ตอนที่ Ⅱ: ผลของสารสกัด Cistanche Tubulosa ต่อการทำงานของระบบสืบพันธุ์เพศชายในหนูเบาหวานที่กระตุ้นด้วยสเตรปโตโซโตซิน-นิโคตินาไมด์

ติดต่อ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 อีเมล:audrey.hu@wecistanche.com

Zwe-Ling Kong ® Athira Johnson® Fan-Chi Ko, Jia-Ling He และ Shu-Chun Cheng

ภาควิชาวิทยาศาสตร์การอาหาร National Taiwan Ocean University, Pei-Ning Road, Keelung 20224, Taiwan; athirajohnson07@gmail.com (เอเจ); makeadrea@hotmail.com (F.-CK); k46255@gmail.com (จ.-ล.); riceroll826@gmail.com (ส.-ซีซี)

* จดหมายโต้ตอบ: kongzl@mail.ntou.edu.tw; โทร.: บวก 886-2-2462-2192; แฟกซ์: บวก 886-2-2463-4203

เชิงนามธรรม:โรคเบาหวานเป็นโรคเรื้อรังที่มีภาวะน้ำตาลในเลือดสูงเนื่องจากระดับอินซูลินลดลงหรือเนื้อเยื่อไม่สามารถใช้งานได้อย่างมีประสิทธิภาพ ภาวะมีบุตรยากเป็นที่ทราบกันดีว่าเป็นผลลัพธ์ที่สำคัญของโรคเบาหวานและส่งผลต่อระบบสืบพันธุ์เพศชายโดยทำให้เกิดการด้อยค่าของตัวอสุจิและความผิดปกติของอวัยวะสืบพันธุ์ Cistanche tubulosa เป็นพืชกาฝากที่มีความสามารถในการปรับปรุงความจำ ภูมิคุ้มกัน และความสามารถทางเพศ ลดความอ่อนแอ และลดอาการท้องผูก การศึกษานี้มุ่งเน้นไปที่การศึกษาฤทธิ์ต้านการอักเสบและการป้องกันของ echinacoside (ECH) ในสารสกัดจาก Cistanche tubulosa (CTE) ในระบบสืบพันธุ์เพศชายของหนูที่เป็นเบาหวาน ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ ต้านการอักเสบ และป้องกันของ CTE ได้รับการประเมินโดยวิธีในหลอดทดลองและในร่างกาย ผลลัพธ์ในหลอดทดลองแสดงให้เห็นว่า ECH ยับยั้งการผลิตชนิดออกซิเจนที่เกิดปฏิกิริยา (ROS) และปรับปรุงการแสดงออกของโปรตีน StAR, CYP11A1, CYP17A1 และ HSD17p3 การวิเคราะห์ ภายในร่างกาย ดำเนินการด้วยอิชินาโคไซด์ (ECH) สามขนาด (80, 160 และ 320 มก./กก.) ใน CTE โดยรวมแล้ว 0.571 มก./กก. ของ rosiglitazone (RSG) ถูกบริหารให้เป็นกลุ่มควบคุมเชิงบวก โรคเบาหวานเกิดจากสเตรปโตโซโตซิน (STZ) (65 มก./กก.) และนิโคตินาไมด์ (230 มก./กก.) ร่วมกับอาหารที่มีไขมันสูง (45 เปอร์เซ็นต์) การศึกษาในร่างกายยืนยันว่า ECH ช่วยเพิ่มระดับน้ำตาลในเลือด ความต้านทานต่ออินซูลิน ความต้านทานต่อเลปติน และลิพิดเปอร์ออกซิเดชัน สามารถฟื้นฟูคิสเปปติน 1 (KiSS1), G รีเซพเตอร์ควบคู่โปรตีน GPR 54, ตัวยับยั้งการส่งสัญญาณไซโตไคน์ 3 (SOCS-3) และเซอร์ทูอิน 1 (SIRT1) การแสดงออกของกรดไรโบนิวคลีอิก (mRNA) ของผู้ส่งสารในไฮโปทาลามัสและฟื้นฟูเพศ ระดับฮอร์โมน ดังนั้นการศึกษานี้จึงยืนยันผลของสารต้านอนุมูลอิสระ ต้านการอักเสบ และสเตียรอยด์ของ CTE

คำสำคัญ:โรคเบาหวาน; ภาวะมีบุตรยาก; สารสกัดจาก Cistanche tubulosa (CTE); อิไคนาโคไซด์ (ECH); กิจกรรมต้านการอักเสบ ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ ผลของการสร้างสเตียรอยด์

กลับไปที่ส่วนหนึ่ง Ⅰ

ผลการป้องกันของ echinacoside (ECH) จากCistanche tubulosa

3. ผลลัพธ์

3.1.การวิเคราะห์ในหลอดทดลอง

3.1.1.การเปรียบเทียบฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของ ECH, CTE และ RES

ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันสูงและการอักเสบเรื้อรังเป็นเวลานานเป็นสาเหตุหลักของภาวะแทรกซ้อนจากเบาหวาน [16] CTE มีฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์หลายชนิด เช่น อีชินาโคไซด์ (ECH) และแอคทีโอไซด์ ที่มีศักยภาพในการต้านอนุมูลอิสระ [17] การทดสอบการกำจัดอนุมูลอิสระ DPPH ดำเนินการเพื่อประเมินฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของ ECH Trolox และ resveratrol (3,5,4'-trihydroxystilbene, RES) ถูกนำมาใช้เป็นมาตรฐานและกลุ่มควบคุมเชิงบวกตามลำดับ ดังที่แสดงไว้ในรูปที่ 1 ECH แสดงแอคติวิตีการกวาดล้างแบบรุนแรงที่ดีกว่าและกิจกรรมนั้นสูงกว่ากลุ่มควบคุมเชิงบวก (RES) อย่างมีนัยสำคัญ

3.1.2.ความอยู่รอดของเซลล์ของ ECH บน LC-540 และ TM3 Leydig Cells

การทดสอบ MTT ถูกดำเนินการเพื่อประเมินความมีชีวิตของเซลล์ที่มีความเข้มข้นต่างกันของ ECH LC-540 เซลล์เลย์ดิกและเซลล์ TM3 เลย์ดิกแสดงความอยู่รอดได้มากกว่า 80 เปอร์เซ็นต์หลังจากได้รับการบำบัดด้วย ECH (รูปที่ 2) เมื่อเทียบกับความเข้มข้นอื่นๆ ความเข้มข้น 100-|dM (การเจือจาง 100 rM ใน 2 เปอร์เซ็นต์ FBS) ของ ECtf แสดงความสามารถในการมีชีวิตของเซลล์ที่ดีขึ้นในเซลล์ ffM3 Leydig ผลการวิจัยพบว่าความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้นของ ECH ไม่ได้มีส่วนทำให้เกิดความเป็นพิษอย่างมีนัยสำคัญต่อเซลล์

3.1.3.ผลของ ECH ต่อการผลิตซูเปอร์ออกไซด์ที่เหนี่ยวนำด้วย AGE โดย NBT Assay ใน LC-540 และ TM3 Leyd ig Cells

AGEs ทำให้เกิดความเสียหายจากปฏิกิริยาออกซิเดชันในร่างกายเนื่องจากการเกิดออกซิเดชันของกลูโคสและการก่อตัวของอนุมูลอิสระ เช่น O2- อนุมูลไฮดรอกซิล และหมู่คาร์บอนิล [18] หลังจากถูกกระตุ้นด้วย 50 Rg/mL ของ AGEs, LC-540 (รูปที่ 3a) และ TM3 (รูปที่ 3b) c เซลล์ถูกบำบัดด้วย ECH และ RES (5 /M และ 10 ช้อนชาแต่ละตัว) ผลการวิจัยพบว่าการผลิต superoxide anion เพิ่มขึ้นในกลุ่มควบคุม (stimulated AGOs) แต่การผลิต superoxide anion ลดลงหลังการรักษาด้วย ECH และ RES จากรูปที่ 3, ii เป็นที่เข้าใจว่า ECH และ RES ลดระดับการผลิตซูเปอร์ออกไซด์และปกป้องเซลล์จากความเสียหายจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน ในกรณีของเซลล์ LC-540, 10 ECH แสดงกิจกรรมที่เกือบจะคล้ายกันกับกลุ่มปกติ การผลิตซูเปอร์ออกไซด์ในเซลล์ทั้งสองลดลงเมื่อความเข้มข้นของทั้ง ECH และ RES เพิ่มขึ้น

3.1.4.ผลของ ECH ต่อการผลิต H2O2 ใน LC ที่กระตุ้นด้วยอายุ-540 Leydig Cells

การสอบวิเคราะห์ DCFH-DA ถูกดำเนินการเพื่อตรวจจับการมีอยู่ของสปีชีส์ออกซิเดชัน หลังจากเข้าสู่เซลล์แล้ว สีย้อมเรืองแสง DCFH-DA จะถูกออกซิไดซ์โดย H2O2 ภายในเซลล์ และเกิดเป็นไดคลอโรฟลูออเรสซีน (DCF) ดังที่แสดงในรูปที่ 4 มีการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในการผลิต H2O2 ภายในเซลล์ในกลุ่มที่กระตุ้น AGE (กลุ่มควบคุม) ในขณะที่การเพิ่ม 10 ECH และ RES ลดการผลิต H2O2 ในเซลล์อย่างมีนัยสำคัญ การบริหาร 10 ECH ส่งผลให้มีการผลิต H2O2 เพียง 47.1 เปอร์เซ็นต์ ซึ่งต่ำกว่าในกลุ่มควบคุมอย่างมีนัยสำคัญ

3.1.5. ผลของ ECH ต่อระดับการแสดงออกของโปรตีน RAGE และ NF-kB ในเซลล์เลย์ดิกที่กระตุ้นด้วยวัย LC-540

การวิเคราะห์ Western blot ถูกดำเนินการเพื่อยืนยันการมีอยู่ของ RAGE ใน LC-540 เซลล์ Leydig ผลของ ECH ต่อระดับการแสดงออกของโปรตีน RAGE (รูปที่ 5a) และ NF-kB (รูปที่ 5b) ในเซลล์ Leydig ที่กระตุ้นด้วย AGEs ถูกแสดงไว้ในรูปที่ 5 ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่าความเข้มข้น 50 /mL ของ AGEs เหนี่ยวนำให้ RAGE และ NF-kB สูงขึ้น การแสดงออกใน LC-540 เซลล์ Leydig และความเข้มข้น 10 ของ ECH และ RES ได้ลดการแสดงออกของ RAGE และ NF-kB ลงอย่างมาก การแสดงออกของ NF-kB มีค่า RES และ ECH ต่ำกว่าใน RAGE antagonists อย่างมีนัยสำคัญ ดังนั้น ผลการยืนยันว่า ECH ลดระดับการอักเสบโดยการลดระดับของ RAGE และ NF-kB

3.1.6. ผลของ ECH บนเส้นทางการสังเคราะห์ฮอร์โมนเพศชายในเซลล์ Leydig ที่กระตุ้น AGE-Stimulated LC-540

กระบวนการสร้างอสุจิและภาวะมีบุตรยากของผู้ชายขึ้นอยู่กับการมีฮอร์โมนเทสโทสเตอโรน ดังที่แสดงไว้ในรูปที่ 6 การแสดงออกของโปรตีน StAR (รูปที่ 6a), CYP11A1 (รูปที่ 6b), CYP17A1 (รูปที่ 6c) และ HSD17p3 (รูปที่ 6d) ลดลงอย่างมีนัยสำคัญในเซลล์ Leydig ที่กระตุ้นด้วย AGE-540 Leydig ( กลุ่มควบคุม). การแสดงออกของโปรตีน StAR, CYP11A1, CYP17A1 และ HSD17p3 เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อศัตรู RAGE, RES และ ECH เพิ่มขึ้น การแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของโปรตีน StAR และ CYP11A1 พบได้ในทั้งกลุ่มที่ได้รับ ECH และ RES ระดับการแสดงออกของ CYP17A1 ใกล้เคียงกันในกลุ่ม RES และ ECH การแสดงออกของโปรตีน HSD17&3 ในเซลล์ Leydig ที่บำบัดด้วย ECH นั้นสูงกว่าเซลล์ที่บำบัดด้วย RES และ RAGE อย่างมาก การแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของโปรตีน StAR, CYP11A1, CYP17A1 และ HSD17p3 บ่งชี้ถึงการผลิตฮอร์โมนเพศชายตามปกติ

3.2.ในการวิเคราะห์ Vivo

3.2.1. ผลของ CTE ต่อน้ำหนักตัวและการบริโภคแคลอรี่

หลังการทดลอง 6 สัปดาห์ กลุ่มผู้ป่วยเบาหวาน (HFD-DM) มีน้ำหนักตัวสูงกว่ากลุ่มควบคุม กลุ่ม HFD-DME4 แสดงน้ำหนักตัวที่ต่ำกว่ากลุ่ม HFD-DM และ HFD-DMER (รูปที่ 7a) การบริโภคแคลอรี่ของกลุ่มควบคุมต่ำกว่ากลุ่มอื่นอย่างมีนัยสำคัญ ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างการบริโภคแคลอรี่ของอีกห้ากลุ่ม (รูปที่ 7b)

3.2.2.Oral Glucose Tolerance Test (OGTT) to Determine the Success) 1 ตัวเหนี่ยวนำของโรคเบาหวาน

การทดสอบความทนทานต่อกลูโคสในช่องปาก (OGTT) ใช้เป็นเครื่องมือในการตรวจหาเบาหวาน ระดับน้ำตาลในเลือดที่เพิ่มขึ้นบ่งชี้ถึงภาวะเบาหวาน ดังที่แสดงไว้ในรูปที่ 8a ระดับกลูโคสในพลาสมาในกลุ่ม CTE ต่ำกว่าในกลุ่ม DM ที่ 0, 30, 90 และ 120 นาที นอกจากนี้ พื้นที่ใต้เส้นโค้ง (AUC) ของความเข้มข้นของกลูโคสในพลาสมาพบว่าในกลุ่ม CTE และ RSG3.2.3.ปริมาณกลูโคสในเลือด โคเลสเตอรอล และไตรกลีเซอไรด์ในพลาสมาทั้งหมด

ระดับน้ำตาลในเลือดที่อดอาหารในพลาสมาสูงกว่าในกลุ่ม DM และต่ำกว่าในกลุ่ม DME2 (ยกเว้นกลุ่มควบคุม) มากกว่ากลุ่มอื่น ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในคอเลสเตอรอลรวมระหว่างกลุ่มยกเว้นกลุ่ม DME4 ในกลุ่ม DME4 ระดับคอเลสเตอรอลต่ำกว่ากลุ่มอื่น ระดับไตรกลีเซอไรด์สูงขึ้นในกลุ่ม DM และต่ำกว่าในกลุ่ม DME4 และปริมาณไตรกลีเซอไรด์ลดลงเมื่อความเข้มข้นของ CTE เพิ่มขึ้น (ตารางที่ 2) ผลการศึกษาพบว่าระดับน้ำตาลในเลือด คอเลสเตอรอล และไตรกลีเซอไรด์ในกลุ่ม DM สูงขึ้น และระดับของ CTE ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ

3.2.4.ระดับอินซูลินในพลาสมา ระดับเลปตินในพลาสมา และค่าแบบจำลองสภาวะสมดุลของสภาวะสมดุลระหว่างอินซูลิน (HOMA-IR)

ระดับของอินซูลินในพลาสมา เลปติน และค่า HOMA-IR แสดงไว้ในตารางที่ 3 กลุ่ม DM มีระดับอินซูลินในพลาสมาและเลปตินในพลาสมาสูงกว่ากลุ่มควบคุม ดัชนี HOMA-IR ยังสูงกว่าอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม DM ค่าอินซูลินในพลาสมา เลปติน และ HOMA-IR ลดลงเมื่อความเข้มข้นของ CTE เพิ่มขึ้น เลปตินในพลาสมาลดลงอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม CTE แต่กลุ่มยา RSG (DMR) ไม่แสดงความแตกต่างที่มีนัยสำคัญจากกลุ่ม DM

3.2.5.ผลของ CTE ต่อระดับ LH ในพลาสมาและฮอร์โมนเพศชายในหนูเบาหวาน

ดังแสดงในตารางที่ 4 ความเข้มข้นของฮอร์โมนเพศชายในหนูที่เป็นเบาหวาน (DM) ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ ในขณะที่ความเข้มข้นของฮอร์โมนเพศชายเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญที่ปริมาณ CTE ต่างๆ นอกจากนี้ ผลลัพธ์ยังแสดงให้เห็นว่าระดับ LH ในกลุ่ม DM ลดลงเล็กน้อยเมื่อเทียบกับ DMR, DME1, DME2 และ DME4 การผลิต LH สูงกว่าในกลุ่ม DME4

3.2.6.ผลของ CTE ต่อพารามิเตอร์อสุจิของหนูเบาหวาน

ผลการทดลองพบว่า กลุ่ม DM มีจำนวนอสุจิและการเคลื่อนที่ลดลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม ในขณะที่อัตราความผิดปกติของตัวอสุจิในกลุ่ม DM เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ ที่น่าสนใจคือจำนวนอสุจิ การเคลื่อนที่ของอสุจิ และอัตราความผิดปกติของตัวอสุจิของกลุ่ม DMR ดีขึ้น แต่การเคลื่อนไหวของตัวอสุจิยังไม่ถึงระดับที่มีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับ DME4 DME2 แสดงจำนวนอสุจิได้ดีกว่าทั้งหมด และอัตราการเคลื่อนไหวเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม DME4 ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างจำนวนอสุจิที่ผิดปกติระหว่างกลุ่มที่ได้รับ RSG และ CTE (ตารางที่ 5)

3.2.7.ผลของ CTE ต่อ Morpholo ของ Seminiferous Tubules ในหนูเบาหวาน

รูปที่ 9 แสดงการย้อมสี H&E ของส่วนอัณฑะ ลูกศรสีดำหมายถึงเซลล์ Leydig และลูกศรสีขาวหมายถึงเซลล์ Sertoli ทั้งเซลล์ Leydig และเซลล์ Sertoli ในกลุ่ม DM มีการฝ่ออย่างมีนัยสำคัญและมองเห็นโพรงในลูเมน โครงสร้างของเซลล์ Leydig และ Sertoli ได้รับการฟื้นฟูในกลุ่มที่บำบัดด้วย CTE และ RSG thictasess ของท่อ seminiferous ในกลุ่ม CTE และ RSG สูงกว่าในกลุ่ม DM

3.2.8.ผลของ CTE ต่อ KiSS1, GPR54, SOCS-3 และ SIRT1 mRNAs ในไฮโพทาลามัสของหนูเบาหวาน

การแสดงออกของ KiSS1 (รูปที่ 10a), GPR54 (รูปที่ 10b), SOCS-3 (รูปที่ 10d) และ SIRT1 (รูปที่ 10c) แสดงไว้ในรูปที่ 10 การแสดงออกของ mRNA ของ KiSS1 และตัวรับ GPR54 ในหนูที่เป็นเบาหวานคือ ต่ำกว่ากลุ่มควบคุมอย่างมีนัยสำคัญ ระดับการแสดงออก KiSS1 และ GPR 54 mRNA ใน DMR, DME1, DME2 และ DME4 เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ โดยเฉพาะอย่างยิ่ง การแสดงออกของ GPR54 mRNA เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญใน DME4 และเกือบจะคล้ายกับกลุ่มควบคุม

การทดลองนี้สำรวจเพิ่มเติมเกี่ยวกับปริมาณของ SOCS-3 และ SIRT1 mRNAs ในไฮโปทาลามัสของหนูแรท การแสดงออกของ SOCS-3 mRNA ในหนูที่เป็นเบาหวานเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญซึ่งบ่งชี้ว่าอิมพีแดนซ์ของเลปตินรุนแรงกว่า กลุ่ม DMR, DME1, DME2 และ DME4 มีการปรับปรุงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มผู้ป่วยโรคเบาหวาน การแสดงออกของ SIRT1 mRNA ในกลุ่ม DM ลดลง

3.2.9.ผลของ CTE ต่อเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระในพลาสมาและอัณฑะของหนูเบาหวาน

ตารางที่ 6 แสดงว่ากิจกรรม SOD ในพลาสมา, กิจกรรม GPx และกิจกรรมคาตาเลสของหนูแรท diab etic ลดลงอย่างมีนัยสำคัญและกิจกรรมเพิ่มขึ้นในกลุ่มที่ได้รับ CTE และ RSG นอกจากนี้ DM E4 ยังแสดงให้เห็นการปรับปรุงที่สำคัญในกิจกรรม GPx มากกว่าตัวอื่นๆ ผลการศึกษาพบว่ากิจกรรม SOD และ catalase ในหนูที่เป็นเบาหวานลดลงอย่างมีนัยสำคัญหลังผ่านไป 6 สัปดาห์ กิจกรรม SOD และ catalase ของกลุ่ม DMR ไม่ถึงระดับที่มีนัยสำคัญ กลุ่มที่ได้รับ CTE แสดงให้เห็นการปรับปรุงที่สำคัญในกิจกรรม SOD และ catalase กิจกรรมที่เพิ่มขึ้นของ catalase และ SOD ในกลุ่ม CTE ยังเห็นได้ในอัณฑะ (ตารางที่ 7) พบกิจกรรมสูงสุดของ SOD และ catalase ในกลุ่ม DME1 และ DME2 ตามลำดับ

3.2.10.ผลของ CTE ต่อความเครียดและการอักเสบในพลาสมาและอัณฑะของหนูเบาหวาน

การผลิตไนตริกออกไซด์ (NO) ในพลาสมา (รูปที่ 11a) และอัณฑะ (รูปที่ lib) แสดงไว้ในรูปที่ การผลิตของ NO ในกลุ่ม DM เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญทั้งในอัณฑะและในพลาสมาเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม พบการลดลงทีละน้อยของการผลิต NO ในกลุ่ม DME1, DME2 และ DME4 (ในพลาสมา) กลุ่ม DMR ยังแสดงการลดลงอย่างมีนัยสำคัญในการผลิต NO ในกรณีของอัณฑะ พบว่ามีการผลิต NO ลดลงเล็กน้อยในกลุ่ม CTE ในขณะที่กลุ่ม DMR ไม่ได้ลดการผลิต NO อย่างมีนัยสำคัญ

ดังที่แสดงในรูปที่ 12 และ 13 ระดับของ TNF-a และ IL-6 เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในหนูที่เป็นเบาหวาน (ทั้งในพลาสมาและอัณฑะ) ซึ่งบ่งชี้ว่าการอักเสบนั้นรุนแรงกว่า ในพลาสมา ระดับของ TNF-a จะคล้ายกันในกลุ่มที่ได้รับ CTE- และ RSG (รูปที่ 12a) กลุ่ม CTE อย่างมีนัยสำคัญ (โดยเฉพาะ DME2) ลดระดับ TNF-a ในอัณฑะ (รูปที่ 12b) ระดับของ IL-6 ลดลงอย่างมีนัยสำคัญในพลาสมาของกลุ่ม CTE และ RSG (รูปที่ 13a) ในอัณฑะ มีแนวโน้มลดลงในระดับ IL-6 แต่ไม่ถึงระดับที่มีนัยสำคัญ (รูปที่ 13b)

3.2.11.ผลของ CTE ต่อความเครียดที่เกิดจากออกซิเดชันและการอักเสบในอสุจิของหนูเบาหวาน I ที่เกิดจากอาหารที่มีไขมันสูง

รูปที่ 14 แสดงปริมาณประจุลบของซูเปอร์ออกไซด์ในตัวอสุจิของหนู ผลการศึกษาพบว่าการผลิตประจุลบของซูเปอร์ออกไซด์ในตัวอสุจิของหนูที่เป็นเบาหวานเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ และไม่พบการปรับปรุงอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม DMR กลุ่ม DME1 และ DME4 แสดงการผลิตซูเปอร์ออกไซด์แอนไอออนที่ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ

3.2.12. ผลของ CTE ต่อไขมันเปอร์ออกซิเดชันในอสุจิของหนูเบาหวานที่เกิดจากอาหารที่มีไขมันสูง

จากการศึกษาพบว่า lipid peroxidation เพิ่มขึ้นในผู้ป่วยเบาหวานชนิดที่ 1 และชนิดที่ 2 [19] ระดับ malondialdehyde (MDA) ในพลาสมา สเปิร์ม และอัณฑะแสดงในตารางที่ 8 ระดับ MDA ในพลาสมา อัณฑะ และสเปิร์มของกลุ่ม DM สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ และการรักษาด้วย CTE และ RSG ลดการผลิต MDA พบการลดลงอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม DME4 และ DMEI ในพลาสมา การศึกษานี้พบว่าหนูเบาหวานไม่เพียงแต่เพิ่มระดับของลิพิดเปอร์ออกซิเดชันในพลาสมา แต่ยังเพิ่มขึ้นในอัณฑะและสเปิร์มอีกด้วย

ผลของสารสกัด Cistanche tubulosa: Anti-Oxidative Stress and Inflammation

4. การอภิปราย

โรคเบาหวานเป็นโรคเรื้อรังที่เกี่ยวข้องกับระดับน้ำตาลในเลือดสูง ความไม่สมดุลระหว่างระดับสารต้านอนุมูลอิสระและ ROS จะนำไปสู่สภาวะที่เรียกว่าความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน ซูเปอร์ออกไซด์ ไฮดรอกซิล เรดิคัล ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ ไนตริกออกไซด์ และออกซิเจนสายเดี่ยว เป็นตัวอย่างบางส่วนของ ROS ที่จะก่อให้เกิดภาวะเบาหวานผ่านความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน [20] Cittanche tubulosa เป็นพืชในทะเลทรายที่มีส่วนประกอบสำคัญ เช่น polysaccharides, oligosaccharide s, phenylethanoid glycosides (echinacoside, verbascoside), palmitic acid, linoleic acid, iridoids, alditols และ lignans พืชชนิดนี้สามารถผลิตฤทธิ์ต้านการอักเสบ ป้องกันระบบประสาท ต้านแบคทีเรีย ต้านไวรัส ต่อต้านอนุมูลอิสระ ต้านเนื้องอก และปรับภูมิคุ้มกัน [21] การศึกษาวรรณคดีแสดงให้เห็นว่า phenylethanoid glycosides จาก Cistanche tubulosa เป็นสาเหตุหลักของฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ [22] Resveratrol (RES) และ rosiglitazone (RSG) ถูกใช้เป็นตัวควบคุมเชิงบวกสำหรับการศึกษา ในหลอดทดลอง และ ในร่างกาย ตามลำดับ RSG เป็นสารกระตุ้นอินซูลินที่มีประสิทธิภาพและมีความสัมพันธ์กับไอโซฟอร์มของ peroxisome proliferator-activated receptor (PPARc) ควบคุมภาวะน้ำตาลในเลือดสูงในผู้ป่วยเบาหวาน [23] RES มีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระตามธรรมชาติ ทำหน้าที่เป็นตัวขยายหลอดเลือด ควบคุมการเผาผลาญของไลโปโปรตีน ยับยั้งการรวมตัวของเกล็ดเลือด และป้องกันมะเร็ง [24,25] การตรวจสอบของเราระบุว่า ECH แสดงกิจกรรมการกวาดล้างที่รุนแรงกว่า CTE และ RES (รูปที่ 1) เป็นที่เข้าใจอีกด้วยว่า ECH ไม่ก่อให้เกิดความเป็นพิษที่มีนัยสำคัญใดๆ ต่อ LC-540 และเซลล์ TM3 Leydig (รูปที่ 2)

AGEs ถูกใช้เพื่อกระตุ้นสภาวะความเครียดในเซลล์ Leydig การผลิต AGEs การอักเสบ ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน และโรคเบาหวานนั้นเชื่อมโยงถึงกัน ภาวะน้ำตาลในเลือดสูงของโรคเบาหวานส่งเสริมการบาดเจ็บของเซลล์ผ่านการผลิต AGEs และความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน AGEs ทำให้เกิดความเป็นพิษต่อเซลล์ p ซึ่งส่งเสริมการสร้างเซลล์ภูมิคุ้มกันและการตายของเซลล์ ระดับที่เพิ่มขึ้นของ AGEs ส่งเสริมการแสดงออกของตัวรับสองประเภทที่เรียกว่า RAGE และ AGER1 [26] การหยดและการถ่ายโอนอิเล็กตรอนจากสายโซ่ระบบทางเดินหายใจของไมโตคอนเดรียไปยังโมเลกุลออกซิเจนในระหว่างความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันส่งผลให้เกิดการก่อตัวของไอออนซูเปอร์ออกไซด์ ผลลัพธ์ของเราแสดงว่าการผลิตของ superoxide anion ที่ถูกเหนี่ยวนำโดย AGEs เพิ่มขึ้นในกลุ่มควบคุม และสังเกตเห็นการปรับปรุงเพิ่มเติมด้วยการบำบัดด้วย ECH และ RES จากการศึกษาของเรา เป็นที่เข้าใจว่าการผลิตซูเปอร์ออกไซด์ (รูปที่ 3) และ H2O2 (รูปที่ 4) ที่เกิดจาก AGEs ลดลงเมื่อมี ECH และ RES

NF-kB เป็นที่รู้จักในฐานะผู้ไกล่เกลี่ยสำคัญของการอักเสบที่เกี่ยวข้องกับโรคเบาหวาน [27] การแสดงออกของ NF-kB นำไปสู่ความผิดปกติของเซลล์ p และการตายของเซลล์ การกระตุ้น NF-KB โดยความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันช่วยกระตุ้นการตอบสนองต่อการอักเสบ การควบคุมเอ็นโดเทลิน และการตายของเซลล์ [28] การแสดงออกของ RAGE และ NF-kB เพิ่มขึ้นในกลุ่มที่กระตุ้นด้วย AGE และการลดลงที่ตามมาถูกสังเกตพบในเซลล์ที่บำบัดด้วย ECH และ RES (รูปที่ 5)

ฮอร์โมนเพศชายเป็นสเตียรอยด์และฮอร์โมนเพศชายหลักที่สังเคราะห์จากคอเลสเตอรอล กระบวนการเริ่มต้นด้วยความแตกแยกออกซิเดชันของสายโซ่ข้างของคอเลสเตอรอลโดยยีนความแตกแยกของสายโซ่ด้านข้างของคอเลสเตอรอล (CYP11A) ยีนนี้มีการแปลเป็นภาษาท้องถิ่นในเยื่อหุ้มไมโตคอนเดรียและแปลงคอเลสเตอรอลเป็น pregnenolone ถัดไป ยีน CYP17A1 จากเอนโดพลาสมิกเรติคิวลัมจะกำจัดอะตอมของคาร์บอนส่วนเกินออกสองอะตอมและผลิตสเตียรอยด์ C19 หลายตัว นอกจากนี้ พรีกโนโลนยังถูกออกซิไดซ์เพื่อสร้างแอนโดรสเตนีไดโอน/โปรเจสเตอโรนโดยไฮดรอกซีสเตียรอยด์ดีไฮโดรจีเนส (3-p-HSD) ในที่สุด ฮอร์โมนเทสโทสเตอโรนผลิตโดยการลดลงของกลุ่มคีโตในตำแหน่งคาร์บอนที่ 17 ของแอนโดรสเตเนไดโอนโดย 17-เบต้า-ไฮดรอกซีสเตียรอยด์ดีไฮโดรจีเนส (17-p-HSD) เซลล์ Leydig มีส่วนร่วมในการผลิตฮอร์โมนเพศชายที่สำคัญ การถ่ายโอนโคเลสเตอรอลไปยังเยื่อหุ้มไมโตคอนเดรียชั้นในนั้นต้องการการกระทำของโปรตีนควบคุมเฉียบพลันแบบสเตอรอยด์ (StAR) การศึกษาในปัจจุบันแสดงให้เห็นว่าการแสดงออกของ Star, CYP11A1, CYP17A1 และ HSD17p3 ลดลงในเซลล์ที่บำบัดด้วย AGE (กลุ่มควบคุม) และมีการเพิ่มขึ้นอย่างมากในเซลล์ที่บำบัดด้วย ECH และ RES (รูปที่ 6) ดังนั้น ผลการวิจัยแสดงให้เห็นว่าการผลิตฮอร์โมนเทสโทสเตอโรนเพิ่มขึ้นในกลุ่มที่ได้รับ ECH และ RES

ในช่วงที่เป็นเบาหวาน การขนส่งกลูโคสไปยังอวัยวะมีจำกัด ส่งผลให้ระดับกลูโคสเพิ่มขึ้น [29] ดังนั้นภาวะน้ำตาลในเลือดสูงจึงเป็นตัวบ่งชี้ที่สำคัญอย่างหนึ่งในการตรวจหาเบาหวาน การศึกษาของเราแสดงให้เห็นว่าระดับกลูโคสในพลาสมาเพิ่มขึ้นในกลุ่มผู้ป่วยเบาหวาน และ AUC ของกลุ่ม DM สูงกว่ากลุ่มอื่นอย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 8) ร่วมกับกลูโคสในพลาสมา ปริมาณคอเลสเตอรอลรวมและไตรกลีเซอไรด์เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม DM (ตารางที่ 2) หลอดเลือดได้รับการอำนวยความสะดวกโดยระดับที่เพิ่มขึ้นของคอเลสเตอรอลและไตรกลีเซอไรด์ [30] อย่างไรก็ตาม ระดับคอเลสเตอรอลและไตรกลีเซอไรด์ลดลงในกลุ่มที่ได้รับ CTE และ RSG ปริมาณไตรกลีเซอไรด์ของกลุ่ม DME4 มีค่าใกล้เคียงกับกลุ่มควบคุมเกือบทั้งหมด

อินซูลินเป็นฮอร์โมนที่ผลิตโดยเซลล์ p ของตับอ่อนและทำหน้าที่ควบคุมระดับน้ำตาลในเลือดในร่างกายในขณะที่เลปตินเป็นฮอร์โมนที่ผลิตโดย adipocytes และสามารถควบคุมการรับประทานอาหารและการใช้พลังงาน การศึกษาระบุว่าเลปตินมีส่วนเกี่ยวข้องกับพยาธิสรีรวิทยาของโรคอ้วนและมีปฏิสัมพันธ์เชิงบวกระหว่างเลปตินกับอินซูลิน [31] การศึกษาของเราแสดงให้เห็นว่าระดับของอินนูลินในพลาสมาและเลปตินในกลุ่ม DM สูงขึ้น และระดับอินซูลินลดลงเมื่อความเข้มข้นของ CTE เพิ่มขึ้น กลุ่ม RSG ไม่แสดงความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญจากกลุ่ม DM ประเมินการดื้อต่ออินซูลินและการทำงานของเซลล์พีโดย

วิธี HOMA-IR ค่า HOMA-IR เพิ่มขึ้นในกลุ่ม DM และแตกต่างจากกลุ่มอื่นอย่างมีนัยสำคัญ (ตารางที่ 3)

DM ส่งผลกระทบต่อการทำงานของระบบสืบพันธุ์ผ่านการสลับของฮอร์โมนในแกน HPG และการศึกษาพบว่าการแสดงออกของอินซูลินในอัณฑะได้รับผลกระทบจากโรคเบาหวานเช่นกัน มีลักษณะเฉพาะโดยการทำให้เซลล์แตกตัวเป็นก้อนของ Sertoli, การกระจายตัวของ DNA ที่เพิ่มขึ้น, การสร้างสเปิร์มที่บกพร่อง, และการสูญเสียเซลล์สืบพันธุ์ที่เพิ่มขึ้น ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันยังก่อให้เกิดความผิดปกติในการสืบพันธุ์ [32] กระบวนการสร้างสเปิร์มในอวัยวะสืบพันธุ์เพศชาย (อัณฑะ) เรียกว่า spermatogenesis ลูกอัณฑะประกอบด้วยท่อที่ขดแน่นเรียกว่าท่อกึ่งกึ่งหนึ่ง เซลล์ Sertoli มองเห็นได้ในผนังของท่อน้ำอสุจิและให้อาหารแก่ตัวอสุจิที่ยังไม่บรรลุนิติภาวะ การตรวจสอบพารามิเตอร์ของอสุจิพบว่าจำนวนอสุจิและการเคลื่อนไหวลดลงและความผิดปกติเพิ่มขึ้นในกลุ่ม DM (ตารางที่ 5) ผลตรงกันข้ามถูกสังเกตพบในกลุ่มที่บำบัดด้วย CTE และ RSG ทั้งเซลล์ Leydig และเซลล์ Sertoli ในกลุ่ม DM มีการฝ่ออย่างมีนัยสำคัญและมองเห็นโพรงในลูเมน ความหนาของท่อ seminiferous ลดลงในกลุ่ม DM ด้วย ผลลัพธ์ที่ปรับปรุงดีขึ้นถูกสังเกตพบในกลุ่มที่บำบัดด้วย CTE และ RSG (รูปที่ 9) นอกจากนี้ ระดับของ LH และฮอร์โมนเพศชายในกลุ่ม DM ลดลง และระดับเพิ่มขึ้นในกลุ่มที่ได้รับ CTE (ตารางที่ 4) ในผู้ชาย ฮอร์โมนเทสโทสเตอโรนต่ำและความถี่ชีพจรของ LH ที่ต่ำกว่ามักเกี่ยวข้องกับโรคอ้วนและโรคเบาหวานประเภท 2 [33]

Kisspeptins ที่เข้ารหัสโดยยีน KiSS1 เป็นที่รู้จักกันในชื่อตัวกระตุ้นที่มีศักยภาพของแกน HPG และการกลายพันธุ์ใด ๆ ในยีน kisspeptin จะนำไปสู่ระดับสเตียรอยด์ทางเพศและ gonadotropin ในระดับต่ำ การศึกษาแสดงให้เห็นว่าในหนูเบาหวานที่เกิดจาก STZ ระดับ Kiss1 mRNA ลดลง [33] การเริ่มต้นและการรักษาภาวะมีบุตรยากของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมเชื่อมต่อกับ G-protein coupled receptor 54 (GPR54) การกลายพันธุ์ใน GPR 54 มีลักษณะเฉพาะโดยไม่มีวุฒิภาวะทางเพศและฮอร์โมน gonadotropic ในระดับต่ำ (LH และ FSH) ไซโตไคน์ที่ก่อให้เกิดการอักเสบ เช่น IL-6 และ TNF-a ควบคุมการแสดงออกของตัวยับยั้งการส่งสัญญาณไซโตไคน์ 3 (SOCS3) ที่เกี่ยวข้องกับการดื้อต่ออินซูลินที่อาศัยการอักเสบในตับและ adipocytes [34] SIRT 1 เป็นยีนที่เกี่ยวข้องกับการควบคุมโรคชราต่างๆ ยีนนี้แสดงออกอย่างเด่นชัดในเซลล์ p ของตับอ่อนและควบคุมการหลั่งอินซูลินและป้องกันการตายของเซลล์ การศึกษาในปัจจุบันระบุว่าการแสดงออกของ KiSS1, GPR54 และ SIRT1 ลดลงในกลุ่ม DM แต่การแสดงออกเพิ่มขึ้นในกลุ่มที่ได้รับ CTE (รูปที่ 10) การแสดงออกของ SOCS-3 ที่เพิ่มขึ้นในกลุ่ม DM บ่งชี้ถึงสภาวะการอักเสบ การเชื่อมโยงระดับโมเลกุลแรกที่ระบุระหว่างโรคอ้วนและการอักเสบคือ TNF-a ดังนั้นระดับ TNF-a ที่เพิ่มขึ้นจึงเป็นตัวบ่งชี้การอักเสบ ระดับที่ลดลงของไซโตไคน์ที่ก่อให้เกิดการอักเสบ เช่น TNF-a และ IL-6 ถูกพบในกลุ่มที่บำบัดด้วย CTE (รูปที่ 12 และ 13)

ความไม่สมดุลระหว่าง ROS และสารต้านอนุมูลอิสระทำให้เกิดภาวะเบาหวาน ซูเปอร์ออกไซด์ dismutase (SOD), catalase (CAT) และกลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส (GPX) เป็นที่รู้จักในฐานะสารต้านอนุมูลอิสระหลักที่รับผิดชอบในการรักษาระดับ ROS ที่เหมาะสม [35] จากผลการศึกษาพบว่าฤทธิ์ของสารต้านอนุมูลอิสระในกลุ่ม DM ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ กลุ่มที่ได้รับ CT แสดงให้เห็นการปรับปรุงในการผลิตสารต้านอนุมูลอิสระ กลุ่มที่ได้รับ RSG ไม่ได้แสดงการปรับปรุงที่สำคัญใดๆ ในการมีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ (ตารางที่ 6 และ 7)

ไนตริกออกไซด์ (NO) เรียกว่า ROS สำคัญที่ก่อให้เกิดการอักเสบ การศึกษาของเราชี้ให้เห็นว่าระดับของ NO ลดลงในกลุ่มที่ได้รับ CTE (รูปที่ 11) ผลการศึกษาพบว่าปริมาณประจุลบของซูเปอร์ออกไซด์ในตัวอสุจิของหนูที่เป็นเบาหวานเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ และไม่มีการปรับปรุงอย่างมีนัยสำคัญภายหลังการให้ RSG การผลิตซูเปอร์ออกไซด์ลดลงในกลุ่ม CTE

การหาค่า MDA มีประโยชน์มากในการประเมินไขมันเปอร์ออกซิเดชัน ลิปิดเปอร์ออกซิเดชันเป็นกระบวนการของการเกิดออกซิเดชันในไขมันและสุดท้ายส่งผลให้เกิดความเสียหายต่อเซลล์ MDA ผลิตขึ้นจากผลของลิพิดเปอร์ออกซิเดชันของกรดไขมันไม่อิ่มตัวเชิงซ้อน การศึกษาแสดงให้เห็นว่าระดับ MDA มีความสัมพันธ์กับอายุและระดับน้ำตาลในเลือดที่อดอาหาร [36] การศึกษาในปัจจุบันระบุว่า CTE ช่วยปรับปรุงลิพิดเปอร์ออกซิเดชันในพลาสมา อัณฑะ และสเปิร์ม (ตารางที่ 8)

สารสกัดจาก Cistanche tubulosa

5. สรุปผลการวิจัย

ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันระหว่างภาวะเบาหวานจะรบกวนระบบสืบพันธุ์เพศชายโดยการด้อยค่าของอสุจิและความผิดปกติของอวัยวะสืบพันธุ์ Cistanche tubulosa เป็นพืชทะเลทรายที่ได้รับการยอมรับอย่างกว้างขวางในการแพทย์แผนจีน เนื่องจากมีผลทางเภสัชวิทยา Echinacoside (ECH) เป็นองค์ประกอบหลักของ CTE ที่ทำหน้าที่ต้านอนุมูลอิสระและต้านการอักเสบ ผลการทดลองในหลอดทดลองของเราระบุว่า ECH ได้ฟื้นฟูเส้นทางการสังเคราะห์ฮอร์โมนเทสโทสเตอโรน และลดระดับการแสดงออกของโปรตีน NF-kB และ RAGE ECH ยับยั้งการผลิต superoxide anion และ H2O2 ในเซลล์ Leydig ได้อย่างมีประสิทธิภาพ การศึกษาในร่างกายพบว่า ECH ลดระดับคอเลสเตอรอล ไตรกลีเซอไรด์ TNF-a และ IL-6 นอกจากนี้ การแสดงออกของ mRNA ในไฮโปทาลามัสของหนูที่เป็นเบาหวานยังได้รับการปรับปรุงอย่างมีนัยสำคัญ นอกจากนี้ยังควรทราบด้วยว่า ECH ลดการเกิด lipid peroxidation และปรับปรุงการดื้อต่ออินซูลินในหนูเพศผู้ที่เป็นเบาหวาน กิจกรรมต้านอนุมูลอิสระเพิ่มขึ้นทั้งในพลาสมาและอัณฑะ ดังนั้นการศึกษาของเราจึงแนะนำว่า ECH ให้การป้องกันที่มีประสิทธิภาพต่อความผิดปกติของระบบสืบพันธุ์ในหนูเพศผู้ที่เป็นเบาหวานที่เกิดจาก STZ

ผลงานของผู้เขียน:F.-CK ดำเนินการตรวจสอบ วิเคราะห์อย่างเป็นทางการ และวิเคราะห์ซอฟต์แวร์ AJ และ J.-LH มีส่วนร่วมในการดูแลข้อมูลและร่างต้นฉบับ Z.-LK และ AJ คิดทบทวนต้นฉบับและแก้ไข Z.-LK กำหนดวิธีการและดูแลการทดลองทั้งหมด S.-CC มีส่วนร่วมในการวิเคราะห์ การสอบสวน และการตรวจสอบอย่างเป็นทางการ ผู้เขียนทุกคนมีส่วนในการวิเคราะห์ข้อมูล การร่าง และแก้ไขบทความอย่างมีวิจารณญาณ ให้การอนุมัติขั้นสุดท้ายสำหรับฉบับที่จะตีพิมพ์ และตกลงที่จะรับผิดชอบในทุกแง่มุมของงาน

เงินทุน:งานนี้ได้รับการสนับสนุนทางการเงินโดยศูนย์ความเป็นเลิศสำหรับมหาสมุทร National Taiwan Ocean University จากโครงการศูนย์วิจัยพื้นที่เด่นภายในกรอบของโครงการ Higher Education Sprout โดยกระทรวงศึกษาธิการ (MOE) ไต้หวัน

ผลประโยชน์ทับซ้อน:ผู้เขียนประกาศไม่มีความขัดแย้งทางผลประโยชน์

อ้างอิง

1. องค์การอนามัยโลก. รายงานระดับโลกเกี่ยวกับโรคเบาหวาน 2017. พร้อมใช้งานออนไลน์: http://www.who.int/ news-room/fact-sheets/detail/diabetes (เข้าถึงเมื่อ 25 สิงหาคม 2018)

2. เฮย์เนส NE; คอร์เบตต์ WL; Bizzarro, FT; Guertin, KR; ฮิลเลียร์ด, DW; ฮอลแลนด์, GW; เคสเตอร์, RF; Mahaney, พ.ศ.; ฉี, แอล.; สเปนซ์ CL; และคณะ การค้นพบ ความสัมพันธ์ระหว่างโครงสร้าง-กิจกรรม โพรพิโอนาไมด์ (RO0281675) เจ เมด เคมี. 2010, 53, 3618-3625. [CrossRef] [PubMed]

3. อักบาเจ IM; โรเจอร์ส ดา; แมควิคาร์ CM; McClure, N.; แอตกินสัน AB; มัลลิดิส, C.; Lewis, SE เบาหวานขึ้นอยู่กับอินซูลิน: นัยสำหรับการทำงานของระบบสืบพันธุ์เพศชาย ฮึ่ม รีผลิตภัณฑ์ 2007, 22,1871-1877. [CrossRef] [PubMed]

4. ฟูเช่คอร์ต, เอส.; Metayer, S.; Locatelli, A.; Dacheux, F.; Dacheux, JL Stallion epididymal fluid proteome: ลักษณะเชิงคุณภาพและเชิงปริมาณ; การหลั่งและการเปลี่ยนแปลงแบบไดนามิกของโปรตีนที่สำคัญ1. ไบโอล. ทำซ้ำ 2000, 62,1790-1803. [CrossRef] [PubMed]

5.Vernet, P.; เอตเคน อาร์เจ; Drevet, JR กลยุทธ์ต้านอนุมูลอิสระในหลอดน้ำอสุจิ มล. เซลล์. เอ็นโดครินอล 2004,216, 31-39. [CrossRef] [PubMed]

6.Szkudelski, T. Streptozotocin-nicotinamide ที่เกิดจากเบาหวานในหนู ลักษณะของแบบจำลองการทดลอง ประสบการณ์ ไบโอล. เมดิ. 2012,237, 481-490. [CrossRef] [PubMed]

7.เจิ้ง, เอส.; เจียง X.; วูแอล.; วัง Z .; Huang, L. การเลือกปฏิบัติทางเคมีและทางพันธุกรรมของ Cistanches herba ตาม UPLC-QTOF/MS และบาร์โค้ดของ DNA โปรดหนึ่ง 2014, 9, e98061. [CrossRef] [PubMed]

8. หลี่ เจ.; หลี่ เจ.; Aspire, A.; เกาแอล.; Huo, S .; หลัว เจ.; Zhang, F. Phenylethanoid glycosides จาก Cistanche tubulosa ยับยั้งการเจริญเติบโตของ B16-F10 Cells ทั้งในหลอดทดลองและในร่างกายโดยการเหนี่ยวนำของ apoptosis ผ่านทางทางเดินที่ขึ้นกับ mitochondria เจ. มะเร็ง 2016, 7,1877-1887. [CrossRef] [PubMed]

9. จ้าว คิว; เกา เจ.; Cai, D. ผลกระทบของ Neurotrophic และ neurorescue ของ echinacoside ในรูปแบบเมาส์ MPTP กึ่งเฉียบพลันของโรคพาร์กินสัน ความละเอียดของสมอง 2010,1346, 224-236. [CrossRef] [PubMed]

10. Yoshikawa, M.; มัตสึดะ, H.; โมริกาวะ ต.; Xie, H .; นากามูระ เอส.; Muraoka, O. Phenylethanoid aminoglycosides และ oligosugars ที่มีอะซิเลตที่มีฤทธิ์ vasorelaxant จาก Cistanche tubulosa ไบโอออร์ก. เมดิ. เคมี. 2006, 14, 7468-7475. [CrossRef] [PubMed]

11. เจียง Z.; วังเจ .; หลี่ X .; Zhang, X. Echinacoside และ Cistanche tubulosa (Schenk) R. wight ameliorate bisphenol ที่เกิดจากอัณฑะและความเสียหายของตัวอสุจิในหนูผ่านแกนอวัยวะเพศควบคุมเอนไซม์สเตียรอยด์ เจ. เอธโนฟาร์มาคอล. 2016,193, 321—328. [CrossRef] [PubMed]

12. เพลเซอร์ ZA; คุชแมน, LL; Johnson, BC การประเมินผลิตภัณฑ์ของลิพิดเปอร์ออกซิเดชัน (มาโลนิลไดอัลดีไฮด์) ในระบบชีวเคมี ก้น ไบโอเคมี. 1966,16, 359-364. [ข้ามอ้างอิง]

13. ยังลาย, อีวี; โฮลท์, ดี.; บราวน์, ป.; Jurisicova, A.; แคสเปอร์ เทคนิคการว่ายน้ำของสเปิร์ม RF และการกระจายตัวของดีเอ็นเอ ฮึ่ม ทำซ้ำ 2001,16,1950-1953. [CrossRef] [PubMed]

14. โยโคอิ เค.; Uthus, EO; Nielsen, FH การขาดนิกเกิลทำให้ปริมาณอสุจิและการเคลื่อนไหวของหนูลดลง ไบโอล. ติดตามเอเลม ความละเอียด 2003, 93,141-153. [ข้ามอ้างอิง]

15.Aebi, H. Catalase ในหลอดทดลอง วิธีการ Enz^mol. 1984,105,121-126. [CrossRef] [PubMed]

16. Brownlee, M. ชีวเคมีและชีววิทยาเซลล์โมเลกุลของภาวะแทรกซ้อนจากเบาหวาน ธรรมชาติ 2001, 414, 813. [CrossRef] [PubMed]

17.Shimoda, H.; ทานากะ เจ.; ทาคาฮาระ Y.; ทาเคโมโตะ, K.; ฉาน เอสเจ; Su, MH ผลกระทบของภาวะไขมันในเลือดต่ำของสารสกัด Cistanche tubulosa ซึ่งเป็นยาแผนโบราณของจีนในหนูเมาส์ เป็น. เจ. ชิน. เมดิ. 2552, 37, 1125-1138. [CrossRef] [PubMed]

18. เบย์นส์ เจดับบลิว; Thorpe, SR บทบาทของความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันในภาวะแทรกซ้อนจากเบาหวาน: มุมมองใหม่เกี่ยวกับกระบวนทัศน์แบบเก่า โรคเบาหวาน 1999, 48,1-9 [CrossRef] [PubMed]

19. อัคคุส ฉัน.; กะลัก, S.; Vural, H.; Caglayan, O.; Menekse, E.; ได้, จี.; Durmus, B. Leukocyte lipid peroxidation, superoxide dismutase, glutathione peroxidase และระดับวิตามินซีในซีรัมและเม็ดเลือดขาวของผู้ป่วยเบาหวานชนิดที่ 2 คลินิก ชิม. แอคตา 1996, 244, 221-227 [ข้ามอ้างอิง]

20. มาทูฟ, เอฟเอ; บูดิน, เอสบี; ฮามิด, ZA; อัลวาไฮบี, N.; Mohamed, J. บทบาทของความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันและสารต้านอนุมูลอิสระในภาวะแทรกซ้อนของโรคเบาหวาน สุลต่าน. มหาวิทยาลัยคาบูส เมดิ. จ. 2012, 12, 5-18. [CrossRef] [PubMed]

21. Gu, C.; ยาง X.; Huang, L. Cistanches herba: การทบทวนทางเภสัชวิทยา ด้านหน้า. ฟา. 2016, 7,1-10. [CrossRef] [PubMed]

22. ซง, WT; Gu, L.; วัง, C.; ซัน, เอชเอ็กซ์; Liu, X. ฤทธิ์ต้านน้ำตาลในเลือดสูงและภาวะไขมันในเลือดต่ำของ Cistanche tubulosa ในหนู db/db ที่เป็นเบาหวานชนิดที่ 2 เจ. เอธโนฟาร์มาคอล. 2013,150, 935-945. [CrossRef] [PubMed]

อาหารเสริม Cistanche tubulosa