โรคไต Polycystic

ali.ma@wecistanche.com

ตอนที่Ⅱ: อวัยวะในไตที่เกิดจากเซลล์ต้นกำเนิดของเม็ดเลือดแดงของผู้ป่วยโรคไต polycystic ที่โดดเด่น autosomal

Roberta Faciolio, Fernando Henrique Lojudice และคณะ

พื้นหลัง:ไตOrganoids ได้รับอย่างกว้างขวางจากเซลล์ต้นกำเนิด pluripotent ที่เหนี่ยวนำให้มีขายในท้องตลาด (iPSCs); อย่างไรก็ตาม การผลิตโมเดลออร์กานอยด์ของไตอย่างมีประสิทธิภาพจากผู้ป่วยที่มีภาวะถุงน้ำหลายใบที่มีลักษณะเด่นของ autosomal ถือเป็นความท้าทายอย่างมากไตโรค (ADPKD) ที่สรุปทั้งการกำเนิดของตัวอ่อนและกลไกของการสร้างถุงน้ำดี

คลิกเพื่อดูผลข้างเคียงและประโยชน์ต่อไต

วิธีการ: บรรพบุรุษของเม็ดเลือดแดง (EPs) จาก ADPKD สองตัว (polycystic ที่โดดเด่น autosomalไตผู้ป่วยและผู้ให้ที่มีสุขภาพดีหนึ่งราย (HC) ถูกใช้เป็นตัวควบคุมเปรียบเทียบเพื่อทำให้ขั้นตอนทางเทคนิคจำนวนมากเป็นปกติสำหรับ EPs ที่ทำโปรแกรมซ้ำและสำหรับการสร้างออร์กานอยด์ EP ถูกตั้งโปรแกรมใหม่โดยอีพิโซมอลเวคเตอร์ไปเป็น iPSC (เซลล์ต้นกำเนิดพลูริโพเทนต์ที่เหนี่ยวนำ) ซึ่ง แยกออกเป็นอวัยวะท่อไตและกระตุ้นด้วยฟอร์สโคลินเพื่อกระตุ้นการสร้างซีสต์

ผลลัพธ์: iPSCs (เซลล์ต้นกำเนิด pluripotent Stem Cell ที่ถูกเหนี่ยวนำ) ที่ได้จาก EPs แสดงให้เห็นลักษณะทั้งหมดของ pluripotency และสามารถแยกความแตกต่างออกเป็นชั้นเชื้อโรคทั้งสามชั้นได้ 3D tubular organoids ถูกสร้างขึ้นจากเซลล์เดียวหลังจาก 28 วันใน Matrigel HC และ ADPKD (polycystic เด่น autosomalไตโรค) ออร์กานอยด์ไม่ได้ก่อตัวขึ้นเองตามธรรมชาติ แต่เมื่อกระตุ้น forskolin โครงสร้างที่เหมือนซีสต์ถูกสังเกตพบใน ADPKD (polycystic ที่โดดเด่น autosomalไตโรค) ออร์กานอยด์แต่ไม่อยู่ในออร์กานอยด์ที่ได้มาจาก HC

สรุป: ผลการวิจัยครั้งนี้พบว่าไตออร์แกนอยด์ถูกสร้างขึ้นจากเซลล์ EP ในเลือดของ ADPKD ได้สำเร็จ (autosomal dominant polycysticไตโรค) ผู้ป่วยและผู้บริจาคควบคุมสุขภาพ. แนวทางนี้ควรมีส่วนช่วยเป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพสำหรับตัวอ่อนไตแบบจำลองการพัฒนาซึ่งสามารถสรุปกลไกทางพยาธิสรีรวิทยาในระยะแรกที่เกี่ยวข้องกับการสร้างเซลล์ได้

คลิกที่นี่เพื่อเข้าร่วมⅠ

การอภิปราย

ในการศึกษานี้ เราได้อธิบายรายละเอียดขั้นตอนในการสร้างอวัยวะในไตจาก iPSC ของมนุษย์ (เซลล์ต้นกำเนิดพลูริโพเทนต์ที่เหนี่ยวนำให้เกิด) ที่ได้จากเซลล์ต้นกำเนิดของเม็ดเลือดแดงในเม็ดเลือดแดงของผู้ป่วยที่มี ADPKD (โรคไต polycystic ที่โดดเด่นของ autosomal) เซลล์โซมาติกหลายชนิดได้รับการตั้งโปรแกรมใหม่เป็น iPSC ได้สำเร็จ (เซลล์ต้นกำเนิดพลูริโพเทนต์ที่เหนี่ยวนำให้เกิด) รวมถึงเซลล์เม็ดเลือด [Z] ในที่นี้ เราเลือกใช้ต้นกำเนิดอีรีทรอยด์ในเลือดเป็นชนิดเซลล์เริ่มต้นด้วยเหตุผลหลายประการ เช่น ความสมบูรณ์ของจีโนม หน่วยความจำ epigenetic และการสร้างโปรแกรมใหม่อย่างมีประสิทธิภาพ [11,17,18] ประสิทธิภาพโดยการแปลงบรรพบุรุษของอีรีทรอยด์เป็น iPSC นั้นดีกว่าสองลำดับความสำคัญ (7 เปอร์เซ็นต์ -28 เปอร์เซ็นต์ ) เมื่อเทียบกับประสิทธิภาพของเซลล์เม็ดเลือดที่แตกต่างกัน (00 2 เปอร์เซ็นต์ -0.60 เปอร์เซ็นต์ ) หรือไฟโบรบลาสต์ (0.74 เปอร์เซ็นต์ )[Z] แม้จะมีเซลล์เหล่านี้ในเลือดต่ำมาก แต่ก็สามารถแยกและขยายเซลล์ในหลอดทดลองได้อย่างง่ายดายเพื่อสร้างจำนวนที่เพียงพอสำหรับการตั้งโปรแกรมใหม่ หนึ่งในความท้าทายที่สำคัญที่สุดในการสร้าง iPSC ที่เหมาะสมคือจีโนไทป์และความแปรปรวนของฟีโนไทป์ [6] แต่มีกลยุทธ์ทางเทคนิคบางอย่างที่เสนอให้หลีกเลี่ยงหรือลดความแปรปรวนดังกล่าว ในการทดลองนี้ เราใช้ระบบ episomal ที่ไม่มีการผสานรวมสำหรับการตั้งโปรแกรมใหม่ซึ่งไม่ต้องการการรวมจีโนมสำหรับยีน reprogramming ที่จะแสดง [10] ทำให้ภูมิคุ้มกันน้อยลงและทำให้เซลล์มีเสถียรภาพทางพันธุกรรมมากขึ้น [19,20] นอกจากนี้ ตัวอย่างทั้งหมดได้มาจากแหล่งเดียวกัน ซึ่งช่วยลดความแปรปรวนของอีพีเจเนติก [12] โดยสมมติว่าการสร้างความแตกต่างของเซลล์เริ่มต้นอาจส่งผลต่อประสิทธิภาพของผลลัพธ์สุดท้าย การวิเคราะห์เครื่องหมายพลูริโพเทนซีและความสามารถของ iPSC (เซลล์ต้นกำเนิดพลูริโพเทนต์ที่เหนี่ยวนำ) ในการแยกแยะความแตกต่างของชั้นเชื้อโรคทั้งสามชั้นถูกเปรียบเทียบแบบเคียงข้างกัน และพวกเขายังถูกนำไปเปรียบเทียบกับสายเซลล์ตัวอ่อน H9 ซึ่งใช้เป็นตัวควบคุมเชิงบวก . การเปรียบเทียบทั้งหมดนี้ไม่พบความแตกต่างที่มีนัยสำคัญระหว่างผู้ป่วย ADPKD (โรคไต polycystic ที่โดดเด่น autosomal) HCs และเซลล์ H9

มีการพัฒนาโปรโตคอลหลายอย่างเพื่อกระตุ้นการสร้างความแตกต่างของ iPSC (เซลล์ต้นกำเนิดพลูริโพเทนต์ที่เหนี่ยวนำ) ไปเป็นอวัยวะในไต [13,21] ขึ้นอยู่กับโปรโตคอลที่อธิบายโดยครูซและคณะ [6] เราได้รับโครงสร้างที่มีคุณสมบัติของท่อใกล้เคียง รวมถึงการแสดงออกของ NHE3 และ AOP1 นอกจากนี้ ออร์กานอยด์ยังแสดง NPHS2 ซึ่งบ่งชี้ว่ามีเซลล์คล้ายพอดไซต์

ในทางกลับกัน AQP2 ไม่ได้แสดงออกในออร์แกนอยด์ท่อเหล่านี้ การค้นพบนี้สอดคล้องกับการศึกษาก่อนหน้านี้ที่ชี้ให้เห็นถึงข้อจำกัดหลายประการในการพัฒนาโครงสร้างที่ได้มาจากหลอดไต (UB) ในหลอดทดลอง โดยการพัฒนา UB ต้องใช้โปรโตคอลเฉพาะ เนื่องจากกรอบเวลาสำหรับการเพิ่มตัวเหนี่ยวนำจำเพาะมีจำกัดมาก [ 6,22,23].

ในกระบวนการสร้างอวัยวะในไตจาก iPSCs (เซลล์ต้นกำเนิดพลูริโพเทนต์ที่เหนี่ยวนำให้เกิด) การสร้างตัวอ่อนของไตทั้งหมดจะถูกสรุปในหลอดทดลอง โดยเริ่มแรกเกี่ยวข้องกับการก่อตัวของทรงกลมโพรงโพรงจากเซลล์เดียว [14] อันที่จริง เราพบว่า iPSCss ที่ไม่แตกต่างกัน (เซลล์ต้นกำเนิดพลูริโพเทนต์ที่เหนี่ยวนำ) จากทั้งผู้ป่วย ADPKD (โรคไต polycystic ที่โดดเด่น autosomal) และกลุ่มควบคุมที่มีสุขภาพดีสร้างโครงสร้างทรงกลมคล้าย epiblast ที่มีลักษณะคล้ายกันทางสัณฐานวิทยา แม้ว่าจะไม่มีการจัดลำดับดีเอ็นเอของยีน PKD1 และ PKD2 ในการศึกษานี้ แต่ผลการวิจัยในปัจจุบันบ่งชี้ว่าประเภทของการกลายพันธุ์ที่ดำเนินการโดยผู้ป่วยไม่มีอิทธิพลต่อการสร้างสัณฐานของ epiblast ทั่วไป ยังจำเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมเพื่อประเมินการแสดงออกของโมเลกุลสำคัญที่เกี่ยวข้องกับระยะนี้ของการพัฒนาตัวอ่อนอย่างเหมาะสมยิ่งขึ้น

ตามโปรโตคอลที่พัฒนาโดย Freedman et al [14] เราสังเกตว่า spheroids แยกความแตกต่างออกเป็นอวัยวะท่อ 26 วันหลังจากเหนี่ยวนำให้เกิดความแตกต่าง และเวลาก็ใกล้เคียงกันสำหรับทั้งผู้ป่วย ADPKD (โรคไต polycystic ที่โดดเด่น autosomal) และ HC (รูปที่ 3) อย่างไรก็ตาม เราสังเกตเห็นความแปรปรวนบางอย่างเกี่ยวกับตารางเวลาของการแสดงออกและระดับของตัวทำเครื่องหมายความแตกต่าง ในทางกลับกัน สัณฐานวิทยาของโครงสร้างแบบท่อมีความคล้ายคลึงและเปรียบเทียบได้ระหว่างตัวอย่างจากผู้ป่วย ADPKD และ HC ในทางตรงกันข้าม การใช้ iPSCs (เซลล์ต้นกำเนิดพลูริโพเทนต์ที่เหนี่ยวนำให้เกิด) ที่เกิดจากการตรวจชิ้นเนื้อไตของผู้ป่วยโรคไตเรื้อรังกลุ่ม ADPKD (โรคไต polycystic ที่โดดเด่น autosomal) กลุ่มครูซและคณะพบความแปรปรวนในความสามารถของเซลล์เหล่านี้ในการสร้างออร์กานอยด์ที่สูงขึ้น[6] นอกเหนือจากความหลากหลายอย่างมากของการกลายพันธุ์โดยธรรมชาติของโรคนี้ ความแตกต่างในประสิทธิภาพของการรับออร์แกนอยด์ยังสามารถอธิบายได้ด้วยชนิดเซลล์ที่ต่างกันที่มีอยู่ในตัวอย่างชิ้นเนื้อ ตรงกันข้ามกับต้นกำเนิดของอีรีทรอยด์ ซึ่งเป็นประชากรเซลล์ที่เป็นเนื้อเดียวกันมากขึ้น เมื่อนำมารวมกัน ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่าแม้จะมีความแปรปรวนและความแตกต่างในประสิทธิภาพของโคลน iPSC ที่แตกต่างกันเพื่อสร้างอวัยวะในไต แต่การได้รับอย่างหลังจากผู้ป่วย ADPKD (โรคไต polycystic ที่โดดเด่น autosomal) อาจเป็นแบบจำลองเฉพาะสำหรับการศึกษาอาการทางฟีโนไทป์หลายรูปแบบ ของโรคนี้ นอกจากนี้ สิ่งสำคัญที่ควรทราบคือหากมีความแปรปรวนมากของการกลายพันธุ์ในประชากรที่ได้รับผลกระทบจาก ADPKD แสดงว่า iPSC เฉพาะผู้ป่วย (เซลล์ต้นกำเนิดพลูริโพเทนต์ที่เหนี่ยวนำให้เกิด) ซึ่งเข้ากันได้กับภูมิคุ้มกันโดยสิ้นเชิง พวกมันอาจถูกนำมาใช้สำหรับการรักษาแบบสร้างใหม่ได้เฉพาะบุคคลในอนาคต นอกจากจะอนุญาตให้มีการพัฒนาแบบจำลองในหลอดทดลองเพื่อตรวจสอบว่าอาการแสดงทางฟีโนไทป์ในระยะแรกๆ มีความหลากหลายพอๆ กับการนำเสนอทางคลินิกหรือไม่

สารออร์แกนอยด์ที่ไม่ได้รับการกระตุ้นจากผู้ป่วย HCor ADPKD (โรคไต polycystic ที่โดดเด่น autosomal) ไม่ได้สร้างซีสต์โดยธรรมชาติ ไม่พบลักษณะทางสัณฐานวิทยาทั่วไปของซีสต์และการแสดงออกของเครื่องหมายซีสต์เจเนซิสในตัวอย่างใดๆ แม้แต่การขยายความแตกต่างของออร์กานอยด์ในวัฒนธรรมจนถึง 35 วัน มีการพิสูจน์แล้วว่าการเพิ่มจำนวนเซลล์เพียงอย่างเดียวไม่ได้ผลิตซีสต์[24] นอกจากนี้ จำเป็นต้องมีเหตุการณ์อิสระครั้งที่สาม (เรียกว่า Third-hit) เพื่อเร่งการสร้างซีสต์และการเจริญเติบโตในร่างกาย [23] ในทางกลับกัน การก่อตัวของซีสต์ที่เกิดจากฟอร์สโคลินเกิดขึ้นในออร์กานอยด์จากผู้ป่วย ADPKD แต่ไม่พบในออร์กานอยด์จาก HC ข้อสังเกต ถึงแม้ว่าในปัจจุบัน ซีสต์ถูกพบที่เปอร์เซ็นต์ต่ำในตัวอย่าง ADPKD แม้ในที่ที่มีฟอร์สโคลิน ตามที่ Freedman et al ได้สังเกตเช่นกัน [14] ในออร์กานอยด์ที่เกิดขึ้นจากแบบจำลอง CRISPR/Cas9 ของโรค ADPKD สมมติฐานบางข้อสามารถยกขึ้นเพื่ออธิบายความถี่ต่ำของซีสต์ที่พบในแบบจำลองปัจจุบัน 1)Organoids ที่เพาะเลี้ยงในสภาพแวดล้อมแบบแขวนลอย 3D มีประสิทธิภาพในการเกิด cystogenesis ที่สูงกว่ามากเมื่อเทียบกับกลุ่ม organoids ที่ยึดติด [6] ซึ่งบ่งชี้ว่า microenvironment เกี่ยวข้องโดยตรงใน cystogenesis2) โปรโตคอลการทดลองที่ใช้ในการศึกษานี้ทำให้เกิดอวัยวะที่เป็นท่อใกล้เคียง แต่ไม่ใช่ ส่วนปลายของเนฟรอน [23] แม้ว่ากลุ่มเนฟรอนทั้งหมดสามารถก่อกำเนิดซีสต์รวมทั้งท่อใกล้เคียง [25] แต่เห็นได้ชัดว่ากลุ่มที่ได้มาจากท่อรวบรวมจะมีขนาดใหญ่กว่าและมีจำนวนที่สูงกว่ากลุ่มอื่น ๆ [26], 3) ในที่สุด ก็ได้แสดงให้เห็นเมื่อเร็ว ๆ นี้ว่าต้นกำเนิดของซีสต์ อาจเกี่ยวข้องกับการปรากฏตัวของการกลายพันธุ์ของ PKD1 หลายตัวที่กำหนดความรุนแรงของโรคและการก่อตัวของซีสต์ในท่อรวบรวมนั้นสัมพันธ์กับความรุนแรงของโรค [27, 28]

โดยสรุป ผลการวิจัยปัจจุบันแสดงให้เห็นว่ามีความเป็นไปได้ที่จะสร้างออร์กานอยด์ที่มีโครงสร้างสามมิติคล้ายกับสถาปัตยกรรมต้นกำเนิดของไตโดยใช้ iPSC (เซลล์ต้นกำเนิดพลูริโพเทนต์ที่เหนี่ยวนำ) ที่ได้รับการตั้งโปรแกรมใหม่จากต้นกำเนิดอีรีทรอยด์ที่แยกได้ง่ายจาก ADPKD (โรคไต polycystic ที่โดดเด่น autosomal) ผู้ป่วยและอวัยวะเหล่านี้สามารถสร้างซีสต์ภายใต้การกระตุ้นของ forskolin วิธีการที่มีแนวโน้มดีนี้เผยให้เห็นวิธีการในการเพิ่มความเข้าใจเกี่ยวกับขั้นตอนทางพันธุกรรม ฟีโนไทป์ และสรีรวิทยาในระยะเริ่มแรกในการสร้างซีสต์ในการตั้งค่า ADPKD (โรคไต polycystic ที่โดดเด่น autosomal)

อ้างอิง

1. Chebib FT, Torres VE: โรคไต Polycystic ที่โดดเด่นของ Autosomal: Core Curriculum 2016.AmJ Kidney Dis, 67:792-810, 2016 https://doi.org/10.1053/j.aikd.2015.07.037PMID:26530876

2. WatnickTJ, Torres VE, Gandolph MA, Qian F, Onuchic LF, Klinger KW, et al: การกลายพันธุ์ของโซมาติกในซีสต์ของตับแต่ละซีสต์สนับสนุนรูปแบบการเกิด cystogenesis สองครั้งในโรคไต polycystic ที่โดดเด่น autosomal เซลล์โมล 2: {{ 3}}, 1998 https://doi.orq/10.1016/s1097-2765(00)80135-5 PMID:9734362

3. Pei Y, WatnickT, He N, WangK, Liang Y, Parfrey P, et al.: การกลายพันธุ์ของโซมาติก PKD2 ในซีสต์ของไตและตับแต่ละซีสต์สนับสนุนแบบจำลอง cystogenesis แบบ "ตีสอง" ในโรคไต polycystic ที่โดดเด่นประเภท 2 autosomal JAm Soc Nephrol, 10;1524-1529.1999 https://doi.or/10.1681/ASN.V1071524 PMID:10405208

4. Piontek K, Menezes LF, Garcia-Gonzalez MA, Huso DL, Germino GG: สวิตช์พัฒนาการที่สำคัญกำหนดจลนศาสตร์ของการสร้างซีสต์ในไตหลังจากสูญเสีย Pkd1.Nat Med, 13: 1490-1495,2007 https:/ l doi.org/10.1038/nm1675 PMID: 17965720

5. TakakuraA, Contrino L, Zhou X, Bonventre JV, Sun Y, Humphreys BD, et al: การบาดเจ็บของไตเป็นการโจมตีครั้งที่สามที่ส่งเสริมการพัฒนาอย่างรวดเร็วของโรคไต polycystic สำหรับผู้ใหญ่ Hum Mol Genet,18:2523-2531,2009 https://doi.org/10.1093/hmg/ddp147 PMID: 19342421

6. ครูซ NM เพลง X, Czerniecki SM, Gulieva RE, Churchill AJ, Kim YK, et al: Organoid cystogenesis เผยให้เห็นบทบาทที่สำคัญของสภาพแวดล้อมขนาดเล็กในโรคไต polycystic ของมนุษย์ นัท เมเตอร์,16:1112-1119, 2017 https://doi.org/10.1038/nmat4994 PMID:28967916

7. Takahashi K, Okita K, Nakagawa M, Yamanaka S: การเหนี่ยวนำเซลล์ต้นกำเนิด pluripotent จากวัฒนธรรมไฟโบรบลาสต์ นัท โพรโทค,2:3081-3089,2007 https://doi.org/10.1038/nprot.2007.418 PMID:18079707

8. Freedman BS, Lam AQ, SundsbakJL, Latino R, Su X, Koon SJ, et al: ลดถุงน้ำดี polycystin -2 ในเซลล์ต้นกำเนิด pluripotent ที่เกิดจากผู้ป่วยโรคไต polycystic ที่มีการกลายพันธุ์ PKD1 J Am Soc Nephrol,24:1571-1586,2013 https://doi.org/10.1681/ASN.2012111089 PMID:24009235

9. Chen HY, Tan HK, Loh YH: การได้มาของสเต็มเซลล์ Pluripotent ที่เหนี่ยวนำโดยปราศจากทรานส์ยีนจากเลือดหยดเดียว Curr Protoc Stem Cell Biol, 38:4A.9.1-4A.9.10,2016https: //doi.or/10.1002/CPSC.12 PMID:27532818

10. YuJ, Hu K, Smuga-Otto K, Tian S, Stewart R, Slukvin Il, et al.: เซลล์ต้นกำเนิด pluripotent ที่เหนี่ยวนำโดยมนุษย์ปราศจากลำดับเวกเตอร์และทรานส์ยีน วิทยาศาสตร์, 324:797-801,2009 https: //doi.org/10.1126/วิทยาศาตร์. 1172482 PMID:19325077

11. EminliS, Foudi A, Stadtfeld M, Maherali N, Ahfeldt T, Mostoslavsky G, et al: ขั้นตอนการสร้างความแตกต่างกำหนดศักยภาพของเซลล์เม็ดเลือดสำหรับการตั้งโปรแกรมใหม่ในเซลล์ต้นกำเนิด pluripotent ที่เหนี่ยวนำ นัท เจตน์, 41: 968-976, 2009 https://doi.orq/10.1038/ng.428 PMID: 19668214

12. Chou BK, Mali P, Huang X, Ye Z, Dowey SN, Resar LM, et al.: การสร้างเซลล์ iPS ของมนุษย์อย่างมีประสิทธิภาพโดยพลาสมิดที่ไม่ผสานรวมจากเซลล์เม็ดเลือดที่มีลายเซ็นการแสดงออกของยีนและ epigenetic ที่เป็นเอกลักษณ์ เซล/Res,21:518-529, 2011 https://doi.orq/10.1038/cr.2011.12 PMID:21243013

13. Schutgens F, Verhaar MC, Rookmaaker MB: Organoids ไตที่ได้จากเซลล์ต้นกำเนิด Pluripotent: เทคโนโลยีในหลอดทดลองในหลอดทดลอง Eur J Pharmacol,790:12-20, 2016 https://ldoi.org/10.1016/j.eiphar.2016. 06.059 PMID: 27375081

14. Freedman BS, Brooks CR, Lam AQ, Fu H, Morizane R, Agrawal V, et al: การสร้างแบบจำลองโรคไตด้วยอวัยวะในไต CRISPR-mutant ที่ได้มาจากมนุษย์ pluripotent epiblast spheroids แนท คอมมูนิตี้, 6:8715, 2015 https://doi.orq/10.1038/ncomms9715 PMID: 26493500

15. Pei Y. ObaiiJ. Dupuis A. Paterson AD. Magistroni R. Dicks E, และคณะ; เกณฑ์แบบครบวงจรสำหรับการวินิจฉัยอัลตราซาวนด์ของ ADPKD (โรคไต polycystic ที่โดดเด่น autosomal) JAm Soc Nephrol, 20:205-212,2009 https://doi.org/10.1681/ASN.2008050507 PMID:18945943

16. Watanabe K, Ueno M, Kamiya D, Nishiyama A, Matsumura M, Wataya T, et al: สารยับยั้ง ROCK ช่วยให้การอยู่รอดของเซลล์ต้นกำเนิดจากตัวอ่อนของมนุษย์ที่แยกตัวออกจากกันได้ นัท ไบโอเทค, 25:681-686,2007 https://doi.org/10.1038/nbt1310 PMID: 17529971

17. Hochedlinger K, Jaenisch R: Nuclear reprogramming และ pluripotency.Nature,441:1061-1067,2006 https://doi.org/10.1038/nature04955 PMID: 16810240

18. Maherali N, Ahfeldt T, Rigamonti A, UtikalJ, Cowan C, Hochedlinger K: ระบบที่มีประสิทธิภาพสูงสำหรับการสร้างและศึกษาเซลล์ต้นกำเนิด pluripotent ที่เกิดจากมนุษย์ เซลล์/ สเต็มเซลล์. 3:340-345. 2008 https://doi.org/10.1016/.stem.2008.08.003 PMID: 18786420