ตอนที่ Ⅱ:Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides กระตุ้นการตายของเซลล์มะเร็งตับโดยวิธี Mitochondria-Dependent และ MAPK และเพิ่มผลต้านเนื้องอกด้วยการผสมผสานกับ Cisplatin

ติดต่อ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 อีเมล:audrey.hu@wecistanche.com

เราประเมินผลการกระตุ้นภูมิคุ้มกันของ CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides) บนหนู หลังการฉีด ip, sc injection และ ig ของ CTPG (200 และ 400 มก./กก.) ไม่มีการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญในสถานะของหนูเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มที่ไม่ได้รับการรักษา น้ำหนักตัวของหนูเมาส์ยังไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างกลุ่มที่ได้รับ CTPG และกลุ่มที่ไม่ได้รับการรักษา (รูปที่ 7A) ดัชนีหัวใจ ตับ ม้าม ปอด ไต และไธมัสของหนูทดลองมีความคล้ายคลึงกันในทุกกลุ่ม ยกเว้นดัชนีม้ามของหนูในกลุ่มที่ฉีด CTPG ip 400 มก./ กก. (ตารางที่ 1) ผลการวิจัยชี้ให้เห็นว่าปริมาณ CTPG ที่เลือกไม่มีผลข้างเคียงในหนูทดลอง ม้ามเป็นอวัยวะป้องกันภูมิคุ้มกันที่สำคัญในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม และการพัฒนาของมันส่งผลโดยตรงต่อการทำงานของภูมิคุ้มกันของแต่ละบุคคลและความสามารถในการต้านทานโรค ดัชนีอวัยวะภูมิคุ้มกันสะท้อนถึงการพัฒนาและการทำงานของภูมิคุ้มกันของอวัยวะภูมิคุ้มกัน ม้ามประกอบด้วยเซลล์ภูมิคุ้มกันที่หลากหลาย ได้แก่ ทีเซลล์ บีเซลล์ เซลล์เพชฌฆาตตามธรรมชาติ (เซลล์ NK) มาโครฟาจ เซลล์เดนไดรต์ (DCs) และอื่นๆ ซึ่งมีบทบาทสำคัญในระบบภูมิคุ้มกัน.30 มีรายงานว่า ที่พอลิแซ็กคาไรด์สามารถเพิ่มจำนวนเซลล์ภูมิคุ้มกันเพื่อเสริมสร้างร่างกายได้ภูมิคุ้มกัน.31 เนื่องจากการฉีด ip ของ CTPG เพิ่มดัชนีม้ามอย่างมีนัยสำคัญ (เพิ่มขึ้น 0.55 เท่า) เราจึงวิเคราะห์จำนวนเซลล์ภูมิคุ้มกันต่างๆ ในม้ามเพิ่มเติม ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่าการฉีด ip ของ CTPG เพิ่มจำนวนทีเซลล์อย่างมีนัยสำคัญ (CD3 บวก CD19− เซลล์) (เพิ่มขึ้น 0.49 เท่า), บีเซลล์ (CD3−CD19 บวกเซลล์) (เพิ่มขึ้น 0 .49 ครั้ง) และเซลล์ NK (CD3−CD19−CD49b บวกเซลล์) (เพิ่มขึ้น 1.63 เท่า) เปรียบเทียบกับกลุ่มที่ไม่บำบัด CD4 plus และ CD8 plus T cells เป็นชนิดย่อยหลักของ T cells มีบทบาทสำคัญในการตอบสนองภูมิคุ้มกันของเซลล์ที่จำเพาะต่อแอนติเจน 32 ดังนั้นเราจึงวิเคราะห์จำนวนและสถานะการเปิดใช้งานของ CD4 plus และ CD8 plus T เซลล์ใน ม้าม. ผลลัพธ์ระบุว่าการฉีด ip ของ CTPG ไม่เพียงแต่เพิ่มจำนวน CD4 plus และ CD8 plus T เซลล์อย่างมีนัยสำคัญ (เพิ่มขึ้น 0.55 และ 0.34 เท่า ตามลำดับ) แต่ยังปรับปรุงสถานะการเปิดใช้งานของ CD4 บวกทีเซลล์ (CD4 บวก CD44 บวกเซลล์) (เพิ่มขึ้น 0.84 เท่า) (รูปที่ 7B) ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า CTPG มีฟังก์ชันการเพิ่มประสิทธิภาพภูมิคุ้มกัน

การรวมกันของ CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides) และ Cisplatin แสดงฤทธิ์ต้านเนื้องอกที่มีศักยภาพต่อโมเดลเมาส์เนื้องอก H22

เป็นที่ยอมรับกันโดยทั่วไปว่าเคมีบำบัดหรือรังสีรักษาสามารถนำไปสู่การพยากรณ์โรคที่ไม่ดีและทำให้เกิดเหตุการณ์ไม่พึงประสงค์มากมาย ซึ่งอาจเกิดจากการกดภูมิคุ้มกันของระบบภูมิคุ้มกันและความเสียหายต่อเนื้อเยื่อและอวัยวะปกติ พอลิแซ็กคาไรด์จาก TCM มีผลเสริมภูมิคุ้มกันและบรรเทาความเสียหายของอวัยวะภูมิคุ้มกันและเซลล์ภูมิคุ้มกันที่เกิดจากเคมีบำบัดเช่น chitosan33 และ Lycium barbarum polysaccharides34 ผลข้างต้นพบว่า CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides) สามารถบรรเทาผลข้างเคียงของซิสพลาตินต่อระบบภูมิคุ้มกันได้ ดังนั้น ผลของการต้านเนื้องอกของ CTPG ที่รวมกับซิสพลาตินจึงถูกประเมินในแบบจำลองหนูเมาส์ที่เป็นเนื้องอก H22 ดังที่แสดงไว้ในรูปที่ 8A, CTPG เพียงอย่างเดียว, ซิสพลาตินเพียงอย่างเดียว และการรวมกันของ CTPG และซิสพลาติน (CTPG บวกกับซิสพลาติน) ยับยั้งการเจริญของเนื้องอก H22 อย่างมีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม CTPG ร่วมกับซิสพลาตินแสดงผลการยับยั้งที่แข็งแกร่งกว่าของ CTPG และซิสพลาตินเพียงอย่างเดียว ในวันที่ 20 ปริมาตรเนื้องอกในกลุ่มควบคุม ซิสพลาตินเพียงอย่างเดียว CTPG เพียงอย่างเดียวและกลุ่ม CTPG บวกกับพลาติน cis อยู่ที่ประมาณ 1707.8, 722.5, 1033.8 และ 367.5 มม. 3 ตามลำดับ ในวันเดียวกัน เนื้องอกถูกรวบรวมเพื่อการสังเกตด้วยสายตา (รูปที่ 8B) และการเปรียบเทียบน้ำหนัก (รูปที่ 8C) CTPG ร่วมกับซิสพลาตินแสดงผลการรักษาที่ดีกว่าบนแบบจำลองหนูเมาส์ที่เป็นเนื้องอก H22 กว่า CTPG หรือซิสพลาตินเพียงอย่างเดียว น้ำหนักเนื้องอกในกลุ่ม CTPG บวกกับซิสพลาตินต่ำกว่าในกลุ่มอื่นๆ ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าฤทธิ์ต้านเนื้องอกของ CTPG และซิสพลาตินส่งผลให้เกิดผลเสริมฤทธิ์กัน

วัดน้ำหนักตัวของหนูเพื่อสะท้อนสถานะสุขภาพของหนู น้ำหนักตัวลดลงอย่างเห็นได้ชัดหลังการรักษาด้วยซิสพลาติน ซึ่งบ่งชี้ถึงความเป็นพิษต่อระบบอย่างรุนแรงที่เกิดจากซิสพลาติน35 ในการเปรียบเทียบ CTPG ร่วมกับซิสพลาตินช่วยลดน้ำหนักของร่างกายที่เกิดจากซิสพลาตินได้อย่างมีนัยสำคัญ ในขณะที่ CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides) เพียงอย่างเดียวไม่มีผลอย่างมีนัยสำคัญต่อน้ำหนักตัวของหนู (รูปที่ 8D) แยกอวัยวะต่าง ๆ รวมทั้งม้าม หัวใจ ตับ ปอด ไต และต่อมไทมัส เพื่อคำนวณดัชนีอวัยวะ เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มที่ไม่ได้รับการรักษา ดัชนีม้ามลดลงอย่างมีนัยสำคัญและเพิ่มขึ้นโดยซิสพลาตินและ CTPG ตามลำดับ CTPG plus cisplatin กู้คืนดัชนีม้ามเมื่อเปรียบเทียบกับ cisplatin เพียงอย่างเดียว ดัชนีอวัยวะอื่นไม่พบความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในทุกกลุ่ม (ตารางที่ 2).CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides) ร่วมกับ Cisplatin Enhanced theภูมิคุ้มกันของเนื้องอกหนู

จากผลการศึกษาข้างต้นพบว่า CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides) เสริมภูมิต้านทานของหนูและยับยั้งการตายของเซลล์ม้ามที่เกิดจากซิสพลาติน เราตรวจสอบเพิ่มเติมว่าฤทธิ์ต้านเนื้องอกของ CTPG ร่วมกับซิสพลาตินมีความสัมพันธ์กับภูมิคุ้มกันที่เพิ่มขึ้นหรือไม่ ในกระบวนการของการเกิดเนื้องอกและการพัฒนา ระบบภูมิคุ้มกันของร่างกายมีบทบาทสำคัญในการเฝ้าระวังภูมิคุ้มกัน และภูมิคุ้มกันของเซลล์ที่อาศัยเซลล์ T ก็มีบทบาทสำคัญ CD4 plus T เซลล์มีหน้าที่ในการช่วยภูมิคุ้มกันของเซลล์และการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันของร่างกาย และ CD8 บวก T เซลล์เป็นเซลล์เอฟเฟกต์หลักของการตอบสนองทางภูมิคุ้มกัน ซึ่งสามารถฆ่าเซลล์เป้าหมายโดยเฉพาะและมีบทบาทสำคัญในการสร้างภูมิคุ้มกันของเนื้องอกและภูมิคุ้มกันของไวรัส32 ม้ามของหนูเมาส์ที่มีเนื้องอกถูกรวบรวมเพื่อตรวจหาจำนวนทีเซลล์และบีเซลล์โดยโฟลว์ไซโตเมทรี ความถี่และจำนวนของทีเซลล์ซึ่งรวมถึง CD4 บวกและ CD8 บวกทีเซลล์ในกลุ่ม CTPG บวกซิสพลาตินสูงกว่ากลุ่มควบคุมอย่างมีนัยสำคัญ (เพิ่มขึ้น 0.55 และ 0.7 เท่า ตามลำดับ) และกลุ่มซิสพลาติน (เพิ่มขึ้น 0.92 และ 1.16 เท่าตามลำดับ) (รูปที่ 9A และ B) เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม CTPG เพียงอย่างเดียวยังเพิ่มจำนวน CD4 plus และ CD8 plus T เซลล์บางส่วนด้วย แม้ว่าจะไม่มีความแตกต่างที่มีนัยสำคัญ ความถี่และจำนวนของเซลล์ B ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในทุกกลุ่ม

เซลล์ต้านจากมัยอีลอยด์ (MDSCs) และเซลล์ T ควบคุม (Tregs) ขยายตัวในเนื้องอกและยับยั้งการตอบสนองของภูมิคุ้มกันต้านเนื้องอก พวกมันยับยั้งการกระตุ้นและการขยายตัวของ CD4 บวกทีเซลล์, การทำงานของเอฟเฟกเตอร์ทีเซลล์, การกระตุ้นและ/หรือการเพิ่มจำนวน, และการก่อตัวของไซโตไคน์ของ CD4 plus และ CD8 บวกทีเซลล์, การเพิ่มจำนวนบีเซลล์และการผลิตอิมมูโนโกลบูลินและสวิตช์คลาส ฟังก์ชันที่เป็นพิษต่อเซลล์ของ NK และทีเซลล์นักฆ่าตามธรรมชาติ (NKT) และฟังก์ชันและการเจริญเต็มที่ของ DCs36-38 ความถี่และจำนวนของ MDSC (CD11b บวก Gr-1 บวก ), มาโครฟาจ (CD11b บวก Gr -1−) และ Tregs (Treg ธรรมชาติ: CD4 บวก CD25 บวก Foxp3 plus ; Tregs ที่เหนี่ยวนำ: CD4 บวก CD25−Foxp3 บวก ) ในม้ามของหนูที่เป็นเนื้องอกถูกวิเคราะห์โดยโฟลว์ไซโตเมทรี เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม ความถี่และจำนวนของ MDSCs ลดลงอย่างมีนัยสำคัญหลังการฉีดด้วยซิสพลาตินเพียงอย่างเดียว (ลดลง 1.56 เท่า) หรือร่วมกับ CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides) (ลดลง 0.62 ครั้ง) จำนวนของ CD11b บวก Gr-1− มาโครฟาจยังลดลงอย่างมีนัยสำคัญแม้ว่าจะไม่มีการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญในความถี่ของพวกมัน (รูปที่ 9C) นอกจากนี้ CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides) เพียงอย่างเดียวและการบำบัดด้วย CTPG บวกกับซิสพลาตินลดความถี่ของ Tregs ที่ถูกเหนี่ยวนำลงอย่างมีนัยสำคัญ (ลดลง {{0}}.33 และ 0.37 เท่า ตามลำดับ) (รูปที่ 9D) ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าผลต้านเนื้องอกของ CTPG ร่วมกับซิสพลาตินอาจสัมพันธ์กับภูมิคุ้มกันที่เพิ่มขึ้นซึ่งมีลักษณะเฉพาะโดยจำนวนทีเซลล์ที่เพิ่มขึ้นและจำนวน MDSC และ Tregs ที่ลดลง