ส่วนที่ Ⅰ ค่าเสริมของ Herba Cistanches เมื่อใช้ร่วมกับ Statin ในรุ่น Murine

Elaine Wat, Chun Fai Ng, Chi Man Koon, Cheng Zhang, Si Gao, Brian Tomlinson & Clara Bik San Lau

1 สถาบันการแพทย์แผนจีน, The Chinese University of Hong Kong, Shatin, New Territories, Hong Kong

2 State Key Laboratory of Phytochemistry and Plant Resources in West China, The Chinese University of Hong Kong, Shatin, New Territories, ฮ่องกง

3 Division of Clinical Pharmacology, Department of Medicine and Therapeutics, The Chinese University of Hong Kong, Shatin, New Territories, ฮ่องกง เอเลน วัด และ ชุน ไฟอึ้ง มีส่วนสนับสนุนงานนี้อย่างเท่าเทียมกัน จดหมายโต้ตอบและคำขอวัสดุควรส่งถึง CBSL (อีเมล: claralau@cuhk.edu.hk)

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม: emily.li@wecistanche.com

คลิกที่นี่เพื่อรับข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับ Cistanche

เชิงนามธรรม

สแตตินเป็นที่รู้จักกันดีว่ามีปัญหาความเป็นพิษต่อกล้ามเนื้อเฮอร์บาCistanches(HC) เป็นสมุนไพรจีนที่ใช้รักษาอาการเจ็บเอวและเข่า การศึกษาในหลอดทดลองก่อนหน้าของเราแนะนำว่าสามารถป้องกันความเป็นพิษของกล้ามเนื้อที่เกิดจากสแตตินได้ อย่างไรก็ตาม มันไม่เคยมีการตรวจสอบผลการป้องกันในร่างกาย วัตถุประสงค์ของการศึกษาครั้งนี้เพื่อพิจารณาว่าสารสกัดที่เป็นน้ำของเฮอร์บาCistanche(HCE) สามารถป้องกันความเป็นพิษของกล้ามเนื้อที่เกิดจากซิมวาสแตตินในหนู และไม่ว่า Herba Cistanche E อาจให้ผลดีในการลดคอเลสเตอรอลในเลือดสูงที่เกิดจากอาหารที่มีไขมันสูงและคอเลสเตอรอลในตับสูงหรือไม่ ซึ่งจะช่วยลดปริมาณของซิมวาสแตตินเมื่อใช้ในการรักษาร่วมกัน จากผลลัพธ์ของเรา Herba Cistanche E ได้ฟื้นฟูการลดน้ำหนักของกล้ามเนื้อที่เกิดจาก simvastatin อย่างมีนัยสำคัญ และลดไคเนส creatine creatine ในพลาสมาในหนูเฮอร์บาCistancheE ยังปรับปรุงการลดลงของระดับกลูตาไธโอนของกล้ามเนื้อที่เกิดจากซิมวาสแตติน ศักยภาพของเยื่อหุ้มไมโตคอนเดรียของกล้ามเนื้อ และลดการอักเสบของกล้ามเนื้อที่เกิดจากซิมวาสแตติน นอกจากนี้ HCE สามารถลดน้ำหนักตับ ระดับไขมันในตับทั้งหมด และระดับไขมันในพลาสมาในหนูที่ได้รับอาหารที่มีไขมันสูง โดยสรุป การศึกษาของเราได้ให้หลักฐานในร่างกายว่าเฮอร์บา CistancheE มีผลป้องกันที่อาจเกิดขึ้นต่อความเป็นพิษที่เกิดจากซิมวาสแตตินในกล้ามเนื้อ และยังส่งผลดีต่อไขมันพอกตับที่ไม่มีแอลกอฮอล์และภาวะไขมันในเลือดสูงที่เกิดจากอาหารเมื่อใช้คนเดียวหรือร่วมกับซิมวาสแตตินในขนาดที่ลดลง

สารยับยั้ง HMG-CoA reductase หรือที่เรียกว่า statin ได้รับการบันทึกไว้อย่างดีว่ามีประโยชน์ต่อผู้ป่วยภาวะไขมันในเลือดสูงที่มีความเสี่ยงต่อโรคหลอดเลือดหัวใจในระดับปานกลางและสูง1 สแตติน ซึ่งเป็นหนึ่งในกลุ่มยาที่ต้องสั่งโดยแพทย์ที่ขายดีที่สุดในโลก ทำหน้าที่ผ่านการยับยั้งการลดลงของ HMG-CoA เป็นกรดเมวาโลนิกในช่วงเริ่มต้นของวิถีทางเมวาโลเนตเพื่อลดการสังเคราะห์คอเลสเตอรอลภายในร่างกาย2, 3 แม้ว่าสแตตินมักจะทนได้ดี ผลข้างเคียงทางคลินิกที่สำคัญและเป็นที่รู้จักมากที่สุดอย่างหนึ่งคือความผิดปกติของกล้ามเนื้อโครงร่าง ซึ่งอาจอยู่ในช่วงตั้งแต่กล้ามเนื้ออ่อนแรงไปจนถึงโรคกล้ามเนื้อรุนแรง4, 5. ในการสำรวจขนาดใหญ่ในอาสาสมัครชาวฝรั่งเศส 10,409 คนที่ดำเนินการสัมภาษณ์ทางโทรศัพท์ พบว่า 10 เปอร์เซ็นต์ของผู้ป่วยที่ได้รับ การรักษาด้วยสแตตินรายงานว่ามีอาการของกล้ามเนื้อ โดยร้อยละ 30 ของผู้ป่วยที่มีอาการเหล่านี้ส่งผลให้ต้องหยุดการรักษา6 คณะทำงานเฉพาะกิจด้านความปลอดภัยของ Statin สมาคมไขมันในเลือดได้ให้คำแนะนำสำหรับการจัดการอาการที่เกี่ยวข้องกับกล้ามเนื้อในผู้ป่วยที่ได้รับการรักษาด้วยสแตติน โดยทั่วไป ขอแนะนำว่าในผู้ป่วยที่มีอาการรุนแรง เช่น creatine kinase (CK) สูง มากกว่า 5×ULN ควรระงับ statin จนกว่าระดับ CK จะกลับมาเป็นปกติอีกครั้ง5 เนื่องจากการเกิดขึ้นของผลข้างเคียงเหล่านี้ และไม่มีการรักษาที่มีประสิทธิภาพสำหรับความเป็นพิษของกล้ามเนื้อที่เกิดจากสแตติน ดังนั้นจึงมีความต้องการที่จะค้นหาวิธีรักษาใหม่ๆ สำหรับการจัดการปัญหากล้ามเนื้อที่เกิดจากสแตติน

แม้ว่าจะมีการเสนอกลไกแบบผสมและอาจรับผิดชอบต่อผลข้างเคียงของสแตติน แต่เชื่อว่ากลไกของยลเชื่อว่ามีส่วนเกี่ยวข้องในผลข้างเคียงที่เป็นพิษต่อกล้ามเนื้อของสแตติน1 Mevalonate ไม่ได้เป็นเพียงสารตั้งต้นของคอเลสเตอรอลเท่านั้น แต่ยังเป็นสารตั้งต้นของสารประกอบที่สำคัญ เช่น selenoproteins, dolicol และ ubiquinone7, 8. Statin สามารถลดระดับซีลีโนโปรตีน เช่น กลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส (GPx) ที่ลดความหนาแน่นของสารต้านอนุมูลอิสระและมีส่วนทำให้เกิดผลเสีย เอฟเฟกต์4. สแตตินยังสามารถนำไปสู่การพร่องของยูบิควิโนน ทำให้การใช้ออกซิเจนลดลงและการสังเคราะห์ ATP9 นอกจากนี้ การเพิ่มขึ้นของการศึกษาในหลอดทดลองและในร่างกายแสดงให้เห็นว่า statin ยังสามารถทำหน้าที่โดยตรงกับไมโตคอนเดรียของเนื้อเยื่อ ทำให้เกิดปฏิกิริยาออกซิเจนที่เพิ่มขึ้น (ROS) และความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันของไมโตคอนเดรีย ส่งผลให้เซลล์ตายและส่งผลให้เกิดการบาดเจ็บที่ตับและกล้ามเนื้อ10, 11

เฮอร์บาCistanches, พืชแห้งทั้งต้นของCistancheทะเลทรายYC Ma (ตระกูล Orobanchaceae) เป็นพืชกาฝากที่เติบโตอย่างเด่นชัดในพื้นที่ทะเลทรายทางตอนเหนือและตะวันออกเฉียงเหนือของจีน12 ตามทฤษฎีการแพทย์แผนจีน Herba Cistanches มีรสหวาน อบอุ่น และเค็ม13 เป็นสมุนไพรยาชูกำลังแบบจีนที่ให้พลังหยาง ซึ่งใช้เป็นหลักในการรักษาภาวะไตบกพร่องที่มีอาการต่างๆ เช่น ความอ่อนแอ ภาวะมีบุตรยาก การหลั่งเร็ว นอกจากนี้ยังเป็นสมุนไพรจีนที่สั่งจ่ายตามธรรมเนียมสำหรับผู้ป่วยที่มีอาการปวดบริเวณเอวและหัวเข่า และมักใช้ในสูตรจีนสำหรับการรักษาปัญหากล้ามเนื้อ12, 14 ที่น่าสนใจคือสิ่งนี้ยังสอดคล้องกับการศึกษาทางวิทยาศาสตร์สมัยใหม่ที่แสดงให้เห็นถึงการต่อต้าน -กิจกรรมเมื่อยล้าของสารสกัด Herba Cistanches ที่อุดมด้วยโพลีแซ็กคาไรด์และฟีนิลทานอยด์ในหนูหลังออกกำลังกาย โดยการลดความเสียหายของกล้ามเนื้อและปรับปรุงการจัดเก็บ ATP15 นอกจากนี้ ผลงานล่าสุดแสดงให้เห็นว่าสารสกัดจากเมทานอลของ Herba Cistanches สามารถเพิ่มประสิทธิภาพการสร้าง ATP ของไมโตคอนเดรียเฮอร์บาCistanchesยังได้รับการพิสูจน์ว่าเป็นสารต้านอนุมูลอิสระที่แข็งแกร่งและสารกำจัดอนุมูลอิสระในอวัยวะต่างๆ ช่วยลดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันและกิจกรรม ROS ในการศึกษาในร่างกาย 17, 18 ในการศึกษาล่าสุดที่ดำเนินการโดยห้องปฏิบัติการของเรา เราได้แสดงให้เห็นว่าเฮอร์บาCistanchesสารสกัดที่เป็นน้ำสามารถป้องกันความเป็นพิษที่เกิดจากซิมวาสแตตินในเซลล์กล้ามเนื้อโครงร่าง L6 ได้อย่างมีนัยสำคัญ รวมถึงการลดลงที่เกิดจากยาซิมวาสแตตินที่ฟื้นฟูโดยขึ้นกับขนาดยาในการผลิต ATP ในเซลล์ L6 ซึ่งบ่งชี้ถึงศักยภาพของเฮอร์บาCistanchesสารสกัดที่เป็นน้ำเพื่อป้องกันความเป็นพิษต่อกล้ามเนื้อที่เกิดจากสแตติน19. อย่างไรก็ตาม หลักฐานในร่างกายยังขาดอยู่

ดังนั้นเราจึงตั้งสมมติฐานว่าเฮอร์บาCistanchesสารสกัดจากน้ำ (HCE) อาจส่งผลดีต่อความเป็นพิษของกล้ามเนื้อที่เกิดจากซิมวาสแตติน ดังนั้น การศึกษานี้จึงมีวัตถุประสงค์เพื่อตรวจสอบว่าการใช้ HCE สามารถลดความเป็นพิษของกล้ามเนื้อที่เกิดจากซิมวาสแตตินโดยใช้แบบจำลองสัตว์ในร่างกายได้หรือไม่ และนอกจากนี้ HCE ยังสามารถให้ผลประโยชน์ในการลดไขมันในเลือดสูงที่เกิดจากอาหารที่มีไขมันสูงและคอเลสเตอรอลในตับสูงได้หรือไม่ จึงเป็นการลดขนาดยาซิมวาสแตตินที่ใช้

วัสดุและวิธีการ

การรับรองและสกัดวัสดุสมุนไพร

วัตถุดิบสมุนไพรของเฮอร์บาCistanches(Cistanche deserticola ที่มาจากมองโกเลียใน) ซื้อมาจาก Zi Xin ซัพพลายเออร์ที่มีชื่อเสียงในกวางโจว ประเทศจีน Herba Cistanches ได้รับการรับรองทางเคมีโดยใช้โครมาโตกราฟีแบบชั้นบางและโครมาโตกราฟีของเหลวสมรรถนะพิเศษตามตำรับยาจีน 201013 ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้19 ด้วยverbascosideและเอ็กไคนาโคไซด์(ซื้อจากสถาบันแห่งชาติเพื่อการควบคุมผลิตภัณฑ์ยาและชีวภาพ ประเทศจีน) เป็นเครื่องหมายเคมี เมื่อรับรองสารเคมี ตัวอย่างใบสำคัญสมุนไพรของเฮอร์บาCistanchesถูกฝากไว้ที่พิพิธภัณฑ์สถาบันการแพทย์แผนจีนที่มหาวิทยาลัยจีนแห่งฮ่องกง พร้อมหมายเลขตัวอย่างใบสำคัญ 2014-3434

เฮอร์บาCistanchesสารสกัดที่เป็นน้ำถูกเตรียมตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้19. โดยสังเขป แช่สมุนไพรดิบ 1 กก. เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ตามด้วยการสกัดสองครั้งโดยให้ความร้อนเป็นเวลา 1 ชั่วโมงภายใต้กรดไหลย้อนที่ 100 องศาโดยใช้น้ำกลั่น 10 เท่า จากนั้นนำสารสกัดที่เป็นน้ำ (HCE) มารวมกันและกรอง และสิ่งกรองถูกทำให้เข้มข้นภายใต้แรงดันที่ลดลงที่ 60 องศา สารสกัดเข้มข้น Te ถูกทำให้แห้งจนแห้ง เปอร์เซ็นต์ของผลผลิตเท่ากับ 50.1 เปอร์เซ็นต์โดยน้ำหนัก ผงสกัดทั้งหมดถูกบรรจุในสุญญากาศและเก็บไว้จนกว่าจะใช้

สัตว์ทดลอง.

Simvastatin ซื้อมาจาก SR Pharmasolutions Ltd. หนู Sprague Dawley เพศผู้ (180–200 ก.) และหนู C57Bl/6J เพศผู้ (8-อายุสัปดาห์) จัดหาให้โดย Laboratory Animal Services Centre, Chinese University of Hong Kong การทดลองกับสัตว์ได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการจริยธรรมการทดลองกับสัตว์แห่งมหาวิทยาลัยจีนแห่งฮ่องกง (Ref no. 12/074/MIS) วิธีการทดลองทั้งหมดดำเนินการตามแนวทางที่ได้รับอนุมัติซึ่งกำหนดโดยคณะกรรมการจริยธรรมการทดลองกับสัตว์ของมหาวิทยาลัยจีนแห่งฮ่องกง หนูทั้งหมด (สัตว์ 3 ตัวต่อกรง) และหนู (สัตว์ 5 ตัวต่อกรง) ทั้งหมดถูกเลี้ยงในกรงมาตรฐานปกติที่อุณหภูมิคงที่ 21 องศาโดยมีวัฏจักรแสง-ความมืด 12-ชม. กรงมาตรฐานแต่ละอันบรรจุแอสเพนเป็นวัสดุปูเตียง สัตว์ทั้งหมดได้รับอนุญาตให้เข้าถึงอาหารและน้ำโดยอิสระ

การศึกษาความเป็นพิษต่อกล้ามเนื้อที่เกิดจากสแตตินในหนูแรท

หนูทั้งหมดถูกสุ่มแบ่งออกเป็น 5 กลุ่ม (n=5–10) สัตว์ทั้งหมดอยู่ในอาหารเชาปกติ พวกเขายังได้รับน้ำกลั่นหรือซิมวาสแตตินทุกวัน และมีหรือไม่มีการบำบัด HCE ทางช่องท้อง สำหรับสัตว์ที่ต้องการให้ทั้งซิมวาสแตตินและ HCE HCE จะได้รับ 3 ชั่วโมงหลังการให้ยาซิมวาสแตติน เพื่อป้องกันปฏิกิริยาระหว่างสารเคมีกับยาสมุนไพรโดยตรง สารสกัดจากสมุนไพรหรือซิมวาสแตตินละลายในเมทิลเซลลูโลส 0.5 เปอร์เซ็นต์ในน้ำกลั่นที่ความเข้มข้นที่ทราบ ปริมาตรที่คำนวณไว้ล่วงหน้าถูกให้ในทางเดินอาหารแก่สัตว์แต่ละตัวตามน้ำหนักของแต่ละบุคคล เพื่อให้ปริมาตรที่คำนวณได้มีปริมาณของขนาดยาที่เสนอที่ต้องการ รายละเอียดของกลุ่มเหล่านี้มีดังนี้:

กลุ่ม ก) อาหารธรรมดาและน้ำกลั่น (กลุ่มควบคุมปกติ)

กลุ่ม b) อาหารปกติและซิมวาสแตติน (640 มก./กก.)

กลุ่ม c) อาหารปกติ-เชา บวก ซิมวาสแตติน (640 มก./กก.) บวก HCE ขนาดต่ำ (1.1 ก./กก. ของสัตว์)

กลุ่ม d) อาหารปกติ-เชา บวก ซิมวาสแตติน (640 มก./กก.) บวก HCE ปริมาณสูง (2.2 ก./กก. ของสัตว์)

กลุ่ม e) อาหารแบบธรรมดาบวก HCE ปริมาณสูง (2.2 กรัม/กิโลกรัมของสัตว์)

บันทึกการบริโภคอาหารทุกวันและวัดน้ำหนักตัวสัปดาห์ละสองครั้ง ให้การรักษาเป็นเวลา 4 สัปดาห์ หลังจากนั้น สัตว์ถูกวางยาสลบโดยใช้ของผสมของคีตามีน (100 มก./กก.) และไซลาซีน (10 มก./กก.) ในช่องท้อง เลือดถูกเจาะโดยหัวใจและปล่อยให้เป็นก้อน จากนั้นพลาสมาถูกแยกออกโดยการหมุนเหวี่ยง (3,000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 10 นาที) กล้ามเนื้อต่างๆ (quadriceps, gastrocnemius, soleus, tibialis anterior และ extensor digitorumlongus) ถูกตัดออกและเก็บไว้ที่ −80 องศาจนกว่าจะวิเคราะห์

การวัดค่าไคเนสของครีเอทีนในพลาสมา กิจกรรมของ Plasma creatine kinase (CK) ถูกกำหนดโดยใช้ Stanbio CK Liqui-UV® kit (2910-430, Stanbio Laboratory, USA) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต

การวัดกล้ามเนื้อกลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส กลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดสของกล้ามเนื้อ (GPx) วัดโดยใช้ชุดเครื่องมือที่มีขายทั่วไป (703102, Cayman Chemical, USA) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต โดยสรุป เนื้อเยื่อของกล้ามเนื้อถูกล้างด้วย PBS ที่ pH 7.4 เพื่อกำจัดเซลล์เม็ดเลือดแดงใดๆ และทำให้เป็นเนื้อเดียวกันในบัฟเฟอร์ไลซิสเย็น 5-10 มล. หลังจากนั้นโฮโมจิเนตถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 กรัม เป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 องศา จากนั้นนำ supernatant ออกและทดสอบกิจกรรม GPx โดยใช้ชุดเครื่องมือเชิงพาณิชย์

การเตรียมไมโตคอนเดรียของกล้ามเนื้อและเศษส่วนไซโตซอล Mitochondrial และ cytosolic Fractions จากตัวอย่างกล้ามเนื้อถูกเตรียมโดยใช้ Mitochondria Isolation Kit (MITOISO, Sigma-Aldrich Corporation, USA) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต โดยสังเขป ตัวอย่างกล้ามเนื้อสดได้รับการบำบัดล่วงหน้าด้วยเนยสกัด หั่นเป็นชิ้นเล็กๆ และทำให้เป็นเนื้อเดียวกันในบัฟเฟอร์การสกัด จากนั้นจึงทำการปั่นแยกเนื้อเยื่อที่เป็นเนื้อเดียวกัน ส่วนลอยเหนือตะกอนถูกรวบรวมและสงวนไว้สำหรับการวิเคราะห์เศษส่วนเซลล์ จากนั้น เม็ดไมโตคอนเดรียจะถูกล้างและหมุนเหวี่ยงอีกครั้ง และใช้สำหรับการวิเคราะห์เศษส่วนของไมโตคอนเดรีย

การวัดค่าชนิดออกซิเจนปฏิกิริยาไมโตคอนเดรียของกล้ามเนื้อ (ROS) ROS ถูกวัดด้วยโปรโตคอลที่ดัดแปลงจากเอกสารก่อนหน้า20 โดยย่อ ROS ถูกวัดจากเศษส่วนของไมโตคอนเดรีย (โปรตีน 50 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) โดยใช้สารละลาย DCFDA (C6827, Invitrogen, USA) ของผสมถูกบ่มที่ 37 องศา เป็นเวลา 10 นาทีในความมืด หลังจากนั้น มันถูกบ่มด้วยสารละลายซับสเตรต (10 มิลลิโมลาร์ ไพรูเวต, 15 มิลลิโมลาร์ มาเลต) สำหรับการกระตุ้นด้วยแสง ความเข้มของการเรืองแสงถูกวัดทุก 5 นาทีเป็นเวลา 60 นาทีโดย BioRad Fluostar Optima 413-101 BMG Fluorescent Microplate Reader ที่การกระตุ้น 485 nm และการปล่อย 520nm ความเข้มของการเรืองแสงถูกคำนวณสำหรับการวัดการสร้าง ROS

ศักยภาพของเยื่อไมโทคอนเดรียของกล้ามเนื้อ ศักยภาพของเยื่อหุ้มไมโตคอนเดรียของเศษส่วนไมโตคอนเดรียจากตัวอย่างกล้ามเนื้อถูกกำหนดตามโปรโตคอลของผู้ผลิต (MITOISO, Sigma-Aldrich Corporation, USA) ขั้นตอนนี้เป็นการสอบวิเคราะห์แบบจุดตายตัวซึ่งวัดการรับเข้าของ JC-1 ด้วยการก่อตัวของมวลรวม J โดยย่อ สารแขวนลอยไมโตคอนเดรียถูกเจือจางเพื่อให้มีโปรตีน 20 ไมโครกรัมและถูกบ่มด้วยการย้อม JC-1 เป็นเวลา 7 นาทีที่อุณหภูมิห้อง 7-นาทีนี้เป็นเวลาที่ปรับให้เหมาะสมและตรวจสอบโดยผู้ผลิตโดยใช้สารประกอบต่างๆ (ตามที่ระบุไว้ในโปรโตคอลของผู้ผลิต) เนื่องจากการเรืองแสงที่สังเกตได้ของสารละลายจะเพิ่มขึ้นสู่ที่ราบสูงหลังจาก 5-10 นาที ตามด้วยการลดลงอย่างมากใน การเรืองแสง JC-1 เนื่องจากการทำให้สมดุลของความเข้มข้นของ JC-1 ภายในและภายนอกเมทริกซ์ยล ความเข้มของการเรืองแสงถูกวัดโดย BioRad Fluostar Optima 413-101 BMG Fluorescent Microplate Reader ที่การกระตุ้น 490nm และการปล่อย 590nm ความเข้มของการเรืองแสงถูกคำนวณสำหรับการวัดการไล่ระดับสีที่อาจเกิดขึ้น

การตรวจเนื้อเยื่อวิทยาและการอักเสบของกล้ามเนื้อ อิมมูโนฮิสโตเคมีของเซลล์อักเสบภายในกล้ามเนื้อได้รับการประเมินโดยการย้อมสี CD68 และ CD163 ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ 21–23 ส่วน Parafn ขนาด 5 ไมครอนถูกตัด ยึดติดกับสไลด์แก้ว Superfrost™ Plus (Menzel-Gläser ประเทศเยอรมนี) แอนติบอดี CD68, ED1 และ CD163 ของหนูเมาส์ปฐมภูมิ, ED2, (Bio-Rad, USA) ถูกนำไปใช้กับส่วนที่ 1:100 การเจือจาง EnVision™ Systems ตรวจพบการย้อมสีจำเพาะ (ดาโก, เดนมาร์ก) โดยใช้แอนติบอดีทุติยภูมิ, EnVision-HRP โพลีเมอร์-คอนจูเกต IgG ต้านเมาส์ที่การเจือจาง 1:200 และตรวจพบโดยใช้สารละลาย DAB (ดาโก, เดนมาร์ก) ตามด้วย โดยการย้อมทับด้วยฮีมาทอกซิลิน จากนั้นจึงประกอบชิ้นส่วนในไดบิวทิล-พทาเลตในฮิสโตน (DPX) การปรากฏตัวของนิวโทรฟิลในกล้ามเนื้อถูกตรวจพบโดยอิมมูโนฮิสโตเคมีเชิงปริมาณโดยใช้ซอฟต์แวร์ ImageJ

การวิเคราะห์การแสดงออกของยีนของกล้ามเนื้อ การทดสอบ PCR ซึ่งสร้างโปรไฟล์ยีนที่เกี่ยวข้องกับความเครียดออกซิเดชันโดยใช้ Rat Oxidative Stress และ Antioxidant Defense PCR-arrays (PARN-065Z, SABiosciences, Frederick, USA) อาร์เรย์ PCR ดำเนินการตามคำแนะนำของผู้ผลิต โดยสังเขป RNA ทั้งหมดถูกแยกออกโดยการจับคัดเลือกกับเมมเบรนที่มีซิลิกาเจลเป็นหลักหลังจากการสลายและการทำให้เป็นเนื้อเดียวกันของตัวอย่างกล้ามเนื้อในบัฟเฟอร์กัวนิดีนไทโอไซยาเนตที่ทำให้เสียสภาพ (RNeasy kit, Qiagen) RNA ถูกแปลงกลับเป็น cDNA โดยใช้ RT2 First Strand Kit (SABiosciences, Frederick, USA) cDNA นี้ถูกเพิ่มไปยัง RT2 SYBR Green qPCR Master Mix (SABiosciences, Frederick, USA) ถัดไป แต่ละตัวอย่างถูกแบ่งส่วนตามความเครียดออกซิเดชันของหนูและ PCR-arrays ป้องกันสารต้านอนุมูลอิสระ (SABiosciences, Frederick, USA) ขั้นตอนทั้งหมดดำเนินการตามโปรโตคอลของผู้ผลิต

การศึกษาภาวะไขมันในเลือดสูงที่เกิดจากอาหารที่มีไขมันสูงและภาวะไขมันพอกตับในหนูทดลอง

หนูทั้งหมดถูกสุ่มแบ่งออกเป็น 5 กลุ่ม (n=8–10) และได้รับสิ่งต่อไปนี้: กลุ่ม a) อาหารปกติ-chow (ตารางที่ 1); กลุ่ม b ถึง e) อาหารที่มีไขมันสูง (มีไขมัน 21 เปอร์เซ็นต์และคอเลสเตอรอล 0.15 เปอร์เซ็นต์) (ตารางที่ 2) ให้อาหารเป็นเวลา 8 สัปดาห์เพื่อให้สัตว์ทำให้เกิดโรคอ้วน หลังจาก 8 สัปดาห์ กลุ่มที่ได้รับอาหารที่มีไขมันสูงทั้งหมดจะได้รับน้ำกลั่น หรือซิมวาสแตตินทุกวัน และหรือการบำบัดด้วย HCE ในช่องทางเดินอาหาร 3 ชั่วโมงหลังการให้ยาซิมวาสแตติน สารสกัดจากสมุนไพรหรือซิมวาสแตตินละลายในเมทิลเซลลูโลส 0.5 เปอร์เซ็นต์ (ซิกมา-อัลดริช คอร์ปอเรชั่น สหรัฐอเมริกา) ในน้ำกลั่นที่ระดับความเข้มข้นที่ทราบ ปริมาตรที่คำนวณไว้ล่วงหน้าถูกให้ในทางเดินอาหารแก่สัตว์แต่ละตัวตามน้ำหนักของแต่ละบุคคล เพื่อให้ปริมาตรที่คำนวณได้มีปริมาณของขนาดยาที่เสนอที่ต้องการ รายละเอียดของกลุ่มเหล่านี้มีดังนี้:

กลุ่ม a) อาหารเชาปกติบวกน้ำกลั่น

กลุ่ม b) อาหารไขมันสูงบวกน้ำกลั่น

กลุ่ม c) อาหารไขมันสูงร่วมกับซิมวาสแตติน (50 มก./กก.)

กลุ่ม d) อาหารไขมันสูงบวก HCE (4.4 กรัม/กก.)

กลุ่ม e) อาหารที่มีไขมันสูงร่วมกับซิมวาสแตติน (25 มก./กก.) บวก HCE (4.4 ก./กก.)

บันทึกการบริโภคอาหารทุกวันและวัดน้ำหนักตัวสัปดาห์ละสองครั้ง เมื่อสิ้นสุดการศึกษา 16-สัปดาห์ หนูทั้งหมดถูกสังเวยหลังจากการอดอาหารข้ามคืน 16-ชั่วโมง สัตว์ถูกทำให้หมดความรู้สึกโดยของผสมของคีตามีน (100 มก./กก.) และไซลาซีน (10 มก./กก.) ในช่องท้อง เลือดถูกเจาะโดยหัวใจและปล่อยให้เป็นก้อน พลาสมาถูกแยกออกโดยการหมุนเหวี่ยง (3,000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 10 นาที) ตับถูกตัดออกและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ −80 องศาจนกระทั่งวิเคราะห์

การวัดไขมันในพลาสมาและตับ

ไตรกลีเซอไรด์ในพลาสมา, คอเลสเตอรอล (11488872216 และ 11489232216, Roche Diagnostics, สวิตเซอร์แลนด์), คอเลสเตอรอลไลโปโปรตีนความหนาแน่นสูงและความหนาแน่นต่ำ (L-Type HDL-C และ L-Type LDL-C, Wako Pure Chemicals Industries, Japan) ความเข้มข้นถูกวัดโดย วิธีเอนไซม์โดยใช้ชุดอุปกรณ์ที่มีจำหน่ายทั่วไปตามคำแนะนำของผู้ผลิต กิจกรรมของพลาสม่า creatine kinase (CK) ถูกกำหนดโดยใช้ Stanbio CK Liqui-UV® kit (2910-430, Stanbio Laboratory, USA) ไขมันในตับทั้งหมดถูกกำหนดแบบกราวิเมตริกหลังจากการสกัดด้วยวิธีการของไบลห์และไดเออร์24 ไขมันในตับแต่ละตัวถูกหาปริมาณด้วยเอนไซม์ (ตามที่อธิบายข้างต้น) หลังจากการละลายในไอโซโพรพานอล (Sigma-Aldrich, USA)25

การตรวจชิ้นเนื้อตับและการอักเสบ การย้อมสีฮีมาทอกซิลินและอีโอซิน (การย้อมสี H&E) ทิชชู่ที่ฝังพาราฟิน (5 ไมโครเมตร) ถูกตัดด้วยไมโครโทมและวางบนสไลด์ไมโครสโคป SuperFrost Plus® (Thermo Scientific, USA) ส่วนต่างๆ อยู่ภายใต้การย้อมสี H&E ตามวิธีการของ Harris et al 26 และติดตั้งด้วยไดบิวทิล-พทาเลตในฮิสโตน (DPX) (ซิกมา-อัลดริช สหรัฐอเมริกา)25.

Mac-3 การย้อมสีและการหาปริมาณ เนื้อเยื่อที่ฝังพาราฟินหนา (5 ไมโครเมตร) ถูกตัดโดยใช้ไมโครโทมและวางบนสไลด์ไมโครสโคป SuperFrost Plus® (Thermo Scientific, USA) ดำเนินการดึงแอนติเจนตามด้วยการบล็อกด้วย Peroxidase Block (Dako Cytomation, เดนมาร์ก) แอนติบอดีต่อ Mac-3 แอนติบอดีสำหรับเมาส์ปฐมภูมิที่ทำให้บริสุทธิ์ (BD Pharmingen, USA) ถูกนำไปใช้กับส่วนที่เจือจาง 1:50 ตรวจพบการย้อมสีเฉพาะโดยใช้ระบบ EnVision™ (ดาโก เดนมาร์ก) สไลด์ถูกบ่มด้วยแอนติบอดีทุติยภูมิ, EnVision-HRP แอนติ-กระต่าย IgG ที่คอนจูเกตโพลีเมอร์ที่การเจือจาง 1:200 ตรวจพบ Mac-3 โดยใช้สารละลาย DAB (ดาโก เดนมาร์ก) และย้อมด้วยฮีมาทอกซิลิน จากนั้นส่วนต่างๆ จะถูกติดตั้งใน DPX การมีอยู่ของแมคโครฟาจในตับถูกตรวจพบโดยอิมมูโนฮิสโตเคมีเชิงปริมาณโดยใช้ซอฟต์แวร์ ImageJ

การวิเคราะห์ทางสถิติ. ความแตกต่างระหว่างกลุ่มการรักษาและกลุ่มควบคุมได้รับการทดสอบด้วยการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว (ANOVA) ตามด้วยการทดสอบเปรียบเทียบหลายรายการของ Bonferroni ภายหลัง การวิเคราะห์ทางสถิติทั้งหมดดำเนินการโดยใช้ GraphPad Prism เวอร์ชัน 60 (GraphPad, USA) ความน่าจะเป็นของ p<0.05 would="" be="" considered="" statistically="">

ผลลัพธ์

ผลกระทบของเฮอร์บาCistancheE เกี่ยวกับความเป็นพิษของกล้ามเนื้อที่เกิดจากซิมวาสแตตินในหนูแรท การวัดน้ำหนักของกล้ามเนื้อและการวัดค่าไคเนสของครีเอทีนในพลาสมา แยกกล้ามเนื้อ 5 ประเภท (quadriceps, gastrocnemius, soleus, tibialis anterior และ extensor digitorum longus muscle) ออกจากหนูที่ได้รับการรักษาทั้งหมด ผลของการรักษาแบบต่างๆ ต่อน้ำหนักกล้ามเนื้อแสดงไว้ในรูปที่ 1a Simvastatin (640 มก./กก.) ชักนำให้น้ำหนักลดลงอย่างมีนัยสำคัญในกล้ามเนื้อ quadriceps, gastrocnemius และ tibialis ในหนู ในขณะที่การลดลงเหล่านี้ได้รับการฟื้นฟูอย่างมีนัยสำคัญโดย HCE ในกล้ามเนื้อ quadriceps และ gastrocnemius ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา แม้ว่าเฮอร์บาCistancheE ใช้แนวโน้มที่จะฟื้นฟูน้ำหนักของกล้ามเนื้อหน้าแข้งในหนูที่ได้รับการรักษาด้วยซิมวาสแตติน ไม่มีกลุ่มการรักษาใดที่มีนัยสำคัญทางสถิติ ไม่พบผลอย่างมีนัยสำคัญของการรักษา HCE อย่างเดียวต่อน้ำหนักกล้ามเนื้อเมื่อเปรียบเทียบกับหนูควบคุม (รูปที่ 1a)

รูปที่ 1b แสดงผลของการรักษาต่างๆ ต่อระดับครีเอทีนไคเนสในพลาสมา (CK) ในหนูแรท Simvastatin กระตุ้นการทำงานของ creatine kinase ที่เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในหนูแรท ซึ่งลดลงอย่างมีนัยสำคัญโดยการรักษาร่วมกับ HCE ในทั้งสองขนาด นอกจากนี้ยังไม่มีผลอย่างมีนัยสำคัญของการรักษา HCE เพียงอย่างเดียวต่อระดับ CK เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม เนื่องจาก gastrocnemius ดูเหมือนจะไวต่อการรักษาด้วย simvastatin และเป็นกล้ามเนื้อที่ใหญ่ที่สุดที่แยกได้จากมวล เราจึงเลือกกล้ามเนื้อนี้สำหรับการวิเคราะห์เพิ่มเติม รวมทั้งการวัดกล้ามเนื้อกลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส (GPx) การวัด mitochondrial MMP และ ROS และการตรวจเนื้อเยื่อวิทยาของกล้ามเนื้อและการประเมินการอักเสบ .

การวัดกล้ามเนื้อกลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส (GPx) ระดับกลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดสของกล้ามเนื้อถูกวัดและแสดงไว้ในรูปที่ 2a การบริหาร Simvastatin ทำให้เกิดแนวโน้มในการลดการวัดของกล้ามเนื้อกลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส (GPx) ในหนูแรท อย่างไรก็ตาม HCE มีแนวโน้มที่จะทำให้การลด GPx ของกล้ามเนื้อที่เกิดจากซิมวาสแตตินดีขึ้นที่ขนาดยา 1.1 ก./กก. และ 2.2 ก./กก. ยังไม่มีผลอย่างมีนัยสำคัญของการรักษา HCE เพียงอย่างเดียวในระดับ GPx ของกล้ามเนื้อเมื่อเปรียบเทียบกับหนูที่ควบคุมปกติ

Mitochondrial Membrane Potential (MMP) และการวัด ROS การรักษาด้วย Simvastatin (640 มก./กก.) ทำให้เกิดการลดลงอย่างมีนัยสำคัญใน MMP ของกล้ามเนื้อ (รูปที่ 2b) การลดลงนี้ดีขึ้นตามขนาดยาในหนูที่ได้รับการบำบัดร่วมของ HCE และซิมวาสแตติน (รูปที่ 2b) ในทางกลับกัน ที่น่าสนใจคือ กลุ่มที่บำบัดด้วย simvastatin เพียงอย่างเดียวมีระดับ ROS ของไมโตคอนเดรียของกล้ามเนื้อลดลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุมปกติ (รูปที่ 2c) อย่างไรก็ตาม การรักษาด้วย HCE ให้กับหนูที่ได้รับ simvastatin มีแนวโน้มขึ้นอยู่กับปริมาณยาเพื่อฟื้นฟูระดับ ROS ของไมโตคอนเดรียของกล้ามเนื้อให้อยู่ในระดับปกติ นอกจากนี้ยังไม่มีผลอย่างมีนัยสำคัญของการรักษา HCE เพียงอย่างเดียวในหนูเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมปกติสำหรับการวัด MMP และ ROS ของไมโตคอนเดรีย

การตรวจเนื้อเยื่อวิทยาและการอักเสบของกล้ามเนื้อ กล้ามเนื้อ Gastrocnemius จากหนูที่ได้รับการบำบัดที่ต่างกันได้รับการวิเคราะห์เพิ่มเติมทางจุลกายวิภาคและส่วนที่เป็นสีแทนจะแสดงในรูปที่ 3a สัตว์กลุ่มควบคุมแสดงส่วนเนื้อเยื่อปกติของกล้ามเนื้อปกติ ในทางตรงกันข้าม ส่วน H&E จากสัตว์ที่รักษาด้วยซิมวาสแตตินเผยให้เห็นการแทรกซึมของตัวบ่งชี้การอักเสบ (ลูกศรสีเหลือง) ซึ่งลดลงอย่างมีนัยสำคัญในส่วนกล้ามเนื้อของหนูที่ได้รับยาซิมวาสแตตินและ HCE ร่วมกัน การวิเคราะห์ทางอิมมูโนฮิสโตเคมียังถูกดำเนินการสำหรับการมีอยู่ของมาโครฟาจ CD68 และ CD163 ในรูปที่ 4a และ 5a ตามลำดับ ด้วยการหาปริมาณของมาโครฟาจตามลำดับที่แสดงไว้ในรูปที่ 4b และ 5b การวิเคราะห์ทางอิมมูโนฮิสโตเคมีของกล้ามเนื้อเผยให้เห็นการมีอยู่ของมาโครฟาจ (CD68) ในหนูที่ได้รับการรักษาด้วยซิมวาสแตติน (การทำสีน้ำตาล) ซึ่งลดลงอย่างมีนัยสำคัญในหนูที่ได้รับการบำบัดร่วมด้วย HCE ทั้งสองขนาด (รูปที่ 4b) นอกจากนี้ยังไม่พบการอักเสบที่มีนัยสำคัญในสัตว์ที่ได้รับการรักษาด้วย HCE เพียงอย่างเดียว ในทำนองเดียวกัน การวิเคราะห์อิมมูโนฮิสโตเคมีของกล้ามเนื้อเผยให้เห็นการมีอยู่ของ CD163-มาโครฟาจที่เป็นบวกในหนูที่ได้รับการรักษาด้วยซิมวาสแตติน (การทำสีน้ำตาล) ซึ่งลดลงอย่างมีนัยสำคัญในหนูที่ได้รับการบำบัดร่วมด้วย HCE ที่ 2.2 กรัม/กิโลกรัม (รูปที่ 5b ). นอกจากนี้ยังไม่พบการอักเสบที่มีนัยสำคัญในสัตว์ที่ได้รับการรักษาด้วย HCE เพียงอย่างเดียว

การวิเคราะห์การแสดงออกของยีนของกล้ามเนื้อ เพื่อตรวจสอบผลของซิมวาสแตตินและ HCE ต่อยีนที่เกี่ยวข้องกับความเครียดออกซิเดชันภายในกล้ามเนื้อ การทดสอบ PCR ซึ่งสร้างโปรไฟล์ยีนที่เกี่ยวข้องกับความเครียดออกซิเดชันได้ดำเนินการโดยใช้ Rat Oxidative Stress และ Antioxidant Defense PCR-array ยีนที่ได้รับผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญจากการรักษาด้วย simvastatin ได้รับการวิเคราะห์และนำเสนอในรูปที่ 6 สำหรับโปรไฟล์การแสดงออกของยีนที่ควบคุมสารต้านอนุมูลอิสระ หนูที่ได้รับ simvastatin (640 มก./กก.) เพิ่มการแสดงออกของยีนที่ควบคุมสารต้านอนุมูลอิสระ Tese ประกอบด้วยกลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส (GPx) GPx1 และ GPx7 และเปอร์ออกซิเดสอื่น ๆ รวมถึง Serpinb1b และคลับ (รูปที่ 6a) HCE ที่ขนาดยาทั้งสอง (1.1 หรือ 2.2 กรัม/กก.) ลดการเพิ่มขึ้นของ GPxs และเปอร์ออกซิเดสที่เกิดจากซิมวาสแตตินเหล่านี้ให้อยู่ในระดับปกติ ในทางกลับกัน การรักษาด้วย HCE เพียงอย่างเดียวเพิ่มระดับการแสดงออกของ GPx1 อย่างมีนัยสำคัญ เกี่ยวกับการแสดงออกของยีนที่ควบคุมเมแทบอลิซึมของ ROS ซิมวาสแตตินกระตุ้นการแสดงออกของยีนเมแทบอลิซึมของซูเปอร์ออกไซด์อื่นๆ อย่างมีนัยสำคัญ รวมถึง Cyba, Ncf1, Ncf2, Scd1 และ Ucp2 ในทำนองเดียวกัน HCE ในทั้งสองขนาดช่วยลดการเพิ่มขึ้นเหล่านี้ได้อย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 6b) นอกจากนี้ ซิมวาสแตตินยังกระตุ้นการแสดงออกของยีนที่ตอบสนองต่อความเครียดออกซิเดชัน ซึ่งรวมถึง Apoe, Ccl5 และ Txn1 ในขณะที่การแสดงออกเหล่านี้ลดลงอย่างมีนัยสำคัญในสัตว์ที่ได้รับการบำบัดร่วมด้วย HCE ทั้งสองขนาด (รูปที่ 6c) ในทางกลับกัน ซิมวาสแตตินทำให้การแสดงออกของยีน Txnip ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ ไม่มีผลอย่างมีนัยสำคัญของ HCE ต่อการลดลงที่เกิดจากซิมวาสแตตินในการแสดงออกของยีน Txnip (รูปที่ 6c) ซิมวาสแตตินยังออกแรงเพิ่มขึ้นอย่างมากในการแสดงออกของยีนที่ควบคุมการขนส่งออกซิเจนรวมถึง Slc38a1 และ Vim การรักษาร่วม HCE ลดการแสดงออกของยีนเหล่านี้ในทั้งสองขนาด (รูปที่ 6d)

ผลของการใช้ Simvastatin และ HCE ร่วมกันต่อการรับประทานอาหารและน้ำหนักตัวในหนูทดลอง รูปที่ 7a แสดงการรับประทานอาหารในแต่ละวันของหนูเมาส์สำหรับกลุ่มการรักษาทั้งหมด อาหารที่มีไขมันสูงทำให้การบริโภคอาหารประจำวันของสัตว์เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับสัตว์ที่เลี้ยงด้วยอาหาร (p<0.001). there="" was="" however="" no="" significant="" effect="" of="" the="" herb="" or="" drug="" treatments="" among="" all="" high-fat-fed="" groups="" (fig.="">

การวัดน้ำหนักตัวรายสัปดาห์. หลังจาก 16 สัปดาห์ของการให้อาหารที่มีไขมันสูง สัตว์ที่เลี้ยงด้วย HF จะมีน้ำหนักมากกว่าสัตว์ที่เลี้ยงด้วยอาหารเจาอย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 7b) อย่างไรก็ตาม ไม่มีผลอย่างมีนัยสำคัญระหว่างหนูที่ได้รับ HF กับกลุ่มที่ได้รับ HF-fed ที่ได้รับการบำบัดทั้งหมด นอกจากนี้ยังไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างหนูที่ได้รับ HF-fed ที่ได้รับการบำบัดร่วมของ simvastatin และ HCE กับหนูที่ได้รับ HF-fed ที่ได้รับ HCE หรือการรักษาด้วย simvastatin เพียงอย่างเดียว (รูปที่ 7b)

ผลของการใช้ Simvastatin และ HCE ร่วมกันต่อภาวะไขมันในเลือดสูงและการตีบของตับในหนูทดลอง การวัดการทำงานของไขมันในพลาสมาและครีเอทีนไคเนส ระดับไขมันในพลาสมาของหนูทุกตัวแสดงในรูปที่ 8 เมื่อเปรียบเทียบกับหนูที่ได้รับอาหารปกติแล้ว หนูที่ได้รับ HF มีระดับคอเลสเตอรอลรวมในพลาสมา (TC) สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งลดลงอย่างมีนัยสำคัญในทุกกลุ่มการรักษา (รูปที่ 8a) . หนูที่ได้รับ HF ที่ได้รับการรักษาด้วย simvastatin และ HCE มี TC ในพลาสมาที่ต่ำกว่าอย่างมีนัยสำคัญ เมื่อเทียบกับสัตว์ HF ที่ได้รับ simvastatin เพียงอย่างเดียวหรือสัตว์ HF ที่ได้รับ HCE เพียงอย่างเดียว (p<0.001 and=""><0.01, respectively)="" (fig.="" 8a).="" no="" significant="" difference="" was="" observed="" between="" hf-fed="" mice="" receiving="" hce="" alone="" vs="" simvastatin="" alone="" treatment="" group,="" suggesting="" hce="" has="" comparable="" effects="" as="" simvastatin.="" besides,="" hf-fed="" mice="" also="" had="" significantly="" higher="" plasma="" triglyceride="" (tg)="" levels="" compared="" to="" mice="" given="" a="" normal="" chow="" diet=""><0.05) (figure="" 8b).="" there="" was="" a="" trend="" for="" a="" reduction="" in="" simvastatin="" treatment="" alone="" group="" on="" plasma="" tg="" in="" hf-fed="" animals,="" though="" this="" did="" not="" reach="" statistical="" significance.="" however,="" hce="" treatment,="" with="" or="" without="" simvastatin="" co-treatment="" significantly="" reduced="" plasma="" tg="" compared="" to="" control="" hf-fed="" animals=""><0.001 and=""><0.01, respectively).="" when="" comparing="" between="" simvastatin="" treatment="" alone="" group="" with="" simvastatin="" co-treatment="" with="" hce="" group,="" hce="" co-treatment="" with="" simvastatin="" had="">

TG ในพลาสมาที่ต่ำกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับหนูที่ได้รับ HF ที่ได้รับการรักษาด้วย simvastatin เพียงอย่างเดียว (p<0.01) (fig.="" 8b).="" no="" significant="" difference="" was="" observed="" between="" hf-fed="" mice="" receiving="" hce="" alone="" vs="" the="" simvastatin="" treatment="" group,="" though="" hce="" had="" a="" slightly="" better="" reduction="" in="" tg="" levels.="" in="" addition,="" high-fat-diet-induced="" significant="" increase="" in="" plasma="" high-density="" lipoprotein="" (hdl)="" cholesterol="" and="" plasma="" low-density="" lipoprotein="" (ldl)="" cholesterol="" in="" mice="" compared="" to="" normal="" chow-fed="" animals="" (fig.="" 8c="" and="" d).="" simvastatin="" treatment="" alone="" significantly="" reduced="" both="" lipids="" in="" high-fat-fed="" mice.="" hce="" treatment,="" with="" or="" without="" simvastatin="" co-treatment="" also="" significantly="" reduced="" both="" types="" of="" plasma="" lipids="" compared="" to="" mice="" given="" hf="" diet="" alone.="" there="" was="" no="" significant="" difference="" in="" both="" lipids="" among="" all="" treatment="" groups.="" figure="" 8e="" showed="" the="" effect="" of="" different="" treatments="" on="" plasma="" creatine="" kinase="" (ck)="" levels.="" interestingly,="" hf="" diet-induced="" significant="" increase="" in="" plasma="" ck="" levels="" in="" mice="" compared="" to="" normal-chow-fed="" mice="" (fig.="" 8e).="" hce="" treatment,="" with="" or="" without="" the="" co-treatment="" of="" simvastatin="" significantly="" reduced="" plasma="" ck="" levels="" compared="" to="" mice="" given="" hf="" diet="" alone=""><0.01 and=""><0.01, respectively).="" simvastatin="" treatment="" alone="" also="" significantly="" reduced="" the="" high-fat="" diet-induced="" increase="" in="" plasma="" ck="" levels.="" there="" was="" also="" no="" significant="" difference="" in="" plasma="" ck="" levels="" among="" all="" active="" treatment="" groups="">การวัดไขมันไอเวอร์

ผลกระทบของกลุ่มการรักษาต่างๆ ต่อตับที่เกิดจาก HF (ตับขยาย) สัมพันธ์กับการลดปริมาณไขมันในตับทั้งหมดอย่างมีนัยสำคัญ โดยแสดงเป็นมิลลิกรัมของไขมันต่อตับ (รูปที่ 9a) ปริมาณไขมันในตับทั้งหมดสูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในหนูที่ได้รับ HF เมื่อเทียบกับหนูที่ได้รับอาหารปกติ (3.0- เท่าที่สูงขึ้น p<0.001). simvastatin="" exerted="" no="" significant="" effect="" on="" the="" high-fat="" diet-induced="" increase="" in="" total="" liver="" lipid.="" interestingly,="" hce="" significantly="" reduced="" such="" a="" diet-induced="" increase="" in="" liver="" lipid=""><0.05). on="" the="" other="" hand,="" simvastatin="" co-treatment="" with="" hce="" exerted="" a="" trend="" to="" reduce="" the="" liver="" lipid="" content="" though="" did="" not="" reach="" statistical="" significance="" (p="0.15)." however,="" when="" comparing="" the="" liver="" lipid="" content="" among="" all="" treatment="" groups,="" no="" significant="" difference="" was="" observed="" among="" all="">

ดังที่แสดงไว้ในรูปที่ 9b และ c การวัดค่าคอเลสเตอรอลรวมในตับ (TC) และไตรกลีเซอไรด์ในตับ (TG) พบว่าหนูที่ได้รับ HF ที่ได้รับอาหาร HF มีระดับไขมันทั้งสองในระดับสูงเมื่อเทียบกับหนูที่ได้รับอาหารปกติ (เช่น 3.{{4} } TC เพิ่มขึ้นเท่าตัว p<0.001; and="" 3.4-fold="" increase="" in="" tg,=""><0.001). simvastatin="" treatment="" significantly="" reduced="" liver="" total="" cholesterol="" levels=""><0.05) but="" not="" triglyceride="" levels.="" on="" the="" other="" hand,="" hce="" treatment,="" with="" or="" without="" simvastatin="" co-treatment,="" significantly="" reduced="" both="" liver="" total="" cholesterol="" and="" triglyceride="" levels="" in="" high-fat-fed="" mice.="" when="" comparing="" the="" effects="" among="" all="" groups,="" we="" observed="" no="" significant="" difference="" in="" liver="" total="" cholesterol,="" but="" there="" was="" a="" significant="" reduction="" in="" liver="" tg="" for="" the="" hce="" treatment="" group="" as="" compared="" to="" the="" simvastatin="" treatment="" group="" (fig.="" 9b="" and="">

การประเมินการอักเสบของตับ การย้อมสีอิมมูโนฮิสโทเคมีถูกดำเนินการเพื่อย้อมสำหรับการมีอยู่ของมาโครฟาจ (Mac-3) (รูปที่ 10a) การวิเคราะห์ทางอิมมูโนฮิสโตเคมีของตับเผยให้เห็นการมีอยู่ของ Mac-3 ทั้งในหนูที่เลี้ยงด้วยไขมันสูงและปกติที่เลี้ยงด้วยอาหาร (สีน้ำตาล) การอักเสบนี้เพิ่มขึ้นอีกในสัตว์ที่ได้รับยาซิมวาสแตติน แม้ว่าการเพิ่มขึ้นดังกล่าวไม่มีนัยสำคัญทางสถิติ ที่น่าสนใจคือ การรักษาด้วย HCE ที่มีหรือไม่มีการรักษาร่วมด้วย simvastatin ช่วยลดการอักเสบในหนูที่ได้รับอาหารที่มีไขมันสูงได้อย่างมีนัยสำคัญ เมื่อเปรียบเทียบระหว่างกลุ่มการรักษาทั้งหมด การรักษาด้วย HCE ที่มีหรือไม่มีการรักษาร่วมด้วย simvastatin มีการอักเสบที่ต่ำกว่าอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับกลุ่มที่ได้รับ simvastatin (p<0.001 and=""><0.001, respectively).="" these="" data="" are="" also="" presented="" as="" percentage="" areas="" in="" fig.="">

อ่านต่อไป ...