เซลล์ที่แทรกแซงของไตเป็นเซลล์ฟาโกไซติกและทำให้เป็นกรด Escherichia Coli . ที่ก่อโรคภายในระบบทางเดินปัสสาวะ
Feb 28, 2022
ไตเซลล์ที่มีการแทรกสอดเกี่ยวข้องกับสภาวะสมดุลของกรด-เบสผ่านการแสดงออกของ ATPase ของแวคิวโอลาร์ ที่นี่ เรารายงานชนิดย่อยของเซลล์ที่มีการแทรกสอดของมนุษย์หกชนิด ซึ่งรวมถึงเซลล์ที่ถูกแทรกแซงแบบไฮบริดหลักที่ระบุจากทรานสคริปโทมิกเซลล์เดียว การเจริญเติบโตของ Phagosome เป็นกระบวนการทางชีววิทยาที่เพิ่มอันดับในการวิเคราะห์วิถีทางชีววิทยาหลังจากการสัมผัสกับ Escherichia coli ที่ทำให้เกิดโรคในทางเดินปัสสาวะในสองชนิดย่อยของเซลล์ที่มีการแทรกสอด การแสดงภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอลแบบเรียลไทม์ของ murineไตหลอดที่ผสมกับโปรตีนเรืองแสงสีเขียวซึ่งแสดง Escherichia coli หรือ pHrodo Green E. coli BioParticles แสดงให้เห็นว่าเซลล์ที่แทรกซ้อนสร้างแบคทีเรียฟาโกไซโตสอย่างแข็งขัน จากนั้นจะทำให้กรดฟาโกลิโซโซมเป็นกรด นอกจากนี้ เซลล์ที่มีการแทรกสอดได้เพิ่มการแสดงออกของ ATPase ของ vacuolar หลังการทดลอง UTI ในหลอดทดลอง เมื่อนำมารวมกัน เซลล์ที่มีการแทรกสอดแสดงการตอบสนองการถอดรหัสที่เอื้อต่อไตป้องกัน ดูดกลืนแบคทีเรีย และทำให้เป็นกรดของแบคทีเรียภายใน เซลล์ที่มีการแทรกสอดเป็นตัวแทนของเซลล์เยื่อบุผิวที่มีลักษณะเฉพาะของฟาโกไซต์มืออาชีพ เช่น มาโครฟาจ
คำสำคัญ:โรคไต เนื้อเยื่อไต เซลล์ไต ไต; ไต
ท่อเก็บไตคือตำแหน่งปลายทางสำหรับการควบคุมกรด-เบส 1 ท่อรวบรวมประกอบด้วยเซลล์หลักและเซลล์อินเทอร์คาเลต (ICs) เซลล์หลัก (PCs) เป็นตัวกลางในการดูดซับเกลือและน้ำ และมีลักษณะเฉพาะโดย cytoplasmic aquaporin 2 (AQP2) 2 ไอซีช่วยรักษาสภาวะสมดุลของกรด-เบส และมีสามชนิดย่อยที่อธิบายไว้ ได้แก่ ชนิด A (A-IC) ชนิด B (B-IC) และ nonA–nonB 2,3 A-ICs จะหลั่งโปรตอนผ่านทางปลายสุญญากาศ H-ATPase (V-ATPase) และสร้างไบคาร์บอเนตใหม่ผ่านทางตัวขนส่ง basilar chloride/bicarbonate (Cl − /HCO 3 ) การแลกเปลี่ยนประจุลบ 1 (AE1/band 3/SLC4A1) 1,4 B-ICs หลั่ง HCO 3 − ผ่าน apical Cl − /HCO 3 transporter, pendrin (SLC26A4) และแสดง V-ATPase basolateral 2,3 ไอซี nonA–nonB ของหนูมีปลายแหลมและ V-ATPase แต่ไม่มี AE1 และได้รับการระบุในท่อรวบรวมและท่อต่อ (CNT) 3 หลักฐานที่เพิ่มขึ้นสนับสนุนบทบาทภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติสำหรับ IC ควบคู่ไปกับการทำงานแบบดั้งเดิมของการควบคุมค่า pH ประการแรก ผู้ป่วยส่วนใหญ่ 10 รายที่ไม่เกี่ยวข้องกับโรคส่วนปลายไตภาวะกรดในท่อไตซึ่งเป็นภาวะที่มีลักษณะผิดปกติของ IC ได้รับรายงานว่ามีประวัติ UTI 5 ประการที่สอง Escherichia coli ที่ทำให้เกิดโรคในทางเดินปัสสาวะ (UPEC) สิ่งมีชีวิตที่แยกได้ใน 70 เปอร์เซ็นต์ของ pyelo-nephritis เฉียบพลันในเพศชายและ 80 เปอร์เซ็นต์ในเพศหญิงโดยคัดเลือกเฉพาะกับไซโตพลาสซึมของ ICs 6,7 ประการที่สาม เราระบุว่า IC แสดงเปปไทด์ต้านจุลชีพ (AMPs) เช่น ribonuclease 7 (RNASE7) 8–11 AMP เหล่านี้มีฤทธิ์โดยตรงกับเชื้อโรคหลายชนิด รวมถึงแบคทีเรีย ที่การตรวจวัดพื้นฐานและ/หรือเพื่อตอบสนองต่อการติดเชื้อ 8–11 ประการที่สี่ เราและคนอื่นๆ ได้รายงานโดยอิสระว่าหนูที่มีการพัฒนา IC ผิดปกติได้เพิ่มความไวต่อการติดเชื้อทางเดินปัสสาวะ (UTIs) และ/หรือ pyelonephritis 12,13 ประการที่ห้า ICs ทั้งสัมผัสและไกล่เกลี่ยการอักเสบ 14 . สุดท้าย เราได้แสดงให้เห็นการแสดงออกของยีนภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติในไอซีของหนูที่แยกได้ 15,16
CISTANCHE จะปรับปรุงการทำงานของไต/ไต
การทำความเข้าใจว่า ICs ปกป้องระบบทางเดินปัสสาวะจากการติดเชื้อนั้นมีความสำคัญอย่างไร เนื่องจากมักพบการติดเชื้อทางเดินปัสสาวะ ผู้หญิงมากกว่า 50 เปอร์เซ็นต์ประสบกับ UTI ในช่วงชีวิตของพวกเขา และ UTI คิดเป็น 1-6 เปอร์เซ็นต์ของการไปพบแพทย์ทั้งหมด 17 เมื่อแบคทีเรียขึ้นสู่ไตทำให้เกิด pyelonephritis, ภาวะแทรกซ้อนที่อาจเกิดขึ้น ได้แก่ ความดันโลหิตสูง, เรื้อรังโรคไตและ urosepsis 18,19 . ประมาณ 250,000 กรณีของ pyelonephritis เกิดขึ้นทุกปีในสหรัฐอเมริกา 17 การดื้อยาหลายชนิดกำลังเกิดขึ้นเป็นความท้าทายที่สำคัญเกี่ยวกับการรักษา UTIs และการติดเชื้ออื่นๆ 20 ดังนั้นกลไกที่ ICs ใช้เพื่อป้องกัน uropathogens จากน้อยไปมาก อาจเป็นเป้าหมายการรักษาที่สามารถใช้ประโยชน์เพื่อพัฒนาไต- การรักษา pyelonephritis เฉพาะ เนื่องจากการศึกษา IC ส่วนใหญ่เกี่ยวข้องกับแบบจำลองของสัตว์ จำเป็นต้องมีความเข้าใจที่ดีขึ้นเกี่ยวกับ IC ของมนุษย์เพื่อเป็นแนวทางในการศึกษาทางวิทยาศาสตร์ขั้นพื้นฐานในการดูแลทางคลินิกที่ดีขึ้น
เพราะว่าไตเป็นอวัยวะที่ซับซ้อน โปรไฟล์ mRNA นั้นตีความได้ยาก ตัวอย่างเช่น เนฟรอนมีความเชี่ยวชาญเฉพาะภูมิภาคด้วยเซ็กเมนต์ของท่อและชนิดย่อยของเซลล์ที่แตกต่างกัน ดิไตประกอบด้วยเซลล์บุผนังหลอดเลือด เยื่อบุผิว คั่นระหว่างหน้า และเซลล์อักเสบที่คัดเลือกมา ทั้งหมดนี้มีหน้าที่ทางชีวภาพที่แตกต่างกันและรูปแบบการแสดงออกของยีน การจัดลำดับ RNA เซลล์เดียว (scRNA-seq) แสดงถึงวิธีการที่ก้าวหน้าอย่างรวดเร็วในการระบุและกำหนดรูปแบบเซลล์ที่แตกต่างกันที่การตรวจวัดพื้นฐานหรือเพื่อตอบสนองต่อความเครียด 21 ที่นี่เราแสดงโดยใช้เทคโนโลยี scRNA-seq ที่มนุษย์ไตไอซีประกอบด้วยชุดย่อยที่แตกต่างกันหกชุดซึ่งประกอบด้วย A-IC สามชุด, IC-PC แบบไฮบริดหนึ่งชุด, IC แบบ nonA-nonB หนึ่งชุด และ B-IC หนึ่งชุด การวิเคราะห์ความเร็ว RNA เผยให้เห็นการเปลี่ยนแปลงการถอดรหัสจากพีซีไปยังชุดย่อย A-IC เมื่อได้รับ UPEC การวิเคราะห์เส้นทางความเฉลียวฉลาดเปิดเผยว่าการเจริญเต็มที่ของฟาโกโซมเป็นวิถีทางชีววิทยาที่สำคัญในชุดย่อย A-IC เมื่อได้รับสาร UPEC ภายในเส้นทางนี้ V-ATPases เป็นส่วนประกอบสำคัญที่เกี่ยวข้อง เราใช้กล้องจุลทรรศน์แบบ intravital เพื่อให้เห็นภาพการดูดซึม UPEC ในร่างกายโดยไอซี และยืนยันการทำให้เป็นกรดของ UPEC ภายในไอซีเหล่านี้ ในที่สุด แบบจำลอง UTI ของหนูแสดงให้เห็นการเพิ่มขึ้นของการแสดงออกของ V-ATPase (Atp6v1b1) mRNA การศึกษานี้จะเป็นพื้นฐานในการสำรวจและจัดการ V-ATPase ที่แสดงเซลล์เยื่อบุผิวในการบำบัดรักษาในฐานะเซลล์ฟาโกไซต์ของแบคทีเรีย
ผลลัพธ์
IC ของมนุษย์สามารถถูกทำให้สมบูรณ์ได้ผ่านการคัดแยกเซลล์ที่กระตุ้นด้วยแม่เหล็ก (MACS) ด้วยเม็ดแม่เหล็กเคลือบแมสต์/สเต็มเซลล์ growth factor รีเซพเตอร์ (CD117/c- KIT) มนุษย์ไตเนื้อเยื่อส่วนใหญ่มาจากขอบปกติของไตการผ่าตัดจำนวนมาก ถูกผ่าเป็นชิ้นขนาด 2–4- มม. จากนั้นข้ามคืนไปที่ห้องปฏิบัติการของเราใน Modified Eagle Medium (DMEM) ของ Dulbecco บนน้ำแข็งโดย Cooperative Human Tissue Network [https://www.chtn.org] เราประเมิน c-KIT เป็นเครื่องหมายพื้นผิวเซลล์เพื่อจัดเรียง IC ของมนุษย์ เนื่องจาก c-KIT ถูกใช้เพื่อจุดประสงค์นี้สำเร็จในหนูเมาส์ 22 การแสดงออกของ c-KIT ที่แปลเป็นภาษาท้องถิ่นของ IC ของมนุษย์โดยพิจารณาจากการค้นพบว่า c-KIT และเครื่องหมาย IC ของมนุษย์ V-ATPase, ยูนิตย่อย B1 (ยีน ATP6V1B1), ติดป้ายกำกับเซลล์เดียวกันในมนุษย์ไตส่วน (รูปที่ 1) 22,23 . หลังจากการคัดแยกแบบแม่เหล็กซึ่งรวมถึงการกำจัด CD45 รวมทั้งเซลล์ภูมิคุ้มกันและเซลล์ที่ตายแล้ว การเพิ่มประสิทธิภาพของไอซีที่สันนิษฐานว่าเป็น c-KIT-positive นั้นแสดงให้เห็นโดยการแสดงออกของ ATP6V1B1 mRNA ที่เพิ่มขึ้น 8–12- เท่าใน c-Kit-positive เมื่อเทียบกับเซลล์ c-KIT-negative ทั้ง SLC4A1 และ SLC26A4 ได้รับการเสริมสมรรถนะแบบแปรผันในไอซีซึ่งแสดงให้เห็นว่าทั้งการเพิ่มสมรรถนะ A-IC และ/หรือ B-IC เป็นไปได้โดยใช้วิธีการนี้ (รูปที่ 2) พื้นหลังของเนื้อเยื่อไตที่ใช้ในการศึกษานี้แสดงไว้ในตารางเสริม 1
การวิเคราะห์คลัสเตอร์แบบบูรณาการระบุ IC ย่อยหกชนิดScRNA-seq เสร็จสมบูรณ์เมื่อ พ.ศ. 2404 แยกตัวออกไตเซลล์ที่ถูกทำให้สมบูรณ์สำหรับไอซีดังที่อธิบายไว้ข้างต้น IC ที่เสริมสมรรถนะได้มาจากระยะขอบปกติของตัวเดียวไตการผ่าตัดมวล การกรองการควบคุมคุณภาพ (QC) ถูกส่งผ่านโดย 859 เซลล์ที่สัมผัสกับ UPEC ในหลอดทดลอง เป็นเวลา 1 ชั่วโมงและ 1002 เซลล์ที่สัมผัสกับน้ำเกลือในหลอดทดลองเป็นเวลา 1 ชั่วโมง การวิเคราะห์ฟังก์ชัน Seurat ระบุ 12 กลุ่มในการเตรียมเซลล์ที่จัดแยก (รูปที่ 1a) เครื่องหมายที่อนุรักษ์ไว้มากที่สุดเก้าตัวภายในแต่ละคลัสเตอร์ถูกนำเสนอในรูปที่เสริม 3–14. โดยรวมแล้ว ชนิดย่อยของ IC คิดเป็น 1,066 (57 เปอร์เซ็นต์) ของเซลล์ 1861 หกกลุ่มเป็นตัวแทนของประเภทย่อยของ IC โดยเฉพาะอย่างยิ่ง เราพบ A-IC สามตัว, B-IC หนึ่งตัว, หนึ่ง nonA–nonB-IC และหนึ่งชนิดย่อย PC–IC แบบไฮบริดไตระบบการตั้งชื่อเซลล์เยื่อบุผิวที่แนะนำโดย Chen และเพื่อนร่วมงาน ผู้ผลิตที่ได้รับการอนุรักษ์ซึ่งได้รับรายงานก่อนหน้านี้ว่าเป็นเครื่องหมายประเภทเซลล์หรือเครื่องหมายอนุรักษ์ที่แยกกลุ่มใดกลุ่มหนึ่งจาก 12 กลุ่มออกจากกลุ่มอื่น ถูกนำมาใช้เพื่อกำหนดประเภทเซลล์ให้กับแต่ละคลัสเตอร์ (ตารางเสริมที่ 2 , รูปที่ 1b, c, รูปที่ 2) 24–28 .
ชนิดย่อย A-IC และการแสดงออกของโปรตีน PC–IC แบบลูกผสมสัมพันธ์กับผลลัพธ์ scRNA-seq เราตรวจสอบการค้นพบ scRNA-seq ที่สำคัญ โดยเฉพาะอย่างยิ่ง SLC8A1 (เรียกอีกอย่างว่า Na plus /Ca plus exchanger 1 (NCX1)) เป็นเครื่องหมายสำหรับ PC–IC แบบไฮบริดและฮีทช็อกโปรตีนในตระกูล A (Hsp70) สมาชิก 1A (HSPA1A) พร้อมกับการตอบสนองการเติบโตในช่วงต้น 1 (EGR1) เป็นเครื่องหมายที่สามารถแยกแยะประเภทย่อย A-IC (รูปที่ 3) เนื่องจากเราใช้ระยะขอบปกติของไตการผ่าตัดมะเร็ง เราได้ตรวจสอบว่า SLC8A1, HSPA1A และ EGR1 . ของเราไตรูปแบบการแสดงออกมีความสอดคล้องกับที่เห็นได้ตามปกติไตเนื้อเยื่อจาก Human Protein Atlas หาได้จาก http://www.proteinatlas.org (รูปที่ 15 เพิ่มเติม) 29
การรวบรวมโปรไฟล์มาร์คเกอร์ชนิดย่อยของเซลล์ในท่อที่แสดงให้เห็นก่อนหน้านี้ใน murineไตเซลล์ส่วนใหญ่ยังคงไม่บุบสลายในมนุษย์ไตเซลล์. เนื่องจากจะมีความสำคัญต่อบริบทของการค้นพบแบบจำลองหนูในอนาคตต่อพยาธิสรีรวิทยาของมนุษย์ เราจึงประเมินการแสดงออกของ IC ของมนุษย์ของเครื่องหมายเซลล์ท่อดักจับหนูที่ระบุก่อนหน้านี้ในการศึกษา scRNA-seq ที่ดำเนินการโดย Chen et al 22 และ Ransick et al. 30 . แผนภาพจุดของผลลัพธ์ถูกนำเสนอในรูปที่ 4 เครื่องหมายประเภทเซลล์ในท่อดักจับมิวรีนส่วนใหญ่จะอนุรักษ์ไว้ในเซลล์ท่อดักจับของมนุษย์
A-IC subtype A เพิ่มขึ้นในเปอร์เซ็นต์สัมพัทธ์ด้วยการสัมผัส UPEC 1 ชั่วโมง เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ภายในคลัสเตอร์มีความสอดคล้องกันระหว่างประเภทการสัมผัส ยกเว้น A-IC subtype A/cluster 0 ซึ่งเพิ่มขึ้นจาก 16.2 เป็น 20.1 เปอร์เซ็นต์ และ A-IC subtype C/cluster 5 ซึ่งลดลงจาก 9.4 ถึง 6.6 เปอร์เซ็นต์ โดยได้รับน้ำเกลือเทียบกับ UPEC, P =0.03 (ตารางที่ 1)
เซลล์ PC–IC แบบไฮบริดเปลี่ยนความเร็ว RNA ของพวกมันออกจากพีซีและไปยัง A-IC เพื่อตอบสนองต่อการสัมผัส UPEC 1 ชั่วโมง ความอุดมสมบูรณ์สัมพัทธ์ของ pre-mRNA ที่ไม่ได้ตัดต่อที่ถอดเสียงเมื่อเร็วๆ นี้เทียบกับ mRNA ที่ต่อต่อที่เจริญเต็มที่สามารถใช้ในการคำนวณการเปลี่ยนแปลงในความอุดมสมบูรณ์ของ mRNA ที่เรียกว่า mRNA velocity 31 ความเร็ว mRNA ที่เป็นบวกในการศึกษาในเซลล์เดียวบ่งชี้ว่ายีนกำลังถูกควบคุมโดยที่ความเร็ว mRNA เชิงลบหมายความว่ายีนกำลังถูกปรับลด 31 ทิศทางความเร็วของ RNA อนุมานว่าเซลล์มีวิถีการแสดงออกของ mRNA ไปยังเซลล์ประเภทอื่น 31,32 ความเร็ว mRNA ในการตอบสนองต่อการสัมผัสของ UPEC แสดงไว้ในรูปที่ 5 สิ่งที่สำคัญคือ PC–IC แบบไฮบริดจะเปลี่ยนความเร็ว RNA ของพวกมันออกจากพีซีและไปสู่ IC เพื่อตอบสนองต่อ UPEC นอกจากนี้ ไอซียังรักษากิจกรรมการถอดความ ในขณะที่กิจกรรมการถอดความจะมีน้อยที่สุดในอย่างอื่นไตประเภทเซลล์
โปรไฟล์ภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติของไตแสดงให้เห็นการเปลี่ยนแปลงในการแสดงออกของเซลล์เดียวในระยะแรกหลังการสัมผัส UPEC 1 ชั่วโมงรูปแบบการแสดงออกของ scRNA-seq ของยีนภูมิคุ้มกันโดยกำเนิดที่เลือกไว้หลังจากการได้รับ UPEC เทียบกับการได้รับน้ำเกลือเป็นเวลา 1 ชั่วโมงจะแสดงในรูปที่เสริม 16 และ 17 การค้นพบที่สำคัญ ได้แก่ การแสดงออกที่สูงของ AMP adrenomedullin (ADM) ใน A-IC ชนิดย่อย A และ B, PC–IC แบบไฮบริด และ B-IC พีซีไม่แสดง adrenomedullin ที่การตรวจวัดพื้นฐาน แต่มีการแสดงออกที่เพิ่มขึ้นอย่างมากในการตอบสนองต่อการสัมผัส UPEC SH2-ที่เหนี่ยวนำโดยไซโตไคน์ซึ่งมีโปรตีน (CISH) และอุปสรรคต่อการแสดงออกของปัจจัยการรวมอัตโนมัติ 1 (BANF1) เกิดขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในไอซี nonA–nonB หลังการสัมผัส UPEC Interleukin 18 (IL18), galectin 3 (LGALS3), beta defensin 1 (DEFB1) และตัวแปลงสัญญาณ CD24 lipocalin 2/neutrophil gelatinase-associated lipocalin (LCN2/NGAL) ถูกระบุเท่านั้น
ใน PC–IC แบบไฮบริดและการแสดงออกของรีเซพเตอร์ 4 mRNA ที่คล้ายค่าโทรที่น้อยที่สุดมีอยู่เท่านั้น เราไม่ได้ระบุการแสดงออกของไรโบ-นิวคลีเอส 7 (RNASE7) บน scRNA-seq เราประเมินการแสดงออกของ RNASE7 mRNA ใน IC ที่เรียงลำดับด้วยแม่เหล็กและไม่ใช่ ICไตเซลล์. การแสดงออกของ RNASE7 mRNA ถูกระบุในไอซีจากหนึ่งในสี่ไต(รูปที่ 18 เสริม)
กระบวนการทางชีวภาพของการเจริญเต็มที่ของฟาโกโซมเกี่ยวข้องกับไอซีที่สัมผัสกับ UPEC เป็นเวลา 1 ชั่วโมงเส้นทางทางชีวภาพชั้นนำสิบประการที่เกี่ยวข้องกับแต่ละคลัสเตอร์ได้รับการจัดอันดับตามค่า p ตามที่กำหนดโดยการวิเคราะห์เส้นทางความฉลาด การรวบรวมสามกลุ่มที่กำหนดโดยท่อ A-IC ชนิดย่อย A/คลัสเตอร์ 0, A-IC ชนิดย่อย B/ คลัสเตอร์ 3 และ A-IC ชนิดย่อย C/คลัสเตอร์ 5 มีกระบวนการทางเดินทางชีวภาพที่แตกต่างกันตามการสัมผัส UPEC เมื่อเทียบกับน้ำเกลือ (รูปที่ . 6a–c) การเจริญเต็มที่ของ Phagosome เป็นหน้าที่อันดับสูงสุดในเซลล์ที่สัมผัสกับ UPEC และน้ำเกลือใน A-IC ชนิดย่อย C/คลัสเตอร์ 5 ย้ายจากตำแหน่งที่สองไปยังตำแหน่งแรกในประเภทย่อย A-IC A/คลัสเตอร์ 0 และจากตำแหน่งสูงสุดอันดับที่สี่ไปยังอันดับสาม ใน A-IC ชนิดย่อย B/ คลัสเตอร์ 3 ไม่มีชนิดย่อยของเซลล์ท่อรวบรวมที่เหลือ (รูปที่ 19 เพิ่มเติม) มีเส้นทางที่เกี่ยวข้องสิบอันดับแรกที่แตกต่างกันตามการสัมผัส UPEC เมื่อเทียบกับน้ำเกลือ โปรไฟล์การแสดงออกของยีนที่ส่งผลให้การจัดอันดับการเจริญเติบโตของ phagosome สำหรับ A-IC subtype A/cluster 0 ถูกนำเสนอในตารางเสริม 3
การแสดงออกของ IC Atp6v1b1 mRNA เพิ่มขึ้นในการตอบสนองต่อpyelonephritis ทดลอง ในร่างกายวิถีการเจริญเต็มที่ของฟาโกโซมของ Ingenuity เน้น V-ATPase ว่าเกี่ยวข้องกับไอซี (ตารางเสริม 3) เพื่อตรวจสอบว่ามีการเปิดใช้งาน V-ATPase เมื่อได้รับ UPEC หรือไม่ เราใช้แบบจำลอง UTI ของหนู หนึ่งชั่วโมงหลังการถ่าย UPEC กับหนูที่ฉีดวัคซีนน้ำเกลือ "IC Reporter" หนูซึ่งมีการแสดงออกของ tdTomato (tdT, ตัวแปรโปรตีนเรืองแสงสีแดง) ใน ICs ถูกทำการุณยฆาตและ IC ถูกเสริมด้วยการแยกตัวออกจากกันเซลล์ไต. IC ที่เสริมคุณค่ามีการแสดงออกของ mRNA ของ Atp6v1b1 ที่สูงขึ้นในหนูเมาส์ที่มีการเพาะเชื้อ UPEC เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมน้ำเกลือ (รูปที่ 6d)
ไอซี phagocytize UPEC ในร่างกายเราพัฒนาระเบียบวิธีเพื่อหลอมรวมเป็นหนึ่งเดียวไตtubule กับ UPEC ในเมาส์ที่มีชีวิตที่สมบูรณ์ไต.โปรตีนเรืองแสงสีเขียว (GFP) ซึ่งแสดงออกถึง UPEC รวมไมโครเพอร์ฟิวส์ในลูเมนหลอดไตเดียวของหนู "IC Reporter" ที่ไหลผ่านท่อ โดยคัดเลือกโดยคัดเลือกกับพื้นผิวของลูเมนและถูกทำให้อยู่ภายในโดยไอซี (รูปที่ 7) ระหว่างกล้องจุลทรรศน์ภายในเซลล์
ไอซีทำให้กรด UPEC ที่มี phagolysosomes ในร่างกาย และในหลอดทดลองนอกจากนี้เรายังผสมหลอดดูดด้วยอนุภาคชีวภาพ pHrodo Green E. coli ซึ่งจะเรืองแสงได้เมื่อทำให้เป็นกรดเท่านั้น การดูดซึมและการเรืองแสงของอนุภาคชีวภาพเหล่านี้ถูกมองเห็นได้เฉพาะระหว่าง\ ในกล้องจุลทรรศน์ภายในในไอซี (รูปที่ 8) การวิเคราะห์การแบ่งส่วน Imaris แสดงให้เห็นว่าการเรืองแสงสีเขียวเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเวลาผ่านไปใน tdT บวกไอซีภายใน 2 หลอดที่ผสมกับ pHrodo Green E. coli BioParticles เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม tdT บวก tubule (รูปที่ 9a, b) เมื่อประเมินการเรืองแสงโดยพื้นฐานเซลล์ 12/16 (75 เปอร์เซ็นต์ )tdT บวกเซลล์แสดงให้เห็นการเรืองแสงสีเขียวที่เพิ่มขึ้นเมื่อเวลาผ่านไปหลังจากการปะทุของหลอดฟลูออเรสเซนต์ด้วยอนุภาคชีวภาพ pHrodo Green E. coli (รูปที่ 9b) ผลการถดถอยเชิงเส้นจากแต่ละเซลล์ถูกนำเสนอในตารางเสริม 4 การค้นพบการถ่ายภาพภายในร่างกายที่มีชีวิตของฟาโกไซโตซิสและการทำให้เป็นกรดของอนุภาคชีวภาพ PHrodo Green E. coli โดยไอซีได้รับการตรวจสอบโดยใช้การทดสอบโฟลว์ไซโตเมทรีในหลอดทดลอง มูรีนเซลล์ไตสารแขวนลอยจากหนูเมาส์ "ตัวรายงาน IC" ซึ่งไอซี (CD45 − tdT บวก ) แสดง tdT ภายในร่างกายถูกสัมผัสกับอนุภาคชีวภาพ pHrodo Green E. coli เทียบกับเซลล์ที่มีตัวกลางเพียงอย่างเดียว CD45 บวกกับเซลล์ภูมิคุ้มกันที่มีถิ่นที่อยู่ในสารแขวนลอยของเซลล์ถูกควบคุมโดยกลุ่มควบคุมเชิงบวก และเซลล์ CD45 − tdT − (ที่ไม่ใช่ไอซี) ถูกปิดล้อมเป็นกลุ่มควบคุมเชิงลบ เปรียบเทียบสื่ออย่างเดียวกับ
การได้รับอนุภาคชีวภาพ การเรืองแสงสีเขียวที่บ่งบอกถึงการได้มาของอนุภาคชีวภาพและการทำให้เป็นกรดเพิ่มขึ้นจาก {0}}7 เป็น 62.8 เปอร์เซ็นต์ของ CD45 plus เซลล์ การค้นพบนี้แสดงให้เห็นถึงการดูดซึมแบคทีเรียที่คาดไว้โดยฟาโกไซต์มืออาชีพ เช่น นิวโทรฟิล ที่น่าสนใจคือ 22.2% ของไอซีได้รับอนุภาคชีวภาพสีเขียว เทียบกับ 5.6 เปอร์เซ็นต์ของไอซีที่ไม่ใช่ไอซี (รูปที่ 20 เพิ่มเติม) การควบคุมสื่อมีการดูดซึม 0.7 เปอร์เซ็นต์ของไอซีและ 0 เปอร์เซ็นต์ที่ไม่ใช่ไอซี
การอภิปราย
ไอซีนั้นยากต่อการศึกษา โดยเฉพาะอย่างยิ่งในมนุษย์ เพราะมันมีเพียง 7 เปอร์เซ็นต์ของไตเซลล์ ประกอบด้วยช่วงของชนิดย่อย และไม่คงฟีโนไทป์ของพวกมันไว้ในวัฒนธรรม 33 เฉินและคณะ 22 รายงานการวิเคราะห์เซลล์เดียวใน murineไตเซลล์และ Lake et al. รายงานไปป์ไลน์การจัดลำดับ RNA นิวเคลียสเดียวบนมนุษย์ไตเซลล์ 34,35 . การศึกษาเหล่านี้ระบุ A-ICs สองประเภทย่อย ที่นี่ เราได้พัฒนาวิธีการเพื่อดำเนินการจัดลำดับเซลล์เดียวบน IC ของมนุษย์ที่ได้รับการเสริมสมรรถนะที่ทำงานได้ เราเสริมสมรรถนะสำหรับไอซีที่ทำงานได้มากกว่าการจัดลำดับทั้งหมดไตเซลล์เพื่อให้โฟกัสเพิ่มขึ้นในเซลล์ประเภทนี้ การค้นพบหลักของเราคือ (a) การระบุว่าไฮบริดพีซี - ไอซีสามารถเปลี่ยนทิศทางความเร็ว RNA ของพวกเขาออกจากพีซีและไปยัง A-IC เพื่อตอบสนองต่อการสัมผัส UPEC (b) อย่างน้อยสามชนิดย่อยของ A-IC และญาติของพวกมัน ความถี่สามารถเปลี่ยนแปลงได้เพื่อตอบสนองต่อการสัมผัส UPEC (c) การเจริญเติบโตของฟาโกโซมเป็นวิถีทางทางชีวภาพชั้นนำในประเภทย่อยของ A-IC หลายชนิดและสามารถเพิ่มความสำคัญสัมพัทธ์กับการสัมผัส UPEC และ (ง) ICs phagocytose และทำให้เป็นกรด UPEC ในร่างกาย ระหว่างการถ่ายภาพสิ่งมีชีวิต หนู
ไอซีแยกความแตกต่างในการตอบสนองต่อภาวะกรดโดยการกลับขั้วของพวกมัน 36,37 มีรายงานว่าไอซีเกิดขึ้นจาก AQP2- ที่แสดงเซลล์ 38 ในปี 2560 Chen และเพื่อนร่วมงานได้ระบุเซลล์ที่เป็นบวกสองเท่าที่แสดง Aqp2 พร้อมกับ Slc4a1 หรือ Slc26a4 โดยการทำโปรไฟล์เซลล์เดียวของหนู การค้นพบนี้ได้รับการตรวจสอบโดย Park และเพื่อนร่วมงานในปีถัดมา 22,35 ในปี 2019 เราแสดงให้เห็นโดยการสร้างโปรตีนและ mRNA immunolabeling ที่ PC–IC แบบไฮบริดมีอยู่ 15 โดยเฉพาะอย่างยิ่ง 9 เปอร์เซ็นต์ของ IC ของหนูที่กำหนดโดย V-ATPase B1 อิมมูโนฉลากเรืองแสงยังแสดง Aqp2 mRNA ที่กำหนดโดยการผสมพันธุ์แบบเรืองแสงในแหล่งกำเนิด 15 การศึกษาในปัจจุบันได้กำหนดจำนวนประชากรของมนุษย์ไต-รวบรวมเซลล์ท่อที่แสดง AQP2, ATP6V1G3 และ SLC4A1 ที่สอดคล้องกับ PC–IC แบบไฮบริด บนพล็อต tSNE และ UMAP เซลล์ไฮบริดเหล่านี้จัดกลุ่มใกล้กับพีซีมากที่สุด แต่แตกต่างจากพีซีแบบเดิมโดยอิงจากการแสดงออกของ IC marker นิพจน์ SLC8A1 แตกต่างจากเซลล์ประเภทนี้ สิ่งที่น่าสนใจคือ SLC8A1 มีส่วนเกี่ยวข้องอย่างมากกับการเปลี่ยนแปลงของเยื่อบุผิวเป็นมีเซนไคม์ โดยเฉพาะอย่างยิ่ง การไม่มี SLC8A1 จะเปลี่ยนฟีโนไทป์ของเซลล์เยื่อบุผิวผ่านการทำให้ไม่เสถียรของ E-cadherin 39 เป็นสื่อกลาง -catenin ที่นี่ เราแสดงให้เห็นว่าไอซีสร้างความแตกต่างในการตอบสนองต่อการสัมผัสสารก่อโรคในระบบทางเดินปัสสาวะ เซลล์ PC–IC แบบลูกผสมเปลี่ยนความเร็ว RNA ของพวกมัน ซึ่งเป็นอนุพันธ์ของเวลาของการแสดงออก mRNA ห่างจากพีซีและไปยัง A-IC เพื่อตอบสนองต่อ UPEC ในหนู Ransick et al. 30 การแสดงออกของ Slc8a1 ที่ระบุในขั้นต้นในทูบูลที่ส่วนปลายและเซลล์ที่คล้ายกับพีซีในทูบูลที่เชื่อมต่อ ในการประเมินภาพกล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอลของเราไตการแสดงออกของ SLC8A1 เราพบเซลล์ที่ถูกแยกออกมาซึ่งแสดงออก SLC8A1 ใน AQP2-ทูบูลที่เป็นบวก (เช่น การรวบรวมท่อหรือท่อเชื่อมต่อ) นอกจากนี้เรายังระบุ AQP2-ทูบูลเชิงลบซึ่งเซลล์ส่วนใหญ่แสดงออก SLC8A1 ซึ่งอาจสอดคล้องกับนิพจน์ Slc8a1 ของท่อส่วนปลายที่สลับซับซ้อนดังกล่าวในหนูเมาส์ ชนิดย่อยของ A-IC บางชนิดมีวิถีทางชีววิทยาชั้นนำที่แตกต่างกันหลังจากการได้รับ UPEC และชนิดย่อย A-IC A เพิ่มขึ้นในความถี่สัมพัทธ์ในการตอบสนองต่อ UPEC การค้นพบนี้บ่งชี้ว่า A-IC ชนิดย่อย A อาจเป็นตัวแทนของตัวแปรภูมิคุ้มกันโดยกำเนิด บทบาทของ SLC8A1 ในการสร้างความแตกต่างของ IC รับประกันการตรวจสอบในการศึกษาในอนาคต
CISTANCHE จะปรับปรุงไต/ความล้มเหลวของไต
เราทำ scRNA-seq กับมนุษย์ในปี 1861ไตเซลล์ที่ 1,066 เป็นไอซี เพื่อให้บริบทของแบบจำลองการทดลองของหนูกับพยาธิสรีรวิทยาของมนุษย์ จำเป็นต้องเปรียบเทียบไอซีของมนุษย์และของหนู Chen และเพื่อนร่วมงานได้เสริมสมรรถนะสำหรับ murine ICs ด้วย c-KIT และดำเนินการ scRNA-seq 22 พวกเขาจำแนก 74 เซลล์เป็นพีซี 87 เซลล์เป็น A-IC และ 23 เซลล์เป็น B-IC 22 แรนซิคและคณะ 30 ดำเนินการ scRNA-seq บน 688 ไอซี พวกเขาไม่ได้เสริมสมรรถนะสำหรับไอซี แต่แบ่งไตเข้าไปในคอร์เทกซ์ แมดัลลาชั้นใน และเมดัลลาชั้นนอก เพื่อประเมินความแตกต่างของโซน 30 เราสาธิตให้เห็นแล้วว่าการแสดงออกของเครื่องหมายประเภทเซลล์ท่อดักจับมูรีนดูเหมือนจะถูกอนุรักษ์ไว้เป็นส่วนใหญ่ในเซลล์ท่อดักจับของมนุษย์ ไม่ว่าหนูจะมีชนิดย่อยของ A-IC ที่เทียบเคียงได้กับมนุษย์หรือไม่ก็ตาม มีแนวโน้มว่าจะต้องมีการประเมินเซลล์เดียวที่เป็นเป้าหมายของ IC ของหนูจำนวนมากขึ้น
เราระบุการแสดงออกของ IC scRNA-seq ของโปรตีนภูมิคุ้มกันโดยกำเนิด เช่น galectin 3 (LGALS3) ซึ่งเป็นสื่อกลางของภูมิคุ้มกันและการอักเสบ และ ADM ที่เราเคยรายงานใน IC ของหนู 15,40–42 อย่างไรก็ตาม โปรตีนภูมิคุ้มกันโดยกำเนิดที่สำคัญบางตัวที่รายงานก่อนหน้านี้ใน ICs เช่น Lipocalin 2 (LCN2/NGAL), RNASE7 และ toll-like receptor 4 (TLR4) มีการแสดงออกน้อยที่สุดหรือไม่พบใน IC ของมนุษย์ในระดับเซลล์เดียวใน การวิเคราะห์ของเรา 6,9 . ความขัดสนของการแสดงออกของ LCN2/NGAL และ TLR4 ใน IC นั้นสอดคล้องกับสิ่งที่รายงานใน IC ของหนูโดยกลุ่มวิจัยของเราพร้อมกับ Ransick et al 30ไตนักสำรวจเซลล์/] 15 . เฉินและคณะ 22 รายงานการแสดงออกของ TLR4 และ NGAL mRNA ในไอซี แต่น้อยกว่าในพีซีหลายเท่า เราได้ประเมินไอซีของมนุษย์ที่รวมกลุ่มไว้สำหรับการแสดงออกของ RNASE7 และระบุมันในไอซีตั้งแต่ 1 จาก 4ไต(รูปที่ 18 เพิ่มเติม) แสดงว่าการแสดงออกอาจไม่สม่ำเสมอขึ้นอยู่กับภูมิภาค จุดเวลา และสภาวะทางสรีรวิทยา การแสดงออกของ CISH ซึ่งเกิดขึ้นใน nonA nonB IC เพื่อตอบสนองต่อ UPEC ได้รับการพิสูจน์เพื่อควบคุมการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติต่อ Mycobacterium tuberculosis ในปอดและม้าม 43 IC ฟาโกไซโตสแบคทีเรียเป็นเวลาหลายนาที และเซลล์ของเราสำหรับ scRNA-seq สัมผัสกับ UPEC เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ค่อนข้างสั้น จำเป็นต้องมีการศึกษาในอนาคตเพื่อพิจารณาว่าวิถีทาง IC อื่นๆ เช่น การแสดงออกของ AMP หรือการควบคุมการตายของเซลล์ มีความสำคัญมากขึ้นในช่วงเวลาต่อมาภายหลังการสัมผัส UPEC หรือไม่
Phagocytosis involves the cellular uptake of particulates >0.5 μm โดยเยื่อหุ้มพลาสมาเมมเบรน 44 "ฟาโกไซต์ระดับมืออาชีพ" เซลล์ภูมิคุ้มกันที่ได้จากมัยอีลอยด์ ซึ่งรวมถึงมาโครฟาจ นิวโทรฟิล และเซลล์สร้างกระดูกสร้างความแตกต่างของจุลินทรีย์ที่บุกรุกจากไมโครไบโอตาและเซลล์ที่มีสุขภาพดี ดูดกลืนเป้าหมายเข้าไปในฟาโกโซม สร้างสปีชีส์ออกซิเจนปฏิกิริยา (ROS) คัดหลั่ง AMP และแอนติเจนในปัจจุบัน เซลล์อื่นๆ 45–49 . ความสำคัญ การทำให้เป็นกรดอย่างแข็งแกร่งโดย V-ATPase ของฟาโกลิโซโซมที่สร้างสภาพแวดล้อมจุลภาคที่เป็นกรดเพียงพอสำหรับการฆ่าเชื้อจุลินทรีย์ส่วนใหญ่เป็นลักษณะเด่นของฟาโกไซต์มืออาชีพ 48,50 ตัวอย่างเช่น การยับยั้ง V-ATPase ด้วย bafilomycin A1 ยับยั้งกิจกรรมการฆ่าเชื้อแบคทีเรียของมาโครฟาจ 51 เซลล์เยื่อบุผิวบางชนิดเป็นจุลินทรีย์ฟาโกไซโตสแต่มีประสิทธิภาพในการฆ่าแบคทีเรียน้อยกว่าฟาโกไซต์แบบมืออาชีพ และได้รับการอธิบายว่าเป็นฟาโกไซต์ที่ไม่เป็นมืออาชีพ 52 ไอซีเป็นตัวแทนของสายเลือดเยื่อบุผิวที่มีความสามารถในการฟาโกไซโทซิสและการนำเสนอแอนติเจน (รูปที่ 6–9) พร้อมกับการแสดงออกของ AMP ที่แข็งแกร่งและไมโตคอนเดรียที่เอื้ออำนวยเพื่อสร้าง ROS; ดังนั้น IC จึงมีศักยภาพในการฆ่าเชื้อแบคทีเรียที่เปรียบเทียบได้กับมาโครฟาจมากกว่าเซลล์ฟาโกไซต์ 8,53–55 ที่ไม่เป็นมืออาชีพดังกล่าว ก่อนหน้านี้ A-ICs ได้รับการพิสูจน์แล้วว่าสามารถทำให้เกิด endocytosis ปลายยอดของเดกซ์ทรานในถุงน้ำไซโตพลาสซึมได้ในอัตราที่สูง 56 เราคาดการณ์ว่า IC phagocytosis ของ UPEC เป็นส่วนขยายของคุณลักษณะที่ใช้ร่วมกับมาโครฟาจ รวมทั้งการแสดงออกของ V-ATPase, ศักยภาพรีดอกซ์, การหลั่ง AMP และความสามารถในเอนโดไซโทซิส 8,16,49,57,58 ไม่ว่าไอซีจะสามารถฟาโกไซโตสเซลล์เศษซากและแบคทีเรียอื่นที่ไม่ใช่ UPEC ในลักษณะที่คล้ายคลึงกับฟาโกไซต์แบบมืออาชีพได้หรือไม่นั้นยังคงต้องพิจารณา
การถ่ายภาพ Confocal ของ single-ไตtubule perfused ใน vivo กับแบคทีเรียขยายบนเทคนิค in vitro ก่อนหน้าเช่นการเพาะเซลล์และ perfusion ของ tubes ที่ผ่า ที่นี่ เราพัฒนาวิธีการเพื่อทดสอบโดยตรงในหนูที่มีชีวิตว่าฟาโกไซโตซิสเป็นฟังก์ชันไอซีหรือไม่ กล้องจุลทรรศน์ภายในช่วยให้การศึกษาที่ซับซ้อนของกระบวนการเซลล์แบบไดนามิกภายในมิวรีนที่ทำงานอยู่ไต59 . กลยุทธ์ที่ผ่านมาในการใช้กล้องจุลทรรศน์ในหลอดอาหารนั้นเกี่ยวข้องกับการฉีดสีย้อมหรือเครื่องหมาย intravital เข้าไปในหนูเพื่อศึกษา endocytosis ของท่อใกล้เคียงไตพลวัตของการไหลเวียนของเลือด และการซึมผ่านของหลอดเลือดหรือไต 60 เมื่อรวมกล้องจุลทรรศน์ในช่องปากเข้ากับเทคนิคการผ่าตัดที่ซับซ้อน การประเมินจุดเวลาเริ่มต้นของกระบวนการติดเชื้อที่ยากต่อการประเมิน 61 ก่อนหน้านี้ แบคทีเรียถูกไมโครเพอร์ฟิวส์ในท่อใกล้เคียงของหนูเพื่อประเมินการไหลเวียนของเลือด การรับนิวโทรฟิล และการอุดตันทางเดินปัสสาวะ 62,63 UTIs ส่วนใหญ่เกิดจากเชื้อโรคที่เพิ่มขึ้น และในขั้นต้นจะพบกับท่อรวบรวม 64,65 ดังนั้นเราจึงเสนอว่าท่อรวบรวมเป็นบริเวณท่อที่สำคัญเพื่อประเมินปฏิสัมพันธ์ระหว่างโฮสต์กับเชื้อโรค ระบบแบบจำลองภายในของเราสร้างแบบจำลองคลาสสิกอย่างมีประสิทธิภาพ
CISTANCHE จะปรับปรุงโรคไต/โรคไต
การศึกษาการกระจายตัวของ tubule แบบเดี่ยว แต่ในหนูที่มีชีวิตที่สมบูรณ์ไต,ปริมาณเลือด น้ำเหลือง และเซลล์ประสาท ควบคู่ไปกับความสามารถในการโต้ตอบกับเซลล์ภูมิคุ้มกัน พยาธิสรีรวิทยาของ Pyelonephritis มีความแตกต่างระหว่างเพศชายกับเพศหญิง ตัวอย่างเช่น ในมนุษย์ เพศหญิงมีแนวโน้มที่จะพัฒนา pyelonephritis เฉียบพลันมากกว่าห้าเท่า แต่หนูเพศผู้จะมีความรุนแรงของ pyelonephritis ที่เพิ่มขึ้นโดยอาศัยแอนโดรเจน 66,67 Ransick และคณะได้สาธิตความแตกต่างของเพศชายและเพศหญิงในเซลล์ท่อใกล้เคียง โดยเฉพาะอย่างยิ่งในสารขนส่งแอนไอออนอินทรีย์ 30 IC เพศผู้ได้รับการประเมินทั้งในการจัดลำดับเซลล์เดียวและการศึกษาภายในร่างกาย เนื่องจากบทบาทของไอซีในการป้องกันแบคทีเรียของไตและความสมดุลของอิเล็กโทรไลต์ ความหลากหลายที่เกี่ยวข้องกับเพศในการทำงานของ IC เช่น phagocytosis และการแสดงออกของยีนเซลล์เดียว จะเป็นประเด็นสำคัญสำหรับการศึกษาในอนาคต การศึกษานี้มีข้อจำกัด การเปิดรับ UPEC ต่อ IC ของมนุษย์ใน scRNA-seq ของเรานั้นอยู่ในหลอดทดลองเป็น singleไตและอาจมีความแตกต่างเมื่อเทียบกับการได้รับ UPEC ในร่างกาย นอกจากนี้ การค้นพบของเรายังแสดงถึงพื้นที่ทางกายวิภาคของมนุษย์ไตตัวอย่างและการศึกษาในอนาคตที่มีสถานที่ต่างกันอาจมีความหลากหลายในระดับภูมิภาคดังที่แสดงโดย Ransick et al 30 . ไอซีประกอบด้วย 57 เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ใน scRNA-seq ของเรา ซึ่งได้รับการเสริมสมรรถนะจากองค์ประกอบไอซี ~7 เปอร์เซ็นต์ในไตที่เส้นฐาน 33 . ตัวอย่างของเรามีเซลล์เยื่อบุผิวและเซลล์บุผนังหลอดเลือดประเภทอื่น แต่มีค่าลบสำหรับ CD45 บวกกับเซลล์ภูมิคุ้มกันที่ถูกแยกออกก่อนที่จะเสริมคุณค่าของไอซี (รูปที่ 1 รูปที่ 1 เพิ่มเติม) ด้วย scRNA-seq ไอซีเป้าหมายสามารถระบุและประเมินแยกกันได้ เซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดแสดง c-KIT แต่ไม่น่าจะเป็นตัวแทนของไตประชากรเซลล์ไมอีลอยด์ที่อาศัยอยู่ 68 เราไม่ได้ระบุเซลล์ที่แสดงออก c-KIT อื่น ๆ ที่มีอยู่ในมนุษย์ที่มีสุขภาพดีไตเช่น สโตรมอลเซลล์/เทโลไซต์ 69 ก่อนหน้านี้มีการรายงานผลบวกของ Henle และท่อใกล้เคียง c-KIT ที่แยกได้บางส่วนไตอิมมูโนฮิสโตเคมีสอดคล้องกับผลลัพธ์ scRNA-seq ของเรา 70
