การซึมผ่านต่ำของ ACT อาจเกิดจากการแทรกซึมเข้าไปในเยื่อหุ้มเซลล์
สารสกัดจาก Cistanche tubulosa
สารประกอบโพลีฟีนอลมีการบริโภคในส่วนผสมของสมุนไพรในระหว่างการใช้งานทางคลินิกและมีจำหน่ายในเชิงพาณิชย์เป็นผลิตภัณฑ์เสริมอาหาร ในการศึกษาในหลอดทดลอง พบว่าการดูดซึมของฟีนอลิกอีพิคาเตชินไม่ได้รับอิทธิพลจากองค์ประกอบส่วนผสมของวัสดุอาหารเครื่องดื่ม ในทางตรงกันข้าม Hypericum perforatumL. เมทริกซ์ของผลิตภัณฑ์ส่งผลต่อการขนส่งเซลล์ quercetinglucosides (รูตินและไอโซเควอซิทริน) และไฮเปอร์โรไซด์ครอส Caco-2 เนื่องจากความแตกต่างในองค์ประกอบเมทริกซ์ไฟโตเคมิคอลและลักษณะการขนส่ง เช่น การถ่ายโอนพาราเซลและการขนส่งโดยสื่อกลางหรือการขนส่งแบบแอคทีฟ ในการศึกษานี้ C. tubulosa ให้การขนส่ง transepithelial สูงกว่า ECH และ ACT ที่ไม่เสียหายสามเท่า (รูปที่ 2 และตารางที่ 2) เราคาดเดาว่าส่วนประกอบในสารสกัดจาก Cistanche tubulosaกระตุ้นการขนส่งที่ไวต่อสารคลอริดซินและ/หรือเร่งการกำจัด ECH ภายในเซลล์และ ACTสารสกัดจาก Cistanche tubulosaในปริมาณที่สูงดูเหมือนจะปกปิดศักยภาพของการขนส่งที่ไวต่อยา phloridzin อย่างมาก (ตารางที่ 2) คาร์โบไฮเดรตในอาหาร [40] และโปรตีน [41] มีปฏิสัมพันธ์กับโพลีฟีนอลบางชนิดในทางเดินอาหาร Morikawa et al. [10] แสดงให้เห็นว่าไอริดอยด์ห้าชนิด, แคนคาโนไซด์ AD, และแคนคานอล, โมโนเทอร์พีนไกลโคไซด์, แคนคาโนไซด์ E, ฟีนิลธานอยด์โอลิโกไกลโคไซด์สองชนิด, แคนคาโนไซด์ F และ G และน้ำตาลโอลิโกอะซิเลต, แคนกาโนส สามารถแยกได้จากสารสกัดจาก Cistanche tubulosa
ที่ใช้อยู่ในปัจจุบัน ส่วนประกอบอื่นๆ รวมทั้งโปรตีนในสารสกัดจาก Cistanche tubulosa, ยังคงไม่ชัดเจน. เมื่อรวมกับการเก็งกำไรข้างต้นแล้ว เราได้รับการออกแบบมาเพื่อตรวจสอบว่ามีส่วนประกอบอื่นโต้ตอบกับ SGLT1 และยับยั้งการดูดซึม ECH และ ACT หรือไม่
การทดลองภายในร่างกายไม่สามารถแยกแยะได้ง่ายระหว่างขอบเขตของการดูดซึมและการหลีกเลี่ยงการควบคุมผ่านตับครั้งแรก แบบจำลองการแพร่กระจายของลำไส้ในแหล่งกำเนิดมีความได้เปรียบเหนือแบบจำลองภายในร่างกายและในหลอดทดลอง เนื่องจากการควบคุมพารามิเตอร์การทดลองที่ง่ายดายและการยกเว้นผลกระทบของอวัยวะอื่นๆ และการบำรุงรักษาปริมาณเลือดในลำไส้ที่ไม่เสียหาย การประเมินการมีส่วนร่วมของผู้ขนส่งกลูโคสที่ไวต่อยา thephloridzin ในระบบไหลเวียนของลำไส้ anin-situ ดังแสดงในรูปที่ 5 ปริมาณที่ดูดซับของ ECH และ ACT ที่ควบคู่กันในสารสกัดจาก Cistanche tubulosa (low dose) were greatly abolished by phloridzin, which agrees with our in-vitro data (Figure 4). Using peptides and 20 drugs passively absorbed, a good correlation is obtained between in-vivo drug absorption and the drug permeability of Caco-2 monolayers.[42] Drugs with a Papp of >1 × 10−6 cm/s ถูกดูดซึมอย่างสมบูรณ์ในมนุษย์ ในขณะที่ยาและเปปไทด์ที่ดูดซึมได้ไม่ดี (<1% of="" dose)="" have="" papp="" values="" of=""><1 ×="" 10−7="" cm/s.="" surprisingly,="" the="" papp="" of="" the="" ech="" concomitant="" (high="" dose)="" was="">1 × 10−6 ซม./วินาที (ตารางที่ 2) บ่งชี้ว่าการดูดซึมทางปากสูงในสัตว์และมนุษย์ Crespy และคณะ [43] แสดงให้เห็นว่าการไหลออกในการศึกษาการไหลเวียนของลำไส้ในแหล่งกำเนิดไม่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญระหว่าง phloridzin และ phloretin พวกเขา [44] ยังแสดงให้เห็นว่าการดูดซึมทางปากของ phloridzin ที่มีความไวต่อ SGLT1 สูงนั้นมีเพียง 10 เปอร์เซ็นต์ในหนู การศึกษาในอนาคตจำเป็นต้องประเมินการดูดซึมและผลกระทบครั้งแรกของตับจากการใช้ยาร่วมกับ ECH ภายหลังการบริหารช่องปากของสารสกัดจากอาหารในปริมาณสูง ผลลัพธ์ในสถานที่แสดงว่าการบริโภคของสารสกัดจาก Cistanche tubulosaอาจปรับปรุงการดูดซึมของ ECH และ ACT ที่ไม่เสียหายได้ในระดับต่ำ
บทสรุป
อาหารและยาสารสกัดจาก Cistanche tubulosaการเพิ่มการดูดซึมของ ECH และ ACT ในลำไส้อาจช่วยในการจัดการสุขภาพของมนุษย์ให้ดีขึ้น แม้ว่าควรลดการมีส่วนร่วมของการขนส่งที่ไวต่อยา phloridzin
ประกาศ
ความขัดแย้งทางผลประโยชน์
ผู้เขียนประกาศว่าพวกเขาไม่มีผลประโยชน์ทับซ้อนที่จะเปิดเผย
เงินทุน
งานนี้ได้รับการสนับสนุนจาก High-Tech ResearchCenter จาก Kinki University
รับทราบ
ผู้เขียนขอขอบคุณ Osamu Muraoka (Kinki University, Osaka, Japan) และ Toshio Morikawa (Kinki University,Osaka, Japan) สำหรับการจัดหาสารสกัดจาก Cistanche tubulosaและองค์ประกอบที่บริสุทธิ์ เรารู้สึกขอบคุณมากที่ Masahiro Iwaki (มหาวิทยาลัย Kinki) สำหรับการสนับสนุนด้านการศึกษา
สารสกัดจาก Cistanche tubulosaสินค้า
จาก: ' การขนส่ง echinacoside และ acteoside ที่ไวต่อ Phloridzin และเปลี่ยนเส้นทางการดูดซึมของลำไส้หลังการใช้สารสกัดจาก Cistanche tubulosa' โดยทาดาโทชิ ทานิโนะ และคณะ
---© 2015 Royal Pharmaceutical Society, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 67, pp. 1457–1465,Phenylethanoid glucosides ที่ขนส่งโดย SGLT1
อ้างอิง
1. Tanaka J และคณะ ผลกระทบของสารสกัดจาก Cistanche tubulosaเกี่ยวกับโรคทางสมองต่างๆ รูปแบบอาหาร 21 2008; 12: 24–26.
2. ทานากะ เจ และคณะ ฟังก์ชันต่อต้านริ้วรอยของสารสกัดจาก Cistanche tubulosa. รูปแบบอาหาร 21 2008; 12: 27–29.
3. ทานากะ เจ และคณะ ฟังก์ชั่นความงามและการเจริญเติบโตของเส้นผมของสารสกัดจาก Cistanche tubulosa. รูปแบบอาหาร 21 2008; 12: 29–32.
4. ทานากะ เจ และคณะ ผลการเผาผลาญไขมันของสารสกัดจาก Cistanche tubulosa. รูปแบบอาหาร 21 2008; 12: 30–33.
5. Yoshizawa F และคณะ องค์ประกอบของ Cistanche tubulosa Schrenk (Hook) f.II การแยกตัวและโครงสร้างของ phenylethanoid glycoside ใหม่และ neolignan glycoside ใหม่ เคมี Pharm Bull 1990; 38: 1927–1930.
6. Yoshikawa M และคณะ Phenylethanoid oligoglycosides และ acylated oligosugars ที่มีกิจกรรม vasorelaxant จาก Cistanche tubulosa Bioorg Med Chem 2006; 14: 7468–7475.
7. Tu PF และคณะ การวิเคราะห์ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ของเฮอร์บาซิสแทนซ์โดย RP-HPLC เหยา Xue Xue เปา 1997; 32: 294–300.
8. Lei L และคณะ การควบคุมการเผาผลาญของ phenylethanoid glycosides จาก Herba cistanches ในทางเดินอาหารของสุนัข เหยา Xue Xue เปา 2001; 36: 432–435.
9. Geng X และคณะ ผลกระทบต่อระบบประสาทของ echinacoside ในรูปแบบ MPTP ของหนูเมาส์ของโรคพาร์กินสัน Eur J Pharmacol 2007; 564: 66–74.
10. โมริกาว่า T และคณะ Acylated phenylethanoid oligoglycosides ที่มีฤทธิ์ปกป้องตับจากพืชทะเลทราย Cistanche tubulosa Bioorg Med Chem 2010; 18: 1882–1890.
11. Paola RD และคณะ ผลของ verbascoside ที่ทำให้บริสุทธิ์ด้วยเทคโนโลยีชีวภาพโดยการเพาะเลี้ยงเซลล์พืช syringa Vulgaris ในรูปแบบหนูของโรคปริทันต์อักเสบ เจ Pharm Pharmacol 2011; 63: 707–717.
12. Wu YT และคณะ การหาค่าแอคทีโอไซด์ใน Cistanche deserticola และ Boschniakia rossica และเภสัชจลนศาสตร์ในหนูที่เคลื่อนไหวอย่างอิสระโดยใช้ LC-MS/MS J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2006; 844: 89–95.
13. Matthias A และคณะ การศึกษาการซึมผ่านของอัลคิลลาไมด์และคอนจูเกตกรดคาเฟอีนจากอิชินาเซียโดยใช้แบบจำลองเซลล์โมโนเลเยอร์ caco-2 J Clin Pharm Therapeut 2004; 29: 7–13.
14. เจียซีและคณะ การหาค่าอีไคนาโคไซด์ในซีรัมของหนูโดยวิธีโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงแบบย้อนกลับเฟสที่มีการตรวจหาอัลตราไวโอเลตและการประยุกต์ใช้กับเภสัชจลนศาสตร์และการดูดซึม เจ Chromatogr 2006; 844: 308–313.
15. พระคาร์ดินัลเอและคณะ เวอร์บาสโคไซด์จากน้ำโรงสีมะกอก: การประเมินความสามารถในการเข้าถึงทางชีวภาพและการดูดซึมในลำไส้โดยใช้ระบบแบบจำลองการย่อยอาหารในหลอดทดลอง/caco-2 เจ ฟู้ด วิทย์ 2011; 176: H48–H54.
16. เจียซีและคณะ เมแทบอลิซึมของอิไคนาโคไซด์ซึ่งเป็นสารต้านอนุมูลอิสระที่ดีในหนู: การแยกและการระบุสารเมตาโบไลต์ของทางเดินน้ำดี การกำจัด Metab ของยา 2009; 37: 431–438.
17. Najar IA และคณะ การปรับกิจกรรม P-glycoprotein ATPase โดยองค์ประกอบพืชบางชนิด Phytother Res 2009; 24: 454–458.
18. Walgren RA และคณะ การไหลออกของสารฟลาโวนอยด์ เควอซิทิน 4′-เบตา-กลูโคไซด์ในอาหารผ่านเซลล์คาโค่ในลำไส้ของมนุษย์-2ชั้นเดียวโดยโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับการดื้อยาหลายขนานส่วนปลาย-2 เจ Pharmacol Exp เธอ 2000a; 294: 830–836.
19. Walgren RA และคณะ การดูดซึมระดับเซลล์ของอาหารฟลาโวนอยด์ เควอซิติน 4′-เบตา-กลูโคซิเดสในอาหารโดยสารขนส่งกลูโคสที่ขึ้นกับโซเดียม SGLT1 เจ Pharmacol Exp เธอ 2000b; 294: 837–843.
20. มิฮาระ เค และคณะ การเผาผลาญอาหารผ่านลำไส้ครั้งแรกของ eperisone ในหนูแรท Pharm Res 2001; 18: 1131–1137.
21. Isacchi B และคณะ ฤทธิ์ลดไข้ของ verbascoside ในสองรูปแบบของอาการปวดเมื่อยตามระบบประสาท เจ Pharm Pharmacol 2011; 63: 594–601
22. คุก TJ และคณะ การซึมผ่านของลำไส้ของคลอร์ไพริฟอสโดยใช้วิธีการกระจายลำไส้ผ่านครั้งเดียวในหนูแรท พิษวิทยา 2546; 184: 125–133.
23. Kumar YS และคณะ P-ไกลโคโปรตีน-และไซโตโครม P-450-อันตรกิริยาระหว่างยาสมุนไพรที่เป็นสื่อกลาง ยา Metabol Drug Interact 2010; 25: 3–16.
24. Walle สหราชอาณาจักรและคณะ การขนส่งเจนิสไตน์-7-กลูโคไซด์โดยเซลล์ CACO ในลำไส้ของมนุษย์-2: บทบาทที่เป็นไปได้สำหรับ MRP2 Res ชุมชน Mol Pathol Pharmacol 1999; 103: 45–56.
25. อิโต้ เค และคณะ การแสดงออกของพื้นผิวด้านบน/ด้านล่างของตัวขนส่งยาและบทบาทในการขนส่งยาที่เป็นพาหะ Pharm Res 2005; 22: 1559–1577.
26. Laitinen L et al. การเพาะเลี้ยงเซลล์ Caco-2 ในการประเมินการดูดซึมในลำไส้: ผลของยาบางตัวที่ใช้ร่วมกับยาและสารประกอบตามธรรมชาติในเมทริกซ์ทางชีววิทยา (University of Helsinki, Finland, 2006) Academic Dissertation, pp. 1–66.
27. Scambia G และคณะ เควอซิทินกระตุ้นผลของ adriamycin ในเซลล์มะเร็งเต้านมของมนุษย์ MCF-7 ที่ดื้อต่อยาหลายชนิด: P-glycoprotein เป็นเป้าหมายที่เป็นไปได้ เคมีบำบัดมะเร็ง Pharmacol 1994; 34: 459–464.
28. ชอย DH และคณะ ผลของไมริซิติน สารต้านอนุมูลอิสระต่อเภสัชจลนศาสตร์ของโลซาร์แทนและสารออกฤทธิ์ EXP-3174 ในหนู: บทบาทที่เป็นไปได้ของไซโตโครม P450 3A4, ไซโตโครม P450 2C9 และ P- การยับยั้งไกลโคโปรตีนโดยไมริซิติน เจ Pharm Pharmacol 2010; 62: 908–914.
29. Tanino T และคณะ Paclitaxel-2′-เอทิลคาร์บอเนต prodrug สามารถหลีกเลี่ยงการไหลออกของเซลล์ที่มี P-glycoprotein-mediated เพื่อเพิ่มความเป็นพิษต่อเซลล์ของยา Pharm Res 2007; 24: 555–565.
30. Hollman PC และคณะ การดูดซึมของ quercetin glycosides และ quercetin ในอาหารของอาสาสมัคร ileostomy ที่มีสุขภาพดี Am J Clin Nutr 1995; 62: 1276–1282.
31. Kellett GL และคณะ ส่วนประกอบที่กระจายตัวของการดูดซึมกลูโคสในลำไส้เป็นสื่อกลางโดยการจัดหา GLUT2 ที่เหนี่ยวนำให้เกิดกลูโคสไปยังเมมเบรนของบอร์ดแปรง ไบโอเคม เจ 2000; 350: 155–162.
32. เรื่อง K และคณะ การคัดแยกโปรตีนจากเยื่อหุ้มเซลล์ภายในร่างกายเกิดขึ้นจากสองตำแหน่งในเซลล์เยื่อบุผิวในลำไส้ของมนุษย์ที่เพาะเลี้ยง (Caco-2) เซลล์ 1990; 60: 429–437.
33. Mahraoui L et al. การมีอยู่และการแสดงออกที่แตกต่างกันของ SGLT1, GLUT1, GLUT2, GLUT3 และ GLUT5 hexose transporter mRNAs ในสำเนาพันธุ์ของเซลล์ Caco-2 ที่เกี่ยวข้องกับการเจริญเติบโตของเซลล์และการบริโภคกลูโคส ไบโอเคม เจ 1994; 298: 629–633.
34. Mesonero J และคณะ การแสดงออกที่ขึ้นกับน้ำตาลของสารขนส่งฟรุกโตส GLUT 5 ในเซลล์ Cac-2 ไบโอเคม เจ 1995; 312: 757–762.
35. Walgren RA และคณะ การขนส่งเควอซิทินและกลูโคไซด์ผ่านเซลล์ Caco-2 ของเยื่อบุผิวในลำไส้ของมนุษย์ Biochem Pharmacol 1998; 55: 1721–1727.
36. Yoshikawa T และคณะ การแสดงออกเปรียบเทียบของสารขนส่งเฮกโซส (SGLT1, GLUT1, GLUT2 และ GLUT5) ทั่วทางเดินอาหารของหนูเมาส์ ฮิสโตเคม เซลล์ ไบโอล 2011; 135: 183–194.
37. Funes L et al. ผลของ verbascoside ซึ่งเป็นฟีนิลโพรพานอยด์ไกลโคไซด์จากเลมอนเวอร์บีน่า ต่อเยื่อหุ้มแบบจำลองฟอสโฟลิปิด เคมีฟิสิกส์ไขมัน 2010; 163: 190–199.
38. Neilson AP และคณะ อิทธิพลขององค์ประกอบเมทริกซ์ช็อกโกแลตต่อรสโกโก้-3-การเข้าถึงทางชีวภาพในหลอดทดลองและการดูดซึมในมนุษย์ เจ Agric Food Chem 2009; 57: 9418–9426.
39. Gao S และคณะ ปริมาณฟีนอลิกที่แปรผันสูงในผลิตภัณฑ์สาโทเซนต์จอห์นส่งผลต่อการขนส่งในแบบจำลองเซลล์ Caco-2 ในลำไส้ของมนุษย์: เหตุผลทางเภสัชกรรมและชีวเภสัชภัณฑ์สำหรับการกำหนดมาตรฐานผลิตภัณฑ์ เจ Agric อาหารเคมี 2010; 58: 6650–6659
40. Schramm DD และคณะ ผลของอาหารต่อการดูดซึมและเภสัชจลนศาสตร์ของโกโก้ฟลาโวนอล วิทย์ชีวิต 2003; 73: 857–869.
41. Laurent C และคณะ เมทริกซ์ไวน์ปลอดสารเอทานอลและโพลีฟีนอลกระตุ้นการสร้างความแตกต่างของเซลล์ Caco-2 ในลำไส้ของมนุษย์ อิทธิพลของความสัมพันธ์กับสารสกัดจากเมล็ดองุ่นที่อุดมด้วยโพรไซยานิดิน เจ Agric Food Chem 2005; 53: 5541–5548.
42. Artursson P และคณะ ความสัมพันธ์ระหว่างการดูดซึมยาในช่องปากในมนุษย์และสัมประสิทธิ์การซึมผ่านของยาที่เห็นได้ชัดในเซลล์เยื่อบุผิวภายในของมนุษย์ (Caco-2) ชุมชน Biochem Biophys Res 1991; 175: 880–885.
43. Crespy V และคณะ การเปรียบเทียบการดูดซึมของเควอซิทิน ฟลอเรติน และกลูโคไซด์ในหนูในลำไส้ เจ Nutr 2001a; 131: 2109–2114.
44. Crespy V และคณะ การดูดซึมของ phloretin และ phloridzin ในหนูทดลอง เจ Nutr 2001b; 131: 3227–3230.