กิจกรรมการลดสีของเมลานินของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระ, กลูตาไธโอนเพอรอกซิเดส, ไทออลเพอรอกซิเดส และคาตาเลส

ติดต่อ:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

คยองชานจอน¹· ชินฮาน คิม²· สหราชอาณาจักรมินโช²· อีแทกฮวัง³· ฮยองซอฮวัง⁴· จีโฮมิน¹

นามธรรม

เมลานินเป็นปัจจัยที่สําคัญที่สุดในการกําหนดสีผิว ความพยายามในการวิจัยจํานวนมากกําลังดําเนินการเพื่อย่อยสลายสารประกอบเมลานินที่ผลิตแล้วในผิวหนังเพื่อความงาม งานวิจัยนี้ตรวจสอบผลในการลดสีเมลานินของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระทั้งสามชนิด ได้แก่ กลูตาไธโอนเพอร์ออกซิเดส (GPX), ไทออลเพอรอกซิเดส (TPX) และคาตาเลสในเศษส่วนไลโซโซม สารละลายเมลานินได้รับการรักษาด้วยเอนไซม์และไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์จากนั้นทําปฏิกิริยากับเมลานินที่เปลี่ยนสี.GPXได้ 48 ชั่วโมงและ TPX และระหว่างนั้น GPX มีประสิทธิภาพมากกว่า แต่คาตาเลสไม่ได้ผล GPX ยังยับยั้งการผลิตเมลานินในเซลล์เนื้องอก B16F10 GPX ซึ่งมีอยู่ในจุลินทรีย์เกือบทั้งหมดมีบทบาทสําคัญในกลไกการป้องกันเซลล์โดยสายพันธุ์ออกซิเจนที่ทําปฏิกิริยา นอกจากนี้ยังไม่เป็นพิษต่อเซลล์ แต่มีประสิทธิภาพในการเปลี่ยนสีเมลานินอย่างมีนัยสําคัญ ดังนั้นในด้านชีวภาพและจุลชีววิทยาความเป็นไปได้ของการใช้ประโยชน์ในเครื่องสําอางฟอกสีผิวจึงสูง

คําสําคัญ เมลานิน · กลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส (GPX) · ไทออลเพอรอกซิเดส (TPX) · คาตาเลส · $$ บี16F10 · ไลโซโซม

Cistanche เป็นส่วนผสมที่ทําให้ผิวขาวกระจ่างใส

แนะ นำ

ใบหน้าที่สะอาดเป็นหนึ่งในองค์ประกอบสําคัญของความงามสําหรับคนสมัยใหม่โดยเฉพาะชาวเอเชียที่มีความกระตือรือร้นเกี่ยวกับผิวขาว สารประกอบเมลานินเป็นปัจจัยที่สําคัญที่สุดในการกําหนดสีผิว มันแตกต่างจากยูเมลานินที่มีสีดําหรือสีน้ําตาลและฟีโอเมลานินซึ่งส่งผลให้เป็นสีชมพูถึงสีแดง [1] สารประกอบเมลานินเป็น syn- thesized โดยการเกิดออกซิเดชันไทโรซีนในเซลล์เมลาโนไซต์, ซึ่งพบในชั้นฐานของหนังกําพร้า; และบทบาทหลักของเม็ดสีนี้ในผิวหนังคือการปกป้องผิวหนังชั้นหนังแท้โดยการปิดกั้นรังสีอัลตราไวโอเลตที่เป็นอันตราย [2, 3] อย่างไรก็ตามหากมีสารประกอบเมลานินมากเกินไปในผิวหนังจะทําให้ผิวคล้ําและไม่สะอาดและอาจทําให้เกิดรอยดําเช่นฝ้า [4]

มีการศึกษามากมายที่เกี่ยวข้องกับการดูแลผิว cos- metics ที่แก้ปัญหาเหล่านี้, แต่ส่วนใหญ่ของการพัฒนาเครื่องสําอางฟอกสีผิวในปัจจุบันมีหน้าที่ในการยับยั้งการสังเคราะห์เมลานินผ่านกลไกต่างๆ, เช่นการปิดกั้นการเกิดออกซิเดชันของไทโรซีน, หรือรังสียูวีที่สามารถส่งเสริมการสังเคราะห์เมลานิน [5]. ผลิตภัณฑ์เหล่านี้ใช้เวลานานจึงจะมีประสิทธิภาพ และไม่ได้ผลสําหรับอาการเฉพาะ เช่น รอยดํา [6] ในปัจจุบันวิธีการทั่วไปในการกําจัดเมลานินที่ทําไปแล้วคือการรักษาด้วยเลเซอร์ [7] หากวัสดุที่สามารถแก้ไขได้ ปัญหาเหล่านี้โดยไม่มีขั้นตอนดังกล่าวได้รับการพัฒนา พวกเขาจะมีประโยชน์อย่างมากในด้านชีวภาพและเครื่องสําอาง สนาม

ในการวิจัยก่อนหน้านี้เราพยายามหาวิธีที่จะลดสี - ize สารประกอบเมลานินที่ผลิตแล้ว มี ได้รับรายงานการวิจัยเกี่ยวกับความสัมพันธ์ของไลโซโซมและเมลานิน มีโอกาสมากที่เคราติโนไซต์ที่แตกต่าง โดยเฉพาะอย่างยิ่งลดทอนเมลาโนโซมภายนอกแอคคอร์ด- ing เพื่อเรียงลําดับของฟังก์ชั่น autophagy พื้นฐานที่ควบคุม ปริมาณของออร์แกเนลล์เซลล์หรือลบข้อบกพร่องออก ออร์แกเนลล์ เช่น เพอรอกซิโซม [8] เส้นทางอัตโนมัติ- วิธีตั้งแต่ไซโตพลาสซึมไปจนถึงไลโซโซมมีบทบาทสําคัญ ในการย่อยสลายของเมลาโนโซมในผิวหนังชั้นนอกของมนุษย์ เคราตินไซต์ [9] ข้อมูลเหล่านี้ให้หลักฐานว่าเอนไซม์เฉพาะของไลโซโซมมีส่วนทําให้เกิดการย่อยสลายเมลานิน ก่อนหน้านี้เราพบกิจกรรมการลดสีของเมลานิน ของเอนไซม์ในเศษส่วนไลโซโซมซึ่งเป็นคอมเพล็กซ์ที่มี ไฮโดรไลเสตเพื่อสลายวัสดุเหลือใช้และเซลล์ เศษซากในเพอรอกซิโซมและไลโซโซม [10, 11] บทความนี้ ศึกษาผลของเอนไซม์ที่เลือกสามชนิด ได้แก่ กลูตาไธโอนเพอรอกซิเดสไทออลเพอร์ออกซิเดสคาตาเลสในเศษส่วนไลโซโซมเพื่อลดสีเมลานิน เพอรอกซิดาสเหล่านี้ ทําหน้าที่ป้องกันความเสียหายของเซลล์ที่เกิดจากสายพันธุ์ออกซิเจนปฏิกิริยา (ROS) และมีอยู่ในยูคาริโอตทั้งหมด [12]

สายพันธุ์ออกซิเจนปฏิกิริยา (ROS) เกิดขึ้นตามธรรมชาติ ผลพลอยได้จากการเผาผลาญปกติของออกซิเจนในเซลล์ และสามารถเพิ่มขึ้นได้จากความเครียดจากสิ่งแวดล้อม ROS ที่สร้างขึ้นสูงสามารถทําลายเซลล์ได้ ผลกระทบที่เป็นอันตรายของ ROS ในเซลล์มีดังนี้ [12, 13]: ความเสียหายของดีเอ็นเอหรือ RNA, ออกซิเดชันของกรดไขมันไม่อิ่มตัวในไขมัน, ออกซิเดชันของกรดอะมิโนในโปรตีนและการปิดใช้งานออกซิเดชันของเอนไซม์เฉพาะโดยการเกิดออกซิเดชันของปัจจัยร่วม เซลล์ต่อต้าน ROS โดยระบบต้านอนุมูลอิสระเพื่อ ป้องกันความเสียหายของเนื้อเยื่อดังกล่าว ในระบบนี้ซูเปอร์ออกไซด์ ไอออนที่ผลิตโดยการเผาผลาญอาหารนั้นทําลายล้างอย่างมาก แม้ว่าจะถูกแปลงเป็นไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์โดยซูเปอร์ออกไซด์ดิสมิวเทส (SOD) แต่ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ก็ยังคงอยู่ ปฏิกิริยา ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์จะถูกเปลี่ยนเป็น H2O โดย คาตาเลสและบริโภคในการผลิตกลูตาไธโอน ไดซัลไฟด์ (GSSG) จากกลูตาไธโอนโดยการเร่งปฏิกิริยาของ จีพีเอ็กซ์. TPX ทํางานคล้ายกับ GPX [13]

การศึกษานี้วิจัยผลการลดสีเมลานิน ของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระสามชนิด ได้แก่ GPX, TPX และคาตาเลส เป็น ส่งผลให้ GPX และ TPX มีประสิทธิภาพในการลดสีเมลานิน ในหมู่พวกเขา GPX ไม่มีพิษต่อเซลล์ที่ ความเข้มข้นที่เหมาะสมของกิจกรรมการลดสีเมลานิน และยับยั้งการสังเคราะห์เมลานินได้อย่างมีประสิทธิภาพ ดังนั้นมันจึง แสดงหลักฐานว่า GPX มีบทบาทสําคัญในการ กลไกของการเกิดเกล็ดเมลานินของเศษส่วนไลโซโซมไม่เพียง แต่มีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระเท่านั้นและมีศักยภาพ ของสารเครื่องสําอางไวท์เทนนิ่งใหม่เป็นเอนไซม์เดี่ยว

วัสดุและวิธีการ

การทดสอบกิจกรรม Peroxidases และ Peroxidase

ความเข้มข้นของ peroxidases ทั้งสาม (กลูตาไธโอนเพอรอกซิเดส, ไทออลเพอรอกซิเดส, และคาตาเลส) ถูกกําหนดโดย ชุดทดสอบ (ชุดทดสอบ Peroxidase, D2PD-100, QuantiChromTM) ซื้อจากระบบไบโอแอสเซย์ กลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส 2 (GPX2, NBP1-78,824, Novus) และไทออลเพอรอกซิเดส (TPX, NBP1-78,805, Novus) ถูกซื้อจากโนวัสและ คาตาเลส (9001-05-2, ซิกม่า-อัลดริช) ถูกซื้อมาจาก ซิกม่า-อัลดริช. ...

ชุดทดสอบนี้ใช้ H2O2 และสีย้อมผู้บริจาคอิเล็กตรอนที่ รูปแบบ resorufin ในช่วง peroxidase การทดสอบจะดําเนินการที่อุณหภูมิห้อง (RT) และความเข้มของ วัดสีได้ที่ 570 นาโนเมตร เพรอกซิดาสถูกทําปฏิกิริยา ด้วยสีย้อมผู้บริจาคอิเล็กตรอนด้วยไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 0.6% เป็นเวลา 10 นาทีที่ RT หลังจากปฏิกิริยาปฏิกิริยารีเอเจนต์หยุดถูกเพิ่มเข้ามา และการดูดซับของตัวอย่างถูกวัดโดยไมโครเพลทสเปกโตรโฟโตเมตรี กิจกรรมถูกคํานวณดังนี้:

กิจกรรมเพรอกซิเดส = RSAMPLE −RBLANK × [เรโซรูฟิน](μM) × ปฏิกิริยา Vol(μL)RRESORUFIN −RH2 O t(min) ตัวอย่าง Vol(μL)

(U/L) เอนไซม์หนึ่งหน่วย (U) จะเร่งการก่อตัว ของ 1 μmole resorufin ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ ที่นี่ RSAMPLE, RBLANK, RRESORUFIN และ RH2O เป็นความพร้อมของตัวอย่างตัวอย่างเปล่า Resorufin และน้ําตามลําดับ และ n เป็นปัจจัยการเจือจางตัวอย่าง การ [Resorufin] สําหรับการทดสอบนี้คือ 50 μM ปริมาณปฏิกิริยาคือ 100 μL และตัวอย่าง Vol ในการศึกษานี้คือ 10 μL

เมลานิน Decolorization โดยกลูตาไธโอน Peroxidase (GPX), ไทออล เพอรอกซิเดส (TPX) และคาตาเลส

สารละลายเมลานินประกอบด้วย PBS 0.1 mM (น้ําเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์, pH: 7.0) และผงเมลานิน (สังเคราะห์, ซิกม่า) ที่ถูกเตรียมโดยการเกิดออกซิเดชันของไทโรซีนกับ ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ วัดปริมาณเมลานิน โดยการดูดซับที่ 450 นาโนเมตร ในการกําหนดความเข้มข้นของเมลานินเส้นโค้งมาตรฐานถูกจัดทําขึ้นจากของแท้ มาตรฐานของเมลานินสังเคราะห์ (R2 = 0.999 ไม่แสดงข้อมูล)

ในการตรวจสอบการเปลี่ยนสีเมลานินเมลานิน 100 ppm เมลานิน สารละลายที่มี (50 ถึง 1000) μU/L Peroxidases (GPX, TPX, Catalase) ที่มีไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 1 mM ถูกทําปฏิกิริยา ที่ RT และวัดผลทุกวัน ค่าการลดสีเมลานิน ถูกกําหนดโดยการลบความเข้มข้นของเมลานิน หลังจากปฏิกิริยาจากค่าเริ่มต้น

Cistanche ยับยั้งการสังเคราะห์เมลานิน

การเพาะเลี้ยงเซลล์

เซลล์เนื้องอกของหนู B16F10 (KCLB 80008) ถูก ซื้อจากธนาคารสายเซลล์เกาหลี (KCLB, โซล, เกาหลี). เซลล์ถูกเพาะเลี้ยงในสื่อนกอินทรีดัดแปลง (DMEM) ของ Dulbecco ที่มีกลูโคส 4500 มก. / ลิตร l-กลูตามีน 4 mM, โซเดียมไพรูเวต 1 mM ซึ่งก็คือ เพิ่มเซรั่มวัวของทารกในครรภ์ 10%(FBS), HEPES 20 mM, 1% เพนิซิลลินและเซลล์ถูกบ่มด้วยความชื้น สภาพที่มี CO2 5% ที่ 37 °C สื่อคือ แลกเปลี่ยนทุก 2 วัน (d) และเซลล์ถูกเก็บเกี่ยวโดย ใช้โซลูชันทริปซิน/EDTA

การทดสอบความมีชีวิตของเซลล์ (การทดสอบ MTT)

พิษของกลูตาไธโอน peroxidase ใน B16F10 mela- เซลล์ noma ได้รับการยืนยันโดยการทดสอบ MTT ซึ่งเป็นวิธีการทั่วไป ใช้เพื่อกําหนดผลของตัวอย่างต่อความมีชีวิต ของเซลล์สมัครพรรคพวก การทดสอบนี้ใช้ 3-(4,5-ไดเมทิล-ไทอาโซล- 2-yl)-2,5-ไดฟีนิลเตตระโซเลียมโบรไมด์ (MTT) ที่สามารถเป็นได้ ลดลงเป็น formazan โดยเอนไซม์ไมโตคอนเดรียในทํางานได้ เซลล์ เซลล์ 3 × 103 เซลล์ถูกเพาะต่อหลุมใน 96 หลุม จานและบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมง จากนั้นตัวอย่างถูกเพิ่มไปยัง แต่ละหลุมและบ่มเพาะเป็นเวลา 72 ชั่วโมง หลังจากนั้นสื่อ ถูกแลกเปลี่ยนเป็นหนึ่งที่มี 0.5 mg / mL ของ MTT และ บ่มเป็นเวลา 2 ชั่วโมง ถัดไปน้ํายาย้อมสี MTT ถูกถอดออก และ formazan ที่สร้างขึ้นถูกละลายโดย DMSO สําหรับ 30 นาที ในที่สุดความเข้มข้นของ formazan คือ วัดที่ 570 นาโนเมตรโดยใช้ไมโครเพลทสเปกโตรโฟโตเมตรี ความมีชีวิตของเซลล์ถูกคํานวณดังนี้: ความมีชีวิตของเซลล์(%) = (ตัวอย่าง - Ablank)/(Acontrol − Ablank)*100

cistanche ในภาษาฮินดี

การทดสอบเนื้อหาเมลานิน

เซลล์ 3 × 105 B16F10 ถูกเพาะต่อหลุมในแผ่น 6 หลุมและบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงเพื่อยึดติด ตัวกลางของแต่ละหลุมถูกแลกเปลี่ยนกับหลุมที่มีความเข้มข้นของเอนไซม์ต่าง ๆ และ 10 nM α-MSH จากนั้นบ่มเป็นเวลา 72 ชั่วโมง หลังจากนั้นหลุมทั้งหมดถูกล้างด้วยบัฟเฟอร์ DPBS และเก็บเกี่ยวโดยใช้สารละลายทริปซิน / EDTA 0.5% เม็ดของเซลล์ที่ได้จากการหมุนเหวี่ยงถูก lysed กับ 200 μL ของ 1 N NaOH ที่มี 10% DMSO เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 80 °C ในที่สุดปริมาณเมลานินไลซ์ไลซ์ก็วัดโดยการดูดซับที่ 450 นาโนเมตร ประสิทธิภาพการยับยั้งการผลิตเมลานินของเอนไซม์ถูกกําหนดโดยเปรียบเทียบกับการควบคุมเชิงบวกโดยใช้อาร์บูติน 100 มก./มล.

ผลลัพธ์

กิจกรรมเพรอกซิเดสของกลูตาไธโอนเพอรอกซิเดส (GPX), ไทออลเพอรอกซิเดส (TPX) และคาตาเลส

การศึกษานี้เป็นการวิจัยเพิ่มเติมของการประยุกต์ใช้การรักษาเศษส่วน lys- osomal สําหรับ decolorizing melanin com- ปอนด์ในหลอดทดลองและในร่างกาย. ในการศึกษาก่อนหน้านี้เราพบว่าเศษส่วนไลโซโซมที่แยกได้จากเซลล์ Hela, S. cerevisiae, ไข่ของไก่มีผลในการลดสีเมลานินและประสิทธิภาพของการ decolorization เมลานินมีความสัมพันธ์กับกิจกรรม peroxidase ของเศษส่วนไมโครโซมที่ไม่ใช่เมมเบรนที่ไม่ใช่เมมเบรนรวมถึงไลโซโซมและต่อออกซิโซม เพื่อยืนยันผลการลดสีของเมลานินของ peroxidases, สาม peroxidases ถูกเลือก, กลูตาไธโอน peroxidase (GPX), ไทออล peroxidase (TPX), และคาตาเลส. เอนไซม์เหล่านี้มีบทบาทสําคัญในการลดความเครียดออกซิเดชันที่เกิดจากสายพันธุ์ออกซิเจนปฏิกิริยาในเซลล์ [14]

กิจกรรมของเอนไซม์เหล่านี้ถูกกําหนดโดยชุดทดสอบ (ชุดทดสอบ Peroxidase, D2PD-100, QuantiChrom™) วิธีนี้ขึ้นอยู่กับการเกิดออกซิเดชันของสีย้อมผู้บริจาคอิเล็กตรอนที่ก่อตัวเป็นสีชมพูระหว่างปฏิกิริยา peroxidase [15] กิจกรรม peroxidase แสดงโดยใช้หน่วยต่อไปนี้: 1 หน่วย = 1 U = การก่อตัวของ 1 μmole resorufin ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ ตารางที่ 1 สรุปกิจกรรมและความเข้มข้นของ peroxidases ทั้งสาม, GPX, TPX และ Catalase

กิจกรรมการลดสีของเมลานินของกลูตาไธโอนเพอรอกซิเดส (GPX), ไทออลเพอรอกซิเดส (TPX) และคาตาเลส

เพื่อยืนยันผลการลดสีของเมลานินของ peroxi- dases สารละลายเมลานิน 100 ppm ได้รับการรักษาด้วยไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 1 mM และความเข้มข้น μU/ L (50 ถึง 1000) ของแต่ละ peroxidase ตัวอย่างถูกทําปฏิกิริยาเป็นเวลา 2 วันที่ RT จากนั้นเปรียบเทียบกับความเข้มข้นเริ่มต้น รูปที่ 1 แสดงการลดลงของเมลานินหลังจาก 48 ชั่วโมง รูปที่ 1 แสดงหลักฐานว่า TPX และ GPX มีฤทธิ์ลดสีเมลานิน คาตาเลสไม่มีผลต่อการลดสีเมลานิน (รูปที่ 1a) TPX มีประสิทธิภาพในการเปลี่ยนสีสารประกอบเมลานิน และประสิทธิภาพจะดีที่สุดเมื่อได้รับการรักษาที่ความเข้มข้น 1 μU/mL (รูปที่ 1b) GPX ยังมีกิจกรรมลดสีเมลานินซึ่งดีที่สุดที่ความเข้มข้น 0.2 μU/ มล. และค่อยๆลดลงที่ความเข้มข้นที่สูงขึ้น (รูปที่ 1c) ค่านี้แสดงถึงการลดสีของเมลานินที่ดีขึ้น 175% เมื่อเทียบกับการควบคุมที่รับการรักษาด้วยไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์เท่านั้น GPX มีประสิทธิภาพมากกว่าในแง่ของความเข้มข้นและกิจกรรม peroxidase เมื่อเทียบกับ TPX การรักษา - ment ของ 0.2 μU / mL GPX และไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 1 mM เพื่อสารละลายเมลานิน decolorized 13% ของ 100 ppm เมลานินสําหรับ 4 d (รูปที่2). อย่างไรก็ตาม ทั้ง GPX และ TPX ไม่ได้แสดงอะไรเลย ผลการลดสีภายใต้การไม่มีไฮโดรเจน perox- ide (ไม่แสดงข้อมูล)

ตารางที่ 1 ข้อมูลเฉพาะของเอนไซม์, กลูตาไธโอน เพอรอกซิเดส 2, ไทออล เพอรอกซิเดส และคาตาเลส

ผลของความมีชีวิตของเซลล์กลูตาไธโอนเพรอกซิเดส (GPX) และ H2O2on B16F10

ผลของ GPX ต่อความมีชีวิตของมะเร็งผิวหนัง B16F10 เซลล์ได้รับการยืนยันโดยการทดสอบ MTT ก่อนการสังเคราะห์เมลานิน การทดสอบการยับยั้งวิทยานิพนธ์ เพื่อหาความเข้มข้นที่เหมาะสมของ ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ในการรักษาความเป็นพิษต่อเซลล์ได้รับการประเมินโดย การรักษาด้วยไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์เป็นเวลา 72 ชั่วโมงที่ความเข้มข้นต่างกัน ภายใต้ความเข้มข้น 0.1 mM, H2O2 มี ไม่มีความเป็นพิษต่อเซลล์เป็นเวลา 72 ชั่วโมงในขณะที่มีความเข้มข้น สูงกว่า 1 mM พบความเป็นพิษอย่างมาก (รูปที่ 3a) การ ผลของ GPX ต่อการอยู่รอดของเซลล์ได้รับการประเมินในที่ที่มีไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 0.1 mM ซึ่งไม่เป็นพิษต่อเซลล์ GPX ไม่มีพิษต่อเซลล์ B16F10 ด้านล่าง ความเข้มข้น 0.5 μU/mL ซึ่งมีประสิทธิภาพในเมลานิน การศึกษาการลดสี (รูปที่ 3b)

รูปที่ 1การลดสีเมลานินสัมพัทธ์เมื่อเทียบกับการรักษาไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์เท่านั้น

ผลของการสังเคราะห์กลูตาไธโอนเพอรอกซิเดส (GPX) และ H2O2on Melanin ในเซลล์เมลานิน B16F10

เราวิจัยผลของ GPX ซึ่งมีประสิทธิภาพมากที่สุด ในการลดสีเมลานิน, การสังเคราะห์เมลานินในเมล- เซลล์เม็ดเลือดแดง รูปที่ 4 แสดงเนื้อหาเมลานินใน B16F10 เซลล์เมลาโนมาที่รักษาด้วยแต่ละตัวอย่างเป็นเวลา 72 ชั่วโมง การรักษา- ment ที่มี 0.05 μU / มล. ของ GPX และ 0.1 mM H2O2 เหนี่ยวนําให้เกิด การยับยั้งเมลาโนเจเนซิสมากที่สุดโดย 43% เมื่อเทียบกับ เพื่อควบคุม (การรักษาด้วย α-MSH เท่านั้น) นี่คือ 153% สูงกว่าการควบคุมในเชิงบวก (การรักษาด้วย Arbutin และ α-MSH) และสูงกว่าไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 22% ไม่มีเอนไซม์ในขณะที่การรักษา GPX ไม่ได้แสดง dra- การลดเมลานิน matic ในกรณีที่ไม่มีไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ นอกจากนี้ยังสนับสนุนมุมมองนี้ (ข้อมูลไม่แสดง) ส่งผลให้ GPX ยับยั้งการผลิตสารประกอบเมลานิน แต่เมลานิน การสังเคราะห์ในเซลล์ได้รับผลกระทบจากไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์มากขึ้น กว่าโดย GPX

การอภิปราย

ในการศึกษานี้นักวิจัยของเราพบว่าความเข้มข้นที่เหมาะสมและผลของ GPX, TPX และ Catalase ซึ่งเป็นสารต้านอนุมูลอิสระ เอนไซม์ที่ช่วยลดความเครียดออกซิเดชันในเซลล์, ใน decolorization ของสารประกอบเมลานิน. จากการทดลองนอกเซลล์โดยใช้สารประกอบเมลานินสังเคราะห์ GPX และ TPX มีผลทําให้เมลานินเปลี่ยนสี แต่คาตาเลส ไม่ มีรายงานว่าเอนไซม์ที่ย่อยสลายลิกนิน ในเชื้อราบางชนิดเช่นแลคเคสลิกนินเปอร์ออกซิเดสสามารถแตกหักได้ ลงเมลานินต่อหน้าไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ [16–18] จากการศึกษาครั้งนี้ได้รับการยืนยันว่าสารต้านอนุมูลอิสระ เอนไซม์ซึ่งอยู่ในยูคาริโอตทั้งหมดและไม่ใช่เอนไซม์ที่ย่อยสลายลิกนินมีฤทธิ์ลดสีเมลานิน แม้ว่า GPX และ TPX ยังสามารถลดสีเมลานินในที่ที่มีไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์เอนไซม์เหล่านี้มีความเป็นไปได้ที่จะทําหน้าที่เป็นส่วนประกอบสําคัญของกลไกการลดสีของเมลานินของเศษส่วนไลโซโซม

GPX ซึ่งมีประสิทธิภาพมากที่สุดในการลดสีเมลานิน ในหลอดทดลองได้รับการรักษาด้วยเซลล์เนื้องอก B16F10 เพื่อตรวจสอบผลกระทบต่อการสังเคราะห์เมลานิน ในมะเร็งผิวหนัง B16F10 เซลล์ GPX ไม่ได้เป็นพิษต่อเซลล์ที่ความเข้มข้นที่ถูก มีประสิทธิภาพในการลดสีของสารประกอบเมลานินและ ความเข้มข้นของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ที่ได้รับการรักษาร่วมกันคือ 0.1 mM โดยไม่มีความเป็นพิษ การรักษาไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ ยับยั้งการสังเคราะห์เมลานินอย่างมากและเมื่อทํางาน ด้วย GPX ประสิทธิภาพดีขึ้นในขณะที่ไม่มีการพึ่งพาความเข้มข้นของยา เนื่องจากเอนไซม์ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ถูกบริโภคอย่างรวดเร็วจึงสามารถตีความได้ ว่าความเข้มข้นของเอนไซม์ที่จะรับการรักษาก็จะยิ่งสูงขึ้นเท่านั้น ลดการยับยั้งการสังเคราะห์เมลานินโดยไฮโดรเจน เปอร์ออกไซด์ ความจริงที่ว่าการรักษา GPX ไม่ได้แสดงการลดลงของเมลานินอย่างมากในกรณีที่ไม่มีไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ นอกจากนี้ยังสนับสนุนมุมมองนี้ (ข้อมูลไม่แสดง) ส่งผลให้ GPX ยับยั้งการผลิตสารประกอบเมลานิน แต่เมลานิน การสังเคราะห์ในเซลล์ได้รับผลกระทบจากไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์มากขึ้น กว่าโดย GPX ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระก่อให้เกิด การย่อยสลายเมลานินในกลไก autophagy ที่ย่อย เมลาโนโซม

แท็บเล็ต cistanche

สําหรับข้อมูลเพิ่มเติมโปรดคลิกที่นี่

บทสรุป

การศึกษาของเราแสดงให้เห็นว่ากลูตาไธโอน peroxidase (GPX) และ ไทออลเพอรอกซิเดส (TPX) มีส่วนช่วยในการลดสีเมลานิน และ GPX ยับยั้งการสังเคราะห์เมลานินได้อย่างมีประสิทธิภาพ ผลลัพธ์ที่ได้ สนับสนุนสมมติฐานที่ว่าเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระก่อให้เกิด การย่อยสลายเมลานินในกลไก autophagy ที่ย่อย เมลาโนโซม เพื่อให้ได้ข้อสรุปที่ชัดเจนให้ศึกษาเกี่ยวกับ กลไกการย่อยเมลาโนโซมในเซลล์ผิว เคราติโนไซต์ และเมลาโนไซต์ อาจจําเป็น