Pentraxin-3-mediated Complement Activation ในรูปแบบสุกรของภาวะไตขาดเลือด/การบาดเจ็บซ้ำ

ติดต่อ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 อีเมล:audrey.hu@wecistanche.com

Chiara Divella และคณะ

บทคัดย่อ

เพนตราซินเป็นตระกูลของโมเลกุลการจดจำรูปแบบที่ได้รับการอนุรักษ์โดยวิวัฒนาการ โดยมีบทบาทสำคัญในภูมิคุ้มกันและการอักเสบโดยกำเนิด เช่น ออพโซไนเซชันของเชื้อโรคในระหว่างการติดเชื้อแบคทีเรียและไวรัส โดยเฉพาะอย่างยิ่ง Pentraxin 3 (PTX3) แบบยาวได้รับการแสดงเพื่อควบคุมหลายแง่มุมของการอักเสบของหลอดเลือดและเนื้อเยื่อในระหว่างการปลูกถ่ายอวัยวะที่เป็นของแข็ง

การศึกษาของเราตรวจสอบบทบาทของ PTX3 เป็นโมดูเลเตอร์ที่เป็นไปได้ของการกระตุ้น Complement ในรูปแบบสุกรของการบาดเจ็บของไต/การกลับเป็นเลือด (I/R) เราแสดงให้เห็นว่าสิ่งสะสม PTX3 ในระยะเริ่มต้นที่เหนี่ยวนำให้เกิดการบาดเจ็บที่ระดับเส้นเลือดฝอยในช่องท้องและไต กล้องจุลทรรศน์สแกนด้วยเลเซอร์คอนโฟคอลเผยให้เห็นการสะสมของ PTX3 ร่วมกับ CD31 บวกกับเซลล์บุผนังหลอดเลือด นอกจากนี้ PTX3 ยังเกี่ยวข้องกับมาโครฟาจที่แทรกซึม (CD163), เซลล์เดนไดรต์ (SWC3a) และมัยโอไฟโบรบลาสต์ (FSP1) โดยเฉพาะอย่างยิ่ง เราแสดงให้เห็นอย่างชัดเจนถึงการกระตุ้นด้วย PTX3-สื่อกลางของวิถีแบบคลาสสิก (C1q เป็นสื่อกลาง) และเลคติน (MBL-mediated) ของ Complement สิ่งที่น่าสนใจคือ PTX3 ที่สะสมอยู่ร่วมกับการกระตุ้นของ terminal Complement complex (C5b-9) บนเซลล์บุผนังหลอดเลือด ซึ่งบ่งชี้ว่า PTX3-การกระตุ้นส่วนเติมเต็มที่อาศัยสื่อกลางเกิดขึ้นที่ระดับหลอดเลือดในไตเป็นส่วนใหญ่ โดยสรุป ข้อมูลเหล่านี้บ่งชี้ว่า PTX3 อาจเป็นเป้าหมายในการรักษาที่มีศักยภาพในการป้องกันการบาดเจ็บของ I/R ที่เกิดจากส่วนประกอบ

ติดต่อกับ:Giuseppe Castellano

คำสำคัญ:ภาวะขาดเลือดขาดเลือด/การบาดเจ็บซ้ำ, ระบบเสริม, เพนตราซิน 3,ไต, ทางเดินคลาสสิก

Cistanche tubulosa ป้องกันโรคไต คลิกที่นี่เพื่อรับตัวอย่าง

การแนะนำ

Ischemia-reperfusion (I/R) การบาดเจ็บเป็นสาเหตุสำคัญของภาวะเฉียบพลันไตบาดเจ็บหลังการปลูกถ่ายและมีลักษณะการเปิดใช้งานที่สำคัญของระบบเสริม [1, 2] ในสถานการณ์สมมตินี้ เซลล์บุผนังหลอดเลือด (EC) มีบทบาทสำคัญในการซ่อมแซมที่ไม่เหมาะสมหลังจาก I/R ซึ่งนำไปสู่การเกิดพังผืดในระยะเริ่มต้นโดยการเปลี่ยนแปลงของเยื่อบุผนังหลอดเลือดเป็นเยื่อหุ้มเซลล์ (EndMT) [3] ในระหว่างระยะการกลับเป็นซ้ำ Complement จะควบคุมกระบวนการทางภูมิคุ้มกันและการอักเสบ ทำให้เกิดโรคภูมิคุ้มกันและการอักเสบต่างๆ [2–5] องค์ประกอบที่จำเป็นอื่น ๆ ของแขนควบคุมร่างกายของระบบภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาตินั้นเป็นตัวแทนของเพนตราซินซึ่งคิดว่ามีบทบาทสำคัญในชีววิทยาของหลอดเลือด [6]

Pentraxins เป็นตระกูลของโปรตีนที่ละลายน้ำได้หลายชนิด [6] ซึ่งถูกจำแนกออกเป็นตระกูลสั้นและยาวตามโครงสร้างของพวกมัน [7] โปรตีนที่ได้รับการอนุรักษ์โดยวิวัฒนาการเหล่านี้เป็นเอฟเฟกเตอร์ระยะเฉียบพลัน ซึ่งทำหน้าที่เป็นเซ็นเซอร์สำหรับการเริ่มต้นการอักเสบและเพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็วในพลาสมาระหว่างการติดเชื้อ [8] เพนตราซิน 3 แบบยาว (PTX3) เป็นโมเลกุลการจดจำรูปแบบที่ละลายน้ำได้ซึ่งมีความสำคัญต่อการป้องกันภูมิคุ้มกันโดยกำเนิด และสามารถกระตุ้นระบบเสริม [9–11]

โดยเฉพาะอย่างยิ่ง PTX3 กระตุ้นการสั่งงานวิถีแบบคลาสสิกและแบบเลคตินโดยผูกมัดกับ C1q, MBL, Ficolin-2 และสามารถส่งผลต่อวิถีทางเลือกผ่านทาง CFH [10]

ตรงกันข้ามกับเพนตราซินที่ผลิตโดยตับในกระแสเลือด (เช่น CRP) PTX3 สามารถถูกปลดปล่อยโดยเซลล์ที่อาศัยอยู่ภายในบริเวณที่เกิดการอักเสบ เช่น จากเซลล์ฟาโกไซต์ที่มีนิวเคลียสเดียว เซลล์เดนไดรต์ ไฟโบรบลาสต์ และ EC [9] ที่ออกฤทธิ์ในลักษณะพาราไครน์ [13]. PTX3 ยังถูกจัดเก็บในรูปแบบสำเร็จรูปในนิวโทรฟิล ซึ่งแปลเป็นภาษาท้องถิ่นในแกรนูลจำเพาะ และหลั่งออกมาเพื่อตอบสนองต่อการรับรู้ของมอยอิตีจุลินทรีย์ [14] ใน EC การแสดงออกของ PTX3 เกิดขึ้นโดยทันทีโดย TNF- และ IL-1 ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงจากฟีโนไทป์ต้านการอักเสบที่สงบนิ่ง ไปเป็นสถานะโปรโคแอกกูแลนต์และโปรอักเสบ ดังนั้นจึงควบคุมการทำงานของ microvascular อย่างเข้มงวด [7, 8 ]. ด้วยเหตุผลดังกล่าว ระดับ PTX3 จึงถูกอธิบายว่าเป็นเรื้อรังไตโรคการเพิ่มขึ้นของระดับโปรตีนของ PTX3 มีความสัมพันธ์กับการลดลงของ GFR และภาวะแทรกซ้อนของหัวใจและหลอดเลือด อย่างไรก็ตาม ยังไม่ค่อยมีใครรู้จักบทบาทของ PTX3 ในการตั้งค่าในระยะเริ่มต้นเนื่องจาก I/R แบบเฉียบพลันไตบาดเจ็บ [15, 16].

บทบาทของ PTX3 ในโรคไตอักเสบนั้นมีอยู่ 2 ด้าน จากด้านหนึ่ง โปรตีนสามารถกระตุ้นเส้นทางคลาสสิกและเลคตินที่ส่งเสริมการอักเสบและการบาดเจ็บในระยะเริ่มต้น [10-12] ในอีกด้านหนึ่ง โดเมนปลาย N ของ PTX3 ที่มอดูเลตการเปิดใช้งานคอมพลีเมนต์ที่ลดทอนการจัดหาลิวโคไซต์และยับยั้งการเกิดพังผืดของคั่นระหว่างหน้าในการบาดเจ็บที่ไตเฉียบพลันซึ่งส่งเสริมการซ่อมแซมเนื้อเยื่อ [17–20]

อาหารเสริมมีบทบาทสำคัญในพยาธิสรีรวิทยาของการบาดเจ็บที่เกิดจาก I/R เฉียบพลันไตบาดเจ็บ[21, 22]. ในรูปแบบสุกรของการบาดเจ็บของ I/R ของไต เราแสดงให้เห็นบทบาทสำคัญของการกระตุ้นระบบเสริมในการกระตุ้น EndMT และการเกิดพังผืดในระยะแรก โดยมีส่วนร่วมของทั้งทางเดินแบบคลาสสิกและแบบเลคติน [23] ยิ่งกว่านั้น เราแสดงให้เห็นว่าการยับยั้งทางการรักษาของวิถีการเติมเต็มเหล่านี้โดยลูกผสม C1-INH (rhC1INH) ทำให้เกิดการลดลงอย่างมีนัยสำคัญในการสะสมของส่วนเติมเต็ม ด้วยการจัดหาเซลล์อักเสบที่แทรกซึมและความเสียหายของเนื้อเยื่อท่อน้ำอสุจิลดลง [23] ผลลัพธ์เหล่านี้ได้รับการยืนยันโดย Delpech PO et al [24]; การมอดูเลตที่มีนัยสำคัญใน C1q, MASP และ C4d glomerular และการสะสมของท่อถูกประเมินหลังจาก 30 นาทีหลังการเกิดซ้ำซึ่งบ่งชี้ถึงบทบาทสำคัญของ C1-INH ในการต่อต้านวิถีคลาสสิกและเลกติน

ในการศึกษานี้ เราตรวจสอบการมีส่วนร่วมที่เป็นไปได้ของ PTX3 ในการไกล่เกลี่ยการกระตุ้น Complement ในระยะเริ่มต้นในการบาดเจ็บของ I/R ของไต โดยระบุลักษณะแหล่งที่มาของเซลล์ต่างๆ ของ PTX3

ผลลัพธ์

PTX3 แสดงออกโดยเซลล์บุผนังหลอดเลือดและเซลล์แทรกซึมของภูมิคุ้มกันในแบบจำลองสุกรของการบาดเจ็บของ I/R

อันดับแรก เราตรวจสอบการมีอยู่ของ PTX3 ในแบบจำลองสุกรของการบาดเจ็บที่ไตที่เกิดจาก I/R ที่อบอุ่น เราสังเกตเห็นสิ่งสะสม PTX3 ที่จำกัดมากในเนื้อเยื่อปกติ (รูปที่ 1A) การบาดเจ็บที่ I/R ทำให้เกิดการสะสมของ PTX3 แบบกระจายแล้วที่ 15 นาทีหลังจากการเกิดซ้ำ (รูปที่ 1B, 1C) ในบริเวณ tubulointerstitial (รูปที่ 1E) ที่เส้นเลือดฝอยในช่องท้อง (รูปที่ 1D; ลูกศร) และที่ระดับไต (รูปที่ 1D) สิ่งสะสม PTX3 ยังคงตรวจพบได้ 1 ชั่วโมงหลังจากการคืนสภาพที่ระดับของเส้นเลือดฝอยในช่องท้อง (รูปที่ 1G) ในงานก่อนหน้านี้ของเรา [23] เราแสดงให้เห็นว่าลักษณะสำคัญของการบาดเจ็บของ I/R คือการตายของเซลล์เยื่อบุผิวแบบท่อและการสรรหาเซลล์อักเสบที่แทรกซึมเข้าไป เช่น โมโนไซต์ เซลล์เดนไดรต์ และลิมโฟไซต์ อย่างไรก็ตาม โดยการประเมินทางจุลพยาธิวิทยาเป็นประจำ (รูปที่ 1) เราแสดงให้เห็นว่ามีภาวะขาดเลือดขาดเลือดที่อบอุ่น 30 นาที ตามด้วยความเสียหายระหว่างคั่นระหว่างหน้าของท่อไตที่เกิดจากการเกิดซ้ำ 15 นาที โดยมีลักษณะเฉพาะคือความแออัดของเส้นเลือดฝอยที่ใหญ่ขึ้นและการโฟกัสของไซโทพลาสซึมของเยื่อบุผิวของท่อไตเมื่อเปรียบเทียบกับฐาน สภาพ.

เพื่อระบุลักษณะเฉพาะของการแปลเป็นภาษาท้องถิ่นของตะกอน PTX3 และประเมินผลกระทบที่อาจเกิดขึ้นในการปรับการตอบสนองต่อการอักเสบและการบาดเจ็บ เราทำการวิเคราะห์ด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบสร้างภูมิคุ้มกันสองครั้งและแบบคอนโฟคอล ตรวจพบการแสดงออกของโปรตีน PTX3 ใน EC ส่วนใหญ่ที่ระดับเส้นเลือดฝอยในช่องท้อง (รูปที่ 2A) และไต (รูปที่ 2B) 15 นาทีหลังจากการหลอมรวมกลับ

เป็นที่ทราบกันดีว่าการบาดเจ็บของ I/R มีลักษณะเฉพาะโดยการกระตุ้นการตอบสนองของภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติและการปรับตัวที่เพิ่มขึ้น รวมถึงการลักลอบค้าเซลล์ที่อักเสบไปยังอวัยวะที่เป็นโรค ซึ่งทำให้อาการบาดเจ็บรุนแรงขึ้นอีกผ่านทางเซลล์ภูมิคุ้มกันและระบบเสริม [25] ในแบบจำลองสุกรของเรา เรายังสังเกตด้วยว่า 15 นาทีหลังจากการให้เลือดกลับคืนสู่สภาพเดิม การแทรกซึมที่มีการอักเสบหนาแน่นซึ่งประกอบด้วยมาโครฟาจและเซลล์เดนไดรต์เป็นส่วนใหญ่ในพื้นที่ทิวบูล-คั่นระหว่างหน้า เราพบว่าเซลล์ที่สร้างแอนติเจนทั้งสองนี้มีลักษณะเฉพาะด้วยการแสดงออก PTX3 ที่เพิ่มขึ้นเมื่อเปรียบเทียบกับ T0 เนื่องจากเราสังเกตเห็นจำนวน CD163 บวก /PTX3 plus ที่เพิ่มขึ้น (รูปที่ 2E, 2F, 2K) และ SWC3a plus /PTX3 plus (รูปที่ 2G, 2H, 2L) เซลล์ที่ระดับคั่นระหว่างหน้าแบบทูบูลที่ T15

นิพจน์ PTX3 สามารถส่งผลต่อ EndMT ในการบาดเจ็บของ I/R

ในการสังเกตก่อนหน้านี้ เราแสดงให้เห็นว่าการบาดเจ็บของ I/R มีส่วนรับผิดชอบต่อ EndMT [26, 27] โดยมีลักษณะเฉพาะโดยการได้มาซึ่งฟีโนไทป์ของเยื่อหุ้มเซลล์โดย EC โดยสูญเสียเครื่องหมายบุผนังหลอดเลือดที่เฉพาะเจาะจงและการเพิ่มของเครื่องหมายมีเซนไคม์ เช่น ไฟโบรบลาสต์ที่จำเพาะ โปรตีน 1 (FSP-1), neuronal cadherin (N-cadherin) และ alpha-smooth muscle actin (alpha-SMA) ดังนั้นเราจึงตรวจสอบว่าการแสดงออก PTX3 โดย EC อาจส่งผลต่อกระบวนการนี้หรือไม่ ตามที่คาดไว้ เมื่อเราตรวจสอบนิพจน์ alpha-SMA ในฐานะเครื่องหมายของ myofibroblast ที่ถูกกระตุ้น เราไม่พบการโลคัลไลเซชันร่วมกันระหว่าง alpha-SMA และ PTX3 (รูปที่ 2C, 2D) ในทางกลับกัน เราสังเกตเห็นการเพิ่มขึ้นของ tubulointerstitial FSP1 plus /PTX3 บวก myofibroblasts ตลอดระยะเวลาการสังเกต (รูปที่ 2K–2M)

เงินฝาก PTX3 เกี่ยวข้องกับการเปิดใช้งานระบบเสริม

สุดท้าย เราได้ตรวจสอบว่าเงินฝาก PTX3 เกี่ยวข้องกับการเปิดใช้งาน Complement หรือไม่ ที่จริงแล้ว เช่นเดียวกับส่วนประกอบอื่น ๆ ของตระกูลเพนตราซิน PTX3 สามารถควบคุมการเปิดใช้งานเส้นทางเสริมแบบคลาสสิก [7] เพื่อกำหนดความสัมพันธ์ระหว่างการเปิดใช้งาน PTX3 และส่วนประกอบเสริม เราได้ดำเนินการอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์สองป้ายเพื่อประเมินการแสดงออกของ PTX3 และเทอร์มินัล สารเชิงซ้อน C5b-9 โดยใช้แอนติบอดีที่ต่อต้าน C9-นีโอพิโทปของ C9- เราสังเกตเห็นการโลคัลไลเซชันร่วมกันอย่างมีนัยสำคัญของเงินฝาก PTX3 และ C5b-9 (รูปที่ 3A, 3B) Complement terminal complex ถูกแปลเป็นภาษาท้องถิ่นที่ระดับ peritubular เช่นเดียวกับภายในเส้นเลือดฝอยในช่องท้องพร้อมกับชั้นเซลล์บุผนังหลอดเลือด ตามที่เราแสดงให้เห็นก่อนหน้านี้ [23, 28] เนื่องจาก PTX3 สามารถเปิดใช้งานระบบ Complement ผ่านทางเดินแบบคลาสสิกและแบบเลคติน เราจึงประเมินการสะสมของ C1q และ MBL ในเนื้อเยื่อของไต ที่น่าสนใจคือเงินฝาก C1q (รูปที่ 3E, 3F) และ MBL (รูปที่ 3C, 3D) ส่วนใหญ่พบที่ระดับโฆษณาคั่นระหว่างหน้าและเส้นเลือดฝอย (รูปที่ 3C ถึง 3F) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [23] และรวมกลุ่มกับเงินฝาก PTX3

C1-สารยับยั้งขัดขวางการจับ PTX3 บนเซลล์บุผนังหลอดเลือด

ในงานก่อนหน้านี้ของเรา [23] เราแสดงให้เห็นว่าการบริหาร C1-inhibitor นำไปสู่การลดลงอย่างมากในการสะสมส่วนเติมเต็ม โดยลดการจัดหาเซลล์อักเสบที่แทรกซึมและความเสียหายของ tubulointerstitial ดังนั้นเราจึงตรวจสอบระดับการแสดงออกของ PTX3 ในสัตว์ที่ได้รับการบำบัดด้วย rhC1-INH เราพบว่าการให้สารยับยั้ง C1-ลดการสะสมของ PTX3 ที่เส้นเลือดฝอยในช่องท้องและระดับคั่นระหว่างหน้าหลังจาก 15 นาทีหลังการให้เลือดซ้ำ (รูปที่ 4A)

นอกจากนี้ เพื่อสนับสนุนสมมติฐานที่ว่าการลดการสะสมของ PTX3 ในสัตว์ที่ได้รับการบำบัดด้วย rhC1-INH มีความเกี่ยวข้องกับการยับยั้งความเสียหายของบุผนังหลอดเลือด เราทำการทดลองในหลอดทดลอง และเราประเมินการจับ rhC1-INH และ PTX3 บน EC ที่เพาะเลี้ยงภายใต้สภาวะปกติหรือในที่ที่มีความเครียดของเซลล์ (รูปที่ 4B) การวิเคราะห์ FACS แสดงให้เห็นว่า EC ในสภาวะปกติไม่จับทั้ง rhC1-INH และ PTX3 จากการศึกษาก่อนหน้านี้ของเรา [26] เราสังเกตพบว่าการรวมเซลล์ของ rhC1-INH บน H2O2- EC ที่กระตุ้นเพิ่มขึ้นเมื่อเปรียบเทียบกับสภาวะพื้นฐาน นอกจากนี้ ในกรณีที่ไม่มี rhC1-INH, PTX3 สามารถจับ EC ที่ถูกกระตุ้นได้ น่าสนใจ เมื่อ H2O2- EC ที่ถูกกระตุ้นถูกฟักด้วย PTX3 และ rhC1-INH เราสังเกตว่า C1INH สามารถปกป้อง EC ได้เมื่อขัดขวางการจับ PTX3

อภิปรายผล

ในการศึกษานี้ เราแสดงให้เห็นถึงการสะสมของ PTX3 ในระยะแรกของการบาดเจ็บของ I/R ของไต และการมีส่วนร่วมที่เป็นไปได้ในการพัฒนา EndMT ที่น่าสนใจ เราพบว่าการเปิดใช้ PTX3-mediated Complement เกิดขึ้นที่ระดับหลอดเลือดเป็นหลัก โดยเชื่อมโยงกับ C1q และ MBL ซึ่งเป็นโมเลกุลการจดจำของเส้นทางคลาสสิกและเลคตินของ Complement cascade

การบาดเจ็บของ I/R กระตุ้นการตอบสนองการอักเสบที่ทำเครื่องหมายไว้โดยแสดงคุณลักษณะโดยการกระตุ้นเสริม อนุมูลอิสระและการผลิตไซโตไคน์ที่ก่อให้เกิดการอักเสบ ส่งผลให้เกิดการกระตุ้นของเยื่อบุผนังหลอดเลือดและเม็ดเลือดขาวส่วนปลาย [29, 30] ในระหว่างการบาดเจ็บของ I/R การเปิดใช้งาน Complement จะนำไปสู่การสะสมส่วนประกอบเสริมบนเมมเบรนพื้นผิวของ EC ที่เสียหายและผิดปกติ โดยมีการสร้าง anaphylatoxins ขึ้นพร้อม ๆ กันและการขยายตัวของกระบวนการอักเสบ [31] ในระหว่างการอักเสบ PTX3 จะเพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็วและอาจมีบทบาทสำคัญในการปรับการตอบสนองของบุผนังหลอดเลือด อันที่จริง PTX3 ได้รับการระบุว่าเป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพของความผิดปกติของบุผนังหลอดเลือดในโรคต่างๆ รวมถึงโรคเรื้อรังไตโรค ครรภ์เป็นพิษ และโรคหลอดเลือดหลายชนิด [7, 16, 17, 32] นอกจากนี้เรายังแสดงให้เห็นว่า PTX3 เกี่ยวข้องกับภาวะแทรกซ้อนของหลอดเลือดอื่นๆ เช่น ความล้มเหลวของทวารหลอดเลือดในผู้ป่วยไตเทียม [33] การสังเกตเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า PTX3 อาจเป็นสะพานเชื่อมระหว่างการตอบสนองต่อการอักเสบและความผิดปกติของเยื่อบุผนังหลอดเลือด [34] ตามการศึกษาเหล่านี้ เราสังเกตพบการสะสมของ PTX3 ที่ระดับบุผนังหลอดเลือดแล้วหลังจากผ่านไป 15 นาทีหลังจากการส่งกลับคืน (รูปที่ 2A, 2B) ผลลัพธ์ของเรายังแสดงให้เห็นด้วยว่าในระยะแรกของการบาดเจ็บของ I/R PTX3 colocalized ด้วยเครื่องหมาย myofibroblast, FSP-1 (รูปที่ 2I, 2J) แต่ไม่ใช่ด้วย alpha-SMA ซึ่งเป็นเครื่องหมายที่แสดงโดย myofibroblast ที่กระตุ้น (รูปที่ 2C 2D) เมื่อนำมารวมกัน ข้อมูลเหล่านี้อาจบ่งชี้ว่าความผิดปกติของบุผนังหลอดเลือดและกระบวนการ EndMT [35] ซึ่งสังเกตพบในสัตว์ I/R [26] เกิดขึ้นครั้งแรกใน EC ที่แสดง PTX3

ความเชื่อมโยงระหว่าง PTX3 กับเซลล์อักเสบเป็นที่ทราบกันดี ในบทความนี้ เราเน้นเป็นพิเศษเกี่ยวกับผลกระทบโดยธรรมชาติของ PTX3 ในการแทรกซึมของเม็ดเลือดขาวที่เป็นแหล่งสำคัญของ PTX3 [36] โดยเฉพาะอย่างยิ่ง เราพบมาโครฟาจและเซลล์เดนไดรต์ หลังจาก 15 นาทีหลังจากการส่งกลับ ซึ่งแสดงระดับ PTX3 ที่สูงขึ้น (รูปที่ 2E ถึง 2H) ข้อมูลเหล่านี้สอดคล้องกับหลักฐานที่เพิ่มขึ้นซึ่งชี้ให้เห็นถึงบทบาทที่เกี่ยวข้องกับภูมิคุ้มกันโดยกำเนิดในการไกล่เกลี่ยความเสียหายในระยะเริ่มต้นในการบาดเจ็บของ I/R [23] การกระตุ้น Complement ในเนื้อเยื่อไตในระยะเริ่มต้นหลังจากการบาดเจ็บของ I/R นำไปสู่การสร้างตัวกลางการอักเสบหลายตัวที่เพิ่มการสรรหาเซลล์ภูมิคุ้มกัน [21, 23, 37, 38] การศึกษาล่าสุดระบุว่า PTX3 เป็นหนึ่งในองค์ประกอบหลักของเครือข่ายที่เตรียมการตอบสนองต่อการอักเสบที่เกิดจากการบาดเจ็บของ I/R [39] ในแบบจำลองการทดลองต่างๆ ของการบาดเจ็บที่ I/R PTX3 สามารถแสดงบทบาทที่ตรงกันข้ามกับเนื้อเยื่อเฉพาะ [40, 41] การผลิต PTX3 ในระยะแรกเกี่ยวข้องกับความเสียหายของไต เนื่องจากจะกระตุ้นการแสดงออกของโมเลกุลการยึดเกาะของเยื่อบุผนังหลอดเลือดในระยะแรกและคีโมไคน์ที่เร่งการตอบสนองต่อการอักเสบที่ไม่เหมาะสมเฉพาะที่

ในทางตรงกันข้าม การผลิต PTX3 ในท้องถิ่นเป็นเวลานานจะช่วยป้องกันการอักเสบและการทำงานของอวัยวะที่มากเกินไป [41]

PTX3 เป็นโมดูเลเตอร์คาสเคดเสริม [9, 42]; ซึ่งสอดคล้องกับคุณสมบัติ pleiotropic ของ PTX3 ซึ่งบ่งชี้ถึงบทบาทคู่ของ PTX3 เป็นตัวปรับหรือขยายสัญญาณของการตอบสนองภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติ [39] เริ่มแรก PTX3 เปิดใช้งาน Complement โดยผูก C1q และ MBL [43]; อย่างไรก็ตาม การอักเสบที่เพิ่มขึ้นในระยะเริ่มต้นต้องจำกัดอยู่ที่พื้นที่เป้าหมาย ดังนั้น PTX3 โดยการคัดเลือกปัจจัย H หรือการยับยั้งการสร้างเส้นเลือดใหม่ ยังสามารถลดการตอบสนองต่อการอักเสบและเสริมการกระตุ้นที่ช่วยรักษาเนื้อเยื่อไตจากความเสียหายจากการอักเสบ [43] แม้ว่าการกระตุ้น Complement ใน I/R ในสัตว์ฟันแทะจะแปลเป็นภาษาท้องถิ่นเป็นส่วนใหญ่ที่ระดับ tubular [44] ในระหว่างระยะ reperfusion endothelium เป็นเป้าหมายหลักของสารก่อการอักเสบต่างๆ ซึ่งรวมถึงตัวกลางเสริม [2] ก่อนหน้านี้เราได้แสดงให้เห็นว่าในรูปแบบสุกรของการบาดเจ็บ I/R เช่นเดียวกับในผู้ป่วย DGF การกระตุ้นระบบ Complement เกิดขึ้นในระยะแรก บนเส้นเลือดฝอยในช่องท้อง ภายใน interstitium และบน glomerular endothelium [23] ข้อมูลของเราแสดงการโลคัลไลเซชันร่วมกันที่ชัดเจนของเงินฝาก C5b-9 บน PTX3 บวก EC หลังจาก 15 นาทีหลังการเกิดซ้ำ (รูปที่ 3A, 3B) ดังนั้น endothelium ของไตจึงดูเหมือนว่าจะเป็นตำแหน่งที่แพร่หลายของการกระตุ้นด้วย PTX3-mediated Complement ในระยะแรกของการบาดเจ็บ I/R ทั้งในสภาวะพรีคลินิกและทางคลินิก

ปฏิสัมพันธ์ของเพนตราซินกับ C1q และบทบาทในการกระตุ้นเส้นทางการเติมเต็มแบบคลาสสิกได้รับการอธิบายไว้อย่างดี [45–47] ในบริบทของการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติ PTX3 สามารถจับส่วนประกอบเสริมที่แตกต่างกันและปรับการเปิดใช้ Complement [43, 48] PTX3 เปิดใช้งาน Complement โดยการเชื่อม C1q [49] ผลลัพธ์ของเราในแบบจำลองสัตว์แสดงให้เห็นอย่างชัดเจนว่า PTX3 อาจเป็นสื่อกลางในการเปิดใช้งานเส้นทางแบบคลาสสิกโดยการโต้ตอบกับ C1q (รูปที่ 3E, 3F) นอกจากนี้ PTX3 ยังปรับเส้นทางเลคตินของส่วนประกอบดังแสดงในรูปที่ 3C, 3D MBL จับ PTX3 ผ่านโดเมนที่เหมือนคอลลาเจน [45] และคอมเพล็กซ์ MBL/PTX3 รับสมัคร C1q และกระตุ้นการสะสม C3 และ C4 บนพื้นผิวเซลล์เป้าหมาย

โดยรวมแล้ว ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นถึงบทบาทสำคัญของ PTX3 ในการไกล่เกลี่ยไตความเสียหายในการบาดเจ็บของ I/R ซึ่งอาจมีผลกระทบที่สำคัญสำหรับการรักษาที่เน้นการเสริมในการบาดเจ็บของ I/R ของไต

ในการศึกษาก่อนหน้าของเรา [26] เราตรวจสอบการมีส่วนร่วมของคอมพลีเมนต์ในการเป็นสื่อกลางในการกระตุ้น EC โดยใช้รูปแบบลูกผสมของ C1-INH ซึ่งเป็นตัวยับยั้งที่มีศักยภาพของโปรตีเอสของวิถีการเติมเต็มแบบคลาสสิกและเลกติน (C1r, C1 s, และ MASP2) ในรูปแบบสัตว์เดียวกัน เราแสดงให้เห็น (รูปที่ 4A) ว่าการยับยั้งการรักษาของทั้งสองวิถีโดย rhC1INH ลดการสะสมของ PTX3 ที่เส้นเลือดฝอยในช่องท้องและระดับคั่นระหว่างหน้าหลังจาก 15 นาทีหลังจากการให้เลือดกลับคืนสู่สภาพเดิม ข้อมูลเหล่านี้ยืนยันด้วยผลลัพธ์ในหลอดทดลองใน EC (รูปที่ 4B) ทำให้เราตั้งสมมติฐานว่า rhC1INH อาจป้องกัน EC ที่เสียหายเมื่อบล็อกการผูก PTX3 ในวรรณคดี มีหลักฐานเกี่ยวกับการจับของ C1-INH กับโมเลกุลการยึดเกาะของเยื่อบุผนังหลอดเลือด ซึ่งแสดงออกบนเอนโดทีเลียมที่ถูกกระตุ้น ซึ่งเรียกว่าซีเล็คติน โดยเฉพาะ P และ E-selectins [50, 51] การผูกมัดกับ EC นี้สามารถแทรกแซงปฏิสัมพันธ์ระหว่างบุผนังหลอดเลือดกับเม็ดเลือดขาวระหว่างการอักเสบ และแสดงถึงกลไกต้านการอักเสบที่สำคัญอีกประการหนึ่ง [50, 51] ดังนั้นเราจึงตั้งสมมติฐานว่า rh-C1INH สามารถจับ EC ที่ถูกกระตุ้นและเป็นสื่อกลางในการควบคุมในท้องถิ่นของการกระตุ้นส่วนเติมเต็มและกระบวนการอักเสบ ในการศึกษาก่อนหน้านี้ เราได้แสดงให้เห็นการมีส่วนร่วมของส่วนประกอบในการบาดเจ็บของ I/R และโรคไตวายเรื้อรังที่มีภูมิคุ้มกันอื่นๆ [38, 52–54] กลไกการเปิดใช้งาน Complement ในแบบจำลองสัตว์นี้อาจมีความหมายที่สำคัญสำหรับการตีความข้อมูลที่คาดหวังในการตั้งค่าของมนุษย์ เพื่อให้ประสบความสำเร็จในการพัฒนาวิธีการรักษาโดยมุ่งเป้าไปที่การออกฤทธิ์เสริม [36, 54] จำเป็นต้องสร้างความถูกต้องของข้อมูลสุกรให้สัมพันธ์กับสิ่งที่เกิดขึ้นในสถานการณ์ทางคลินิก เนื่องจากงานวิจัยนี้จำกัดเฉพาะการศึกษาเชิงสังเกต จึงจำเป็นต้องมีการทดลองเพิ่มเติมเพื่ออธิบายกลไกที่เชื่อมโยงถึงกันระหว่าง PTX3 และ Complement ที่อาจเน้นถึงกลยุทธ์การรักษาแบบใหม่ จากผลลัพธ์ข้างต้น ข้อมูลของเราสนับสนุนสมมติฐานที่ว่า PTX3 อาจควบคุมการบาดเจ็บของ I/R ที่เป็นสื่อกลางในหลายๆ แง่มุม ซึ่งแสดงถึงเป้าหมายการรักษาที่เป็นไปได้

วัสดุและวิธีการ

โมเดลหมูบาดเจ็บของไต I/R

แบบจำลองสัตว์ของการบาดเจ็บของ I/R ของไตได้รับการพัฒนาตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [23] หลังจากได้รับอนุมัติจากคณะกรรมการจริยธรรมของกระทรวงสาธารณสุขแล้ว สุกรขาวตัวใหญ่เพศเมียอายุ 4-เดือน (n=8, n=4 สำหรับกลุ่ม 20 กก.) ได้ดำเนินการ ขั้นตอนการผ่าตัดแบบเปิดทดลองภายใต้การดมยาสลบ สัตว์อดอาหารเป็นเวลา 24 ชั่วโมงก่อนการดมยาสลบ คลื่นไฟฟ้าหัวใจ อัตราการเต้นของหัวใจ ความอิ่มตัวของฮีโมโกลบินของออกซิเจน องค์ประกอบของก๊าซทางเดินหายใจ อัตราการหายใจ ปริมาณน้ำขึ้นน้ำลง ความดันทางเดินหายใจ ความดันโลหิตซิสโตลิก . หลอดเลือดแดงและหลอดเลือดดำของไตด้านซ้ายถูกแยกออกและหลอดเลือดถูกวางตำแหน่งรอบหลอดเลือดแดงของไตด้วยแคลมป์มุมฉาก ตรวจชิ้นเนื้อไตก่อนขาดเลือดขาดเลือด (T0) จากนั้นจึงเหนี่ยวนำให้เกิดเฟสขาดเลือด (30 นาที) โดยการดึงห่วงของหลอดเลือด จากนั้นทำการตรวจชิ้นเนื้อหลายครั้งที่ 15, 30 และ 60 นาทีหลังจากการให้เลือดกลับคืนสภาพเดิม สัตว์ถูกสังเวย 24 ชั่วโมงหลังการผ่าตัด ส่วนหนึ่งของชิ้นตรวจชิ้นเนื้อแต่ละชิ้นถูกแช่แข็งทันทีในอุณหภูมิการตัดที่เหมาะสม (Tissuetek, Pittsburgh, PA) และเก็บไว้ในไนโตรเจนเหลว อีกส่วนหนึ่งถูกตรึงในบัฟเฟอร์ฟอร์มาลิน (4 เปอร์เซ็นต์) เป็นเวลา 12 ชั่วโมง และฝังในพาราฟินโดยใช้กรรมวิธีมาตรฐาน

การศึกษาด้วยกล้องจุลทรรศน์

ตัวอย่างไตที่ฝังด้วยพาราฟินจากการตรวจชิ้นเนื้อไตถูกนำมาใช้สำหรับการย้อมสีทางเนื้อเยื่อวิทยาแบบธรรมดา (H&E, กรดเป็นระยะ-ชิฟฟ์) รูปภาพได้มาโดยอุปกรณ์ Aperio ScanScope CS2 (Aperio Technologies, Vista, CA, USA) Tubule-interstitial และ glomerular lesions ได้รับการประเมินโดยใช้การวิเคราะห์เชิงคุณภาพโดยผู้สังเกตการณ์สองคน (CD, MR) ซึ่งไม่ทราบที่มา

แอนติบอดี

แอนติบอดีหลักที่ใช้ในการศึกษานี้รู้จักแอนติเจนต่อไปนี้: PTX3 (MNB4: ต่อต้านโดเมน N-terminal PTX3 โดยตรง, Exira Life Sciences In., Larsen, Switzerland); CD163 (monocytes/macrophages, US Biological, Swampscott, แมสซาชูเซตส์); SWC3a (เซลล์เดนไดรต์, [55] 74-22-15A, BD Biosciences); FSP1 (โปรตีนจำเพาะไฟโบรบลาสต์ 1, Abcam, Cambridge, UK); แอกตินของกล้ามเนื้ออัลฟาเรียบ (Santa Cruz Biotechnology Inc.; Santa Cruz, CA, USA); C1q (R9/2, AbDSerotec; Kidlington สหราชอาณาจักร); MBL (3E7: ต่อต้านโดเมนการจดจำคาร์โบไฮเดรต MBL, เทคโนโลยีชีวภาพ Hycult, Uden, เนเธอร์แลนด์) และ C9 neoantigen (aE11, เทคโนโลยีชีวภาพ Hycult) ปฏิกิริยาข้ามได้รับการตรวจสอบโดยก่อนการบ่มแอนติบอดีจำเพาะ ก่อนการใช้งานด้วยเปปไทด์ของมนุษย์ที่ใช้ในการเลี้ยงพวกมัน การฟักไข่ก่อนการฟักจะยกเลิกการย้อมสีเฉพาะบนเนื้อเยื่อสุกร

อิมมูโนฟลูออเรสเซนต์เนื้อเยื่อและกล้องจุลทรรศน์สแกนด้วยเลเซอร์คอนโฟคอล

การกำหนดลักษณะเฉพาะและการกำหนดตำแหน่งของสัญญาณ PTX3 ถูกตรวจสอบบนเนื้อเยื่อที่ถูกแช่แข็งที่รวมอยู่ในอาหารเลี้ยงเชื้อ OCT (เนื้อเยื่อ-เต็ก) สไลด์ถูกฟักด้วยเซรั่มกระต่าย 5% เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 37 องศาเซลเซียส จากนั้นจึงบ่มสไลด์เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องด้วยแอนติบอดีจำเพาะ หลังจากล้างสามครั้งใน PBS แล้ว สไลด์ถูกบ่มด้วยแอนติบอดีทุติยภูมิที่เหมาะสม (Alexa Flour 488 และ 555, Molecular Probes, Eugene, OR) ทุกส่วนถูกย้อมทับด้วย TO-PRO-3 (Molecular Probes) กลุ่มควบคุมเชิงลบถูกเตรียมด้วยแอนติบอดีที่ไม่เกี่ยวข้อง วิเคราะห์ส่วนต่างๆ โดยใช้กล้องจุลทรรศน์สแกนด้วยเลเซอร์คอนโฟคอล Leica TCS SP2 (Leica, Wetzlar, Germany) จำนวนของเซลล์ที่แทรกซึมถูกวัดในฟิลด์/ส่วนกำลังสูง 10 แห่งเป็นอย่างน้อย (x630) โดยผู้สังเกตการณ์อิสระสองคนที่มองไม่เห็นที่มาของสไลด์ การนับครั้งสุดท้ายเป็นค่าเฉลี่ยของทั้งสองมาตรการ ไม่ว่าในกรณีใด ความแปรปรวนของผู้สังเกตการณ์ระหว่างกันจะสูงกว่า 20 เปอร์เซ็นต์

การเพาะเลี้ยงเซลล์และการวิเคราะห์โฟลว์ไซโตเมทรี

เซลล์บุผนังหลอดเลือดจากสายสะดือของมนุษย์ (HUVEC, EC) ถูกซื้อจาก American Type Culture Collection (มาตรฐาน ATCC-LGC, Sesto San Giovanni, Italy) EC เติบโตขึ้นในสื่อที่แนะนำของพวกเขาคือ EndoGro (เมอร์คมิลลิพอร์ ดาร์มสตัดท์ เยอรมนี) EC ถูกชุบที่ความหนาแน่น 1{{10}},000เซลล์/ซม2 และถูกกระตุ้นด้วยการบำบัด H2O2 (3 เปอร์เซ็นต์ , 1 ชั่วโมง) จากนั้น EC พื้นฐานและที่ถูกกระตุ้นถูกล้างสองครั้งด้วย PBS และถูกกำจัดออกด้วย PBS-EDTA 2mM และทริปซิน 0.001× จากนั้นเซลล์ถูกแขวนลอยใหม่ใน PBS และถูกบ่มตามลำดับด้วย PTX3 (ลูกผสม PTX3 ของมนุษย์, Sigma-Aldrich, Merck, เยอรมนี) (1 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) หรือ/และด้วย rhC1-INH (Ruconest®, Pharming) (2.5 ไมโครกรัม) /มล.) เป็นเวลา 60 นาที หลังจากล้างด้วย PBS 1X สามครั้ง เซลล์ถูกแขวนลอยใหม่ในบัฟเฟอร์โฟลว์ไซโตเมทรี (FACS) (น้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต, pH 7.2, อัลบูมินในซีรัมโบวีน 0.2 เปอร์เซ็นต์ และโซเดียม เอไซด์ 0.02 เปอร์เซ็นต์) และบ่มด้วยรีเอเจนต์การขัดขวาง FCR (Miltenyi Biotec) สำหรับ 10 นาทีที่อุณหภูมิห้อง หลังจากการปิดกั้น EC ถูกบ่มด้วยกระต่ายต้าน C1-INH ของมนุษย์ (จัดหาโดย Prof. M. Daha, University of Leiden, การเจือจาง 1//100) หรือ/และด้วยสารต้าน PTX3 ของหนู (MNB4, Exira Life Sciences In., 1/20 เจือจาง) ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที และล้างด้วยบัฟเฟอร์ FACS จากนั้น เซลล์ถูกบ่มด้วย IgG PE ต้านกระต่ายของแพะ (โพรบโมเลกุล, การเจือจาง 1/100) หรือ/ด้วย IgG FITC ต้านหนู (โพรบโมเลกุล, การเจือจาง 1/100) ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที และล้างสามครั้ง เซลล์ถูกวิเคราะห์ด้วย FC500 (Beckman Coulter, Brea, CA, USA) และซอฟต์แวร์ Kaluza พื้นที่ของความเป็นบวกถูกกำหนดหาโดยใช้ mAb ที่จับคู่ไอโซไทป์ และโดยรวมแล้ว 104 เหตุการณ์สำหรับแต่ละตัวอย่างได้รับมา ทำการทดลองอิสระสามครั้ง

การวิเคราะห์ทางสถิติ

ข้อมูลแสดงเป็นค่าเฉลี่ย±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD) และเปรียบเทียบโดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนหรือการทดสอบ t นักเรียนที่จับคู่ตามความเหมาะสม ความแตกต่างถูกพิจารณาว่ามีนัยสำคัญทางสถิติเมื่อค่า p น้อยกว่า 005 ข้อมูลได้รับการวิเคราะห์โดยใช้แพ็คเกจซอฟต์แวร์ Statview (เวอร์ชัน 5.0) (SAS Inc. Co., Cary, NC, USA) แสดงกราฟโดยใช้ GraphPad Prism Software 5

ตัวย่อ

I/R: ischemia/reperfusion; EC: เซลล์บุผนังหลอดเลือด; PTX3: เพนตราซิน 3; FSP-1: โปรตีนจำเพาะไฟโบรบลาสต์ 1; N-cadherin: เส้นประสาทไขสันหลังอักเสบ; alpha-SMA: แอกตินของกล้ามเนื้อเรียบอัลฟา

ผลงานของผู้เขียน

ซีดีประสานงานการศึกษา เข้าร่วมในการตรวจ immunolabeling และ confocal microscopy ของไตและร่างต้นฉบับ AS และ RF เข้าร่วมในการออกแบบการศึกษา มีส่วนร่วมในการวิเคราะห์ข้อมูล ทำการทดลองในหลอดทดลอง และแก้ไขต้นฉบับอย่างมีวิจารณญาณ MR และ GSN ทำการวิเคราะห์ภาพทางจุลพยาธิวิทยา LL, FS, AMC ดำเนินการแบบจำลองสัตว์ของการบาดเจ็บของ Ischemia-Reperfusion และช่วยแก้ไขต้นฉบับ GL, PD และ MB ได้ดำเนินการขั้นตอนการผ่าตัดทั้งหมดในแบบจำลองสุกรและช่วยแก้ไขต้นฉบับ MRD, P.vdP., C.vK. และ FS ได้แก้ไขต้นฉบับ

PP, ER, GG, GS และ LG แก้ไขต้นฉบับอย่างมีวิจารณญาณ GC จัดหาเครื่องมือวิเคราะห์ใหม่ ออกแบบและดูแลงานวิจัย CD, AS และ RF สนับสนุนการศึกษานี้อย่างเท่าเทียมกัน ผู้เขียนทุกคนมีส่วนร่วมในบทความและอนุมัติเวอร์ชันที่ส่ง

กิตติกรรมประกาศ

ขอขอบคุณ Claudia Curci จากหน่วยไต การฟอกไต และการปลูกถ่าย กรมฉุกเฉินและการปลูกถ่ายอวัยวะ

University of Bari สำหรับความช่วยเหลือด้านเทคนิคที่ยอดเยี่ยม

ผลประโยชน์ทับซ้อน

ผู้เขียนประกาศว่าพวกเขาไม่มีความขัดแย้งทางผลประโยชน์

เงินทุน

การศึกษานี้ได้รับการสนับสนุนโดย University of Bari "Aldo Moro" กระทรวงสาธารณสุขของอิตาลี (GR 2016- 02362239 "A transcriptomics – based approach สำหรับการระบุปัจจัยคาดการณ์และเป้าหมายการรักษาสำหรับการทำงานของการรับสินบนที่ล่าช้าในไตผู้รับการปลูกถ่าย", Bando di Ricerca Finalizzata 2016, CD ได้รับทุนการศึกษาในโครงการนี้) และ Fondo Sociale Europeo, Azione I.2 "Attrazione e Mobilità Internazionale dei Ricercatori"- AIM-1810057-กิจกรรม 2 ที่ได้รับจาก AS

ข้อมูลอ้างอิง

1. Bonventre JV, Yang L. พยาธิสรีรวิทยาของเซลล์ของภาวะขาดเลือดเฉียบพลันไตบาดเจ็บ. เจ คลิน อินเวสท์ 2554; 121:4210–21.

2. Jang HR, Rabb H. การตอบสนองของภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติในภาวะขาดเลือดเฉียบพลันไตบาดเจ็บ. คลีนิกอิมมูนอล 2552; 130:41–50.

3. Ricklin D, Hajishengallis G, Yang K, Lambris JD. เสริม: ระบบกุญแจสำหรับการเฝ้าระวังภูมิคุ้มกันและสภาวะสมดุล นัท อิมมูนอล. 2010; 11:785–97.

4. Thurman JM, Holers VM บทบาทสำคัญของแนวทางเสริมทางเลือกในโรคของมนุษย์ เจ อิมมูนอล 2549; 176:1305–10. PMID:16424154

5. Franzin R, Stasi A, Fiorentino M, Stallone G, Cantaluppi V, Gesualdo L, Castellano G. ระบบการอักเสบและการเสริม: การเชื่อมโยงระหว่างเฉียบพลันไตการบาดเจ็บและความเสียหายจากการต่อกิ่งเรื้อรัง อิมมูนอลด้านหน้า

2020; 11:734.PMID:32457738

6. Deban L, Jaillon S, Garlanda C, Bottazzi B, Mantovani A. Pentraxins ในภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติ: บทเรียนจาก PTX3 ความละเอียดของเนื้อเยื่อเซลล์ 2554; 343:237–49.PMID:20683616

7. Cieślik P, Hrycek A. Long pentraxin 3 (PTX3) ในแง่ของโครงสร้าง กลไกการออกฤทธิ์ และผลกระทบทางคลินิก ภูมิคุ้มกัน 2555; 45:119–28.PMID:21988562

8. Kunes P, Holubcova Z, Kolackova M, Krejsek J. Pentraxin 3(PTX 3): โมดูเลเตอร์ภายนอกของการตอบสนองต่อการอักเสบ ผู้ไกล่เกลี่ย Inflamm 2555; 2012:920517.PMID:22577258

9. Garlanda C, Bottazzi B, Bastone A, Mantovani A. Pentraxins ที่ทางแยกระหว่างภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติ การอักเสบ การสะสมของเมทริกซ์ และภาวะเจริญพันธุ์ของเพศหญิง อนุศาสน์ อิมมูนอล. 2548; 23:337–66.115756PMID:15771574

10. Bottazzi B, Garlanda C, Cotena A, Moalli F, Jaillon S, Deban L, Mantovani A. pentraxin PTX3 แบบยาวเป็นตัวรับการรับรู้รูปแบบอารมณ์ขันต้นแบบ: โต้ตอบกับภูมิคุ้มกันโดยกำเนิดของเซลล์ Immunol Rev. 2009; 227:9–18.PMID:19120471

11. Ma YJ, Doni A, Hummelshøj T, Honoré C, Bastone A, Mantovani A, Thielens NM, Garred P. Synergy ระหว่าง ficolin-2 และ pentraxin 3 ช่วยเพิ่มการรับรู้ภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติและการสะสมของสารเติมเต็ม เจ ไบโอล เคม. 2552; 284:28263–75.PMID:19632990

12. Netti GS, Lucarelli G, Spadaccino F, Castellano G, Gigante M, Divella C, Rocchetti MT, Rascio F, Mancini V, Stallone G, Carrieri G, Gesualdo L, Battaglia M, Ranieri E. PTX3 ปรับภูมิคุ้มกันในเนื้องอก microenvironment และเป็นปัจจัยพยากรณ์โรคสำหรับผู้ป่วยมะเร็งเซลล์ไตชนิดเซลล์ใส เอจจิ้ง (ออลบานีนิวยอร์ก). 2020; 12:7585–602.PMID:32345771

13. Souza DG, Amaral FA, Fagundes CT, Coelho FM, Arantes RM, Sousa LP, Matzuk MM, Garlanda C, Mantovani A, Dias AA, Teixeira MM เพนตราซิน PTX3 แบบยาวมีความสำคัญต่อการอักเสบของเนื้อเยื่อภายหลัง

ภาวะขาดเลือดในลำไส้และการกลับเป็นซ้ำในหนู แอม เจ ปทุม. 2552; 174:1309–18.PMID:19286566

14. Jaillon S, Peri G, Delneste Y, Frémaux I, Doni A, Moalli F, Garlanda C, Romani L, Gascan H, Bellocchio S, Bozza S, Cassatella MA, Jeannin P, Mantovani A. ตัวรับการรับรู้รูปแบบอารมณ์ขัน PTX3 ถูกเก็บไว้ในแกรนูลนิวโทรฟิลและปรับตำแหน่งในกับดักนอกเซลล์ เจ เอ็กซ์พี เมด 2550; 204:793–804.PMID:17389238

15. Tong M, Carrero JJ, Qureshi AR, Anderstam B, Heimbürger O, Bárány P, Axelsson J, Alvestrand A, Stenvinkel P, Lindholm B, Suliman ME พลาสม่าเพนตราซิน 3 ในผู้ป่วยโรคเรื้อรังไตโรค: ความสัมพันธ์กับการทำงานของไต โปรตีนพลังงาน การสูญเสีย โรคหัวใจและหลอดเลือด และการตาย คลินิก เจ แอม ซ็อก เนโฟรล 2550; 2:889–97.PMID:17702732

16. Witasp A, Rydén M, Carrero JJ, Qureshi AR, Nordfors L, Näslund E, Hammarqvist F, Arefin S, Kublickiene K, Stenvinkel P. ยกระดับการไหลเวียนโลหิตและการแสดงออกของเนื้อเยื่อ pentraxin 3 ในปัสสาวะ: ภาพสะท้อนของความผิดปกติของเยื่อบุผนังหลอดเลือด ป.ล. หนึ่ง 2013; 8: e63493.PMID:23658833

17. Presta M, Camozzi M, Salvatori G, Rusnati M. บทบาทของตัวรับการรับรู้รูปแบบที่ละลายน้ำได้ PTX3 ในชีววิทยาของหลอดเลือด เจ เซลล์ โมล เมด 2550; 11:723–38.PMID:17760835

18. Bottazzi B, Inforzato A, Messa M, Barbagallo M, Magrini E, Garlanda C, Mantovani A. เพนตราซิน PTX3 และ SAP ในภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติ การควบคุมการอักเสบและการสร้างเนื้อเยื่อใหม่ เจ เฮปาตอล. 2559; 64:1416–27.

19. Xiao Y, Yang N, Zhang Q, Wang Y, Yang S, Liu Z. Pentraxin 3 ยับยั้งการเกิดพังผืดคั่นระหว่างหน้าที่เกิดจากการบาดเจ็บที่ไตอย่างเฉียบพลันผ่านการปราบปรามทางเดิน IL-6/Stat3 การอักเสบ 2014; 37:1895–901.PMID:24854162

20. Inforzato A, Reading PC, Barbati E, Bottazzi B, Garlanda C, Mantovani A. ด้านที่ "หวาน" ของเพนตราซินยาว: ไกลโคซิเลชันส่งผลต่อการทำงานของ PTX3 ในภูมิคุ้มกันและการอักเสบโดยกำเนิดอย่างไร อิมมูนอลด้านหน้า 2013; 3:407. PMID:23316195