การพร่องของแมคโครฟาจช่วยลดพยาธิสภาพของโรคในปัจจัย H ขึ้นอยู่กับภูมิคุ้มกันโกลเมอรูโลไตอักเสบที่เกิดจากคอมเพล็กซ์ภูมิคุ้มกัน

ปัจจัยเสริมH (FH) เป็นตัวควบคุมหลักของแนวทางทางเลือกของการเสริมทั้งในมนุษย์และหนู ก่อนหน้านี้ การศึกษาของเราเปิดเผยว่าการไม่มี FH ทำให้เมาส์ C57BL6 ไวต่อโรคซีรั่มเรื้อรัง(CSS) พร้อมกับการเพิ่มขึ้นของไตเข้าฟิการกรองของแมคโครฟาจเมื่อเทียบกับการควบคุม เพื่อทำความเข้าใจว่าการสรรหาแมคโครฟาจเพิ่มขึ้นหรือไม่ (Mϕs) ไปที่ไตกำลังขับเข้าชั้นการเจาะและการแพร่กระจายของการบาดเจ็บ เราได้ตรวจสอบ eเอฟเอฟฯลฯ ของ Mϕ พร่องด้วย clodronate ในหนูที่น่าพิศวง FH ด้วย CSS หนู FHKO อายุแปดสัปดาห์ได้รับการรักษาด้วยอะโพเฟอร์ริติน (4 มก./หนู) เป็นเวลา 5 สัปดาห์และด้วยพาหะนำยา (PBS) หรือคลอโดรเนต (50 มก./กก. ip, 3 ครั้ง/สัปดาห์ในช่วง 3 สัปดาห์ที่ผ่านมา) การบริหารงานของclodronate ลดโมโนไซต์และ Mϕอยู่ที่ไตโดย>80%. 

การทำงานของไตประเมินโดย BUN และอัลบูมินยังคงใกล้เคียงกับปกติเมื่อสูญเสีย Mϕส. การรักษาด้วย Clodronate ป้องกันการเปลี่ยนแปลงในไซโตไคน์ TNF และ IL-6 และเพิ่มการแสดงออกของยีนของปัจจัยการเจริญเติบโตของเนื้อเยื่อเกี่ยวพัน (CTGF), TGF -1, เมทริกซ์เมทัลโลโปรตีนเนส-9 (MMP9)ฟิโบรเนกติน ลามินิน และคอลลาเจนในหนู FHKO ที่มี CSS (P < 0:05). การรักษาด้วยโคลโดรเนตนำไปสู่การป้องกันแบบสัมพัทธ์จากภูมิคุ้มกันที่ซับซ้อน- (IC-) พยาธิวิทยาของโรคที่เป็นสื่อกลางระหว่าง CSS ตามที่ประเมินโดยลงชื่อเข้าใช้ฟิลดพยาธิสภาพของไตลงไม่ได้(GN) และเมทริกซ์นอกเซลล์ ผลลัพธ์ของเราแนะนำว่าการกระตุ้นเสริมเป็นหนึ่งในกลไกที่ควบคุมภูมิทัศน์ขนาดมหึมาและด้วยเหตุนี้ฟิโบรซิส กลไกที่แน่นอนยังคงต้องถอดรหัส โดยสรุป ข้อมูลของเราแสดงให้เห็นว่า Mϕมีบทบาทสำคัญใน ICGN และ M ที่ขึ้นกับ FHϕ พร่องลดการลุกลามของโรค.

คลิกที่นี่เพื่อรับสารสกัดจากถังเก็บน้ำออร์แกนิกธรรมชาติที่มีเอไคนาโคไซด์ 25% และแอคทีโอไซด์ 9% สำหรับการทำงานของไต

1. บทนำ

โรคไตเรื้อรัง(CKD) เป็นปัญหาสุขภาพระดับโลก 10% เป็นสื่อกลางของภูมิคุ้มกันเชิงซ้อน (IC-) และเกิดขึ้นในอาการเจ็บป่วยจากซีรั่ม การติดเชื้อ และโรคแพ้ภูมิตัวเอง [1]. รายงานประจำปีของระบบข้อมูลไตของสหรัฐอเมริการะบุว่าผู้ที่เป็นโรค CKD"เห็นได้ชัดว่ามีความเสี่ยงสูงต่อการเสียชีวิต" โดยมีอุบัติการณ์เพิ่มขึ้น 10- เท่าในช่วงสามทศวรรษ ซึ่งผู้ป่วยที่ได้รับผลกระทบสูญเสียอายุขัยไป 70% จากข้อมูลของ NIDDK พบว่าประมาณ 14% ของประชากรผู้ใหญ่ได้รับการวินิจฉัยว่าเป็นโรคไต ทำให้เป็นสาเหตุการเสียชีวิตอันดับที่ 9 [2] ไตมีความอ่อนไหวสูงต่อความเสียหายที่เกิดจากเสริมโดยเฉพาะอย่างยิ่งในภูมิต้านทานตนเองและการอักเสบ [3, 4]

ระบบเสริมมีส่วนร่วมในการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติและแบบปรับตัว และเป็นด่านแรกในการป้องกันจุลินทรีย์ [5, 6] ประกอบด้วยวิถีการกระตุ้น 3 วิถีซึ่งเริ่มต้นในลักษณะเฉพาะ และประกอบด้วยพลาสมาและโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับเซลล์มากกว่า 30 ชนิด [7] ทางเลือกอื่นคือการตื่นตัวอยู่เสมอและควบคุมโดยโปรตีน เช่น ปัจจัยเสริม H (FH) FH เป็นโปรตีนหมุนเวียนที่ตับสังเคราะห์เป็นส่วนใหญ่ [8] หนูที่ขาด FH (fh-/-) ที่รักษาด้วยอะโปเฟอร์ริตินจะทำให้เกิดอาการป่วยในซีรั่มเรื้อรัง (CSS) ทำให้เกิดการแพร่กระจายของไตอักเสบ (GN) ภายใน 5 สัปดาห์ของการรักษา ในขณะที่หนูครอก C57BL/6 ที่มีปัจจัย H (FH) เพียงพอจะมีเพียงเล็กน้อย โรคไตอักเสบ [9] การแทรกซึมของมาโครฟาจ F4/80+ เกิดขึ้นในไตและสังเกตได้รอบๆ การสะสมของ IC ในหนู fh-/- การกระตุ้นแบบเสริมจะสร้างอะนาไฟลาทอกซิน C3a และ C5a ซึ่งมีส่วนร่วมในการค้า Mϕs ไปยังบริเวณที่เกิดการอักเสบ การยับยั้งการส่งสัญญาณ C5a/ C5aR1 ช่วยลด Mϕs ในไต [10] ในการตั้งค่านี้อาการบาดเจ็บที่ไตมีความเกี่ยวข้องกับการแทรกซึมของไต แต่มีกลไกที่อาจเกี่ยวข้องกับการก่อให้เกิดการบาดเจ็บของไตยังไม่ทราบ

รูปที่ 1: FH เปลี่ยนแปลงยีนมาร์กเกอร์มาโครฟาจในไตของหนูที่มี ICGN ที่ขึ้นกับ FH PCR เชิงปริมาณแบบเรียลไทม์สำหรับ CD204 และ CD206 โดยใช้ mRNA ที่แยกได้จากไตหลังการให้น้ำเกลือหรืออะโปเฟอร์ริตินเป็นเวลา 5 สัปดาห์ นิพจน์ถูกทำให้เป็นมาตรฐานเป็น GAPDH (n=6/group) ∗พี < 0:01. กราฟแสดงการเปลี่ยนแปลงการพับของยีนในหนู fh-/- ที่ได้รับการรักษาด้วยอะโพเฟอร์ริติน (n=6) เปรียบเทียบกับหนู fh-/- ที่บำบัดด้วยน้ำเกลือ (n=6)

โมโนไซต์ (Mo) ที่สร้างโดยเซลล์เม็ดเลือด [11] เคลื่อนตัวผ่านเอ็นโดทีเลียมไปยังเนื้อเยื่อ ซึ่งพวกมันจะแยกความแตกต่างออกเป็น Mϕs เครื่องหมาย เช่น รีเซพเตอร์ F4/80, CD11b, CD68 และ Fc สามารถระบุ Mϕ ได้ Mϕs มีส่วนร่วมอย่างยิ่งต่อการบาดเจ็บของไต การซ่อมแซม และการเกิดพังผืดในแบบจำลองการทดลองต่างๆ ของโรคไต [12, 13] เมื่อเร็ว ๆ นี้ การศึกษาของเราแสดงให้เห็นว่าการบาดเจ็บที่ไตใน ICGN ที่ขึ้นกับ FH นั้นสัมพันธ์กับการแทรกซึมของไตของ Mϕs นอกจากนี้ การศึกษาก่อนหน้านี้ได้แสดงให้เห็นว่าการยับยั้งการแทรกซึมของ Mϕ ของไตช่วยลดความดันหลอดเลือดและป้องกันการบาดเจ็บของไตและการเกิดพังผืดในสัตว์หลายชนิดของโรคไต [14, 15] อย่างไรก็ตามตามความรู้ของเรา ผลกระทบของการสูญเสีย Mϕ ในระหว่างการบาดเจ็บของไตที่เกี่ยวข้องกับ ICGN ที่ขึ้นกับ FH ยังไม่ได้รับการกล่าวถึง ดังนั้นการศึกษาครั้งนี้จึงตรวจสอบบทบาทของ Mϕs ต่อการบาดเจ็บของไตที่เกี่ยวข้องกับ ICGN ที่ขึ้นกับ FH โดยใช้ liposome clodro nate Clodronate (กรดโคลโดรนิก) เป็นบิสฟอสโฟเนตที่ถูกเผาผลาญเป็นอะนาล็อก ATP ที่ไม่สามารถไฮโดรไลซ์ได้ [16] การทดลองของเราแสดงให้เห็นว่า Mϕs มีบทบาทสำคัญในการสูญเสียการทำงานของไตในการตั้งค่าการเปิดใช้งานส่วนเสริมที่ไม่ได้รับการควบคุม ดังนั้นการลด Mϕs หรือการสั่งให้ Mϕs รับฟีโนไทป์ของการซ่อมแซมสามารถลดพยาธิสภาพของโรคและสามารถนำไปใช้ประโยชน์ในการรักษาได้

2. วัสดุและวิธีการ

2.1. สัตว์ทดลอง.

ความเครียดของเมาส์ fh−/− ถูกสร้างขึ้นและกรุณาจัดเตรียมโดย Drs Matthew Pickering และ Marina Botto (วิทยาลัยอิมพีเรียลแห่งลอนดอน) และย้อนกลับไปยังสายพันธุ์ C57BL/6 ในห้องปฏิบัติการของเราอย่างต่อเนื่องมานานกว่า 10 รุ่น หนูที่เพียงพอต่อ FH ของ Littermate ทำหน้าที่เป็นส่วนควบคุม (n=8/กลุ่ม) การทำจีโนไทป์ดำเนินการโดยใช้แนวทางที่ใช้ PCR หนูถูกเก็บรักษาไว้ที่อุณหภูมิ 20–22 องศา C ในรอบแสงมืด 12 ชั่วโมง–12 ชั่วโมง ในกรงปลอดเชื้อที่มีการระบายอากาศพร้อมอาหารและน้ำโดยไม่จำกัด มหาวิทยาลัยชิคาโกและคณะกรรมการการดูแลและใช้สัตว์ประจำสถาบันบัฟฟาโลอนุมัติการศึกษาทั้งหมด

2.2. โปรโตคอลการเจ็บป่วยจากซีรั่มเรื้อรัง

CSS ถูกชักนำในหนู fH−/− หรือหนูพันธุ์ wild ที่อายุ 6-8 สัปดาห์ โดยให้ยา apoferritin ม้ามม้าม 4 มก. (Calzyme Laboratories) ในช่องท้องทุกวัน โดยไม่มีสารเสริม [10, 17, 18] เป็นเวลา 5 สัปดาห์ กลุ่มควบคุมเมทได้รับการฉีดน้ำเกลือในช่องท้องพร้อมกัน

2.3. การประเมินการทำงานของไต

ตรวจวัดความเข้มข้นของยูเรียไนโตรเจนในเลือด (BUN) ด้วยเครื่องวิเคราะห์อัตโนมัติของ Beckman (Beckman Coulter, Fullerton, CA) ความเข้มข้นของอัลบูมินในปัสสาวะถูกวัดด้วยชุดเมาส์อัลบูมิน ELISA (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX) และปรับค่าครีเอตินีนในปัสสาวะให้เป็นมาตรฐานโดยวัดด้วยสี (Stanbio Laboratory, Boerne, TX) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [19]

รูปที่ 2: Clodronate ช่วยลดขนาดแมคโครฟาจของไตในหนูที่มี ICGN ที่ขึ้นกับ FH มากขึ้น ที่ให้มาคือโปรไฟล์โฟลว์ไซโตเมทรีของ F4/80+ มอนอไซต์/Mϕ ในวันที่ 0, 2, 4 และ 7 โดยเป็นตัวแทน การแสดงออกของเซลล์ F4/80+ ถูกกำหนดหาโดยโฟลว์ไซโตเมทรี วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ซอฟต์แวร์ FlowJo V10 เซลล์ F4/80+ ลดลงอย่างมากในแต่ละช่วงเวลาถึงน้อยกว่า 10% ในวันที่ 7 แต่ละช่วงเวลา n=6

2.4. มิญชวิทยา

ไตถูกฝังอยู่ในพาราฟินและสำหรับมาลินคงที่ และมีการสร้างส่วนขนาดสี่ไมโครเมตร ส่วนต่างๆ ถูกย้อมด้วย Periodic Acid-Schiff และตรวจสอบโดยนักพยาธิวิทยาไต (AC) ในลักษณะที่ตาบอด สำหรับแต่ละสไลด์ ไตอักเสบที่มีการงอกขยาย และโกลเมอรูโล-สเคลอโรซิสถูกให้คะแนนจาก 0 ถึง 4 ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [20] สำหรับกล้องจุลทรรศน์อิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์ เนื้อเยื่อไตถูกแช่แข็งอย่างรวดเร็วใน 2- เมทิลบิวเทนที่ทำให้เย็นลงในน้ำแข็งแห้ง ส่วนการแช่แข็งสี่ไมครอนได้รับการประมวลผลสำหรับการย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนต์ (IF) ส่วนต่างๆ ได้รับการแก้ไขด้วยพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 4% และย้อมด้วย Alexa488-conjugated anti-mouse C3 (Cappel) และ Alexa 555 anti-mouse IgG คะแนนกึ่งปริมาณของความเข้มของการย้อมสีและการกระจายจาก 0 ถึง 4 จัดทำขึ้นในลักษณะที่มองไม่เห็นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [19]

2.5. qRT-PCR.

เก็บเกี่ยวไตและสกัด RNA ทั้งหมดจากเนื้อเยื่อโดยใช้รีเอเจนต์ TRIzol ตามคำแนะนำของผู้ผลิต (Invitrogen, USA) cDNA ถูกสังเคราะห์โดยใช้ SuperScript III Reverse Transcriptase (Invitrogen) qRT-PCR ดำเนินการโดยใช้ Power SYBR Green PCR Master mix บนเครื่องตรวจจับลำดับ ABI 7700 (Applied Biosystems) การขยาย PCR ถูกดำเนินการในปริมาตรรวม 25 ไมโครลิตร ซึ่งมี 12.5 ไมโครลิตรของ 2x TaqMan Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems), 6.25 ไมโครลิตรของน้ำที่ปราศจากนิวคลีเอส, 5 ไมโครลิตรของ cDNA และ 1.25 ไมโครลิตรของไพรเมอร์ที่เหมาะสม (IDT) ไพรเมอร์ qPCR ทั้งหมด (ตารางที่ 1) ได้รับการออกแบบโดยใช้ซอฟต์แวร์ Primer3 (สถาบัน Whitehead สำหรับการวิจัยชีวการแพทย์) เพื่อให้มั่นใจถึงความจำเพาะและความไว ในการหาปริมาณของระดับ mRNA เราได้ทำให้การแสดงออกของยีนเป้าหมายเป็นกลีเซอรัลดีไฮด์-3- ฟอสเฟต ดีไฮโดรจีเนส ระดับการแสดงออก mRNA สัมพัทธ์คำนวณโดยใช้วิธี 2 - ΔΔCt และถูกทำให้เป็นมาตรฐานเป็นระดับการแสดงออกของ GAPDH

2.6. สถิติ.

ผลลัพธ์ทั้งหมดเป็นค่าเฉลี่ย ± SD จากหนูอย่างน้อย {{0}} ตัวในแต่ละกลุ่ม มีการใช้การทดสอบสองด้านแบบไม่มีคู่ (ข้อมูลที่มีการแจกแจงแบบปกติ) หรือการทดสอบ Mann–Whitney U (ข้อมูลไม่มีการแจกแจงแบบปกติ) เพื่อเปรียบเทียบ 2 กลุ่มด้วย GraphPad Prism 50 นัยสำคัญทางสถิติแสดงดังนี้: ∗P < 0:05; ∗∗P < 0:01; และ ns: ไม่มีนัยสำคัญ

บริการสนับสนุนของ Wecistanche - ผู้ส่งออก cistanche ที่ใหญ่ที่สุดในประเทศจีน:

อีเมล:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/โทรศัพท์:+86 15292862950

เลือกซื้อรายละเอียดข้อมูลจำเพาะเพิ่มเติม:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-ร้านค้า