ส่วนที่ 1 การเตรียมและการประเมินการนำส่งผ่านผิวหนังด้วยไมโครอิมัลชันของ Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides

ติดต่อ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 อีเมล:audrey.hu@wecistanche.com

JIANHUA YANG1*, HUANHUAN XU1-3*, & et al.

เชิงนามธรรม.

จุดมุ่งหมายหลักของการศึกษาครั้งนี้คือการพัฒนาสูตรไมโครอิมัลชัน (ME) แบบใหม่เพื่อส่งมอบphenylethanoid glycoside จาก cistanche(PG) สำหรับใช้ในผลิตภัณฑ์ปรับสีผิวและครีมกันแดด ระยะของน้ำมันได้รับการคัดเลือกโดยพิจารณาจากความสามารถในการละลายของยา ในขณะที่สารลดแรงตึงผิวและสารลดแรงตึงผิวได้รับการคัดเลือกและเลือกโดยพิจารณาจากความสามารถในการละลายและประสิทธิภาพในการสร้าง ME ไดอะแกรมเฟส 3 แบบหลอกถูกสร้างขึ้นเพื่อประเมินบริเวณ ME และเลือกสูตรผสมของ ME แบบน้ำมันในน้ำห้าสูตรเป็นยานพาหนะ ทำการทดลองการซึมผ่านของผิวหนังในหลอดทดลองเพื่อปรับสูตร ME ให้เหมาะสมที่สุด และเพื่อประเมินความสามารถในการซึมผ่านของมันเมื่อเปรียบเทียบกับสารละลายน้ำเกลือ คุณสมบัติทางเคมีกายภาพของ ME ที่ปรับให้เหมาะสมและความสามารถในการซึมผ่านของ PG(phenylethanoid glycoside จาก cistanche) ที่ข้าพเจ้าส่งมาให้ก็ถูกสอบสวนด้วย สูตร ME ที่ปรับให้เหมาะสมที่สุดประกอบด้วยไอโซโพรพิลไมริสเตท (7 เปอร์เซ็นต์ , น้ำหนัก/น้ำหนัก), Cremorphor EL (21 เปอร์เซ็นต์ , น้ำหนัก/น้ำหนัก), โพรพิลีนไกลคอล (7 เปอร์เซ็นต์ , น้ำหนัก/น้ำหนัก) และน้ำ (65 เปอร์เซ็นต์ น้ำหนัก/น้ำหนัก) จำนวนสะสมของPG(phenylethanoid glycoside จาก cistanche) ที่ซึมผ่านผิวหนังของหนูที่ตัดตอนโดย ME มีค่าประมาณ 1.68 เท่าของตอนที่ฉีด PG ด้วยน้ำเกลือเท่านั้น ปริมาณสะสมของ PG ในไมโครอิมัลชัน (4149.650±37.3 ไมโครกรัม·ซม.-2 ) มีค่ามากกว่า PG ในสารละลายน้ำเกลือ (2288.63±20.9 ไมโครกรัมอย่างมีนัยสำคัญ ซม.-2 ). นอกจากนี้ ค่าสัมประสิทธิ์การซึมผ่านบ่งชี้ว่าไมโครอิมัลชันที่เหมาะสมที่สุดเป็นตัวพาที่มีประสิทธิภาพมากขึ้นสำหรับการนำส่ง PG ผ่านผิวหนังมากกว่าสารละลายควบคุม (8.87±0.49 ซม./ชม.10-3 เทียบกับ 5.41±0.12 ซม./ชม.10-3 ) เมื่อนำมารวมกัน ความสามารถในการซึมผ่านของ ME‑carried PG เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับน้ำเกลือ

cistanche

บทนำ

เฮอร์บา ซิสแทนเช่,ยาชูกำลังสมุนไพรที่กระจายอยู่ทั่วไปในภูมิภาคทะเลทราย มักใช้ในยาจีนโบราณ จนถึงปัจจุบัน มีการศึกษาหลายชิ้นเพื่อตรวจสอบคุณสมบัติทางชีวเภสัชภัณฑ์ ซึ่งรวมถึงการปรับปรุงความจำ สมรรถภาพทางเพศ การกำจัดอนุมูลอิสระ และกิจกรรมต่อต้านวัย (1) ส่วนประกอบหลักของ H. cistanche คือฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ (PG). การศึกษาก่อนหน้านี้เปิดเผยว่า PG ยับยั้งการทำงานของไทโรซิเนส เอนไซม์จำกัดอัตราสำหรับการสังเคราะห์เมลานินในร่างกายมนุษย์ (2) นอกจากนี้ PG(phenylethanoid glycoside จาก cistanche) มีรายงานว่ามีหน้าที่ในการกำจัดอนุมูล 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl radical (3) และปกป้อง keratinocytes จากรังสีอัลตราไวโอเลต (UV) ดังนั้นส่วนประกอบนี้อาจมีศักยภาพในการเสื่อมสภาพของผิวหนัง ยาเฉพาะที่มักใช้ในด้านเครื่องสำอาง โดยยาส่งตรงไปยังผิวกาย (4) ไมโครอิมัลชัน (ME) เป็นระบบการนำส่งยาแบบใหม่ตามอัตภาพประกอบด้วยขั้นตอนของน้ำมัน สารลดแรงตึงผิว สารลดแรงตึงผิวและสารในน้ำ (5) และได้รับรายงานว่าปรับปรุงอัตราและการดูดซึมยาสลายไขมัน (6) นอกจากนี้ เนื่องจากความสามารถในการละลายที่น่าพอใจ การระคายเคืองผิวหนังต่ำ และการซึมผ่านสูง จึงคาดว่าจะใช้ในการนำส่งยาเฉพาะที่ (7,8) ตามความรู้ที่ดีที่สุดของเรา มีการศึกษาเพียงไม่กี่ชิ้นที่นำส่ง PG ผ่านยาเฉพาะที่โดยใช้ไมโครอิมัลชัน ในการศึกษานี้ ได้มีการสร้างระบบนำส่งนาโนอิมัลชันแบบน้ำมันในน้ำ (O/W) สำหรับการบริหารทางผิวหนัง และรวม PG ไว้ในนาโนอิมัลชัน (9,10) ในขณะเดียวกัน การเตรียมและการกำหนดลักษณะเฉพาะของนาโนอิมัลชันที่มี PG เป็นพื้นฐานถูกดำเนินการโดยการตรวจสอบการปลดปล่อยผ่านผิวหนังในหลอดทดลอง

วัสดุและวิธีการ รีเอเจนต์

Cremorphor EL และ isopropyl myristate (IPM) ถูกซื้อจาก Sigma Aldrich; เมอร์ค เมอร์ค (ดาร์มสตัดท์ เยอรมนี) เอทานอล กรดโอเลอิก (OA) และทวีน-80 ซื้อมาจาก Guangcheng Chemical Reagent Co., Ltd. (เทียนจิน ประเทศจีน) Ethyl oleate ซื้อมาจาก Shanghai Chemical Reagent Co., Ltd. (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) สารเคมีและตัวทำละลายทั้งหมดที่ใช้เป็นเกรดรีเอเจนต์เชิงวิเคราะห์ การเตรียมและการประเมินการนำส่งผ่านผิวหนังด้วยไมโครอิมัลชันของ Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides JIANHUA YANG1*, HUAN HUAN XU1-3*, SHANSHAN WU2, BOWIE JU2, DANDAN ZHU2, YAO YAN1, MEI WANG2 และ JUMPING HU{{9} } ภาควิชาเภสัช โรงพยาบาลในเครือแห่งแรก 2 ภาควิชายาธรรมชาติ, วิทยาลัยเภสัช, มหาวิทยาลัยการแพทย์ซินเจียง, อุรุมชี, ซินเจียง 830011; 3 Department of Pharmacy, Kanghua Hospital, Dongguan, Guangdong 523003, PR China รับ 2 ธันวาคม 2558; ยอมรับ 29 พฤศจิกายน 2016 DOI: 10.3892/MMR.2017.6147 ติดต่อกับ: Dr. Junping Hu, Department of Natural Medicines, College of Pharmacy, Xinjiang Medical University, 393 Xinyi Road, Urumqi, Xinjiang 830011, PR China E-mail: hujp0551 @yeah.net * สนับสนุนอย่างเท่าเทียมกัน คำสำคัญ: phenylethanoid glycoside, microemulsion, transdermal delivery, skin lightener, sunscreen yang et al: ME-BASED PG FOR COSMETIC APPLICATION 1110 Preparation of PhGs PhG(phenylethanoid glycoside จาก cistanche) จัดทำขึ้นตามที่อธิบายไว้เป็นประจำ (11)

อากาศแห้งค. ทูบูโลซาถูกขับเคลื่อนและสกัดโดยการซึมผ่านด้วย 80 เปอร์เซ็นต์ EtOH เปอร์โคเลตถูกระเหยภายใต้ความกดดัน ตามด้วยการกรองของไหลตกค้าง สิ่งกรองถูกทำให้เข้มข้นและโครมาโตกราฟีบนคอลัมน์แมโครพอรัสเรซิน SP-825 โดยใช้ EtOH 0, 30, 50, 70 และ 90 เปอร์เซ็นต์ในน้ำเป็นสารชะ สารชะ EtOH ร้อยละ 30-50 เปอร์เซ็นต์ถูกทำให้เข้มข้นและทำให้แห้งเพื่อให้ได้ส่วนที่อุดมด้วย PhG UV spectrophotometry ระบุเนื้อหาของ PhG(phenylethanoid glycoside จาก cistanche) อยู่ที่ร้อยละ 87.6 การคัดกรองน้ำมัน สารลดแรงตึงผิว และสารลดแรงตึงผิวสำหรับ ME ทำการทดสอบความสามารถในการละลายเพื่อเลือกส่วนประกอบที่เหมาะสมสำหรับการเตรียมสูตร ME ที่มีความสามารถในการบรรจุยาสูง ในกระบวนการนี้ ปริมาณที่มากเกินไปของ PG ถูกเติมลงใน 4 มล. ของรีเอเจนต์ต่อไปนี้: IPM, พาราฟินเหลว, OA, Cremophor EL, Tween‑80, เอทานอลสัมบูรณ์, โพรพิลีนไกลคอล, กลีเซอรีน และ PEG400 ตามลำดับ ต่อจากนี้ ของผสมที่เป็นผลลัพธ์ถูกเขย่าแบบซึ่งกันและกันที่ 37˚C เป็นเวลา 72 ชั่วโมง ที่ตามด้วยการหมุนเหวี่ยงที่ 12,830 xg เป็นเวลา 10 นาที ต่อมา เม็ดถูกแขวนลอยใหม่ในเมทานอล และ PG ถูกกำหนดหาโดยใช้ UV spectrophotometry ที่ 333 นาโนเมตร สารละลายเจือจางที่เหมาะสมของน้ำมัน สารลดแรงตึงผิว และตัวทำละลายร่วมในเมทานอลทำหน้าที่เป็นตัวควบคุมเปล่า การสร้างแผนภาพเฟส เพื่อให้ได้ช่วงความเข้มข้นของส่วนประกอบสำหรับขอบเขตไมโครอิมัลชันที่มีอยู่ ไดอะแกรมเฟสไตรภาคเทียมถูกสร้างขึ้นโดยใช้วิธีการไทเทรตน้ำตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (12) ไดอะแกรมสามเฟสถูกเตรียมด้วยอัตราส่วนน้ำหนัก 1:3, 1:1 และ 3:1 โดยน้ำหนักของสารลดแรงตึงผิวต่อสารลดแรงตึงผิว จากนั้นผสมเฟสของน้ำมันและส่วนผสมของสารลดแรงตึงผิวที่อัตราส่วนน้ำหนัก 1:9, 2:8, 3:7, 4:6, 5:5, 6:4, 7:3, 8:2 และ 9:1 . ของผสมน้ำมันและสารลดแรงตึงผิวถูกผสมให้เป็นเนื้อเดียวกันและถูกเจือจางแบบหยดด้วยน้ำบริสุทธิ์ภายใต้การกวนด้วยแม่เหล็ก (300 รอบต่อนาที) ที่อุณหภูมิห้องจนได้ ME ที่โปร่งใส ความเข้มข้นของส่วนประกอบถูกบันทึกเพื่อทำให้ไดอะแกรมเฟส ternary หลอกสมบูรณ์ จากแผนภาพเหล่านี้ เลือกความเข้มข้นของวัสดุที่เหมาะสมสำหรับการเตรียม ME ที่มี PG เป็นพื้นฐาน การเตรียม ME และสารละลายน้ำของ PG เลือก MEs (ME1-5) ทั้งหมด 5 รายการตามแผนภาพเฟสที่มีสารลดแรงตึงผิว: อัตราส่วนน้ำหนักของ Cosurfactant 3:1 (ตารางที่ 1) ระบบไมโครอิมัลชันถูกเตรียมโดยการผสมน้ำมันกับส่วนผสมของสารลดแรงตึงผิวและสารลดแรงตึงผิว และน้ำถูกเติมลงในเฟสที่เป็นน้ำมันอย่างแม่นยำด้วยการกวนด้วยแม่เหล็ก (300 รอบ/นาที) ที่37˚C ระบบถูกปรับสมดุลโดยใช้การกวนแม่เหล็กอย่างอ่อนโยนเป็นเวลา 30 นาทีตามด้วยการละลายปริมาณ PG ที่เหมาะสมภายใต้อัลตราโซนิก สารละลายในน้ำถูกเตรียมด้วยปริมาณ PG เดียวกันที่ละลายในน้ำบริสุทธิ์ ลักษณะของไมโครอิมัลชัน ขนาดหยดโดยเฉลี่ยและดัชนีการกระจายหลายตัวของ MEs ได้รับการประเมินโดยโฟตอนสหสัมพันธ์สเปกโทรสโกปี (Malvern Instruments, Ltd., Malvern, UK) ตัวอย่างทั้งหมดถูกเจือจางด้วยน้ำในอัตราส่วน 1:5 และถูกกรองผ่านตัวกรอง 0.22 ไมโครเมตร การทดสอบดำเนินการในห้องควบคุมอุณหภูมิที่อุณหภูมิ 25˚C เพิ่มขึ้นสามเท่า สัณฐานวิทยาของไมโครอิมัลชัน PG สังเกตได้โดยใช้กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด (JEM-100CXII; JEOL Ltd., Tokyo, Japan) โดยสังเขป ตัวอย่างเจือจางหนึ่งหยดถูกวางบนตะแกรงทองแดงที่เคลือบฟิล์ม ตามด้วยการย้อมสีด้วยสารละลายน้ำกรดฟอสโฟทังสติก 2 เปอร์เซ็นต์หนึ่งหยด

เส้นผ่านศูนย์กลางหยดเฉลี่ยของไมโครอิมัลชันถูกกำหนดโดยโฟตอนสหสัมพันธ์สเปกโทรสโกปี (BI{0}}SM; Brookhaven Instruments Corporation, Holtsville, NY, USA) ที่อุณหภูมิห้อง ความหนืดของยานพาหนะ ME วัดได้ที่ 25˚C โดยใช้เครื่องวัดความหนืดแบบดิจิตอล NDJ-8S (Shanghai Precision and Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai, China) โดยไม่มี 1 ชุดโรเตอร์ที่ 60 รอบต่อนาที การกำหนด pH ค่า pH ของ MEs ถูกกำหนดที่ 25˚C โดยใช้เครื่องวัดความเป็นกรดแบบดิจิตอล Phs‑3C (โรงงานเครื่องมือ Shanghai REX เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) ดัชนีการหักเหของแสงถูกวัดด้วยเครื่องวัดการหักเหของแสง Abbe แบบควบคุมอุณหภูมิ (Optical Instrument Factory, Shanghai, China) การเตรียมเนื้อเยื่อผิวหนัง หนูคุนหมิงเพศผู้น้ำหนัก 20 กรัมซื้อมาจากศูนย์สัตว์ทดลองของมหาวิทยาลัยการแพทย์ซินเจียง (ซินเจียงประเทศจีน) หนู 10 ตัว (อายุ 6 สัปดาห์) ได้รับการให้อาหารแบบปรับตัวเป็นเวลา 1 สัปดาห์ในรอบมืด 12 ชั่วโมง/12 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิห้อง (24±2˚C) ที่มีความชื้น 50±15 เปอร์เซ็นต์ สัตว์ทุกตัวสามารถเข้าถึงอาหารและน้ำมาตรฐานได้ กำจัดขนด้วยปัตตาเลี่ยนไฟฟ้า หลังจากการดมยาสลบด้วยคลอรัลไฮเดรต (10 เปอร์เซ็นต์) โดยการฉีดใต้ผิวหนัง เนื้อเยื่อผิวหนังถูกตัดออกจากบริเวณหน้าท้อง และเอาไขมันใต้ผิวหนังและเนื้อเยื่อเกี่ยวพันออก เนื้อเยื่อถูกวางในตู้เย็นที่ 4˚C ค้างคืน โปรโตคอลการศึกษาได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการจริยธรรมของมหาวิทยาลัยการแพทย์ซินเจียง (ซินเจียง, จีน) การศึกษาการซึมผ่านในหลอดทดลอง การทดลองการซึมผ่านได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (12) ผิวหนังที่ถูกตัดออกถูกหนีบไว้ระหว่างผู้ให้และห้องรับของเซลล์การแพร่กระจายในแนวตั้งที่มีพื้นที่การแพร่กระจายที่มีประสิทธิผล 2.8 ซม.2 ห้องรับสารเต็มไปด้วยน้ำเกลือสดปกติ เซลล์แพร่ถูกคงรักษาไว้ที่ 37˚C โดยใช้อ่างน้ำหมุนเวียน และสารละลายในห้องรีเซพเตอร์ถูกกวนอย่างต่อเนื่องที่ 200 รอบต่อนาที ต่อจากนี้ สูตรทดสอบ (1.0 มล.) ถูกใส่อย่างเบามือในห้องผู้ให้ ต่อจากนั้น สารละลาย 3 มล. ในห้องตัวรับถูกเอาออกและแทนที่ด้วยน้ำเกลือปกติสดที่มีปริมาตรเท่ากันในช่วงเวลาที่กำหนดไว้ (0, 2, 4, 6, 8, 10 และ 24 ชั่วโมง) ตัวอย่างที่ได้จากห้องตัวรับถูกใช้เพื่อกำหนด PG(phenylethanoid glycoside จาก cistanche)โดยใช้ UV spectroscopy ที่ความยาวคลื่น 333 นาโนเมตร ปริมาณสะสมของ PG ที่ซึมผ่านผิวหนังของหนูเมาส์ที่ถูกตัดออกถูกคำนวณตามสูตรต่อไปนี้:

โดยที่ Qn คือปริมาณที่สะสม ณ เวลาที่กำหนดให้ t, Cn คือความเข้มข้นของยาของสารละลายตัวรับในแต่ละช่วงเวลาของการสุ่มตัวอย่าง, Ci คือความเข้มข้นของยาในกลุ่มตัวอย่าง, S คือพื้นที่การแพร่ที่มีประสิทธิผล (S{{0) }}.8 cm2 ) และ V0 และ Vi คือปริมาตรของสารละลายตัวรับและตัวอย่างตามลำดับ จำนวนสะสม (Qn) ของ PG(phenylethanoid glycoside จาก cistanche)แทรกซึมถูกวางแผนเป็นฟังก์ชันของเวลา (t) สำหรับแต่ละสูตรผสม อัตราการซึมผ่านของ PG ที่สภาวะคงตัว (Jss, µg/cm-2 /h-1 ) ผ่านผิวหนังของหนูเมาส์ถูกคำนวณจากความชันของส่วนเชิงเส้นของแผนภาพของเวลา Qnversus ค่าสัมประสิทธิ์การซึมผ่าน (Kp, cm/h) คำนวณตามสูตรต่อไปนี้:

โดยที่ Kp คือสัมประสิทธิ์การซึมผ่าน Jss คือการไหลออกที่คำนวณที่สภาวะคงตัว และ C0แสดงความเข้มข้นของยาที่คงที่ในกระสายยา การศึกษาการคงอยู่ของผิวหนัง ส่วนต่อไปนี้ให้รายละเอียดการเปรียบเทียบพฤติกรรมการซึมผ่านของ ex vivo ปริมาณสะสม อัตราการซึมผ่าน สัมประสิทธิ์การซึมผ่านและลักษณะการกักเก็บผิวหนังระหว่างสูตร ME ที่ปรับให้เหมาะสม (เนื้อหา PG 2 เปอร์เซ็นต์ น้ำหนัก/น้ำหนัก) และสารละลายที่เป็นน้ำ เมื่อสิ้นสุดการทดลองการซึมผ่าน ระดับยาที่ตกค้างในผิวหนังถูกกำหนดโดยใช้วิธีการทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน หลังจากล้างด้วยน้ำเกลือปกติ ผิวหนังถูกตัดเป็นชิ้นเล็กๆ และใส่ในหลอดแก้วที่มีเมทานอล 3 มล. ในอ่างน้ำแข็ง ตัวอย่างถูกทำให้เป็นเนื้อเดียวกันด้วยความเร็ว 12000 รอบ/นาที รอบต่อนาที เป็นเวลา 2 นาที แล้วหมุนเหวี่ยงที่ 12,830 xg ในแนวนอนเป็นเวลา 30 นาที ที่ 25˚C ส่วนลอยเหนือตะกอนถูกส่งผ่านตัวกรองพรุนขนาดเล็ก (0.45 µm) และ PG(phenylethanoid glycoside จาก cistanche)ระดับใน supernatant ถูกกำหนดโดย UV spectroscopy ที่ความยาวคลื่น 333 นาโนเมตร การศึกษาเสถียรภาพ ความเสถียรทางกายภาพของ ME ที่โหลดด้วย PG ได้รับการตรวจสอบผ่านความชัดเจน การวิเคราะห์ขนาดอนุภาค และการแยกเฟส ซึ่งสังเกตได้ที่ 2‑8˚C และที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 3 เดือน การหมุนเหวี่ยงถูกดำเนินการที่ 12,830 xg เป็นเวลา 30 นาทีที่ 25˚C เพื่อประเมินความเสถียรทางกายภาพของ ME การแยกเฟสและความเข้มข้นของ PG ถูกตรวจสอบทุกเดือนเพื่อประเมินอุณหภูมิการจัดเก็บที่เหมาะสม ความคงตัวทางเคมีถูกประเมินบนสูตรผสมที่บรรจุยา เก็บไว้ที่ 2‑8˚C และที่อุณหภูมิห้อง โดยมีปริมาณ PG ที่กำหนดโดย UV spectrophotometry ที่ 333 นาโนเมตร การทดสอบความไวของผิวหนัง ทำการทดสอบความไวต่อผิวหนังกับกระต่าย (น้ำหนัก 2.02.5 กก.) เพื่อประเมินศักยภาพการระคายเคืองของการใช้เฉพาะที่ของสูตรที่พัฒนาแล้วตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (13) กระต่ายฮอลแลนด์เก้าตัว (อายุ 16 สัปดาห์; น้ำหนัก 2.0-2.5 กก. เพศผู้ 5 ตัวและตัวเมีย 4 ตัว) ได้มาจากศูนย์สัตว์ทดลองของมหาวิทยาลัยการแพทย์ซินเจียง สัตว์ถูกให้อาหารแบบปรับได้เป็นเวลา 1 สัปดาห์ในรอบมืด 12 ชั่วโมง/12 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิห้อง (24±2˚C) ที่มีความชื้น 50±15 เปอร์เซ็นต์ สัตว์ทุกตัวสามารถเข้าถึงอาหารและน้ำมาตรฐานได้ เส้นเลือดอุดตันอากาศถูกนำมาใช้สำหรับการเสียสละ โปรโตคอลที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการจริยธรรมของมหาวิทยาลัยการแพทย์ซินเจียง (ซินเจียงประเทศจีน) ขนที่ด้านหลังถูกกำจัดออก ~24 ชั่วโมงก่อนการบริหารให้สูตร ME สัตว์ถูกแบ่งออกเป็นกลุ่มต่อไปนี้: กลุ่ม ME ที่ปรับให้เหมาะสม (n=3) ที่มีการบริหารให้เฉพาะที่ของ ME ที่ปรับให้เหมาะสมซึ่งมี PG 2 เปอร์เซ็นต์ (น้ำหนัก/น้ำหนัก); หมู่น้ำเกลือ PG (n=3) กับการบริหารเฉพาะของสารละลายน้ำเกลือที่มี PG 2 เปอร์เซ็นต์ (w/w); และกลุ่มควบคุมน้ำเกลือ (n=3) ภายใต้การบริหารเฉพาะที่ของน้ำเกลือปกติ การบริหารถูกดำเนินการวันละสองครั้งเป็นเวลา 5 วัน สัตว์ถูกสังเกตอาการใดๆ ของอาการคันหรือการเปลี่ยนแปลงของผิวหนัง ซึ่งรวมถึงอาการผื่นแดง มีเลือดคั่ง ผื่นขึ้น และความแห้งกร้าน (14) หลังจากการถอนยา การสังเกตสำหรับการบริหารให้ครั้งเดียวหรือหลายครั้งดำเนินต่อไปเป็นเวลา 3 วัน คะแนนการระคายเคืองของพื้นที่ทดสอบประเมินโดยการตัดสินขอบเขตของผื่นแดงและอาการบวมน้ำตามเกณฑ์ต่อไปนี้: 1 ไม่มีปฏิกิริยาที่มองเห็นได้; 2 ปฏิกิริยาเล็กน้อย; 3 ปฏิกิริยาปานกลางและ 4 ปฏิกิริยารุนแรง (15,16) สุดท้าย คะแนนการระคายเคืองทั้งหมดสำหรับแต่ละสภาวะคำนวณโดยใช้สมการต่อไปนี้

การวิเคราะห์ทางสถิติ. ข้อมูลแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน การวิเคราะห์ข้อมูลดำเนินการโดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียวตามด้วยการทดสอบความแตกต่างที่มีนัยสำคัญน้อยที่สุด วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ซอฟต์แวร์ SPSS เวอร์ชัน 190 (IBM SPSS, Armonk, NY, USA) พี<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

ผลลัพธ์และการอภิปราย

การคัดกรองน้ำมัน สารลดแรงตึงผิว และสารลดแรงตึงผิวร่วมสำหรับ ME PG(phenylethanoid glycoside จาก cistanche)เกือบจะไม่ละลายในพาราฟินเหลวและกรดโอเลอิก แต่สามารถสังเกตการละลายในระดับปานกลางใน IPM (ตารางที่ 2) IPM เพิ่มค่าสัมประสิทธิ์การแพร่กระจายในผิวหนังและส่งผลให้ค่าสัมประสิทธิ์การซึมผ่านเพิ่มขึ้น (17,18) นอกจากนี้ โดยทั่วไปแล้ว IPM จะถูกเลือกสำหรับการเตรียม MEs เนื่องจากคุณสมบัติเพิ่มการซึมผ่านที่เป็นที่รู้จักและความเข้ากันได้ทางชีวภาพ การเลือกสารลดแรงตึงผิวเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการกำหนดสูตร ME ที่ประสบความสำเร็จ เนื่องจากช่วยลดแรงตึงผิวโดยการสร้างฟิล์มที่ส่วนต่อประสานระหว่างน้ำกับน้ำมัน (19) ในการศึกษานี้ PG แสดงความสามารถในการละลายที่สูงขึ้นใน Cremophor-EL (40.193 มก./มล.; ตารางที่ II) เมื่อเทียบกับ Tween-80 (28.051 มก./มล.; ตารางที่ II) ดังนั้น CremophorEL จึงถูกเลือกใช้ในการศึกษาต่อเนื่องจากคุณสมบัติการละลายและระดับความเป็นพิษต่ำในฐานะสารลดแรงตึงผิวชนิดไม่มีอิออน นอกจากนี้ สารละลายในน้ำยังแสดงให้เห็นความสามารถในการละลายที่ดีของ PG ความสามารถในการละลายสูงสุดของ PG ในหมู่ cosurfactants ถูกสังเกตพบในโพรพิลีนไกลคอล (48.714 มก./มล.; ตารางที่ II) นอกจากนี้ โพรพิลีนไกลคอลยังมีความสามารถในการสร้าง ME ด้วย IPM และ CremophorEL เมื่อนำมารวมกัน IPM, CremophorEL และโพรพิลีนไกลคอลถูกใช้เป็นเฟสน้ำมัน, สารลดแรงตึงผิว และสารลดแรงตึงผิว ตามลำดับ สำหรับสูตรของ ME ที่บรรจุ PG การสร้างไดอะแกรมเฟสแบบไตรภาคเทียม ในการศึกษานี้ ไดอะแกรมเฟสถูกสร้างขึ้นเพื่อเลือกช่วงความเข้มข้นของส่วนประกอบสำหรับไมโครอิมัลชัน และพื้นที่ที่ทำเครื่องหมายระบุ O/WMEregion ที่ชัดเจน (รูปที่ 1) มีรายงานความสัมพันธ์ที่ใกล้ชิดระหว่างผลการชุ่มชื้นของชั้น corneum และการซึมผ่านผิวหนัง (20) ก่อนหน้านี้และกิจกรรมทางอุณหพลศาสตร์ของยาใน MEs เป็นแรงผลักดันสำคัญที่อยู่เบื้องหลังการปลดปล่อยและการแทรกซึมของยาเข้าสู่ผิวหนัง (20,21 ). กิจกรรมทางอุณหพลศาสตร์ของยาใน ME ที่มีปริมาณสารลดแรงตึงผิวที่ต่ำกว่านั้นแสดงให้เห็นว่าเป็นแรงผลักดันที่สำคัญสำหรับการปล่อยและการแทรกซึมของยาเข้าสู่ผิวหนัง (22,23)

The decreased concentration of surfactant in dispersed systems may also increase the rate of drug release and its permeation in the skin (24,25). Thus, the water content ranged between 50 and 70%, while that of the surfactant and cosurfactant ranged between 20 and 45%. The microemulsion domain was determined by visual inspection for clarity and fluidity. The rest of the region in the phase diagrams represents turbid and conventional emulsions based on visual observation (Fig. 1). No liquid crystalline structure was observed using the cross polarizer. The area of the O/W ME region was expanded following the increase of the Km value (Fig. 1). These findings were consistent with previous studies, which demonstrated that a higher level of surfactant reduces interfacial tension of the colloidal solution more effectively, thereby improving the fluidity of the interface and increasing the entropy of the system (21,24). Thus, it is reasonable to speculate that the effect of CremophorEL on ME regions depends on the other ME components, especially the cosurfactant. The combination of short to medium carbon chain length alcohols, including propylene glycol, with single-chain surfactants, may lower interfacial tension due to increased fluidity at the interface. Additionally, medium carbon chain length alcohols may induce elevation of miscibility of the aqueous and oily phases due to the partitioning behavior between the two phases. Finally, in the presence of a Km ratio of 3:1, the ratio of the surfactant mixture to oil was 1:9 or 2:8. MEs prepared with a ratio of surfactant mixture to oil >2:8 มีความขุ่นและไม่เสถียร (รูปที่ 2)

องค์ประกอบสุดท้ายของ ME1-5 แสดงไว้ในตารางที่ 1 การเตรียมและลักษณะเฉพาะของ ME คุณสมบัติทางกายภาพของ ME1-5 แสดงอยู่ในตารางที่ III ระบบการกระจัดกระจายมีลักษณะเหมือนกันในระดับมหภาค เป็นเนื้อเดียวกัน และโปร่งใส โดยไม่มีตะกอนใดๆ ขนาดหยดเฉลี่ยของ ME เหล่านี้อยู่ในช่วงระหว่าง 30.56 ถึง 79.21 นาโนเมตร (รูปที่ 3; ตารางที่ III) โดยมีค่าดัชนีการกระจายตัวระหว่าง 0.187 และ 0.321 (ตาราง III). สิ่งนี้บ่งชี้ ME ที่สม่ำเสมอพร้อมการกระจายขนาดที่แคบ นอกจากนี้ ขนาดหยดยังเพิ่มขึ้นตามสัดส่วนของปริมาณน้ำมัน แต่ลดลงด้วยส่วนผสมของสารลดแรงตึงผิว ปรากฏการณ์นี้อาจเกิดจากการขยายตัวของแกนน้ำมัน ME และความเข้มข้นของสารลดแรงตึงผิวสูงช่วยลดแรงตึงผิวระหว่างน้ำมันและน้ำเพื่อลดขนาดหยด นอกจากนี้ ค่าความหนืด ME เพิ่มขึ้นเนื่องจากระดับสารลดแรงตึงผิวที่เพิ่มขึ้นและน้ำลดลง ค่า pH ของ MEs ทั้งหมดอยู่ในช่วงที่เหมาะสม 5.0-7.5 (ตารางที่ III) และสอดคล้องกับค่าของเนื้อเยื่อผิวหนัง เกี่ยวกับความเสถียรทางกายภาพ ไม่มีการสังเกตการแยกเฟส การแตกหรือการตกตะกอนของยาใน ME ที่ทดสอบใดๆ ซึ่งบ่งชี้ว่า ME มีความคงตัวทางอุณหพลศาสตร์ที่น่าพอใจต่อการปั่นเหวี่ยง การทดสอบความสามารถในการละลายของสีย้อมเปิดเผยว่าสีย้อมที่ละลายน้ำได้ (เมทิลออเรนจ์) กระจายอย่างสม่ำเสมอทั่วทั้งระบบ ME ซึ่งหมายความว่า ME ที่เกิดขึ้นนั้นเป็นประเภท O/W (ไม่แสดงข้อมูล) ไมโครกราฟเผยให้เห็นหยดน้ำ ME5 เดี่ยวที่มีโครงร่างทรงกลม (รูปที่ 4) การศึกษาการซึมผ่านของผิวหนัง Exvivo โปรไฟล์การซึมผ่านของยานพาหนะที่ทดสอบทั้งหมดเป็นไปตามจลนพลศาสตร์การปลดปล่อยเป็นศูนย์ (26,27) และ ME5 ให้ฟลักซ์ผ่านผิวหนังสูงสุดของ PG (86.795±0.23 ไมโครกรัม/ซม.{{28 }} /h-1; รูปที่ 5; ตาราง III) ในการศึกษานี้ กำหนดผลของปริมาณน้ำมันและสารลดแรงตึงผิวต่อการซึมผ่านผิวหนังของ PG ผลการวิจัยพบว่าสารลดแรงตึงผิวช่วยเพิ่มการซึมผ่านของผิวหนังโดยการเพิ่มการไหลของเมมเบรน การละลายของยา และการสกัดไขมันจากสตราตัมคอร์เนียม อัตราการซึมผ่านของ ME5 (86.795±0.23µg/cm-2 /h-1 ) เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับอัตราการซึมผ่านของ ME1 (69.57±{ {48}}.78, P=0.0094), ME2 (44.326±0.84, P{{50}} .0052), ME3 (79.859±0.12, P=0.039) และ ME4 (58.332±0.39 µg/cm-2 /h-1 , P=0.0063, รูปที่ 5; ตารางที่ III) สิ่งนี้สอดคล้องกับผลการศึกษาก่อนหน้านี้ ซึ่งกิจกรรมทางอุณหพลศาสตร์ของการขนส่งยา ME อาจลดลงเมื่อระดับสารลดแรงตึงผิวเพิ่มขึ้น (12,28 ). ความหนืดของ ME5 (30.43±0.12 mPa.s) ต่ำกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับ ME1 อื่นๆ (80.51±0.87 mPa.s, P=0.0076), ME2 (47.52±0.54 mPa.s, P{{88) }}.0089), ME3 (60.49±1.34 mPa.s, P=0.0094) และ ME4 (43.27±0.21 mPa.s, P=0.0059)