การปลูกถ่ายไต

ติดต่อ:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

การแนะนำ

ไตการปลูกถ่ายเป็นทางเลือกที่ดีที่สุดสำหรับการรักษาโรคไตเรื้อรังระยะสุดท้าย ในปัจจุบัน การปฏิเสธโดยอาศัยแอนติบอดี (AMR) ซึ่งมีลักษณะเฉพาะโดยการมีอยู่ของแอนติบอดีจำเพาะผู้บริจาค (DSA) ที่มุ่งตรงไปยังแอนติเจนของเม็ดเลือดขาวของมนุษย์ (HLA) ได้กลายเป็นสาเหตุสำคัญของความเสียหายเรื้อรังต่อการปลูกถ่ายไต ซึ่ง ส่วนใหญ่จำกัดการอยู่รอดในระยะยาวของการรับสินบน (1, 2). อย่างไรก็ตาม โครงการที่มีอยู่ล้มเหลวในการบรรลุผลลัพธ์ที่คาดหวังในทางคลินิกการรักษา AMR (1, 3, 4) ดังนั้นจึงมีความจำเป็นเร่งด่วนในการระบุตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่อาจเกิดขึ้นและปัจจัยเสี่ยงสำหรับ AMR หลังการปลูกถ่ายไต ซึ่งเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการรักษาและผลลัพธ์ของผู้ป่วย

หลักฐานที่รวบรวมมาบ่งชี้ว่าภายใต้สภาวะแวดล้อมในการติดเชื้อ บีเซลล์สามารถแยกความแตกต่างไปเป็นพลาสมาบลาสต์ที่สร้างแอนติบอดีและเซลล์บีควบคุม (Bregs) ซึ่งเป็นชุดย่อยของบีเซลล์พิเศษที่หลั่งไซโตไคน์กดภูมิคุ้มกัน โดยเฉพาะอย่างยิ่งอินเตอร์ลิวคิน (IL)-10 (1, 5–7). ดังนั้นพลาสมาบลาสต์จึงผลิตอัลโลแอนติบอดี ส่งผลให้เกิด AMR ในขณะที่ Bregs แสดงหน้าที่ควบคุมภูมิคุ้มกันและช่วยกระตุ้นสภาวะสมดุลของภูมิคุ้มกัน ดังนั้น Bregs จึงได้รับรายงานว่ามีความสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับความต้านทานต่อ AMR หลังการปลูกถ่ายไต (1, 8, 9)

แม้ว่าเครื่องหมายพื้นผิวที่ชัดเจนของชุดย่อย Breg ยังไม่ได้รับการระบุในมนุษย์ (1) การศึกษาก่อนหน้านี้ได้รายงานประชากรย่อยทั่วไปสี่กลุ่มของ Bregs: หน่วยความจำ Bregs (mBregs) ที่กำหนดด้วย CD19 บวก CD24 บวก CD27 บวก (10), Bregs เฉพาะกาล ( tBregs) กำหนดด้วย CD19 plus CD24 plus CD38 plus (10, 11), IL-10-การผลิตหน่วยความจำ Bregs (IL-10 บวก mBregs) ที่กำหนดด้วย CD19 plus CD24 plus CD27 plus IL-10 plus (12) และ IL-10-การผลิตช่วงเปลี่ยนผ่าน (IL-10 บวก tBregs) กำหนดด้วย CD19 บวก CD24 บวก CD38 บวก IL-10 บวก (13) ลากูน่า-โกยา และคณะ รายงานว่าการลดลงของ tBregs และ IL-10 บวก tBregs มีความสัมพันธ์เชิงบวกกับการปฏิเสธอย่างเฉียบพลันหลังการปลูกถ่ายไต (14) อย่างไรก็ตาม โจวและคณะ รายงานว่า mBregs แทนที่จะเป็น tBregs ลดลงอย่างมีนัยสำคัญในผู้ป่วยห้ารายที่มีการปฏิเสธเฉียบพลันหลังการปลูกถ่ายตับ (10) นอกจากนี้ Shavir และคณะ รายงานว่า tBregs ไม่เกี่ยวข้องกับการปฏิเสธ allograft ในไตในผู้ป่วย AMR สามคน (15) จากผลลัพธ์ที่ไม่สอดคล้องกันเหล่านี้ มีความจำเป็นต้องชี้แจงเพิ่มเติมว่าประชากรย่อยของ Breg ใดมีบทบาทสำคัญในผู้ป่วย AMR หลังการปลูกถ่ายไต

ในการศึกษานี้ เปรียบเทียบสัดส่วนของประชากรย่อยสี่กลุ่มของ Bregs ที่หมุนเวียนอยู่ในกลุ่มที่มีสุขภาพดี มีเสถียรภาพ (ST) และ AMR จากนั้น การกระจายตัวทางชีวภาพของบีเซลล์, IL-10 และคีโมไคน์ในการปลูกถ่ายไตของผู้ป่วยที่มีสุขภาพดี, ST และ AMR ถูกกำหนด นอกจากนี้ ยังได้ตรวจสอบพลวัตของประชากรย่อยสี่กลุ่มของการหมุนเวียน Bregs ในผู้ป่วยโรคติดต่อทางเพศสัมพันธ์เป็นเวลา 90 วันหลังการผ่าตัด ผลลัพธ์ในปัจจุบันเหล่านี้ รวมที่รายงานโดยการศึกษาก่อนหน้านี้ (1) ชี้ให้เห็นว่าการหมุนเวียน IL-10 บวก mBregs และ IL-10 บวก tBregs เป็นประชากรย่อย Breg ชั้นนำที่มีส่วนทำให้เกิดการต่อต้าน AMR

ผงซิสทานเช่ทูบูโลซ่าป้องกันโรคไต, คลิกที่นี่เพื่อรับตัวอย่าง

คำสำคัญ:ฟีโนไทป์ของ Breg, การปลูกถ่ายไต, การปฏิเสธแอนติบอดี้, สภาวะสมดุล, ไดนามิก

วัสดุและวิธีการ

ผู้ป่วยและกลุ่ม

ผู้ป่วยทุกรายให้ความยินยอมพร้อมข้อมูลและลงนามก่อนการศึกษา การศึกษาปัจจุบันได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการจริยธรรมของโรงพยาบาลในเครือแห่งแรกของมหาวิทยาลัยเจิ้งโจว (2018-KY-72) หมายเลขทะเบียนการทดลองทางคลินิกคือ ChiCTR190022501

ผู้ป่วยเหล่านี้แบ่งออกเป็นสามกลุ่ม: (1) กลุ่มควบคุมที่มีสุขภาพดี (สุขภาพดี, n=9): ผู้บริจาคไตที่มีสุขภาพดีภายในอายุ 18-55 ปี (ปลอดโรค) ประกอบด้วยพี่น้องและคู่สมรสของผู้รับ; (2) ผู้รับที่มีกลุ่มฟังก์ชันการต่อกิ่งที่เสถียร (ST, n=25): ผู้ป่วยอายุระหว่าง 18-55 ปี ซึ่งการทำงานของไตมีเสถียรภาพ (ไม่มีการติดเชื้อหรือการปฏิเสธก่อนและหลังการปลูกถ่ายไต) ระหว่างการติดตามผล ระยะเวลา ( มากกว่าหรือเท่ากับ 6 เดือน); (3) ผู้รับที่มีกลุ่ม AMR (AMR, n=18): ผู้ป่วยอายุระหว่าง 18-55 ปี ที่ได้รับการวินิจฉัยว่าเป็นโรค AMR การปลูกถ่ายไตของผู้รับที่มี ST และ AMR ได้มาจากผู้บริจาคไตที่มีสุขภาพดีส. การวินิจฉัยแยกโรคระหว่างกลุ่ม ST และ AMR ได้รับการยืนยันโดยนักพยาธิวิทยาไตสองคนตามมติของ Banff 2017 (3, 16)

เลือด เนื้อเยื่อไต และตัวอย่างเซลล์

ตัวอย่างเลือดส่วนปลายจากกลุ่มที่มีสุขภาพดีถูกเก็บที่ก่อนการผ่าตัด และที่ 1, 7 และ 14 วันหลังการผ่าตัด ตัวอย่างที่ได้จากกลุ่ม ST ถูกรวบรวมที่ก่อนการผ่าตัด และที่ 1, 7, 14, 30 และ 90 วันหลังการผ่าตัด ตัวอย่างที่ได้จากกลุ่ม AMR ถูกรวบรวมเมื่อเกิดการปฏิเสธ (ก่อนการบำบัดด้วยการต่อต้านการปฏิเสธสำหรับ AMR) เซลล์โมโนนิวเคลียร์ของเลือดส่วนปลาย (PBMC) ถูกแยกออกจาก

เลือด 5 มล. โดยการหมุนเหวี่ยงไล่ระดับ Ficoll-Paque และเก็บรักษาไว้ด้วย 10 เปอร์เซ็นต์ไดเมทิลซัลฟอกไซด์ (Solarbio Inc. ปักกิ่ง จีน) ในไนโตรเจนเหลว

เก็บตัวอย่างชิ้นเนื้อไตแกนกลางของไตที่ได้รับจากกลุ่มที่มีสุขภาพดีก่อนการผ่าตัดเพื่อตัดชิ้นเนื้อไตของผู้บริจาคที่เป็นศูนย์เวลา ตัวอย่างชิ้นเนื้อไตของไตเข็มหลักที่ได้จากกลุ่ม ST ถูกรวบรวมที่ 90 วันหลังการผ่าตัดหลังจากที่ไตทำงานได้อย่างเสถียรเนื่องจากการตรวจชิ้นเนื้อโปรโตคอล ในแง่ของการด้อยค่าของการเจาะไตครั้งที่สอง ผู้ป่วย AMR ทั้งหมดปฏิเสธการตรวจชิ้นเนื้อไตของไตด้วยเข็มหลักหลังการบำบัดด้วยการต่อต้านการปฏิเสธสำหรับ AMR ดังนั้น การเก็บตัวอย่างชิ้นเนื้อไตแกนกลางของไตจากกลุ่ม AMR จะถูกรวบรวมเฉพาะเมื่อมีการปฏิเสธ (ก่อนการบำบัดด้วยการต่อต้านการปฏิเสธสำหรับ AMR) ผู้บริจาคที่มีสุขภาพดีทั้งหมด 3 ราย ผู้ป่วยโรคติดต่อทางเพศสัมพันธ์ 9 ราย และผู้ป่วย AMR เก้ารายได้ให้ความยินยอมพร้อมลายเซ็นก่อนการตรวจชิ้นเนื้อไตด้วยเข็มหลัก ผู้บริจาคที่มีสุขภาพดีที่เหลืออีก 6 ราย ผู้ป่วย ST 16 ราย และผู้ป่วย AMR 9 รายปฏิเสธการตรวจชิ้นเนื้อไตหลักเนื่องจากกลัวว่าจะมีเลือดออกรุนแรงร่วมกับการตรวจชิ้นเนื้อ แยกเซลล์เดี่ยวออกจากตัวอย่างชิ้นเนื้อไตของไตด้วยเข็มแกนหลักของผู้บริจาคที่มีสุขภาพดี 3 ราย ผู้ป่วย ST 3 ราย และผู้ป่วย AMR 3 ราย โดยการรวมการแยกตัวทางกลกับการสลายตัวของเอนไซม์ของเมทริกซ์นอกเซลล์ ซึ่งคงไว้ซึ่งความสมบูรณ์ของโครงสร้างของเนื้อเยื่อ (Multi Tissue Dissociation Kit) 1; Miltenyi Biotec, แบร์กิชกลัดบัค, เยอรมนี) เซลล์ไตได้รับการเก็บรักษาไว้ด้วยไดเมทิลซัลฟอกไซด์ 10 เปอร์เซ็นต์ (Solarbio Inc., ปักกิ่ง, จีน) ในไนโตรเจนเหลว และตัวอย่างชิ้นเนื้อไตที่เหลือด้วยเข็มหลักที่เหลือถูกฝังในพาราฟินที่ 4 องศา

Flow Cytometry

เซลล์ที่เก็บไว้ในไนโตรเจนเหลวถูกละลายอย่างรวดเร็วในอ่างน้ำที่ตั้งค่าไว้ที่ 37 องศาเป็นเวลา 3 นาที PBMC ทั้งหมด 2-3 × 106 ถูกบ่มด้วยค็อกเทลกระตุ้นเซลล์เจือจางของ Roswell Park Memorial Institute 1640 (500 ×) ซึ่งประกอบด้วย PMA (Phorbol 12-Myristate 13-Acetate) แคลเซียมไอโอโนฟอร์ (Ionomycin) และสารยับยั้งการขนส่งโปรตีน Brefeldin A และ Monensin, (eBioscience, San Diego, CA) ที่ 37 องศาโดยมี CO2 5 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 5 ชั่วโมง เซลล์ที่ตายแล้วถูกแยกออกจากการย้อมสีด้วย 7-Aminoactinomycin D (Thermo Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, USA) และเครื่องหมายพื้นผิวของ Bregs ถูกย้อมด้วยแอนติบอดีที่ติดฉลาก fluorochrome (Brilliant Violet 421™ anti-human CD19, phycoerythrin (PE)/Cy7 ต่อต้านมนุษย์ CD24, Alexa FluorR647 ต่อต้านมนุษย์ CD27, Alexa FluorR488

ต่อต้านมนุษย์ CD38 และ Brilliant Violet 510™ ต่อต้านมนุษย์ CD45; การควบคุมไอโซไทป์ที่เหมาะสม: Brilliant Violet 421™ Mouse

IgG1 k Isotype Control, เมาส์ PE/Cy7 IgG2a k Isotype Control, Alexa FluorR647 เมาส์ IgG1 k Isotype Control, Alexa FluorR488 เมาส์ IgG1 k Isotype Control และ Brilliant Violet

510™ เมาส์ IgG1 k การควบคุมไอโซไทป์; ไบโอเลเจนด์, ซานดิเอโก, แคลิฟอร์เนีย,

สหรัฐอเมริกา) เป็นเวลา 30 นาที ที่ 4 องศา โดยมีการป้องกันแสง สำหรับการย้อมสีภายในเซลล์ เซลล์ถูกย้อมด้วยแอนติบอดีที่มุ่งเป้าไซโตไคน์ภายในเซลล์ของ Bregs (PE ต้าน IL ของมนุษย์-10; ตัวควบคุมไอโซไทป์ที่เหมาะสม: PE หนู IgG1 k Isotype Control; Biolegend, San Diego, CA, USA) สำหรับ 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง มีการป้องกันแสง เซลล์ที่ติดฉลากได้รับการวิเคราะห์โดยใช้เครื่องมือ BD Biosciences Canto II (BD Biosciences, USA) เหตุการณ์ทั้งหมด 100,000 ได้มาในประตูลิมโฟไซต์ การวิเคราะห์ข้อมูลดำเนินการโดยใช้ซอฟต์แวร์ FlowJo (Tree Star, San Carlos, CA, USA)

อิมมูโนฮิสโตเคมี

Immunohistochemistry staining of CD19, IL-10, and C-X-C motif chemokine 13 (CXCL13) in kidney tissues was performed, respectively. Brieflfly, 4 mm sections obtained from formalin-fifixed, paraffifin-embedded kidney tissue samples were incubated with 1:500-diluted anti-CD19, 1:1000-diluted antiCXCL13 (rabbit anti-human; Abcam, Cambridge, UK), and 1:500-diluted anti-IL-10 (rabbit anti-human; Absin, Shanghai, China) primary antibodies overnight at 4°C, followed by Horseradish Peroxidase-conjugated 1:20,000-diluted goat antirabbit secondary antibody (Abcam, Cambridge, UK) for 1 h at room temperature and then 3,3′-diaminobenzidine for another 10 min. DAPI appears in blue. Immunohistochemistry images were acquired with an Aperio ScanScope AT Turbo (Aperio, Vista, CA). Numbers of CD19, IL-10, and CXCL13 positivities were scored as follows: 0 positivity, score = zero; 1–5 positivities, score = one; 6–10 positivities, score = two; 11–20 positivities, score = three; >20 แง่บวก คะแนน=สี่

การวิเคราะห์ทางสถิติ

ในการศึกษากรณีศึกษาการควบคุมแบบซ้อน การวิเคราะห์เส้นโค้งลักษณะการทำงานของตัวรับ (ROC) ดำเนินการโดย MedCalc v18.11.3 การวิเคราะห์ทางสถิติที่เหลือดำเนินการโดยใช้ IBM SPSS 210 ข้อมูลการวัดแบบกระจายตามปกติที่มีความเหมือนกันของความแปรปรวนถูกแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (x ± s) และวิเคราะห์โดยตัวอย่างอิสระ t-test (ระหว่างการเปรียบเทียบกลุ่ม) หรือการวิเคราะห์ทางเดียวของความแปรปรวน (ระหว่างการเปรียบเทียบกลุ่ม) ข้อมูลการวัดที่ไม่มีการแจกแจงแบบปกติหรือความเป็นเนื้อเดียวกันของความแปรปรวนถูกแสดงเป็นค่ามัธยฐานที่มีช่วงควอไทล์ (IQR) และวิเคราะห์โดยการทดสอบ Mann–Whitney U (ระหว่างการเปรียบเทียบกลุ่ม) หรือการทดสอบ Kruskal–Wallis (การเปรียบเทียบระหว่างกลุ่ม) ข้อมูลการนับถูกวิเคราะห์โดยการทดสอบ c2, การทดสอบ c2 ที่ถูกแก้ไข หรือการทดสอบที่แน่นอนของ Fisher ตามความจำเป็น การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียวการวัดซ้ำทางเดียว

ถูกใช้ในช่วงเวลาต่างๆ P-values<0.05 were="" considered="" statistically="">

ผลลัพธ์

ลักษณะพื้นฐานของผู้ป่วย

ผู้บริจาคที่มีสุขภาพดีทั้งหมด 9 ราย ผู้ป่วยโรคติดต่อทางเพศสัมพันธ์ 25 ราย และผู้ป่วย AMR 18 รายรวมอยู่ในการศึกษาครั้งนี้ ดังแสดงในตารางที่ 1 เพศของผู้รับ อายุ ดัชนีมวลกาย (BMI) โรคไตในระยะเริ่มแรก HLA ไม่ตรงกัน CNIs เวลาอุ่น-ขาดเลือด และเวลาเย็น-ขาดเลือดไม่แตกต่างกันระหว่างกลุ่มหรือระหว่างกลุ่ม (P > 0.05 ทั้งหมด) อย่างไรก็ตาม อุบัติการณ์ของทั้งผลบวกของ DSA ที่ต่อต้านคลาส I และต่อต้านคลาส II ในกลุ่ม AMR นั้นสูงกว่าอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มในกลุ่ม ST (P < 0001="" สำหรับการต่อต้าน="" -คลาส="" i="" dsa,="" p=""><0.001; p="0.001" สำหรับแอนตี้คลาส="" ii="" dsa)="" นอกจากนี้="" เมื่อเทียบกับผู้ป่วย="" st="" ผู้ป่วย="" amr="" มีคะแนนที่สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญใน="" tubulitis="" (t),="" การอักเสบของคั่นระหว่างหน้า="" (i)="" และ="" peritubular="" capillaritis="" (ptc)="" (p="0.012" สำหรับ="" t;="" p="">< 0.001="" สำหรับ="" i="" และ="" ptc="" )="" ตามการจำแนกประเภทแบมฟ์="" (ปกติ="" คะแนน="0" อ่อน="" คะแนน="1" ปานกลาง="" คะแนน="2" รุนแรง="" คะแนน="3)" (3,="" 16)="" (="" ตารางเสริม="" 1="" และ="">

cistanche echincosideสำหรับ โรคเบาหวาน