ส่วนที่ 2 แอนติออกซิเดชันและไซโตโพรเทคชันของแอกทีโอไซด์และอนุพันธ์ของแอกทีโอไซด์: การเปรียบเทียบและเคมีเชิงกลไก

ส่วนที่ 2 สารต้านอนุมูลอิสระ Cistanche Acteoside ปกป้องเซลล์อย่างไร?

คลิกที่นี่เพื่อส่วนที่ 1

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติมกรุณาติดต่อ:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola มีเอฟเฟกต์มากมาย คลิกที่นี่เพื่อทราบข้อมูลเพิ่มเติม

3. การอภิปราย

การทำงานของสารต้านอนุมูลอิสระของสารประกอบฟีนอลิกตามธรรมชาตินั้นเกี่ยวข้องกับการถ่ายโอนอิเล็กตรอน (ET) [18,19] ดังนั้น การทดสอบการลดโลหะด้วย ET บางชนิดจึงถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในการประเมินระดับสารต้านอนุมูลอิสระของฟีนอล เช่น การทดสอบ FRAP และ CUPRAC แนวทางการทดสอบ FRAP จะต้องเป็นไปตามค่า pH ที่น้อยกว่า 3.6 สภาพแวดล้อมที่เป็นกรดดังกล่าวสามารถยับยั้ง H บวกไอออไนซ์จากฟีนอลได้สำเร็จ ดังนั้น การทดสอบ FRAP ถือเป็นเพียงกระบวนการ ET [20,21] ประสิทธิผลของแอคทีโอไซด์และอนุพันธ์ของมันในการทดสอบ FRAP บอกเป็นนัยว่าเมื่อแอคทีโอไซด์และอนุพันธ์ของมันทำหน้าที่เป็นสารต้านอนุมูลอิสระ พวกมันอาจใช้วิถีทาง ET เพื่อออกแรงกระทำการต้านอนุมูลอิสระ

นอกจากนี้เรายังทำการทดสอบ CUPRAC ในบัฟเฟอร์ pH 7.4 ตามที่เห็นใน Suppl. 1,แอคทีโอไซด์และอนุพันธ์ของมันเพิ่มปริมาณ Cu . ขึ้นกับ^{2 บวก}-ลดเปอร์เซ็นต์กำลัง ซึ่งบ่งชี้ว่ายังคงมีศักยภาพ ET ที่ pH ทางสรีรวิทยา อย่างไรก็ตาม ศักยภาพ ET ของพวกเขาลดลงตามลำดับต่อไปนี้:แอคทีโอไซด์> forsythoside B > poliumoside (ตารางที่ 1) ไดนามิกนี้แสดงให้เห็นชัดเจนว่า apiosyl moiety ใน forsythoside B และ rhamnosyl moiety ใน poliumoside ลดศักยภาพ ET

เพื่อทดสอบความเป็นไปได้ที่ ET จะเกิดขึ้นในระหว่างกระบวนการกำจัดอนุมูลอิสระ PTIO・ อนุมูลอิสระที่มีออกซิเจนจึงถูกนำมาใช้ในการศึกษา หลักฐานวงจรโวลแทมเมทรีเปิดเผยว่า PTIO・-scavenging ต่ำกว่า pH 5.0 เป็นปฏิกิริยาอิเลคตรอน-รีดอกซ์เดี่ยว ข้อสังเกตที่ว่าแอคทีโอไซด์และอนุพันธ์ของมันสามารถกำจัด PTIO・ เรดิคัลได้อย่างมีประสิทธิภาพที่ pH 4.5 แสดงให้เห็นความเป็นไปได้ของ ET ในระหว่างกระบวนการกำจัดอนุมูลอิสระ เห็นได้ชัดว่าการค้นพบนี้สนับสนุนผลลัพธ์ดังกล่าวจากการทดสอบ FRAP และ CUPRAC และผลก่อนหน้านี้ว่าอิเล็กตรอนที่บริจาค (e) เป็นคุณสมบัติของสารต้านอนุมูลอิสระฟีนอล [23]

อย่างไรก็ตาม ที่ค่า pH ทางสรีรวิทยา 7.4 การเขียนเรียงความ PTIO・--scavenging ไม่ได้เป็นเพียงวิถีทาง ET แต่ยังรวมถึงวิถีการถ่ายโอนโปรตอน (H plus ) ด้วย ในระหว่างกระบวนการ PTIO・ ได้รับการแนะนำให้ยอมรับH^บวกจากฟีนอลเพื่อผลิตผลิตภัณฑ์พีค ([PTIO-H]^บวก). เพราะ H^บวก-การถ่ายโอนมักจะมาพร้อมกับ ET ในกลไกแบบขั้นตอนหรือแบบซิงโครนัส [24] ผลิตภัณฑ์จริง (หรือขั้นสุดท้าย) คือโมเลกุล [PTIO-H] [22] PTIO・-scavenging ที่ pH 7.4 (Suppl. 1) หมายความว่าแอคทีโอไซด์และอนุพันธ์ของมันมีศักยภาพในการถ่ายโอน H บวกเช่นกัน ค่า IC50 (ตารางที่ 1) ระบุว่า H . สัมพัทธ์^บวก-ศักยภาพการถ่ายโอนอยู่ในลำดับจากมากไปน้อยของแอคทีโอไซด์>ฟอร์ซิโทไซด์ บี > โปลิโอโมไซด์ เห็นได้ชัดว่า apiosyl และ rhamnosyl moieties ก็ทำให้H .อ่อนแอลงเช่นกัน^บวก-ถ่ายโอนศักยภาพระหว่างกระบวนการต้านอนุมูลอิสระ

ตามที่กล่าวไว้ก่อนหน้านี้ ในระหว่างกระบวนการต้านอนุมูลอิสระของฟีนอล ET มักจะมาพร้อมกับโปรตอน (H^บวก) ถ่ายโอนเพื่อสร้างกลไกต้านอนุมูลอิสระหลายอย่าง [24] เช่น การถ่ายโอนไฮโดรเจน-อะตอม (HAT) [23,25-27], การถ่ายโอนอิเล็กตรอน-โปรตอนตามลำดับ (SEPT) [26,27], การสูญเสียโปรตอนตามลำดับอิเล็กตรอนเดี่ยว ถ่ายโอน (SPLET) [26] และการถ่ายโอนอิเล็กตรอนควบคู่โปรตอน (PCET) [24-26,28] ตัวอย่างเช่น ABTS plus • -scavenging ซึ่งเป็นปฏิกิริยาที่ถูกครอบงำโดยการถ่ายโอนอิเล็กตรอนเดี่ยว (SET) [29] ได้รับการพิสูจน์แล้วว่าได้รับผลกระทบจากระดับ H plus เมื่อเร็วๆ นี้ [30] ABTS plus • -scavenging จึงเป็นการทดสอบสารต้านอนุมูลอิสระแบบ multi-pathway-based [21,31] ความจริงที่ว่าแอคทีโอไซด์และอนุพันธ์ของมันสามารถกำจัด ABTS บวก ・ อนุมูลได้บ่งชี้ว่าฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของพวกมันอาจถูกสื่อกลางผ่านหลายวิถีทาง สมมติฐานนี้ได้รับการยืนยันเพิ่มเติมโดยหลักฐานจากการทดสอบการกำจัด DPPH・ ซึ่งเป็นปฏิกิริยาที่ประกอบด้วยหลายเส้นทาง HAT, ET, SEPT และ PCET [26,32] อย่างไรก็ตาม การวิเคราะห์เชิงปริมาณที่ใช้IC₅₀ค่า (ตารางที่ 1) เปิดเผยว่าใน ABTS แบบ multi-pathway-based บวกกับ --scavenging และ DPPH*-scavengingแอคทีโอไซด์ดีกว่า forsythoside B และ rhamnoside poliumoside ดังนั้นจึงสามารถอนุมานได้ว่า apiol และ rhamnosyl moieties ในที่สุดก็ขัดขวางศักยภาพของหลายวิถีทาง (โดยเฉพาะ ET และ H^บวก-โอน) ระหว่างกระบวนการกำจัดอนุมูลอิสระ

ตามที่ผู้เขียนและคนอื่น ๆ ระบุไว้ [14,26] ระหว่างกระบวนการต้านอนุมูลอิสระ อาจเกิดปฏิกิริยา RAF ได้เช่นกัน อย่างไรก็ตาม เพื่อตรวจสอบความเป็นไปได้ของ RAF ได้ศึกษาฟีนิลโพรพานอยด์ไกลโคไซด์สามชนิดร่วมกับกรดคาเฟอีนโดยใช้การวิเคราะห์ UPLC-ESI-Q—TOF-MS/MS พบว่ากรดคาเฟอีนให้ผลผลิตเป็นผลิตภัณฑ์ไดเมอร์ ในขณะที่ไกลโคไซด์ฟีนิลโพรพานอยด์สามชนิดไม่ผลิตผลิตภัณฑ์ RAF สูงสุด การค้นพบนี้แสดงให้เห็นอย่างชัดเจนว่าฟีนิลโพรพานอยด์ไกลโคไซด์สามชนิดไม่สามารถผ่านวิถี RAF เพื่อออกแรงกระทำการต้านอนุมูลอิสระได้ เนื่องจากฟีนิลโพรพานอยด์ไกลโคไซด์สามชนิดถือได้ว่าเป็นเอสเทอร์ของกรดคาเฟอีน (รูปที่ 1) ความแตกต่างระหว่างกรดคาเฟอีนและเอสเทอร์ของกรดคาเฟอีนยังบ่งชี้ว่าปริมาณมากอาจขัดขวางการสร้าง RAF

เมื่อนำมารวมกันจากการขจัดอนุมูลอิสระแอคทีโอไซด์และอนุพันธ์ของมันอาจผ่านหลายวิถีทางเพื่อออกแรงต้านอนุมูลอิสระ เส้นทางสารต้านอนุมูลอิสระเหล่านี้อย่างน้อยเกี่ยวข้องกับ ET และ H plus -transfer (แต่ไม่ใช่ RAF) ผลการวิจัยของเราได้รับการสนับสนุนบางส่วนจากการศึกษาเชิงทฤษฎีที่แอคทีโอไซด์สามารถออกแรงต้านอนุมูลอิสระผ่านทางเส้นทาง SPLET ในกระบวนการนี้ แอกทีโอไซด์อาจลดโปรโตเนตลงก่อน (H^บวก-transfer) เพื่อให้เกิดประจุลบ คาดว่าการเกิด deprotonation จะเกิดขึ้นในกลุ่ม catechol ที่มีความเป็นกรดอ่อน ต่อจากนั้น ประจุลบได้บริจาคอิเล็กตรอนเพื่อให้เกิดรูปแบบฟีน็อกซีเรดิคัล [33] ฟีน็อกซีแรดิคัลที่มีการผัน pn มีความเสถียรในระดับหนึ่ง แน่นอน ในแง่นี้จำเป็นต้องมีการทดลองเพิ่มเติมในอนาคต

เป็นมูลค่าการกล่าวขวัญว่าความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันของเซลล์ยังสามารถเกิดขึ้นได้จากโลหะทรานสิชัน (โดยเฉพาะ Fe^{2 บวก}). เฟ^{2 บวก}อย่างไรก็ตาม ไอออนสามารถเปลี่ยน H . ได้₂O₂โมเลกุลที่เป็นอันตรายที่สุด •OH อนุมูลผ่านปฏิกิริยาเฟนตัน (Fe²บวก บวก H2O2 T Fe³บวก บวก ・OH บวก OH^-). ดังนั้นการลดทอนของ Fe²ระดับบวกสามารถยับยั้ง ・OH อนุมูลได้อย่างมีประสิทธิภาพเพื่อปลดปล่อยความเครียดจากการเกิดออกซิเดชันของเซลล์ อันที่จริง การทำคีเลตธาตุเหล็กด้วยสารต้านอนุมูลอิสระฟีนอลตามธรรมชาติในตอนนี้ ได้รับการพัฒนาให้เป็นวิธีบำบัดที่มีประสิทธิภาพสำหรับโรคเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันบางโรค [34,35]

ในการศึกษานี้ แอกทีโอไซด์และอนุพันธ์ของแอกทีโอไซด์ได้รับการแนะนำว่าเฟ .มีประสิทธิผล^{2 บวก}-คีเลเตอร์โดยการเปลี่ยนแปลงในสเปกโทรสโกปีและสีของสารละลาย (รูปที่ 2) อย่างไรก็ตาม แอคทีโอไซด์นั้นด้อยกว่ากลูโคไซด์ทั้งสองชนิดในคีเลตเฟ^{2 บวก}และ forsythoside B ที่มี apiosyl moiety นั้นด้อยกว่า poliumoside ที่มี rhamnosyl moiety จากการเปรียบเทียบรูปแบบพิเศษของพวกมัน (รูปที่ 1, ขวา) ขอเสนอว่ามอยอิตี apiosyl (หรือ rhamnosyl) สามารถช่วยแกนด์หลัก (กลุ่มฟีนิลโพรพานอยด์) ในการคีเลต Fe^{2 บวก}. ผลกระทบเสริมฤทธิ์กันดังกล่าวทำให้ Fe . แข็งแกร่งขึ้นอย่างไม่ต้องสงสัย^{2 บวก}- ความสามารถในการขับกรดและขยายยอด UV-vis อย่างไรก็ตาม แรมโนซิลมีประสิทธิภาพมากกว่า apiosyl ใน Fe^{2 บวก}- ความสามารถในการคีเลต ความแตกต่างสามารถนำมาประกอบกับความจริงที่ว่า แรมโนซิลเกิดขึ้นในรูปแบบ exocyclic (เช่น aL-rhamnopyranosyl) ในขณะที่ apiosyl อยู่ในรูปแบบเพนทาไซคลิก (เช่น pD-apiofuransyl) เป็นที่ทราบกันว่ารูปแบบ exocyclic นั้นใหญ่กว่าและเสถียรกว่า ดังนั้น exocyclic rhamnosyl จึงมีประสิทธิผลมากกว่าเมื่อเทียบกับ pentacyclic apiosyl ใน Fe^{2 บวก}- ความสามารถในการคีเลต

เพื่อทดสอบว่าแอกทิโอไซด์และอนุพันธ์ของแอกทีโอไซด์สามารถกำจัด ROS ได้หรือไม่ เราทำการทดสอบด้วยไพโรกัลลอลออโตซิเดชัน ตามที่เห็นใน Suppl. 1, ทั้งหมดสามารถกำจัด — รุนแรง, ROS ทั่วไปที่เกิดขึ้นในเซลล์ได้อย่างมีประสิทธิภาพ อย่างไรก็ตาม ฤทธิ์ทางชีวภาพสัมพัทธ์ลดลงในลำดับ โพลิอุโมไซด์ > ฟอร์ไซโทไซด์ บี >แอคทีโอไซด์. ลำดับนี้ยังขนานกับผลของ cytoprotective effect (ตารางที่ 2) การค้นพบนี้บ่งชี้ว่าผลโดยทั่วไปของ แรมโนซิล มอยอิตี หรือ อะพิโอซิล มอยอิตี คือการเพิ่มประสิทธิภาพของการกำจัด ROS หรือผลต่อเซลล์

4. วัสดุและวิธีการ

4.1. เคมีภัณฑ์และสัตว์

Acteoside (หมายเลข CAS: 61276-17-3, 97 เปอร์เซ็นต์ ), forsythoside B (หมายเลข CAS: 81525-13-5,97 เปอร์เซ็นต์ ) ได้รับจาก BioBioPha (คุนหมิง จีน ซัพพลาย 3) Poliumoside (หมายเลข CAS: 94079-81-9, 97 เปอร์เซ็นต์ ) ถูกแยกโดยทีมงานของเราจากสมุนไพรจีนโบราณCallicarpa เปริห.ท.ช้าง (ป.3). DPPH・,(±)-6-ไฮดรอกซิล-2,5,7,8-กรดคาร์บอกซิลิก-2-กรดคาร์บอกซิลิก (โทรลอกซ์), 2,9-ไดเมทิล{{ 9}},10-phenanthroline (neocuproine), 2,4,6-tripyridyltriazine (TPTZ) และ pyrogallol ซื้อมาจาก Sigma-Aldrich Shanghai Trading Co. (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) (NHq'ABTS [2,2'-azino-bis (3-ethylbenzene-thiazoline-6-sulfonic acid diammonium salt)] ได้รับจาก Amresco Chemical Co. (Solon, OH, USA) PTIO・ซื้อ Radical จาก TCI Development Co., Ltd. (Shanghai, China) กรด Caffeic ซื้อมาจาก National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products (ปักกิ่ง ประเทศจีน) Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM), fetal bovine serum (FBS) และทริปซินถูกซื้อจาก Gibco (แกรนด์ไอแลนด์, นิวยอร์ก, สหรัฐอเมริกา) ชุดทดสอบ AnnexinV/propidium iodide (PI) ถูกซื้อจาก Invitrogen (คาร์ลสแบด แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา) รีเอเจนต์อื่นๆ ทั้งหมดมีระดับการวิเคราะห์

หนู Sprague-Dawley (SD) ที่อายุ 4 สัปดาห์ได้รับจากศูนย์สัตว์แห่งมหาวิทยาลัยการแพทย์จีนกวางโจว โปรโตคอลของการทดลองนี้ดำเนินการภายใต้การกำกับดูแลของคณะกรรมการจริยธรรมของสัตว์ประจำสถาบันในมหาวิทยาลัยกวางโจวแห่งประเทศจีน (หมายเลขอนุมัติ 20170306A)

4.2. การทดสอบการลดโลหะ (FRAP& คูปราค)

การทดสอบการลดโลหะรวมถึง Fe^{3 บวก}- ลดการทดสอบกำลังและ Cu^{2 บวก}- ลดการทดสอบกำลัง เฟ^{3 บวก}-reducing assay ก่อตั้งโดย Benzie และ Strain และชื่ออย่างเป็นทางการว่า FRAP [20] โปรโตคอลการทดลองของการทดสอบนี้อธิบายไว้ในรายงานก่อนหน้านี้ [9] โดยสังเขป รีเอเจนต์ FRAP ถูกเตรียมใหม่โดยผสม 10 mM TPTZ, 20 mM FeCl_3,และ {{0}}.25 M บัฟเฟอร์อะซิเตทที่อัตราส่วน 1:1:10 ที่ pH 3.6 ตัวอย่างทดสอบ (x=4-20 ลิตร, 0.05 มก./มล.) ถูกเติมลงในเอธานอล 95 เปอร์เซ็นต์ (20 — x) ตามด้วย 80 RL ของรีเอเจนต์ FRAP หลังจากการฟักตัวที่อุณหภูมิแวดล้อม 30- นาที การดูดกลืนแสงถูกวัดที่ 595 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท (Multiskan FC, Thermo Scientific, Shanghai, China) กำลังลดสัมพัทธ์ของตัวอย่างคำนวณโดยใช้สูตรต่อไปนี้:

ที่ไหน_maxคือค่าการดูดกลืนแสงสูงสุดของของผสมปฏิกิริยากับตัวอย่าง และ A_นาทีคือค่าการดูดกลืนแสงขั้นต่ำในการทดสอบ A คือค่าการดูดกลืนแสงของตัวอย่าง

Cu^{2 บวก}- การลดพลังงานยังสามารถกำหนดลักษณะระดับของสารต้านอนุมูลอิสระจึงเรียกว่า CUPRAC การทดสอบนี้ดำเนินการตามวิธีการเผยแพร่ก่อนหน้านี้ [36] โดยสังเขป 12 RL ของสารละลายน้ำ CuSOq (10 มิลลิโมล/ลิตร), 12 RL ของสารละลายนีโอคิวโพรอีนเอทานอล (7.5 มิลลิโมล/ลิตร) และ (75 — x) RL ของ CH₃COONH₄สารละลายบัฟเฟอร์ ({{0}}.1 โมล/ลิตร, pH 7.5) ถูกเติมลงในหลุมที่มีปริมาตรต่างกันของตัวอย่าง (0.05 มก./มล., 4-20 |^L) วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 450 นาโนเมตรหลังจาก 30 นาทีโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลทที่กล่าวมาข้างต้น กำลัง CUPRAC สัมพัทธ์คำนวณโดยใช้สูตรสำหรับ FRAP อา_maxคือค่าการดูดกลืนแสงสูงสุดของของผสมปฏิกิริยากับตัวอย่าง และ A_นาทีคือค่าการดูดกลืนแสงขั้นต่ำในการทดสอบ A คือค่าการดูดกลืนแสงของตัวอย่าง

4.3. พีทีไอ0・-ScavengingAssay

การสอบวิเคราะห์ PTIO*-scavenging (ที่ pH 4.5 หรือ pH 7.4) ดำเนินการตามวิธีการของเรา [16] โดยสรุป สารละลายของตัวอย่างทดสอบ (x=0-20 ^L, 1 มก./มล. สำหรับ pH 4.5 และ {{10}}.5 มก./มล. สำหรับ pH 7.4) ถูกเติมลงใน (20 — x) rL ของเอทานอล 95 เปอร์เซ็นต์ ตามด้วย 80 RL ของสารละลาย PTIO* ที่เป็นน้ำ สารละลาย PTIO* ที่เป็นน้ำถูกเตรียมโดยใช้สารละลายเนยฟอสเฟต (0.1 มิลลิโมลาร์, pH 4.5 หรือ pH 7.4) ของผสมถูกคงรักษาไว้ที่ 37 องศาเป็นเวลา 2 ชั่วโมง และจากนั้นวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 560 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลทที่กล่าวถึงข้างต้น เปอร์เซ็นต์การยับยั้ง PTIO* คำนวณได้ดังนี้:

โดยที่ A คือค่าการดูดกลืนแสงของสารควบคุมที่ไม่มีตัวอย่าง และ A คือค่าการดูดกลืนแสงของของผสมปฏิกิริยากับตัวอย่าง

4.4. ABTSบวก*-การกวาดล้างและDPPH*- การทดสอบการกวาดล้าง

เอบีทีเอส*^บวก-ประเมินกิจกรรมการกวาดล้างตามวิธีการ [37] ABTS plus * ผลิตขึ้นโดยการผสมเกลือ ABTS diammonium 0.2 มล. (7.4 มิลลิโมล/ลิตร) กับโพแทสเซียม เพอร์ซัลเฟต 0.2 มล. (2.6 มิลลิโมล/ลิตร) ของผสมถูกเก็บไว้ในที่มืดที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 12 ชั่วโมงเพื่อให้การสร้างอนุมูลสมบูรณ์ก่อนที่จะถูกเจือจางด้วยน้ำกลั่น (ที่อัตราส่วนประมาณ 1:20) เพื่อให้การดูดกลืนแสงที่ 734 นาโนเมตรเท่ากับ { {16}}.35 土 0.01 โดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลทดังกล่าว เพื่อตรวจสอบกิจกรรมการไล่ขยะ ตัวอย่างทดสอบ (x=4-20 RL, 0.05 มก./มล.) ถูกเติมลงใน RL (20 — x) RL ของน้ำกลั่น ตามด้วย 80 RL ของ ABTS บวก * รีเอเจนต์ และการดูดกลืนแสงที่ 734 นาโนเมตรวัดได้ 3 นาทีหลังการผสมครั้งแรก โดยใช้น้ำกลั่นเป็นน้ำเปล่า

การออกฤทธิ์กำจัดอนุมูล DPPH* ถูกกำหนดหาตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [18] โดยสรุป 75 RL ของสารละลาย DPPH* (0.1 rM) ถูกผสมกับความเข้มข้นที่ระบุของตัวอย่าง (0.025 มก./มล., 5-25 RL) ที่ละลายในเมทานอล ของผสมถูกคงสภาพไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที และการดูดกลืนแสงถูกวัดที่ 519 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลทที่กล่าวมาข้างต้น

เปอร์เซ็นต์ของกิจกรรมการกวาดล้างของ ABTS บวก • - กิจกรรมการกวาดล้างและ DPPH* - กิจกรรมการกวาดล้าง DPPH* คำนวณจากสูตรที่นำเสนอในส่วนที่ 4.3

4.5. UPLC—ESI—Q-TOF—การวิเคราะห์ MS/MS ของ PPH* ผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยา

วิธีนี้อิงจากการศึกษาครั้งก่อนของเรา [25] สารละลายเมทานอลของแอกทีโอไซด์ถูกผสมกับสารละลายของอนุมูล DPPH* ในเมทานอลที่อัตราส่วนโมลาร์ที่ 1:2 และของผสมที่เป็นผลลัพธ์ถูกบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง จากนั้น ส่วนผสมของผลิตภัณฑ์ถูกกรองผ่าน 0.22-ตัวกรอง Rm และวิเคราะห์โดยใช้ระบบ UPLC ที่ติดตั้งคอลัมน์ C18 (2.0 mm id x 100 mm, 1.6 Rm, Phenomenex, Torrance, CA, USA). เฟสเคลื่อนที่ถูกใช้สำหรับการชะของระบบและประกอบด้วยส่วนผสมของเมทานอล (เฟส A) และน้ำ (เฟส B) คอลัมน์ถูกชะที่อัตราการไหล 0.3 มิลลิลิตร/นาทีด้วยโปรแกรมการชะเกรเดียนต์ต่อไปนี้: 0-10 นาที, 60-100 เปอร์เซ็นต์ A; 10-15 นาที 100 เปอร์เซ็นต์ A. ปริมาณการฉีดตัวอย่างถูกกำหนดไว้ที่ 1 RL สำหรับการแยกส่วนประกอบต่างๆ การวิเคราะห์ ESI-Q-TOF-MS/MS ดำเนินการโดยใช้ Triple TOF 5600บวกแมสสเปกโตรมิเตอร์ (AB SCIEX, Framingham, MA, USA) ที่ติดตั้งแหล่งกำเนิด ESI ซึ่งทำงานในโหมดลบไอออนไนซ์ ช่วงการสแกนถูกตั้งไว้ที่ 100-2000 Da. ระบบทำงานด้วยพารามิเตอร์ต่อไปนี้: แรงดันสเปรย์ไอออน, —4500 V; เครื่องทำความร้อนแหล่งไอออน 550 องศาเซลเซียส; แก๊สม่าน (CUR, N2), 30 psi; ก๊าซพ่นฝอย (GS1, อากาศ), 50 psi; ก๊าซมอก. (GS2, อากาศ), 50 psi. ค่าศักย์การแยกตัว (DP) ถูกตั้งค่าไว้ที่ —100 V ในขณะที่พลังงานการชน (CE) ถูกตั้งค่าไว้ที่ —40 V โดยมีการกระจายพลังงานการชน (CES) ที่ 20 V ผลิตภัณฑ์ RAF

หาปริมาณโดยการสกัดสูตรโมเลกุลที่สอดคล้องกันจากโครมาโตแกรมของไอออนทั้งหมด (Suppl. 2)

การทดลองดังกล่าวทำซ้ำโดยใช้ forsythoside B, podium side และ caffeic acid ที่สอดคล้องกันm/zสกัดพีคจากสูตรโมเลกุลที่สอดคล้องกันจากโครมาโตแกรมของไอออนทั้งหมด (Suppl. 2)

4.6. การวิเคราะห์ UV-Vis-Spectra ของ Fe^{2 บวก}-ผลิตภัณฑ์คีเลต

เฟ^{2 บวก}-ผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาคีเลตของแอกทีโอไซด์-เฟ^{2 บวก}ประเมินโดยใช้ UV-Vis-spectroscopy [13] สำหรับการทดลอง 300 ของสารละลายเมทานอลของแอกทีโอไซด์ (0.24 มิลลิโมลาร์) ถูกเติมลงใน 700 rL ของสารละลายที่เป็นน้ำของ FeCl? 4H2O (168 มิลลิโมลาร์) จากนั้นจึงผสมสารละลายอย่างแรง ต่อมา ของผสมที่เป็นผลลัพธ์ถูกสแกนโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV-Vis หลังจากผ่านไปหนึ่งชั่วโมง (Unico 2600A, เซี่ยงไฮ้, จีน) จาก 200-850 นาโนเมตร

การทดลองดังกล่าวทำซ้ำโดยใช้ฟอร์ไซโทไซด์บีหรือด้านโพเดียมแทนแอกทีโอไซด์

4.7. การทดสอบ Pyrogallol Autooxidation สำหรับ Superoxide Anion (•O2~) การกวาดล้าง

การวัดค่าประจุลบของซูเปอร์ออกไซด์ (・.{0}}) กิจกรรมการกำจัดเป็นไปตามวิธีการของเรา [17] โดยย่อ ตัวอย่างถูกละลายในเอทานอลที่ 1 มก./มล. สารละลายตัวอย่าง (x rL) ถูกผสมกับบัฟเฟอร์ Tris-HCl (980 — x rL, 0.05 โมลาร์, pH 7.4) ที่มี EDTA (1 มิลลิโมลาร์) เมื่อ 20 RL ไพโรกัลลอล (60 มิลลิโมลาร์ใน 1 มิลลิโมลาร์ HCl) ถูกเติม ของผสมถูกเขย่าที่อุณหภูมิห้องทันที วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 325 นาโนเมตรของของผสม (Unico 2100, Shanghai, China) เทียบกับบัฟเฟอร์ Tris-HCl โดยเว้นว่างทุกๆ 30 วินาที เป็นเวลา 5 นาที — ความสามารถในการกำจัดคำนวณดังนี้:

4.8. ผลของ Cytoprotective ต่อ bmMSC ที่ถูกความเครียดออกซิเดชัน (MTT Assay)

bmMSCs ได้รับการเพาะเลี้ยงตามรายงานก่อนหน้าของเรา [38] โดยมีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย โดยสังเขป ไขกระดูกได้มาจากกระดูกโคนขาและกระดูกหน้าแข้งของหนู ตัวอย่างไขกระดูกถูกเจือจางด้วย DMEM (กลูโคสต่ำ) ที่มี FBS 10 เปอร์เซ็นต์ bmMSC ถูกเตรียมโดยการหมุนเหวี่ยงเกรเดียนท์ที่ 900 กรัม เป็นเวลา 30 นาทีที่ 1.073 กรัม/มิลลิลิตร Percoll เซลล์ที่เตรียมไว้ถูกแยกออกโดยการบำบัดด้วยทริปซินร้อยละ 0.25 และส่งผ่านไปยังขวดเพาะเลี้ยงที่ขนาด 1 x 104/ซม.². bmMSC ที่ข้อ 3 ถูกประเมินสำหรับความเป็นเนื้อเดียวกันของเซลล์เพาะเลี้ยงโดยใช้การตรวจหา CD44 โดยใช้การสอบวิเคราะห์ MTT [39]

การสอบวิเคราะห์ MTT ถูกใช้เพื่อประเมินผลทางไซโตโพรเทคทีฟของแอกทีโอไซด์และอนุพันธ์ของมันที่มีต่อ bmMSC [40] แบบจำลองการบาดเจ็บถูกสร้างขึ้นจากการศึกษาก่อนหน้านี้ [41] โปรโตคอลการทดลองแสดงโดยสังเขปในรูปที่ 3

4.9. การวิเคราะห์ทางสถิติ

การทดสอบแต่ละครั้งในส่วนที่ 42-4.4 และ 4.7 ถูกดำเนินการเป็นสามเท่า และการทดสอบด้วย MTT ดำเนินการในรูปแบบเพนตาพลาเคต ข้อมูลถูกบันทึกเป็นค่าเฉลี่ย土SD (ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน) เส้นกราฟการตอบสนองปริมาณรังสีถูกวางแผนโดยใช้ซอฟต์แวร์ระดับมืออาชีพ Origin 60 (OriginLab, Northampton, MA, USA) ค่า IC50 ถูกกำหนดให้เป็นความเข้มข้นสุดท้ายของการยับยั้งอนุมูล 50 เปอร์เซ็นต์ (กำลังรีดิวซ์สัมพัทธ์) [42] การเปรียบเทียบทางสถิติทำโดย ANOVA ทางเดียวเพื่อตรวจหาความแตกต่างที่มีนัยสำคัญโดยใช้ SPSS 13.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) สำหรับ Windowsp< 0.05 ถือว่ามีนัยสำคัญทางสถิติ

5. สรุปผลการวิจัย

ฟีนิลโพรพานอยด์ไกลโคไซด์ตามธรรมชาติสามชนิด ได้แก่ แอกทิโอไซด์ ฟอร์ซิโทไซด์บี และโพเดียม สามารถมีส่วนร่วมในหลายวิถีทางเพื่อออกแรงต้านอนุมูลอิสระ รวมถึง ET, H plus -transfer; และเฟ^{2 บวก}-คีเลต แต่ไม่ใช่ RAF ET และ H^บวก-วิถีการถ่ายโอนอาจถูกขัดขวางโดย แรมโนซิล มอยอิตี หรือ อะพิโอซิล มอยอิตี; อย่างไรก็ตาม Fe^{2 บวก}- ทางเดินคีเลตสามารถเพิ่มได้ด้วยน้ำตาลตกค้าง (โดยเฉพาะ มอยอิตี แรมโนซิล) ผลกระทบทั่วไปของ rhamnosyl moiety หรือ apiosyl moiety คือการเพิ่มความสามารถในการกำจัด ROS ที่เกี่ยวข้องกับหลายเส้นทาง ดังนั้น forsythoside B และ poliumoside จึงเหนือกว่า acteoside ในผล cytoprotective

วัสดุเสริม:มีเอกสารประกอบเพิ่มเติมทางออนไลน์ 1. กราฟปริมาณการตอบสนอง; 2. HPLC-MS สเปกตรัม; 3. ใบรับรองการวิเคราะห์ของ acteoside, forsythoside B และ poliumoside

รับทราบ:งานนี้ได้รับการสนับสนุนโดย National Science Foundation of China (81573558, 81603269), Guangdong Science and Technology Project (2017A050506043) และ Natural Science Foundation of Guangdong Province (2 017A030312009, 2015A030310491)

ผลงานของผู้เขียน:Xian Li และ Dongfeng Chen คิดและออกแบบการทดลอง ไอจิ หวู่เตรียมโปลิโอโมไซด์; Yulu Xie, Qian Guo และ Penghui Xue ทำการทดลองสารต้านอนุมูลอิสระ Ke Li และ Wei Zhao ทำการทดลอง MTT; Hong Xie วิเคราะห์ข้อมูล Jiasong Guo ทำการทดลอง oi รูปที่ 2D; Xian Li เขียนบทความ ผู้เขียนทั้งหมดอ่านและได้รับการอนุมัติต้นฉบับสุดท้าย.

ผลประโยชน์ทับซ้อน:ผู้เขียนประกาศไม่มีความขัดแย้งทางผลประโยชน์

แอคทีโอไซด์ในcistanche

ตัวย่อ

ABTS plus • 2,2'-azino-bis (3-ethylbenzo-thiazoline-6-sulfonic acid) เรดิคัล

bmMSCs เซลล์ต้นกำเนิดจากไขกระดูกที่ได้จากไขกระดูก

CUPRAC Cupric ลดความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระ

ชื้น 2'-ดีออกซีอะดีโนซีน-5'-โมโนฟอสเฟตเรดิคัล

DMEM Dulbecco ตัวกลางของ Eagle ที่ดัดแปลงแล้ว

dGMP2^/-ดีออกซีกัวโนซีน-5'-โมโนฟอสเฟตเรดิคัล

DPPHe 1,1-ไดฟีนิล-2-พิคริล-ไฮดราซีน เรดิคัล

ET การถ่ายโอนอิเล็กตรอน; FBS: เซรั่มวัวในครรภ์

FRAP เฟอร์ริกไอออนลดพลังต้านอนุมูลอิสระ;

การถ่ายโอนอะตอมไฮโดรเจน HAT

MTT 3-(4,5-ไดเมทิลไทอะซอล-2-อิล)-25-ไดฟีนิล

การถ่ายโอนอิเล็กตรอนแบบคู่โปรตอน PCET

PTIOe 2-ฟีนิล-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-ออกซิล 3-ออกไซด์ เรดิคัล

RAF Radical adduct การก่อตัว

ROS ออกซิเจนชนิดปฏิกิริยา

SCNT การถ่ายโอนนิวเคลียสเซลล์โซมาติก

การถ่ายโอนอิเล็กตรอน-โปรตอนตามลำดับของ SEPT

SPLET การสูญเสียโปรตอนตามลำดับการสูญเสียการถ่ายโอนอิเล็กตรอนเดี่ยว

TPTZ 2,4,6-ทริปไพริดิล ไตรอะซีน

โทรลอกซ์ (±)-6-ไฮดรอกซิล-2,5,7,8-tetramethlychromane-2-กรดคาร์บอกซิลิก

อ้างอิง

1. คูบิก้า ป.; Szopa, A.; Ekiert, H. การผลิต verbascoside และกรดฟีนอลิกในชีวมวลของ Verbena Officinalis L. (vervain) ที่เพาะเลี้ยงภายใต้สภาวะในหลอดทดลองที่แตกต่างกัน แนท. แยง. ความละเอียด 2017, 31, 1663-1668.

2. ลี เจเอช; ชุน เจแอล; คิม เคเจ; คิม อีวาย; คิมดีเอช; ลี บีเอ็ม; ฮัน KW; พาร์ค, แคนซัส; ลี KB; Kim, MK ผลกระทบของ Acteoside ในฐานะตัวป้องกันเซลล์ในการผลิตสุนัขโคลน PLOS ONE 2016,11, e0159330.

3. วัง กองบัญชาการ; ซู, YX; หยาง เจ.; จ้าว XY; ซัน, XB; จาง วายพี; กัว เจซี; Zhu, CQ Acteoside ปกป้องเซลล์ Neuroblastoma SH-SY5Y ของมนุษย์จาก |3-การบาดเจ็บของเซลล์ที่เกิดจากอะไมลอยด์ ความละเอียดของสมอง 2009,1283,139-147.

4. ยาง JH; ยัน, วาย.; หลิว HB; วัง JH; Hu, JP ป้องกันผลกระทบของ Acteoside ต่อความเสียหายที่เกิดจาก X-ray ในไฟโบรบลาสต์ผิวหนังมนุษย์ มล. เมดิ. ตัวแทน. 2015,12, 2301-2306.

5. หลิว CH; หลิว TS; หลัว CQ; จางเจ.; เซง XY; Cui, L.; Xie, LJ การหาค่า forsythiaside B และ poliumoside ในแหล่งกำเนิดและชิ้นส่วนต่างๆ จาก Callicarpa kwangtungensis Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 2013, 38, 3324-3326.

6. เจียง WL; เทียน เจดับบลิว; ฟู เอฟเอช; จู้ HB; Hou, J. Neuroprotective Efficacy and Therapeutic Window of Forsythoside B: Ina Rat Model of Cerebral Ischemia และการบาดเจ็บซ้ำ ยูโร เจ. ฟาร์มาคอล. 2010, 640, 75-81.

7. แพน น.; Hori, H. ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของ Acteoside และแอนะล็อกที่มีต่อลิปิดเปอร์ออกซิเดชัน ตัวแทนรีดอกซ์ 1996, 2, 149-154

8. เจิ้ง RL; ชิ วายเอ็ม; เจีย ZJ; จ้าว CY; จาง Q.; Tan, XR ซ่อมแซม DNA Radicals อย่างรวดเร็ว เคมี. ซ. รายได้ 2010, 39, 2827-2834.

9. หลี่ XC; ใหม่ WQ; Chen, DF Chemical Study เกี่ยวกับผลการป้องกันต่อความเสียหายของ DNA ที่เกิดจาก Hydroxyl และกลไกการต้านอนุมูลอิสระของ Myricitrin เจ. ชิน. เคมี. ซ. 2014, 61, 383-390.

10. ชิ วายเอ็ม; วัง WF; หวง CY; เจีย ZJ; ยาว, เอส.; Zheng, RL ซ่อมแซมความเสียหายของ DNA ออกซิเดชันอย่างรวดเร็วโดย Phenylpropanoid Glycosides และแอนะล็อกของพวกเขา การกลายพันธุ์ 2008, 23, 19-26

11. เจียง คิว; หลี่ XC; เทียน วายจี; หลิน QQ; Xie, H .; ลู, WB; จิ, YG; Chen, DF Lyophilized Aqueous Extracts of Mori Fructus และ Mori Ramulus ปกป้องเซลล์ต้นกำเนิดจาก Mesenchymal จากความเสียหายที่บำบัดด้วย eOH: การวิเคราะห์ทางชีวภาพและกลไกการต้านอนุมูลอิสระ อาหารเสริม BMC ทางเลือก เมดิ. 2017,17, 242.

12. วัง TT; เซง GC; หลี่ XC; Zeng, HP In Vitro Studies เกี่ยวกับสารต้านอนุมูลอิสระและผลการป้องกันของ 2-ที่ถูกแทนที่-8-อนุพันธ์ไฮดรอกซีควิโนลีนที่ต้าน H2O2-ความเค้นที่เกิดจากออกซิเดชันใน BMSC เคมี. ไบโอล. ยาเดส 2010, 75, 214-222.

13. หลิว เจเจ; หลี่ XC; หลิน เจ.; หลี่ วายอาร์; วัง TT; เจียง Q.; Chen, DF Sarcandra Glabra (Caoshanhu) ปกป้องเซลล์ต้นกำเนิด Mesenchymal จากความเครียดออกซิเดชัน: การประเมินทางชีวภาพและเคมีเชิงกลไก อาหารเสริม BMC ทางเลือก เมดิ. 2016, 16, 423.

14. หลี่ XC; ฮันแอล.; หลี่ วายอาร์; จางเจ.; เฉิน เจเอ็ม; ลู, WB; จ้าว XJ; ลาย, วายที; เฉิน DF; Wei, G. ผลการป้องกันของ Sinapine ต่อความเสียหายที่เกิดจากอนุมูลไฮดรอกซิลต่อเซลล์ต้นกำเนิด Mesenchymal และกลไกที่เป็นไปได้ เคมี. เภสัช. วัว. 2016, 64, 319-325.

15. Bertolo, A.; Capossela, S.; แฟรงก์, จี.; เบาร์, ม.; Potzel, ต.; Stoyanov, J. Oxidative Status ทำนายคุณภาพในเซลล์ต้นกำเนิด Mesenchymal ของมนุษย์ ความละเอียดของสเต็มเซลล์ เธอ. 2017, 8, 3

16. Li, XC 2-Phenyl-4,4,5,5-Tetramethylimidazoline-1-oxyl 3-Oxide (PTIOe) Radical Scavenging: สารต้านอนุมูลอิสระแบบใหม่ที่เรียบง่าย การทดสอบในหลอดทดลอง เจ. อากริก. เคมีอาหาร. 2017, 65, 6288-6297.

17. Li, X. ปรับปรุงวิธี Pyrogallol Autoxidation: การทดสอบการกำจัดซูเปอร์ออกไซด์ที่เชื่อถือได้และราคาถูกเหมาะสำหรับสารต้านอนุมูลอิสระทั้งหมด เจ. อากริก. เคมีอาหาร. 2012, 60, 6418-6424.

18. หลี่ XC; เจียง Q.; วัง TT; หลิว เจเจ; Chen, DF การเปรียบเทียบผลของสารต้านอนุมูลอิสระของ Quercitrin และ Isoquercitrin: การทำความเข้าใจบทบาทของกลุ่ม6〃-OH โมเลกุล 2016, 21,1246.

19. Leopoldini, M.; มาริโน, ต.; รุสโซ N.; Toscano, M. คุณสมบัติต้านอนุมูลอิสระของสารประกอบฟีนอลิก: H-atom กับกลไกการถ่ายโอนอิเล็กตรอน เจ. ฟิสิกส์. เคมี. ปี 2547,108, 4916^922

20. เบนซี่, ไอเอฟเอฟ; Strain, JJ ความสามารถในการลดเฟอริกของพลาสม่า (FRAP) เป็นตัววัด "พลังต้านอนุมูลอิสระ": การทดสอบ FRAP ก้น ไบโอเคมี. 1996, 239, 70-76.

21. Gulcin, I. กิจกรรมต้านอนุมูลอิสระของส่วนประกอบอาหาร: ภาพรวม. โค้ง. ท็อกซิคอล 2012, 86, 345-391.

22. โกลด์สตีน, เอส.; รุสโซ, A.; Samuni, A. ปฏิกิริยาของ PTIO และ Carboxy-PTIO กับ ・NO, ・NO2 และ O2 เจ. ไบโอล. เคมี. 2546, 278, 50949-50955.

23. หลี่ X.; ฮัน WJ; ใหม่ WQ; Wang, L. กิจกรรมต้านอนุมูลอิสระและกลไกของ Tetrahydroamentoflavone ในหลอดทดลอง แนท. แยง. คอมมูนิตี้ 2013, 8, 787-789.

24. จาง HY; วู, ว.; Mo, YR Study of Proton-Coupled Electron Transfer (PCET) กับสี่สถานะ Diabatic ที่ชัดเจนที่ระดับ ab Initio คอมพิวเตอร์. ทฤษฎี เคมี. 2017, 1116, 50-58.

25. หลิน เจ.; หลี่ XC; เฉิน L.; ลู, WZ; เฉิน XW; ฮันแอล.; Chen, DF ป้องกันผลกระทบต่อความเสียหายของ DNA ที่เกิดจากไฮดรอกซิลและกลไกการต้านอนุมูลอิสระของ [6]-gingerol: การศึกษาทางเคมี วัว. เคมีเกาหลี. ซ. 2014, 35, 1633-1638.

26. Iuga, C.; อัลวาเรซ-ไอดาบอย เจอาร์; Russo, N. กิจกรรมต้านอนุมูลอิสระของ Trans-Resveratrol ต่อ Hydroxyl และ Hydroperoxyl Radicals: การศึกษาควอนตัมเคมีและจลนพลศาสตร์ เจ. องค์กร. เคมี. 2012, 77, 3868-3877. [CrossRef] [PubMed]

27. หลี่ XC; หู คิวพี; เจียง SX; หลี่เอฟ.; หลิน เจ.; ฮันแอล.; หง, วายแอล; ลู, WB; เกา YX; Chen, DF Flos Chrysanthemi Indici ป้องกันความเสียหายที่เกิดจาก Hydroxyl ต่อ DNA และ MSCs ผ่านกลไกการต้านอนุมูลอิสระ เจ ซาอุดิ เคมี. ซ. 2015,19, 454-460.

28. Amic, A.; มาร์โควิช Z.; มาร์โควิช JMD; สเตฟานิค, วี.; ลูซิก, บี.; Amic, D. สู่การทำนายที่ดีขึ้นของศักยภาพการขจัดอนุมูลอิสระของ Flavonoids: ความสำคัญของกลไก PCET แบบคู่ เคมีอาหาร. 2014, 152, 578-585.

29. ลี CH; Yoon, JY UV Direct Photolysis ของ 2,2'-and-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate) (ABTS) ในสารละลายที่เป็นน้ำ: จลนพลศาสตร์และกลไก เจ. โฟโตเคม. โฟโตไบโอล ปี 2008, 197, 232-238

30. Aliaga, C.; Lissi, ปฏิกิริยา EA ของ 2,2'-Azinobis(3-Ethylbenzothiazoline-6-Sulfonic Acid (ABTS) Derived Radicals with Hydroperoxides. Kinetics and Mechanism. Int. J. Chem. Kinet. 1998, 30, { {8}}.

31. ออสมัน AM; วงศ์ KKY; Fernyhough, A. ABTS Radical-Driven Oxidation of Polyphenols: การแยกและการอธิบายโครงสร้างของโควาเลนต์แอดดักต์ ไบโอเคมี. ชีวฟิสิกส์ ความละเอียด คอมมูนิตี้ 2006, 346, 321-329.

32. Osman, AM หลายวิถีทางของปฏิกิริยาของ 2,2-Diphenyl-1-Picrylhydrazyl Radical (DPPHe) กับ ( บวก )-catechin: หลักฐานสำหรับการก่อตัวของโควาเลนต์ Adduct ระหว่าง DPPHe และรูปแบบออกซิไดซ์ ของสารโพลีฟีนอล ไบโอเคมี. ชีวฟิสิกส์ ความละเอียด คอมมูนิตี้ 2011, 412, 473-478.

33. Lopez-Munguia, A.; เอร์นานเดซ-โรเมโร, วาย.; Pedraza-Chaverri เจ.; มิแรนดา-โมลินา, A.; เรกลา ฉัน; มาร์ติเนซ, A.; Castillo, E. Phenylpropanoid Glycoside Analogues: การสังเคราะห์ด้วยเอนไซม์, กิจกรรมต้านอนุมูลอิสระและการศึกษาเชิงทฤษฎีของกลไกการเก็บขยะแบบหัวรุนแรงฟรีของพวกเขา โปรดหนึ่ง 2011, 6, e20115

34. เพอร์รอน NR; Brumaghim, JL A การทบทวนกลไกการต้านอนุมูลอิสระของสารประกอบโพลีฟีนอลที่เกี่ยวข้องกับการจับเหล็ก เซลล์ไบโอเคมี. ชีวฟิสิกส์ 2552, 53, 75-100.

35. Devos, D.; Moreau, C.; เดเวดเจียน เจซี; คลูซ่า เจ.; แปร์โรลต์, ม.; ลาลูซ, ค.; Jonneaux, A.; Ryckewert, G.; การ์คอน, จี.; Rouaix, N.; และคณะ การกำหนดเป้าหมาย Chelatable Iron เป็นวิธีการรักษาในโรคพาร์กินสัน สารต้านอนุมูลอิสระ สัญญาณรีดอกซ์ 2014, 21,195-210.

36. เซคิก, เอสดี; บาสคาน แคนซัส; Totem, E.; Apak, R. Modified Cupric Reducing Antioxidants (CUPRAC) Assay สำหรับการวัดความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของโปรตีนที่ประกอบด้วย Thiol ในสารผสมกับโพลีฟีนอล ทาลันต้า 2009, 79, 344-351.

37. หลี่ XC; เฉิน DF; ใหม่, วาย.; เหวิน, บี.; Wang, XZ ความสอดคล้องระหว่างกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระในหลอดทดลองและส่วนประกอบทางเคมีของ Radix Astragali (Huangqi) แนท. แยง. ความละเอียด 2012, 26, 1050-1053.

38. เฉิน DF; หลี่ XC; ซู ZW; หลิว XB; ดู่ SH; หลี่เอช.; โจว เจเอช; เซง, เอชพี; Hua, ZC Hexadecanoic Acid จาก Buzhong Yiqi Decoction Induced Proliferation of Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells เจ เมด อาหาร 2010,13, 967-975.

39. หลี่ X.; หลิว เจเจ; หลิน เจ.; วัง TT; หวง JY; หลิน YQ; Chen, DF ป้องกันผลกระทบของ Dihydromyricetin ต่อ »ความเสียหายของสเต็มเซลล์ Mesenchymal ที่เหนี่ยวนำโดย OH และเคมีเชิงกลไก โมเลกุล 2016,21, 604.

40. วัง GR; หลี่ XC; เซง, การสังเคราะห์ HP, ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของ (E)-9-p-Tolyl-3-2-(8-ไฮดรอกซี-ควินอล- 2-อิล)ไวนิล-คาร์บาโซลและ (E){{8 }}(p-Anisyl)-3-2-(8-ไฮดรอกซี-ควินอล-2-อิล)ไวนิล-คาร์บาโซลและการเพิ่มจำนวนการเหนี่ยวนำของสเต็มเซลล์มีเซนไคมอล แอคตา ชิม. บาป. 2552, 67, 974-982.

41. หลี่ X.; เหว่ยจี .; วัง X .; หลิว, D.; เติ้ง, ร.; หลี่เอช.; โจวเจ.; หลี่, วาย.; เซง, เอช.; Chen, D. การกำหนดเป้าหมายของ Shh Pathway โดย atractylenolides ส่งเสริมการสร้างความแตกต่างของ chondrogenic ของเซลล์ต้นกำเนิด mesenchymal ไบโอล. เภสัช. วัว. 2012, 35,1328-1335.

42. หลี่ XC; เกา YX; หลี่เอฟ.; เหลียง เอเอฟ; ซู ZM; ไบ, วาย.; ใหม่ WQ; ฮันแอล.; Chen, DF Maclurin ปกป้องความเสียหายที่เกิดจากไฮดรอกซิลที่เกิดจากอนุมูลอิสระต่อเซลล์ต้นกำเนิดจากเยื่อหุ้มเซลล์: การประเมินสารต้านอนุมูลอิสระและความเข้าใจเชิงกลไก เคมี. ไบโอล. มีปฏิสัมพันธ์. 2014, 219, 221-228.

ความพร้อมใช้งานของตัวอย่าง: ตัวอย่างของสารประกอบ poliumoside มีให้จากผู้เขียน

© 2018 โดยผู้เขียน ผู้ได้รับใบอนุญาต MDPI, บาเซิล, สวิตเซอร์แลนด์ บทความนี้เป็นบทความแบบเปิดที่เผยแพร่ภายใต้ข้อกำหนดและเงื่อนไขของใบอนุญาต Creative Commons Attribution (CC BY) (http:ZZcreativecommons.org/licenses/byZ4.0Z)