วิธีการระบุสารออกฤทธิ์ทางเคมีของ Cistanche

ติดต่อ:joanna.jia@wecistanche.com

การระบุส่วนประกอบทางเคมีของ Cistanche Deserticola โดยใช้ระบบ QTOF X500R

หลี่เยว่เจี๋ย, เฉิงไห่เยี่ยน, หลิวติง, หลี่ลี่จุน, จินเหวินไห่ SCIEX, ศูนย์สนับสนุนการสมัครเอเชียแปซิฟิก (เซี่ยงไฮ้), จีน

แนะ นำ

Cistanche deserticolaถูกบันทึกครั้งแรกใน "Shen Nong Materia Medica"; มันยังเป็นที่รู้จักกันในนาม "ต้าหยุน" "รูซองรง" และ "จงหรง" ในฐานะที่เป็นยาสมุนไพรแบบดั้งเดิม, มันมีคุณสมบัติของการบํารุงหยางไต, ปรับปรุงการไหลเวียนของเลือด, ทําหน้าที่เป็นยาระบาย, กระตุ้นภูมิคุ้มกัน, และผลกระทบอื่น ๆ[1]. ในปี 1983 นักวิชาการชาวญี่ปุ่น H. Kobayashi และคนอื่น ๆ เริ่มศึกษาองค์ประกอบทางเคมีของซิตสแตนเชเดสเซิร์ตซิโซลา[2], และตั้งแต่นั้นมาก็ได้กลายเป็นหัวข้อยอดนิยมในการวิจัยการแพทย์แผนจีนที่สร้างความสนใจอย่างมากทั้งในประเทศและต่างประเทศในช่วง 30 ปีที่ผ่านมา.ซิตสแตนเชเดสเซิร์ตซิโซลาเป็นของชั้นของพืชที่มีฟีนอลิกไกลโคไซด์, อิริดอยด์และของพวกเขาไกลโคไซด์และลิกแนนและของพวกเขาไกลโคไซด์.

การวัดมวลสเปกโตรเมตรีเวลาบินของ Quadrupole (QTOF) เป็นเครื่องมือที่ละเอียดอ่อนและเฉพาะเจาะจงสําหรับการระบุส่วนประกอบการแพทย์แผนจีนที่ค่อยๆ กลายเป็นสิ่งที่ขาดไม่ได้ในการวิจัย เทคโนโลยีนี้ได้เอาชนะความท้าทายทางเทคนิคแบบดั้งเดิมด้วยการวิเคราะห์ย้อนหลังของการฉีดครั้งเดียวที่อนุญาตให้ดึงข้อมูลสําคัญและการได้มาซึ่งข้อมูลตัวอย่างที่ครอบคลุมที่สุด การใช้ข้อมูล TOF-MS และ TOF-MS/MS ที่มีมวลที่แน่นอนและความละเอียดสูงช่วยให้สามารถวิเคราะห์เชิงคุณภาพแบบกําหนดเป้าหมายและแบบไม่ตรงเป้าหมายได้พร้อมกัน อย่างไรก็ตามความซับซ้อนของการทํางานของเครื่องมือและการใช้เทคโนโลยีได้ จํากัด การแพร่กระจายและการพัฒนาเทคโนโลยีนี้อย่างมาก ที่นี่เราแนะนําระบบ QTOF ใหม่ที่ใช้เส้นทาง TOF ที่ใช้รูปทรงเรขาคณิต N-type ซอฟต์แวร์ที่ใช้งานง่ายและเทคนิคน้ําหนักโมเลกุลที่แม่นยําซึ่งง่ายต่อการใช้ในการระบุส่วนประกอบการแพทย์แผนจีน

ประโยชน์ของวิธีนี้มีดังนี้:

1. X500R ใช้แหล่งไอออน Turbo VTM ที่ทนทานและได้รับการรับรองในอุตสาหกรรมและการออกแบบส่วนต่อประสานก๊าซม่านอากาศซึ่งมีคุณสมบัติป้องกันการปนเปื้อนที่แข็งแกร่ง

2. ซอฟต์แวร์ SCIEX OS ได้รวมฟังก์ชันการเข้าซื้อการประมวลผลและการรายงานไว้ในแพลตฟอร์มเดียว อินเทอร์เฟซใช้งานง่ายง่ายต่อการเชี่ยวชาญและมีการแก้ไขอัตโนมัติแบบสัมผัสเดียวเพื่อให้แน่ใจว่านักวิเคราะห์ที่มีความเชี่ยวชาญทุกระดับสามารถรับข้อมูลที่มีคุณภาพสูงและเชื่อถือได้

3. การใช้ซอฟต์แวร์ SCIEX OS เพื่อประมวลผลข้อมูลเพื่อระบุส่วนประกอบการแพทย์แผนจีนนั้นง่ายและอนุญาตให้ดึงข้อมูลที่เป็นประโยชน์ได้อย่างรวดเร็ว

4. ได้ผลลัพธ์การระบุที่แม่นยําและเชื่อถือได้มากขึ้นจากห้องสมุดการแพทย์แผนจีนที่มี MS / MS spectra;

5. ฐานข้อมูล MS / MS การแพทย์แผนจีนความละเอียดสูงขึ้นอยู่กับ "เภสัชตํารับจีน" ส่วนที่ 1 ส่วนผสมที่ใช้งาน TCM; รวมถึงการอ้างอิงส่วนประกอบในเภสัชตํารับและสารออกฤทธิ์ในสมุนไพรมีสารประกอบเกือบ 900 ชนิด

cistanche deserticola ปรับปรุงประสิทธิภาพ

กระบวนการทดลอง

1. ใช้โหมด TOF-MS-IDA MS / MS ฉีดตัวอย่างและรับไอออนสารตั้งต้นหลักและสเปกตรัมทุติยภูมิที่สอดคล้องกันพร้อมกัน

2. การใช้การคัดกรองเป้าหมายของ SCIEX OS Software การยืนยันสารประกอบเป้าหมายและสเปกตรัมทุติยภูมิพร้อมกับการคัดกรองมาตรฐานการแพทย์แผนจีนและวิธีการจับคู่สามารถเพิ่มความแม่นยําและประสิทธิผลในการทํางานได้

3. เวิร์กโฟลว์การระบุที่ไม่ตรงเป้าหมายของ SCIEX OS Software ใช้การค้นหาไลบรารีและการค้นหาที่ไม่รู้จักให้เสร็จสมบูรณ์ใน ChemSpider เพื่อตรวจสอบผลลัพธ์เพื่อให้แน่ใจว่ามีการระบุส่วนประกอบเพิ่มเติมด้วยเวิร์กโฟลว์ที่ง่ายขึ้น

ตัวอย่างและวิธีการประมวลผลล่วงหน้า

แหล่งตัวอย่าง:

ซื้อจากร้านขายยาเซี่ยงไฮ้ในรูปแบบหั่นบาง ๆ

วิธีการประมวลผลล่วงหน้า:

1. ชิ้นถูกบดให้เป็นผง

2. 0.9 มก. ถูกชั่งน้ําหนักและแช่ในเมทานอล 3 มล. เป็นเวลา 40 นาที

3. ตัวอย่างจากขั้นตอนที่ 2) ถูก ultrasonicated 1 ชั่วโมง;

4. การหมุนเหวี่ยงและการกําจัดสิ่งเหนือธรรมชาติเพื่อใช้เป็นตัวอย่างได้ดําเนินการ

สภาวะโครมาโตกราฟีเหลว (LC)

คอลัมน์โครมาโตกราฟี: Xเลือก HSS T3, 2.1 * 150 มม., 3.5μm;

ระยะเคลื่อนที่: ใช้การไล่ระดับสี

เฟสมือถือ: A คือ 0.1% น้ํากรดฟอร์มิก - 2mM NH4FA

B คือ 95% acetonitrile -5% น้ํา - 2mM NH4FA

อัตราการไหล: 0.5mL / นาที

อุณหภูมิคอลัมน์: 40ºC

ปริมาณที่ใส่: 5μL

วิธีการแมสสเปกโตรเมตรี:

วิธีการสแกน: การคัดกรองเชิงคุณภาพ TOF MS-IDA-15 MS/MS

พารามิเตอร์แหล่งกําเนิดไอออน ESI:

ม่านอากาศก๊าซ CUR: 35psi; แรงดันไฟฟ้า IS: 5500V / -4500V

อุณหภูมิแหล่งที่มา: 600ºC

ก๊าซที่ทําให้เป็นละออง GAS1: 55psi; ก๊าซเสริม GAS2: 60psi

การค้นหาโหมดเครื่องมือวัด:

แตะครั้งเดียว (เลือก MS Check ที่ด้านล่างขวา) โหมดการแก้ไข TOF-MS และ TOF-MS/MS/MS อัตโนมัติเต็มรูปแบบช่วยให้มั่นใจได้ว่านักวิเคราะห์ทุกระดับความเชี่ยวชาญจะได้รับข้อมูลที่ถูกต้องเชื่อถือได้และทําซ้ําได้

BPC โหมดไอออนบวกและลบ:

ขั้นตอนการระบุสารประกอบ

1. เวิร์กโฟลว์การระบุส่วนประกอบเป้าหมาย

1.1: การค้นหาสูตรโมเลกุล

ต้องใช้ชื่อสารประกอบทางเคมีและสูตรโมเลกุลเท่านั้น สิ่งเหล่านี้สามารถป้อนเข้าโดยตรงหรือนําเข้าโดยใช้ฟังก์ชันคัดลอกและวางของ Excel เพื่อสร้างวิธีการประมวลผล

เมื่อสร้างตารางผลลัพธ์แล้วผลลัพธ์เชิงปริมาณและเชิงคุณภาพสามารถดูได้ในหน้าต่างเดียวกัน ระบบตัวบ่งชี้สีแดง / เขียวใช้เพื่อระบุความแม่นยําของมวลเวลาการเก็บรักษาประเภทไอโซโทปและความมั่นใจในการระบุโดยการจับคู่ฐานข้อมูล

ซอฟต์แวร์ SCIEX OS ช่วยให้ผู้ใช้กรองผลลัพธ์และแสดงเฉพาะสารประกอบที่ตรงตามเกณฑ์การยอมรับและอยู่ในช่วงความเชื่อมั่นที่กําหนดโดยผู้ใช้ สามารถค้นหาผลลัพธ์ที่ตรงเป้าหมายในฐานข้อมูลขนาดใหญ่ได้อย่างรวดเร็ว

ฐานข้อมูล TCM ของสเปกตรัม MS / MS ช่วยให้สามารถจับคู่รองและให้ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้มากขึ้น (สีเทาในฐานข้อมูลระบุข้อมูล MS / MS)

วรรณกรรมประกอบด้วยชื่อและสูตรโมเลกุลของฟีนอลิกไกลโคไซด์ส่วนผสมที่ใช้งาน การใช้กระบวนการข้างต้นเพื่อระบุส่วนประกอบเป้าหมายพบว่าตัวอย่างมีฟีนอลิกไกลโคไซด์ 39 ชนิด:

นอกจากฟีนอลิกแล้วไกลโคไซด์ส่วนประกอบที่ใช้งาน Cistanche ยังมีสารประกอบจํานวนมากเช่นอิริดอยด์ไกลโคไซด์และลิกแนน ผลการระบุมีดังนี้:

รายการระบุอิริดอยด์ ไกลโคไซด์ และลิกแนน:

1.2: ค้นหาฐานข้อมูล:

สารประกอบ 53 ชนิดได้มาจากการระบุที่ตรงกันในฐานข้อมูล TCM: ไอออนบวก 43 ไอออนไอออนลบ 22 ไอออนและการทําซ้ํา 12 ครั้งตามรายการด้านล่าง นอกจากฟีนอลิกที่ใช้งานไกลโคไซด์, อิริดอยด์, ไกลโคไซด์, และลิกแนน, Cistanche ยังมี

2. การวิเคราะห์องค์ประกอบที่ไม่ตรงเป้าหมาย

การระบุส่วนประกอบที่ไม่ใช่เป้าหมายสามารถทําได้ด้วยฟังก์ชันการค้นหา ChemSpider ในตัวเพื่อกําหนดการจําแนกประเภทและประเภทของสิ่งที่ไม่รู้จัก สําหรับการระบุส่วนประกอบที่ไม่ได้กําหนดเป้าหมายเพียงเลือกโหมด "ไม่กําหนดเป้าหมาย" และการค้นหาสูตรโมเลกุลจะพัฒนาวิธีการประมวลผล เวิร์กโฟลว์มีดังนี้:

ผลการค้นหาสูตรโมเลกุลจะแสดงในหน้าต่างเบราว์เซอร์สูงสุดในส่วนล่างของสเปกตรัมมวล TOFMS ด้วยการค้นหาฐานข้อมูล ChemSpider ผลลัพธ์จะแสดงตามลําดับความสําคัญและข้อมูลโครงสร้างที่ได้รับใน ChemSpider จะถูกเปรียบเทียบกับสเปกตรัม MS / MS ที่ได้รับโดยอัตโนมัติให้ข้อเสนอแนะรองสําหรับการระบุอย่างรวดเร็ว

สรุป

1. การเก็บข้อมูลความละเอียดสูงอย่างรวดเร็ว การฉีดเพียงครั้งเดียวให้ข้อมูล TOF MS และ MS/MS ที่มีความละเอียดสูง โดยมีส่วนประกอบที่ใช้งานฟีนอลิกไกลโคไซด์ที่ระบุได้ 39 ชิ้น และอิริดอยด์ ลิกแนน และไกลโคไซด์ 16 ชิ้น

2. ฐานข้อมูล TCM ของสเปกตรัมทุติยภูมิให้ข้อมูลการจับคู่เพิ่มเติมและซอฟต์แวร์จะให้คะแนนการจับคู่ฐานข้อมูลโดยอัตโนมัติ การใช้คะแนนสามารถระบุส่วนประกอบของยาจีนได้อย่างง่ายดายรวดเร็วและแม่นยํา

3. อุปกรณ์นี้เรียบง่ายและมีการแก้ไขอัตโนมัติแบบสัมผัสเดียวเพื่อให้แน่ใจว่านักวิเคราะห์ที่มีความเชี่ยวชาญทุกระดับสามารถรับข้อมูลที่มีคุณภาพสูงและเชื่อถือได้

4. ซอฟต์แวร์ SCIEX OS เวอร์ชันใหม่รวมการเก็บข้อมูลการประมวลผล (เชิงปริมาณและเชิงคุณภาพ) การแสดงผลการรายงานและการจัดการฐานข้อมูล มันแก้ปัญหาที่ผู้ใช้หลายคนต้องเผชิญด้วยอินเทอร์เฟซที่ใช้งานง่ายและใช้งานง่าย

5. ทั้งเวิร์กโฟลว์การคัดกรองแบบกําหนดเป้าหมายและไม่ตรงเป้าหมายนั้นง่ายและคู่มือวิธีการในตัวช่วยให้ผู้ใช้สร้างวิธีการได้อย่างถูกต้องและรวดเร็ว

อ้าง อิง

1. ISBN 978-7-5067-7337-9 เภสัชตํารับสาธารณรัฐประชาชนจีน [S] ปักกิ่ง: คณะกรรมการเภสัชตํารับแห่งชาติ, 2015

2. เล่ย, ซงจื่อหง, ตูเป็งเฟย; ความก้าวหน้าในการวิจัยในองค์ประกอบทางเคมีของพืชในสกุล Cistanche, "ยาสมุนไพรจีน," เล่มที่ 34, ฉบับที่ 5, พฤษภาคม 2003,473-476.