เมแทบอลิซึมของ Flavonol Kaempferol ในเซลล์ไต

ติดต่อ: emily.li@wecistanche.com

เมแทบอลิซึมของ Flavonol Kaempferol ในเซลล์ไตปลดปล่อย B-ring เพื่อเข้าสู่ Coenzyme Q Biosynthesis

ลูเซีย เฟอร์นานเดซ-เดล-ริโอ¹, et al

เชิงนามธรรมบทคัดย่อ: โคเอ็นไซม์ คิว ​​(CoQ) เป็นส่วนประกอบที่สำคัญของห่วงโซ่การขนส่งอิเล็กตรอนของไมโตคอนเดรีย และเป็นสารต้านอนุมูลอิสระที่สำคัญที่มีอยู่ในเยื่อหุ้มเซลล์ทั้งหมด การขาด CoQ เกิดขึ้นบ่อยครั้งในผู้สูงอายุและในโรคที่เกี่ยวข้องกับอายุ และการรักษาในปัจจุบันจำกัดอยู่ที่การเสริม CoQ เท่านั้น กลยุทธ์ที่พึ่งพาการเสริม CoQ ต้องทนทุกข์ทรมานจากการดูดซึมและการลักลอบค้าโมเลกุลที่ไม่ชอบน้ำนี้ ในการศึกษาก่อนหน้านี้ มีรายงานว่า flavonol kaempferol ในอาหารทำหน้าที่เป็นสารตั้งต้นของวงแหวน CoQ และเพิ่มปริมาณ CoQ ในไตเซลล์ แต่ไม่ได้อธิบายส่วนของโมเลกุลที่เข้าสู่การสังเคราะห์ CoQ biosynthesis หรือกลไก ในการศึกษานี้ kaempferol ที่ติดฉลากเฉพาะใน B-ring ถูกแยกออกจากพืช Arabidopsisไตเซลล์ที่บำบัดด้วยสารประกอบนี้รวม B-ring ของ kaempferol เข้ากับ CoQ ที่สังเคราะห์ขึ้นใหม่ ซึ่งแนะนำว่า B-ring ถูกเผาผลาญผ่านกลไกที่อธิบายไว้ในเซลล์พืช กระชายเป็นฟลาโวนอยด์ตามธรรมชาติที่มีอยู่ในผักและผลไม้ และมีคุณสมบัติต้านอนุมูลอิสระ ต้านมะเร็ง และต้านการอักเสบ ความเข้าใจที่ดีขึ้นเกี่ยวกับบทบาทของ kaempferol ในฐานะสารตั้งต้นของวงแหวน CoQ ทำให้สารประกอบออกฤทธิ์ทางชีวภาพนี้เป็นตัวเลือกที่มีศักยภาพสำหรับการออกแบบการแทรกแซงที่มีเป้าหมายเพื่อเพิ่มการสังเคราะห์ CoQ ภายในร่างกาย และอาจปรับปรุงฟีโนไทป์ที่บกพร่องของ CoQ ในการชราภาพและโรค

คีย์เวิร์ด ฟลาโวนอยด์; ฟลาโวนอล; กระชาย; โคเอ็นไซม์คิว;ไตเซลล์; สารตั้งต้น

Cistanche สามารถปรับปรุงการทำงานของไต

1. บทนำ

Coenzyme Q (CoQ หรือ ubiquinone) เป็นโมเลกุล lipophilic ขนาดเล็กที่พบได้ทั่วไปในเยื่อหุ้มเซลล์ โครงสร้างประกอบด้วยวงแหวนเบนโซควิโนนและหางโพลิไอโซพรีนอยด์ที่มีความยาวแตกต่างกันไปตามสายพันธุ์ [1] ในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมมี CoQ9 (หางเก้าไอโซพรีน) และ CoQ10 (หางสิบไอโซพรีน) โดยมี CoQ9 เด่นในหนูและ CoQ10 ในมนุษย์ [1] การสังเคราะห์ CoQ เกิดขึ้นภายในไมโทคอนเดรียผ่านหลายขั้นตอนโดยอย่างน้อย 14 โปรตีนที่เรียกว่าโปรตีน COQ [1,2] CoQ มีบทบาทในหลาย ๆ หน้าที่ของเซลล์ [3,4] อย่างไรก็ตาม หน้าที่หลักของ CoQ คือการรับอิเล็กตรอนและโปรตอนจากคอมเพล็กซ์ระบบทางเดินหายใจ I และ II และบริจาคให้กับคอมเพล็กซ์ III [1,4] ความจุรีดอกซ์นี้ช่วยให้ CoQ สามารถหมุนเวียนระหว่างสถานะที่แตกต่างกันสามสถานะ: ยูบิควิโนน (ออกซิไดซ์), เซมิควิโนน (กึ่งออกซิไดซ์) และ ยูบิควินอล (ลดลง) [1,5] ในรูปแบบยูบิควินอล CoQH2 มีบทบาทต้านอนุมูลอิสระที่สำคัญและให้การปกป้องดีเอ็นเอ โปรตีน และไขมันจากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน [6,7]

ปริมาณ CoQ ลดลงตามอายุในเนื้อเยื่อของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมหลายชนิด ซึ่งสะท้อนโดยอัตราการสังเคราะห์ทางชีวภาพที่ลดลง [8–10] ความเป็นไปได้ในการเพิ่มเนื้อหา CoQ10 ผ่านการเสริมอาหารได้รับการสำรวจอย่างกว้างขวางในทศวรรษที่ผ่านมา [6,9] แม้ว่าจำเป็นต้องมีการศึกษาที่มีการควบคุมมากขึ้นเพื่อตรวจสอบประสิทธิภาพของ CoQ10 ในการเป็นยาต่อต้านวัยในมนุษย์ [11] มีรายงานก่อนหน้านี้ว่าระดับ CoQ ในพลาสมาในผู้สูงอายุมีความสัมพันธ์กับการออกกำลังกายที่เพิ่มขึ้นและความเสียหายที่เกิดจากออกซิเดชันของไขมันต่ำ และการเสริม CoQ10 ช่วยเพิ่มความมีชีวิตชีวา สมรรถภาพทางกาย และคุณภาพชีวิตในผู้สูงวัย [9] กรณีผลประโยชน์ของการเสริม CoQ10 นั้นแข็งแกร่งขึ้นสำหรับโรคที่เกี่ยวข้องกับอายุจำนวนมากเช่นโรคหลอดเลือดหัวใจ, โรคระบบประสาท, การอักเสบ, กลุ่มอาการเมตาบอลิซึม, โรคไขข้อ, การก่อมะเร็ง, เบาหวาน, โรคกระดูกพรุนและไขมันในเลือดสูง [3,8,11] มีการแสดงการเสริม CoQ10 เพื่อลดเครื่องหมายการอักเสบ ซึ่งมักมีอยู่ในระดับสูงในโรคที่เกี่ยวข้องกับอายุดังกล่าว [12–14]

อย่างไรก็ตาม สายโซ่โพลีไอโซพรีนอยด์ที่ยาวทำให้ CoQ10 มีไขมันในเลือดสูงและดูดซับได้ยาก ผลิตภัณฑ์เสริมอาหาร CoQ10 ก่อให้เกิดความท้าทายหลายประการ รวมถึงการดูดซึมจำเพาะผ่านทางเดินอาหาร [5] การดูดซึมของเซลล์ที่เยื่อหุ้มพลาสมา การขนส่งข้ามเยื่อหุ้มเซลล์ และการดูดซึมโดยไมโตคอนเดรีย ขั้นตอนการค้ามนุษย์เหล่านี้ทำให้กระบวนการเสริม CoQ10 จากภายนอกไม่มีประสิทธิภาพมาก [3,9] ในเรื่องนี้ ยานพาหะทางเลือกสำหรับการบริหาร CoQ10 อยู่ระหว่างการศึกษา (เช่น แคปซูลที่มีน้ำมันเป็นส่วนประกอบ อนุภาคนาโน) [3,15,16] เช่นเดียวกับกลยุทธ์ใหม่ที่สามารถกระตุ้นการสังเคราะห์ CoQ ภายในร่างกาย [2,3] ก่อนหน้านี้ เราได้อธิบายความสามารถของ kaempferol ซึ่งเป็นฟลาโวนอลที่พบในผักและผลไม้ เพื่อเพิ่มเนื้อหา CoQ โดยทำหน้าที่เป็นสารตั้งต้น CoQ ในหนูและมนุษย์ไตเซลล์[17]. อย่างไรก็ตาม ไม่ได้ระบุเส้นทางการเผาผลาญที่แน่นอนซึ่ง kaempferol มีส่วนร่วมในการสังเคราะห์ CoQ มีการเสนอสมมติฐานสองข้อ: (1) กระชายอาจเป็นสารตั้งต้นโดยตรงของ COQ2 ในวิถีการสังเคราะห์ทางชีวสังเคราะห์ของ CoQ และจะถูกเผาผลาญในภายหลังโดยโปรตีน COQ ที่แตกต่างกันจนกว่าจะถึงโครงสร้างสุดท้ายของ CoQ; หรืออีกทางหนึ่ง (2) kaempferol อาจถูกเผาผลาญในเซลล์เพื่อผลิตสารตั้งต้นของวงแหวน CoQ ที่มีศักยภาพ ซึ่งจากนั้นจะถูกรวมเข้ากับวิถีการสังเคราะห์ทางชีวภาพของ CoQ [17] ในการศึกษาเมื่อเร็ว ๆ นี้ Soubeyrand และผู้เขียนร่วม [18] อธิบายว่าในพืช เส้นทางการสังเคราะห์ทางชีวภาพของฟลาโวนอยด์และ CoQ นั้นเชื่อมโยงกันอย่างแท้จริง และกระชายนั้นสามารถทำหน้าที่เป็นสารตั้งต้นสำหรับการสังเคราะห์ CoQ ได้ พวกเขาพิสูจน์ว่าบีริงของแคมป์เฟอรอลอยู่ภายใต้การแตกแยกของเปอร์ออกซิเดชัน เพื่อให้ 4-กรดไฮดรอกซีเบนโซอิก (4HB) ซึ่งเป็นสารตั้งต้นทั่วไปของวงแหวนเบนโซควิโนนของ CoQ [18]

เป้าหมายของงานนี้คือการอธิบายเพิ่มเติมเกี่ยวกับความสัมพันธ์ระหว่าง kaempferol และ CoQ ในเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ผลลัพธ์ของเราแสดงให้เห็นว่าในไตเซลล์ B-ring ของ kaempferol เป็นส่วนหนึ่งของโมเลกุลที่เข้าสู่การสังเคราะห์ CoQ biosynthesis ซึ่งบ่งชี้ว่ากลไกที่อธิบายไว้สำหรับพืชมีแนวโน้มที่จะอนุรักษ์ไว้ในสัตว์มีกระดูกสันหลัง

2. ผลลัพธ์

เพื่อทำความเข้าใจเพิ่มเติมว่า kaempferol ทำหน้าที่เป็นสารตั้งต้นของ CoQ ในเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมอย่างไร เราจึงตัดสินใจทดสอบว่า B-ring ของ kaempferol นั้นเป็นส่วนหนึ่งของโมเลกุลที่เข้าสู่เส้นทางการสังเคราะห์ทางชีวภาพของ CoQ ตามที่รายงานในพืชหรือไม่ [18] ความพยายามของเราในการสังเคราะห์สารเคมี kaempferol โดยเฉพาะที่ติดฉลาก 13C ใน B-ring (13C6-[B-ring]-kaempferol) ไม่ประสบความสำเร็จ เพื่อเป็นแนวทางทางเลือก เราเลือกที่จะแยก 13C6-[B-ring]-kaempferol ออกจากวัฒนธรรมของพืช Arabidopsis thaliana การสังเคราะห์ kaempferol ที่ติดฉลาก B-ring ในร่างกายนั้นเป็นไปได้เนื่องจากพืชได้รับ B-ring ของ kaempferol โดยเฉพาะจากฟีนิลมอยอิตีของฟีนิลอะลานีน [19] ในทางตรงกันข้าม A-ring และ C-ring มีต้นกำเนิดมาจาก malonyl-CoA [19] โดยการป้อน 13C6-L-phenylalanine (13C6-Phe) ให้กับพืช Arabidopsis ที่ปลูกในสภาวะปลอดเชื้อ จึงสามารถได้รับ kaempferol ที่ติดฉลากเฉพาะบน B-ring [18] นอกจากนี้ เพื่อเพิ่มการสะสม kaempferol การให้อาหาร 13C6-Phe ได้ดำเนินการโดยใช้ฟลาโวนอยด์-30-hydroxylase Arabidopsis knockout ซึ่งไม่สามารถเผาผลาญ kaempferol เป็น anthocyanins ได้อีก [20] เราควรสังเกตว่า kaempferol ที่ได้จากวิธีการดังกล่าวประกอบด้วยส่วนผสมของ 13C6-[B-ring]-kaempferol และ kaempferol ที่ไม่มีฉลากซึ่งมีอยู่ในเนื้อเยื่อพืชก่อนให้อาหารด้วย 13C{{36 }}เพ. การเพิ่มสมรรถนะจำเพาะของ 13C6-[B-ring]-kaempferol ในของผสมที่ใช้สำหรับการทดลองของเราคือประมาณ 10 เปอร์เซ็นต์ของแหล่งรวมทั้งหมดของ kaempferol (กล่าวคือ ไม่มีฉลากและติดฉลาก)

ด้วยการใช้ 13C6-[B-ring]-kaempferol ที่สกัดและทำให้บริสุทธิ์จาก Arabidopsis เราจึงทำการรักษาหนูไตproximal tubule epithelial (TKPTS) เซลล์และวัด de novo และเนื้อหาทั้งหมดของ CoQ (รูปที่ 1) kaempferol ที่ไม่ได้ติดฉลาก, kaempferol ที่ติดฉลาก 13C แบบสากล (13C-kaempferol) และ 13C-labeled 4HB(13C6-4HB) ที่ติดฉลาก 13C ถูกใช้เป็นการบำบัดเสริม (รูปที่ 1a) เซลล์ที่บำบัดด้วยกระสายยาเอทานอลถูกรวมไว้เป็นตัวควบคุม เราสังเกตว่าในแง่ของปริมาณ CoQ ทั้งหมด (CoQ บวก 13C6-CoQ) ทั้งเนื้อหา CoQ9 และ CoQ10 เพิ่มขึ้นโดยการบำบัดด้วย kaempferol (ไม่ขึ้นกับฉลาก) และ 4HB (รูปที่ 1b,c) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้สำหรับไตเซลล์ [17]. 13C6-ตรวจพบ CoQ ในเซลล์ที่บำบัดด้วย 13C-kaempferol และ 13C6-4HB ซึ่งสอดคล้องกับบทบาทของสารประกอบเหล่านี้ในฐานะสารตั้งต้นของวงแหวน CoQ [17,21] โดยเฉพาะอย่างยิ่ง การรักษาด้วย 13C6-[B-ring]-kaempferol ยังนำไปสู่การสังเคราะห์ของ 13C6-CoQ (รูปที่ 1b,c) ซึ่งบ่งชี้ว่า B-ring ของ kaempferol เป็นส่วนหนึ่งของ โมเลกุลที่เข้าสู่กระบวนการสังเคราะห์ CoQ ตามที่คาดไว้ การติดฉลากเฉพาะด้านล่างของ B-ring ในส่วนผสม 13C6-[B-ring]-kaempferol/kaempferol ส่งผลให้มีปริมาณ CoQ ที่ต่ำกว่า 13C6-CoQ (รูปที่ 1b,c)

3. อภิปราย

กระชายเป็นฟลาโวนอยด์ประเภทฟลาโวนอยด์ตามธรรมชาติที่มีอยู่ในชา เช่นเดียวกับในผักและผลไม้มากมาย เช่น บร็อคโคลี่ องุ่น คะน้า มะเขือเทศ และผลไม้รสเปรี้ยว เป็นต้น [22,23] คุณสมบัติที่รู้จักกันดีที่สุดของ kaempferol คือฤทธิ์ต้านการอักเสบทั้งในการอักเสบเฉียบพลันและเรื้อรัง และบทบาทในการป้องกันมะเร็งหลายชนิด [24–26] นอกจากนี้ยังได้รับการพิสูจน์แล้วว่าปกป้องการทำงานของตับและหัวใจ และป้องกันโรคเมตาบอลิซึมและโรคทางระบบประสาท [24,26] คิดว่ากระชายจะบรรลุผลที่เป็นประโยชน์ผ่านการควบคุมเส้นทางเซลล์จำนวนมาก [24,26] แต่การทำงานของสารต้านอนุมูลอิสระอาจมีความสำคัญเช่นกัน Kaempferol ช่วยลดความเครียดจากการเกิดออกซิเดชันและการเกิด lipid peroxidation อย่างมีนัยสำคัญ และสามารถปรับปรุงกิจกรรมการป้องกันสารต้านอนุมูลอิสระได้ [26] กลุ่มไฮดรอกซิล C-3 ได้รับการพิจารณาว่ามีความสำคัญเป็นพิเศษสำหรับกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระนี้ [27]

ในปี 2558 Xie และคณะ [21] อธิบายว่า resveratrol ที่เป็นสารประกอบในอาหารซึ่งเชื่อมโยงกับประโยชน์ต่อสุขภาพหลายประการ [28] สามารถทำหน้าที่เป็นสารตั้งต้นในการสังเคราะห์ทางชีวเคมีของ CoQ ใน Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae และเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ในการศึกษาในภายหลัง kaempferol ถูกอธิบายเพิ่มเติมเพื่อทำหน้าที่เป็นสารตั้งต้นของวงแหวน CoQ และเพิ่มเนื้อหา CoQ ในเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม [17] การเพิ่มขึ้นของ CoQ ที่เกิดจาก kaempferol ได้รับการพิสูจน์แล้วว่าแข็งแกร่งกว่าผลของโพลีฟีนอลอื่น ๆ รวมถึง resveratrol ในความเป็นจริง quercetin, naringenin, luteolin และ piceatannol ไม่ได้แสดงผลใด ๆ [17] การศึกษาเหล่านี้เชื่อมโยงผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติโดยทั่วไปมีอยู่ในอาหารที่มีการสังเคราะห์ทาง CoQ แม้ว่าจะไม่ได้กำหนดกลไกที่รับผิดชอบในการรวมตัวกันก็ตาม เมื่อเร็ว ๆ นี้ได้มีการอธิบายว่าการสังเคราะห์ฟลาโวนอยด์นั้นเชื่อมโยงกับการสังเคราะห์ CoQ ในพืช [18] นอกจากนี้ ผู้เขียนยังแสดงให้เห็นว่าในพืช B-ring ของ kaempferol ถูกแยกออกจาก peroxidases ที่ยังไม่เป็นที่รู้จักซึ่งผลิต 4HB ซึ่งเข้าสู่เส้นทางการสังเคราะห์ CoQ โดยตรง[18]

ที่นี่ เรายืนยันว่าเอนไซม์ที่คล้ายกันอาจมีอยู่ในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม เซลล์ทำให้เกิดกลไกที่เปรียบเทียบกันได้ แม้ว่าจำเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมเพื่อพิจารณาว่าความแตกแยกของ kaempferol ในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมสร้าง 4HB หรือไม่ แต่ผลของเราพิสูจน์ว่า B-ring ของ flavonol เป็นส่วนหนึ่งของโมเลกุลที่เข้าสู่เส้นทางการสังเคราะห์ทางชีวภาพของ CoQ (รูปที่ 2) เอนไซม์จำเพาะเหล่านี้ต้องใช้ร่วมกันในพืชและเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม แต่ดูเหมือนว่าจะไม่มีอยู่ใน S. cerevisiae อย่างน้อยก็ในภูมิหลังทางพันธุกรรม BY4741 เนื่องจากยีสต์ถูกอธิบายว่ารวม 13C-kaempferol ไว้เพียงเล็กน้อย [17] ในพืช เคมีของปฏิกิริยาจำเป็นต้องมีพันธะคู่ระหว่าง C-2 และ C-3 พร้อมกัน และหมู่ไฮดรอกซิลบน C-3 [18] เนื่องจากไดไฮโดรคาเอ็มเฟอรอล (ไม่มี C2-C3 พันธะคู่) และ naringenin (ไม่มีพันธะคู่ C2-C3 หรือ C-3 –OH) ล้มเหลวในการเป็นสารตั้งต้นของการตัดแยกเปอร์ออกซิเดชัน การสังเกตอิสระก่อนหน้านี้ว่า apigenin (ไม่มีพันธะคู่ C2-C3) และ naringenin ล้มเหลวในการปรับปรุงเนื้อหา CoQ ในไตเซลล์ [17] สนับสนุนสมมติฐานที่ว่าพืชและสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมมีกลไกคล้ายคลึงกัน

ด้วยการดูดซึมที่จำกัดของอาหารเสริม CoQ10 การกระตุ้นการสังเคราะห์ CoQ ภายนอกจึงเป็นจุดเน้นของการศึกษาหลายเรื่อง [1,9] การทำความเข้าใจว่า kaempferol ช่วยเพิ่มวิถีการสังเคราะห์ทางชีวสังเคราะห์ของ CoQ ได้อย่างไรนั้นมีความสำคัญอย่างยิ่ง เนื่องจากความสามารถในการเพิ่มเนื้อหา CoQ ภายนอกนั้นมีศักยภาพสูงที่จะแก้ไขข้อบกพร่องของ CoQ ที่เกี่ยวข้องกับการชราภาพหรือโรคภัยไข้เจ็บ นอกจากนี้ ผู้ป่วยยังสามารถพบประโยชน์เพิ่มเติม เนื่องจากการบริโภคฟลาโวนอยด์เป็นประจำนั้นสัมพันธ์กับการลดความเสี่ยงของโรคที่เกี่ยวข้องกับอายุดังที่อธิบายไว้ข้างต้น [24–26] แม้ว่าการดูดซึมของกระชายจะค่อนข้างต่ำ [29] การเพิ่มขึ้นของ CoQ inไตเซลล์สังเกตได้จากขนาดยาที่สามารถบรรลุได้ทางสรีรวิทยา โดยการเสริมทางปากหรือโดยการบริโภคอาหารที่มีฟลาโวนอยด์ [27] และแม้แต่สารตั้งต้น CoQ ในปริมาณเล็กน้อยเสริมก็สามารถย้ายฟลักซ์เมตาบอลิซึมเพื่อสนับสนุนการสังเคราะห์ CoQ ได้

จำเป็นต้องมีการวิจัยเพิ่มเติมเพื่อแสดงลักษณะเฉพาะของ kaempferol ว่าเป็นสารประกอบที่มีประสิทธิภาพสำหรับการรักษาภาวะขาด CoQ จำเป็นต้องมีการศึกษาในหลอดทดลองและในร่างกายเพิ่มเติมเพื่อให้เข้าใจถึงความสัมพันธ์ระหว่าง kaempferol และ CoQ อย่างเต็มที่ ค้นหาสูตรที่เหมาะสมที่สุดของสารประกอบออกฤทธิ์ทางชีวภาพ และระบุเอนไซม์ที่รับผิดชอบต่อการแตกแยกของเปอร์ออกซิเดชัน

4. วัสดุและวิธีการ

4.1. เคมีภัณฑ์และรีเอเจนต์

kaempferol ที่ไม่ได้ติดฉลากได้มาจาก Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Dallas, TX, USA); 13C6-4HB จาก Cambridge Isotope Laboratories, Inc. (ทูกส์เบอรี, แมสซาชูเซตส์, สหรัฐอเมริกา); และ 13C-kaempferol จาก Isolife (วาเกนนิงเงน เนเธอร์แลนด์) มาตรฐาน CoQ9 และ CoQ10 ได้มาจาก Sigma-Aldrich (San Luis, MO, USA) Dipropoxy-CoQ10 ถูกสังเคราะห์โดยพื้นฐานตามที่อธิบายโดย Edlund [30] สำหรับ diethoxy-Q10 ยกเว้น 1-propanol ถูกแทนที่ด้วยเอทานอลในขณะที่ยังคงรักษารีเอเจนต์และเงื่อนไขอื่นๆ 13C( Cambridge Isotope Laboratories, Inc., ทูกส์เบอรี, แมสซาชูเซตส์, สหรัฐอเมริกา) [18] ใบ (~1.5 กรัม) ถูกทำให้เป็นเนื้อเดียวกันโดยใช้เครื่องบดเนื้อเยื่อ Pyrex ในเมทานอล 5 × 900 ไมโครลิตร และสารสกัดถูกหมุนเหวี่ยงที่ 18,000× กรัม เป็นเวลา 10 นาที ส่วนลอยเหนือตะกอน (5 × ~800 ไมโครลิตร) ถูกรวมกลุ่มและผสมเข้ากับปริมาตรที่เท่ากันของ 2 โมลาร์ HCl และบ่มที่ 70 ◦ซ เป็นเวลา 40 นาทีเพื่อไฮโดรไลซ์คอนจูเกตของไกลโคซิล–แคมป์เฟอรอล ไฮโดรไลเสตอะลิควอต (200 ไมโครลิตร) ถูกผสมกับปริมาตรที่เท่ากันของ 100 เปอร์เซ็นต์เมทานอลและหมุนเหวี่ยงที่ 18,000× ก. เป็นเวลา 15 นาที ตัวอย่าง (แต่ละ 100 ไมโครลิตร) ถูกโครมาโตกราฟีบนคอลัมน์ Zorbax Eclipse Plus C18 (4.6 × 100 มม., 3.5 µm; Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) ที่ 30 ◦C โดยใช้การเริ่มการไล่ระดับสีเชิงเส้น 25- นาที จาก 10 mM แอมโมเนียมสร้าง pH 3.5 ถึง 100 เปอร์เซ็นต์เมทานอลที่อัตราการไหล 0.8 มล./นาที กระชาย (18.7 นาที) ถูกเก็บรวบรวมโดยการตรวจสอบการดูดกลืนแสงที่ 365 นาโนเมตร ระเหยจนแห้งด้วยก๊าซไนโตรเจน จากนั้นแขวนลอยใหม่ในเมทานอล 100 เปอร์เซ็นต์สำหรับการหาปริมาณโดยใช้ค่าสัมประสิทธิ์การสูญพันธุ์ของโมลาร์ที่ 21,242 M-1 ซม.-1 การวิเคราะห์ MS/MS ระบุว่ายาเตรียมประกอบด้วย ~10 เปอร์เซ็นต์ของ 13C ติดฉลาก kaempferol (M plus 6) และ ~90 เปอร์เซ็นต์ของ kaempferol ที่ไม่ติดฉลาก

4.2. เงื่อนไขการเพาะเลี้ยงเซลล์และการรักษา

หนูไตเซลล์เยื่อบุผิวท่อใกล้เคียง (TKPTS) [31] จัดทำโดย Dr. Elsa Bello-Reuss (Texas Tech University Health Science Center, Lubbock, TX, USA) และ Dr. Judit K. Magyesi (University of Arkansas for Medical Sciences, ลิตเติ้ลร็อค, AR, สหรัฐอเมริกา) เซลล์ TKPTS เติบโตใน DMEM/F12 ที่มีกลูโคส 4.5 กรัม/ลิตร และเสริมด้วยซีรัมของตัวอ่อนในครรภ์ 10 เปอร์เซ็นต์ (FBS), 2 mM L-glutamine และ gentamicin–amphotericin B (125 µg/mL และ 5 มก. /มล. ตามลำดับ) วัฒนธรรมถูกคงไว้ที่ 37 ◦C ในบรรยากาศที่มีความชื้นโดยมี CO2 5 เปอร์เซ็นต์ สำหรับการกำหนดหา CoQ เซลล์ถูกเพาะในเพลต 12-หลุมที่มีปริมาณเริ่มต้น 60000 เซลล์/หลุมและถูกบำบัดด้วยแคมป์เฟอรอล 5 ไมโครโมลาร์, 13C-kaempferol, 13C6-[B -ring]-kaempferol หรือ 1 µM 4HB เป็นเวลา 48 ชั่วโมง ในสิ่งพิมพ์ก่อนหน้านี้ที่เราอธิบาย kaempferol เป็นสารตั้งต้นของ CoQ แบบใหม่ ทำการทดลองด้วย 10 µM 13C-kaempferol [17] อย่างไรก็ตาม ปริมาณที่จำกัดของ 13C6-[B-ring]-kaempferol ที่มีอยู่ทำให้เราลดความเข้มข้นที่ใช้ลง แม้ว่าสภาวะจะยังอยู่ในช่วงที่รายงานว่า kaempferol เพิ่มปริมาณ CoQ [17] เอทานอลถูกเติมไปยังส่วนควบคุมในขณะที่ยานพาหนะถูกเก็บไว้ที่ต่ำกว่า 0.05 เปอร์เซ็นต์ของปริมาตรสุดท้าย เซลล์ถูกบ่มภายใต้สภาวะการเพาะเลี้ยงมาตรฐาน (37 ◦C, 5 เปอร์เซ็นต์ CO2) หลังจากเวลาที่กำหนด เซลล์จะถูกล้างสองครั้งด้วยน้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 1X (PBS) ซึ่งแยกออกจากเพลตเพาะเลี้ยงโดยใช้ทริปซิน-EDTA (Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) และอัดเป็นก้อนโดยการหมุนเหวี่ยงด้วยความเร็วต่ำ (ประมาณ 1,000 × กรัม) นำ supernatant ออกและเก็บเม็ดเซลล์ไว้ที่ -20 องศาจนกว่าจะใช้งาน

4.3. การสกัดไขมัน

เม็ดเซลล์ถูกแขวนลอยใหม่ใน 100 ไมโครลิตรของ 1X PBS ก่อนการสกัดไขมัน ส่วนของส่วนลิคอต 10 ไมโครลิตรถูกบันทึกเพื่อหาปริมาณความเข้มข้นของโปรตีนโดยใช้การสอบวิเคราะห์แบรดฟอร์ด [32] จากนั้น ไดโพรพอกซี-CoQ10 ถูกเติมไปยัง 90 ไมโครลิตรที่เหลือเป็นมาตรฐานภายใน เพื่อเริ่มต้นการสกัด เติมเมทานอลสองมิลลิลิตร สารแขวนลอยของเซลล์ถูกวอร์เท็กซ์และเติมปิโตรเลียม อีเทอร์สองมล. ชั้นปิโตรเลียมอีเทอร์ด้านบน (ที่มีลิปิดที่ไม่สามารถซาโพนิไฟได้ทั้งหมด ซึ่งรวมถึง CoQ) ถูกถ่ายโอนไปยังท่อที่สะอาด ปิโตรเลียมอีเทอร์อีกสองมิลลิลิตรถูกเติมลงในชั้นเมทานอลดั้งเดิม และตัวอย่างถูกวอร์เท็กซ์อีกครั้ง ชั้นบนสุดถูกกำจัดออก รวมกับชั้นก่อนหน้า และวัฏภาคอินทรีย์ที่รวมกันถูกทำให้แห้งภายใต้กระแสของก๊าซไนโตรเจน ชุดของมาตรฐาน CoQ9 และ CoQ10 ที่มีไอโซโพรพอกซี-CoQ10 ถูกเตรียมและสกัดไขมันพร้อมกันกับตัวอย่างเซลล์เพื่อสร้างเส้นโค้งมาตรฐาน CoQ9 และ CoQ10

4.4. การวิเคราะห์ CoQ

ปริมาณ CoQ9 และ CoQ10 ที่ปิดฉลากและไม่มีฉลากจากสารสกัดไขมันถูกวิเคราะห์โดยใช้ HPLC-MS/MS ตามที่บรรยายไว้ก่อนหน้านี้ [17] โดยย่อ ตัวอย่างถูกแขวนลอยใหม่ใน 200 ไมโครลิตรของเอทานอลที่มีเบนโซควิโนน 1 มิลลิกรัม/มิลลิลิตรเพื่อออกซิไดซ์ไขมันทั้งหมดก่อนการวิเคราะห์ ใช้สเปกโตรมิเตอร์ MS/MS เชิงเส้น 4000 QTRAP จาก Applied Biosystems (ฟอสเตอร์ซิตี, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) ซอฟต์แวร์ Applied Biosystem นักวิเคราะห์เวอร์ชัน 1.4.2 ถูกใช้สำหรับการเก็บข้อมูลและการประมวลผล การแยกโครมาโตกราฟีดำเนินการบนคอลัมน์ Luna 5 µm PFP(2) 100A (100 × 4.6 มม., 5 µm; Phenomenex, Torrance, CA, USA) โดยใช้เฟสเคลื่อนที่ที่ประกอบด้วยตัวทำละลาย A 90 เปอร์เซ็นต์ (ของผสม 95:5 ของเมทานอล: ไอโซโพรพานอลที่มีรูปแบบแอมโมเนียม 2.5 มิลลิโมลาร์) และตัวทำละลายบี 10 เปอร์เซ็นต์ (ไอโซโพรพานอลที่มีรูปแบบแอมโมเนียม 2.5 มิลลิโมลาร์) ที่อัตราการไหลคงที่ 1 มล./นาที ตัวอย่างทั้งหมดถูกวิเคราะห์ในโหมดการเฝ้าติดตามปฏิกิริยาหลายแบบ ช่วงการเปลี่ยนภาพที่ใช้คือ: m/z 795.6/197.08 (CoQ9 plus H), m/z 812.6/197.08 (CoQ9 plus NH3), m/z 801.6/203.08 (13C-CoQ9 plus H), m/z 818.6/203.08 (13C -CoQ9 plus NH3), m/z 863.6/197.08 (CoQ10 plus H), m/z 880.6/197.08 (CoQ10 plus NH3), m/z 869.6/203.08 (13C -CoQ10 plus H), m/z 886.6/203.08 (13C-CoQ10 plus NH3), m/z 919.7/253.1 (dipropoxy-CoQ10 plus H),m/z 936.7/253.1 (dipropoxy-CoQ10 plus NH3) พื้นที่ของแต่ละพีค ถูกทำให้เป็นมาตรฐานด้วยเส้นโค้งมาตรฐานที่สอดคล้องกันและมาตรฐานภายใน ถูกอ้างถึงเป็นปริมาณโปรตีนตั้งต้น

4.5. การวิเคราะห์ทางสถิติ

ข้อมูลที่แสดงในงานนี้แสดงถึงค่าเฉลี่ย±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD) วิเคราะห์สถิติและกราฟิกด้วย Graphpad Prism 8 (Graphpad Software Inc., San Diego, CA, USA) ความแตกต่างในเนื้อหา CoQ เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมถูกวิเคราะห์โดยใช้ ANOVA ทางเดียวที่เป็นพารามิเตอร์ การแก้ไขสำหรับการเปรียบเทียบหลายรายการกับหลังการทดสอบของ Dunnett ความแตกต่างที่มีนัยสำคัญเรียกว่า * p < 0.05,="" **="" p="">< 0.01,="" ***="" p="">< 0.001="" และ="" ****="" พี=""><>

5. สรุปผลการวิจัย

ผลลัพธ์ของเราแสดงให้เห็นว่าเซลล์ไตสามารถตัด B-ring ของ flavonol kaempferol ในอาหารเพื่อผลิตสารตั้งต้นของวงแหวนที่มีศักยภาพในการสังเคราะห์ CoQ ได้ ซึ่งน่าจะเป็น 4HB เมแทบอลิซึมของ kaempferol ช่วยเพิ่มการสังเคราะห์ CoQ และเพิ่มปริมาณ CoQ ความสามารถของ kaempferol นี้อาจใช้ในการออกแบบผลิตภัณฑ์เสริมอาหารที่มีประสิทธิภาพมากขึ้นเพื่อบรรเทาอาการขาด CoQ ในวัยและโรค จำเป็นต้องมีการศึกษาทางสรีรวิทยาเพิ่มเติมเพื่อยืนยันประสิทธิภาพของการเสริม kaempferol เพื่อกระตุ้นการสังเคราะห์ทางชีวเคมีของ ubiquinone ในระดับสิ่งมีชีวิตทั้งหมด

ผลงานของผู้เขียน:แนวความคิด, LF-d.-R., ES, GJB และ CFC; วิธีการ, LF-d.-R., ES, GJB และ CFC; ซอฟต์แวร์ LF-d.-R.; การตรวจสอบความถูกต้อง, LF-d.-R., ES, GJB และ CFC; การวิเคราะห์อย่างเป็นทางการ LF-d.-R.; การสอบสวน, LF-d.-R. และ ES; ทรัพยากร, LF-d.-R., ES, GJB และ CFC; การจัดการข้อมูล, LF-d.-R., ES, GJB และ CFC; การเขียน—การเตรียมร่างต้นฉบับ LF-d.-R.; การเขียน—ทบทวนและแก้ไข, LF-d.-R., GJB และ CFC; การสร้างภาพ, LF-d.-R., ES, GJB และ CFC; การกำกับดูแล GJB และ CFC; การบริหารโครงการ GJB และ CFC; การจัดหาเงินทุน GJB และ CFC ผู้เขียนทุกคนได้อ่านและตกลงที่จะเผยแพร่ต้นฉบับของต้นฉบับ

เงินทุน:งานนี้ได้รับการสนับสนุนโดย National Science Foundation Grant MCB-1330803 (CFC) และ MCB-1712608 (GJB)

รับทราบ:ขอขอบคุณ Anish Nag สำหรับการสังเคราะห์ไดโพรพอกซี-CoQ10 Elsa Bello-Reuss (Texas Tech University Health Science Center, Lubbock, TX, USA) และ Judit K. Magyesi (University of Arkansas for Medical Sciences, Little Rock, AR, USA) ได้มอบเมาส์ให้ไตเซลล์เยื่อบุผิวท่อใกล้เคียง (TKPTS) เราขอขอบคุณ Jorge Torres ที่ช่วยอำนวยความสะดวกในการเพาะเลี้ยงเซลล์ เราขอขอบคุณสิ่งอำนวยความสะดวกด้านโปรตีโอมิกส์แกนกลางของเครื่องมือวัดระดับโมเลกุลของ UCLA Yu Chen สำหรับการใช้ QTRAP4000 สำหรับการวิเคราะห์ไขมัน และ Anna Block ที่ USDA-ARS-CMAVE สำหรับการวิเคราะห์ MS/MS

ผลประโยชน์ทับซ้อน: ผู้เขียนประกาศไม่มีความขัดแย้งทางผลประโยชน์

---Journal Molecules (บาเซิล สวิตเซอร์แลนด์), 25(13) ISSN 1420-3049 ผู้แต่ง : Fernández-Del-Río et al.
ดอย 10.3390/โมเลกุล25132955

อ้างอิง

1. วัง Y.; Hekimi, S. ความซับซ้อนของการทำ ubiquinone เทรนด์เอนโดครินอล เมตาบ 2019, 30, 923–943.[ข้ามอ้างอิง] [PubMed]

2. อวาด AM; แบรดลีย์ เอ็มซี; เฟอร์นันเดซ-เดล-ริโอ, L.; นาก, A.; จุ่ย, เอช.; Clarke, CF Coenzyme Q10 บกพร่อง: เส้นทางในยีสต์และมนุษย์ เรียงความ Biochem. 2018, 62, 361–376. [CrossRef] [PubMed]

3. Gutierrez-Mariscal, FM; ยูเบโร-เซอร์ราโน EM; วิลลาลบา เจเอ็ม; Lopez-Miranda, J. Coenzyme Q10: จากม้านั่งสู่คลินิกในโรคชรา, การทบทวนการแปล คริติคอล รายได้วิทยาศาสตร์อาหาร. Nutr. 2018, 59, 2240–2257. [CrossRef] [PubMed]

4. เบนทิงเจอร์, ม.; Tekle, ม.; Dallner, G. Coenzyme Q- การสังเคราะห์ทางชีวภาพและหน้าที่ ไบโอเคมี. ชีวฟิสิกส์ ความละเอียด คอมมูนิตี้ 2010, 396, 74–79. [ข้ามอ้างอิง]

5. Stefely, JA; Pagliarini ดีเจชีวเคมีของการสังเคราะห์โคเอ็นไซม์คิวของไมโตคอนเดรีย เทรนด์ไบโอเคม วิทย์. 2017, 42, 824–843. [ข้ามอ้างอิง]

6. ดิแอซ-คาซาโด เมน; คิลส์ เจแอล; Barriocanal-Casado, E.; กอนซาเลซ-การ์เซีย, พี.; บัตติโน, ม.; โลเปซ LC; Varela-Lopez, A. ความขัดแย้งของโคเอ็นไซม์ Q10 ในการแก่ชรา สารอาหาร 2019, 11, 2221. [CrossRef]

7. เบนทิงเจอร์, ม.; Brismar, K.; Dallner, G. บทบาทของสารต้านอนุมูลอิสระของโคเอ็นไซม์ q. ไมโตคอนเดรีย 2007, 7, S41–S50.[CrossRef]

8. บาร์เซโล, IP; Haas, RH CoQ10 และอายุ ชีววิทยา (บาเซิล) 2019, 8, 28. [CrossRef]

9. เอร์นานเดซ-กามาโช, เจดี; เบอร์เนียร์, ม.; López-Lluch, G.; นวัส พี.โคเอ็นไซม์ คิวเท็น อาหารเสริมในวัยชราและโรค. ด้านหน้า. ฟิสิออล 2018, 9, 1–11. [ข้ามอ้างอิง]

10. Kalen, A.; Appelkvist, เอล; Dallner, G. การเปลี่ยนแปลงที่เกี่ยวข้องกับอายุในองค์ประกอบไขมันของหนูและเนื้อเยื่อของมนุษย์ ไขมัน 1989, 24, 579–584. [ข้ามอ้างอิง]

11. Varela-López, A.; Giampieri, F.; บัตติโน, ม.; Quiles, J. Coenzyme Q และบทบาทในการบำบัดด้วยอาหารเพื่อต่อต้านวัย โมเลกุล 2016, 21, 373. [CrossRef] [PubMed]

12. แฟน, แอล.; เฟิง, วาย.; เฉิน GC; ฉิน LQ; ฟู ซีแอล; Chen, LH ผลของการเสริมโคเอ็นไซม์ Q10 ต่อเครื่องหมายการอักเสบ: การทบทวนอย่างเป็นระบบและการวิเคราะห์อภิมานของการทดลองแบบสุ่มที่มีกลุ่มควบคุม ฟา. ความละเอียด 2017, 119, 128–136. [CrossRef] [PubMed]

13. ไจ เจ.; เด็กผู้ชาย.; ลู, วาย.; หลิว, C.; Zhang, L. ผลของโคเอ็นไซม์ Q10 ต่อเครื่องหมายของการอักเสบ: การทบทวนอย่างเป็นระบบและการวิเคราะห์เมตา โปรดหนึ่ง 2017, 12, e0170172. [CrossRef] [PubMed]

14. ชาร์มา A.; โฟนาโรว์ GC; บัตเลอร์ เจ.; เอเซโควิทซ์, JA; Felker, GM Coenzyme Q10 และภาวะหัวใจล้มเหลว: การทบทวนที่ล้ำสมัย เซอร์ หัวใจล้มเหลว 2016, 9, e002639. [ข้ามอ้างอิง]

15. ลี เจเอส; ซอ เจดับบลิว; คิม อีเอส; Lee, HG การเตรียมและการกำหนดลักษณะพิเศษของอนุภาคนาโนที่เป็นเยื่อเมือกเพื่อเพิ่มการดูดซึมโคเอ็นไซม์ Q10 ในระดับเซลล์ เจ. อากริก. เคมีอาหาร. 2017, 65, 8930–8937. [ข้ามอ้างอิง]

16. Lopez-Lluch, G.; เดล โปโซ-ครูซ เจ.; Sanchez-Cuesta, A.; คอร์เตส-โรดริเกซ, เอบี; Navas, P. การดูดซึมของอาหารเสริมโคเอ็นไซม์ Q10 ขึ้นอยู่กับไขมันของพาหะและการละลาย โภชนาการ 2018, 57, 133–140.[CrossRef]

17. เฟอร์นันเดซ-เดล-ริโอ แอล.; นาก, A.; Gutierrez Casado, E.; อาริซา เจ.; อวัด, น.; โจเซฟ เอไอ; ควอน, อ.; Verdin, E.; เดอคาโบ, R.; ชไนเดอร์, C.; และคณะ กระชายจะเพิ่มระดับของโคเอ็นไซม์คิวในเซลล์ไตและทำหน้าที่เป็นสารตั้งต้นของวงแหวนสังเคราะห์ทางชีวภาพ ฟรี Radic ไบโอล. เมดิ. 2017, 110, 176–187. [ข้ามอ้างอิง]

18. Soubeyrand, E.; จอห์นสัน TS; Latimer, S.; บล็อก A.; คิม, เจ.; โคลคูฮูน, TA; Butelli, อี.; มาร์ติน ซี.; วิลสัน แมสซาชูเซตส์; Basset, G. ความแตกแยกของ peroxidative ของ kaempferol มีส่วนช่วยในการสังเคราะห์ทางชีวเคมีของ benzenoid moiety ของ ubiquinone ในพืช ปลูก. เซลล์ 2018, 30, 2910–2921. [ข้ามอ้างอิง]

19. Kreuzaler, F.; Hahlbrock, K. การสังเคราะห์ด้วยเอนไซม์ของสารประกอบอะโรมาติกในพืชชั้นสูง: การก่อตัวของ naringenin (5,7,4-trihydroxyflavanone) จาก p-coumaroyl coenzyme a และ malonyl coenzyme a FEBS เลตต์ 2515, 28, 69–72. [ข้ามอ้างอิง]

20. เชินโบม, ค.; มาร์เทนส์, เอส.; เอเดอร์, ซี.; Forkmann, G.; Weisshaar, B. การระบุยีน Arabidopsis thaliana flavonoid 3'-hydroxylase และการแสดงออกทางหน้าที่ของเอนไซม์ p450 ที่เข้ารหัส ไบโอล. เคมี. 2000, 381, 749–753. [ข้ามอ้างอิง]

21. Xie, แอลเอ็กซ์; วิลเลียมส์ เคเจ; เขา CH; เวงอี.; ก้อง ส.; โรส, TE; ควอน, อ.; เบนซิงเกอร์, เอสเจ; มาร์บัวส์ BN; Clarke, CF Resveratrol และ para-coumarate ทำหน้าที่เป็นสารตั้งต้นของวงแหวนสำหรับการสังเคราะห์โคเอ็นไซม์คิว เจ. ลิปิด เรส. 2015, 56, 909–919. [CrossRef] [PubMed]

22. คาลเดรอน-มอนตาโน เจเอ็ม; บูร์โกส-โมรอน อี.; เปเรซ-เกร์เรโร, C.; Lopez-Lazaro, M. บทวิจารณ์เกี่ยวกับอาหาร flavonoid kaempferol มินิ Rev. Med. เคมี. 2011, 11, 298–344. [CrossRef] [PubMed]

23. เทพ KP; มาลา, DS; นาบาวี เอสเอฟ; สุรดา, ก.; เซียวเจ .; นาบาวี เอสเอ็ม; Dahlia, M. Kaempferol และการอักเสบ: จากเคมีสู่ยา Pharmacol Res. 2015, 99, 1–10. [CrossRef] [PubMed]

24. เร็น เจ.; ลู, วาย.; เฉียน Y.; เฉิน, บี.; วู, ต.; Ji, G. ความคืบหน้าล่าสุดเกี่ยวกับ kaempferol สำหรับการรักษาโรคต่างๆ. ประสบการณ์ เธอ. เมดิ. 2019, 18, 2759–2776. [CrossRef] [PubMed]

25. อิมราน, เอ็ม.; Salehi, B.; ชาริฟี-ราด เจ.; Aslam Gondal, ต.; ซาอีด, เอฟ.; อิมราน อ.; Shahbaz, ม.; Tsouh Fokou, PV; Umair Arshad, M.; ข่านเอช.; และคณะ กระชาย: กุญแจสำคัญที่เน้นศักยภาพในการต้านมะเร็ง โมเลกุล 2019,24, 2277. [CrossRef]

26. อิมราน, ม.; Rauf, A.; ชาห์ ZA; ซาอีด, เอฟ.; อิมราน อ.; อาร์ชาด มิวเซียม; อาหมัด, บี.; Bawazeer, S.; Atif, ม.; ปีเตอร์ส ดีจี; และคณะ ผลของเคมีป้องกันและการรักษาของฟลาโวนอยด์ kaempferol ในอาหาร: การทบทวนอย่างครอบคลุม Phytother Res. 2019, 33, 263–275. [ข้ามอ้างอิง]

27. Kozlowska, A.; Szostak-Wegierek, D. Flavonoids–แหล่งอาหารและประโยชน์ต่อสุขภาพ รอซ. พันตรี. แซกล์ สูง 2014, 65, 79–85.

28. Kursvietiene, L.; Stanevicene, I.; Mongirdiene, A.; Bernatoniene, J. ผลกระทบมากมายและประโยชน์ต่อสุขภาพของ resveratrol แพทยศาสตร์ (เคานัส) 2016, 52, 148–155. [ข้ามอ้างอิง]

29. ซาเบลา, วี.; สมพาธ, ค.; อูเฟอร์, ม.; โมราดี-อัฟราโปลี, F.; บัตเตอร์เวค, วี.; Hamburger, M. เภสัชจลนศาสตร์ของ kaempferol ในอาหารและสารเมตาโบไลท์ 4- กรดไฮดรอกซีฟีนิลอะซิติกในหนูแรท Fitoterapia 2016, 115, 189–197. [ข้ามอ้างอิง]

30. Edlund, PO การหาค่าโคเอ็นไซม์ Q10 อัลฟาโทโคฟีรอล และโคเลสเตอรอลในตัวอย่างทางชีววิทยาโดยโครมาโตกราฟีของเหลวแบบคอลัมน์คู่พร้อมการตรวจจับคูลอมเมตริกและอัลตราไวโอเลต เจ. โครมาโตกร์. บี ไบโอเมด. วิทย์. แอปพลิเคชัน 2531, 425, 87–97. [ข้ามอ้างอิง]

31. เออร์เนสต์ เอส.; Bello-Reuss, E. การแสดงออกและหน้าที่ของ p-glycoprotein ในเซลล์ไตของหนูเมาส์ เป็น. เจ. ฟิสิออล. 1995, 269, C323–C333 [CrossRef] [PubMed]

32. Stoscheck, CM การหาปริมาณโปรตีน วิธีการ เอนไซม์. 1990, 182, 50–68. [CrossRef] [PubMed] ความพร้อมใช้งานของตัวอย่าง: ไม่พร้อมใช้งาน