ส่วนที่ 1: ฤทธิ์ต้านมะเร็งในช่องท้องของผลรวมของ Diterpenoids จาก Euphorbiae Ebracteolata Radix เป็นผลมาจากการเปลี่ยนแปลงของ Aquaporins ผ่านการยับยั้งกิจกรรม PKC ในไต

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม ติดต่อtina.xiang@wecistanche.com

เชิงนามธรรม: การศึกษานี้ประเมินผลการต้านภาวะท้องมานของสารไดเทอร์พีนอยด์รวมที่สกัดจาก Euphorbiae ebracteolate Radix (TDEE) ต่อหนูที่มีอาการท้องมานที่เป็นมะเร็ง และอธิบายกลไกที่อยู่ภายใต้ TDEE ถูกสกัดโดยไดคลอโรมีเทนและอยู่ภายใต้คอลัมน์โครมาโตกราฟี ความบริสุทธิ์ของไดเทอร์พีนอยด์หกตัวที่แยกได้จาก TDEE ถูกกำหนดหาเป็น 77.18 เปอร์เซ็นต์โดย HPLC TDEE (3 และ 0.6 ก. สมุนไพรดิบ/กก., po) ลดอาการท้องมานและเพิ่มปริมาณปัสสาวะ ในขณะเดียวกัน การวิเคราะห์ความมีชีวิต วัฏจักร และการตายของเซลล์เนื้องอกบ่งชี้ว่า TDEE ไม่มีสารต้านมะเร็งกิจกรรม. นอกจากนี้ ระดับการแสดงออกของ aquaporins (AQPs) และระดับการเคลื่อนย้ายเมมเบรนของโปรตีน kinase C (PKC) และ PKC ในไตและเซลล์ถูกวัด TDEE ลดระดับของ AQP1-4 และยับยั้งการแสดงออกของ PKC ในส่วนของเมมเบรน ไดเทอร์พีนอยด์หลักสี่ชนิด ยกเว้นสารประกอบ 2 ลดระดับ AQP1 ในเซลล์ไตของมนุษย์-2 สารประกอบ 4 และ 5 ยับยั้งการแสดงออกของ AQP2-4 ในเซลล์ท่อรวบรวมไขกระดูกภายในของหนู การยับยั้งที่เกิดจากไดเทอร์พีนอยด์ของการแสดงออกของ AQP1-4 ถูกบล็อกโดยฟอร์-12-ไมริสเตต-13-อะซิเตท (PMA; ตัวเอกของ PKC) ไดเทอร์พีนอยด์จาก TDEE เป็นส่วนประกอบหลักในการต่อต้านน้ำในช่องท้อง ฤทธิ์ต้านอาการท้องมานของไดเทอร์พีนอยด์อาจสัมพันธ์กับการเปลี่ยนแปลงของ AOPs ในไตเพื่อส่งเสริมการขับปัสสาวะ การยับยั้งการแสดงออกของ AOP1-4 โดย TDEE เกี่ยวข้องกับการยับยั้งการกระตุ้น PKC

คีย์เวิร์ด: ยูโฟเรีย ebracteolate Hayata; ขับปัสสาวะ; ส่วนประกอบออกฤทธิ์ทางชีวภาพ เทอร์พีนอยด์; เซลล์ไต สารยับยั้ง PKC

cistanche benefits reddit：improve kidney function

คลิกเพื่อดูประโยชน์ของสมุนไพร cistanche

1. บทนำ

Euphorbia ebracteolate Hayata (EEH) เป็นสมาชิกของสกุล Euphorbia ในวงศ์ Euphorbiaceae และมีการใช้กันอย่างแพร่หลายในการรักษาท้องอืดและบวมน้ำ การติดเชื้อปรสิต วัณโรค และโรคอื่นๆ ในการแพทย์แผนจีน (TCM)[1] รากของ EEH (EER) ประกอบด้วยสารเทอร์พีนอยด์หลายชนิด ซึ่งถือว่าเป็นส่วนประกอบที่มีประสิทธิภาพ มีการศึกษาล่าสุดเกี่ยวกับ terpenoids เพื่อตรวจสอบของพวกเขาต้านการอักเสบ, ยาต้านไวรัส,การต่อต้านวัณโรค และผลกระทบอื่นๆ ในหลอดทดลอง [2-5] อย่างไรก็ตาม การศึกษาวิจัยพื้นฐานเกี่ยวกับผลกระทบดั้งเดิมของ EER ในการรักษาท้องอืดและอาการบวมน้ำนั้นมีจำกัด ตามทฤษฎีของ TCM EER สามารถขจัดอาการท้องอืดและอาการบวมน้ำได้อย่างรวดเร็วโดยส่งเสริมการถ่ายปัสสาวะและท้องร่วง [6] การศึกษาก่อนหน้านี้ของเราแสดงให้เห็นว่า diterpenoids ทั้งหมดจาก EER (TDEE) สามารถทำให้เกิดอาการท้องร่วงได้โดยการควบคุมการแสดงออกของ aquaporin (AQP)-1 และ AQP3 [7] อย่างไรก็ตาม จนถึงปัจจุบัน สารที่มีประสิทธิภาพในการต่อต้านน้ำในช่องท้องใน EER ยังคงไม่ชัดเจน

ท้องอืดและบวมน้ำถูกอธิบายว่าเป็นน้ำในช่องท้องในการแพทย์แผนปัจจุบัน น้ำในช่องท้องเป็นการสะสมทางพยาธิวิทยาของของเหลวในช่องท้อง [8] มีหลายสาเหตุของการเกิดน้ำในช่องท้อง เช่น โรคตับแข็ง เนื้องอก ภาวะหัวใจล้มเหลว และกลุ่มอาการเนฟโฟรติก [9] การเกิดน้ำในช่องท้องเกี่ยวข้องกับความดันโลหิตสูงพอร์ทัล ซึ่งนำไปสู่การขยายตัวของหลอดเลือดแดง splanchnic การลดปริมาตรการหมุนเวียนที่มีประสิทธิภาพ การกระตุ้นระบบการหดตัวของหลอดเลือดภายในร่างกาย และการกักเก็บน้ำในไตอย่างมาก [10] AQPs เป็นเมมเบรนลำเลียงน้ำอย่างรวดเร็วสำหรับการข้ามสิ่งกีดขวางของเยื่อบุผิวและเยื่อบุผนังหลอดเลือด และด้วยเหตุนี้จึงมีบทบาทสำคัญในการรักษาสมดุลของน้ำ [11] การศึกษาจำนวนมากแสดงให้เห็นว่า AQP มีบทบาทสำคัญในการก่อตัวและความผิดปกติของน้ำในช่องท้อง [12-15] AQP ในไตมีหลายชนิด เช่น AQP1, AQP2, AQP3 และ AQP4[16] เนื่องจาก TDEE สามารถควบคุมการแสดงออกของ AQP ในลำไส้ได้ [7] เราขอเสนอว่าอาจใช้ TDEE ในการรักษาน้ำในช่องท้องโดยควบคุม AQP ในไต

AQP มีบทบาทสำคัญในการสร้างปัสสาวะ อย่างไรก็ตาม กลไกการควบคุมการแสดงออกของ AQP ในไตยังไม่ได้รับการชี้แจง ในปัจจุบัน รายงานจำนวนจำกัดเท่านั้นที่ระบุว่า AQP ถูกควบคุมผ่านวิถีโปรตีนไคเนส C(PKC) และโปรตีนไคเนส A(PKA) [17-20] เทอร์พีนอยด์บางชนิดที่แยกได้จากยูโฟเรีย (เช่น รักษาและอินเกนอล 3-แองเจเลต) มีผลบังคับต่อ PKC TDEE อาจควบคุมการแสดงออกของ AQP ในไตโดยวิธี PKC

ในการศึกษานี้ เราสกัด TDEE และประเมินผลการต่อต้านน้ำในช่องท้อง รวมทั้งการแสดงออกของ AQPs ที่วิเคราะห์ด้วยการวิเคราะห์, กิจกรรม PKC และ PKA ในไตของหนูที่มีอาการท้องมาน จากนั้น เราแยกและทำให้บริสุทธิ์ไดเทอร์พีนอยด์หลักจาก TDEE เพื่อตรวจสอบผลกระทบที่มีต่อโปรตีน AQP และระดับการแสดงออกของ mRNA ในสองประเภทเซลล์ไต(เซลล์ไตของมนุษย์-2 (HK-2) และเซลล์ท่อรวบรวมไขกระดูกภายในของหนู (mIMCD3)) สุดท้าย เราเลือกสารประกอบไดเทอร์พีนอยด์ (euphebracteolatin A) โดยใช้ phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA; agonist of PKC) เพื่อกระตุ้นทางเดิน PKC เพื่อระบุว่าการแสดงออกของ AQP ในไตมีการควบคุมหรือไม่ โดยเส้นทาง PKC การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาฤทธิ์ต้านอาการท้องมานของ TDEE ใน EER และเป็นพื้นฐานสำหรับการประยุกต์ใช้ EER ทางคลินิกและการจำแนกยาที่เลือกใช้สำหรับขับปัสสาวะและฤทธิ์ต้านอาการท้องมาน

cistanche propiedades：improve kidney function

2. ผลลัพธ์

2.1.ผลของ TDEE ต่อน้ำหนักของเหลวในช่องท้อง น้ำหนักปัสสาวะ และปริมาณน้ำในอุจจาระ

การรักษาหนูน้ำในช่องท้องด้วยสารสกัดรวมของ EER (TEER) และ TDEE (3 และ 0.6 ก. สมุนไพรดิบ/กก. po) และ furosemide (ยาที่ให้ผลบวก) ช่วยเพิ่มน้ำหนักของน้ำในช่องท้องลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับแบบจำลอง กลุ่ม (รูปที่ 1A) รูปที่ 1C แสดงว่าปัสสาวะมีน้ำหนักอย่างมีนัยสำคัญ (p<0.05, compared="" to="" the="" model="" group)increased="" in="" ascitic="" mice="" pretreated="" with="" teer,="" tdee,="" and="" furosemide.="" in="" addition,="" in="" the="" teer="" and="" tdee="" groups="" at="" a="" dose="" of="" 3="" g="" raw="" herbs/kg,="" a="" significant="" increase="" in="" fecal="" water="" content="" was="" observed="" compared="" with="" the="" model="" group="" (figure="" 1d).="" however,="" the="" non-diterpenoid="" fraction="" of="" eer(ntdee)="" groups="" showed="" no="" significant="" influence="" on="" ascites="" weight,="" urine="" weight,="" and="" fecal="" water="" content="" compared="" to="" the="" model="">

$Figure 1. Effects of extracts from the root of Euphorbia ebracteolata Hayata(EER) on ascitic fluid weight (A),serum albumin levels (B), urine weight (C), and fecal water content (D)in H22 tumor cell-bearing mice. Normal:normal mice treated with blank solvent. Model:H22 tumorcell-bearing mice treated with blank solvent. TEER: total extract of EER;TDEE: total diterpenoids from EER;NTDEE:non-diterpenoid fraction of EER. The data are represented as mean ±SD, n=10, *p<0.05 vs.model group (one-way ANOVA followed by Dunnett test);*p<0.05 vs.TEERgroup using the same dose (one-way ANOVA followed by Dunnett test).$

2.2. ผลของ TDEE ต่อระดับอัลบูมินในซีรัมในหนูแอสซิติก

เซรั่มอัลบูมินเป็นโปรตีนที่มีมากที่สุดในพลาสมาของสัตว์มีกระดูกสันหลัง และสามารถรักษาแรงดันออสโมติกของเลือดและควบคุมการขนส่งทางน้ำ รูปที่ 1B แสดงให้เห็นว่าการผลิตน้ำในช่องท้องในหนูทดลองทำให้ซีรัมอัลบูมินลดลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มปกติ หลังการรักษาด้วย furosemide, TEER และ TDEE(สมุนไพรดิบ 3 และ 0.6 กรัม/กก., po) ระดับของอัลบูมินในซีรัมได้รับการฟื้นฟูอย่างมีประสิทธิภาพเมื่อเทียบกับกลุ่มตัวอย่าง ไม่พบการปรับปรุงในดัชนีนี้ในกลุ่ม NTDEE

2.3.ผลของ TDEE ต่อความมีชีวิตของเซลล์เนื้องอก วัฏจักร และการตายของเซลล์ในหนูที่มีน้ำเหลือง

ในน้ำในช่องท้องที่เป็นมะเร็ง เซลล์เนื้องอกจะลอยอยู่ในน้ำในช่องท้อง เราประเมินว่าการลดลงของน้ำในช่องท้องนั้นสัมพันธ์กับฤทธิ์ต้านมะเร็งของ TEER และ TDEE หรือไม่ ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่ายาเหล่านี้ไม่ได้ยับยั้งความมีชีวิตของเซลล์เนื้องอก (รูปที่ 2A) และไม่นำไปสู่การหยุดวงจรของเซลล์ (รูปที่ 2B) และการตายของเซลล์ (รูปที่ 2C, D)

Figure 2. Effects of extracts from the root of Euphorbiaebradeolata Hayata(EER)on cell viability,cell cycle and apoptosis in H22 tumor cell-bearing mice.

flavonoids supplements anti-inflammatory

2.4.ผลของ TDEE ต่อการแสดงออกของ AQP ในไตของหนูน้ำในช่องท้อง

ไตเป็นอวัยวะที่สำคัญสำหรับการดูดซึมน้ำกลับและความเข้มข้นของปัสสาวะ ช่องน้ำ AQP เป็นสื่อกลางในการขนส่งน้ำในไตอย่างรวดเร็ว ดังนั้นเราจึงตรวจสอบการแสดงออกของ AQP ในไต รูปที่ 3 แสดงให้เห็นว่าการเพิ่มประสิทธิภาพของน้ำในช่องท้องมีผลเพียงเล็กน้อยต่อ AQPsexpression ในไตเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มปกติ เมื่อรักษาด้วย TEER และ TDEE การแสดงออกของโปรตีน AQP1, AQP2, AQP3 และ AQP4 ต่ำกว่าในกลุ่มแบบจำลองอย่างเห็นได้ชัดในขนาดยาส่วนใหญ่ TEER ส่งผลให้การแสดงออกของ AQP2, AQP3 และ AQP4 ลดลงอย่างมีนัยสำคัญที่ขนาด 3.0 และ {{10}}.6g สมุนไพร/กก. ในขณะที่การแสดงออกของ AQP1 ลดลงเพียง ปริมาณต่ำ (สมุนไพรดิบ 0.6g / กก.) โดยเฉพาะอย่างยิ่ง TDEE มีผลการยับยั้งเหมือนกันในการแสดงออกของ AQP3 และ AQP4 กับ TEER ในสองโดส ความแตกต่างระหว่าง TDEE และ TEER คือ TDEE ยับยั้งการแสดงออกของ AQP1 และ AQP2 ในปริมาณที่สูงเท่านั้น (สมุนไพรดิบ 3 กรัม/กก.)NTDEE มีผลอ่อนต่อระดับ AQP ในไต และควบคุมการแสดงออกของโปรตีน AQP4 ที่ขนาดยาเท่านั้น สมุนไพรดิบ 3 กรัม/กก.

Effects of extracts from the root of Euphorbia ebracteolata Hayata (EER)on aquaporins(AQPs) expression in the kidneys of H22 tumor cell-bearing mice

2.5.ผลของ TDEE ต่อ PKC และ PKA Activation ในไตของ Ascitic Mice

การศึกษาก่อนหน้านี้ระบุว่าการแสดงออกของ AQP สามารถควบคุมได้โดยการเปิดใช้งาน PKC และ PKA เราตรวจสอบผลกระทบของ TDEE ต่อการเปิดใช้งาน PKC-a, PKC- และ PKA การกระตุ้น PKC ถูกวัดโดยการเคลื่อนย้ายจากไซโตซอลไปยังเยื่อหุ้มเซลล์ ดังที่แสดงไว้ในรูปที่ 4A และ B ระดับการแสดงออกของโปรตีนของ PKC- ในส่วนของเมมเบรนลดลงอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม TDEE ในขณะที่ไม่มีผลกระทบที่มีนัยสำคัญต่อระดับการแสดงออกของโปรตีนเมมเบรน PKC ฟอสโฟลิเปส C (PLC) เป็นโมเลกุลส่งสัญญาณต้นน้ำที่สำคัญซึ่งไกล่เกลี่ยการกระตุ้นการรักษา PKC.TDEE ไม่มีผลต่อระดับของฟอสโฟรีเลตและ PLC ทั้งหมด (รูปที่ 4D) PKA เป็นเฮเทอโรเตทราเมอร์ที่ประกอบด้วยหน่วยย่อยตัวเร่งปฏิกิริยาสองตัวที่ผูกกับหน่วยย่อยควบคุมสองหน่วย การเปิดตัวหน่วยย่อยของตัวเร่งปฏิกิริยาเป็นจุดเด่นของการเปิดใช้งาน PKA ในรูปที่ 4C TDEE ไม่ส่งผลต่อการแสดงออกของหน่วยย่อยตัวเร่งปฏิกิริยา PKA

Figure 4. Effects of total diterpenoids from the root of Euphorbia ebracteolata Hayata (TDEE) on protein kinase C (PKC)and protein kinase A (PKA)activation in the kidneys of H22 tumorcell-bearing mice.

2.6. การหาปริมาณสารไดเทอร์พีนอยด์หกชนิดใน TDEE โดยโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC)

ผลการทดลองในสัตว์ทดลองพบว่า TDEE เป็นส่วนที่มีประสิทธิภาพหลักของ EER เราแยกไดเทอร์พีนอยด์หกตัว (โครงสร้างของสารประกอบ 1 ถึง 6 แสดงไว้ในรูปที่ 5 ข้อมูลสเปกตรัมถูกเพิ่มไปยังวัสดุเสริม) จาก TDEE และใช้สารประกอบเหล่านี้เป็นมาตรฐานในการกำหนดปริมาณไดเทอร์พีนอยด์ใน TDEE โครมาโตแกรมของ HPLC สำหรับ TDEE และหกมาตรฐานไดเทอร์พีนอยด์แสดงไว้ในรูปที่ 6 เนื้อหาของสารประกอบ 1 ถึง 6 คือ 1.07 เปอร์เซ็นต์ ,12.00 เปอร์เซ็นต์ ,12.69 เปอร์เซ็นต์ ,9.15 เปอร์เซ็นต์ , 39.26 เปอร์เซ็นต์ และ 3.02 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ การบัญชี สำหรับ 77.18 เปอร์เซ็นต์ของ TDEE

The chemical structures of six diterpenoid compounds. Compound 1: euphorin G; compound 2: ent-11α-hydroxyabicta-8(14),13(15)-dien-16,12-olide; compound 3: jolkinolide B; compound 4: euphebracteolatin A; compound 5: fischeria A; compo

Figure 6.HPLC chromatograms of total diterpenoids from the root of Euphorbia ebracteolata Hayata (TDEE)(A) and six diterpenoid standards(B).Peak1:euphorin G; peak 2:ent-11α-hydroxyabicta-8(14),13(15)-dien-16,12-olide; peak3:jplkinolide B;peak4:euphebracteolatin A; peak5: fischeria A;peak 6: jolkinolide E.

2.7.ผลของ Diterpenoids จาก TDEE ต่อการแสดงออกของ AQPs ในเซลล์ไต

TDEE เป็นส่วนที่ใช้งานของ EER ที่ยับยั้งน้ำในช่องท้องโดยลดการแสดงออกของ AQP1, AQP2, AQP3 และ AQP4 ในไต ในเวลาเดียวกัน TDEE ยังลดการแสดงออกของโปรตีนและ mRNA ของ AQP1, AQP2, AQP3 และ AQP4 ในเซลล์ไตของมนุษย์-2 (HK-2) และเซลล์ท่อดักจับไขกระดูกชั้นในของหนู (mIMCD3) (รูปที่ 7) ส่วนประกอบหลักของ TDEE คือไดเทอร์พีนอยด์ เราเปรียบเทียบผลกระทบระหว่างของผสม TDEE และของผสมไดเทอร์พีนอยด์ (ไดเทอร์พีนอยด์ที่แยกได้หกชนิดถูกผสมตามเนื้อหาใน TDEE) ผลการศึกษาพบว่าผลการยับยั้งของส่วนผสมไดเทอร์พีนอยด์และ TDEE ต่อการแสดงออกของ AQP1, AQP2, AQP3 และ AQP4 มีความคล้ายคลึงกัน (รูปที่ 7) กิจกรรมของไดเทอร์พีนอยด์หลักสี่ชนิดจาก TDEE ได้รับการประเมินในหลอดทดลอง รูปที่ 8 และ 9 แสดงให้เห็นว่าระดับการแสดงออกของโปรตีนและ mRNA ของ AQP1 ในเซลล์ HK-2 ลดลงอย่างมีนัยสำคัญโดยสารประกอบ 3,4 และ 5 การบำบัดด้วยสารประกอบ 2 ไม่ทำให้ AOP1 ลดลงอย่างเห็นได้ชัดที่โปรตีนและ mRNA ระดับ สำหรับสารประกอบเหล่านี้ สารประกอบ 3 (ไดเทอร์พีนอยด์ชนิดเอน-อะบีเทน)มีฤทธิ์มากกว่าสารประกอบอื่นๆ ในเซลล์ mlMCD3 สารประกอบไดเทอร์พีนอยด์สี่ชนิดทำให้เกิดระดับการยับยั้งการแสดงออกของ AQP2, AQP3 และ AQP4 ที่แตกต่างกัน ผลลัพธ์ของการแสดงออกของโปรตีนและยีนถูกแสดงไว้ในรูปที่ 8 และ 9 สารประกอบ 4 และ 5 มีผลการยับยั้ง AQP2, AQP3 และ AQP4 ที่มีศักยภาพเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมที่ระดับยีนและโปรตีน สารประกอบ 2 และ 3 แสดงผลที่แตกต่างกันต่อการแสดงออกของ Aqp2, Aqp3 และ Aqp4 mRNA

Figure 8. Effects of compounds 2, 3, 4 and 5 on protein expression levels of aquaporin (AQP)-1 in human kidney-2 cells (HK-2), and AQP2, AQP3 and AQP4 in murine inner medullary collecting duct cells (mIM

Effect of compounds 23,4 and5 on mRNA expression kevels of aquaporin(AQP)-1 in human kdney-2cells (HK-2), and Ao2,. Aqp3 and Aop4 in murine inner medhulkry colkecting dhuct clls (mlMCD3).

flavonoids anti viral

2.8.ผลของแอกทิเวเตอร์ของ PKC ต่อการยับยั้งที่กระตุ้นด้วยไดเทอร์พีนอยด์ของ AQP

ผลจากการทดลองในสัตว์แสดงว่า TDEE ยับยั้งการทำงานของ PKC และการแสดงออกของ AQP ในไตของหนูที่มีเซลล์เนื้องอก H22 พร้อมกัน เพื่อชี้แจงเพิ่มเติมว่า PKC ควบคุมการแสดงออกของ AQP ในเซลล์ไตหรือไม่ PKC agonist (PMA) ถูกปรับสภาพก่อนในเซลล์ HK-2 และ mIMCD3 ที่ 1.5 ชั่วโมงก่อนการกระตุ้นไดเทอร์พีนอยด์ (Euphebracteolatin A) ตรวจพบการเปลี่ยนแปลงของการแสดงออกของเมมเบรน PKC , AOP1, AOP2, AOP3 และ AOP4 ผลลัพธ์ของ Western Bolt แสดงให้เห็นว่า euphebracteolatin A สามารถลดการแสดงออกของโปรตีนของเมมเบรน PKC , AOP1, AOP2, AOP3 และ AOP4 และผลกระทบสามารถถูกทำให้อ่อนลงได้ด้วยการปรับสภาพด้วย PMA (รูปที่ 10)

ects of activator of protein kinase C (PKC) on diterpenoid-induced inhibition of aquaporin (AQP)-1 in human kidney-2 cells (HK-2), and AQP2, AQP3 and AQP4 in murine inner medullary collecting duct cells (mIMCD3). (A