Phenylethanoid Glycosides ซึ่งเป็นส่วนประกอบสำคัญของ Cistanche มีบทบาทในการป้องกันระบบประสาทอย่างไร?

Xue Gong†a , Yan Xu†b , Kai Renc , Xiaorong Baid , Chunhong Zhanga

บทคัดย่อในการศึกษานี้ เราแยกแปดphenylethanoidไกลโคไซด์จาก Paraboea martini เป็นครั้งแรกและประเมินกลไกที่อยู่ภายใต้สารป้องกันประสาทเอฟเฟกต์ต่อการบาดเจ็บที่เกิดจาก H2O2- ในเซลล์ PC12 ใช้วิธี MTS เพื่อคัดกรองphenylethanoidไกลโคไซด์เพื่อความสามารถในการป้องกัน ถัดไป การวิเคราะห์ qRT-PCR และ Western blotting ถูกใช้เพื่อตรวจหาระดับการถอดรหัสของ HO-1 และ GCLC ซึ่งควบคุมโดย Nrf2 สารยับยั้ง ZnPP ถูกใช้เพื่อวิเคราะห์การมีส่วนร่วมของ Nrf2 ในการแสดงออกของ HO-1 การวิเคราะห์แสดงให้เห็นว่าคาลีโอลาริโอไซด์ B, พาราโบไซด์ B และพาราโบไซด์ II ยังเพิ่มการควบคุมการแสดงออกของ H2O-1 แต่ไม่แสดงผลที่ชัดเจนต่อ GCLC การปรับสภาพด้วย ZnPP ช่วยลดสารป้องกันประสาทเอฟเฟกต์. ดังนั้น ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ที่แยกได้จาก P. martini ปกป้องเซลล์ PC12 จากความเสียหายที่เกิดจาก H2O2-โดยการเพิ่มการควบคุม H2O-1 ผลลัพธ์ที่ได้ให้หลักฐานว่า P. martini อาจเป็นตัวยาที่มีศักยภาพในการรักษาความเสื่อมของระบบประสาทโรค.

ประวัติบทความได้รับเมื่อ 8 เมษายน 2019 ยอมรับ 30 กรกฎาคม 2019

คีย์เวิร์ดParaboea มาร์ตินี่;ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์; ผลต่อระบบประสาท สังกะสีโปรโตพอร์ไฟริน; โฮ-1

ติดต่อ:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

กลไกของผลการป้องกันระบบประสาทของ Cistanche deserticola คลิกที่นี่เพื่อเรียนรู้เพิ่มเติม

ความเครียดออกซิเดชันเป็นที่รู้จักกันว่ามีบทบาทสำคัญในการก่อโรคของโรคต่างๆ มันเชื่อมโยงกับสาเหตุของโรคอัลไซเมอร์(AD), โรคพาร์กินสัน (PD), โรคลมบ้าหมู และโรคอื่นๆ [1–3] ปัจจุบันมีความก้าวหน้าในการศึกษาโรค AD, PD และโรคอื่นๆ อย่างต่อเนื่อง อย่างไรก็ตาม เนื่องจากความรู้ที่จำกัดเกี่ยวกับกลไกระดับโมเลกุลที่เป็นสาเหตุของ AD, PD และโรคอื่นๆ กลยุทธ์ในการป้องกันหรือรักษาโรคเหล่านี้จึงไม่เกิดขึ้นจริง [4] H2O2 เป็นองค์ประกอบสำคัญของชนิดออกซิเจนที่เกิดปฏิกิริยา (ROS) ดังนั้น การบาดเจ็บของเซลล์ PC12 ที่เกิดจาก H2O2- จึงเป็นแบบจำลองความเครียดออกซิเดชันที่ใช้บ่อยที่สุด และมีการใช้กันอย่างแพร่หลายในการศึกษาทดลองเกี่ยวกับผลกระทบต่อระบบประสาท [5] Heme oxygenase 1 (H2O-1) และ glutamate-cysteine ​​ligase-catalytic subunit (GCLC) เป็นเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระระดับเซลล์ที่สำคัญ และยีนทั้งสองถูกควบคุมที่ปลายน้ำของปัจจัยนิวเคลียร์อีรีทรอยด์ 2 (Nrf2) ซึ่งเป็นวิธีการรักษาที่มีแนวโน้มดี เป้าหมายสำหรับการป้องกันระบบประสาท [6,7].ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ที่ได้มาจากหน่วย C-6-C-3 มีหมู่ฟีนอลิกไฮดรอกซิลจำนวนมากและมีกิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระและการต่อต้านริ้วรอยที่สำคัญ ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา จากการศึกษาพบว่าพืชสมุนไพรหลายชนิดมีฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ที่แสดงฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระอย่างมีนัยสำคัญ ตัวอย่างเช่น phenylethanoid glycosides ที่ได้มาจาก Herba cistanche เป็นที่ทราบกันดีว่ามีผลในการป้องกันการขาดดุลทางปัญญาใน AD การศึกษาดังกล่าวได้ตรวจสอบกลไกการป้องกันที่เกี่ยวข้องโดยใช้แบบจำลองเมาส์ 8 (SAMP8) ที่ชะลอการชราภาพ AD ผลการศึกษาพบว่าความสามารถของฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ในการแก้ไขความบกพร่องทางสติปัญญาในหนู SAMP8 อาจเกี่ยวข้องกับการส่งเสริมความเป็นพลาสติก synaptic ที่เกี่ยวข้องกับกระบวนการต้านอนุมูลอิสระ [8] ในการศึกษานี้ แยกสารฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ 2 ชนิดออกจากปมไม้สัก Tectona grandis; สารประกอบเหล่านี้แสดงผลการต้านอนุมูลอิสระที่โดดเด่นซึ่งถูกกำหนดโดยใช้วิธีแอมเพอโรเมตริก [9] นอกจากนี้ สารประกอบ caffeoyl phenylethanoid glycoside จาก Lindernia ruellioides จะออกแรงสารต้านอนุมูลอิสระที่ขึ้นกับขนาดยาและผลการขับอนุมูลอิสระที่ปราศจากประจุลบซูเปอร์ออกไซด์ในหลอดทดลอง [10] กลไกการออกฤทธิ์ของ phenylethanoid glycosides เกี่ยวข้องกับการควบคุมเส้นทางการส่งสัญญาณ Nrf2/ARE ซึ่งส่งผลต่อการสังเคราะห์ SOD, CAT, GSH-PX และเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระอื่นๆ [11] วงศ์ Gesneriaceae ซึ่งมี 150 สกุลและประมาณ 3700 สปีชีส์ กระจายอยู่ทั่วไปในเขตร้อนและเขตอบอุ่นของเอเชียตะวันออกและใต้ โอเชียเนีย อเมริกาใต้ แอฟริกา ยุโรปใต้ และเม็กซิโก [12] มี 54 สกุลและประมาณ 463 สายพันธุ์ที่เป็นของ Gesneriaceae ในประเทศจีน มีรายงานว่าประมาณ 100 สายพันธุ์มีประสิทธิภาพทางการแพทย์ และส่วนใหญ่กระจายอยู่ในมณฑลกวางสีและกุ้ยโจว [13] ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา การวิจัยเกี่ยวกับพืช Gesneriaceae ค่อยๆ เพิ่มขึ้นในพื้นที่ต่างๆ ของโลก และพบองค์ประกอบใหม่บางส่วนที่มีกิจกรรมทางสรีรวิทยา [14] Paraboea martinii (Levl.) Burtt เป็นของ Parabola (Gesneriaceae) และเป็นไม้ล้มลุก ตาม "บันทึกทรัพยากรยาแผนจีน" มีการบันทึกว่าทั้งโรงงานใช้เป็นยา นอกจากนี้ยังสามารถดำเนินกิจกรรมทางเภสัชวิทยาได้หลายอย่างในสภาวะต่างๆ เช่น ภาวะโลหิตจาง อาการบวมน้ำ โรคบิด การบาดเจ็บที่บาดแผล และการแตกหัก [15] ไป๋พิสูจน์แล้วว่าphenylethanoidไกลโคไซด์เป็นหนึ่งในองค์ประกอบทางเคมีหลักของพืช Gesneriaceae [16] นักวิจัยบางคนยังพบว่าphenylethanoidไกลโคไซด์have significant antioxidant activities [17]. Li demonstrated that phenylethanoid glycosides of Cistanche deserticola have significant antioxidant activity [18]. In addition, Ju systematically studied the neuroprotective activities of phenylethanoid glycosides using PC12 cell models. The results indicated that phenylethanoid glycosides significantly attenuate the damage induced by Aβ1-42 [19]. In our studies, we isolated eight phenylpropanoid glycosides (paraboside A, paraboside B, paraboside I, paraboside II, paraboside III, nuomioside A, caleolarioside B, isonuomioside A) from P. martini [20]. All compounds were isolated from the genus Parabola for the first time, and the compounds paraboside A, paraboside B, p paraboside I, paraboside II, and paraboside III were new compounds [20]. In a continuing search for molecules with antioxidant properties, phenylpropanoid glycosides were examined. However, whether these phenylpropanoid glycosides from P. martini could protect against H2O2-induced PC12 cell injury was previously unclear. In this study, we examined the protective effects of phenylpropanoid glycosides on H2O2-induced damage to PC12 cells. We also examined the effects and preliminary mechanism underlying the activity of phenylpropanoid glycosides with respect to the activation of HO-1 and GCLC in vitro. Materials and methods Materials Paraboea martini (Level.) Burtt was collected from Daxin County, Guangxi Autonomous Region in August 2014 and verified by Dr. Minhui Li (Baotou Medical College). Voucher specimens were deposited at the Laboratory of Pharmacognosy and Phytochemistry. Eight phenylpropanoid glycosides (paraboside A, paraboside B, paraboside I, paraboside II, paraboside III, nuomioside A, caleolarioside B, isonuomioside A) were extracted and separated from P. martinii (Levl.) Burtt by prof. Xiaoqin Wang [20]. The purity (>98 เปอร์เซ็นต์ ) ของฟีนิลโพรพานอยด์ไกลโคไซด์แปดตัวถูกวัดโดยวิธีการทำให้เป็นมาตรฐานของพื้นที่พีคของ HPLC ตัวอย่างเช่น แผนภูมิโครมาโตกราฟีของพาราโบไซด์ B และพาราโบไซด์ II แสดงในรูปที่ 1 และพบว่าเนื้อหาสัมพัทธ์คือ 98.23 เปอร์เซ็นต์ และ 99.20 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ สายเซลล์ pheochromocytoma ต่อมหมวกไตของหนูที่มีความแตกต่างไม่ดี (PC12) ถูกซื้อจาก Cell Bank ที่ China Academy of Science (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) สื่อกลางของ Eagle (DMEM) ดัดแปลงของ Dulbecco และเซรั่มม้าถูกซื้อจาก Gibco (Gaithersburg, MD, USA) ซื้อซีรั่มโคของทารกในครรภ์ (FBS) จาก Thermo Fisher Scientific (Hyclone, Waltham, MA, USA) H2O2 ได้รับจาก Tianjin Fu Yu Reagent Co., Ltd. (Tianjin, China) Trizol ซื้อมาจาก Invitrogen (Carlsbad, CA, USA) PrimeScriptTM RT reagent Kit (Perfect Real Time) ได้มาจาก TaKaRa Biotechnology Co. (ต้าเหลียน ประเทศจีน) ไพรเมอร์สำหรับ HO-1, GCLC และ GAPDH ถูกสังเคราะห์โดย Sangon Biotech (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) CellTiter 96® Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay kit (MTS) ได้รับจาก Promega Corp. (แมดิสัน สหรัฐอเมริกา) สารยับยั้งของ H2O-1 zinc protoporphyrin (ZnPP) ถูกซื้อจาก Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA) เครื่องบ่ม CO2 Thermo311 (Thermo, USA), StepOnePlusTM Real-Time PCR Instrument Thermal Cycling Block (Thermo), Thermo Scientific Multiskan FC (Thermo) และเครื่องวิเคราะห์ xCELLigence RTCA DPlus และ E-Plate 16 (ACEA Biosciences, USA) ก็ถูกนำมาใช้เช่นกัน .

การเพาะเลี้ยงเซลล์และการรักษา

เซลล์ PC12 ถูกปลูกใน DMEM ที่มี FBS 5 เปอร์เซ็นต์และซีรั่มม้า 5 เปอร์เซ็นต์ที่ 37 องศาในบรรยากาศ CO2 ที่มีความชื้น 5 เปอร์เซ็นต์ เซลล์ PC12 ถูกแบ่งออกเป็นสามกลุ่มดังนี้: กลุ่มควบคุม กลุ่มแบบจำลอง และกลุ่มบำบัด ฟีนิลโพรพานอยด์ไกลโคไซด์แปดตัวถูกละลายใน DMSO (< 0.01%)="" and="" then="" diluted="" with="" a="" complete="" culture="" medium.="" to="" study="" the="" effects="" of="" the="" eight="" phenylpropanoid="" glycosides="" on="" h2="" o2-induced="" cell="" injury,="" pc12="" cells="" were="" cultured="" with="" the="" eight="" compounds="" at="" concentrations="" of="" 3.125,="" 6.25,="" 12.5,="" 25,="" and="" 50="" μm="" for="" 12="">

ความมุ่งมั่นของ H2O2

แบบจำลอง เรากำหนดความเข้มข้นที่เหมาะสมของ H2 O2 โดยใช้การวิเคราะห์เซลล์แบบเรียลไทม์ (RTCA) เซลล์ PC12 ถูกเพาะในไมโครเพลท CIM-16 ที่ปริมาตร 100 ไมโครลิตร จากนั้นบ่มเป็นเวลา 12 ชั่วโมงที่ 37 องศาในบรรยากาศที่มีคาร์บอนไดออกไซด์ 5 เปอร์เซ็นต์ เซลล์ PC12 ถูกแบ่งออกเป็นกลุ่มควบคุมและกลุ่มแบบจำลอง ถัดไป 10 ไมโครลิตร H2O2 (50, 100, 200 และ 400 ไมโครโมลาร์) ถูกเพิ่มไปยังกลุ่มแบบจำลอง และกลุ่มควบคุมถูกบำบัดด้วย DMEM ที่สมบูรณ์ 10 ไมโครลิตร ตั้งค่าในสามหลุมที่ซับซ้อน E-Plate 16 ถูกวางใน xCELLigence RTCA ถูกเฝ้าติดตามทุก 15 นาที และผลลัพธ์ถูกบันทึกเป็นเวลา 32 ชั่วโมง วิเคราะห์ผลกระทบของ H2O2 ในเซลล์ PC12 โดยใช้ซอฟต์แวร์วิเคราะห์ข้อมูล xCELLigence RTCA ค่าดัชนีเซลล์ (CI) ถูกใช้เพื่อกำหนดความเข้มข้นของ H2O2 ที่เหมาะสมและระยะเวลาในการดำเนินการ

การสกัดและการแยกสารผสม

เศษส่วนถูกแยกตามขั้วโดยใช้วิธีการที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ผง P. martinii แบบแห้งด้วยอากาศ (4 กก.) ถูกสกัดอย่างต่อเนื่องสามครั้งด้วยสารละลายเอทานอลที่เป็นน้ำ 75 เปอร์เซ็นต์ [20] สารสกัดที่ได้รับจากนั้นถูกทำให้เข้มข้นโดยใช้เครื่องระเหยแบบหมุนเพื่อกำจัดเอธานอล และได้สารสกัดที่ยังไม่ผ่านกระบวนการใดๆ ตัวอย่างถูกละลายในน้ำปราศจากไอออนแล้วสกัดด้วยปิโตรเลียมอีเทอร์ เอทิลอะซิเตต เอ็น-บิวทานอล และน้ำตามลำดับ สารสกัดเอ็น-บิวทานอล (400 ก.) ถูกแยกส่วนโดยใช้คอลัมน์แมโครพอรัสเรซิน AB-8 และสารละลายเอทานอล-H2O2 (0, 1{{47} }, 30, 50, 70 และ 95 เปอร์เซ็นต์ ) หกเศษส่วน (เศษส่วน 1–6) ได้มาในที่สุด เศษส่วนที่ 3 และ 4 ถูกแยกออกโดยใช้คอลัมน์ MCI ที่มีการไล่ระดับสี MeOH-H2O2 (10–100 เปอร์เซ็นต์) ต่อไป ผลิตภัณฑ์ถูกแยกออกโดยใช้ Sephadex LH-20 โดยมี MeOH 50 เปอร์เซ็นต์เป็นสารชะ สารประกอบ 1 (41.0 มก.) และ 6 (15.6 มก.) ถูกแยกออกจากเศษส่วนที่ 3 ได้สารประกอบ 2 (62.0 มก.), 3 (34.7 มก.), 7 (11.0 มก.) และ 8 (26.0 มก.) จากเศษส่วนที่ 4 โดยใช้เซฟาเดกซ์ LH-20 โครมาโตกราฟีที่มี MeOH 50 เปอร์เซ็นต์เป็นตัวชะ การแยกสุดท้ายถูกดำเนินการโดย HPLC แบบกึ่งเตรียม, เฟสย้อนกลับ (Merck LiChrosorb, RP-18, RP-18, 250 × 10 มม.) ด้วยการตรวจจับ MeOH และ UV 50 เปอร์เซ็นต์ที่ 280 นาโนเมตรเพื่อให้ได้สารประกอบ 4 (39.0 มก.) และ 5 (9.0 มก.) [20]

การทดสอบความมีชีวิตของเซลล์

เซลล์ PC12 ถูกเพาะในเพลต 96-หลุมที่ความหนาแน่น 2 × 1{{10}}4 เซลล์/หลุมที่ปริมาตรสุดท้ายที่ 100 ไมโครลิตร . เซลล์ PC12 ถูกบ่มที่ 37 องศาโดยมีคาร์บอนไดออกไซด์ 5 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 12 ชั่วโมง ต่อมา เซลล์ถูกบำบัดด้วยสารสกัดที่ยังไม่ผ่านกระบวนการที่มีความเข้มข้นต่างๆ (0.025, 0.05, 0.1, 0.2 และ 0.4 มก./มล.) และสารประกอบ 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 และ 8 ที่ความเข้มข้นห้าระดับ (3.125, 6.25, 12.5, 25 และ 50 ไมโครโมลาร์) หลังจากการปรับสภาพเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ความอยู่รอดของเซลล์ถูกกำหนดหาโดยการสอบวิเคราะห์ MTS เซลล์ PC12 ถูกบ่มล่วงหน้าโดยมีหรือไม่มีตัวยับยั้ง HO-1 ที่ไม่มี ZnPP (15 ไมโครโมลาร์) เป็นเวลา 30 นาที จากนั้นจึงฟักไข่โดยมีหรือไม่มีคาเลโอลาริโอไซด์ B พาราโบไซด์ B และพาราโบไซด์ II (3.125 ไมโครโมลาร์) เป็นเวลา 12 ชั่วโมง และสุดท้ายถูกบ่ม ด้วย 400 μM H2O2 อีก 6 ชั่วโมง หลังการรักษา จำนวนเซลล์ที่รอดตายถูกกำหนดโดยการทดสอบ MTS [6]

ผลการป้องกันของสารสกัดหยาบและสารประกอบโมโนเมอร์ต่อ H2O2-เซลล์ PC12 ที่บำบัดด้วย H2O

เซลล์ถูกเพาะเลี้ยงในจานหลุม {{0}}หลุมที่ปริมาตรสุดท้ายที่ 100 ไมโครลิตร การเจือจางแบบอนุกรมของสารสกัดที่ยังไม่ผ่านกระบวนการใดๆ (0.025, 0.05, 0.1, 0.2 และ 0.4 มก./มล.) ถูกเติมไปยังกลุ่มที่ถูกบำบัด หลังจากปรับสภาพเป็นเวลา 12 ชั่วโมง 400 ไมโครโมลาร์ของสารละลาย H2O2 (ความเข้มข้นที่เหมาะสมที่สุด) ถูกเติมไปยังกลุ่มที่บำบัดแล้วและกลุ่ม H2O2 ของแต่ละหลุมเป็นเวลา 6 ชั่วโมง จากนั้นจึงเติมสารละลาย MTS ลงในแต่ละหลุม และเพลตถูกบ่มเป็นเวลา 3 ชั่วโมงที่ 37 องศาเซลเซียส เพลตถูกสั่นที่ความเร็วต่ำเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิห้องจนกว่าผลึกทั้งหมดจะละลายหมด การป้องกันเซลล์ถูกกำหนดตามผลการทดสอบ MTS ตาม 2204 X. GONG ET AL ของผู้ผลิต ดาวน์โหลดจาก https://academic.oup.com/bbb/article/83/12/2202/6044145 โดย guest on 27 สิงหาคม 2021instructions. ความหนาแน่นของแสงถูกกำหนดหาที่ความยาวคลื่นการดูดกลืนแสงที่ 490 นาโนเมตร เราติดตามกิจกรรมของสารประกอบ 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 และ 8 เพิ่มเติมที่แยกได้จากเศษส่วนที่ 3 และ 4 การเจือจางแบบอนุกรมของสารประกอบ 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 และ 8 (3.125, 6.25, 12.5, 25 และ 50 ไมโครโมลาร์) ถูกเติมไปยังกลุ่มที่บำบัดเพื่อกำหนดหาผลการป้องกันตามลำดับของพวกมันต่อเซลล์ PC12 ที่เหนี่ยวนำ H2O2-

PCR แบบเรียลไทม์เชิงปริมาณ (qRT-PCR)

เซลล์ PC12 ถูกเก็บเกี่ยวที่ 12 ชั่วโมงหลังการบำบัดด้วย 3.125 ไมโครโมลาร์ caleolarioside B, พาราโบไซด์ B และพาราโบไซด์ II RNA ทั้งหมดถูกสกัดโดยใช้ TRIzol-reagent และส่วนย่อยของ RNA ทั้งหมดถูกคัดลอกย้อนกลับโดยใช้ Primescript RT Master Kit ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ไพรเมอร์ต่อไปนี้ถูกใช้สำหรับการทดลองตามรายงานก่อนหน้า [21] HO-1: ไปข้างหน้า 5′ -GC CTGCTAGCCTTGTTCAAG-3′, ย้อนกลับ 5′ -AGC GGTGTCTGGGATGAACTA-3′; GCLC: ไปข้างหน้า 5′ - GTCCTCAGGTGACATTCCAAGC-3′, ย้อนกลับ 5′ -TG TTCTTCAGGGGCTCCAGTC-3′; GAPDH: ไปข้างหน้า 5′-AAGCTGGTCATCAACGGGAAAC-3′, ย้อนกลับ 5′- GAAGACGCCAGTAGACTCCACG-3′ อะลิควอตของ cDNA ที่ได้รับจากนั้นถูกขยายโดย PCR สภาวะของปฏิกิริยามีดังนี้: การเปลี่ยนสภาพเริ่มต้นที่ 95 องศา (30 วินาที) ตามด้วย 40 รอบที่ 95 องศา (5 วินาที) 60 องศา (34 วินาที) และ 72 องศา (35 วินาที) ไพรเมอร์ทั้งหมดได้รับการทดสอบและตรวจพบสัญญาณฟลูออเรสเซนต์ FL จากนั้นจึงคำนวณค่า △Ct และเปรียบเทียบค่าสัมพัทธ์กับค่าของกลุ่มควบคุมโดยใช้สมการต่อไปนี้ △Ct=Ct (ตัวอย่าง) − Ct (กลุ่มควบคุมภายใน), △△Ct {{36} } △Ct (ตัวอย่าง) −△Ct (ไม่รักษา) และพับเปลี่ยน=2−△△Ct. กลีเซอราลดีไฮด์-3-ฟอสเฟต ดีไฮโดรจีเนส (GAPDH) ถูกใช้เป็นตัวควบคุมภายใน

การสกัดโปรตีน

เซลล์ PC12 ถูกเพาะบนจาน 100-มม. ที่ 1 × 107 เซลล์/จาน หลังจากการยึดติด เซลล์ถูกบำบัดตามลำดับด้วยคาลีโอลาริโอไซด์ B, พาราโบไซด์ B และพาราโบไซด์ II (3.125 ไมโครโมลาร์) เป็นเวลา 12 ชั่วโมง จากนั้นไกลโคไซด์ถูกกำจัดออก และเซลล์ถูกบ่มด้วย H2O2 อีก 6 ชั่วโมง หลังจากการฟักไข่ เซลล์ถูกล้างสองครั้งด้วย PBS เย็นและขูดออกจากจานด้วย 1 มล. ของ PBS เซลล์โฮโมจิเนตถูกหมุนเหวี่ยงที่ 1500 รอบต่อนาที เป็นเวลา 10 นาที หลังการรักษา โปรตีนในเซลล์ถูกสกัดโดยใช้บัฟเฟอร์สลายเซลล์ Beyotime RIPA ที่มี PMSF 1 มิลลิโมลาร์ตามคำแนะนำของผู้ผลิต นอกจากนี้ โปรตีนไซโตพลาสซึมและนิวเคลียสถูกแยกออกตามที่อธิบายไว้ในโปรโตคอลชุดสกัดนิวเคลียร์และไซโตพลาสซึมของบีโยไทม์ ตรวจพบความเข้มข้นของโปรตีนในกลุ่มตัวอย่างโดยใช้ชุดทดสอบโปรตีน Beyotime BCA และตัวอย่างทั้งหมดถูกเก็บไว้ที่ −80 องศาสำหรับการวิเคราะห์แบบ Western blotting [6]

การวิเคราะห์ Western blot

ดำเนินการอิเล็กโตรโฟรีซิส SDS-PAGE หลังจากการสกัดและการทำให้โปรตีนทั้งหมดถูกทำให้เสียสภาพในภายหลังจากกลุ่มต่างๆ หลังจากอิเล็กโตรโฟรีซิส โปรตีนถูกถ่ายโอนไปยังเยื่อ PVDF ซึ่งถูกบล็อกด้วยนมผงพร่องมันเนย 5 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 4 ชั่วโมง หลังจากการล้าง แอนติบอดีปฐมภูมิ (การเจือจางของแรบบิทโพลีโคลนัลแอนติบอดี GAPDH (1:10,000 การเจือจาง), โพลีโคลนัลแอนติบอดีของกระต่าย HO-1 (1:1000 การเจือจาง) หรือ GCLC โพลีโคลนัลแอนติบอดีของกระต่าย GCLC (1:1000 การเจือจาง) ถูกเติมลงในเยื่อหุ้มซึ่งถูกฟักข้ามคืนที่ 4 องศา ในวันถัดไป เยื่อ PVDF ถูกล้างสามครั้งใน TTBS ถัดไป แอนติบอดีทุติยภูมิ (คอนจูเกตที่สัมพันธ์กันกับแพะบริสุทธิ์ที่ต่อต้านกระต่าย IgG (1:1000 การเจือจาง) ที่ติดฉลากด้วยพืชชนิดหนึ่ง เปอร์ออกซิเดสถูกเติมลงในเยื่อหุ้มเซลล์ จากนั้นจึงฟักที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 2 ชั่วโมง เมมเบรน PVDF ถูกล้างและนำสารตรวจจับเคมีลูมิเนสเซนซ์ของ ECL มาใช้เพื่อส่งสัญญาณให้ฟิล์มเอ็กซ์เรย์ ซึ่งได้รับการแก้ไขและสแกนแล้ว

การวิเคราะห์ทางสถิติ

วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ SPSS 190 และผลลัพธ์จะถูกนำเสนอเป็นค่าเฉลี่ยโดยมีค่าเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD) ของการทดลองอิสระสามการทดลอง ค่าของ p < 0.05="">

ผลลัพธ์ การสร้างแบบจำลอง H2O2

ดังแสดงในรูปที่ 2 H2O2 ที่ 50, 100 และ 200 μM ไม่ทำให้เซลล์ตายในระดับที่เหมาะสม อย่างไรก็ตาม 400 μM H2O2 กระทำกับเซลล์ PC12 ภายใน 2-6 ชั่วโมง และความเสียหายจากปฏิกิริยาออกซิเดชันต่อเซลล์มีแนวโน้มที่จะคงที่ ดังนั้นเราจึงพิจารณาว่าการเหนี่ยวนำด้วย H2O2 ที่ความเข้มข้น 400 ไมโครโมลาร์เป็นเวลา 6 ชั่วโมงนั้นเหมาะสมสำหรับการเลียนแบบการบาดเจ็บที่เกิดจากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันต่อเซลล์ PC12

ผลการป้องกันของสารสกัดหยาบต่อเซลล์ PC12 ที่บำบัดด้วย H2O2

เมื่อเทียบกับในกลุ่มแบบจำลอง H2O2 (รูปที่ 3) สารสกัดเอ็น-บิวทานอลที่ความเข้มข้น 005, 0.1, {{10} }.2 และ 0.4 มก./มล. ปรับปรุงความเสียหายจากปฏิกิริยาออกซิเดชันอย่างมีนัยสำคัญต่อเซลล์ PC12 ที่เหนี่ยวนำโดย H2O2 (p < 0.05)="" ในลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้นอย่างมีนัยสำคัญ="" ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าเศษส่วนของเอ็น-บิวทานอลมีฤทธิ์ป้องกันที่มีประสิทธิภาพมากกว่า="" อย่างไรก็ตาม="" สารสกัดปิโตรเลียมอีเทอร์และเอทิลอะซิเตตมีฤทธิ์ป้องกันที่ความเข้มข้นสูงเท่านั้น="" (ปิโตรเลียม="" อีเทอร์:="" 0.1="" และ="" 0.2="" มก./="" มล.,="" p="">< 0.{{31}="" }5;="" เอทิล="" อะซีเตต:="" 0.2="" และ="" 0.4="" มก./มล.,="" p="">< 0.05)="" นอกจากนี้="" ความเข้มข้นที่แตกต่างกันของสารสกัดที่มีเฟสเป็นน้ำไม่มีผลในการป้องกัน="" (p=""> 0.05) นอกจากนี้ เราได้เพิ่มข้อมูลจากการศึกษาการตรวจสอบความถูกต้องโดยใช้สายเซลล์นิวโรบลาสโตมาของมนุษย์ SH-SY5Y (SH-SY5Y) ในไฟล์เสริม การรักษาด้วย 250 ไมโครโมลาร์ H2O2 ส่งผลให้เซลล์มีชีวิตลดลง อย่างไรก็ตาม การรักษาด้วย caleolarioside B, paraboside B และ paraboside II (3.125, 6.25, 12.5, 25 และ 50 μM) ช่วยลดการตายของเซลล์ SH-SY5Y ได้อย่างมีนัยสำคัญ ผลการทดลองพิสูจน์ว่า caleolarioside B, paraboside B และ paraboside II ปกป้องเซลล์ SHSY5Y จาก H2O2- ที่เหนี่ยวนำให้เกิดการบาดเจ็บของเซลล์

โครงสร้างของสารประกอบที่แยกได้จากเศษส่วนของเอ็น-บิวทานอล

เพื่อยืนยันว่าสารสกัดเอ็น-บิวทานอลมีส่วนประกอบที่ออกฤทธิ์ เราได้แยกสารประกอบแปดชนิดเพิ่มเติมจากการสกัด โครงสร้างของสารประกอบ 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 และ 8 ถูกระบุโดยข้อมูลสเปกตรัมที่แตกต่างกัน (1 H-NMR, 13C-NMR และ ESI-MS) ตามการเปรียบเทียบกับข้อมูลที่เผยแพร่สำหรับพาราโบไซด์ A , พาราโบไซด์ B, พาราโบไซด์ I, พาราโบไซด์ II, พาราโบไซด์ III, นูโอมิโอไซด์ A, แคลโอลาริโอไซด์ B และอิโซนูโอมิโอไซด์ A ตามลำดับ [20] ตัวอย่างเช่น ข้อมูลสำหรับพาราโบไซด์ บี มีดังนี้ หมากฝรั่งสีน้ำตาล ½ 20 D −55.7 (c 0.05, CH3OH) [20]; UVMeOH สูงสุด nm (logε): 220 (3.61), 291 (3.54), 330 (3.66) [20]; IRKBr สูงสุด cm-1 : 3392, 2943, 2885, 1699, 1683, 1606, 1521, 1361, 1282, 1163, 1114, 1039, 995, 817 cm−1 [20]; สำหรับข้อมูลรายละเอียดสเปกโตรสโกปี 1 H และ 13C NMR ที่แสดงในการอ้างอิง 20; HR-ESI-MS (เชิงลบ) m/z 741.2231 [MH]− (คำนวณสำหรับ C33H41O19, 741.2242) [20] ข้อมูลสำหรับพาราโบไซด์ II มีดังนี้: ผงไวท์อะมอร์ฟัส; ½ 20 D −80.5 (c 0.05, CH3OH) [20]; UVMeOH สูงสุด nm (logε): 229 (3.74), 322 (3.73) [20]; IRKBr สูงสุด cm-1 : 3419, 1699, 1625, 1596, 1515, 1456, 1419, 1263, 1159, 1139, 1068, 1022, 808 cm−1 [20]; สำหรับข้อมูลรายละเอียดสเปกโตรสโกปี 1 H และ 13C NMR ที่แสดงในการอ้างอิง 20; ESI-MS (เชิงลบ) m/z 637

ผลการป้องกันของสารประกอบที่แยกได้ต่อ H2 O2-ความเป็นพิษที่เหนี่ยวนำให้เกิดในเซลล์ PC12

การสอบวิเคราะห์ MTS ถูกใช้เพื่อตรวจสอบผลของสารประกอบที่ถูกแยกเดี่ยวต่อความอยู่รอดของเซลล์ PC12 ที่สัมผัสกับความเป็นพิษที่เหนี่ยวนำโดย H2O2- ดังที่แสดงในรูปที่ 5 เมื่อเปรียบเทียบกับในกลุ่มควบคุม เซลล์ PC12 ที่ปรับสภาพด้วยความเข้มข้นที่แตกต่างกันห้าระดับของ caleolarioside B, พาราโบไซด์ B, พาราโบไซด์ II หรือพาราโบไซด์ A (3.125, 6.25, 12.5, 25 และ 50 ไมโครโมลาร์) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในความอยู่รอดของเซลล์ (p > 0.05) ดังนั้น การปรับสภาพเซลล์ PC12 ด้วย caleolarioside B, paraboside B และ paraboside II จึงไม่มีความเป็นพิษต่อเซลล์ ดังที่แสดงไว้ในรูปที่ 6, 400 ไมโครโมลาร์ H2O2 ลดความมีชีวิตของเซลล์อย่างมีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับในกลุ่มควบคุม นอกจากนี้ ความมีชีวิตของเซลล์ของ H2O2- เซลล์ PC12 ที่บำบัดแล้วเพิ่มขึ้นอย่างเห็นได้ชัดหลังจากการปรับสภาพเซลล์ PC12 ที่มีความเข้มข้นต่างกันของ caleolarioside B, paraboside B และ paraboside II; นอกจากนี้ ความมีชีวิตของเซลล์สูงที่สุดหลังการบำบัดด้วย caleolarioside B 50 µM, พาราโบไซด์ B 50 µM และพาราโบไซด์ II 12.5 µM สารประกอบอีกห้าชนิดไม่แสดงผลการป้องกันที่มีนัยสำคัญต่อเซลล์ PC12 ที่บำบัดด้วย H2O2- เพื่อแสดงให้เห็นถึงการค้นพบนี้ เราได้กล่าวถึงหนึ่งในสิ่งเหล่านี้เป็นตัวอย่าง ในขณะที่อีกข้อไม่ได้อธิบายไว้ในต้นฉบับ

ระดับการถอดความของ HO-1 และ GCLC

ต่อไปเราทดสอบระดับการถอดรหัสของ HO-1 และ GCLC ในเซลล์ PC12 ที่บำบัดด้วย caleolarioside B, paraboside B และ paraboside II mRNA ทั้งหมดถูกรวบรวมจากเซลล์ PC12 ที่บำบัดและไม่ถูกบำบัดเป็นเวลา 12 ชั่วโมง และจากนั้นนำไปวิเคราะห์การแสดงออกโดย qRT-PCR ดังแสดงในรูปที่ 7(a,c,e) ระดับการถอดรหัสของ H2O-1 เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญหลังจาก

เซลล์ PC12 ถูกปรับสภาพก่อนด้วยความเข้มข้นที่ระบุของ caleolarioside B, พาราโบไซด์ B และพาราโบไซด์ II เป็นเวลา 12 ชั่วโมง (p < 0{{10}}}5)="" ดังที่แสดงไว้ในรูปที่="" 7(b)="" ระดับการถอดรหัสของ="" gclc="" ยังเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในเซลล์="" pc12="" ที่บำบัดก่อนด้วยความเข้มข้นที่ระบุไว้ของ="" caleolarioside="" b="" เป็นเวลา="" 12="" ชั่วโมง="" อย่างไรก็ตาม="" ระดับของ="" gclc="" ในเซลล์="" pc12="" ที่บำบัดล่วงหน้าด้วยพาราโบไซด์="" b="" เป็นเวลา="" 12="" ชั่วโมงลดลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับระดับในกลุ่มแบบจำลอง="" (p="">< 0.05;="" รูปที่="" 7(d))="" นอกจากนี้="" ด้วยการบำบัดด้วยพาราโบไซด์="" ii="" ระดับของ="" gclc="" ในเซลล์="" pc12="" ไม่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับระดับในกลุ่มแบบจำลอง="" (p=""> 0.05; รูปที่ 7(f))

การแสดงออกของ HO-1 และ GCLC

H2O{{0}} และ GCLC เป็นเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระระดับเซลล์ที่สำคัญ และทั้งคู่เป็นยีนดาวน์สตรีมที่มีการควบคุม Nrf2- การแสดงออกของโปรตีนของ H2O-1 และ GCLC ยังถูกสังเกตพบหลังการบำบัด [6] รูปที่ 8 แสดงระดับโปรตีนของ H2O-1 และ GCLC ในเซลล์ PC12 หลังการบำบัดด้วย 400 ไมโครโมลาร์ H2O2; ผลลัพธ์ระบุว่าความเข้มของฟลูออเรสเซนต์ FL ของ H2O-1 ในกลุ่มคาลีโอลาริโอไซด์ B และพาราโบไซด์ B มีค่ามากกว่าในกลุ่มที่บำบัดด้วย H2O2- (รูปที่ 8(a,c)) อย่างไรก็ตาม การแสดงออกของ GCLC ไม่ได้เปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญโดยสารประกอบ ยกเว้นสำหรับคาลีโอลาริโอไซด์ B (รูปที่ 8(b)) ต่อไป สารยับยั้งเคมีของ H2O-1 ถูกใช้เพื่อประเมินบทบาทของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระเพิ่มเติมในการควบคุมผลการป้องกันที่เกิดจาก caleolarioside B, paraboside B หรือ paraboside II ต่อ H2O2- ความเป็นพิษต่อเซลล์ที่เกิดจาก H2O2- Caleolarioside B, paraboside B และ paraboside II (3.125 µM) ป้องกัน H2O2- ความเป็นพิษต่อเซลล์ แต่ผลการป้องกันดังกล่าวถูกย้อนกลับโดย HO-1 ตัวยับยั้ง ZnPP (p < 0.01)="" ที่="" 15="" µm="" (รูปที่="" 8="">

การอภิปราย

การสูงวัยของประชากรเป็นปัญหาระดับโลกที่ร้ายแรง โรคหลายชนิดเกี่ยวข้องกับความชราภาพ เช่น AD และ PD ซึ่งเป็นภัยคุกคามร้ายแรงต่อสุขภาพของประชาชน AD และ PD กลายเป็นโรคร้ายแรงอันดับสามของโลก รองจากโรคหัวใจและหลอดเลือดและมะเร็ง ดังนั้นการเสื่อมของระบบประสาทจึงกลายเป็นหัวข้อการวิจัยที่เร่งด่วนทั่วโลก อย่างไรก็ตาม พยาธิกำเนิดของ AD และ PD ซึ่งเป็นโรคทางระบบประสาทของระบบประสาทส่วนกลางยังคงไม่ชัดเจนจนถึงปัจจุบัน นอกจากนี้ยังมียาเพียงไม่กี่ชนิดที่สามารถรักษา AD หรือ PD ได้อย่างมีประสิทธิภาพเนื่องจากกลไกการก่อโรคที่ซับซ้อน [23] การศึกษาก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่า ROS เช่น superoxide anion (O2−) และ H2O2 เป็นปัจจัยหลักที่ทำให้เกิดโรคทางระบบประสาท การเปลี่ยนแปลงทางพยาธิวิทยาระหว่าง PD รวมถึงการเสื่อมสภาพของเซลล์ประสาทและการตายของ substantia nigra และ striatal dopamine [24,25] ดังนั้น การพัฒนายาต้านอนุมูลอิสระที่มีประสิทธิภาพเพื่อรักษา PD จึงเป็นสิ่งสำคัญ และการค้นพบยาดังกล่าวได้กลายเป็นทิศทางการวิจัยที่สำคัญ [26] ในปัจจุบัน เส้นทางการส่งสัญญาณ Nrf2/ARE ดูเหมือนจะเป็นวิถีความเครียดจากสารต้านอนุมูลอิสระภายในที่สำคัญที่สุด [27] ARE อยู่ในบริเวณ 5′- ขนาบข้างของยีน เช่น HO-1 และ GCLC [28,29] H2O-1 และ GCLC เป็นยีนที่เกี่ยวข้องกับ Nrf2- ที่ถูกควบคุมที่ปลายน้ำของโปรตีนนี้ [6] AREs สามารถส่งผลต่อระดับของสารต้านอนุมูลอิสระได้ในเวลาต่อมา และกระตุ้นการแสดงออกของ H2O-1 และยีนป้องกันอื่นๆ ที่ปลายน้ำ ซึ่งจะช่วยเพิ่มประสิทธิภาพในการปกป้องเซลล์ [30,31] นอกจากนี้ ผลการวิจัยยังชี้ว่าผลในการป้องกันของ resveratrol ต่อความเป็นพิษที่ชักนำให้เกิด A 1-42- ในเซลล์ PC12 เกิดขึ้นจากการควบคุมการแสดงออกของ H2O-1 ผ่านการกระตุ้นเส้นทางการส่งสัญญาณภายในเซลล์ของ Nrf2 [32]

เซลล์ PC12 เป็นรูปแบบของเซลล์ประสาทที่เป็นที่ยอมรับ และมีการใช้อย่างแพร่หลายในการศึกษาผลกระทบต่อระบบประสาท [33] H2O2 สามารถผ่านเยื่อหุ้มเซลล์ได้อย่างง่ายดายและรวมกับธาตุเหล็กเพื่อสร้างอนุมูลอิสระที่มีฤทธิ์สูง ซึ่งทำให้เกิดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันและการบาดเจ็บของเซลล์ [34] H2O2 เป็น ROS ที่สำคัญ และอนุมูลอิสระสามารถสร้างขึ้นได้ง่ายและค่อนข้างคงที่ ดังนั้นจึงมักใช้เพื่อสร้างแบบจำลองความเครียดออกซิเดชันโดยใช้เซลล์ PC12 [5] ในการศึกษานี้ การปรับสภาพเซลล์ PC12 ที่มีความเข้มข้นที่ไม่เป็นพิษของสารสกัดจากพืชจะปกป้องเซลล์จากความเป็นพิษต่อเซลล์ของ H2O2-โดยการลดการสร้าง ROS Phenylethanoid glycosides มีกลุ่มฟีนอลไฮดรอกซิลจำนวนมากที่มีกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระและต่อต้านวัย ในการศึกษานี้ เราพบว่าการสกัดเอ็น-บิวทานอลให้การป้องกันได้ดีกว่าเศษส่วนขั้วอื่นๆ (รูปที่ 3) ดังนั้นเราจึงคัดกรองกิจกรรมการป้องกันของสารประกอบแปดชนิดที่แยกได้จากเศษส่วนของเอ็น-บิวทานอล ผลลัพธ์แสดงให้เห็นเป็นครั้งแรกว่ารูปที่ 8 การวิเคราะห์ระดับโปรตีน HO-1 และ GCLC บนเซลล์ PC12 (a) การวิเคราะห์ Western blotting ของการแสดงออกของ HO-1 และ GCLC และ GAPDH ถูกใช้เป็นตัวควบคุมการบรรจุ (b) การแสดงออกของโปรตีน GCLC ของการวิเคราะห์ Western blot (c) การแสดงออกของโปรตีนการวิเคราะห์ Western blot H{{20}} (d) H2O-1 ตัวยับยั้ง ZnPP ลดผลกระทบต่อระบบประสาท ข้อมูลถูกนำเสนอด้วยวิธี ± SD, n=3 ***p < 0.001="" เทียบกับกลุ่มควบคุม="" #p="">< 0.05="" เทียบกับกลุ่ม="" h2o2="" (โดยไม่ใช้="" znpp),="" ##p="">< 0.01="" เทียบกับกลุ่ม="" h2o2="" (ไม่บำบัดด้วย="" znpp),="" ###p="">< 0.001="" เทียบกับกลุ่ม="" h2o2="" (ไม่มี="" znpp="" ได้รับการรักษา);="" และ="" p="">< 0.01="" เทียบกับกลุ่ม="" h2o2="" (ที่บำบัดด้วย="" znpp)="" และ="" &p="">< 0.001="" เทียบกับกลุ่ม="" h2o2="" (ด้วยการบำบัดด้วย="" znpp)="" (กลุ่มควบคุม;="" กลุ่มแบบจำลอง:="" h2o2;="" กลุ่มเชิงลบของ="" znpp:="" caleolarioside="" b="" บวก="" h2o2,="" พาราโบไซด์="" b="" บวก="" h2o2,="" พาราโบไซด์="" ii="" บวก="" h2o2;="" กลุ่มบวก="" znpp:="" znpp="" บวก="" caleolarioside="" b="" บวก="" h2o2,="" znpp="" บวกพาราโบไซด์="" b="" บวก="" h2o2,="" znpp="" บวกพาราโบไซด์="" ii="" บวก="" h2o2)="" 2210="" x.="" gong="" et="" al.="" ดาวน์โหลดโดยแขกรับเชิญเมื่อวันที่="" 27="" สิงหาคม="" 2564caleolarioside="" b,="" paraboside="" b="" และ="" paraboside="" ii="" มีผลในการป้องกันอย่างมีนัยสำคัญต่อความเสียหายที่เกิดจากออกซิเดชันของ="" h2o2-="" ในเซลล์="" pc12="" ผลลัพธ์ยังระบุด้วยว่าการรักษาด้วย="" h2o2="" ทำให้เกิดการบาดเจ็บของเซลล์="" pc12="" อย่างมีนัยสำคัญ="" และความมีชีวิตของเซลล์ลดลง="" ในขณะที่การรักษาด้วย="" caleolarioside="" b,="" paraboside="" b="" และ="" paraboside="" ii="" ช่วยลดผลกระทบเหล่านี้ได้อย่างมีนัยสำคัญ="" (รูปที่="" 6)="" การศึกษาก่อนหน้านี้รายงานว่าวิถี="" nrf2/are="" เป็นหนึ่งในวิถีทางต้านอนุมูลอิสระที่สำคัญที่สุด="" และสามารถเพิ่มการควบคุมการแสดงออกของเครื่องหมายปลายน้ำ="" เช่น="" ho-1="" เพื่อปกป้องเซลล์="" [7]="" ผลลัพธ์ของ="" qrt-pcr="" และการวิเคราะห์แบบ="" western="" blotting="" พบว่า="" caleolarioside="" b,="" paraboside="" b="" และ="" paraboside="" ii="" เพิ่มระดับของ="" h2o-1="" อย่างมีนัยสำคัญ="" อย่างไรก็ตาม="" ระดับการถอดรหัสของ="" gclc="" เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในเซลล์="" pc12="" ที่ปรับสภาพด้วย="" caleolarioside="" b="" แต่ลดลงในเซลล์ที่ได้รับพาราโบไซด์="" b="" ก่อนปรับสภาพเมื่อเทียบกับเซลล์ในกลุ่มแบบจำลอง="" นอกจากนี้="" อะราบิโนไซด์="" ii="" ไม่ได้เปลี่ยนแปลงการแสดงออกของเครื่องหมายนี้="" เมื่อเปรียบเทียบกับในกลุ่มแบบจำลอง="" (รูปที่="" 7="" และ="" 8(a–c))="" นอกจากนี้="" ผลการป้องกันของ="" caleolarioside="" b,="" paraboside="" b="" และ="" paraboside="" ii="" ต่อการบาดเจ็บของเซลล์="" pc12="" ที่เกิดจาก="" h2o2-="" ถูกย้อนกลับโดย="" ho-1="" ตัวยับยั้ง="" znpp="" (รูปที่="" 8(d))="" โดยสรุป="" phenylethanoid="" glycosides="" caleo="" larioside="" b,="" arabinoside="" b="" และ="" paraboside="" ii="" ปกป้องเซลล์="" pc12="" อย่างมีประสิทธิภาพจาก="" h2o2-="" ที่ก่อให้เกิดความเสียหายจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน="" ดังนั้น="" สารประกอบเหล่านี้="" ที่แยกได้จาก="" p.="" martini="">

ผลงานของผู้เขียนLM และ ZC คิดและออกแบบการทดลอง GX, RK และ BX ทำการทดลอง GX และ XY เขียนบทความ GX, XY, RK, BX, ZC และ LM อภิปรายผลลัพธ์ แสดงความคิดเห็นในต้นฉบับ ผู้เขียนทั้งหมดอ่านและได้รับการอนุมัติต้นฉบับสุดท้าย.

คำชี้แจงการเปิดเผยข้อมูลผู้เขียนไม่ได้รายงานความขัดแย้งทางผลประโยชน์ที่อาจเกิดขึ้น เงินทุน งานนี้ได้รับการสนับสนุนโดยกองทุนวิจัยของวิทยาลัยการแพทย์เป่าโถว [หมายเลขทุน: BYJJ-YF 201727] และเงินอุดหนุนบริการสาธารณสุขด้านการแพทย์แผนจีนปี 2018 พิเศษ "การสำรวจครั้งที่สี่เกี่ยวกับทรัพยากรเวชภัณฑ์ของจีน" [หมายเลขทุน: สมาคมการเงิน [2018] ] 43].

อ้างอิง

[1] บัตเตอร์ฟิลด์ DA. มุมมองต่อความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันในโรคอัลไซเมอร์และการทำนายผลการวิจัยในอนาคต เจ อัลไซเมอร์ ดิส 2018;64:1–11.

[2] Chignon C, Tomas M, Bonnefontrousselot D และอื่น ๆ ความเครียดออกซิเดชันและเปปไทด์ amyloid-beta ในโรคอัลไซเมอร์ รีดอกซ์ ไบโอล 2018;14:450–464.

[3] Guo JD, Zhao X, Li Y, และคณะ ความเสียหายต่อเซลล์ประสาทโดปามีนจากความเครียดออกซิเดชันในโรคพาร์กินสัน (ทบทวน) อินท์ เจ โมล เมด 2018;41:1817–1825.

[4] Bai Y, Dong LH, Huang XH และอื่น ๆ ความสัมพันธ์ของความหลากหลาย rs823128, rs1572931 และ rs823156 ที่ลดความเสี่ยงของโรคพาร์กินสัน รายงานระบบประสาท 2017;27:936–941.

[5] Han XH, Zhu SL, Wang BX และอื่น ๆ ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของ 7,8-dihydroxyflflavone ปกป้องเซลล์ PC12 จาก6-ความเป็นพิษต่อเซลล์ที่เกิดจากไฮดรอกซีโดพามีน Neurochem อินเตอร์ 2014;64:18–23.

[6] Li MQ, Xu T, Zhou F และอื่น ๆ ผลทางประสาทของฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์สี่ชนิดต่อการตายของเซลล์ PC12 ที่เกิดจาก H2O2- ผ่านทางวิถี Nrf2/ARE Int J โมลวิทย์. 2018;19:1135.

[7] Buendia I, Michalska P, Navarro E และอื่น ๆ เส้นทาง Nrf2-ARE: เป้าหมายที่เกิดขึ้นใหม่ในการต่อต้านความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันและการอักเสบของเส้นประสาทในโรคทางระบบประสาท เภสัชบำบัด. 2016;157:84–104.

[8] Jia XJ, Yan XS, Cai ZP และอื่น ๆ ผลของ phenylethanoid glycosides ที่ได้จาก Herba cistanche ต่อการขาดดุลทางปัญญาและกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระในหนู SAMP8 เพศผู้ J Toxicol Env รักษา A. 2017;80:1180–1186

[9] Tsvetkov DE, Dmitrenok AS, Tsvetkov YE และอื่น ๆ ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์จากนอตไม้สักและฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ เจ ไบโอล แอคทีฟ โปรดักชั่น แนท 2016;6:272–281.

[10] Zhang YQ, Gao EY, Liang CQ, และคณะ ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของสารประกอบ caffeoyl phenylethanoid glycoside จาก Lindernia ruellioides ในหลอดทดลอง เซ็นต์เซาท์ฟาร์มา 2017;15:1687–1690.

[11] Wu ZH, Ma YF, Zhao L และอื่น ๆ บทบาทของ Nrf2-เป็นวิถีในการบาดเจ็บจากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันและความสัมพันธ์กับเส้นทางการส่งสัญญาณอื่นๆ Anim Husbandry Feed วิทย์. 2016;37:42–48.

[12] Zheng XK, Li J, Feng WS และอื่น ๆ ความก้าวหน้าในการศึกษาวงศ์ Gesneriaceae ชินเจ ยาใหม่. 2003;12:261–263.

[13] เวิน F, Li ZD. การวิจัยล่วงหน้าเกี่ยวกับพืช Gesneriaceae ทรัพยากรพืชป่าชิน. 2006;25:1–6.

[14] Yan WY, Chen L, Wang JM และอื่น ๆ ความคืบหน้าการวิจัย Triterpenoids ของพืช Gesneriaceae Nat Prod Res ผู้พัฒนา 2012;24:698–701.

[15] บริษัทยาสมุนไพรจีน บันทึกทรัพยากรการแพทย์แผนจีน จีน: สำนักพิมพ์วิทยาศาสตร์; พ.ศ. 2537

[16] Bai ZF, Wang XQ, Xiao PG และอื่น ๆ การกระจาย Phenylethanoid Glycosides ในพืชสมุนไพรของ Gesneriaceae ชิน เจ ชิน เมเตอร์ เมด 2013;38:4267–4270.

[17] เขา ZD, Lau KM, Xu HX, et al. ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของ phenylethanoid glycosides จาก Brandisia hancei เจ เอธโนฟาร์มาคอล. 2000;71:483–486.

[18] Li L, Shi DF, Gui YG และอื่น ๆ ศึกษาฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของ phenylethanoid glycosides จาก Cistanche deserticola เจ อานฮุย เกษตรศาสตร์ 2552;32:15835–15836.

[19] Ju BW, Yang JH, Yan Y, และคณะ ผลการป้องกันของ glycosides ของ cistanche ต่อความเสียหายของเซลล์ PC12 PARABOLA MARTINI PROTECT PC12 CELLS จาก H2O2-การบาดเจ็บที่เกิดจากการเหนี่ยวนำ 2211